Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Qumica e Ingeniera Qumica EAP Ing.

Agroindustrial LABORATORIO DE BIOQUIMICA INFORME N1

Alumno: Hurtado Risco, Jhoan Nifrae 10070061 PROTEINAS Reacciones cualitativas (de coloracin) sobre grupos funcionales de protenas y aminocidos 1.-Reaccin de Biuret sobre el grupo peptdico. Se basa en la capacidad del grupo peptdico de las protenas y polipptidos de formar en medio alcalino, con los iones de Cu+ un compuesto complejo de color violeta con matices rojizo o azulado, que dependen del nmero de enlaces peptdicos en la protena que es positiva con protenas y pptidos que tienen no menos de dos enlaces peptdicos. Procedimiento: - Coger tres tubos de ensayo y colocar en uno de ellos, 10 gotas de glicina, en otro 10 gotas de alanina y en el tercer tubo la 10 gotas de la solucin de ovoalbmina. - Agregar 2 gotas de Reactivo de Biuret y, agitar suavemente y observar la aparicin de la coloracin. - Para volver el medio alcalino, agregar unas gotas de NaOH 6M. Resultados: Tubo (1), con Alanina Se torn de un color celeste diluido Tubo (2), con Glicina Se torn de un color verde diluido Tubo (3), con Ovoalbmina Se torn de un color VIOLETA intenso 2.- Reaccin Xantoproteica sobre el anillo aromtico de aminocidos cclicos Se basa en la capacidad de los aminocidos y, de residuos de aminocidos de polipptidos que contienen anillo aromtico para formar, por interaccin con cido ntrico concentrado, compuestos dinitro-derivados de color amarillo. En medio alcalino, estos compuestos forman grupos cromforos con estructuras quinoideas que tienen coloracin anaranjada. Procedimiento: - Coger tres tubos de ensayo y colocar en uno de ellos 10 gotas histidina, en otro 10 gotas de triftofano y en el tercero 10 gotas de la solucin de ovoalbmina. - Agregar CON CUIDADO (use lentes) 10 gotas de Acido ntrico 16M y observar. - Colocar los tubos en Bao-Mara para calentarlos y observar. - Enfriar los tubos con un chorro de agua para luego agregar NaOH 6M y ver la coloracin final. Resultados: Tubo (1), con Histidina Se torn de un color amarillento Tubo (2), con Triftofano Se torn de un color amarillento Tubo (3), con Ovoalbmina Se torn de un color anaranjado

3.- Reaccin de la ninhidrina sobre el grupo -amino. Es muy especfico para los aminocidos y protenas, resultando muy til para conocer la secuencia de aminocidos. Se basa en la interaccin de la ninhidrina con el grupo -amino de aminocidos, pptidos y protenas con la formacin de un complejo de color azul o azul-violeta. Por calentamiento, en presencia de ninhidrina, se produce la desaminacin oxidativa del grupo amino de aminocidos y pptidos y reduccin de la molcula de ninhidrina. Al principio, como resultado de la interaccin del aminocido con la ninhidrina. se forma la base de Shiff. Luego de la reagrupacin se descarboxila y descompone a aldehdo y aminodicetohidrindeno. Procedimiento: - Coger tres tubos de ensayo y colocar en uno de ellos 10 gotas alanina, en otro 10 gotas de histidina y en el tercero 10 gotas de la solucin de ovoalbmina. - Agregar 2 gotas de ninhidrina y observar la coloracin. - Calentarlos en a cocinilla hasta ebullicin y luego de 3 minutos observar el color que se obtiene Resultados: Tubo (1), con Alanina En un principio se torn Violeta, despus de calentar se torn de color azul. Tubo (2), con Histidina En un principio se torn Verde, despus de calentar se torn de color azul. Tubo (3), con Ovoalbmina En un principio se torn Amarillenta, despus de calentar se torn de color azul. TABLA RESUMEN DE RESULTADOS
REACCIONES
XANTOPROTEINCA NITROPRUSIATO ADAMKIEWICZ ZIMMERMANN NINHIDRINA SAKAGUCHI

1 2 3 4 5 6 7 8

Glicina Prolina Arginina Tirosina triptofano Histidina Fenilalanina Ac. Aspartico

PAULY

FOLY

MUESTRA PROBLEMA

MILLON

BIURET

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Ac. Glutamico Metionina Cistena Lisina -alanina -alanina Leucina Isoleucina Serina Ovolabumina

OBSERVACIONES Al agregar Agua desionizada a la ovoalbmina, esta se desnaturalizar en parte, por ello debemos filtrarla para obtener una solucin de ovoalbmina. El bao-maria que se le da a los tubos de ensayo en las reacciones xantoproteica sirven como catalizador. Se debe neutralizar la reaccin Xantoproteica de ovoalbmina para ver la coloracin naraja. Cada muestra de aninoacido en al ser tratado con Ninhidrina se torna de un color diferente, luego se descarboxila y descompone a aldehdo, dando una cloracin voleta intensa. CONCLUSIONES La reaccin de Biuret slo funcion con la ovoalbmina ya que fue la nica protena con mas de 2 enlaces peptdicos. La reaccin de Buiret no es positiva con aminocidos porque ellos no presentan enlaces peptidicos entre si. En la reaccin xantoproteica hay una sustitucin en el anillo bencnico por NO2 del H, luego, estos compuestos forman grupos cromforos con estructuras quinoideas que tienen coloracin anaranjada. En la reaccin xantoproteica, la solucin de ovoalbmina acidificada aun sea neutraliza con NaOH, la reaccin es irreversible y se torna anaranjada. La Ninhidrina presenta una coloracin especifica para cada aminocido y con ello podemos reconocer de cual se trata.