Avance Informe Final Micro.!!!! Pasa Justificacion y ... Marco Teroico

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ACTIVIDAD BACTERIANA DE EXTRACTOS ORGNICOS SOBRE LA FLORA MIXTA DE CARIES DENTAL Y BOLSA PERIODONTAL
Microbiologa Aplicada Universidad Nacional Mayor de San Marcos 20/07/2011
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INTRODUCCIN La caries dental y la enfermedad periodontal constituyen las enfermedades de mayor prevalencia que afectan el sistema masticatorio a nivel mundial; y repercuten en los diferentes grupos etarios: desde nios hasta ancianos; y ambas tienen la caracterstica de ser destructivas. Hoy sabemos que estas enfermedades son causadas por varios factores; pero, principalmente son de origen microbiano. Esta comunidad presente en la cavidad oral se organiza en lo que se llama placa o biofilm dental, donde pueden proliferar y desarrollarse debido a que encontraron las condiciones apropiadas para tener actividad bioqumica y metablica. Entre los diferentes tipos de microorganismos presentes en la placa dental, se considera al Streptococcus mutans como la especie ms frecuentemente aislada; y se le atribuye la responsabilidad del inicio de las lesiones cariosas. Por consiguiente, entre las diversas medidas preventivas que se toman para evitar el desarrollo de la caries dental, encontramos el uso de antimicrobianos, para disminuir o eliminar la carga microbiana, en general. Aunque la mayor parte de las investigaciones se centran en antibiticos y quimioterpicos industriales , son cada vez ms numerosos los estudios de laboratorio que revelan el poder antimicrobiano de plantas y/o hierbas. Esto abre una puerta, a la posibilidad de reemplazar el uso de frmacos y diversas sustancias que a largo plazo se pueden volver perjudiciales para nuestro
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organismo; y as introducir una medicina natural no daina y ms al alcance de todas las poblaciones. 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA a) Formulacin del Problema Cul es la actividad antibacteriana de los extractos orgnicos de manzanilla, ans, organo, clavo de olor y canela en comparacin con la clorhexidina al 0,12% y agua destilada sobre flora mixta de caries dental y bolsa periodontal? 2. OBJETIVOS a) Objetivo General Identificar la actividad antibacteriana de diferentes extractos acuosos sobre la flora mixta. b) Objetivos Especficos Identificar la actividad antibacteriana del extracto acuoso del ans sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal. Identificar la actividad antibacteriana del extracto acuoso de la manzanilla sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal. Identificar la actividad antibacteriana del extracto acuoso del organo sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal. Identificar la actividad antibacteriana del extracto acuoso de la canela sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal.
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Identificar la actividad antibacteriana del extracto acuoso del clavo de olor sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal. Identificar la actividad antibacteriana del extracto acuoso de la clorhexidina al 0,12% sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal. 3. JUSTIFICACIN En Lima Metropolitana y Lima provincias existen diferentes productos que son fcilmente cultivables como lo son la manzanilla y ans y otros que son rpidamente adquiribles como el clavo de olor, canela y organo entre otros. Dado que estos productos son utilizables en sus diferentes formas dentro de nuestra gastronoma de forma econmica y sencilla son productos de inters para estudio de cmo acta dentro del primer medio al que ingresan: la cavidad oral y sus propiedades bacteriostticas en algunas de las alteraciones que pueda existir dentro de este medio. 4. MARCO TERICO 4.1 PIMPINELLA ANISUM (ANS)
4.1.1 Historia. Etimolgicamente el trmino pimpinela es una alteracin de bipinnula o dipinella (doble punta), debido a sus hojas bipinadas. Se utilizaba en la antigedad para pagar impuestos. 4.1.2 Lugar de Origen. Originario de Egipto, Grecia, Creta y el Medio Oriente. Actualmente se cultiva en todos los pases de clima templado.
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4.1.3 Nombre Cientfico. Pimpinella Anisum L. 4.1.4 Sinnimos. Anisum officinarum Moench, Anisum vulgare Gaertn, Carum anisum Bail, Sison anisum Spreng. 4.1.5 Clasificacin botnica. Familia Apiaceae/umbeliferae. 4.1.6 Descripcin. Planta herbcea anual, con raz leosa, olor intensamente aromtico, tallo estriado, erecto, rojizo, ramificado en lo alto y muy frgil; hojas inferiores redondeadas, dentadas y las superiores angostosas y filamentosas; flores blancas, pequeas, en umbelas compuestas de largos pednculos, con cinco ptalos radiales obovados. 4.1.7 Compuestos qumicos: y Aceite voltil: constituido por trans-anetol, chavicol metil ter, aldehdo de ans. y Derivados de cido cfico, cido clorognico y cafeoil. y Flavonoides y cidos grasos y Sustancias proteicas y Furanocoumarinas, esteroles. 4.1.8 Parte utilizada. Hojas, frutos y semillas. 4.1.9 Usos medicinales empricos. Para facilitar la digestin, disminuir la formacin de gases y facilitar la expulsin de los mismos.
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4.1.10 Usos aprobados. Problemas disppsicos, catarros del tracto respiratorio, dolor de espalda, lumbago, antiflatulento.
4.2
MATRICARIA CHAMOMILLA (MANZANILLA)
4.2.1 Clasificacin botnica Phylum: Euphyta Divisin: Angiospermae Clase: Dicotyledones Orden: Synandrae Familia: Asteraceae (Compositae) Gnero: Matricaria Especies: Matricaria camomilla o Matricaria recutita
4.2.2 Caractersticas. Existen 3 especies diferentes de plantas herbceas denominadas genricamente como manzanilla, todas ellas pertenecientes a la familia de las asterceas y con similares virtudes 4.2.3 Composicin. Aceite esencial (0,3%-1,5%): Es el componente ms importante que se obtiene de las cabezuelas de la planta y constituyen el grupo lipoflico de la droga. De acuerdo con la Farmacopea Argentina, la droga no debe contener ms de 10% de otras partes de la planta, ni ms de 2% de materia orgnica extraa. La Farmacopea Britnica exige un contenido de aceite esencial entre 0,25-0,70%. La Farmacopea Brasilera al igual que la Espaola, Alemana y Europea, exige un tenor de aceite esencial no menor al 0,4%. Ms del 50% del total de la esencia se compone de la siguiente manera: Azulenos
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(26-46%): Principalmente camazuleno (6-15%) y en menor medida guajazuleno. Se trata de un aceite voltil que le brinda el color azulado a la esencia y que aparece por accin del calor durante el proceso de extraccin. Por ello no estn presentes en las infusiones tradicionales. El camazuleno no est preformado en la planta sino que deriva (por saponificacin, deshidratacin y descarboxilacin) de un proazuleno incoloro e hidrosoluble denominado matricina, el cual es una lactona sesquiterpnica del grupo de los guayanlidos. Sesquiterpenos: a -bisabolol (10-25%) y derivados (bisabolxidos A, B y C, bisabonlonxido A). Tambin se identific el antecotlido (trazas). Lactonas sesquiterpnicas: matricina, matricarina y desacetilmatricarina. La matricina sera tambin precursora del camazuleno. Carburos terpnicos: farneseno, cadineno, cis-espiroter y transespiroter. Flavonoides (1-3%): Constituyen junto a los muclagos el grupo hidroflico de la droga. Fueron identificadas numerosas flavonas y flavonoles metoxilados, entre ellos apigenina (0,25-42%) y quercetina con sus correspondientes glucsidos (7 - glucosil - apigenina y 7glucosil quercetina). Tambin luteolina, patuletina, lisorhamnetol, apina, rutina y otros. Cumarinas: dioxicumarina, umbeliferona y herniarina Otros: cido valerinico, taninos, cido ascrbico, cidos grasos, muclagos urnicos (10%), cido saliclico, esteroides derivados del estigmasterol, cidos fenlicos, cido anglico, mucopolisacridos, principio amargo (cido
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antmico), xiloglucuranos, sales triacontano y fitosterina (resinas).
minerales
(8-10%),
4.2.4 Principios activos y propiedades. Los principios activos contenidos en sus flores son varios y pueden ser de naturaleza liposoluble o hidrosoluble. Los liposolubles estn concentrados en los aceites esenciales y se emplean en compuestos de uso extemo. Los hidrfilos, liberados en las infusiones, tienen sobre todo efecto antiespasmdico. En la infusin slo se libera un 10 a 15% del contenido total de su aceite esencial. El aceite esencial contenido en sus flores oscila entre 0.4 -1 % del peso seco. Compuesto principalmente por farneseno, spathulenol, (pro) camazufen, (-)-alfa bisabolol, (-)alfa bisabololoxide y (-)-alfa bisabolonoxide. La proporcin de procamazulen o matricin en las flores es alta, pero durante el proceso de destilacin, por arrastre con vapor de agua, es transformado en camazulen. La esencia de manzanilla recin destilada es de color azul, esto se debe a la presencia de sesquiterpenos conocidos como azuleno. En parte es el responsable del efecto antiinflamatorio. El contenido de azuleno en el aceite vara entre 1 y 18%. Los con alto contenido son producidos por determinadas variedades cultivadas. La ausencia de matricin en la planta est regido por un gen dominante presente en las poblaciones de manzanilla silvestre del Sureste Europeo y algunos sectores reducidos de Asia. Otras de las sustancias existentes en su aceite esencial es un grupo derivado de los sesquiterpenos, los bisaboloides. En la manzanilla se encuentra el (-)-alfa bisabolol como componente natural. Por medio de procesos oxidativos el (-)-alfa bisabolol pasa,
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dentro de la planta, a formas oxidadas, que son alcoholes secundarios denominados xido de bisabolol, de stos en la manzanilla se han detectado tres tipos. El xido de bisabolol, en un paso siguiente, puede ser oxidado a xido de bisabolon. La oxidacin est regida por un gen dominante. En base al contenido de las distintas formas de bisaboloides y su relacin de concentraciones ha sido postulada la existencia de distintos tipos qumicos de manzanilla. El contenido de bisaboloides en el aceite esencial puede variar entre O y 50% segn los tipos y variedades. El gen que inhibe la produccin de matricin no est ligado naturalmente a ninguno de los distintos tipos productores de bisaboloides. El tipo camazulenlibrebisabolonoxide se ha encontrado en Europa al Sureste, como nativo. El tipo camazulen bisabololoxide en Europa Central, y slo un tipo en camazulen bisabolol han sido encontrado en Espaa. Este tipo mencionado finalmente es recesivo mltiple (aa bb nn). Los grupos acetilnicos, conforman un 20-30%. Las sustancias solubles en agua estn constituidas por flavonoiglicsidos. Junto a stos se han encontrado distintos compuestos terpnicos, pectinas y varios oligosacridos. Como se deca anteriormente, el valor medicinal de una planta reside en una sustancia (principio activo). Estos principios activos se clasifican segn su composicin qumica y son los siguientes: alcaloides, glucsidos, aceites esenciales, muclagos, cidos orgnicos, minerales y vitaminas. 4.3 ORIGANUM VULGARE (ORGANO)
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4.3.1 Clasificacin botnica. Reino: Vegetal Clase: Angiospermae Subclase: Dicotiledoneae Orden: Tubiflorae Familia: Labiateae Gnero: Oreganum Especie: Vulgare 4.3.2 Descripcin Botnica. Arbusto perenne. La planta alcanza una altura de 2 metros, se caracteriza por ser erecta, de hojas delgadas estrechas, de aspecto brillante, fuertemente perfumado, tallos resinosos y levemente amargos. Flores llamativas de color variante de azul plido a blancas. 4.3.3 Propiedades. La esencia de Romero est compuesta por derivados terpnicos, carburos pineno, canfeno, bormeol, alcanfor y otras sustancias como taninos, principios amargos, saponina cida, elementos minerales, entre otros. Las hojas poseen cidos fenlicos, flavonoides y alrededor de un 2% de aceite esencial. 4.3.4 Usos. Se utiliza para controlar la anemia y para detener el flujo menstrual, fortalece la circulacin (debido al alcanfor), fortifica la memoria, es estimulante (debido al aceite esencial), espasmdico y ligeramente diurtico. Tambin se utiliza para afecciones hepticas, anmicas, reumatismo, lumbalgias, tos y muchas otras afecciones.
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4.4
CINAMONUM ZEYLANICUM (CANELA)
4.4.1 Historia. El trmino Cinnamomun proviene de la composicin de cina(canela de la china) y amos (deriva de una planta de familia del jengibre con olor similar a canela). Es originario de China ; crece de forma espontnea en los bosques de ese pas y en el sur de la India. Hoy se ha naturalizado en diversas zonas de Amrica tropical. 4.4.2 Compuestos qumicos. y Aceites voltiles: cinamaldehido, cinamil-alcohol. y Diterpenos: cinnzelanol y Proantociandinas oligomricas y Hasta 10 % de aceites voltiles. y Taninos y Mucilago y azcar. 4.4.3 Actividad farmacolgica. Antibacteriano, fungisttico, promotor de la motilidad, presenta reaccin estrognica suave sobre el sistema genital (en animales de experimentacin). En condiciones experimentales, unida a nisina, disminuye el crecimiento de Salmonella typhimurium, Listeria monocitogenes y Escheria coli. Inhibe el crecimiento de hongos micotxicos como Aspergillus flavus, A. parasiticus, A. ochraceus y Fusarium moniliforme. Estudios realizados muestran resultados positivos de la canela sobre Helicobacter pilory. Ha mostrado disminucin de la glucosa, triglicridos. LDL y colesterol total en pacientes diabticos tipo2.
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4.5
CARYOPHYLLUS AROMATICUS (CLAVO DE OLOR)
4.5.1 Descripcin. Planta mirtcea tropical, que produce los botones florales aromticos que se usan como especia, de olor tpico y sabor picante. Contiene esencia, eugenol. 4.5.2 Propiedades. Al interior, como estimulante general, afodisiaco, aperitivo estomacal. 4.5.3 Uso externo. Preparados odontolgicos, por su accin antisptica y analgsica. Aparte de su empelo como condimento alimenticio, se recomienda para los decaimientos apticos, inapetencia, flatulencias, etc. Se prepara una infusin con medio gramo por taza de agua hirviendo, para tomar antes de las comidas.
5. METODOLOGA 5.1 Materiales y recursos
5.1.1 Recursos humanos 02 Odontlogos Asesores 04 Estudiantes de Pregrado de Odontologa UNMSM 01 Consultora de Microbiologa 02 Asistentes del Laboratorio de Microbiologa 5.1.2 Recursos materiales 01 Agar Mitis Salivarius (con Bacitracina) en placa petri tamao regular.
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01 Agar Mitis Salivarius (sin Bacitracina) en placa petri tamao regular. 02 Agar Schadler en placa petri tamao regular. 01 Medio BHI para transporte de muestra. 01 Medio Tioglicolato para transporte de muestra. 01 Reactivo para condiciones de Anaerobiosis. 01 Kit de material de Diagnstico Odontolgico bsico. 01 Cureta para dentina. 01 Sonda periodontal 11.5. 06 Conos de papel N 30. 05 Papel filtro 50 gr de la planta de manzanilla. 50 gr de la planta de Ans. 50 gr de la planta de Organo. 50 gr de Clavo de olor. 50 gr de Canela. 100 ml de Clorhexidina al 0,12%. 100 ml de Agua destilada. 05 Tubos de ensayo grandes. 02 Tubos de ensayo pequeos. 01 Mechero grande 01 Asa de siembra 01 Vortex. 01 Mortero. 01 Bagueta. 01 Kit de coloracin Gram. 10 ml de Suero fisiolgico 01 Frasco de Aceite de inmersin 04 Portaobjetos. Campos, guantes, mascarillas y gorros en cantidades suficientes.
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5.2
Mtodo
5.3 Procedimiento 5.3.1 Seleccin de paciente Paciente a recibir terapia de operatoria dental en la Clnica de la Facultad de Odontologa de UNMSM, quien deba presentar pieza(s) dentaria(s) con diagnstico de caries profunda y enfermedad periodontal; lo cual fue determinada clnicamente mediante la observacin: o Para Caries Dental Presencia de cavitacin. Ausencia de dolor a la exploracin. o Para Bolsa Periodontal Profundidad al sondaje mayor a 7 mm. Presencia de sangrado al sondaje. Presencia de sarro supragingival. 5.3.2 Toma de muestra o Para Caries Dental Con una cureta para dentina se curete la zona de cavitacin y se obtuvo una muestra de la lesin la cual fue introducida cuidadosamente en el Medio de transporte del Caldo de Tioglicolato para su posterior cultivo en Agar Mitis Salivarius. o Para Bolsa Periodontal Con una sonda periodontal se introdujo en la bolsa periodontal y se coloc los conos de papel a nivel vestbulo-mesial y vestbulo-distal; 02 en cada sitio mencionado dejndolo por 30 segundos. Luego se retiro y cuidadosamente fue introducida en el Medio de transporte BHI para su posterior cultivo en el Agar Schadler.
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5.3.3 Protocolo procesamiento de muestra
6. RESULTADOS Transcurrido 7 das, que es el tiempo que dur la incubacin de la muestras a una temperatura de 37 C, se analiz muestras para para ver las actividad que tienen los extractos usados, sobre las muestras de caries dental y de bolsa periodontal. 6.1 Muestra de caries dental, en medio agar MitisSalivarius Se observ la formacin de halo de inhibicin enlos discos que
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contenan manzanilla, organo y clavo de olor, siendo los dimetros de los halos 8mm, 10mm y 11 mm respectivamente. Se observ que el halo de inhibicin de la Clorhexidina fue de 6 mm. En el caso del ans y canela no se observ cambio.
6.2 Muestra de bolsa periodontal, en medio agar Shadler. En esta muestra se observ que el halo de inhibicin de la Clorhexidina fue de 15 mm. En el disco que contena organo se observ la formacin delhalo de inhibicin cuyo dimetro meda 13 mm. En cuanto a los discos que contenan ans, manzanilla, clavo de olor y canela no hubo cambio. Se pudo notar que el cultivo tenia un olor carcteristico.
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Extractos orgnicos 1 2 3 4 5 6 7 Clorhexidina al 0.12% Agua destilada Ans Manzanilla Organo Clavo de olor Canela
Muestra de Muestra de bolsa Caries dental periodontal + + + + + + -
Accin inhibitoria de los extractos orgnicos sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal
6.3 Microscopa y Muestra de caries dental, en medio agar Mitis Salivarius. A 100X de aumento haciendo uso de aceite de inmersin,luego de realizar la
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coloracin Gram, se logr observar al microscopio principalmente Estreptococos y Estafilococos Gram positivos.
y Muestra de bolsa periodontal, en medio agar Shadler. A 100X de aumento haciendo uso de aceite de inmersin, luego de realizar la coloracin Gram, se logr observar al microscopio principalmente estreptococos y algunas colonias de estafilococos.
7. ANLISIS Y DISCUSIN y La accin inhibitoria que se esperaba de los extractos orgnicos sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal, no se cumpli en todas las especies que se utiliz en la investigacin. Solamente se observ halo de inhibicin en el disco que contena extracto de organo y en el disco que
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contena Clorhexidina, en la en la muestra de bolsa periodontal. Los halos de inhibicin que se pudo observar, en el cultivo de caries dental, fueron de los discos que contenan Clorhexidina, Manzanilla y Clavo de olor. Las acciones inhibitoria que se esperaba puede que no se haya producido por la forma como se adquiri alguno de los productos, ya que fueron adquiridos en un mercado, donde no existe un ambiente limpio o libre de bacterias. En la investigacin se utiliz los extractos de los productos, que se pudo obtener tras haberles colocado en agua por el lapso de tiempo de una semana, existe la posibilidad que por el tiempo que se mantuvo en estas condiciones, las acciones inhibitorias se hayan perdido en aquellas especies donde no se pudo observar accin alguna. Las especies que se utilizaron no eran plantas frescas, ya que no se le haba cosechado en ese instante, por lo tanto la accinla accin inhibitoria que presentan el organo, la manzanilla y el clavo de olor frente a las bacterias de la caries dental y bolsa periodontal, puede quesea distinto si serian cultivos frescos. La accin inhibitoria del organo sobre la flora mixta de la bolsa periodontal es significativa, ya que se pudo comparar con el halo de inhibicin de la Clorhexidina, que es un frmaco que se utiliza en tratamiento de la periodontitis, y se not que el dimetro sus halos eran similares, siendo 15mm el de la Clorhexidina y 13 mm del organo.
8. CONCLUSIONES
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y Lo que se lleg a observar al final de esta investigacin es que hay plantas, que tienen una accin inhibitoria sobre la flora mixta de caries dental y bolsa periodontal, como es el caso de la manzanilla, el organo y el clavo de olor. y Se observ que el organo tiene accin inhibitoria, tanto en caries dental, como en la flora de la bolsa periodontal, por lo que se pude concluir que, se podra utilizar el extracto de organo como componente de colutorios y pastas dentales para prevenir la caries dental asimismo emplear en el tratamiento de las enfermedades periodontales. y La Manzanilla y el clavo de olor son dos especies importantes que se pueden utilizar tambin en la prevencin de la caries dental ya que se observ que tienen una accin inhibitoria sobre la flora mixta de la caris dental. y Se pudo observar que la Clorhexidina no tiene un buen efecto inhibitorio sobre la flora mixta de la caries dental, ya que su halo de inhibicin era demasiado pequeo, por lo que no podemos considerar como un frmaco capas de prevenir la caries dental. Pero el efecto que tiene ante la flora mixta de la bolsa periodontal es significativa, por lo que se puede concluir que es un frmaco recomendado para el tratamiento de la enfermedad periodontal.
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Integrantes y y y y Gejao Heredia Rosa Huarag Gmez Percy Latorre Lpez Michel Llufire Mendoza Sergio
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antmico), xiloglucuranos, sales triacontano y fitosterina (resinas).

CINAMONUM ZEYLANICUM (CANELA)

CARYOPHYLLUS AROMATICUS (CLAVO DE OLOR)

5. METODOLOGA 5.1 Materiales y recursos

5.3.3 Protocolo procesamiento de muestra

Muestra de Muestra de bolsa Caries dental periodontal + + + + + + -

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