Introduccin

En eucariontes, los cromosomas de una clula somtica son duplicados fielmente durante la fase S del ciclo celular y durante la mitosis aparecen como las dos cromtidas de los cromosomas, unidas solo por el centrmero. La mitosis es el proceso de distribucin

equitativa de las cromtidas entre las dos clulas hijas y est convencionalmente dividida en 4 fases : profase, metafase, anafase y telofase. Se dice que la divisin es convencional, pues este proceso es uno solo y por razones de estudio se le ha dividido en 4 fases. Adems, los dos ncleos hijos son genticamente idnticos al original.

Interfase

Profase

Metafase

Anafase

Anafase

Telofase

Mitosis

PROFASE
1. En el NCLEO. Se inicia la condensacin de los cromosomas visibles al MO como finos filamentos entremezclados, los que van hacindose cada vez ms cortos y gruesos a medida que avanza la profase. De esta manera, se van organizando los cromosomas mitticos visibles desde la mitad de la profase e integrados por 2 cromtidas paralelas y separadas, excepto por una unin en su constriccin primaria. cromosoma

Los centrmeros de mamferos consisten en secuencias de ADN altamente repetidas. En humanos, cada secuencia consta de 171 pares de bases y ella est repetida varias veces. De aqu su gran tamao al cual pueden unirse los cinetocoros. Cada cinetocoro est conformado por protenas asociadas al centrmero. Al ME se observa como dos masa discoides de 0.5 1.0 m de dimetro conteniendo un material finamente fibrilar. Detalles de mayor aumento muestran una capa densa interna unida a la cromatina, una capa densa externa que une los microtbulos cinetocricos y una capa clara entre ambas capas densas. El espesor de las capas electrn-densas es de 400 y la capa clara es de 300 .

centrmero

cinetocoros

Microtbulos cinetocricos

cromtida

Mitosis

Las protenas asociadas a la capa externa parecen actuar como motores moleculares que guiarn el movimiento de los cromosomas a lo largo de las fibras del huso mittico. Estudios inmunolgicos muestran que las protenas que forman los cinetocoros persisten en el ncleo interfsico asociadas a la envoltura nuclear. El nuclolo desaparece progresivamente entre el inicio y la mitad de la profase. 2. En el CITOPLASMA Mientras est ocurriendo la condensacin cromosmica y la desaparicin nucleolar en el ncleo, en el citoplasma se inician los procesos tendientes a lograr una bipolaridad con la ubicacin, en polos opuestos de la clula, de los 2 centrolos entre los cuales se extienden microtbulos. El conjunto de microtbulos se denomina huso mittico y cada microtbulo se llama fibra del huso. Se recordar que el centrolo es una formacin microtubular cilndrica (0.2 x 0.4 m) que consta de 9 tradas de microtbulos (subfibrillas A, B y C, siendo la A la ms interna).

Los centrolos se encuentran en pares, cuyo conjunto se denomina centrosoma, dispuestos en ngulo recto y rodeados por un material electrondenso llamado material pericentriolar, que viene a constituir el centro organizador de los microtbulos. Durante la interfase, el par de centrolos se duplica, as en la clula premittica se encuentran 2 pares de centrolos perinucleares.

En la profase, el material pericentriolar se hace ms denso y constituye el centro de nucleacin para la formacin inicial de los microtbulos que constituirn el huso, es decir, es un centro inductor de polimerizacin de la tubulina. El material pericentriolar posee una protena llamada gamma tubulina, la cual manifiesta estrecha relacin molecular con las alfa y beta tubulinas, por ende, sirve como punto de nucleacin para el desarrollo de los microtbulos.

Mitosis

Los primeros microtbulos se orientan de una manera irregular, pero luego, al ir aumentando en cantidad y longitud, los van haciendo a manera de rayos alrededor de cada complejo centriolar (material centriolar ms el par de centrolos). Ahora se llaman microtbulos del ster, que al MO conforman las fibras del ster. El conjunto formado por el complejo centriolar y las fibras del ster se llama ster, por esto este tipo de mitosis se llama mitosis astral, a diferencia de las mitosis anastrales observadas en vegetales superiores. Los steres migran progresivamente en direcciones opuestas en el citoplasma de la clula, producindose elongacin de los microtbulos que se extienden entre los steres, denominndose ahora microtbulos polares (contnuos); algunos de ellos se apoyan en la envoltura nuclear. Por ltimo, los dos pares de centrolos alcanzan puntos opuestos en la clula quedando determinados los dos polos del huso mittico. La segunda parte de la profase, que suele llamarse prometafase, se caracteriza por el inicio de la ruptura de la envoltura nuclear en varios puntos. Se sabe que previo a la ruptura visible de la envoltura ha ocurrido una despolimerizacin de las protenas de la lmina nuclear, como consecuencia de la fosforilacin de las mismas por accin del MPF activo.

Despus de esta ruptura, que es progresiva, se evidencian los microtbulos cinetocricos (cromosmicos) desde los cromosomas, orientndose stos hacia el cinetocoro ms cercano; de esta manera, se mezclan los microtbulos cinetocricos con los polares, siendo sus trayectos paralelos. Los cromosomas duplicados tienen una posicin al azar con respecto a los complejos centriolares y a los microtbulos polares, pero al avanzar la prometafase se van orientando perpendicularmente a los polos, con sus microtbulos cinetocricos paralelos a los microtbulos polares. As, al final de la profase llegan a coexistir 3 grupos de microtbulos : (a) microtbulos cinetocricos o cromosmicos, que se extienden desde el cinetocoro de una cromtida hasta el centrosoma que est ms cercano a ella; (b) microtbulos polares o entrelazados, se extienden desde el centrosoma hasta antes o despus del plano ecuatorial. Slo el 30 % de ellos alcanzan el polo contrario; y (c) microtbulos libres, parecen corresponder a segmentos aislados de microtbulos cinetocricos y polares.

Mitosis

Estudios con luz polarizada muestran una alta birrefringencia en los semihusos, los que tambin muestran una alta fluorescencia al aplicar anticuerpos antitubulinas con fluorescena. Se considera que los cromosomas se mantienen en el plano ecuatorial debido a una tensin balanceada ejercida por la unin de los cinetocoros hermanos a los microtbulos orientados a polos opuestos. De hecho, si se destruye selectivamente uno de los cinetocoros de un cromosoma con un microrayo laser, el cromosoma es retrado inmediatamente hacia el polo conectado con el cinetocoro intacto.

METAFASE
La principal caracterstica de la metafase es el ordenamiento de los cromosomas en el plano ecuatorial del huso. En esta estadio, los cromosomas se encuentran en su mxima condensacin y comienzan una migracin hacia el plano ecuatorial del huso. Este huso metafsico est integrado por las 3 categoras de los microtbulos descritos anteriormente. La distribucin de los microtbulos es variable en el huso, ya que es ms elevado en los semihusos que en la interzona. Para las clulas humanas se han reportado a ME unos 1500 microtbulos en los semihusos y unos 900 en la interzona. Si consideramos que la clula humana posee 46 cromosomas, cada uno de ellos puede tener de 20 a 40 microtbulos cromosmicos.

Mitosis

ANAFASE
El comienzo de la anafase est indicado por la separacin de las cromtidas a nivel de la constriccin primaria. Cada cromtida se desplaza hacia el polo al que mira su cinetocoro y, simultneamente, los microtbulos cinetocricos se acortan. Este desplazamiento es sincrnico : 0.2 a 5.0 m/min aproximadamente y es independiente de la forma y tamao de los cromosomas. A menudo el movimiento es ms rpido al inicio de la anafase y se hace ms lento posteriormente. El final de la anafase est indicada por la reunin de cada lote de cromtidas en un polo, las cuales constituirn los cromosomas de las futuras clulas hijas. Conforme los cromosomas se mueven a sus respectivos polos, stos se alejan entre s y el huso se alarga (semihusos se acortan e interzona se alarga). Debido a estos dos movimientos la anafase suele dividirse en anafase A en la que los cromosomas se separan y anafase B en la que los polos se alejan. Los microtbulos constituyen la estructura esencial en ambos movimientos, puesto que el empleo de la colchicina altera a ambos por igual.

Anafase A Migracin de los cromosomas

La protena motora del complejo cinetocrico libera tubulinas

Desensamble microtbulo Cromosoma

Se recordar que los microtbulos son estructuras polarizadas debido a la orientacin de sus unidades de tubulina y al modelo dinmico de ensamble y desensamble. Adems, se ha comprobado que todos los microtbulos de cada semihuso, tanto cinetocricos como polares, tienen una orientacin paralela; en cambio, los microtbulos de un semihuso tienen orientacin opuesta con los del otro semihuso.

Mitosis

Los microtbulos cinetocricos, al igual que todos los microtbulos del huso, estn orientados con su extremo () hacia el polo y el extremo (+) est unido al cinetocoro de una cromtida. El extremo (+) de los microtbulos polares se extiende libre en la zona ecuatorial. Tanto el ensamble como el desensamble de ambos microtbulos ocurre en los extremos (+). Experimentos in vivo e in vitro han demostrado que el movimiento de los cromosomas (anafase A) se acompaa por un desensamble coordinado de los microtbulos cinetocricos desde sus extremos (+) a nivel de los cinetocoros.

En este punto del proceso es necesario indicar que acta la topoisomerasa II para separar las molculas de ADN que se encuentran entrelazadas en esta regin. Por otro lado, al producirse el acortamiento de los microtbulos cinetocricos, los cromtidas van acercndose progresivamente a cada polo y aumenta la cantidad de molculas de tubulina en el citosol. Es importante sealar aqu que este movimiento NO requiere de ATP, lo que parece ser que el propio desensamble es suficiente para producir el movimiento.

METAFASE
Eliminacin en el polo Adicin en el cinetocoro

ANAFASE
Rpida eliminacin en el cinetocoro

Leve eliminacin en el polo

Microtbulos cinetocricos mantienen longitud constante

Microtbulos cinetocricos se acortan por despolimerizacin en ambos extremos

Mitosis

Anafase B Elongacin del huso En la mitad de la anafase, cuando los cromosomas se aproximan a los polos, se produce un alargamiento del huso derivado de un aumento en la longitud de los microtbulos polares. As, el huso se hace ms largo y ms estrecho. En algunas clulas, este alargamiento es considerable : doblan su longitud (de 10 m a 20 m). Se considera que este alargamiento de los microtbulos se debe a una agregacin de nuevas unidades de tubulina (ensamble) en los extremos ecuatoriales de los microtbulos polares. Recordemos que la mayora de los microtbulos polares llegan hasta un poco ms all del ecuador; por tanto, se establece una zona en que se solapan los microtbulos provenientes de ambos polos.

Adems, la orientacin de estos microtbulos es con su extremo () ubicado en un polo y su extremo (+) en la zona de solapamiento. Existen molculas llamadas kinesina que manejan ciclos ATP-ADP que permiten empujar los microtbulos hacia el extremo (); por esta razn la anafase B requiere de la hidrlisis de molculas de ATP. Experimentos en ausencia de molculas de tubulinas libres han demostrado que al agregar ATP, la elongacin del huso est limitado a la longitud de la zona de solapamiento. Sin embargo, esto no explicara el hecho que la elongacin llega a doblar la longitud de la clula De aqu que si en el experimento anterior se aaden molculas de tubulinas libres, la elongacin del huso llega a ser varias veces la longitud de la zona de solapamiento original.

Las kinesinas empujan los microtbulos hacia los polos

Mitosis

Al final de la anafase se inicia la citodiresis o citocinesis, que corresponde a la divisin en partes iguales del contenido citoplasmtico y se ha demostrado que es un fenmeno contrctil. De hecho, se ha evidenciado por inmunofluorescencia y por ME que se acumulan microfilamentos de actina en la regin ecuatorial, por debajo de la membrana plasmtica. Adems, en experimentos que utilizan citocalasina B que disgrega los microfilamentos, se inhibe la citodiresis; en cambio, el uso de colchicina que disgrega los microtbulos, no tienen efecto sobre la progresin del surco de divisin.

Los poros aparecen muy precozmente y la cisterna perinuclear es al inicio de dimensiones variables hacindose uniforme al final de la telofase. Simultneamente, los cromosomas inician un proceso de descondensacin hasta adquirir la disposicin del ncleo interfsico. Los extremos polares de los microtbulos polares se disgregan, quedando slo los cercanos al ecuador del huso, los cuales se acercan unos a otros hasta fusionarse en un haz nico, a medida que crece el surco de divisin.

TELOFASE
La telofase se inicia cuando comienza a reconstruirse la envultura nuclear, que envuelve cada lote de cromosomas ubicados en los polos. La envoltura nuclear inicia su formacin a partir del final de la anafase B, cuando comienza la polimerizacin de las lminas proteicas de la lmina nuclear. Sobre esta lmina se colocan segmentos cortos de RE, los cuales inician progresiva coalescencia que conduce a la formacin de una envoltura nuclear contnua.

Mitosis

Existe un modelo que intenta explicar la invaginacin del surco de divisin, es el anillo contrctil. Los microfilamentos de actina se encuentran unidos a la membrana plasmtica mediante la alfa-actinina. Los microfilamentos se disponen concntricamente al surco de divisin, quedando entre ellos microfilamentos de miosina de tipo I. Las interacciones entre actina y miosina provocan la invaginacin de la membrana en la regin del surco de divisin. El anillo contrctil sigue contrayndose y el surco subyacente profundizndose, hasta el punto en el cual solo queda un estrecho puente citoplasmtico, por el cual se extiende el haz nico de microtbulos. Luego estos puentes se rompen quedando independientes las dos clulas hijas.

En las clulas animales, la citodiresis se inicia por una invaginacin de la membrana plasmtica, que va formar un surco circular que rodea la clula, es el llamado surco de divisin.

En las clulas vegetales, que estn protegidas por una pared celulsica rgida, las clulas hijas no pueden separarse ms all de los lmites de la pared celular. De aqu que la citodiresis sea diferente a la descrita para las clulas animales. En la regin ecuatorial del huso se acumulan vesculas originadas del Golgi, cuyo conjunto se denomina fragmoplasto. Las vesculas se fusionan progresivamente hasta llegar a formar las membranas plasmticas de las dos clulas hijas.

Surco de divisin

Mitosis

MPF y la progresin hasta Metafase

La mitosis incluye drsticos cambios en compuestos celulares que conducen a una reorganizacin de toda la clula. Estos cambios son iniciados por la activacin del MPF (cdc2 y ciclina B). El MPF acta como un regulador maestro de la transicin hacia la fase M del ciclo celular. Adems, fosforila algunas protenas relacionadas con la reorganizacin celular y tambin activa otras protein kinasas (ver esquema abajo). Al comienzo de la anafase, el MPF es degradado. Esto promueve la actividad de las fosfatasas que van a desfosforilar todas aquellas protenas que haban sido fosforiladas por el MPF activo.

Cdc2

Condensacin de la cromatina mediante fosforilacin de la histona H-1.

Rompimiento de la envoltura nuclear, mediante fosforilacin de las lminas.

Fragmentacin del RE y del Golgi.

Formacin del huso microtbulos con inestabilidad dinmica

El siguiente esquema resume los blancos de la MPF activa

Mitosis

Muerte celular En todos los organismo multicelulares, los ritmos de mitosis y muerte celular son similares. Este equilibrio, que suele llamarse homeostasis, puede esquematizarse a continuacin. Mitosis Muerte Este equilibrio puede alterarse cuando ocurra un trastorno por prdida de clulas. Ejemplos patolgicos de este caso son: el SIDA, las enfermedades de Alzheimer y Parkinson, la anemia aplasica, infarto al miocardio. En todos estos casos el esquema sera:

Homeostasis

Mi

tos is

Este equilibrio puede alterarse por razones fisiolgicas, por ejemplo, durante el desarrollo embrionario por razones patolgicas, por ejemplo un traumatismo. Durante el desarrollo embrionario existe una enorme tendencia a producirse nuevos tejidos y a crecer organizadamente los rganos y estructuras ya formadas. Pero al mismo tiempo, otros tejidos deben desaparecer, por ejemplo, los que constituyen la cola que tuvimos durante una etapa del desarrollo. Esta es una muerte programada que se denomina apoptosis. Las clulas inician su propia muerte mediante la activacin de un programa gentico de suicidio, que se caracteriza por una autodigestin, utilizando sus lisosomas.

Mu

ert

En otras patologas ocurre un trastorno por acumulacin de clulas, como es el caso del cncer, del lupus eritematoso, de glomerulonefritis. En estos casos el esquema tendra el siguiente aspecto:
e ert

Mu
sis ito M