Hepatopancreatite necrosante (NHP)..

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Reviso de Literatura da pag 47 a 53

Reviso de Literatura

HEPATOPANCREATITE NECROSANTE (NHP) EM CAMARO MARINHO

Giana Bastos GOMES1*, Emiko Shinozaki MENDES2, Vernica Arns da SILVA3

RESUMO: A hepatopancreatite necrosante (NHP) uma enfermidade bacteriana grave, que acomete os camares marinhos. causada por uma bactria intracelular obrigatria, pleomrfica, gram-negativa, do tipo Rickettsia, que ataca as clulas do hepatopncreas (glndula digestiva). A NHP est associada a perodos prolongados de elevadas temperaturas e salinidades, ocorrendo principalmente em animais juvenis e adultos, no sendo observados sinais clnicos em ps-larvas. Pode acometer vrias espcies, mas principalmente Litopenaeus vannamei. A transmisso ocorre atravs da ingesto de animais mortos contaminados ou de material contaminado. Os camares afetados apresentam-se letrgicos, anorxicos, exoesqueleto amolecido, corpo flcido, cutcula frouxa, brnquias escurecidas, hepatopncreas atrofiado e plido. O controle fsico-qumico da gua de extrema importncia na profilaxia da doena. As tcnicas mais usadas para o diagnstico da NHP so: o exame a fresco (anlise presuntiva), a histopatologia, hibridizao in situ e principalmente Reao em Cadeia de Polimerase (PCR). Drogas como a oxitetraciclina tm demonstrado bons resultados, tanto na preveno como no tratamento desta enfermidade. Contudo, objetivou-se ampliar os conhecimentos sobre a hepatopancreatite necrosante em camares marinhos buscando mostrar a necessidade de mais pesquisas e discusso sobre este assunto. Termos para indexao: bactria intracelular, diagnstico, Litopenaeus vannamei, rickettsia.

NECROTIZING HEPATOPANCREATITIS (NHP) IN MARINE SHRIMP

ABSTRACT: Necrotizing hepatopancreatitis (NHP) is a serious bacterial disease which affects cultured shrimp. It is caused by Rickettsia-like, pleomorfic, gram-negative, obligatory intracellular bacteria that attack hepatopancreas' cells. NHP prevalence is associated with high temperatures and salinity periods, ocurring mainly in juveniles and adults, not being observed clinical signs in post-larval stages. It attacks several penaeid species; however NHP in Litopenaeus vannamei is most reported. Ingestion of infected dead animals or material of is the most probable mean of contamination. NHP affected shrimp may become lethargic, anorexic, soft-shelled, flaccid body with loose cuticle, darkened gills and atrophic and pale hepatopancreas. Water quality control is very important in the prophylaxis of the disease. The techniques mostly used for the diagnosis of NHP are wet mounts of hepatopancreas, histology, in situ hibridization and most accurately, PCR. Drugs as oxytetracyclin have demonstrated good results in the prevention and in the treatment of NHP. However, it was aimed to
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Mdica Veterinria - Mestranda do Programa de Ps-Graduao em Cincia Veterinria (PPGCV) da Universidade Federal Rural de Pernambuco - Rua Pedro Fonseca Filho, 8889. Ponta Negra. CEP: 59090-080. Natal/RN. Tel: (84) 3219 2740 - gianabg@hotmail.com *Autor para correspondncia. Professora Adjunta - Departamento Medicina Veterinria - Universidade Federal Rural de Pernambuco. Doutoranda do Programa de Ps-Graduao em Cincia Veterinria (PPGCV) da Universidade Federal Rural de Pernambuco.

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enlarge the knowledge of necrotizing hepatopancreatitis in marine shrimp and show the need of more researches and discussion on this subject. Index terms: Diagnosis, intracellular bacteria, Litopenaeus vannamei, rickettsia. INTRODUO A inflamao e necrose do hepatopncreas, denominada Hepatopancreatite Necrosante (NHP), uma doena bacteriana severa que acomete camares marinhos brancos. Muitas perdas na produo de camares marinhos nas Amricas ocorreram devido a esta enfermidade, o que limitou gravemente a produo desses animais no Texas, onde ocorreram mortalidades entre 20-95%, nas Amricas Central e do Sul, como exemplo Tumbes/Peru, onde ocorreram mortalidades entre 70-90% (FRELIER et al., 1992; LOY et al., 1996) Infeces por Rickettsia, que causam NHP, tm causado srios prejuzos econmicos tambm na carcinicultura brasileira, principalmente em cultivos com condies ambientais inadequadas (BUCHELI et al., 2004). Dentre as regies do Brasil, o nordeste destaca-se como plo produtor de camares marinhos. Entretanto, nos ltimos anos, os Estados do Cear, Pernambuco, Paraba e principalmente o Rio Grande do Norte vm enfrentando grandes perdas devido a esta enfermidade. A NHP causada por uma bactria da ordem Rickettsia, que compreende um largo e diverso grupo de organismos, sendo freqentemente patognicos para uma ou mais espcies hospedeiras, podendo causar apenas alteraes benignas, em muitas das espcies acometidas (FRYER e LANNAN, 1994). Desta forma, objetivou-se ampliar os conhecimentos a respeito desta doena que tem ocasionado tantas perdas criao de camares marinhos, principalmente no nordeste brasileiro, assim como mostrar a necessidade de mais pesquisas e discusso sobre este assunto. CARACTERSTICAS ETIOLGICAS Esta enfermidade causada por uma bactria intracelular obrigatria pequena, membro das -Proteobacteria, do tipo Rickettsia, que reside e se multiplica nas clulas epiteliais dos tbulos do hepatopncreas (HP) de camares marinhos infectados (BRADLEY-DUNLOP et al., 2004). As rickettsias so bactrias Gram-negativas, pleomrficas, ou seja, podem variar em forma e tamanho. So microrganismos que lembram morfologicamente indivduos da ordem Rickettsiales (FRELIER et al., 1992; LOY et al., 1996). As -Proteobactrias foram descritas inicialmente como trs microrganismos: uma bactria do tipo rickettsia, pleomrfica com forma de basto, outra bactria com forma helicoidal e outra sendo uma bactria filamentosa. Anlises morfolgicas mais recentes evidenciaram a presena de uma bactria simples presente em duas formas distintas. A forma predominante a de basto, do tipo rickettsia, sem flagelos e ocasionalmente exibindo uma zona de constrico transversa, indicativa de replicao por fisso binria (VINCENT et al., 2004). A outra forma a helicoidal que possui oito flagelos no pice basal e um ou possivelmente dois flagelos na crista. Uma forma confusa, intermediria, exibindo morfologia de ambas variantes observada ocasionalmente nas clulas epiteliais de hepatopncreas infectados, o que sugere a replicao da forma de basto na forma helicoidal. Segundo Frelier et al. (1992) e Loy et al. (1996), esta forma intermediria apresenta uma membrana citoplasmtica trilaminar com ondulaes e um envelope externo. As Rickettsias so bactrias que s se reproduzem dentro das clulas, porque necessitam de um sistema enzimtico que gere energia suficiente para sua reproduo. Esta caracterstica dificulta seu diagnstico, pois difcil cultiv-las pelos mtodos microbiolgicos rotineiros (OSUNA,

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2001). Segundo Lightner (1996), as tentativas de cultivo desta bactria pelos mtodos bacteriolgicos tradicionais no tm apresentado bons resultados. Segundo Mauel e Miller (2002), durante a dcada de 90 membros de um grupo de bactrias intracelulares obrigatrias, do tipo Rickettsia (RLO-rickettsia like organism) foram reconhecidos como importantes patgenos de peixes. Este tipo de bactria ocorre globalmente tanto em peixes de guas doce quanto salgada. A mais antiga identificao de RLO, em peixes, foi na espcie Tetrodon fohaka encontrada no Rio Nilo, no Egito. Outra identificao de RLO em peixes foi feita por Davies (1986) quando o mesmo observou bactrias coccoides encontradas em vacolos ligados a membranas, em linfcitos de peixes da espcie Callianymus lyra L., em guas costeiras da regio de Wales. Estes microrganismos ocorrem freqentemente em brnquias e epitlio digestivo de moluscos marinhos sendo, nestes casos, benignas (FRYER e LANNAN, 1994). Existem muitos relatos de que as Rickettsias so diretamente responsveis pela mortalidade em moluscos marinhos e tm um papel importante na doena destes animais. Alm disso, sabe-se que as mesmas no matam as clulas do hospedeiro pela produo de toxinas, mas a penetrao das mesmas nas clulas hospedeiras causa danos, podendo destru-las. (WU e PAN, 2000). EPIDEMIOLOGIA Um aspecto muito importante da NHP em camares marinhos que esta doena est associada a condies de elevada salinidade e temperatura. Perodos prolongados de altas temperaturas (acima de 29 C) e mudanas na salinidade (entre 2040%) precederam o desenvolvimento de NHP no Texas (FRELIER et al., 1992; LIGHTNER, 1996; LOY et al., 1996). De acordo com Vincent et al. (2004), h transferncia oral do agente etiolgico

em camares sadios, havendo mortalidade induzida por NHP a partir dos 18 at o 41 dias aps exposio ao agente, no havendo recuperao dos animais infectados. Alm disso, os sintomas da enfermidade j podem ser visveis 2 ou 3 semanas aps infeco. Frelier et al. (1992) constataram que a transmisso da NHP atravs da gua no eficiente, sendo necessrio um reservatrio para a transmisso desta bactria intracelular. Segundo Leclercq et al. (2004), diversas espcies de crustceos como caranguejos, coppodes, Callianasa spp, podem ser consideradas como reservatrios de espcies da bactria de NHP, especialmente o Lepidophthalmus spp. que pode mover-se profundamente nos sedimentos de viveiros e persistir por longos perodos de secagem. Esta doena afeta tanto animais em estgio juvenil quanto adulto, no sendo registrados casos em ps-larvas. Segundo Lightner (1996), a enfermidade pode desenvolver-se em Litopenaeus setiferus , L. stylirostris, Farfantepenaeus aztecus, F. californiensis, mas principalmente em Litopenaeus vannamei, sendo a espcie Litopenaeus stylirostris menos susceptvel. Vincent et al. (2004) citaram que a transmisso da doena no ocorre de forma satisfatria quando se utiliza inoculao parenteral do agente. No entanto, a transmisso atravs da ingesto de material infectado ou canibalismo de camares mortos infectados, parecem ser as formas de infeco natural. A bactria causadora de NHP infecta as clulas do hepatopncreas, que a maior glndula digestiva do camaro. Este rgo contm muitos tipos de clulas, incluindo clulas do tipo E, R, F e B. As clulas E caracterizam-se pela atividade mittica, sendo a fonte de formao dos outros tipos de clulas, e esto localizadas na poro mais distal do hepatopncreas. As clulas do tipo R armazenam lipdeos e glicose, sendo as clulas encontradas em maior quantidade. Existem ainda, as clulas tipo F que secretam enzimas digestivas e so

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encontradas em menor quantidade, e as clulas do tipo B, que realizam a digesto intracelular, acumulam e transportam nutrientes (VOGT, 1994). Vicent e Lotz (2005) relataram que possvel observar um aumento no nmero de clulas hepatopancreticas contendo a bactria da NHP, no desenvolvimento da infeco, o que sugere que deve haver multiplicao e disperso bacteriana associada com os danos causados ao tecido, apesar dos escassos estudos sobre a patognese desta bactria. Alm disso, nas clulas j maduras pode-se observar a bactria da NHP, ainda no incio da infeco. Isso no sugere que estes microrganismos tenham preferncia por um tipo de clula. No entanto, observa-se que as clulas do tipo E so menos suscetveis a infeco que os outros tipos celulares. Fatores exgenos (como temperatura e salinidade) interagem com fatores internos (como alteraes hormonais), no desenvolvimento da epizootia da NHP (VINCENT, 2004). De acordo com MoralesCovarrubias (2004), no Mxico, a NHP tem afetado tanto animais nos viveiros, assim como reprodutores nos laboratrios de maturao, especialmente em fmeas abladas. A mortalidade de fmeas abladas foi maior quando comparada com aquelas que receberam aplicaes de hormnio e do grupo controle. Isto sugere que um fator estressante adicional, como uma ablao, pode agravar a infeco por NHP, resultando na doena e nas mortalidades observadas (MORALES-COVARRUBIAS et al., 2006). No Mxico, tem-se observado que a doena manifesta-se principalmente nos meses de abril, maio, junho, julho, agosto, mas sua alta prevalncia observada nos meses de setembro e outubro, causando altas mortalidades em camares cultivados (MORALES-COVARRUBIAS, 2004) Morales-Covarrubias et al. (2006) mostraram que, mesmo em laboratrios com timas condies de maturao e onde o aspecto sanitrio apresenta-se como ponto de controle importante, pode ser obser-

vada a presena do vrus da necrose infecciosa hipodermal e hematopoitica (IHHNV), alm de altas mortalidades em fmeas submetidas ablao. Tem-se observado, tambm, que mudanas ambientais, juntamente com ablao, induzem as alteraes da resposta imune em crustceos, tanto em termos de nmero de hemcitos, como na fagocitose e na ativao do sistema profenoloxidase (LE MOULLAC e HAFFNER, 2000) SINAIS CLNICOS Devido inflamao crnica que ocorre nas clulas do epitlio do hepatopncreas, este rgo torna-se plido e atrofiado. As clulas hepatopancreticas aparecem hipertrofiadas e com grande aglomerado bacteriano no citoplasma. As clulas infectadas perdem a funcionalidade e tornam-se necrticas, gerando uma forte resposta inflamatria, que resulta na formao de mltiplas leses granulomatosas no hepatopncreas. Este quadro causa severos problemas no camaro, pois o hepatopncreas tem um papel muito importante na realizao das funes digestivas, como absoro e metabolismo de nutrientes. Esta disfuno pode alterar significativamente o desenvolvimento do animal (OSUNA, 2001). Os camares afetados apresentam-se letrgicos, anorxicos, com baixo crescimento e elevada converso alimentar. O exoesqueleto encontra-se amolecido, corpo flcido, cutcula frouxa, brnquias escurecidas, aspecto escuro devido expanso dos cromatforos nas bordas dos urpodos e plepodos, resultando em mortalidade. O trato digestivo encontra-se vazio devido ao processo inflamatrio crnico (LIGHTNER e REDMAN, 1998). Segundo Frelier et al. (1992), pode-se classificar a infeco de NHP em trs estgios. Estgio 1: caracterizado por disperso dos tbulos hepatopancreticos exibindo grupos de clulas contendo bactria intracelular, mas sem infiltrao hemoctica. Estgio 2: caracterizado por numerosos

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tbulos hepatopancreticos enrugados, hipertrficos ou com epitlio atenuado com ectasia tubular, poucos tbulos necrticos, alguma descamao luminal das clulas epiteliais e, ocasionalmente, infiltrao hemoctica. Estgio 3: caracterizado por numerosos tbulos hepatopancreticos necrticos dispersos, com falta de epitlio intacto e descamao das clulas epiteliais, densa infiltrao hemoctica, melanizao e fibrose. Uma diminuio na quantidade de lipdeos no hepatopncreas progressivamente observada do estgio 1 ao 3 de NHP. DIAGNSTICO Segundo Lightner (1996), a NHP pode ser detectada atravs de anlises a fresco do tecido do hepatopncreas, onde a ausncia ou uma quantidade reduzida de gotculas de lipdeos fica evidente ao longo dos tbulos do hepatopncreas, que se encontram atrofiados, melanizados e necrosados, podendo tambm ser encontrado massas citoplasmticas da bactria de NHP no interior dos tbulos. Outra forma muito comum de diagnstico para deteco do agente causal da doena a histopatologia, onde possvel verificar a intensidade das leses, podendo ser utilizado tambm sondas moleculares ou genticas, como Dot Blot ou hibridizao in situ. Alteraes histopatolgicas em camares positivos por NHP incluem atrofia do HP com moderada ou severa atrofia da mucosa dos tbulos, alm de leses granulamatosas multifocais envolvendo um ou mais tbulos (BRIEZ et al., 2003). Atualmente, o mtodo de diagnstico utilizado, com resultados mais precisos e eficientes, vem sendo a Reao em Cadeia pela Polimerase (PCR) e exame do tecido afetado atravs da microscopia eletrnica. Estas duas ltimas tcnicas ainda tm custo elevado, principalmente por necessitarem de material e equipamentos especficos, alm de mo-de-obra especializada (OSUNA, 2001). Anticorpos monoclonais tambm tm sido desenvolvidos para de-

teco de NHP (BRADLEY-DUNLOP et al., 2004). Segundo Lightner e Redman (1998), os mtodos de deteco de patgenos e de diagnstico de doenas mais utilizados pelos patologistas e por laboratrios de diagnstico tm sido atualmente revisados, porque as tcnicas utilizadas ainda se baseiam nos mtodos clssicos. Entre os mais importantes destacam-se a observao de sinais clnicos caractersticos, alm de testes laboratoriais como, exames diretos ao microscpio, microbiologia clssica com isolamento dos agentes etiolgicos, histopatologia e histoqumica. Especificamente em relao NHP, os mtodos laboratoriais de diagnstico mais utilizados so a histopatologia, sondas gnicas (LOY et al., 1996; LIGHTNER, 1996), hibridizao in situ e, mais recentemente, a PCR. Esta ltima tcnica, tem tido aplicao no diagnstico de muitas enfermidades de camares, principalmente nas viroses. Mas esta tcnica tambm tem sido muito utilizada para a deteco de patgenos como a bactria do NHP (LOY et al., 1996). A tcnica de hibridizao in situ tambm tem sido utilizada como forma de proporcionar a classificao filogentica, assim como, distinguir espcies de bactrias sem especificar grupos genmicos (LOY et al., 1996). CONTROLE E PROFILAXIA O monitoramento fsico-qumico da gua um fator de extrema importncia para a profilaxia de muitas enfermidades, tendo grande relevncia para a epidemiologia da NHP. Outro ponto importante o vazio sanitrio dos viveiros entre ciclos (secagem completa do solo) e a correta preparao dos viveiros para o prximo cultivo, o que inclui a oxidao da camada superficial atravs de gradeamento, a desinfeco de reas midas com cal virgem e o controle do teor de matria orgnica do solo com nitrato de sdio e/ou adio de bactrias redutoras de matria orgnica (LIGHTNER, 1996).

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Atualmente, no h nenhuma droga aprovada pelo FDA (Food and Drug Administration) e pelo MAPA (Ministrio do Abastecimento, Pecuria e Agricultura) para o tratamento de infeces em camares cultivveis, embora alguns estudos estejam em andamento para melhorar o controle e tratamento de doenas desses animais (REED et al., 2004). De acordo com Reed et al. (2004), a oxitetraciclina (OTC), devido a seu amplo espectro antimicrobiano e alta potncia, muito utilizada como antibitico de eleio contra infeces bacterianas em cultivos de peixes, e tem apresentado bons resultados quando usada em cultivos de camaro para o tratamento de infeces como a vibriose e a NHP. A OTC foi o primeiro antimicrobiano aprovado pela FDA para cultivos de peixes e foi aprovada nos Estados Unidos para uso em lagostas, e tem demonstrado bons resultados em cultivos de crustceos. De acordo com Frelier et al. (1994), o tratamento com oxitetraciclina na rao contendo uma proporo de 1,5g /kg de alimento e usado por 14 dias foi efetivo no tratamento da doena, se administrada quando h diagnstico precoce da infeco. No entanto, ainda se sabe pouco sobre a disposio e a farmacocintica da OTC no organismo de crustceos (REED et al., 2004). Alm disso, medida que a indstria da aquacultura cresce, aumenta tambm a preocupao com o uso indiscriminado dessas drogas e possveis riscos para a sade humana, assim como aos impactos ambientais ocasionados pelos resduos das mesmas (REED et al., 2004). Espera-se que novas drogas sejam desenvolvidas em breve e possam ser eficientes no tratamento desta enfermidade. CONSIDERAES FINAIS A Hepatopancreatite Necrosante (NHP) uma doena que j existe h pelo menos 20 anos nos cultivos de camaro marinho. No entanto, os estudos sobre a doena e principalmente em relao a seu diagnstico, so pouco eficientes.

O maior problema em relao deteco da bactria causadora da NHP o fato de ser um microrganismo exclusivamente intracelular, ou seja, no pode ser cultivada in vitro pelos meios de cultivo convencionais, sendo necessrio, ainda, muita pesquisa em relao ao diagnstico desta enfermidade. Atualmente, o nico tratamento utilizado para esta enfermidade, a terapia com oxitetraciclina. No entanto, o tratamento com antibitico no recomendado por no existir droga antimicrobiana aprovada no Brasil, alm dos riscos para a sade humana e os impactos ambientais ocasionados pelos resduos das mesmas. Dessa forma, possvel considerar que o controle da NHP fica restrito ao manejo das fazendas, principalmente ao controle da qualidade da gua utilizada nos cultivos e do monitoramento de seus parmetros, de forma que se mantenha o conforto desses animais. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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