Biognesis mitocondrial y ejercicio

Lic. Mara Fernanda Insua. La actividad contrctil crnica produce biognesis mitocondrial en el msculo, entendiendo estos trminos como los procesos celulares involucrados en la sntesis y degradacin de estas organelas. Mecanismos celulares de biognesis mitocondrial La iniciacin de la biognesis mitocondrial en las clulas musculares comienza con ciertas seales provocadas por la contraccin del msculo. La magnitud de la seal/es, hasta cierto punto, indudablemente est relacionada con la intensidad y duracin del esfuerzo contrctil. Esta sealizacin puede potencialmente conducir a 1) la activacin o inhibicin de factores de transcripcin, los cuales afectarn la velocidad de transcripcin, 2) la activacin o inhibicin de factores de estabilizacin del RNAm, los cuales median cambios en la velocidad de degradacin del RNAm, 3) alteraciones en la eficiencia de la traduccin a protenas, 4) la modificacin post-traduccional de las protenas, 5) cambios en la cintica de importacin de protenas mitocondriales y/o 6) alteraciones en la velocidad de ensamblado de las subunidades que conforman los complejos enzimticos mitocondriales. Adems, la seal/es podra ser transmitida directamente a la mitocondria para iniciar la replicacin o transcripcin del ADNmitocondrial (ADNmt), o tener un efecto sobre la traduccin del RNAm a protenas o en el ensamblado de las complejos enzimticos. Eventos iniciales de sealizacin Si hablamos de la actividad contrctil, al inicio de la misma, se sucede un nmero de eventos rpidos, que forman parte del proceso de sealizacin inicial, que conduce a la sntesis de protenas y lpidos. Estos incluyen: 1) cambios en la conformacin de protenas sensibles al voltaje, respondiendo a potenciales de accin del sarcolema (membrana plasmtica del msculo); 2) activacin de unas protenas de la superficie celular llamadas integrinas, que son mecanotransductores (traducen seales mecnicas desde el exterior al interior celular); 3) flujo de iones (por ej. de Ca2+) en la clula muscular en contraccin; 4) cambios en la duracin de los puentes cruzados y el desarrollo de la tensin y 5) el recambio de ATP y la subsiguiente estimulacin del metabolismo. Se discutirn principalmente los eventos relacionados la sealizacin por calcio y el recambio de ATP. Calcio. Su liberacin del retculo sarcoplsmico, permite la interaccin de la actina y la miosina en la clula muscular. Tambin es muy reconocido como un importante segundo mensajero en una variedad de clulas, incluyendo las musculares. Incrementos en la concentracin de calcio citoslico pueden activar

un nmero de protenas kinasas (por ej la Ca2+/calmodulina kinasa II, la protena kinasa C (PKC)) y fosfatasas (por ej, la calcineurina), las cuales en ltima instancia envan sus seales al ncleo para alterar la velocidad de la transcripcin de ciertos genes. Existen otros eventos en los que participa el calcio que podran estar relacionados con la biognesis mitocondrial. Primero, el incremento de calcio citoslico influencia directamente la velocidad de la respiracin mitocondrial. Esto ocurre a travs de la activacin de enzimas deshidrogenasas, las cuales requieren calcio para su actividad completa. El cambio en el calcio mitocondrial causa incrementos en los niveles de ATP tanto en el citosol como en la mitocondria, los cuales permanecen ms tiempo, luego de que las elevaciones de calcio mitocondrial han declinado. En segundo trmino, se han reportado cambios mediados por calcio en eventos de fosforilacin en la membrana mitocondrial interna, particularmente con la fosforilacin de la subunidad c de la ATPasa F0 F1(la que participa en la sntesis de ATP). Aunque el significado de estos hechos respecto a la biognesis mitocondrial an no ha sido establecido, podran estar formando parte de una cascada de sealizacin intramitocondrial. Tercero, disminuciones en la concentracin de calcio en el medio que baa miotubos en cultivo, produce cambios paralelos en las actividades de las enzimas mitocondriales. En cuarto lugar, han sido documentados incrementos mediados por calcio en la expresin de citocromo c, un importante componenete de la cadena de transporte de electrones. Finalmente, estudios realizados en clulas con una deplecin inducida del ADN mitocondrial (ADNmt), han sostenido la conclusin de que algunos eventos sealizados por calcio en el msculo, son propagados como resultado directo de desbalances en la relacin suministro-demanda de energa. En la deplecin del ADNmt, la sntesis de ATP est reducida por una cadena respiratoria defectuosa, resultado de niveles inadecuados de ciertas protenas codificadas por el genoma mitocondrial. Esto conduce a un incremento de la concentracin de calcio citoslico, presumiblemente porque los procesos dependientes de energa como la extrusin y la entrada de calcio estn deteriorados. Ms recientemente Wu y col. generaron un ratn transgnico que expresa selectivamente en el msculo esqueltico, una forma constitutivamente activa de la protena kinasa IV dependiente de calcio/calmodulina (CaMKIV). Los msculos esquelticos de estos ratones mostraron una replicacin aumentada de DNA mitocondrial y biognesis de mitocondrias, una up-regulacin de las enzimas mitocondriales involucradas con el metabolismo de los cidos grasos y el transporte de electrones, y una susceptibilidad reducida a la fatiga durante contracciones repetitivas. La CaMK indujo la expresin de PGC-1 (peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1 (PGC-1), un regulador maestro de la biognesis mitocondrial in vivo, y activ el promotor del gen PGC-1 en miocitos en cultivo. Por lo tanto una va de sealizacin regulada por calcio, controla la biognesis mitocondrial en clulas de mamfero (Wu, 2002). Sin embargo, algunos estudios han mostrado que un incremento de calcio no puede, por s mismo, conducir a un aumento de la biognesis mitocondrial, sino que estara formando slo parte de una serie ms amplia de seales positivas y negativas que median los cambios en la sntesis de componentes mitocondriales. Recambio de ATP. Por muchos aos, ha sido hipotetizado que disturbios en el metabolismo energtico que conduce a una deplecin de ATP, una alteracin en la carga energtica, o un cambio en el potencial de fosforilacin, podran iniciar una respuesta compensatoria, conduciendo en ltima instancia a un incremento del contenido mitocondrial. Sin embargo, el entrenamiento fsico de moderada intensidad puede conducir a la biognesis mitocondrial en ausencia de cambios notables en los niveles celulares de ATP. Por lo tanto, a pesar de que las condiciones de deplecin de ATP son conocidas por conducir a un contenido

mayor de mitocondrias, pareciera ser que un incremento en la velocidad de recambio del ATP (es decir, velocidades aumentadas de sntesis y degradacin de ATP), es suficiente para provocar la biognesis mitocondrial. Estas ideas se apoyan en un considerable soporte experimental: experimentos realizados con una droga (el cido b-guanidinoproprinico) para depletar los compuestos con grupos fosfatos de alta energa como la fosfocreatina y el ATP, muestran una up-regulacin de las enzimas mitocondriales y el RNAm del citocromo c, en msculo. En segundo trmino, como resultado del recambio acelerado de ATP, el ejercicio incrementa los niveles de AMP y disminuye los de fosfocreatina en el msculo, provocando la activacin de una protena kinasa, la a2-AMPK (ver fig. 1). El desacople o desacoplamiento mitocondrial se refiere a la disipacin del gradiente electroqumico a travs de la membrana interna, lo cual disminuye la produccin de ATP, inhibiendo la actividad de la ATPasa F1 F0. Subsecuentemente, el transpote de electrones y el consumo de oxgeno se aceleran porque se pierde el control ejercido por el ADP, y la utilizacin de ATP excede la sntesis. En este sentido, esta condicin es anloga al ejercicio intenso. El desacople puede lograrse por el uso de drogas especficas in vitro, o por la sobreexpresin de protenas de desacople (UCPs). En 6 hs de desacople, se observ una induccin del factor de transcripcin llamado factor-1 respiratorio nuclear (NRF-1). NRF-1 ha sido ampliamente involucrado en la activacin de mltiples genes implicados en la biognesis mitocondrial. Seguidamente a la induccin del NRF-1, se observ un aumento en la expresin de los genes que son target de este factor, incluyendo la d-cido amino levulnico sintasa (ALAs), la enzima limitante de la velocidad en la sntesis del grupo hemo. Este grupo es un componente vital de la cadena respiratoria, ya que acta como grupoprosttico de los citocromos mitocondriales. Por lo tanto parece que el incremento de la respiracin mitocondrial, o el dficit entre la demanda celular de ATP y la provisin de ATP mitocondrial, proporciona un estmulo para la subsecuente induccin de una variedad de genes involucrados en la biognesis de la organela. En relacin a las protenas de desacople, la funcin fisiolgica de la protena de desacople-3 (UCP3) an no ha sido dilucidada. Estudios previos muestran que el ejercicio induce aumentos muy considerables de la protena UCP3 en el msculo esqueltico. Como la expresin de UCP3 parece estar regulada por los mismos mecanismos que rigen otros componentes mitocondriales, resultaba poco probable que el ejercicio produjera esos cambios tan impresionantes y divergentes en la composicin mitocondrial. Jones y col, testearon la hiptesis de que los principales cambios en la concentracin de protena UCP3 no ocurren independientemente de la biognesis mitocondrial, y que UCP3 aumenta como parte del incremento de mitocondrias inducido por el ejercicio. Ellos encontraron un gran aumento del RNAm de UCP3 inmediatamente y 3 hs despus de una sesin de natacin. La concentracin de protena UCP3 se increment aproximadamente 35% 18hs despus de una nica sesin de ejercicio, aprox 63% luego de 3 das, y aprox 84% luego de 10 das. Estos resultados son consistentes con la interpretacin acerca de que el ejercicio de resistencia induce un incremento adaptativo en la mitocondria que posee un contenido normal de UCP3. Esta protena tambin aumenta durante el ayuno y las comidas altas en grasa. En estas situaciones la disponibilidad de cidos grasos excede la capacidad de metabolizarlos, sugiriendo que la UCP3 cumplira un rol de regulacin y manejo de estos cidos grasos no metabolizables. Para testear la hiptesis que indica que esta protena actuara como exportadora de cidos grasos no metabolizables desde la matriz mitocondrial, Schrauwen y col., le suministraron a pacientes Etomoxir (bloqueador de la entrada de cidos grasos a la mitocondria), o un placebo, durante 36hs en una cmara respiratoria. El etomoxir inhibi la oxidacin de grasa durante 24hs y la oxidacin de grasas durante el ejercicio aproximadamente entre 14-19%. Sorpresivamente, el contenido de UCP3 en el msculo vastus lateralis, sufri una marcada up-regulacin en las 36hs de la administracin de Etomoxir. Este aumento

de la UCP3 fue acompaado por una glucosa sangunea en ayuno ms baja, y un incremento de la traslocacin del transportador de glucosa 4 (GLUT-4). Estos datos apoyan la hiptesis que supone que la funcin fisiolgica de la UCP3 es facilitar la salida de los cidos grasos no metabolizables desde la matriz mitocondrial hacia el citosol, lo cul preserva a la mitocondria de los potenciales efectos deletreos de niveles altos de cidos grasos. Adems los datos muestran que la up-regulacin de la UCP3, puede ser beneficiosa en el tratamiento de la diabetes tipo2 (Schrauwen, 2002). En conclusin, existe fuerte evidencia para sostener roles interactivos y complementarios de la sealizacin por calcio y por disturbios en el recambio de ATP, como importantes contribuyentes a la iniciacin de los eventos que conducen a la biognesis mitocondrial. Fig. 1: metabolismo del nucletido adenina durante el ejercicio intenso. Desde el inicio hasta la finalizacin de las contracciones, el ADP libre (ADPl) se forma por la reaccin de la miosina ATPasa. El ADPl se combina con la fosfocreatina (CrP) para dar creatina, mediante la reaccin de la creatina fosfokinasa (CPK), provocando niveles reducidos de CrP y restauracin de ATP. El ADPl tambin estimula la gluclisis y la respiracin mitocondrial. 2 molculas de ADPl pueden ser convertidas a ATP y AMP en la reaccin de la miokinasa. En fibras musculares rpidas, el AMP se metaboliza a inosina monofosfato (IMP) y amonio (NH3 ) por la deaminacin del AMP.En las fibras lentas, el metabolismo del ADP sigue la direccin hacia la adenosina, va la reaccin 5-nucleotidasa. El aumento en el AMP y la cada en la CrP, activa la AMP kinasa kinasa,.provocando la fosforilacin y activacin de la AMP kinasa (AMPK) (Modificado de Hoods, 2001) Eventos de fosforilacin La evidencia es muy basta respecto del efecto positivo del ejercicio en la activacin de una variedad de protenas kinasas que podran estar potencialmente involucradas en la fosforilacin de factores de transcripcin. Los resultados indican que la actividad contrctil per se, ms que factores humorales o neurotrficos asociados con el ejercicio, es la que activa la fosforilacin de kinasas. Este es un requisito necesario para que la kinasa se vea potencialmente involucrada en la biognesis mitocondrial inducida por actividad contrctil. Entre las kinasas activadas por la actividad aerbica se incluyen PKC, ERK-1 y ERK2. MAP kinasas, kinasa p38, AMPK, Raf-1, MAPKAP kinase-2, y protena kinasa 1 activada por estrs y mitgenos (MSK1), entre otras. Muchos de estos resultados han sido replicados tanto en modelos humanos de actividad contrctil como en roedores, lo cual indica el vasto potencial de la actividad contrctil para alterar las vas de sealizacin mediadas por kinasas, y subsecuentemente la actividad de unin al ADN de los factores de transcripcin, o, alternativamente, la unin al RNA de factores de estabilizacin mediante modificaciones covalentes. Una nueva serie de eventos de fosforilacin tambin ocurre a nivel mitocondrial, cuyas implicaciones an no han sido establecidas. Por muchos aos se ha sabido que ciertas subunidades de los complejos piruvato deshigrogenasa y cetocido de cadena ramificada deshidrogenasa son fosforiladas reversiblemente, lo cual puede cambiar la activacin del complejo entero. Recientemente, se ha encontrado que otras protenas mitocondriales tambin se fosforilan. Estas incluyen la subunidad 4 de la protena COX (citocromo c oxidasa) y las subuinidad de 18 kDa del complejo I. El mecanismo propuesto parece involucrar la presencia de la protena kinasa A dependiente de AMPc, localizada en la membrana mitocondrial interna. Interesantemente, la fosforilacin de la subunidad de 18-kDa activa la respiracin mitocondrial mediante un aumento en la actividad del complejo I, mientras que la fosforilacin de la subunidad IV reduce la respiracin por inhibicin de la actividad de la COX. Esta inhibicin puede ser revertida por la activacin mediada por calcio de una

protena fosfatasa. Es para remarcar que el calcio no solamente puede activar fosfatasas, sino que tambin ha sido visto que modula la fosforilacin de la subunidad c de la ATPasa F1 F0. Transcripcin de genes nucleares En general la transcripcin de genes (pasaje de ADN a RNAm) es regulada por protenas denominadas factores de transcripcin, los cuales se unen ciertas regiones de los genes, llamadas regiones regulatorias. Un nmero de ellos ha sido implicado en la biognesis mitocondrial, e incluyen NRF-1 y NRF-2 PPAR-a y PPAR-g (peroxisome proliferator-activated receptors-a y -g), Egr-1 y c-Jun, c-Fos, y Sp1. Ha sido demostrado adems que la actividad contrctil induce aumentos en el RNAm y/o en los niveles de protena de muchos de ellos, en concordancia con sus roles en la mediacin de cambios fenotpicos en el msculo como resultado del ejercicio. Se lograra un aumento coordinado en la transcripcin de genes mitocondriales y nucleares, si fuese identificado un activador universal de genes. Al respecto, existen sitios para NRF-1 en las regiones promotoras de varios genes nucleares, incluyendo el factor de transcripcin mitocondrial A (Tfam), como tambin de ALAs, la enzima limitante de la sntesis del grupo hemo. Sin embargo los sitios para NRF-1 no se han encontrado universalmente, por ej. no todas de las 10 subunidades de la COX codificadas por el ncleo, poseen sitios para NRF-1. Recientemente se ha descubierto un coactivador de PPAR-g llamado PGC-1 que podra ser un potencial candidato regulatorio. La sobreexpresin de PGC-1 ha demostrado inducir ndices morfolgicamente mensurables del contenido mitocondrial, como tambin la expresin del RNAm de un nmero de genes nucleares en las clulas musculares, incluyendo el NRF-1, NRF-2a, Tfam, UCP-2, subunidades de COX codificadas nuclear y mitocondrialmente, y el citocromo c. El incremento de la expresin de Tfam, conduce a un aumento del ADN mt. Este efecto se debe probablemente al resultado de la coactivacin del NRF-1 ejercida por PGC-1, sobre el promotor de Tfam. Evidencia anexa provista por otros experimentos, sugieren que el NRF-1 es necesario para el efecto de PGC-1 sobre la biognesis mitocondrial, y adems otro trabajo demostr que el PGC-1 fue capaz de coactivar una segunda protena, la PPAR-a, un receptor conocido por regular la expresin de enzimas involucradas en la oxidacin de cidos grasos como la acetil CoA de cadena media. La biognesis mitocondrial requiere de la cooperacin del genoma nuclear y mitocondrial Uno de los aspectos ms interesantes de la sntesis mitocondrial es que requiere la accin coordinada de los genes nucleares y de los mitocondriales. La mitocondria posee numerosas copias de una molcula pequea de ADN circular (ADNmt) que comprende aprox 16.659 nucletidos. A partir de ese ADN, puede sintetizar 13 protenas que forman parte esencial de la cadena de transporte de electrones, sin embargo la gran mayora de las protenas mitocondriales provienen de la informacin codificada en el ADN del ncleo celular. .Los mecanismos de sealizacin, como los que son activados por el ejercicio, inician la activacin de factores de transcripcin, que aumentan la produccin de RNAm a partir del DNA nuclear y mitocondrial. Los productos de los genes nucleares son traducidos en el citosol como "protenas precursoras" con una secuencia seal (targeting) localizada en el extremo amino terminal o en una secuencia interna protenas precursoras. Estas protenas precursoras interaccionan con otras protenas llamadas chaperonas (ej: protena de shock trmico de 70-kDa o HSP70 y el factor mitocondrial de estimulacin de la importacin o MSF), que mantienen la protena recin sintetizada en forma desplegada y la dirigen a la maquinaria de importacin de la membrana mitocondrial externa, donde hay un grupo de protenas conocidas como complejo Tom. El precursor se transfiere luego a travs de la membrana externa, por el espacio intermembranoso, hacia otras protenas llamadas traslocasas, o

complejo Tim, de la membrana mitocondrial interna. Ciertos componentes intramitocondriales, enpujan al precursor hacia la matriz mitocondrial, clivan la secuencia de reconocimiento de destino, y la protena termina replegndose en la conformacin madura. Situaciones de estrs fisiolgico como la actividad contrctil y la hormona tiroidea aceleran la importacin de protena hacia la mitocondria, coincidentemente con el aumento en la expresin de algunos componentes de la maquinaria de importacin. En forma contraria, deterioros en el proceso de importacin puede causar disfuncin mitocondrial y enfermedad. Ejercicio y plasticidad mitocondrial Qu seales disparan la biognesis mitocondrial? Est bien establecido que el ejercicio de resistencia, empleando una duracin apropiada por da, cierta frecuencia semanal y una intensidad submxima por sesin de entrenamiento, puede producir un aumento del contenido mitocondrial, usualmente en un rango de 50 al 100% en 6 semanas. Esto produce una mejora en la performance de resistencia, mayormente en forma independiente de los cambios mucho ms pequeos inducidos por el ejercicio en el consumo mximo de oxgeno. La biognesis mitocondrial puede ser replicada utilizando modelos artificiales de ejercicio, como la actividad contrctil crnica producida por estimulacin elctrica del nervio motor. Tambin puede ser el resultado de otras condiciones fisiolgicas, incluyendo el tratamiento con hormona tiroidea, actuando a travs de receptores nucleares y mitocondriales. La respuesta del msculo a la hormona tiroidea es especfica segn el tipo de fibra, dependiendo en parte de las diferencias en la distribucin de los receptores nucleares para esta hormona. Las vas que utiliza el tratamiento con hormona tiroidea y las que utiliza la actividad contrctil para producir biognesis mitocondrial son independientes entre s, y esto ha sido evidente porque aumentos en el contenido mitocondrial son an notables en los msculos de animales que han sido tiroidectomizados y sometidos a actividad contrctil crnica. De cualquier manera, ambas condiciones parecen producir un incremento en la masa mitocondrial en las clulas musculares, resultando en una capacidad mayor para el consumo de oxgeno por gramo de tejido. Mediciones de protenas marcadoras como la actividad del citocromo c o de la citocromo c oxidasa (COX), han permitido a los fisilogos del ejercicio reconocer que, en respuesta a un estmulo de ejercicio constante, se requieren 6 semanas de entrenamiento de la resistencia (endurance) para alcanzar un contenido mitocondrial estacionario mayor. Este tiempo depende del tipo de fibra que est siendo reclutado, como tambin de la duracin, frecuencia e intensidad de la sesin de ejercicio. Las adaptaciones mitocondriales no ocurrirn en las clulas musculares esquelticas que no hayan sido reclutadas durante la sesin de ejercicio, consistentemente con la idea de que el estmulo para la biognesis se origina en el msculo en contraccin, independientemente de otras influencias. Un corolario de esto es que los programas de entrenamiento de la resistencia deben ser apuntados, en parte, hacia el reclutamiento de unidades motoras conteniendo fibras tipo IIb (blancas rpidas). Interesantemente, el entrenamiento en contra de resistencia, el cual s recluta unidades motoras fatigables rpidamente, no conduce a una adaptacin mitocondrial. Como la muy alta intensidad y la corta duracin de la mayora de los programas de entrenamiento contra resistencia representan un estmulo fuerte para la sntesis de protenas miofibrilares, conduciendo a la hipertrofia, el contenido mitocondrial en las fibras musculares agrandadas, podra estar "diluido". Esto incrementa la distancia de difusin del oxgeno y de los sustratos, y no representa una adaptacin favorable con respecto a la performance en el entrenamiento de endurance. El perodo de tiempo aproximado de 6 semanas requerido para lograr una nuevo estado estarionario (steady-state) en el contenido mitocondrial en respuesta al entrenamiento de resistencia, claramente no

refleja los eventos moleculares tempranos que en ltima instancia conduce a cambios morfolgicamente mensurables. Las protenas mitocondriales se recambian con una vida media de 1 semana luego del inicio de un nuevo nivel de actividad contrctil muscular. Esto significa que se requiere un estmulo de ejercicio continuo para mantener el contenido de mitocondrias en un nivel elevado luego de un perodo de entrenamiento; de otra manera, se producir la prdida de la capacidad oxidativa y de resistencia. Es interesante hacer notar que los cambios en el contenido mitocondrial de fosfolpidos, ocurren con una vida media an ms corta (4 das), sugiriendo que el ensamblado y/o la degradacin de la organela podra ser iniciada por cambios en la composicin de fosfolpidos. Por ejemplo, en el msculo con defiencia de hierro, se alteran las velocidades normales de sntesis de citocromo (ya que se necesitan grupo hemo) y su incorporacin a la membrana interna, sin embargo cuando se le impone una actividad contrctil a ese msculo, la misma parece conducir a la sntesis continua de lpidos de membrana, produciendo un volumen mitocondrial aumentado, con un contenido proteico notablemente reducido y anormal. Estos datos sugieren que la sntesis de protenas y de fosfolpidos no necesariamente estn acopladas durante la biognesis mitocondrial inducida por actividad contrctil. Los datos tambin sugieren que la proporcin de lpidos a protenas en la mitocondria debe cambiar un poco durante la transicin tanto hacia contenidos mitocondriales ms altos o ms bajos. Este cambio parece ser sutil como resultado del entrenamiento o de la estimulacin crnica, y en la mayora de los casos parece no afectar las velocidad de consumo de oxgeno por unidad de volumen mitocondrial. Sin embargo, podra ser mucho ms evidente bajo condiciones de steadystate en tejidos que posean contenidos mitocondriales ampliamente divergentes, como el corazn y el msculo esqueltico blanco. Cambios en el metabolismo celular producidos por la biognesis mitocondrial durante el ejercicio de resistencia La notable mejora en la performance de la resistencia que resulta de la biognesis mitocondrial es una consecuencia de cambios en el metabolismo muscular durante el ejercicio. Durante la contraccin muscular intensa, la concentracin de ADP libre (ADPl) aumenta. Este incremento conduce el equilibrio de la reaccin en la que interviene la creatina fosfokinasa (CPK) hacia la formacin de ATP y creatina (ver fig 1). El ADPl es tambin un sustrato y efector alostrico en la va glucoltica, y controla la respiracin mitocondrial activa. Como el entrenamiento de la resistencia incrementa el contenido mitocondrial del msculo esqueltico sin grandes efectos sobre la CPK o las enzimas glucolticas, parece razonable asumir que una fraccin mayor del requerimiento de energa para un determinado trabajo de esfuerzo, derivar ahora del metabolismo aerbico. Esto ha sido referido como una sensibilidad mayor de la respiracin mitocondrial al ADPl, ya que se requiere un incremento menor en la concentracin de este metabolito, para lograr el mismo nivel de consumo de oxgeno. Este incremento reducido en el ADPl atenuar la gluclisis y la formacin de cido lctico, y se producir una economa de fosfocreatina. Adems, la formacin de ADP ocurrir a una velocidad menor. En el msculo rpido, con una alta actividad de la AMP-deaminasa, la sntesis de amonaco y de IMP se reducir. En el msculo lento, que posee menos AMP-deaminasa y actividades mayores de 5-nucleotidasas, la menor formacin de AMP ser traducida en una conversin reducida a adenosina (ver fig 1). Con la declinacin ms pequea de creatinafosfato, una sntesis reducida de AMP, conducir a una activacin menor de la AMP kinasa (AMPK), un factor que podra ser importante para la reduccin inducida por el entrenamiento de la traslocacin de GLUT4 (transportador de glucosa) hacia la membrana plasmtica. Esto, en coincidencia con actividades aumentadas de enzimas mitocondriales de la -oxidacin, predispone al individuo hacia una oxidacin lipdica mayor durante el ejercicio. Un estudio investig la importancia de la creatina kinasa (CK) en la regulacin de la respiracin

mitocondrial muscular, en humanos, dependiendo de su nivel de actividad fsica. Los voluntarios fueron clasificados en sedentarios, activos o atlticos, de acuerdo al ndice de actividad total determinado por el cuestionario de Baecke, en combinacin con valores mximos de oxgeno (VO2 mximo), expresado en ml min(-1) kg(-1)). Todos los voluntarios realizaron test de ejercicio incremental en cicloergmetro a su VO2 mx y VO2 en el umbral ventilatorio (VT). Se tomaron muestras de biopsias musculares del vastus lateralis y la respiracin mitocondrial fue evaluada en una celda oxigrfica, en ausencia (V(0)) o en presencia (V(mx)) de concentracin saturada de ADP. Mientras que V(0) fue similar, V(max) difiri entre los grupos. V(max) se correlacion con el VO2 mx y con VT. Hubo un grado significativamente mayor de acoplamiento entre la oxidacin y la fosforilacin (V(max)/V(0)) en los individuos atletas. La Km (constante de equilibrio de una reaccin) mitocondrial para el ADP fue significativamente mayor en los sujetos atlticos. La activacin de la CK mitocondrial por la adicin de creatina, indujo un marcado descenso en la Km (a menor Km, mayor es la afinidad por el sustrato, es decir que la reaccin se ve facilitada hacia la formacin del producto) en los individuos atlticos solamente, indicacin de un eficiente acoplamiento de la CK mitocondrial a la refosforilacin del ADP en dichos sujetos. Se ha sugerido que la performance aerbica aumentada requiere una mejora tanto de la capacidad muscular oxidativa como de los mecanismos de control respiratorio, dando muestra de la importancia de la coordinacin temporal de los flujos de energa por la CK, para ms eficacia. Otros estudios tambin muestran que despus del entrenamiento, la sensibilidad de la mitocondria al ADP, disminuye, mientras que el efecto de la creatina en la respiracin se encuentra aumentado, lo cual resulta en una mejora en el control de la produccin de energa aerbica. El incremento del contenido mitocondrial producido por el ejercicio de resistencia no solamente conduce a una produccin menor de lactato, sino tambin a una mejora en lavado del mismo. El transporte de lactato hacia la mitocondria puede ocurrir va el transportador mitocondrial monocarboxilado (MCT1), por lo tanto el aumento del contenido de mitocondrias aumentar la oxidacin del lactato, produciendo velocidades menores de liberacin desde el msculo. Adems, cuanto mayor es el contenido de mitocondrias por gramo de msculo, menor es la velocidad de respiracin requerida por mitocondria para cualquier carga de trabajo dada. Esto predice una reduccin en los niveles de las especies reactivas de oxgeno (ROS), potencialmente peligrosas, an a una velocidad constante de consumo de oxgeno por gramo de msculo. La combinacin de la produccin reducida de ROS, con un aumento de las enzimas protectoras, sustenta la idea de un beneficio adicional de la actividad contrctil crnica: adems de la capacidad oxidativa aumentada, tambin atena el dao potencial que podran producir las ROS en las protenas, los lpidos y el ADN. Contrariamente, un contenido reducido de mitocondrias, como es evidente en algunos tejidos, como consecuencia del envejecimiento, se correlaciona con una mayor tendencia al dao inducido por ROS, particularmente sobre el ADN mt. Este hecho pone de manifiesto una razn potencialmente importante para mantener el contenido mitocondrial del msculo con un programa de actividad fsica regular durante el proceso de envejecimiento. Conclusiones El ejercicio (es decir, la actividad contrctil) produce cambios fisiolgicos, bioqumicos y moleculares dependientes del tiempo. La magnitud de dichas modificaciones es dependientes de la intensidad y duracin del estmulo del ejercicio aerbico. De esta forma es posible alterar el fenotipo muscular, de una fibra blanca con baja capacidad oxidativa a una roja altamente oxidativa. Este cambio conduce a una adaptacin metablica que atena algunas seales de estrs impuestas por una sesin intensa de ejercicio (por ejemplo la produccin y remocin de lactato), actuando en cierto modo como un feedback negativo. Por lo tanto las seales para producir una futura biognesis mitocondrial se presume

que se ven reducidas en magnitud una vez que la adaptacin ha tenido lugar. El entrenamiento de la resistencia (endurance) conduce a incrementos del volumen mitocondrial (volumen de la clula ocupado por mitocondrias) de hasta el 100% con entrenamiento de unas pocas semanas en sujetos no entrenados. El entrenamiento de la fuerza tiene un impacto mayor en el volumen de las miofibrillas musculares, sin embargo la mitocondria aparece relativamente sin cambios. El inters cientfico actual por la funcin mitocondrial, su biognesis y la expresin gentica en clulas musculares no ha sido nunca tan intenso. Esto se debe a que la mitocondria provee un excelente modelo adaptativo para el estudio de la biognesis de organelas en las clulas de mamfero y porque se sabe ahora, que est implicada en una amplia variedad de enfermedades. Referencias -Adhihetty PJ et al. Plasticity of skeletal muscle mitochondria in response to contractile activity. Exp Physiol 2003;88(Pt 1):99-107. -Dubouchaud H et al. Endurance training, expression, and physiology of LDH, MCT1, and MCT4 in human skeletal muscle. Am J Physiol Endocrinol Metab 278: E571-E579, 2000. -Dudley GA et al. Influence of exercise intensity and duration on biochemical adaptations in skeletal muscle. J Appl Physiol 53: 844-850, 1982. -Dudley GA et al. Influence of mitochondrial content on the sensitivity of respiratory control. J Biol Chem 262: 9109-9114, 1987. -Essig DA. Contractile activity-induced mitochondrial biogenesis in skeletal muscle. Exerc Sport Sci Rev 24: 289-319, 1996. -Enriquez JA et al. Direct regulation of mitochondrial RNA synthesis by thyroid hormone. Mol Cell Biol 19: 657-670, 1999. -Freyssenet D et al. Calcium-dependent regulation of cytochrome cgene expression in skeletal muscle cells: identification of a protein kinase c-dependent pathway. J Biol Chem 274: 9305-9311, 1999. -Gordon JW et al. Plasticity in skeletal, cardiac, and smooth muscle selected contribution: effects of contractile activity on mitochondrial transcription factor A expression in skeletal muscle. J Appl Physiol 90: 389-396, 2001. -Gore M et al. Endurance training alters antioxidant enzyme gene expression in rat skeletal muscle. Can J Physiol Pharmacol 76: 1139-1145, 1998. -Gottlieb RA. Mitochondria: execution central. FEBS Lett 482: 6-12, 2000. -Grey JY et al. Tom20-mediated mitochondrial protein import in muscle cells during differentiation. Am J Physiol Cell Physiol 279: C1393-C1400, 2000. -Herzig RP et al. Sequential serum-dependent activation of CREB and NRF-1 leads to enhanced mitochondrial respiration through the induction of cytochrome c. J Biol Chem 275: 13134-13141, 2000. -Holloszy JO and Coyle EF. Adaptations of skeletal muscle to endurance exercise and their metabolic consequences. J Appl Physiol 56: 831-838, 1984. -Holloszy JO and Winder WW. Induction of d-aminolevulinic acid synthetase in muscle by exercise or thyroxine. Am J Physiol Regulatory Integrative Comp Physiol 236: R180-R183, 1979. -Hood DA et al. Mitochondrial adaptations to chronic muscle use: effect of iron deficiency. Comp Biochem Physiol 101A: 597-605, 1992. -Hood DA at al. Effect of thyroid status on the expression of metabolic enzymes during chronic stimulation. Am J Physiol Cell Physiol 263: C788- C793, 1992. -Hood DA et al. Assembly of the cellular powerhouse: current issues in muscle mitochondrial biogenesis. Exerc Sport Sci Rev 28: 68-73, 2000. -Hood DA. Plasticity in Skeletal, Cardiac, and Smooth Muscle. Invited Review: Contractile activityinduced mitochondrial biogenesis in skeletal muscle. J Appl Physiol 90: 1137-1157, 2001.

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