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CIDOS N UCLEICOS

I. CONCEPTO - Biomolculas constituidas por C, H, O, N y P. Son macromolculas formadas por la polimerizacin de nucletidos. Son responsables del almacenamiento, interpretacin y transmisin de la informacin gentica. Se encuentran normalmente asociados a protenas, formando nucleoprotenas. II. COMPONENTES DE LOS NUCLETIDOS A. Pentosas - -D-ribofuranosa (ARN) y -D-desoxirribofuranosa (ADN) B. Bases nitrogenadas - Compuestos heterocclicos de C y N de carcter bsico 1. Bases pirimidnicas - Citosina (2-oxi-4-aminopirimidina) (ARN y ADN) - Uracilo (2,4-dioxipirimidina) (ARN) - Timina (5-metil-2,4-dioxipirimidina) (ADN) 2. Bases pricas - Adenina (6-aminopurina) (ARN y ADN) - Guanina (2-amino-6-oxipurina) (ARN y ADN) C. cido fosfrico - (H3PO4) III. NUCLESIDOS A. Concepto - Pentosa + Base nitrogenada B. Enlace N-glucosdico - Enlace N-glucosdico - C 1' de la pentosa y N 1 de las bases pirimidnicas y 9 de las pricas. C. Nomenclatura - Ribonuclesidos : Adenosina, Guanosina, Citidina y Uridina. - Desoxirribonuclesidos : Desoxiadenosina, Desoxiguanosina, Desoxicitidina y Timidina. IV. NUCLETIDOS A. Concepto - Nuclesido + A.ortofosfrico. steres fosfricos de los nuclesidos (suele ser en el C 5'). B. Nomenclatura - Ribonucletidos: AMP (adenosina monofosfato), GMP, CMP Y UMP. - Desoxirribonucletidos: dAMP (desoxiadenosina monofosfato), dGMP, dCMP Y dTMP. C. Enlace fosfodister - Enlace fosfodister 3'-5'. Es el enlace que sirve de unin entre los nucletidos de un cido nucleico. El mismo grupo fosfato esterifica al OH en posicin 3 de un nucletido y al OH en posicin 5 de otro nucletido. En una cadena polinucleotdica habr siempre un extremo con el grupo 3 libre y el otro con el grupo 5 libre. D. Otros nucletidos de inters biolgico (nucletidos no nucleicos) 1. AMPc - Un grupo fosfato esterifica los OH en posicin 5' y 3'. Acta como segundo mensajero, intermediario entre molculas extracelulares (hormonas, neurotransmisores) y ciertas reacciones intracelulares que conducen a una respuesta celular. 2. ATP y GTP (nucleotidos trifosfato) - Molculas con una elevada energa qumica potencial debido a los enlaces entre los grupos fosfato. Actan como vectores energticos en las reacciones metablicas. 3. FAD, FMN, NAD y NADP - Coenzimas de las deshidrogenasas que intervienen en las reacciones metablicas en las que hay transferencia de protones y electrones (reacciones de xido-reduccin). Todos ellos pueden aparecer en dos formas, una oxidada y otra reducida. - FMN (Flavinmononucletido) derivado de la vitamina B2 (riboflavina) - FAD (Flavinadenindinucletido) derivado de la vitamina B2 (riboflavina) - NAD (Nicotinadenindinucletido) derivado de la niacina (factor PP) - NADP (Nicotinadenindinucletido-fosfato) derivado de la niacina (factor PP) 4. Coenzima A - Adenosina + difosfato + cido pantotnico (vitamina) + -aminoetanotiol. - Interviene en la transferencia de grupos acilo en el metabolismo de los cidos grasos. V. CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN) A. Concepto - Macromolculas formadas por la polimerizacin de desoxirribonucletidos, con desoxirribosa como pentosa y A, T, G y C como bases nitrogenadas. En el hombre pueden alcanzar 50 cm x 2 nm de anchura. B. Estructura 1. Estructura primaria - Secuencia ordenada de desoxirribonucletidos. - La informacin contenida en el ADN depende de esta secuencia. 2. Estructura secundaria (la doble hlice) - R.Franklin y M.H.F.Wilkins (1950-53) mediante experimentos de difraccin de rayos X determinaron que el ADN tiene estructura helicoidal. - E.Chargaff (1949-53) Realiz anlisis cuantitativo de las cuatro bases en muestras de ADN. Lleg a la conclusin de que la proporcin de bases pricas y pirimidnicas era siempre la misma y que A/T=1, G/C=1. CIDOS NUCLEICOS 1

- J.D.Watson y F.Crick (1953) Elaboraron el m odelo de la doble hlice del ADN: Dos cadenas polinucleotdicas antiparalelas (una orientada en direccin 5'-3' y la otra 3'-5'). Complementarias (cada A de una cadena se une mediante dos puentes de hidrgeno a una T de la otra cadena y cada G se une mediante tres puentes de hidrgeno a una; C A=T, GC). Arrollamiento helicoidal plectonmico (las cadenas estn enrolladas alrededor de un eje imaginario y no pueden ser separadas sin desenrollarlas previamente). Paso de hlice 34 nm (10 bases). 3. Estructura terciaria - ADN asociado a protenas bsicas, normalmente histonas . - Constituye la cromatina que aparece en el ncleo de las clulas eucariticas. a. El collar de perlas - Nucleosoma: octmero de histonas (2x H2A, H2B, H3 y H4)+ 200 pares de bases (140 alrededor del octmero). Resulta una fibra de ADN de 10 nm de grosor. b. Estructura cristalina - ADN asociado a protaminas que aparece en el ncleo de los espermatozoides de ciertos peces. El grado de empaquetamiento es mayor. 4. Empaquetamiento del ADN - Fibra de 30 nm. Enrollamiento del collar de perlas sobre s mismo. - Solenoide, seis nucleosomas por vuelta. Estabilizado por las H1. - Existen grados de empaquetamiento mucho mayores en la cromatina. C. Tipos de ADN - ADN lineal bicatenario Aparece asociado a protenas (histonas) constituyendo la cromatina del ncleo de las clulas eucariticas. - ADN circular bicatenario forma el nucleoide bacteriano, en el que aparece desnudo (no asociado a protenas) y en cloroplastos y mitocondrias. - ADN monocatenarios aparecen en algunos virus. D. Funcin del ADN e importancia biolgica - El ADN es el portador de la informacin hereditaria. 1. Concepto de gen - Tradicionalmente se ha denominado gen a cada fragmento de ADN responsable de la determinacin de una caracterstica hereditaria concreta. Actualmente se considera que un gen es un fragmento de ADN que lleva la inform acin necesaria para sintetizar una determinada cadena polipeptdica. 2. Experimentos que demostraron el papel del ADN en la herencia a. Experimentos de F.Griffith (1928) - Descubri el fenmeno de transformacin en la bacteria Streptoccocus pneumoniae. Esta bacteria presenta dos cepas diferentes: la cepa R, no virulenta, y la cepa S, que provoca neumona. Griffith descubri que la cepa R poda transformarse en virulenta al mezclarse con bacterias S fragmentadas. b. Experimentos de Avery, MacLeod y McCarty (1943) - Descubrieron que el ADN es el responsable de la transformacin de S. pneumoniae. c. Experimentos de Alfred D. Hershey y Martha Chase (1952) - Demostraron, mediante marcaje radiactivo selectivo del ADN (usando 35P) y de las protenas (usando 32S), que el ADN del fago T2 era la molcula que se introduca en la clula bacteriana para la reproduccin viral. E. Duplicacin del ADN - El modelo de Watson y Crick apuntaba la posibilidad (por la complementariedad de las bases) de que las molculas de ADN pudieran duplicarse para formar dos molculas hijas idnticas . - La replicacin es el proceso que garantiza que cuando una clula se divide cada una de las clulas hijas reciba una copia exacta e ntegra de la informacin hereditaria de la clula madre. 1. Tipos de replicacin. Experimentos de Meselson y Stahl - Cultivaron Escherichia coli en un medio en el que el nitrgeno presente era nitrgeno pesado (15N). Purificaron el ADN de varias generaciones de las bacterias cultivadas y lo centrifugaron en un gradiente de densidad. 2. Replicacin semiconservativa - Los experimentos de Meselson y Stahl llevaron a la conclusin de que la replicacin del ADN es un proceso sem iconservativo en el que cada una de las molculas hija contiene una hebra de la molcula original y otra neoform ada. 3. Proceso - Requerimientos : A, G, C y T activadas (trifosforiladas en 5'); cebador (normalmente ARN; la ADN-polimerasa (ADNpolimerasa) solo es capaz de unir nucletidos a un fragmento de cido nucleico ya sintetizado); ADN patrn; Mg2+ ; enzimas que catalizan el proceso: Kornberg (1956) aisl en E.coli el enzima ADN-polimerasa capaz de provocar la replicacin del ADN in vitro. Posteriormente se descubri que en proceso de replicacin intervienen distintas ADN-polimerasas. La ADN-polimerasa tiene varios centros activos: para la unin con la cadena molde; para la unin de los nucletidos trifosfato; para el reconocimiento del OH 3' del ltimo nucletido unido. Las ADN-polimerasas solo aaden nucletidos en el extremo 3 (direccin 5'3'). Las ADN polimerasas tienen tambin actividad exonucleasa, es decir, tienen capacidad de separar nucletidos de los extremos de las cadenas. Adems intervienen otros enzimas: helicasas (desespiralizan las dos cadenas); girasas y topoisomerasas (eliminan las tensiones); primasa (ARN polimerasa) para formar el cebador; y ligasa (une los fragmentos formados en la hebra de replicacin discontinua). - Etapas La replicacin del ADN se basa en la complementariedad de las bases. La replicacin es bidireccional: en una cadena la replicacin es continua (hebra conductora), pero en la otra es discontinua (hebra retardada). 1 etapa: iniciacin La helicasa rompe los puentes de H entre las dos cadenas provocando la aparicin de una burbuja de replicacin. Las girasas y topoisomerasas eliminan las tensiones generadas por la separacin de las cadenas y evi CIDOS NUCLEICOS 2

tan que stas vuelvan a enrollarse. Puesto que el proceso es bidireccional, en cada extremo de la cadena se forma una horquilla de replicacin. Las primasas sintetizan oligonucletidos de ARN (5-30 nucletidos) que servirn de cebadores a las ADN-polimerasa III. La ADN-polimerasa III aade el primer nucletido (por complementariedad con la cadena molde) al extremo 3 del cebador. 2 etapa: elongacin La ADN-polimerasa avanza un nucletido en la direccin de sntesis, reconoce el siguiente nucletido de la cadena molde y coloca el nucletido complementario; ahora cataliza la formacin del enlace fosfodister con el nuevo nucletido obteniendo la energa necesaria de la separacin de los dos grupos fosfato sobrantes (recuerda que se van uniendo nucletidos trifosfato). La hebra conductora es de crecimiento continuo puesto que la horquilla se va abriendo en el mismo sentido que la ADN-polimerasa III aade los nucletidos . Sin embargo en la hebra retardada, a partir del cebador la ADN-polimerasa III sintetiza unos 1000 nucletidos de ADN, alejndose de la horquilla de replicacin, formndose el denominado fragmento de Okazaki. Segn se va abriendo la horquilla se sintetizan nuevos fragmentos, por lo que podemos decir que la hebra retardada es de crecimiento discontinuo. Despus, otra ADN-polimerasa (la ADN-pol I) distinta retira los fragmentos de ARN que han hecho de cebador y rellena los huecos con nucletidos de ADN. La ligasa se encargar de empalmar los fragmentos. 3 etapa: terminacin La elongacin finaliza en las clulas eucariticas cuando la horquilla de replicacin alcanza a la adyacente y en las clulas procariotas cuando se encuentran los dos extremos que iban creciendo en sentidos puestos. Finalizada la elongacin se eliminan los ltimos cebadores y se sustituyen por nucletidos de ADN de una forma semejante a la mencionada anteriormente. En las clulas eucariticas en este proceso de terminacin tiene que intervenir un nuevo enzima, la telomerasa, que aaden a los extremos del cromosoma secuencias de ADN repetitivo no codificante (denominadas telmeros). Diferencias en el proceso en clulas procariotas y eucariotas En general el proceso es ms complejo en clulas eucariotas debido a que el ADN se encuentra ntimamente asociado a las histonas . En la replicacin del ADN en procariotas interviene tres ADN-polimerasas (I, II y III), mientras que en las eucariticas intervienen cinco (, , , y ). En general, en las clulas eucariticas intervienen muchas ms protenas en el proceso. En procariotas hay slo un punto de origen (marcado por una secuencia especfica de nucletidos reconocido por la ADN-polimerasa), mientras que en las eucariotas existen mltiples puntos en cada cromosoma (hasta 30.000). VI. CIDO RIBONUCLEICO (ARN) A. Concepto - Macromolculas formadas por la polimerizacin de nucletidos, con ribosa como pentosa y A, U, G y C como bases nitrogenadas. Son ms frecuentes que en el ADN otro tipo de bases. - Menor peso molecular que el ADN. Sus funciones estn relacionadas con la interpretacin del mensaje gentico. B. ARN de Transferencia (ARNt) - 10% del total de ARN de la clula. 75-95 nucletidos. Posee hasta un 10% de bases diferentes de las comunes. Aporta aminocidos durante la sntesis de las protenas. 1. Estructura secundaria - Cada molcula posee zonas de complementariedad (brazos) y otras no apareadas (bucles). - Cada bucle tiene una funcin: unin al ribosoma; reconocimiento de las aminoacil ARNt sintetasas; anticodon. 2. Especificidad de los ARNt (anticodon) El anticodon es una secuencia de tres nucletidos que determina qu aminocido se une la ARNt. El aminocido c orrespondiente se une al nico brazo que no tiene bucle y que se conoce como brazo aceptor del aminocido. C. ARN Mensajero (ARN m) - 2-5 % del total del ARN de la clula. Son molculas lineales que se forman en el ncleo por complementariedad a partir de un gen (transcripcin). Llevan una copia del mensaje gentico contenido en el ADN al citoplasma, donde se encuentran los ribosomas que lo emplearn como molde en el proceso de sntesis de protenas (traduccin). D. ARN Ribosmico (ARNr) - 80-85 % del ARN celular. Tiene zonas plegadas en doble cadena. Se asocia a protenas para constituir los ribosomas. Existen varios ARNr que se diferencian en su peso molecular (y en su coeficiente de sedimentacin (Svedberg)). E. ARN Nucleolar (ARNn) - Son molculas precursoras de los ARN que forman los ribosomas .

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