Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria www.anvisa.gov.br Consulta Pblica n 50, de 4 de setembro de 2008 D.O.

U de 05/09/2008 A Diretoria Colegiada da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, no uso das atribuies que lhe confere o inciso IV do art. 11 e o art. 35 do Regulamento da ANVISA aprovado pelo Decreto n 3.029, de 16 de abril de 1999, e tendo em vista o disposto no inciso V e nos 1 e 3 do art. 54 do Regimento Interno aprovado nos termos do Anexo I da Portaria n 354 da ANVISA, de 11 de agosto de 2006, republicada no DOU de 21 de agosto de 2006, em reunio realizada em 19 de agosto de 2008, adota a seguinte Consulta Pblica e eu, Diretor-Presidente, determino a sua publicao: considerando que responsabilidade da ANVISA a atualizao e reviso peridica da Farmacopia Brasileira; considerando o Processo de Reviso de Monografias da Farmacopia Brasileira e o desenvolvimento e reviso de mtodos gerais da Farmacopia Brasileira por instituies de ensino superior; considerando que devem ser observadas as especificaes de qualidade determinadas pela Farmacopia Brasileira, para fins de controle de qualidade, registro e anlises fiscais de produtos sujeitos ao regime de vigilncia sanitria; adota a seguinte Consulta Pblica e eu, Diretor-Presidente, determino a sua publicao: Art. 1 Fica aberto, a contar da data de publicao desta Consulta Pblica, o prazo de 60 (sessenta) dias para que sejam apresentadas sugestes quanto s propostas de reviso e atualizao dos Mtodos Gerais da Farmacopia Brasileira, descritos no Anexo I. Art. 2 Informar que os mtodos gerais descritos no Anexo I, estaro disponveis, na ntegra, durante o perodo de consulta no endereo eletrnico www.anvisa.gov.br, e as sugestes devero ser encaminhadas por escrito para o seguinte endereo: Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria/DIMCB/Farmacopia Brasileira, SEPN 515, Bloco B, Ed. Omega, 5 Andar, Sala 2, Asa Norte, Braslia/DF, CEP 70.770.541, ou Fax: (061) 3448-1119 ou e-mail: cp50.farmacopia@anvisa.gov.br. Art. 3 Findo o prazo estipulado no Art. 1, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria submeter Comisso da Farmacopia Brasileira as contribuies enviadas, para avaliao e os encaminhamentos devidos.

DIRCEU RAPOSO DE MELO ANEXO I Mtodos Gerais da Farmacopia Brasileira ANEXO I Mtodos Gerais da Farmacopia Brasileira Os mtodos gerais em questo so propostas para reviso/atualizao dos seguintes mtodos constantes na 4 Edio da Farmacopia Brasileira. IV GENERALIDADES V.1.1 DETERMINAO DE PESO V.1.2 DETERMINAO DE VOLUME V.1.3 DETERMINAO DE RESISTNCIA MECNICA EM COMPRIMIDOS

V.1.4 TESTES DE DESINTEGRAO V.1.5 TESTE DE DISSOLUO V.1.6 UNIFORMIDADE DE DOSES UNITRIAS V.1.8 TESTE DE GOTEJAMENTO V.2.12. COR DE LQUIDOS V.2.17.4 CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA V.2.25 LIMPIDEZ DE SOLUES V.3.2 ENSAIOS-LIMITE PARA IMPUREZAS INORGNICAS V.3.4.10 ENSAIO IODOMTRICO DE ANTIBITICOS V.4 MTODOS DE FARMACOGNOSIA V.5.1 TESTES DE SEGURANA BIOLGICA XI SUBSTNCIAS CORANTES IV GENERALIDADES TTULO O ttulo completo desta obra Farmacopia da Repblica Federativa do Brasil, x edio. Sua denominao pode ser abreviada para Farmacopia Brasileira, x edio, F. Bras. x ou F. BRAS. x. DEFINIES Farmacopico A expresso farmacopico substitui as expresses oficial, oficinal ou magistral, utilizadas em edies anteriores, equivalendo-se s trs expresses para todos os efeitos. Frmaco Substncia ativa, droga, insumo farmacutico ou matria-prima empregada para modificar ou explorar sistemas fisiolgicos ou estados patolgicos em benefcio da pessoa na qual se administra. Medicamento Produto farmacutico, tecnicamente obtido ou elaborado, que contm um ou mais frmacos e outras substncias, com finalidade profiltica, curativa, paliativa ou para fins de diagnstico. Medicamento farmacopico Medicamento inscrito numa das edies da Farmacopia Brasileira. Medicamento magistral Medicamento preparado numa farmcia, cuja prescrio estabelece a composio, a forma farmacutica e a posologia. NOMENCLATURA Os ttulos das monografias obedecem Denominao Comum Brasileira (DCB) para Frmacos, estabelecida com base nas recomendaes da Organizao Mundial da Sade. Os subttulos so em latim.

Em casos excepcionais, nomes muito difundidos, porm diferentes dos adotados pela Denominao Comum Brasileira para Frmacos, podem ser citados como outra denominao. NOME QUMICO O nome qumico de substncia farmacopica est de acordo com a nomenclatura preconizada pela Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC). FRMULA QUMICA Quando a substncia farmacopica possui composio qumica definida, sua frmula bruta e massa molecular constam na monografia. No caso de substncias orgnicas de composio qumica definida, esses dados so acrescidos da respectiva frmula estrutural. MASSA ATMICA RELATIVA As massas atmicas relativas, usadas para o clculo de massas moleculares, so as constantes na Tabela de Massas Atmicas Relativas, publicada em 1979 pela Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC), com base na massa do carbono 12 (12C). UNIDADES DE MEDIDA So adotadas nessa Farmacopia as unidades do Sistema Internacional de Unidades (SI), em conformidade com o Decreto Federal n. 81.621 de 3 de maio de 1978. Excepcionalmente, so utilizadas outras unidades de uso corrente na prtica farmacutica. As unidades e fraes do Sistema Mtrico Decimal utilizadas na F. BRAS. x, baseadas no Sistema Internacional de Unidades (SI), so representadas pelas abreviaes relacionadas a seguir. DE COMPRIMENTO metro decmetro dm centmetro cm milmetro mm micrmetro m nanmetro nm DE VOLUME litro decilitro mililitro microlitro DE MASSA* quilograma grama decigrama centigrama miligrama micrograma** nanograma picograma fentograma attograma
* **

= = = = = = = =

m 10-1 m 10-2 m 10-3 m 10-6 m 10-9 m l 10-1 l 10-3 l 10-6 l kg g = dg = cg = mg = 10-3 g = 10-6 g ng = pg = fg = ag =

dl ml l

10-3 kg 10-1 g 10-2 g 10-9 g 10-12 g 10-15 g 10-18 g

As expresses massa e peso so adotadas indistintamente na F. BRAS. x. Nas prescries e referncias relativas a doses teraputicas, g equivale a mcg ou (gama).

DE RADIOATIVIDADE becquerel Bq = desintegrao nuclear por segundo curie Ci = 3,7 1010 Bq 7 milicurie mCi = 3,7 10 Bq microcurie Ci = 3,7 104 Bq gigabecquerel GBq = 27,027 mCi

megabecquerel MBq = 27,027 Ci quilobecquerel kBq = 27,027 nCi PROCESSOS DE FABRICAO A Farmacopia no fornece detalhes dos processos de fabricao de substncias qumicas. A indicao de que uma substncia pode ser produzida por um mtodo determinado no exclui a possibilidade de produzi-la por outros mtodos. Qualquer que seja o mtodo utilizado, o produto final deve corresponder s especificaes da Farmacopia. Na fabricao de produtos injetveis, comprimidos, cpsulas ou outras preparaes farmacopicas, permitido o uso de substncias adjuvantes, descritas nas monografias e adicionadas com finalidade especfica. Elas devem ser incuas e no devem ter influncia adversa sobre a eficcia teraputica da substncia ativa contida na preparao, nem interferir nos ensaios e determinaes. DESCRIO DE SUBSTNCIA As informaes referentes descrio de uma substncia so genricas e destinam-se avaliao preliminar da sua integridade. A descrio, por si, no indicativa da pureza, devendo ser associada a outros testes farmacopicos para assegurar que a substncia esteja de acordo com a monografia. SOLUBILIDADE A solubilidade indicada no deve ser tomada no sentido estrito de constante fsica, mas como simples informao. As indicaes sobre a solubilidade referem-se s determinaes feitas temperatura de 25 C. A expresso solvente refere-se gua, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. A expresso partes refere-se dissoluo de 1 g de um slido no nmero de mililitros do solvente estabelecido no nmero de partes. As solubilidades aproximadas constantes nas monografias so designadas por termos descritivos cujos significados figuram na Tabela 1. Tabela 1 Termos descritivos de solubilidade e seus significados. Termo descritivo Solvente Muito solvel menos de 1 parte Facilmente solvel de 1 a 10 partes Solvel de 10 a 30 partes Ligeiramente solvel de 30 a 100 partes Pouco solvel de 100 a 1000 partes Muito pouco solvel de 1000 a 10 000 partes Praticamente insolvel ou insolvel mais de 10 000 partes ENSAIOS DE IDENTIFICAO Os ensaios de identificao permitem verificar, com um nvel de certeza aceitvel, que a identidade do material sob exame est de acordo com o rtulo de sua embalagem. Embora especficos, eles no so necessariamente suficientes para estabelecer prova absoluta de identidade. Entretanto, o no-cumprimento dos requerimentos de um ensaio de identificao pode significar erro de rotulagem do material. Outros testes e especificaes na monografia contribuem para a confirmao da identidade do artigo sob exame. DOSEAMENTO E DETERMINAO DA POTNCIA Nas monografias da Farmacopia Brasileira, usualmente, so descritos mais de um mtodo de doseamento. Nesses casos, os mtodos devem ser considerados equivalentes, podendo ser utilizados indistintamente. No caso de antibiticos, quando constarem na monografia individual mtodos de determinao de potncia e doseamento, empregar um dos mtodos descritos. DENSIDADE DE MASSA E DENSIDADE RELATIVA

A densidade de massa () a massa de uma unidade de volume de uma substncia. expressa em unidades de massa por volume. 20 A densidade relativa usualmente adotada (d 20) definida como a relao entre a massa de uma substncia ao ar a 20 C e a massa de igual volume de gua na mesma temperatura. DETERMINAO DE GUA E PERDA POR DESSECAO Usam-se, geralmente, as expresses determinao de gua ou determinao de umidade quando se determina, em condies especificadas, a gua de hidratao ou a gua de adsoro de uma substncia. A expresso perda por dessecao refere-se perda em massa, por secagem, de gua e outros componentes residuais volteis, em condies especificadas. IMPUREZAS Os testes descritos nas monografias limitam as impurezas a quantidades que assegurem qualidade ao frmaco. O fato dos ensaios no inclurem uma impureza pouco freqente no significa que ela possa ser tolerada. ACIDEZ E ALCALINIDADE ENSAIOS RPIDOS Uma soluo considerada neutra quando no modifica a cor dos papis azul e vermelho de tornassol, ou quando o papel indicador universal adquire as cores da escala neutra, ou quando 1 ml da mesma soluo se cora de verde por uma gota de azul de bromotimol SI (pH 7,0). considerada cida quando cora de vermelho o papel azul de tornassol ou 1 ml se cora de amarelo por uma gota de vermelho de fenol SI (pH 1,0 a 6,6). considerada fracamente cida quando cora levemente de vermelho o papel azul de tornassol ou 1 ml se cora de alaranjado por uma gota de vermelho de metila SI (pH 4,0 a 6,6). considerada fortemente cida quando cora de azul o papel vermelho de congo ou 1 ml se cora de vermelho por uma gota de alaranjado de metila SI (pH 1,0 a 4,0). considerada alcalina quando cora de azul o papel vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de azul por uma gota de azul de bromotimol SI (pH 7,6 a 13,0). considerada fracamente alcalina quando cora de azul o papel vermelho de tornassol ou 1 ml se cora de rosa por uma gota de vermelho de cresol SI (pH 7,6 a 8,8). considerada fortemente alcalina quando 1 ml se cora de azul por uma gota de timolftalena SI (pH 9,3 a 10,5) ou de vermelho por uma gota de fenolftalena SI (pH 10,0 a 13,0). REAGENTES, INDICADORES, SOLUES REAGENTES, SOLUES INDICADORAS, SOLUES COLORIMTRICAS E SOLUES VOLUMTRICAS Reagentes So substncias utilizadas em testes, reaes, ensaios e doseamentos farmacopicos, quer como tais ou em solues. Indicadores So substncias utilizadas nos ensaios farmacopicos para determinar o ponto final de uma reao qumica, avaliar a concentrao hidrogeninica ou assinalar uma mudana de pH desejada. Solues reagentes So solues de reagentes em solventes especficos e concentraes definidas. So designadas por SR. Solues indicadoras So solues de indicadores em solventes especficos e concentraes definidas. So designadas por SI. Solues colorimtricas So solues utilizadas na preparao de padres colorimtricos para fins de comparao. So designadas por SC. Solues volumtricas So solues de reagentes de concentrao conhecida, destinadas ao uso em determinaes quantitativas. Na F. BRAS. x as concentraes das solues volumtricas so expressas em molaridade. So designadas por SV. Soluo molar a soluo que contm uma molcula-grama do soluto em 1000 ml da soluo. Os mltiplos e submltiplos da soluo molar, tambm, so designados por nmeros inteiros ou fraes decimais como: 2 M; M; 0,5 M; 0,1 M; etc. PREPARAO DE SOLUES Todas as solues utilizadas em testes, ensaios e reaes so preparadas com gua purificada, a menos indicado de maneira diferente na monografia individual. A expresso recentemente preparada, referente ao preparo de solues utilizadas em testes, ensaios e reaes, indica que a soluo deve ser preparada no mais que 24 horas antes da realizao do ensaio.

GUA A gua mencionada nos testes, reaes e ensaios gua purificada. Para preparaes injetveis, devese utilizar gua para injetveis, descrita em monografia individual. Quando for prescrito o uso de gua isenta de dixido de carbono, utilizar gua purificada fervida por pelo menos 5 minutos e protegida do ar atmosfrico durante o resfriamento e armazenagem. EXPRESSO DE CONCENTRAES As concentraes em porcentagem so expressas como segue. Por cento p/p (peso em peso) ou % (p/p) Expressa o nmero de g de um componente em 100 g de mistura. Por cento p/V (peso em volume) ou % (p/V) Expressa o nmero de g de um componente em 100 ml de soluo. Por cento V/V (volume em volume) ou % (V/V) Expressa o nmero de ml de um componente em 100 ml de soluo. Por cento V/p (volume em peso) ou % (V/p) Expressa o nmero de ml de um componente em 100 g de mistura. A expresso por cento usada sem outra atribuio significa: para mistura de slidos e semi-slidos, por cento p/p; para solues ou suspenses de slidos em lquidos, por cento p/V; para solues de lquidos, por cento V/V; para solues de gases em lquidos, por cento p/V; para expressar teor de leos essenciais em drogas vegetais, por cento V/p. APARELHOS VOLUMTRICOS Os aparelhos volumtricos so empregados nas medidas de volume nos testes, ensaios e doseamentos farmacopicos, e devem ser aferidos temperatura padro de 25 C. Caso o aparelho volumtrico no tenha sido aferido a 25 C, as medidas de volume devem ser realizadas na temperatura nele indicada. Nas medies de volume, o nvel inferior do menisco do lquido contido nos aparelhos volumtricos deve tangenciar o trao de aferio. Nos casos de lquidos fortemente corados, utiliza-se como referncia a borda superior do menisco. Os aparelhos volumtricos para transferncia de lquidos (pipetas ou buretas), em virtude de terem sido aferidos com gua, s podero fornecer exatamente o volume indicado quando os lquidos a medir tiverem, aproximadamente, a viscosidade, a tenso superficial e a densidade da gua. TEMPERATURA Todas as temperaturas constantes na F. BRAS. x so expressas na escala Celsius, e todas as medidas so feitas a 25 C, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. BANHO-MARIA E BANHO A VAPOR A expresso banho-maria significa o uso de um banho de gua fervente, a menos que outra temperatura seja indicada na monografia individual. As expresses gua quente e gua muito quente indicam temperaturas aproximadas entre 60 C e 70 C e entre 85 C e 95 C, respectivamente. Banho a vapor significa exposio ao vapor fluente ou a outra forma de calor correspondendo, em temperatura, do vapor fluente. MEDIDAS DE PRESSO A expresso pascal (Pa), usada para medidas de presso como a arterial, a atmosfrica ou a interna de um aparelho, refere-se ao uso de manmetros ou barmetros calibrados em relao presso exercida pela fora de 1 newton uniformemente distribuda sobre uma superfcie plana de 1 m2 de rea perpendicular direo da fora; 1 pascal equivale a 7,5 10-3 mm de mercrio. PRESSO REDUZIDA A expresso presso reduzida significa presso menor ou igual a 6,7 kPa (aproximadamente 50 mm de mercrio), a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Quando na monografia for

indicada dessecao sob presso reduzida sobre agente dessecante, a operao deve ser feita sob presso reduzida em dessecador ou outro aparelho adequado. DESSECADOR Compreende-se por dessecador um recipiente perfeitamente fechado, de formato e dimenses adequadas para manter atmosfera de baixo teor de umidade por meio de agentes dessecantes nele introduzidos, tais como slica-gel, cloreto de clcio anidro, pentxido de fsforo, cido sulfrico, dentre outros. Dessecador sob presso reduzida o que permite manter atmosfera de baixa umidade sob presso de no mais que 6,7 kPa ou outra presso indicada na monografia. ODOR As expresses inodora, praticamente inodora, leve odor caracterstico ou suas variaes so usadas examinando-se a amostra depois de exposta ao ar por 15 minutos, quando se tratarem de embalagens de at 25 g abertas recentemente. No caso de embalagens maiores, transferir amostras de aproximadamente 25 g para cpsula de 100 ml de capacidade. A caracterizao do odor apenas descritiva e no pode ser considerada como padro de pureza, exceto nos casos em que um odor particular no permitido seja indicado na monografia individual. PROVA EM BRANCO As expresses executar branco paralelo, fazer prova em branco ou efetuar ensaio em branco significam repetir a determinao em condies idnticas e com quantidades idnticas de reagentes, omitindo-se, apenas, a substncia em exame. DESSECAO AT PESO CONSTANTE Esta expresso significa que a dessecao deve prosseguir at que duas pesagens consecutivas no difiram em mais de 0,5 mg por grama da substncia em exame, sendo que a segunda pesagem deve ser efetuada depois de 1 hora de dessecao adicional nas condies especificadas. INCINERAO AT PESO CONSTANTE Esta expresso significa que a incinerao deve prosseguir a 800 25 C, ou em outra temperatura indicada na monografia individual, at que duas pesagens consecutivas no difiram em mais de 0,5 mg por grama da substncia em exame, sendo que a segunda pesagem deve ser efetuada depois de 15 minutos de incinerao adicional. INTERPRETAO DA PRECISO DOS DADOS NUMRICOS E LIMITES DE TOLERNCIA A preciso desejada nos testes, reaes e ensaios farmacopicos indicada pelo nmero de decimais que se apresenta no texto. Por exemplo, 20 indica valor no menor que 19,5 e no maior que 20,5; 2,0 indica valor no menor que 1,95 e no maior que 2,05; 0,20 indica valor no menor que 0,195 e no maior que 0,205. Os limites de tolerncia, expressos numericamente por um valor mximo e mnimo, indicam a pureza de uma substncia farmacopica. Esses valores podem ser expressos em porcentagem ou nmeros absolutos. A faixa da variao deve ser estritamente observada, no sendo tolerados valores fora dos limites mximo e mnimo. CONSERVAO As substncias farmacopicas devem ser conservadas sob condies tais que evitem sua contaminao ou deteriorao. As condies de conservao de substncias farmacopicas figuram nas respectivas monografias. Proteger da luz significa que a substncia deve ser conservada em recipiente opaco ou capaz de impedir a ao da luz. Proteger da poeira significa que a substncia deve ser mantida em frasco arrolhado e munido de capuz protetor. Quando na monografia so definidas as condies de temperatura na qual a substncia deve ser conservada, so utilizados os termos descritos a seguir.

Em congelador Em temperatura entre -20 C e 0 C. Em refrigerador Em temperatura entre 2 C e 8 C. Local frio Ambiente cuja temperatura no excede 8 C. Local fresco Ambiente cuja temperatura permanece entre 8 C e 15 C. Temperatura ambiente Temperatura normalmente encontrada em um ambiente de trabalho, entre 15 C e 30 C. Local quente Ambiente cuja temperatura permanece entre 30 C e 40 C. Calor excessivo Indica temperaturas acima de 40 C. Quando for necessrio conservar um frmaco em local fresco, pode-se conserv-lo em refrigerador, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Quando na monografia no forem especificadas condies de conservao, elas incluem proteo contra a umidade, congelamento e calor excessivo. MATERIAL DE ACONDICIONAMENTO E EMBALAGEM Compreende-se por material de acondicionamento e embalagem o recipiente, envoltrio, invlucro ou qualquer outra forma de proteo, removvel ou no, destinado a envasar, proteger, manter, cobrir ou empacotar, especificamente ou no, matrias-primas, reagentes e medicamentos. Material de acondicionamento propriamente dito o que est em contato direto com seu contedo durante todo o tempo. Considera-se material de acondicionamento ampola, bisnaga, envelope, estojo, flaconete, frasco de vidro ou de plstico, frasco-ampola, cartucho, lata, pote, saco de papel e outros. Embalagem a que se destina total proteo do material de acondicionamento nas condies usuais de transporte, armazenagem e distribuio. Considera-se embalagem: caixas de papelo, cartolina, madeira ou material plstico ou estojo de cartolina e outros. No deve haver qualquer interao entre o material de acondicionamento e o seu contedo capaz de alterar a concentrao, a qualidade ou a pureza do material acondicionado. As condies de acondicionamento so descritas nas monografias individuais, utilizando-se os termos relacionados a seguir. Recipiente bem-fechado aquele que protege o seu contedo de perdas e contaminao por slidos estranhos, nas condies usuais de manipulao, transporte, armazenagem e distribuio. Recipiente perfeitamente fechado aquele que protege seu contedo de perdas e de contaminao por slidos, lquidos e vapores estranhos, eflorescncia, deliqescncia ou evaporao nas condies usuais de manipulao, distribuio, armazenagem e transporte. Recipiente hermtico aquele impermevel ao ar ou qualquer outro gs, nas condies usuais de manipulao, transporte, armazenagem e distribuio. Cilindro de gs recipiente metlico perfeitamente fechado, de paredes resistentes, destinado a conter gs sob presso, obturado por vlvula regulvel, capaz de manter a sada do gs em vazo determinada. Recipiente para dose nica o recipiente hermtico que contm determinada quantidade do medicamento destinada a ser administrada de uma s vez, o qual, uma vez aberto, no poder ser fechado com garantia de esterilidade. Recipiente para doses mltiplas o recipiente hermtico que permite a retirada de pores sucessivas de seu contedo, sem modificar a concentrao, a pureza e a esterilidade da poro remanescente. ROTULAGEM Rtulo a identificao impressa ou litografada, bem como dizeres pintados ou gravados a fogo, presso ou decalque aplicados diretamente sobre recipientes, vasilhames, invlucros, envoltrios ou qualquer outro material de acondicionamento. Os rtulos tero dimenses necessrias fcil leitura e sero redigidos de modo a facilitar o entendimento do consumidor. A confeco dos rtulos dever obedecer s normas vigentes do rgo federal de Vigilncia Sanitria. PRAZO DE VALIDADE O prazo de validade limita o tempo durante o qual o produto poder ser usado. Os produtos devero indicar nos rtulos, quando tecnicamente possvel, e nas embalagens a data do trmino do prazo de validade. Essa data identifica o tempo durante o qual o frmaco estar de acordo com as exigncias da monografia farmacopica, quando mantido sob as condies de conservao indicadas. Quando o prazo de validade for indicado apenas pelo ms e ano, entende-se como vencimento do prazo o ltimo dia desse ms. SUBSTNCIAS ADJUVANTES

Substncias adjuvantes, tais como conservantes, edulcorantes, estabilizantes, diluentes, desagregantes, aglutinantes, deslizantes, antiaderentes, entre outras so aquelas empregadas para preparar a forma farmacutica. Essas substncias devem ser incuas nas quantidades adicionadas e no devem prejudicar a eficcia teraputica do medicamento. A presena de tais substncias e a proporo adicionada devem ser claramente indicadas nos rtulos dos recipientes em que o produto entregue para consumo. A no ser que haja contra-indicao expressa, o ar dos recipientes pode ser substitudo por dixido de carbono ou nitrognio. CORANTES Nas preparaes farmacuticas tolerada a presena de substncias corantes enumeradas em XI. AO, USO E DOSES So as constantes no relatrio para registro do produto no rgo sanitrio, atualizadas mediante reviso bibliogrfica internacional, quando for o caso. Quando indicadas nas monografias, as doses representam a quantidade do medicamento usualmente prescrita para pacientes adultos. O mdico, a seu critrio e sob sua exclusiva responsabilidade, poder variar as quantidades e a freqncia de administrao de qualquer medicamento. Entretanto, a prescrio de doses muito superiores s usuais obriga o farmacutico a confirmar, com o mdico emissor da receita, as doses estabelecidas. DOSES E MEDIDAS APROXIMADAS Na falta de dispositivos de medidas apropriados (dosadores, colheres-medida, etc.) para a dispensao de medicamentos, podem ser utilizadas medidas aproximadas. So, geralmente, unidades para uso domstico, adotadas para informar ao paciente a medida da dose. Tais medidas tm a indicao de capacidade descrita a seguir. Colher de ch ............................... 5 ml Colher de sobremesa .................. 10 ml Colher de sopa ............................. 15 ml Doses menores que 5 ml costumam ser administradas em fraes da colher de ch ou em gotas. PADRES E SUBSTNCIAS DE REFERNCIA So adotados na F. BRAS. x padres e substncias qumicas de referncia (SQR) desenvolvidos, aprovados e/ou oficializados pela Comisso Permanente de Reviso da Farmacopia Brasileira. Na inexistncia desses, podem-se adotar substncias qumicas de referncia e padres estabelecidos por farmacopias consideradas oficiais no Brasil, conforme a legislao vigente. Os padres primrios para Espectrofotometria de Absoro Atmica so listados pela denominao do metal, seguida da sigla SRA (Soluo Reagente para Absoro Atmica). PRECISO DOS ENSAIOS BIOLGICOS Os resultados dos ensaios biolgicos so expressos como potncia mdia estimada e os limites de confiana para uma probabilidade de erro determinada. As especificaes para as estimativas de potncia e para os limites de confiana aceitveis so indicadas em cada monografia. A probabilidade de erro utilizada p = 0,05, a menos que outra probabilidade seja indicada na monografia. GUAS AROMTICAS So solues saturadas de leos essenciais ou outras substncias aromticas em gua. Possuem odor caracterstico das substncias utilizadas na sua preparao, recebendo, tambm, o nome delas. CPSULAS So formas farmacuticas slidas que encerram o frmaco em invlucro constitudo de gelatina ou material elstico. So classificadas em duras ou moles. As cpsulas duras (gelatinosas) apresentam duas partes cilndricas alongadas que se fecham uma na outra contendo, no seu interior, ps ou granulados. Nas

cpsulas moles o invlucro constitudo de duas partes fundidas contendo, no seu interior, material lquido ou semi-slido. As cpsulas devem atender s exigncias de Determinao de peso (V.1.1), Teste de desintegrao (V.1.4.1), Teste de dissoluo (V.1.5), Uniformidade de doses unitrias (V.1.6) e s previstas nas monografias individuais. COLRIOS So preparaes farmacuticas lquidas destinadas aplicao sobre a mucosa ocular. Devem atender s exigncias de Determinao de volume (V.1.2), Determinao de pH (V.1.19), Esterilidade (V.5.1.1) e s previstas nas monografias individuais. COMPRIMIDOS So formas farmacuticas slidas obtidas por compresso. Podem ser no-revestidos, revestidos com filme ou com revestimento aucarado (drgeas). Comprimidos revestidos com filme so comprimidos revestidos com uma camada polimrica fina de material hidrossolvel ou que resista secreo gstrica. Drgeas so comprimidos revestidos com camadas constitudas por misturas de substncias diversas, como resinas naturais ou sintticas, gomas, gelatina, materiais inativos e insolveis, acares, plastificantes, poliis, ceras, corantes autorizados e, s vezes, aromatizantes e princpios ativos. Comprimidos solveis so comprimidos no-revestidos ou revestidos com filme destinados a serem dissolvidos em gua antes da administrao. Comprimidos dispersveis so comprimidos no-revestidos ou revestidos com filme destinados a serem dispersos em gua antes da administrao. Os comprimidos devem atender s exigncias de Determinao de peso (V.1.1), Teste de desintegrao (V.1.4.1), Teste de dissoluo (V.1.5) e Uniformidade de doses unitrias (V.1.6) e s previstas nas monografias individuais. O Teste de dureza (V.1.3.1) e o Teste de friabilidade (V.1.3.2) aplicam-se, unicamente, a comprimidos no-revestidos. ELIXIRES So preparaes lquidas, lmpidas, hidroalcolicas apresentando teor alcolico na faixa de 20% a 50%. Os elixires so preparados por dissoluo simples e devem ser envasados em frascos de cor mbar e mantidos em lugar fresco e ao abrigo da luz. EMULSES So preparaes farmacuticas obtidas pela disperso de duas fases lquidas imiscveis ou praticamente imiscveis. De acordo com a hidrofilia ou lipofilia da fase dispersante os sistemas so classificados em leo em gua (O/A) ou gua em leo (A/O). As emulses devem atender s exigncias contidas nas monografias individuais e ao teste de Determinao de volume (V.1.2). Quando destinadas para uso injetvel, devem atender s exigncias de Esterilidade (V.5.1.1) e Pirognios (V.5.1.2). Quando destinadas para uso tpico ou aplicao em mucosas, devem atender s exigncias de Contagem microbiana em produtos no estreis (V.5.1.6) e Pesquisa e identificao de patgenos (V.5.1.7). ESPRITOS So preparaes lquidas alcolicas ou hidroalcolicas, contendo princpios aromticos ou medicamentosos. So classificados em simples ou compostos. Os espritos so obtidos pela dissoluo de substncias aromticas em etanol, geralmente na proporo de 5% (p/V). EXTRATOS So preparaes de consistncia lquida, slida ou intermediria obtidas a partir de material vegetal ou animal. O material utilizado na preparao de extratos pode sofrer tratamento preliminar, tal como inativao de enzimas, moagem ou desengorduramento. Os extratos so preparados por percolao, macerao ou outro mtodo adequado e validado, utilizando como solvente etanol, gua ou outro solvente adequado. Aps a extrao, materiais indesejveis podem ser eliminados. EXTRATOS FLUIDOS

So preparaes lquidas nas quais, exceto quando indicado de maneira diferente, uma parte do extrato, em massa ou volume, corresponde a uma parte, em massa, da droga seca utilizada na sua preparao. Se necessrio, os extratos fluidos podem ser padronizados em termos de concentrao do solvente, teor de constituintes ou resduo seco. Se necessrio, podem ser adicionados conservantes inibidores do crescimento microbiano. EXTRATOS MOLES So preparaes de consistncia pastosa obtidas por evaporao parcial do solvente utilizado na sua preparao. So utilizados como solvente etanol, gua ou misturas etanol/gua em proporo adequada. Apresentam, no mnimo, 70% de resduo seco, calculados como porcentagem de massa. Se necessrio, podem ser adicionados conservantes inibidores do crescimento microbiano. EXTRATOS SECOS So preparaes slidas obtidas por evaporao do solvente utilizado na sua preparao. Apresentam, no mnimo, 95% de resduo seco, calculados como porcentagem de massa. Podem ser adicionados de materiais inertes adequados. Os extratos secos padronizados tm o teor de seus constituintes ajustado pela adio de materiais inertes adequados ou pela adio de extratos secos obtidos com o mesmo frmaco utilizado na preparao. Quando necessrio, poder ser prescrita na monografia a realizao de ensaio-limite para o solvente utilizado na preparao. INJETVEIS So preparaes estreis destinadas administrao parenteral. Apresentam-se como solues, suspenses, ou emulses. Devem atender s exigncias de Determinao de volume (V.1.2), Esterilidade (V.5.1.1), pirognios e s previstas nas monografias individuais. Os requerimentos para pirognios podem ser cumpridos aplicando-se o teste de Pirognios (V.5.1.2) ou de Endotoxinas bacterianas (V.5.1.9). Veculos aquosos gua para injetveis geralmente utilizada como veculo, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Cloreto de sdio pode ser adicionado em quantidades suficientes para obter solues isotnicas. Solues de cloreto de sdio ou outras solues adequadas podem ser utilizadas para substituir total ou parcialmente gua para injetveis, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Todos os veculos aquosos devem satisfazer s exigncias especificadas nas provas de Esterilidade (V.5.1.1) e pirognios. Veculos no-aquosos Veculos no-aquosos utilizados parcial ou totalmente na obteno de preparaes injetveis podem ser miscveis ou imiscveis com a gua. Entre os veculos miscveis com a gua, os mais usados so os polilcoois e os polmeros do xido de etileno. Entre os imiscveis com a gua, os mais usados so os leos fixos de origem vegetal e os mono e diglicerdeos de cidos graxos. Os leos fixos so inodoros ou quase inodoros, e seu odor e sabor no devem lembrar os de rano. Devem satisfazer s exigncias especificadas nas monografias individuais e s descritas a seguir. Teste de resfriamento Dessecar a amostra de leo fixo a 105 C durante 2 horas e resfriar temperatura ambiente em dessecador sobre slica-gel. Transferir quantidade da amostra para recipiente cilndrico de vidro incolor, com dimetro interno de aproximadamente 25 mm. Fechar o recipiente e mergulhar durante 4 horas em gua mantida a 10 C. A amostra deve permanecer suficientemente lmpida de modo que uma linha negra, de 0,5 mm de largura, possa facilmente ser visualizada quando mantida, verticalmente, atrs do cilindro, contra fundo branco. ndice de saponificao Entre 185 e 200 (V.3.3.8). ndice de iodo Entre 79 e 128 (V.3.3.10). Substncias insaponificveis Refluxar em banho-maria 10 ml da amostra com 15 ml de hidrxido de sdio a 16,7% (p/V) e 30 ml de etanol, agitando ocasionalmente at que a mistura se torne lmpida. Transferir a mistura para cpsula de porcelana, evaporar o etanol em banho-maria e misturar o resduo com 100 ml de gua. Uma soluo lmpida deve ser obtida. cidos graxos livres No mximo 2 ml de hidrxido de sdio 0,02 M so gastos para neutralizar os cidos graxos livres em 10 g da amostra (V.3.3.7).

Os mono ou diglicerdeos sintticos de cidos graxos devem ser lquidos e devem permanecer lmpidos quando resfriados a 10 C. Seu ndice de iodo no deve ser maior que 140 (V.3.3.10). Os veculos no-aquosos devem ser selecionados com especial cuidado, pois no podem ser irritantes, txicos ou sensibilizantes e no devem interferir na eficcia teraputica da preparao. Substncias adjuvantes Adjuvantes so substncias com finalidades especficas adicionadas s preparaes injetveis. Essas substncias devem ser selecionadas tendo em vista o aumento da estabilidade do produto, no devendo interferir na eficcia teraputica nem no doseamento do principio ativo, tampouco causar toxicidade na quantidade administrada ao paciente. Dentre tais substncias incluem-se os solubilizantes, os antioxidantes, os agentes quelantes, os tampes, os agentes antibacterianos, os agentes antifngicos, os agentes antiespumantes e outros, quando especificados nas monografias. No permitida a adio de substncias corantes. A menos que indicado de maneira diferente na monografia individual, os limites mximos para alguns adjuvantes so os descritos a seguir. Agentes contendo mercrio ou compostos tensoativos catinicos 0,01%. Agentes do tipo clorobutanol, cresol e fenol 0,5%. Dixido de enxofre, ou quantidade equivalente de sulfito, bissulfito ou metabissulfito de potssio ou sdio 0,2%. Recipientes para injetveis Os recipientes para preparaes injetveis devem ser fabricados com materiais que no provoquem interao com o contedo e possuam transparncia suficiente para permitir inspeo visual. As tampas, quando usadas, tampouco podem influir na composio ou na conservao do medicamento, oferecendo perfeita vedao, mesmo depois de perfuradas vrias vezes. Os recipientes para preparaes injetveis so classificados em recipientes para dose nica, recipientes para doses mltiplas ou recipientes para perfuso. Os recipientes para dose nica, ampolas e cartuchos de uso odontolgico, so frascos de vidro ou de material plstico adequado, fechados pela fuso do vidro ou com a utilizao de oprculos fixos ou mveis. O contedo s deve ser utilizado em uma nica dose, no podendo ser reaproveitado. Os recipientes para doses mltiplas so frascos de vidro de paredes resistentes que, depois de cheios com preparaes lquidas ou com slidos para serem dissolvidos ou suspensos, so selados com tampa de outro material. O contedo destes frascos pode ser removido para administrao em uma nica ou em vrias doses. Os recipientes para perfuso so frascos com mais de 50 ml de capacidade, selados com tampa de outro material ou no, fabricados de vidro ou de plstico. Os medicamentos envasados nestes tipos de recipientes devem ser administrados em uma nica vez, com a utilizao de equipos estreis, e no podem conter agentes bactericidas ou antifngicos. O uso de outros tipos de adjuvantes deve ser considerado cuidadosamente. Controle de volume em recipientes Proceder como descrito em Determinao de volume (V.1.2), Produtos lquidos em recipientes para dose nica e injetveis. Esterilidade As preparaes injetveis devem satisfazer s exigncias especificadas na monografia para o Teste de esterilidade (V.5.1.1). Pirognios As preparaes injetveis devem satisfazer s exigncias especificadas na monografia individual para o teste de Pirognios (V.5.1.2) ou de Endotoxinas bacterianas (V.5.1.9). Contaminao por partculas As preparaes injetveis devem satisfazer s exigncias especificadas na monografia para o teste de Contaminao por partculas (V.1.7).

LOES So preparaes lquidas aquosas ou hidroalcolicas destinadas ao uso externo por meio de aplicaes sobre a pele. MEDICAMENTOS PRESSURIZADOS So medicamentos acondicionados em frascos mantidos sob presso com sistema apropriado de aplicao. Devem atender s exigncias das respectivas monografias. VULOS So preparaes farmacuticas slidas com formato adequado para aplicao vaginal. Devem dispersar ou fundir temperatura do organismo. Essas preparaes devem atender s exigncias de Determinao de peso (V.1.1), Teste de desintegrao (V.1.4.2) e s previstas nas monografias especficas. PREPARAES TPICAS SEMI-SLIDAS Preparaes tpicas semi-slidas so aquelas previstas para aplicao na pele ou em certas mucosas, para ao local ou penetrao percutnea de medicamentos, ou ainda por sua ao emoliente ou protetora. As preparaes destinadas ao uso oftlmico, ao tratamento de feridas ou aplicao sobre leses extensas da pele devem satisfazer s exigncias do teste de Esterilidade (V.5.1.1). As preparaes semi-slidas so classificadas em pomadas, cremes, gis ou pastas. Pomadas Pomadas so preparaes tpicas constitudas de base monofsica na qual podem estar dispersas substncias slidas ou lquidas. Cremes So preparaes plsticas obtidas pela disperso de duas fases lquidas no miscveis ou praticamente imiscveis. Gis Gis so preparaes farmacuticas constitudas por uma disperso bicoerente de fase slida em fase lquida. Gis hidrofbicos consistem, usualmente, de parafina lquida com polietileno ou leos gordurosos com slica coloidal ou sabes de alumnio ou zinco. Gis hidroflicos so preparaes obtidas pela incorporao de agentes gelificantes tragacanta, amido, derivados de celulose, polmeros carboxivinlicos e silicatos duplos de magnsio e alumnio gua, glicerol ou propilenoglicol. Pastas Pastas so pomadas contendo grande quantidade de slidos em disperso. SUPOSITRIOS So preparaes farmacuticas slidas com formato adequado para introduo no reto. Devem fundir temperatura do organismo ou dispersar em meio aquoso. Os supositrios devem atender s exigncias de Determinao de peso (V.1.1), Teste de desintegrao (V.1.4.2) e s previstas nas monografias especficas. SUSPENSES So preparaes farmacuticas obtidas pela disperso de uma fase slida insolvel ou praticamente insolvel em uma fase lquida. As suspenses devem atender s exigncias contidas nas monografias individuais, bem como ao teste de Determinao de volume (V.1.2).

Quando acondicionadas em recipientes para dose nica devem satisfazer s exigncias de Uniformidade de doses unitrias (V.1.6). Quando se destinam ao uso injetvel, devem satisfazer s exigncias de Esterilidade (V.5.1.1) e pirognios e no devem apresentar partculas maiores que 100 nm. TINTURAS So preparaes alcolicas ou hidroalcolicas resultantes da extrao de drogas vegetais ou animais ou da diluio dos respectivos extratos. So classificadas em simples ou compostas, conforme preparadas com uma ou mais matrias-primas. A menos que indicado de maneira diferente na monografia individual, 10 ml de tintura simples correspondem a 1 g de droga seca. XAROPES So solues aquosas concentradas de sacarose ou outros acares. Quando no se destinam ao consumo imediato, devem ser adicionados de conservadores antimicrobianos apropriados. V.1 PROCEDIMENTOS TCNICOS APLICADOS A MEDICAMENTOS V.1.1 DETERMINAO DE PESO O teste se aplica a formas farmacuticas slidas em dose unitria (comprimidos no-revestidos, comprimidos revestidos, pastilhas, cpsulas duras e moles e supositrios), formas farmacuticas slidas acondicionadas em recipientes para dose unitria (ps estreis, ps liofilizados, ps para injetveis e ps para reconstituio de uso oral) e a formas farmacuticas slidas e semi-slidas acondicionadas em recipientes para doses mltiplas (granulados, ps, gis, cremes, pomadas e ps para reconstituio). As pesagens so feitas em balanas de sensibilidade adequada. PROCEDIMENTO PARA PRODUTOS EM DOSE UNITRIA Para produtos em dose unitria, o teste permite verificar se as unidades de um mesmo lote apresentam uniformidade de peso. Para realizar o teste, necessrio determinar, previamente, o peso mdio de unidades do lote. Comprimidos no-revestidos ou revestidos com filme Pesar, individualmente, 20 comprimidos e determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) Pesar, individualmente, 20 drgeas e determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que cinco unidades fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Cpsulas duras Pesar, individualmente, 20 unidades, remover o contedo de cada uma, limpar adequadamente e pesar novamente. Determinar o peso do contedo de cada cpsula pela diferena de peso entre a cpsula cheia e a vazia. Com os valores obtidos, determinar o peso mdio do contedo. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio do contedo, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Cpsulas moles Proceder como descrito para Cpsulas duras. Para determinar o peso mdio do contedo, cortar as cpsulas previamente pesadas e lav-las com ter etlico ou outro solvente adequado. Deixar os invlucros expostos ao ar, em temperatura ambiente, at completa evaporao do solvente. Pesar novamente. Supositrios e vulos

Pesar, individualmente, 20 supositrios ou vulos e determinar o peso mdio. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Ps estreis, ps liofilizados e ps para injetveis Realizar o teste com 20 unidades. Remover os lacres metlicos, no caso de frascos-ampola. Retirar rtulos que possam sofrer danos durante o teste. Secar, se necessrio, a superfcie externa dos recipientes. Pesar, individualmente, as 20 unidades, com as respectivas tampas. Remover o contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando gua e em seguida etanol. Secar em estufa a 105 C, por 1 hora, ou em temperaturas inferiores a essa, dependendo da natureza do material, at peso constante. Resfriar temperatura ambiente, recolocar a tampa e pesar novamente. A diferena entre as duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar o peso mdio do contedo das 20 unidades. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Ps para reconstituio (uso oral) Proceder conforme descrito para Ps estreis, ps liofilizados e ps para injetveis. Pode-se tolerar no mais que duas unidades fora dos limites especificados na Tabela 1, em relao ao peso mdio, porm, nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das porcentagens indicadas. Tabela 1 Critrios de avaliao da determinao de peso para formas farmacuticas slidas em dose unitria Formas farmacuticas em dose unitria Comprimidos no-revestidos ou revestidos com filme, comprimidos efervescentes, comprimidos sublinguais, comprimidos vaginais e pastilhas Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) Cpsulas duras e moles, cpsulas vaginais Supositrios e vulos Ps estreis, ps liofilizados e ps para injetveis Ps para reconstituio (uso oral) Peso mdio Limites de variao

80 mg ou menos mais que 80 mg e menos que 250 mg 250 mg ou mais 25 mg ou menos mais que 25 mg e at 150 mg mais que 150 mg e menos que 300 mg 300 mg ou mais menos que 300 mg 300 mg ou mais independente do peso mdio mais que 40 mg* menos que 300 mg 300 mg ou mais

10,0% 7,5% 5,0% 15,0% 10,0% 7,5% 5,0% 10,0% 7,5% 5,0 % 10,0% 10,0% 7,5%

(*) Se o peso mdio for de 40 mg ou menos, submeter ao teste de Uniformidade de doses unitrias (V.1.6). PROCEDIMENTO PARA PRODUTOS EM DOSES MLTIPLAS Para produtos acondicionados em recipientes para doses mltiplas, o teste permite verificar a homogeneidade no envase. Ps para reconstituio (uso oral e parenteral) Pesar, individualmente, 10 unidades. Remover o contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando solvente adequado. Secar, esfriar temperatura ambiente e pesar novamente. A diferena entre as duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar o peso mdio do contedo das 10 unidades. Os valores individuais no diferem de 10% em relao ao peso mdio. Granulados, ps, gis, cremes e pomadas

Nota: para realizar o teste, necessrio conhecer a quantidade nominal do envase. Pesar, individualmente, 10 unidades. Remover o contedo e lavar os respectivos recipientes utilizando solvente adequado. Secar, esfriar temperatura ambiente e pesar novamente. A diferena entre as duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar o peso mdio do contedo das 10 unidades. O peso mdio dos contedos no inferior ao peso declarado e o peso individual de nenhuma das unidades testadas inferior porcentagem indicada na Tabela 2, em relao ao peso declarado. Caso no seja cumprida essa exigncia, determinar o peso individual do contedo de 20 unidades adicionais. O peso mdio do contedo das 30 unidades no inferior ao peso declarado, e o peso individual de no mais que uma unidade em 30 inferior porcentagem indicada na Tabela 2, em relao ao peso declarado. Tabela 2 Critrios de avaliao da determinao de peso para formas farmacuticas em doses mltiplas Formas farmacuticas em doses mltiplas Peso declarado Porcentagem mnima em relao ao peso declarado 90,0% 92,5% 95,0%

Granulados, ps, gis, cremes e pomadas

at 60 g acima de 60 g e at 150 g acima de 150,0 g

V.1.2 DETERMINAO DE VOLUME O teste de determinao de volume requerido para produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas e produtos lquidos em recipientes para dose nica. O teste se aplica tanto a preparaes lquidas quanto a preparaes lquidas obtidas a partir de ps para reconstituio. O teste no requerido para produtos lquidos em recipientes para dose nica quando na monografia individual constar requerimento para Uniformidade de doses unitrias. PROCEDIMENTO Produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas (exceto injetveis) Separar 10 unidades. Remover os lacres metlicos, quando for o caso. Retirar rtulos que possam sofrer danos durante o teste. Pesar, individualmente, cada recipiente com as respectivas tampas. Homogeneizar, remover e reunir os contedos e reservar para a determinao da densidade de massa. Lavar os recipientes e as tampas com gua e, em seguida, com etanol. Secar em estufa a 105 C, por 1 hora, ou em temperatura compatvel com o material do recipiente, at peso constante. Esfriar temperatura ambiente, recolocar a tampa e outras partes correspondentes e pesar novamente. A diferena entre as duas pesagens representa o peso do contedo. Determinar os volumes individuais correspondentes (V), em ml, utilizando a expresso:

V =
em que

m = peso do contedo, em g; = densidade de massa do produto, em g/ml, determinada a 20 C, conforme descrito em Determinao de massa e densidade relativa (V.2.5). A partir dos valores obtidos, determinar o volume mdio das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao volume declarado e o volume individual de nenhuma das unidades testadas inferior a 95,0% do volume declarado. Produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas obtidos a partir de ps para reconstituio (exceto injetveis)

Separar 10 unidades. Reconstituir cada unidade conforme indicado no rtulo. Proceder conforme descrito em Produtos lquidos em recipientes para doses mltiplas (exceto injetveis). A partir dos valores obtidos, determinar o volume mdio das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao volume declarado e o volume individual de nenhuma das unidades testadas inferior a 95,0% ou superior a 110,0% do volume declarado. Produtos lquidos em recipientes para dose nica (exceto injetveis) Separar 10 unidades. Verter, separadamente, o contedo de cada unidade em provetas secas calibradas de capacidade que no exceda 2,5 vezes o volume a ser medido, tomando precaues para evitar a formao de bolhas. Deixar o lquido escoar por 5 segundos, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Efetuar a medio. A partir dos valores obtidos, determinar o volume mdio das unidades testadas. O volume mdio no inferior ao volume declarado, e o volume individual de nenhuma das unidades testadas inferior a 95,0% ou superior a 110,0% do volume declarado. Produtos lquidos injetveis O teste se aplica a produtos lquidos injetveis acondicionados em recipientes como ampolas, cartuchos ou seringas pr-carregadas. Os recipientes so preenchidos com pequeno excesso volume, de acordo com as caractersticas do produto, para permitir a administrao do volume declarado. Os excessos de volume recomendados na Tabela 1 geralmente so suficientes para permitir a retirada e a administrao do volume declarado. Tabela 1 Excesso de volume recomendado para produtos lquidos injetveis. Volume declarado (ml) 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 10,0 20,0 30,0 50,0 ou mais Excesso de volume recomendado mveis / ml 0,10 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,50 0,60 0,80 2% viscosos / ml 0,12 0,15 0,25 0,35 0,45 0,50 0,70 0,90 1,20 3%

Suspenses e emulses devem ser agitadas antes da retirada do contedo e antes da determinao da densidade. Preparaes oleosas ou muito viscosas podem ser aquecidas, se necessrio, segundo as indicaes do rtulo ou a 37 C, e agitadas vigorosamente antes da retirada do contedo. Os contedos so ento esfriados entre 20 C e 25 C antes da medio do volume. Para injetveis em recipientes para dose nica, testar 6 unidades se o volume declarado igual ou superior a 10 ml, 10 unidades se o volume declarado superior a 3 ml e inferior a 10 ml, ou 12 unidades se o volume declarado igual ou inferior a 3 ml. Remover o contedo total de cada unidade com auxlio de seringa de capacidade que no exceda 3 vezes o volume a ser medido, munida de agulha nmero 21 com no menos que 2,5 cm de comprimento. Eliminar bolhas eventualmente existentes na agulha e na seringa e transferir o contedo da seringa, sem esvaziar a agulha, para proveta seca calibrada de capacidade que no exceda 2,5 vezes o volume a ser medido. Alternativamente, o contedo da seringa pode ser transferido para bquer seco tarado, sendo o volume calculado pelo peso do lquido, em gramas, dividido pela sua densidade. Para recipientes com volume declarado de 2 ml ou menos, os contedos dos recipientes podem ser reunidos para obter o volume necessrio para a medio, devendo-se utilizar seringas e agulhas secas separadas para cada recipiente. O contedo de recipientes com volume declarado de 10 ml ou mais pode ser determinado esvaziando-se o contedo de cada recipiente diretamente em provetas calibradas ou bqueres tarados.

O volume de cada recipiente examinado no inferior ao volume declarado. No caso de recipientes com volume declarado de 2 ml ou menos, o volume dos contedos reunidos no inferior soma dos volumes declarados dos recipientes utilizados no teste. Para injetveis em recipientes para doses mltiplas rotulados para conter um nmero especfico de doses de um determinado volume, selecionar uma unidade e proceder conforme descrito para injetveis em recipientes para dose nica, utilizando nmero de seringas e agulhas separadas equivalente ao nmero de doses especificadas no rtulo. O volume dispensado por cada seringa no inferior ao volume declarado por dose. Para injetveis em cartuchos ou seringas pr-carregadas, testar uma unidade se o volume declarado igual ou superior a 10 ml, 3 unidades se o volume declarado superior a 3 ml e inferior a 10 ml ou 5 unidades se o volume declarado igual ou inferior a 3 ml. Ajustar aos recipientes os acessrios necessrios para sua utilizao (agulha, mbolo, corpo de seringa), quando for o caso, e transferir o contedo de cada recipiente, sem esvaziar a agulha, para bquer seco tarado, empurrando o mbolo lenta e regularmente. Calcular o volume, em mililitros, dividindo o peso do lquido, em gramas, pela sua densidade. O volume de cada recipiente no inferior ao volume declarado. Para preparaes injetveis de grande volume (infuses parenterais), selecionar duas unidades e transferir o contedo de cada recipiente para provetas secas calibradas de capacidade que no exceda 2,5 vezes o volume a ser medido. O volume de cada recipiente no inferior ao volume declarado. V.1.3 DETERMINAO DE RESISTNCIA MECNICA EM COMPRIMIDOS Os testes de resistncia mecnica, tais como dureza e friabilidade, so considerados oficiais dentro do contexto legal desta Farmacopia, constituindo-se em elementos teis na avaliao da qualidade integral dos comprimidos. Estes testes visam demonstrar a resistncia dos comprimidos ruptura provocada por quedas ou frico. V.1.3.1 TESTE DE DUREZA O teste de dureza permite determinar a resistncia do comprimido ao esmagamento ou ruptura sob presso radial. A dureza de um comprimido proporcional fora de compresso e inversamente proporcional sua porosidade. O teste se aplica, unicamente, a comprimidos no-revestidos. O teste consiste em submeter o comprimido ao de um aparelho que mea a fora, aplicada diametralmente, necessria para esmag-lo. A fora medida em newtons (N). Para a dureza de comprimidos, o mnimo aceitvel 30 N (aproximadamente 3 kgf). APARELHAGEM Podem ser utilizados diferentes tipos de aparelhos, os quais diferem basicamente quanto ao mecanismo empregado para exercer a presso. A fora pode ser exercida manualmente ou mecanicamente. medida que a presso aumenta, um mbolo, uma placa ou um pisto aplica determinada fora sobre o comprimido, apoiado em base fixa. O aparelho calibrado com preciso de 1 N. PROCEDIMENTO O teste realizado com 10 comprimidos, eliminando qualquer resduo superficial antes de cada determinao. Os comprimidos so testados, individualmente, obedecendo sempre mesma orientao (considerar a forma, presena de ranhura e gravao). Nenhuma unidade apresenta dureza inferior a 30 N. V.1.3.2 TESTE DE FRIABILIDADE O teste de friabilidade permite determinar a resistncia dos comprimidos abraso, quando submetidos ao mecnica de aparelhagem especfica. O teste se aplica, unicamente, a comprimidos no-revestidos. O teste consiste em pesar com exatido um nmero determinado de comprimidos, submet-los ao do aparelho e retir-los depois de efetuadas 100 rotaes. Aps remover qualquer resduo de p dos comprimidos, eles so novamente pesados. A diferena entre o peso inicial e o final representa a friabilidade, medida em funo da porcentagem de p perdido. APARELHAGEM

O aparelho (Figura 1) consiste de um cilindro rotativo, com 287,0 4,0 mm de dimetro e 38,0 2,0 mm de profundidade, constitudo de polmero sinttico transparente com faces internas polidas de baixa atividade esttica, o qual gira em torno de seu eixo a uma velocidade de 25 1 rotaes por minuto. Uma das faces do cilindro removvel. Os comprimidos so recolhidos a cada volta do cilindro por uma projeo curva com raio interno de 80,5 5,0 mm que se estende do centro parede externa do cilindro, e levados a uma altura de 156,0 2,0 mm, de onde caem repetidamente.

Figura 1 Aparelho para teste de friabilidade (friabilmetro). PROCEDIMENTO Para comprimidos com peso mdio igual ou inferior a 0,65 g, utilizar 20 comprimidos. Para comprimidos com peso mdio superior a 0,65 g, utilizar 10 comprimidos. Pesar, com exatido, os comprimidos, introduzilos no aparelho. Ajustar a velocidade para 25 rotaes por minuto e o tempo de teste para 4 minutos. Decorrido o prazo, remover qualquer resduo de p da superfcie dos comprimidos e pesar novamente. Nenhum comprimido pode apresentar-se, ao final do teste, quebrado, lascado, rachado ou partido. So considerados aceitveis os comprimidos com perda igual ou inferior a 1,5% do seu peso ou a porcentagem estabelecida na monografia. Se o resultado for duvidoso ou se a perda for superior ao limite especificado, repetir o teste por mais duas vezes, considerando-se, na avaliao, o resultado mdio das trs determinaes. V.1.4 TESTES DE DESINTEGRAO V.1.4.1 TESTE DE DESINTEGRAO PARA COMPRIMIDOS E CPSULAS O teste de desintegrao permite verificar se comprimidos e cpsulas se desintegram dentro do limite de tempo especificado, quando seis unidades do lote so submetidas ao de aparelhagem especfica sob condies experimentais descritas. O teste se aplica a comprimidos no-revestidos, revestidos com filme ou com revestimento aucarado (drgeas), comprimidos com revestimento entrico, comprimidos sublinguais, comprimidos solveis, comprimidos dispersveis, cpsulas duras e cpsulas moles. Pode ser aplicado a comprimidos mastigveis, nesse caso as condies e critrios de avaliao constaro na monografia individual. O teste no se aplica a pastilhas e comprimidos ou cpsulas de liberao controlada (prolongada). A desintegrao definida, para os fins desse teste, como o estado no qual nenhum resduo das unidades testadas (cpsulas ou comprimidos) permanece na tela metlica do aparelho de desintegrao,

salvo fragmentos insolveis de revestimento de comprimidos ou invlucros de cpsulas. Consideram-se, tambm, como desintegradas as unidades que durante o teste se transformam em massa pastosa, desde que no apresentem ncleo palpvel. APARELHAGEM Consiste de sistema de cestas e tubos (Figura 1), de recipiente apropriado para o lquido de imerso (um bquer com capacidade de 1 litro), de termostato para manter o lquido a 37 1 C e de mecanismo para movimentar verticalmente a cesta e os tubos no lquido de imerso, com freqncia constante e percurso especfico. O volume do lquido de imerso dever ser suficiente para que, ao atingir o ponto mais alto do percurso, a parte inferior da cesta fique, no mnimo, a 25 mm abaixo da superfcie do lquido, e que no ponto mais baixo fique, no mnimo, a 25 mm do fundo do bquer. Os movimentos ascendente e descendente devero ter a mesma velocidade e a mudana do sentido do movimento deve ser suave. A cesta consiste em seis tubos de vidro ou acrlico transparente, abertos em ambos os lados. As dimenses dos tubos so: comprimento 77,5 2,5 mm, dimetro interno entre 20,7 mm e 23,0 mm e espessura das paredes aproximadamente 2 mm. Os tubos so mantidos verticalmente, adaptando-se em cada extremidade da cesta um disco de material transparente adequado, com dimetro entre 88,0 mm e 92,0 mm e espessura entre 5,0 mm e 8,5 mm, possuindo seis orifcios nos quais so introduzidos os tubos. Os seis orifcios eqidistam do centro de cada disco, estando igualmente espaados. Na face externa do disco inferior encontra-se uma tela de arame (dimetro de 0,635 0,030 mm) de ao inoxidvel, com abertura entre 1,8 mm e 2,2 mm, presa por meio de trs parafusos. Para o teste de desintegrao de cpsulas, uma tela de arame de ao inoxidvel, semelhante quela adaptada ao disco inferior da cesta, ou outro dispositivo adequado pode ser adaptado face externa do disco superior para evitar que as cpsulas escapem dos tubos durante o teste. As partes que constituem a cesta so montadas e mantidas firmemente unidas mediante eixo metlico central, com dimetro de cerca de 5 mm. A extremidade superior do eixo central deve ter dispositivo para fixar a cesta ao mecanismo que produz o movimento vertical do sistema. Quando indicado, deve ser adicionado em cada tubo da cesta um disco cilndrico de material transparente adequado, com densidade relativa entre 1,18 e 1,20, dimetro de 20,70 0,15 mm, e espessura de 9,50 0,15 mm. Cada disco possui cinco orifcios, cada um com 2 mm de dimetro, sendo um orifcio no eixo do cilindro e os outros quatro eqidistantes, dispostos sobre um crculo de 6 mm de raio relativo ao centro do disco. A superfcie lateral do disco possui quatro mossas eqidistantes, com profundidade de 2,6 0,1 mm, em forma de V, as quais, no lado superior do disco, medem 9,4 0,2 mm de largura, e no lado inferior, 1,6 mm. Todas as superfcies do disco so lisas. O desenho e montagem da cesta podem variar desde que as especificaes para os tubos e abertura das telas sejam mantidas.

Figura 1 Aparelho para teste de desintegrao de comprimidos e cpsulas (dimenses em mm). PROCEDIMENTO Comprimidos no-revestidos Utilizar seis comprimidos no teste. Colocar um comprimido em cada um dos seis tubos da cesta, adicionar um disco a cada tubo e acionar o aparelho, utilizando gua mantida a 37 1 C como lquido de imerso, a menos que outro lquido seja especificado na monografia do medicamento. Ao final do intervalo de tempo especificado, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos. Todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. Se os comprimidos no se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir o teste com seis outros comprimidos, omitindo os discos. Ao final do teste, todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. O limite de tempo estabelecido como critrio geral para a desintegrao de comprimidos no-revestidos de 30 minutos, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) ou revestidos com filme Utilizar seis comprimidos no teste. Colocar um comprimido em cada um dos seis tubos da cesta. Colocar um disco em cada tubo e acionar o aparelho, utilizando gua mantida a 37 1 C, como lquido de imerso. Ao final do intervalo de tempo especificado, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos. Se os comprimidos no estiverem completamente desintegrados, testar outros seis comprimidos, substituindo a gua por cido clordrico 0,1 M, mantido a 37 1 C, como lquido de imerso. Ao final do intervalo de tempo especificado, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos. Todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. Se os comprimidos no se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir o teste com seis outros comprimidos, omitindo os discos. Ao final do teste, todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. O limite de tempo estabelecido como critrio geral para a desintegrao de comprimidos revestidos com filme de 30 minutos, e para comprimidos com revestimento aucarado (drgeas) de 60 minutos, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Comprimidos com revestimento entrico (gastro-resistentes) Utilizar seis comprimidos no teste. Colocar um comprimido em cada um dos seis tubos da cesta. Acionar o aparelho, sem adicionar os discos, utilizando cido clordrico 0,1 M mantido a 37 1 C como lquido de

imerso, por 60 minutos ou o tempo especificado na monografia individual. Cessar o movimento da cesta e observar os comprimidos. Nenhuma unidade pode apresentar qualquer sinal de desintegrao, rachadura ou amolecimento, que possibilite o extravasamento do seu contedo. Colocar um disco em cada tubo e acionar o aparelho, utilizando soluo tampo fosfato pH 6,8 mantido a 37 1 C como lquido de imerso. Decorridos 45 minutos ou o tempo especificado na monografia, cessar o movimento da cesta e observar o material em cada um dos tubos. Todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados, podendo restar apenas fragmentos de revestimento insolveis. Se os comprimidos no se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir o teste com seis outros comprimidos, omitindo os discos. Ao final do teste, todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. Comprimidos sublinguais Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos no-revestidos, omitindo o uso de discos. Aps 5 minutos, todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. Comprimidos solveis e comprimidos dispersveis Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos no-revestidos, utilizando gua mantida entre 15 C e 25 C, como lquido de imerso. Aps 3 minutos, todos os comprimidos devem estar completamente desintegrados. Cpsulas gelatinosas (duras) Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos no-revestidos, omitindo o uso dos discos. Utilizar uma tela com abertura de 1,8 mm a 2,2 mm, de arame de ao inoxidvel adaptada tampa da cesta, conforme descrito no item Aparelhagem. Observar as cpsulas aps 45 minutos ou conforme especificado na monografia do medicamento. Todas as cpsulas devem estar completamente desintegradas, ou restando, na tela, apenas fragmentos insolveis de consistncia mole. Cpsulas moles Realizar o teste conforme descrito para Comprimidos no-revestidos, utilizando os discos. Observar as cpsulas aps 30 minutos ou conforme especificado na monografia do medicamento. Todas as cpsulas devem estar completamente desintegradas, ou restando, na tela, apenas fragmentos insolveis de consistncia mole. Se as cpsulas no se desintegrarem devido aderncia aos discos, repetir o teste com seis outras unidades, omitindo os discos. Ao final do teste, todas as cpsulas devem estar completamente desintegradas. V.1.4.2 TESTE DE DESINTEGRAO DE SUPOSITRIOS, VULOS E COMPRIMIDOS VAGINAIS Este teste permite verificar a maior ou menor capacidade dessas formas farmacuticas de amolecerem ou se desagregarem em meio lquido, no espao de tempo prescrito. Considera-se desintegrao completa quando o supositrio ou vulo apresentar: a) dissoluo completa; b) separao completa de seus componentes, acumulando-se substncias graxas fundidas na superfcie do lquido, depositando-se os ps insolveis no fundo do recipiente e dissolvendo-se os componentes solveis da amostra, sendo que a distribuio dos componentes ocorre de um ou mais dos modos descritos acima; c) amolecimento da amostra que pode ser acompanhado pela mudana da sua forma sem que ocorra separao completa de seus componentes; o amolecimento deve ser tal que, ao pressionar a amostra amolecida com basto de vidro, no se perceba existncia de camada mais dura na sua superfcie; d) ruptura da cpsula gelatinosa de vulos, permitindo liberao de seus componentes; e) ausncia de resduo sobre o disco perfurado ou, quando houver, tenha a consistncia de massa mole que no oferea resistncia presso de basto de vidro. APARELHAGEM A aparelhagem (Figura 1) consiste de cilindro de vidro ou plstico, transparente, com paredes de espessura apropriada, em cujo interior se encontra preso, por trs ganchos de metal, um dispositivo metlico que consiste de dois discos perfurados de ao inoxidvel, contendo cada um 39 orifcios de 4 mm de dimetro cada. O dimetro de cada disco tal que permite a sua introduo no cilindro transparente, ficando os discos afastados de, aproximadamente, 30 cm. A determinao levada a efeito utilizando-se

trs aparelhos, contendo cada um uma nica amostra. Cada aparelho introduzido no interior de bquer de, pelo menos, 4 litros de capacidade, contendo gua temperatura de 36 C a 37 C, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. O bquer provido de agitador que opere em velocidade lenta e dispositivo que permita inverter o cilindro sem retir-lo da gua.

Figura 1 Aparelho para teste de desintegrao de supositrios, vulos e comprimidos vaginais (dimenses em mm). PROCEDIMENTO Supositrios e vulos Utilizar trs supositrios ou vulos. Colocar cada um deles sobre o disco inferior do dispositivo, introduzir e fixar o disco no interior do cilindro. Inverter o aparelho a cada 10 minutos. Examinar as amostras depois de decorrido o tempo prescrito na monografia. O teste considerado satisfatrio se todas as amostras se apresentarem desintegradas. O limite de tempo estabelecido como critrio geral para a desintegrao de 30 minutos para supositrios, vulos e comprimidos vaginais com base hidrofbica, e de 60 minutos para supositrios com base hidroflica, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Comprimidos vaginais Utilizar o aparelho descrito em Desintegrao de supositrios e vulos, montado conforme Figura 2. Introduzir o cilindro em bquer de dimetro adequado contendo gua entre 36 C e 37 C que deve cobrir uniformemente as perfuraes do disco. Utilizar trs aparelhos, colocando em cada um deles um comprimido vaginal sobre o disco superior. Cobrir o aparelho com uma placa de vidro para assegurar a umidade adequada. Examinar o estado de cada amostra depois de decorrido o tempo prescrito na monografia. O teste considerado satisfatrio se todas as amostras se apresentarem desintegradas.

Figura 2 Aparelho para teste de desintegrao de supositrios, vulos e comprimidos vaginais. A, placa de vidro; B, comprimido vaginal; C, superfcie da gua; D, gua; E, fundo do recipiente. V.1.5 TESTE DE DISSOLUO O teste de dissoluo permite determinar a quantidade de substncia ativa dissolvida no meio de dissoluo quando o produto submetido ao de aparelhagem especfica, sob condies experimentais descritas. O resultado expresso em porcentagem da quantidade declarada no rtulo. O teste visa demonstrar se o produto atende s exigncias constantes da monografia do medicamento para comprimidos, cpsulas e outros casos em que o teste seja requerido. APARELHAGEM O aparelho de dissoluo consiste em um sistema de trs componentes, descritos a seguir. (1) Recipientes abertos de forma cilndrica e fundo hemisfrico (cubas), feitos em vidro boro silicato, plstico ou outro material transparente e inerte, aos quais pode ser adaptada tampa de material inerte, com aberturas adequadas para o agitador, coleta de amostras e insero de termmetro. As cubas podem apresentar as seguintes dimenses e capacidades: 185 25 mm de altura e 102 4 mm de dimetro interno para uma capacidade nominal de um litro; 290 10 mm de altura e 102 4 mm de dimetro interno para uma capacidade nominal de dois litros; 290 10 mm de altura e 150 5 mm de dimetro interno para uma capacidade nominal de quatro litros. (2) Hastes em ao inoxidvel para prover agitao do meio, que podem apresentar-se sob duas formas: cestas (Mtodo 1) ou ps (Mtodo 2) (Figuras 1 e 2). A haste deve ser centralizada de tal forma que, ao ser acionada, seu eixo de rotao no se afaste mais de 2 mm em relao ao eixo vertical do recipiente contendo o meio de dissoluo. (3) Um motor que permita ajustar a velocidade de rotao da haste quela especificada na monografia individual, mantendo-a dentro dos limites de 4%. A rotao no deve produzir efeitos indesejveis na hidrodinmica do sistema. As cubas so imersas em banho de gua termostatizado, de material transparente e tamanho adequado, em que a temperatura seja mantida a 37 0,5 C durante a execuo do teste. O aparelho deve ser isento de qualquer fonte de vibrao, inclusive externa, que possa influir na hidrodinmica do sistema. De preferncia, o aparelho deve permitir a visualizao das amostras e dos agitadores durante o teste. Mtodo 1: Cestas Quando especificado na monografia, utiliza-se como agitador uma haste de ao inoxidvel, em cuja extremidade se adapta uma cesta do mesmo material (Figura 1). A tela padro utilizada na confeco da cesta possui dimetro de fio de 0,25 mm e abertura de malha quadrada de 0,40 0,04 mm (mesh 40), salvo especificao em contrrio na monografia individual. A amostra deve ser colocada dentro da cesta seca, antes do incio do teste. Durante sua execuo, uma distncia de 25 2 mm deve ser mantida entre a parte inferior da cesta e o fundo interno do recipiente que contm o meio de dissoluo.

Figura 1 Mtodo 1 (Cestas). A cesta e a cuba no esto na mesma proporo. Mtodo 2: Ps Quando especificado na monografia, utiliza-se como agitador uma haste de ao inoxidvel, revestida ou no de material inerte, cuja extremidade apresenta a forma de p (Figura 2), capaz de girar suavemente e sem desvio de eixo durante o tempo e velocidade especificados na monografia correspondente. A amostra deve ser adicionada, sempre que possvel, antes do incio do teste. Durante sua execuo, uma distncia de 25 2 mm deve ser mantida entre o extremo inferior das ps e o fundo interno do recipiente que contm o meio de dissoluo. importante que as amostras no flutuem no meio de dissoluo. No caso de cpsulas, pode-se recorrer a um dispositivo apropriado, confeccionado em fio de ao espiralado em poucas voltas e em dimetro suficiente para aprisionar a cpsula sem deform-la nem reduzir a rea de contato com o meio.

Figura 2 Mtodo 2 (Ps). A p e a cuba no esto na mesma proporo. MEIO DE DISSOLUO Utiliza-se o meio de dissoluo especificado na monografia do produto, previamente desgaseificado por procedimento conveniente, quando necessrio, para evitar a formao de bolhas que possam interferir na velocidade de dissoluo a ser medida. Quando o meio de dissoluo for soluo tampo, o pH deve ser ajustado a 0,05 unidades do valor do pH especificado na monografia do produto. TEMPO DE DISSOLUO Quando um nico tempo for especificado na monografia do produto, o mesmo representa o tempo mximo dentro do qual deve ser dissolvida a quantidade mnima, em porcentagem, de substncia ativa estabelecida na mesma. Quando mais de um tempo for especificado na monografia, devem ser tomadas alquotas, adequadamente medidas, ao final de cada tempo indicado. PROCEDIMENTO Montar e verificar a aparelhagem conforme especificaes mencionadas anteriormente, a fim de reduzir, ao mnimo, fatores que alterem significativamente a hidrodinmica do sistema (desvio de eixo, vibrao, etc.). Adicionar o volume medido do Meio de dissoluo especificado na monografia do produto, convenientemente desgaseificado, caso necessrio, ao recipiente da aparelhagem de dissoluo. Manter a temperatura do meio a 37 0,5 C, retirando o termmetro antes de iniciar a agitao. No caso do Mtodo

1, colocar a amostra dentro da cesta seca. No caso do Mtodo 2, colocar a amostra dentro do recipiente de dissoluo, como descrito anteriormente. Em ambos os casos, ao observar formao de bolhas na superfcie das amostras, quando em contato com o meio de dissoluo, verificar sua influncia no resultado. Iniciar imediatamente a agitao, conforme velocidade pr-fixada. Em intervalo(s) de tempo especificado(s) na monografia do produto, retirar alquota para anlise da regio intermdia entre a superfcie do meio de dissoluo e a parte superior do cesto ou ps, a no menos que 1 cm da parede interna do recipiente (Figuras 1 e 2). Durante a retirada da alquota, manter a agitao. Filtrar imediatamente as amostras, caso no esteja utilizando filtros acoplados ao sistema de amostragem. Os filtros empregados devem ser inertes, no adsorver poro significativa do frmaco e possuir porosidade adequada. De acordo com o especificado na monografia do produto, o volume de amostra retirado pode ou no ser reposto. Se necessria a reposio, o mesmo meio de dissoluo aquecido a 37 C deve ser utilizado. Caso a reposio do meio de dissoluo no seja realizada, corrigir o volume nos clculos. Aps filtrao e diluio (quando necessrio) da alquota, a quantificao do frmaco efetuada mediante a tcnica indicada na monografia do produto. Repetir o teste com doses unitrias adicionais, conforme necessrio, considerando os Critrios de aceitao. Caso algum componente da gelatina da cpsula interfira na anlise, esvazi-la de qualquer resduo de seu contedo e test-la no mesmo volume de meio de dissoluo especificado, efetuando a anlise conforme as exigncias descritas na monografia do produto. Qualquer interferncia assim constatada deve ser corrigida ao se calcular os resultados. Correes superiores a 25% tornam o teste invlido. CRITRIOS DE ACEITAO O produto cumpre o teste se os resultados preencherem as exigncias descritas na Tabela 1, salvo especificao em contrrio na monografia individual. Tabela 1 Critrios de aceitao para o teste de dissoluo Estgios E1 E2 E3 N. de amostras testadas 06 06 12 Critrios de aceitao Cada unidade apresenta resultado maior ou igual a Q + 5% Mdia de 12 unidades (E1 + E2) igual ou maior que Q e nenhuma unidade apresenta resultado inferior a Q 15%. Mdia de 24 unidades (E1 + E2 + E3) igual ou maior do que Q, no mais que duas unidades apresentam resultados inferiores a Q 15% e nenhuma unidade apresenta resultado inferior a Q 25%.

O termo Q corresponde quantidade dissolvida de frmaco, especificada na monografia individual, expressa como porcentagem da quantidade declarada. Os valores 5%, 15% e 25% tambm representam porcentagens da quantidade declarada. Em circunstncias especiais, a porcentagem mxima de dissoluo deve ser estabelecida experimentalmente. Nesses casos, assegurar um valor de Q (quantidade dissolvida em tempo infinito) verificando que duas dosagens consecutivas no diferem entre si mais de 2% aps 10 minutos. Estgio E1 No Estgio E1 so testadas seis unidades. Se cada unidade, individualmente, apresenta resultado igual ou maior do que Q + 5%, o produto est em conformidade com o especificado, no sendo necessrio efetuar o Estgio E2. Estgio E2 Caso o critrio para o Estgio E1 no seja atendido, repetir o teste com mais seis unidades. Se a mdia das doze unidades testadas (Estgios E1 e E2) maior ou igual a Q e se nenhuma das unidades testadas apresenta resultado inferior a Q 15%, o produto est em conformidade com o especificado, no sendo necessrio efetuar o Estgio E3. Estgio E3 Caso o critrio para o Estgio E2 ainda no seja atendido, repetir o teste com mais 12 unidades. Se a mdia das 24 unidades testadas (Estgios E1, E2 e E3) maior ou igual a Q, no mximo duas unidades

apresentam resultados inferiores a Q 15% e nenhuma unidade apresenta resultado inferior a Q 25%, o produto est em conformidade com o especificado. Caso o critrio para o Estgio E3 ainda no seja atendido, o produto considerado insatisfatrio. V.1.6 UNIFORMIDADE DE DOSES UNITRIAS Para assegurar a administrao de doses corretas, cada unidade do lote de um medicamento deve conter quantidade do componente ativo prxima da quantidade declarada. O teste de uniformidade de doses unitrias permite avaliar a quantidade de componente ativo em unidades individuais do lote e verificar se esta quantidade uniforme nas unidades testadas. As especificaes deste teste se aplicam s formas farmacuticas com um nico frmaco ou com mais de um componente ativo. A menos que indicado de maneira diferente na monografia individual, o teste se aplica, individualmente, a cada componente ativo do produto. A uniformidade das doses unitrias de formas farmacuticas pode ser avaliada por dois mtodos: Variao de peso e Uniformidade de Contedo. A aplicao de cada mtodo considerando a forma farmacutica, dose e proporo do frmaco apresentada na Tabela 1. Tabela 1 Aplicao do mtodo de Uniformidade de Contedo (UC) ou de Variao de peso (VP) de acordo com a forma farmacutica, dose e proporo do frmaco. Forma Farmacutica Tipo Subtipo Dose e proporo do frmaco 25 mg e 25% Comprimidos no-revestido revestido Cpsulas dura mole suspenses, emulses ou gis solues Slidos acondicionados em recipientes para dose nica componente nico mltiplos componentes soluo liofilizada no recipiente final outros Solues acondicionadas em recipientes para dose nica Outros filme outros VP VP UC VP UC VP VP VP UC VP UC < 25 mg ou < 25% UC UC UC UC UC VP VP VP UC VP UC

O mtodo de Uniformidade de Contedo para preparaes em doses unitrias baseia-se no doseamento do contedo individual do componente ativo de um nmero de doses unitrias para determinar se o contedo individual est dentro dos limites especificados. O mtodo de Uniformidade de Contedo pode ser aplicado em todos os casos. O mtodo de Variao de peso pode ser aplicado s seguintes formas farmacuticas: (1) solues acondicionadas em recipientes para dose nica e em cpsulas moles; (2) slidos (incluindo ps, grnulos e slidos estreis) acondicionados em recipientes para dose nica que no contm outras substncias adicionadas, sejam elas ativas ou inativas; (3) slidos (incluindo slidos estreis) acondicionados em recipientes para dose nica, contendo ou no substncias ativas ou inativas adicionadas, que tenham sido preparados a partir de solues homogneas liofilizadas nos recipientes finais, e sejam rotulados de modo a indicar este modo de preparao; (4) cpsulas duras, comprimidos no-revestidos ou revestidos com filme, contendo 25 mg ou mais da substncia ativa compreendendo 25% ou mais, em peso, da dose unitria ou, no caso de cpsulas duras, o contedo da cpsula, exceto que a uniformidade de outras substncias ativas presentes em menores propores deve ser demonstrada pelo mtodo de Uniformidade de Contedo.

O mtodo de Uniformidade de Contedo exigido para todas as formas farmacuticas que no atendem s condies especificadas para aplicao do mtodo de Variao de peso. UNIFORMIDADE DE CONTEDO Para determinar a uniformidade de doses unitrias pelo mtodo de uniformidade de contedo separar, no mnimo, 30 unidades e proceder conforme descrito para as formas farmacuticas indicadas. Quando a quantidade de componente ativo de uma dose unitria for diferente do especificado no doseamento, fazer os ajustes de diluio das solues e/ou o volume das alquotas de modo a obter a concentrao do componente ativo na soluo final semelhante do doseamento. No caso de doseamento por titulao, utilizar titulante com concentrao diferente, se necessrio, para consumo de volume adequado de titulante. Considerar qualquer modificao das diluies para efetuar os clculos. Quando houver procedimento especial para o teste de uniformidade de contedo na monografia individual, fazer a correo necessria dos resultados obtidos conforme descrito a seguir. 1. Pesar quantidade de unidades do produto suficiente para efetuar o doseamento e o procedimento especial do teste de uniformidade de contedo apresentados na monografia individual. Reduzir os comprimidos a p fino (ou misturar os contedos das cpsulas, solues, suspenses, emulses, gis ou slidos em recipientes para dose nica) para obter mistura homognea. Se no for possvel obter mistura homognea desta forma, usar solventes apropriados ou outros procedimentos para obter soluo contendo o frmaco. Empregar alquotas apropriadas desta soluo para os ensaios especificados. 2. Analisar, separadamente, pores da amostra, medidas com preciso, conforme o procedimento indicado para o doseamento (D) e o procedimento especial indicado para uniformidade de contedo (E), descritos na monografia individual. 3. Calcular a quantidade de frmaco por peso mdio utilizando os resultados obtidos pelo procedimento de doseamento (D) e pelo procedimento especial (E). 4. Calcular o fator de correo (F) segundo a equao: F = D/E em que D = quantidade do componente ativo por peso mdio da forma farmacutica obtida pelo procedimento de doseamento; E = quantidade do componente ativo por peso mdio da forma farmacutica obtida pelo procedimento especial. Se (100|D E|)/D for superior a 10, no vlido o uso de F. 5. Se F estiver entre 0,970 e 1,030, no h necessidade de correo.

6. A correo ser aplicada quando o valor de F estiver entre 0,900 e 0,970 e entre 1,030 e 1,100 e deve ser efetuada calculando-se a quantidade do frmaco em cada unidade, multiplicando-se as quantidades obtidas no procedimento especial pelo fator de correo F. Formas farmacuticas slidas Analisar, individualmente, 10 unidades conforme indicado na monografia individual para o doseamento, a menos que um procedimento especial para uniformidade de contedo seja descrito na monografia. Calcular o Valor de Aceitao (VA). Formas farmacuticas lquidas Analisar, individualmente, 10 unidades conforme indicado na monografia individual para o doseamento, a menos que um procedimento especial para uniformidade de contedo seja descrito na monografia. Conduzir o teste, individualmente, em quantidade homognea do material que removida de cada recipiente em condies normais de uso. Expressar o resultado como quantidade dispensada por unidade. Calcular o Valor de Aceitao (VA). Valor de Aceitao para Uniformidade de Contedo

Calcular o Valor de Aceitao (VA) segundo a equao:

VA = M X + ks
cujos termos so definidos na Tabela 2. VARIAO DE PESO Para determinar a uniformidade de doses unitrias pelo mtodo de variao de peso separar, no mnimo, 30 unidades e proceder conforme descrito para as formas farmacuticas indicadas. A quantidade de frmaco por unidade estimada a partir do resultado do doseamento e dos pesos individuais, assumindo-se distribuio homognea do componente ativo. As quantidades individuais estimadas (xi) so calculadas segundo a equao: xi = pi A/P em que pi = pesos individuais das unidades ou dos contedos das unidades testadas; A = quantidade de componente ativo, expressa em porcentagem da quantidade declarada, determinada no doseamento; P = peso mdio das unidades utilizadas no doseamento. Comprimidos no-revestidos ou revestidos com filme Pesar, exatamente e individualmente, 10 comprimidos. A partir do resultado do doseamento e do peso individual de cada comprimido, estimar a quantidade de componente ativo em cada unidade e expressar os resultados individuais em porcentagem da quantidade declarada. Calcular o Valor de Aceitao (VA). Cpsulas duras Pesar, exatamente e individualmente, 10 cpsulas, preservando a identidade de cada uma. Remover, cuidadosamente, o contedo e pesar as cpsulas vazias. Calcular o peso do contedo de cada cpsula e, a partir do resultado do doseamento, estimar a quantidade de componente ativo em cada cpsula. Expressar os resultados individuais em porcentagem da quantidade declarada. Calcular o Valor de Aceitao (VA). Cpsulas moles Pesar, exatamente e individualmente, 10 cpsulas, preservando a identidade de cada uma. Cortar as cpsulas com lmina e retirar o contedo, lavando os invlucros com solvente adequado. Deixar os invlucros temperatura ambiente, por 30 minutos, para completa evaporao do solvente, tomando precaues para evitar adio ou perda de umidade. Pesar as cpsulas vazias e calcular o peso do contedo de cada cpsula. Estimar a quantidade de componente ativo em cada cpsula a partir do resultado do doseamento e do peso do contedo de cada cpsula. Calcular o Valor de Aceitao (VA). Formas farmacuticas slidas (exceto comprimidos e cpsulas) Proceder como indicado em Cpsulas duras. Calcular o Valor de Aceitao. Formas farmacuticas lquidas Pesar, exatamente e individualmente, a quantidade de lquido que removida de cada um de 10 recipientes em condies normais de uso. Se necessrio, calcular o volume equivalente do contedo removido aps a determinao da densidade. Estimar a quantidade de componente ativo em cada recipiente a partir do resultado do doseamento e do peso do contedo removido dos recipientes individuais. Calcular o Valor de Aceitao. Valor de Aceitao para Variao de Peso

Calcular o Valor de Aceitao conforme descrito em Valor de Aceitao para Uniformidade de Contedo, exceto que as quantidades individuais de componente ativo nas unidades so substitudas pelas quantidades individuais estimadas. CRITRIOS Aplicar os critrios a seguir, tanto para Uniformidade de Contedo como para Variao de peso, a menos que indicado de maneira diferente na monografia individual. Formas farmacuticas slidas e lquidas O produto cumpre o teste de uniformidade de doses unitrias se o Valor de Aceitao calculado para as 10 primeiras unidades testadas no maior que L1. Se o Valor de Aceitao for maior que L1, testar mais 20 unidades e calcular o Valor de Aceitao. O produto cumpre o teste de uniformidade de doses unitrias se o Valor de Aceitao final calculado para as 30 unidades testadas no maior que L1 e a quantidade de componente ativo de nenhuma unidade individual menor que (1 L2 0,01)M ou maior que (1 + L2 0,01)M. A menos que indicado de maneira diferente na monografia individual, L1 15,0 e L2 25,0. Tabela 2 Termos e expresses para o clculo do Valor de Aceitao (VA). Varivel Definio Mdia dos contedos individuais (x1, x2,..., xn), expressa como porcentagem da quantidade declarada. Contedos individuais das unidades testadas, expressos como porcentagem da quantidade declarada. Nmero de unidades testadas Constante de aceitabilidade Desvio padro da amostra Se n = 10, ento k = Se n = 30, ento k = 2,4 2,0
n xi X i =1 n 1

Condies

Valores

x1, x2,..., xn

n k s

12

M a ser utilizado quando T 101,5 (caso 1)

Valor de referncia

Se 98,5% X 101,5%, ento Se X < 98,5%, ento Se X > 101,5%, ento

(VA = ks )

M=X

(VA = 98,5 X + ks ) (VA = X 101,5 + ks )

M=X (VA = ks ) M = 98,5%
M =T

M = 98,5%

M = 101,5%

M a ser utilizado quando T > 101,5 (caso 2)

Valor de referncia

Se 98,5 X T, ento Se X < 98,5%, ento Se X > T, ento

(VA = 98,5 X + ks ) (VA = X T + ks )

Frmula geral:

Valor de Aceitao (VA)

M X + ks

Os clculos so especificados acima para os diferentes casos L1 Valor mximo permitido para o valor de aceitao L1 = 15,0 a menos que especificado de forma diferente na monografia individual Nenhum resultado individual menor que (1 L2 0,01)M ou maior que (1 + L2 0,01)M T igual a 100% a menos que outro valor tenha sido aprovado por razes de estabilidade; nestes casos, T maior que 100%. L2 = 25,0 a menos que especificado de forma diferente na monografia individual

L2

Desvio mximo permitido para cada unidade testada em relao ao valor de M utilizado nos clculos do valor de aceitao. Mdia dos limites especificados na monografia individual para a quantidade ou potncia declarada, expressa em porcentagem.

V.1.8 TESTE DE GOTEJAMENTO O teste de gotejamento destina-se a determinar a relao do nmero de gotas por mililitro e a quantidade de frmaco por gota em formas farmacuticas lquidas acondicionadas em recipientes com dispositivo dosador integrado. Para realizar o teste necessrio conhecer o nmero declarado de gotas por mililitro. PROCEDIMENTO Determinao do nmero de gotas por mililitro O gotejamento deve ser realizado com o frasco invertido na posio vertical ou conforme o ngulo de gotejamento declarado pelo fabricante, permitindo o fluxo por gravidade, a uma taxa constante, sem qualquer tipo de presso adicional. Uma leve presso pode ser aplicada em frascos de polietileno. Separar 30 unidades. Proceder ao teste utilizando 10 unidades, em ambiente com temperatura controlada de 20 2 C. Para cada unidade determinar a massa relativa ao nmero de gotas correspondente a 1 mililitro, conforme declarado pelo fabricante. Calcular o nmero de gotas por mililitro para cada unidade testada (Ni) segundo a equao:

Ni =
em que

(n1 )
mi

n1 = nmero declarado de gotas por mililitro; = densidade de massa do produto, em g/ml, determinada a 20 C, conforme descrito em Determinao de densidade de massa e densidade relativa (V.2.5); mi = massa, em g, correspondente ao nmero de gotas utilizado no teste. Determinao da quantidade de frmaco por gota Calcular a quantidade do frmaco, em mg/gota, para cada unidade testada (Qi), segundo a equao:

Qi =

Q Ni

em que Q = quantidade de frmaco em mg/ml determinada no doseamento; Ni = nmero de gotas por mililitro calculado para cada unidade testada. Calcular a porcentagem em relao quantidade declarada, para cada unidade testada (%Qi), segundo a equao:

%Qi =
em que

Qi 100 (Qd / n1 )

Qi = quantidade do frmaco, em mg/gota, calculada para cada unidade testada; Qd = quantidade declarada do frmaco, em mg/ml; n1 = nmero declarado de gotas por mililitro. Calcular a mdia das porcentagens individuais obtidas ( %Q ) e o desvio padro relativo (DPR) segundo as equaes:

%Q =

%Q
n
i

s=

(%Q
DPR =

%Q) 2

n 1

100 s %Q

em que %Qi = porcentagem em relao quantidade declarada calculada para cada unidade testada; s = desvio padro; n = nmero de unidades testadas. CRITRIOS O produto cumpre os requisitos do teste se as porcentagens individuais, para cada uma das 10 unidades testadas, esto situadas entre 85,0% e 115,0% da quantidade declarada e o desvio padro relativo (DPR) no maior que 6,0%. Se uma unidade estiver fora da faixa de 85,0% a 115,0% da quantidade declarada, ou se o DPR for maior que 6,0%, ou se ambas as condies forem observadas, testar mais 20 unidades. O produto cumpre o teste se no mximo uma unidade est fora da faixa de 85,0% a 115,0% da quantidade declarada, nenhuma unidade est fora da faixa de 75,0% a 125,0% e o DPR das 30 unidades testadas no maior que 7,8%. V.2.12. COR DE LQUIDOS A avaliao da cor de lquidos executada por comparao da soluo sob anlise preparada conforme instrues da monografia e solues-padro de cor (SC). Tais solues encontram emprego como referncia para alguns frmacos e em testes de carbonizao com cido sulfrico especificados em diversas monografias. O processo comparativo, salvo especificao em contrrio, deve ser executado em tubos de ensaio de vidro transparente e fundo chato, com dimetro da ordem de 16 mm, do tipo empregado em ensaio-limite de impurezas. Os tubos devem ser os mais uniformes possveis. Para a avaliao, utilizar volumes de 10 ml tanto para a amostra quanto para o padro, assegurando altura aproximada de 50 mm para os lquidos nos tubos. Observar os tubos transversalmente contra fundo branco, sob luz difusa. importante comparar as solues nas mesmas condies, inclusive de temperatura (25

C). As solues-amostra so preparadas de modo a apresentarem colorao semelhante da soluo de referncia especificada. PADRES BSICOS As solues de referncia de cor (SC) so obtidas a partir de trs solues bsicas, a serem preparadas e armazenadas em frascos hermticos. Destas com base na Tabela anexa, contendo instrues de preparao de 20 solues-padro de cor (SC) designadas com as letras do alfabeto, de A a T preparar a soluo ou solues especificadas para a comparao. Transferir os volumes indicados (deixar a gua por ltimo) e homogeneizar diretamente nos tubos de comparao. Soluo base de cloreto cobaltoso Preparar mistura de 25 ml de cido clordrico e 975 ml de gua. Dissolver 65 g de cloreto de cobalto(II) em aproximadamente 900 ml desta mistura e completar o volume para 1000 ml com a mesma. Transferir, com auxilio de pipeta, 5 ml desta soluo para frasco de iodo de 250 ml, juntar 5 ml de perxido de hidrognio SR e 15 ml de hidrxido de sdio 5 M. Ferver durante 10 minutos, resfriar e adicionar 2 g de iodeto de potssio e 20 ml de cido sulfrico 0,26 M. Dissolver com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando 3 ml de amido SI como indicador. Corrigir o volume de titulante consumido por determinao em branco. Cada ml de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 23,79 mg de CoCl2.6H2O. Ajustar o volume da soluo adicionando quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e gua para obter soluo contendo exatamente 59,5 mg de CoCl2.6H2O por ml de soluo. Soluo base de sulfato cprico Preparar mistura de 25 ml de cido clordrico e 975 ml de gua. Dissolver 65 g de sulfato cprico (CuSO4.5H2O) em 900 ml desta mistura e completar o volume para 1000 ml com a mesma mistura. Transferir, com auxlio de pipeta, 10 ml desta soluo para frasco de iodo de 250 ml, juntar 40 ml de gua, 4 ml de cido actico glacial, 3 g de iodeto de potssio e 5 ml de cido clordrico. Titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando 3 ml de amido SI como indicador. Corrigir o volume de titulante consumido por determinao em branco. Cada ml de tiossulfato de sdio 0,1 M SV equivale a 24,97 mg de CuSO4.5H2O. Ajustar o volume da soluo adicionando quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e gua para obter soluo contendo exatamente 62,4 mg de CuSO4.5H2O por ml de soluo. Soluo base de cloreto frrico Preparar mistura de 25 ml de cido clordrico e 975 ml de gua. Dissolver cerca de 55 g de do reto frrico (FeCl3.6H2O) em aproximadamente 900 ml desta mistura e completar o volume para 1000 ml com a mesma mistura. Transferir, com auxilio de pipeta, 10 ml desta soluo para frasco de iodo de 250 ml, adicionar 1 5 ml de gua, 3 g de iodeto de potssio e 5 ml de cido clordrico. Deixar em repouso durante 15 minutos. Completar o volume da soluo para 100 ml com gua e titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,1 M SV, juntando 3 ml de amido SI como indicador. Corrigir o volume de titulante consumido por determinao em branco. Cada ml de tiossulfato de sdio 0.1 M SV equivale a 27.03 mg de FeCl3 .6H2O. Ajustar o volume da soluo adicionando quantidade suficiente de mistura de cido clordrico e gua para obter soluo contendo exatamente 45,0 mg de FeCI3 6H2O por ml de soluo. Composio das solues-padro de cor (SC) SC A B C D E F G H I J K Soluo base de cloreto cobaltoso 0,1 0,3 0,1 0,3 0,4 0,3 0,5 0,2 0,4 0,4 0,5 Partes de Soluo base de Soluo base de cloreto frrico sulfato cprico 0,4 0,1 0,9 0,3 0,6 0,1 0,6 0,4 1,2 0,3 1,2 0,0 1,2 0,2 1,5 0,0 2,2 0,1 3,5 0,1 4,5 0,0 gua 4,4 8,5 4,2 3,7 3,1 3,5 3,1 3,3 2,3 1,0 0,0

L M N O P Q R S T

0,8 0,1 0,0 0,1 0,2 0,2 0,3 0,2 0,5

3,8 2,0 4,9 4,8 0,4 0,3 0,4 0,1 0,5

0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 0,0 0,4

0,3 2,8 0,0 0,0 4,3 4,4 4,1 4,7 3,6

V.2.17.4 CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) uma tcnica de separao fundamentada na distribuio dos componentes de uma mistura entre duas fases imiscveis, a fase mvel, lquida, e a fase estacionria, contida em uma coluna. As separaes so alcanadas por partio, adsoro, troca inica, excluso por tamanho ou interaes estereoqumicas, dependendo do tipo de fase estacionria utilizada. A CLAE apresenta vantagens sobre a cromatografia a gs para as anlises de combinaes orgnicas. Amostras no volteis e termolbeis so, preferencialmente, analisadas por CLAE. A maioria das anlises farmacuticas est baseada no mtodo de separao por partio e devem ocorrer em tempo curto de anlise. Vrios fatores qumicos e fsico-qumicos influenciam na separao cromatogrfica, esses dependem da natureza qumica das substncias a serem separadas, da composio e fluxo da fase mvel, da composio e rea superficial da fase estacionria. APARELHAGEM O equipamento utilizado consiste em um reservatrio que contm a fase mvel, uma bomba com a finalidade de impelir a fase mvel pelo sistema cromatogrfico, um injetor para introduzir a amostra no sistema, uma coluna cromatogrfica, um detector e um dispositivo de captura de dados, como um software, integrador ou registrador. Alm de receber e enviar informaes para o detector, softwares so utilizados para controlar todo o sistema cromatogrfico, proporcionando maior operacionalidade e logstica de anlise. Os sistemas cromatogrficos modernos consistem de bombas de fluxo, controladas por software, que podem ser programadas para variar a relao de componentes da fase mvel, como requerido para cromatografia por gradiente de solvente, ou para misturar, de forma isocrtica, a fase mvel (fases mveis com relao fixa de solventes). Porm, a preciso da proporo de solventes pode ser mais bem controlada se a mistura for preparada previamente, em comparao com a mistura realizada no sistema cromatogrfico. Presses operacionais de at 5000 psi (cerca de 345 bar) e fluxo de at 10 ml por minuto podem ser utilizados. Aps dissolver a amostra na fase mvel ou em outro solvente adequado, a soluo injetada no sistema cromatogrfico, de forma manual, utilizando seringa apropriada, ou por meio de um injetor ou amostrador automtico. Este consiste em um carrossel ou bandeja, capaz de acomodar diversos frascos contendo as amostras. Alguns amostradores automticos podem ser programados para injetar diferentes volumes de amostra, diversas quantidades de injees, controlar o intervalo entre injees e outras variveis operacionais. Quando se trabalha a altas presses, uma vlvula de injeo essencial. Essa apresenta um sistema calibrado, com volume definido, denominado anel de injeo ou ala de amostragem, que ser preenchido com a soluo a ser analisada e, posteriormente, transferida coluna. Para a maioria das anlises farmacuticas, a separao alcanada por partio dos componentes, presentes na soluo a ser analisada, entre as fases mvel e estacionria. Sistemas que consistem de fases estacionrias polares e fases mveis apolares so definidos como cromatografia em fase normal, enquanto o oposto, fases mveis polares e fases estacionrias apolares, so denominados de cromatografia em fase reversa. A afinidade de uma substncia pela fase estacionria e, conseqentemente, seu tempo de reteno na coluna, controlado pela polaridade da fase mvel. As fases estacionrias utilizadas em cromatografia em fase reversa consistem, tipicamente, de uma molcula orgnica quimicamente ligada slica ou outros suportes, como grafita porosa. O dimetro das partculas de, normalmente, 3 m a 10 m. Quanto menores o dimetro da partcula e a pelcula que recobre o suporte, mais rpida e eficiente ser a transferncia das substncias entre as fases estacionrias e mveis. A polaridade da coluna depende dos grupos funcionais presentes, sendo os mais comuns os grupos apolares octil, octadecil, fenil, cianopropil e polar, nitrila. A proporo de grupos silanis no ligados ao grupo funcional influencia, significativamente, na eficincia da separao cromatogrfica e no formato do pico eludo. Comercialmente, esto disponveis colunas cromatogrficas com diferentes qualidades de fases estacionrias, inclusive aquelas com pequena proporo de grupos silanis livres, denominadas capeadas. Geralmente, colunas de slica em fase reversa apresentam vida til na faixa de pH de 2 a 8, entretanto, colunas contendo grafita porosa ou materiais polimricos, como o estireno-divinilbenzeno, so estveis em

uma faixa mais ampla de pH. De forma menos comum, podem ser utilizados lquidos, no ligados, como revestimento do suporte de slica e, portanto, devem ser imiscveis com a fase mvel. As colunas normalmente usadas para separaes analticas tm dimetros internos de 2 mm a 5 mm. Essas podem ser aquecidas, proporcionando separaes mais eficientes, mas s raramente so utilizadas temperaturas superiores a 60 C, devido ao potencial de degradao da fase estacionria ou volatilidade da fase mvel. A menos que especificado na monografia da substncia a ser analisada, as colunas so utilizadas em temperatura ambiente. Os detectores mais freqentemente utilizados em cromatografia lquida de alta eficincia so os espectrofotomtricos. Tais detectores consistem de uma clula de fluxo localizada no trmino da coluna cromatogrfica. A radiao ultravioleta passa, constantemente, pela clula de fluxo e recebida no detector. Com o sistema em funcionamento, as substncias so eludas da coluna, passam pela clula de fluxo e absorvem a radiao, resultando em alteraes mensurveis no nvel de energia. Esses detectores podem apresentar comprimento de onda fixo, varivel ou mltiplo. Detectores de comprimento de onda fixo operam em um nico valor, tipicamente 254 nm, emitido por uma lmpada de mercrio de baixa presso. Aqueles com comprimento de onda varivel contm uma fonte contnua de emisso, como uma lmpada de deutrio ou xennio de alta presso, e um monocromador ou um filtro de interferncia, de modo a gerar radiao monocromtica a um valor selecionado pelo operador, podendo, ainda, ser programados para alterar o comprimento de onda durante o desenvolvimento da anlise. Os detectores de comprimento de onda mltiplo medem, simultaneamente, a absorvncia em dois ou mais comprimentos de onda, sendo denominados de detectores de arranjo de diodos (DAD). Nestes, a radiao ultravioleta transmitida atravs da clula de fluxo, absorvida pela amostra e ento separada em seus componentes originais, que so detectados, individualmente, pelo detector de fotodiodos, registrando dados de absorvncia em toda a faixa do espectro do ultravioleta e visvel e, adicionalmente, os espectros de cada pico registrado no cromatograma. Detectores de ndice de refrao medem a diferena entre o ndice de refrao da fase mvel pura e da fase mvel contendo a substncia a ser analisada. So utilizados para detectar substncias que no absorvem no ultravioleta ou visvel, entretanto so menos sensveis que os detectores espectrofotomtricos. Os detectores de ndice de refrao apresentam a desvantagem de serem sensveis a pequenas mudanas da composio dos solventes da fase mvel, taxa de fluxo e temperatura. Detectores fluorimtricos so utilizados para detectar compostos naturalmente fluorescentes ou que podem ser convertidos em derivados fluorescentes, por transformao qumica ou adicionando reagentes fluorescentes a grupos funcionais especficos. Se a reao qumica requerida, pode-se realiz-la no momento da preparao da amostra ou, alternativamente, o reagente pode ser introduzido na fase mvel, com a reao ocorrendo antes da deteco. Detectores potenciomtricos, voltamtricos ou eletroqumicos so teis para quantificao de substncias que podem ser oxidadas ou reduzidas em um eletrodo. Esses detectores so altamente seletivos, sensveis e seguros, mas requerem fases mveis livres de oxignio e ons de metais redutveis. Uma bomba de fluxo contnuo deve ser utilizada, assegurando que o pH, a fora inica, e a temperatura da fase mvel permanecem constantes. Detectores eletroqumicos com eletrodo especficos de carbono podem ser utilizados, vantajosamente, para quantificar nanogramas de substncias facilmente oxidveis, como fenis e catecis. Atualmente, sistemas de coleta de dados modernos esto disponveis com as funes de receber e armazenar os sinais provenientes do detector e, posteriormente, proporcionar o manejo dessas informaes, gerando os cromatogramas com os dados de rea e altura do pico, identificao da amostra e mtodos. As informaes tambm podem ser coletadas em sistemas simples de gravao de dados, como registradores e integradores. PROCEDIMENTO O comprimento e o dimetro interno da coluna, o tipo e o tamanho das partculas da fase estacionria, a temperatura da operao, a composio e o fluxo da fase mvel e o tipo de deteco so descritos nas monografias individuais. A composio da fase mvel tem influncia significativa na performance cromatogrfica e na separao das substncias presentes na soluo a ser analisada. Para uma anlise quantitativa precisa, reagentes de elevado grau de pureza ou solventes orgnicos de pureza cromatogrfica devem ser utilizados. A gua, de qualidade adequada, deve apresentar baixas condutividade e absoro na faixa do ultravioleta. Na cromatografia de partio, o coeficiente de partio e, conseqentemente, a separao podem ser modificados pela adio de outro solvente fase mvel. Na cromatografia de troca-inica, a reteno das substncias afetada pelo pH, pela fora inica e por outras modificaes na composio da fase mvel. A tcnica de modificar continuamente a composio dos solventes da fase mvel durante a corrida cromatogrfica denominada de eluio gradiente, e aplicada para separar misturas complexas de substncias com diferentes fatores de capacidade. Entretanto, detectores que so sensveis a modificaes

na composio da fase mvel, como os refratmetros, tm sua utilizao limitada com a tcnica de eluio gradiente. O detector deve apresentar uma ampla faixa de atuao e as substncias a serem analisadas devem estar separadas de qualquer interferente. A faixa linear para uma substncia aquela na qual a resposta do detector diretamente proporcional sua concentrao. Os sistemas de CLAE so calibrados comparando-se as respostas dos picos obtidos com as respectivas concentraes de substncias qumicas de referncia. Resultados quantitativos confiveis so obtidos por meio de calibrao com padro externo, quando injetores ou amostradores automticos so preferencialmente utilizados. Esse mtodo envolve a comparao direta das respostas obtidas com os picos, separadamente analisados, das solues padro e amostra. Nos casos em que a padronizao externa utilizada, os clculos podem ser realizados segundo a equao:

Ca = Cp ( Ra / Rp)
em que, Ca = concentrao da soluo amostra; Cp = concentrao da soluo padro; Ra = resposta (rea ou altura) do pico da soluo amostra; Rp = resposta (rea ou altura) do pico da soluo padro. Se a injeo realizada por meio de seringa, melhores resultados quantitativos so obtidos por meio de calibrao com padro interno, adicionando-se uma quantidade conhecida de uma substncia qumica de referncia no interferente s solues padro e amostra. A relao das respostas obtidas com a substncia a ser analisada e com o padro interno utilizada para expressar o resultado quantitativo. Nos casos em que a padronizao interna utilizada, os clculos podem ser realizados segundo a equao:

Ca = Cp
em que,

(Ra / Rai ) (Rp / Rpi )

Rai = resposta (rea ou altura) do pico do padro interno na soluo amostra; Rpi = resposta (rea ou altura) do pico do padro interno na soluo padro. Devido a variaes normais entre equipamentos, solventes, reagentes e tcnicas, necessrio um teste de adequao do sistema para assegurar que o mtodo descrito seja aplicado de forma irrestrita. Os principais parmetros da adequao do sistema esto descritos em Interpretao dos cromatogramas e em Adequao do sistema. INTERPRETAO DOS CROMATOGRAMAS Na Figura 1 representada uma separao cromatogrfica tpica de duas substncias, sendo t1 e t2 os respectivos tempos de reteno. Os termos h, h/2 e Wh/2 correspondem altura, meia altura e largura a meia altura, respectivamente, e W representa a largura do pico na linha de base, pelo mtodo da triangulao. O sinal relativo ao tempo morto, t0, refere-se a uma substncia no retida na coluna cromatogrfica.

Figura 1 Separao cromatogrfica de duas substncias. Tempo de reteno (t), Fator de reteno (k) e Tempo de reteno relativo O tempo de reteno em cromatografia caracterstico da substncia analisada, entretanto no exclusivo. A comparao entre os tempos de reteno da amostra e da substncia qumica de referncia pode ser utilizada como indicativo da identidade da substncia, porm insuficiente para garantir a total caracterizao da amostra. O tempo de reteno absoluto pode variar entre equipamentos e conforme o uso de solventes e reagentes diferentes. Nesse sentido, as comparaes so feitas em termos de fator de reteno, k, calculado segundo a expresso:

k=
em que, t = tempo de reteno da substncia analisada; t0 = tempo morto.

t t0 t0

O fator de reteno, k, a razo entre a quantidade da substncia com afinidade pela fase estacionria e a quantidade com afinidade pela fase mvel. Quanto maior a afinidade da substncia pela fase estacionria maior a sua reteno. O conceito de tempo de reteno relativo tambm pode ser aplicado. Para tanto, deve-se definir uma substncia, de uma mistura, como a principal. Essa ter o tempo de reteno relativo de 1. Todas as outras substncias tero seus tempos de reteno relacionados com o tempo de reteno da substncia principal. Nmero de pratos tericos (N) O nmero de pratos tericos, N, indicativo da eficincia da coluna. Pode ser expresso em nmeros de pratos tericos por coluna ou nmero de pratos tericos por metro. Para picos com formato gaussiano, o nmero de pratos tericos por coluna calculado segundo as expresses:

t t N = 16 ou N = 5,54 W W h/2
2

O valor de N depende da substncia a ser analisada e das condies de anlise, como fase mvel, temperatura e fase estacionria. Resoluo (R) A resoluo, R, o parmetro cromatogrfico que indica o grau de separao entre duas substncias em uma mistura, e calculada segundo as expresses,

R=
em que,

(t 2 t1 ) 2(t 2 t1 ) ou R = 1,18 (W1,h / 2 + W2,h / 2 ) W1 + W 2

t2 e t1 = tempos de reteno das duas substncias da mistura; W1 e W2 = respectivas larguras dos picos na linha de base, pelo mtodo da triangulao; W1,h/2 e W2,h/2 = respectivas larguras dos picos meia altura. A rea ou a altura do pico so, usualmente, proporcionais quantidade da substncia eluda. A rea do pico, geralmente, mais utilizada, entretanto pode ser menos precisa se houver outros picos interferentes. Para medidas manuais, o grfico deve ser obtido em velocidade maior que a usual, minimizando os erros na obteno da largura e da largura meia altura dos picos. Para a anlise quantitativa, as substncias devem estar totalmente separadas de qualquer substncia interferente. Fator de cauda (T) O fator de cauda, T, que indica a simetria do pico, apresenta valor igual a 1 quando o pico perfeitamente simtrico. Esse valor aumenta medida que a assimetria do pico se torna mais pronunciada. Em alguns casos, valores inferiores a 1 podem ser observados. medida que a assimetria do pico aumenta, a integrao e a preciso se tornam menos confiveis. O fator de cauda calculado segundo a expresso:

T=
em que,

W0, 05

2f

W0,05 = largura do pico a 5% da altura; f = valor da poro anterior do pico, em relao largura a 5% da altura, de acordo com a Figura 2.

Figura 2 Cromatograma representando a assimetria do pico. ADEQUABILIDADE DO SISTEMA Os testes de adequabilidade do sistema so parte integrante dos mtodos de cromatografia lquida. So aplicados com a finalidade de verificar se a resoluo e a reprodutibilidade do sistema cromatogrfico esto adequadas para as anlises a serem realizadas. Os principais parmetros necessrios para a verificao da adequabilidade do sistema so descritos a seguir.

A resoluo, R, funo da eficincia da coluna, N, e especificada para garantir que substncias eludas proximamente, apresentem separao satisfatria sem interferncias mtuas. Replicatas de injees da soluo padro so trabalhadas, estatisticamente, para verificar se os requerimentos para a preciso da anlise foram atingidos. A menos que especificado na monografia individual, so utilizados os dados de cinco replicatas de injees para calcular o desvio padro relativo (DPR), se a especificao for igual ou inferior a 2,0%. Se o desvio padro relativo especificado for superior a 2,0%, os dados de seis replicatas devem ser utilizados. O fator de cauda, T, que indica a simetria do pico, igual a 1 para picos perfeitamente simtricos e maior que 1 para picos que apresentam assimetria. Em alguns casos, valores menores que 1 podem ser observados. Esses testes so realizados aps coletar os resultados de replicatas de injees da soluo padro ou outra soluo especificada na monografia individual. A especificao desses parmetros cromatogrficos, em uma monografia, no impede a modificao das condies de anlise. Ajustes nas condies de trabalho, de forma a atingir os parmetros de adequabilidade do sistema, podem ser necessrios. A menos que especificado na monografia individual, os parmetros de adequabilidade do sistema so determinados a partir dos dados obtidos com o pico da substncia de interesse. A preciso do sistema, demonstrada por meio de replicatas da soluo padro, deve ser alcanada antes das injees das solues amostras. A adequabilidade do sistema deve ser verificada durante toda a anlise cromatogrfica, por injeo de soluo padro em intervalos de tempo apropriados. Quando houver mudana significativa no equipamento ou em um reagente, os testes de adequabilidade do sistema devem ser realizados antes das injees da amostra. A anlise no ser vlida a menos que os requerimentos do teste de adequabilidade do sistema sejam alcanados. V.2.17.4 CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) uma tcnica de separao fundamentada na distribuio dos componentes de uma mistura entre duas fases imiscveis, a fase mvel, lquida, e a fase estacionria, contida em uma coluna. As separaes so alcanadas por partio, adsoro, troca inica, excluso por tamanho ou interaes estereoqumicas, dependendo do tipo de fase estacionria utilizada. A CLAE apresenta vantagens sobre a cromatografia a gs para as anlises de combinaes orgnicas. Amostras no volteis e termolbeis so, preferencialmente, analisadas por CLAE. A maioria das anlises farmacuticas est baseada no mtodo de separao por partio e devem ocorrer em tempo curto de anlise. Vrios fatores qumicos e fsico-qumicos influenciam na separao cromatogrfica, esses dependem da natureza qumica das substncias a serem separadas, da composio e fluxo da fase mvel, da composio e rea superficial da fase estacionria. APARELHAGEM O equipamento utilizado consiste em um reservatrio que contm a fase mvel, uma bomba com a finalidade de impelir a fase mvel pelo sistema cromatogrfico, um injetor para introduzir a amostra no sistema, uma coluna cromatogrfica, um detector e um dispositivo de captura de dados, como um software, integrador ou registrador. Alm de receber e enviar informaes para o detector, softwares so utilizados para controlar todo o sistema cromatogrfico, proporcionando maior operacionalidade e logstica de anlise. Os sistemas cromatogrficos modernos consistem de bombas de fluxo, controladas por software, que podem ser programadas para variar a relao de componentes da fase mvel, como requerido para cromatografia por gradiente de solvente, ou para misturar, de forma isocrtica, a fase mvel (fases mveis com relao fixa de solventes). Porm, a preciso da proporo de solventes pode ser mais bem controlada se a mistura for preparada previamente, em comparao com a mistura realizada no sistema cromatogrfico. Presses operacionais de at 5000 psi (cerca de 345 bar) e fluxo de at 10 ml por minuto podem ser utilizados. Aps dissolver a amostra na fase mvel ou em outro solvente adequado, a soluo injetada no sistema cromatogrfico, de forma manual, utilizando seringa apropriada, ou por meio de um injetor ou amostrador automtico. Este consiste em um carrossel ou bandeja, capaz de acomodar diversos frascos contendo as amostras. Alguns amostradores automticos podem ser programados para injetar diferentes volumes de amostra, diversos quantidades de injees, controlar o intervalo entre injees e outras variveis operacionais. Quando se trabalha a altas presses, uma vlvula de injeo essencial. Essa apresenta um sistema calibrado, com volume definido, denominado anel de injeo ou ala de amostragem, que ser preenchido com a soluo a ser analisada e, posteriormente, transferida coluna. Para a maioria das anlises farmacuticas, a separao alcanada por partio dos componentes, presentes na soluo a ser analisada, entre as fases mvel e estacionria. Sistemas que consistem de fases estacionrias polares e fases mveis apolares so definidos como cromatografia em fase normal, enquanto o oposto, fases mveis polares e fases estacionrias apolares, so denominados de

cromatografia em fase reversa. A afinidade de uma substncia pela fase estacionria e, conseqentemente, seu tempo de reteno na coluna, controlado pela polaridade da fase mvel. As fases estacionrias utilizadas em cromatografia em fase reversa consistem, tipicamente, de uma molcula orgnica quimicamente ligada slica ou outros suportes, como grafita porosa. O dimetro das partculas de, normalmente, 3 m a 10 m. Quanto menores o dimetro da partcula e a pelcula que recobre o suporte, mais rpida e eficiente ser a transferncia das substncias entre as fases estacionrias e mveis. A polaridade da coluna depende dos grupos funcionais presentes, sendo os mais comuns os grupos apolares octil, octadecil, fenil, cianopropil e polar, nitrila. A proporo de grupos silanis no ligados ao grupo funcional influencia, significativamente, na eficincia da separao cromatogrfica e no formato do pico eludo. Comercialmente, esto disponveis colunas cromatogrficas com diferentes qualidades de fases estacionrias, inclusive aquelas com pequena proporo de grupos silanis livres, denominadas capeadas. Geralmente, colunas de slica em fase reversa apresentam vida til na faixa de pH de 2 a 8, entretanto, colunas contendo grafita porosa ou materiais polimricos, como o estireno-divinilbenzeno, so estveis em uma faixa mais ampla de pH. De forma menos comum, podem ser utilizados lquidos, no ligados, como revestimento do suporte de slica e, portanto, devem ser imiscveis com a fase mvel. As colunas normalmente usadas para separaes analticas tm dimetros internos de 2 mm a 5 mm. Essas podem ser aquecidas, proporcionando separaes mais eficientes, mas s raramente so utilizadas temperaturas superiores a 60 C, devido ao potencial de degradao da fase estacionria ou volatilidade da fase mvel. A menos que especificado na monografia da substncia a ser analisada, as colunas so utilizadas em temperatura ambiente. Os detectores mais freqentemente utilizados em cromatografia lquida de alta eficincia so os espectrofotomtricos. Tais detectores consistem de uma clula de fluxo localizada no trmino da coluna cromatogrfica. A radiao ultravioleta passa, constantemente, pela clula de fluxo e recebida no detector. Com o sistema em funcionamento, as substncias so eludas da coluna, passam pela clula de fluxo e absorvem a radiao, resultando em alteraes mensurveis no nvel de energia. Esses detectores podem apresentar comprimento de onda fixo, varivel ou mltiplo. Detectores de comprimento de onda fixo operam em um nico valor, tipicamente 254 nm, emitido por uma lmpada de mercrio de baixa presso. Aqueles com comprimento de onda varivel contm uma fonte contnua de emisso, como uma lmpada de deutrio ou xennio de alta presso, e um monocromador ou um filtro de interferncia, de modo a gerar radiao monocromtica a um valor selecionado pelo operador, podendo, ainda, ser programados para alterar o comprimento de onda durante o desenvolvimento da anlise. Os detectores de comprimento de onda mltiplo medem, simultaneamente, a absorvncia em dois ou mais comprimentos de onda, sendo denominados de detectores de arranjo de diodos (DAD). Nestes, a radiao ultravioleta transmitida atravs da clula de fluxo, absorvida pela amostra e ento separada em seus componentes originais, que so detectados, individualmente, pelo detector de fotodiodos, registrando dados de absorvncia em toda a faixa do espectro do ultravioleta e visvel e, adicionalmente, os espectros de cada pico registrado no cromatograma. Detectores de ndice de refrao medem a diferena entre o ndice de refrao da fase mvel pura e da fase mvel contendo a substncia a ser analisada. So utilizados para detectar substncias que no absorvem no ultravioleta ou visvel, entretanto so menos sensveis que os detectores espectrofotomtricos. Os detectores de ndice de refrao apresentam a desvantagem de serem sensveis a pequenas mudanas da composio dos solventes da fase mvel, taxa de fluxo e temperatura. Detectores fluorimtricos so utilizados para detectar compostos naturalmente fluorescentes ou que podem ser convertidos em derivados fluorescentes, por transformao qumica ou adicionando reagentes fluorescentes a grupos funcionais especficos. Se a reao qumica requerida, pode-se realiz-la no momento da preparao da amostra ou, alternativamente, o reagente pode ser introduzido na fase mvel, com a reao ocorrendo antes da deteco. Detectores potenciomtricos, voltamtricos ou eletroqumicos so teis para quantificao de substncias que podem ser oxidadas ou reduzidas em um eletrodo. Esses detectores so altamente seletivos, sensveis e seguros, mas requerem fases mveis livres de oxignio e ons de metais redutveis. Uma bomba de fluxo contnuo deve ser utilizada, assegurando que o pH, a fora inica, e a temperatura da fase mvel permanecem constantes. Detectores eletroqumicos com eletrodo especficos de carbono podem ser utilizados, vantajosamente, para quantificar nanogramas de substncias facilmente oxidveis, como fenis e catecis. Atualmente, sistemas de coleta de dados modernos esto disponveis com as funes de receber e armazenar os sinais provenientes do detector e, posteriormente, proporcionar o manejo dessas informaes, gerando os cromatogramas com os dados de rea e altura do pico, identificao da amostra e mtodos. As informaes tambm podem ser coletadas em sistemas simples de gravao de dados, como registradores e integradores. PROCEDIMENTO

O comprimento e o dimetro interno da coluna, o tipo e o tamanho das partculas da fase estacionria, a temperatura da operao, a composio e o fluxo da fase mvel e o tipo de deteco so descritos nas monografias individuais. A composio da fase mvel tem influncia significativa na performance cromatogrfica e na separao das substncias presentes na soluo a ser analisada. Para uma anlise quantitativa precisa, reagentes de elevado grau de pureza ou solventes orgnicos de pureza cromatogrfica devem ser utilizados. A gua, de qualidade adequada, deve apresentar baixas condutividade e absoro na faixa do ultravioleta. Na cromatografia de partio, o coeficiente de partio e, conseqentemente, a separao podem ser modificados pela adio de outro solvente fase mvel. Na cromatografia de troca-inica, a reteno das substncias afetada pelo pH, pela fora inica e por outras modificaes na composio da fase mvel. A tcnica de modificar continuamente a composio dos solventes da fase mvel durante a corrida cromatogrfica denominada de eluio gradiente, e aplicada para separar misturas complexas de substncias com diferentes fatores de capacidade. Entretanto, detectores que so sensveis a modificaes na composio da fase mvel, como os refratmetros, tm sua utilizao limitada com a tcnica de eluio gradiente. O detector deve apresentar uma ampla faixa de atuao e as substncias a serem analisadas devem estar separadas de qualquer interferente. A faixa linear para uma substncia aquela na qual a resposta do detector diretamente proporcional sua concentrao. Os sistemas de CLAE so calibrados comparando-se as respostas dos picos obtidos com as respectivas concentraes de substncias qumicas de referncia. Resultados quantitativos confiveis so obtidos por meio de calibrao com padro externo, quando injetores ou amostradores automticos so preferencialmente utilizados. Esse mtodo envolve a comparao direta das respostas obtidas com os picos, separadamente analisados, das solues padro e amostra. Nos casos em que a padronizao externa utilizada, os clculos podem ser realizados segundo a equao:

Ca = Cp ( Ra / Rp)
em que, Ca = concentrao da soluo amostra; Cp = concentrao da soluo padro; Ra = resposta (rea ou altura) do pico da soluo amostra; Rp = resposta (rea ou altura) do pico da soluo padro. Se a injeo realizada por meio de seringa, melhores resultados quantitativos so obtidos por meio de calibrao com padro interno, adicionando-se uma quantidade conhecida de uma substncia qumica de referncia no interferente s solues padro e amostra. A relao das respostas obtidas com a substncia a ser analisada e com o padro interno utilizada para expressar o resultado quantitativo. Nos casos em que a padronizao interna utilizada, os clculos podem ser realizados segundo a equao:

Ca = Cp
em que,

(Ra / Rai ) (Rp / Rpi )

Rai = resposta (rea ou altura) do pico do padro interno na soluo amostra; Rpi = resposta (rea ou altura) do pico do padro interno na soluo padro. Devido a variaes normais entre equipamentos, solventes, reagentes e tcnicas, necessrio um teste de adequao do sistema para assegurar que o mtodo descrito seja aplicado de forma irrestrita. Os principais parmetros da adequao do sistema esto descritos em Interpretao dos cromatogramas e em Adequao do sistema. INTERPRETAO DOS CROMATOGRAMAS Na Figura 1 representada uma separao cromatogrfica tpica de duas substncias, sendo t1 e t2 os respectivos tempos de reteno. Os termos h, h/2 e Wh/2 correspondem altura, meia altura e largura a meia altura, respectivamente, e W representa a largura do pico na linha de base, pelo mtodo da

triangulao. O sinal relativo ao tempo morto, t0, refere-se a uma substncia no retida na coluna cromatogrfica.

Figura 1 Separao cromatogrfica de duas substncias. Tempo de reteno (t), Fator de reteno (k) e Tempo de reteno relativo O tempo de reteno em cromatografia caracterstico da substncia analisada, entretanto no exclusivo. A comparao entre os tempos de reteno da amostra e da substncia qumica de referncia pode ser utilizada como indicativo da identidade da substncia, porm insuficiente para garantir a total caracterizao da amostra. O tempo de reteno absoluto pode variar entre equipamentos e conforme o uso de solventes e reagentes diferentes. Nesse sentido, as comparaes so feitas em termos de fator de reteno, k, calculado segundo a expresso:

k=
em que, t = tempo de reteno da substncia analisada; t0 = tempo morto.

t t0 t0

O fator de reteno, k, a razo entre a quantidade da substncia com afinidade pela fase estacionria e a quantidade com afinidade pela fase mvel. Quanto maior a afinidade da substncia pela fase estacionria maior a sua reteno. O conceito de tempo de reteno relativo tambm pode ser aplicado. Para tanto, deve-se definir uma substncia, de uma mistura, como a principal. Essa ter o tempo de reteno relativo de 1. Todas as outras substncias tero seus tempos de reteno relacionados com o tempo de reteno da substncia principal. Nmero de pratos tericos (N) O nmero de pratos tericos, N, indicativo da eficincia da coluna. Pode ser expresso em nmeros de pratos tericos por coluna ou nmero de pratos tericos por metro. Para picos com formato gaussiano, o nmero de pratos tericos por coluna calculado segundo as expresses:

t t N = 16 ou N = 5,54 W W h/2
2

O valor de N depende da substncia a ser analisada e das condies de anlise, como fase mvel, temperatura e fase estacionria. Resoluo (R)

A resoluo, R, o parmetro cromatogrfico que indica o grau de separao entre duas substncias em uma mistura, e calculada segundo as expresses,

R=
em que,

(t 2 t1 ) 2(t 2 t1 ) ou R = 1,18 (W1,h / 2 + W2,h / 2 ) W1 + W 2

t2 e t1 = tempos de reteno das duas substncias da mistura; W1 e W2 = respectivas larguras dos picos na linha de base, pelo mtodo da triangulao; W1,h/2 e W2,h/2 = respectivas larguras dos picos meia altura. A rea ou a altura do pico so, usualmente, proporcionais quantidade da substncia eluda. A rea do pico, geralmente, mais utilizada, entretanto pode ser menos precisa se houver outros picos interferentes. Para medidas manuais, o grfico deve ser obtido em velocidade maior que a usual, minimizando os erros na obteno da largura e da largura meia altura dos picos. Para a anlise quantitativa, as substncias devem estar totalmente separadas de qualquer substncia interferente. Fator de cauda (T) O fator de cauda, T, que indica a simetria do pico, apresenta valor igual a 1 quando o pico perfeitamente simtrico. Esse valor aumenta medida que a assimetria do pico se torna mais pronunciada. Em alguns casos, valores inferiores a 1 podem ser observados. medida que a assimetria do pico aumenta, a integrao e a preciso se tornam menos confiveis. O fator de cauda calculado segundo a expresso:

T=
em que,

W0, 05

2f

W0,05 = largura do pico a 5% da altura; f = valor da poro anterior do pico, em relao largura a 5% da altura, de acordo com a Figura 2.

Figura 2 Cromatograma representando a assimetria do pico. ADEQUABILIDADE DO SISTEMA Os testes de adequabilidade do sistema so parte integrante dos mtodos de cromatografia lquida. So aplicados com a finalidade de verificar se a resoluo e a reprodutibilidade do sistema cromatogrfico esto

adequadas para as anlises a serem realizadas. Os principais parmetros necessrios para a verificao da adequabilidade do sistema so descritos a seguir. A resoluo, R, funo da eficincia da coluna, N, e especificada para garantir que substncias eludas proximamente, apresentem separao satisfatria sem interferncias mtuas. Replicatas de injees da soluo padro so trabalhadas, estatisticamente, para verificar se os requerimentos para a preciso da anlise foram atingidos. A menos que especificado na monografia individual, so utilizados os dados de cinco replicatas de injees para calcular o desvio padro relativo (DPR), se a especificao for igual ou inferior a 2,0%. Se o desvio padro relativo especificado for superior a 2,0%, os dados de seis replicatas devem ser utilizados. O fator de cauda, T, que indica a simetria do pico, igual a 1 para picos perfeitamente simtricos e maior que 1 para picos que apresentam assimetria. Em alguns casos, valores menores que 1 podem ser observados. Esses testes so realizados aps coletar os resultados de replicatas de injees da soluo padro ou outra soluo especificada na monografia individual. A especificao desses parmetros cromatogrficos, em uma monografia, no impede a modificao das condies de anlise. Ajustes nas condies de trabalho, de forma a atingir os parmetros de adequabilidade do sistema, podem ser necessrios. A menos que especificado na monografia individual, os parmetros de adequabilidade do sistema so determinados a partir dos dados obtidos com o pico da substncia de interesse. A preciso do sistema, demonstrada por meio de replicatas da soluo padro, deve ser alcanada antes das injees das solues amostras. A adequabilidade do sistema deve ser verificada durante toda a anlise cromatogrfica, por injeo de soluo padro em intervalos de tempo apropriados. Quando houver mudana significativa no equipamento ou em um reagente, os testes de adequabilidade do sistema devem ser realizados antes das injees da amostra. A anlise no ser vlida a menos que os requerimentos do teste de adequabilidade do sistema sejam alcanados. V.2.25 LIMPIDEZ DE SOLUES Utilizar tubos de vidro neutro, incolor e transparente, com fundo chato e de 15 a 25 mm de dimetro interno, a menos que indicado de maneira diferente na monografia. Introduzir, em tubos separados, a soluo em exame e a suspenso de referncia indicada na monografia, preparando-a por ocasio do uso, conforme especificado na Tabela 1. Encher os tubos at a profundidade de 40 mm. Cinco minutos aps o preparo da suspenso de referncia, comparar o contedo dos tubos, observando-os verticalmente, sob luz visvel difusa e contra fundo preto. A difuso da luz deve ser tal que a suspenso de referncia I seja facilmente distinguida da gua e da suspenso de referncia II. Uma soluo considerada lmpida quando, ao ser examinada nas condies anteriormente descritas, sua transparncia corresponde da gua ou do solvente utilizado, ou quando sua opalescncia no mais pronunciada que a da suspenso de referncia I. Padro de opalescncia Dissolver 1 g de sulfato de hidrazina em gua e completar o volume para 100 ml com o mesmo solvente. Deixar em repouso por 4 a 6 horas. Adicionar 25 ml desta soluo a uma soluo contendo 2,5 g de metenamina em 25 ml de gua. Misturar bem e deixar em repouso por 24 horas. Esta suspenso estvel por dois meses se conservada em recipiente de vidro, com superfcie livre de defeitos. A suspenso no deve aderir s paredes do recipiente e deve ser vigorosamente agitada, no recipiente original, antes do uso. Para o preparo do padro de opalescncia, diluir 15 ml da suspenso para 1000 ml com gua. O padro de opalescncia deve ser preparado no momento do uso e pode ser conservado por, no mximo, 24 horas. Tabela 1 Suspenses de referncia Suspenso de referncia Padro de opalescncia (ml) gua (ml) I 5 95 II 10 90 III 30 70 IV 50 50

V.3.2 ENSAIOS-LIMITE PARA IMPUREZAS INORGNICAS Ensaios-limite so ensaios quantitativos ou semiquantitativos realizados para verificar se o contedo de impurezas inorgnicas presentes em insumos farmacuticos no excede o limite especificado na monografia da substncia em exame, expresso em porcentagem (p/p) ou em microgramas por grama (ppm) da substncia. Os ensaios so realizados em tubos calibrados de vidro transparente, de dimetro interno uniforme e

fundo plano, salvo indicao contrria na monografia. Os tubos devem apresentar marcas externas correspondentes aos volumes de 25 ml e 50 ml. Tubos de Nessler usualmente so adequados. A coluna de lquido observada segundo o eixo vertical do tubo, de cima para baixo, sob luz difusa, sobre fundo branco ou, se necessrio, sobre fundo negro, salvo indicao contrria. V.3.2.1 ENSAIO-LIMITE PARA CLORETOS Preparao amostra Transferir para tubo adequado a quantidade de amostra especificada na monografia e adicionar 30 ml a 40 ml de gua. Se a substncia j estiver em soluo, diluir para 30 ml a 40 ml com gua. Neutralizar, se necessrio, com cido ntrico SR. Se aps a neutralizao a soluo no estiver perfeitamente lmpida, filtrar em papel de filtro isento de cloreto. Caso um volume especfico de soluo da amostra seja especificado na monografia individual, e o limite de cloreto corresponda a volume igual ou inferior a 0,2 ml de cido clordrico padro, o ensaio deve ser realizado sem diluio adicional da soluo da amostra. Preparao padro Transferir o volume de cido clordrico padro (HCl 0,01 M) indicado na monografia ou na Tabela 1 (ou calculado conforme o limite especificado) para tubo adequado e proceder conforme descrito para a preparao amostra. Procedimento Desenvolver padro e amostra paralelamente. Adicionar s preparaes padro e amostra 1 ml de cido ntrico SR e 1 ml de nitrato de prata SR. Diluir para 50 ml com gua e homogeneizar. Deixar em repouso ao abrigo da luz durante 5 minutos. Qualquer turbidez desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. Tabela 1 Clculo de limites para cloretos Equivalentes em parte de Cl por 1 milho de partes da substncia (p/p) Padro: 1 ml de cido clordrico 0,01 M (= 0,0003546 g de Cl) Volume final 50 ml Tubo Nessler de 50 ml e dimetro externo de 20 mm g de amostra 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 Cl p/milho 3546 (= 0,355%) 2364 (= 0,236%) 1773 (= 0,180%) 1418 (= 0,142%) 1182 (= 0,120%) 1013 (= 0,100%) 886 788 709 645 591 545 506 473 443 417 394 373 354 285 253 221 197 177 161 148 136 g de amostra 3,8 4,0 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 8,8 9,0 Cl p/milho 93 88 84 80 77 74 71 68 65 63 61 59 57 55 53 52 50 49 48 46 45 44 43 42 41 40 39

2,8 3,0 3,2 3,4 3,6

126 118 111 104 98

9,2 9,4 9,6 9,8 10,0

38 37 37 36 35

Exemplo: sendo o padro fixo (0,0003546 g de Cl), se o limite de cloretos para a substncia sob exame for 354 ppm, submeter ao ensaio 1 g de amostra; se o limite for 71 ppm, submeter ao ensaio 5 g de amostra. V.3.2.2 ENSAIO-LIMITE PARA SULFATOS Preparao amostra Transferir para tubo adequado a quantidade de amostra especificada na monografia e adicionar 30 ml a 40 ml de gua. Se a substncia j estiver em soluo, diluir para 30 ml a 40 ml com gua. Neutralizar, se necessrio, com cido clordrico SR. Eventualmente, pode-se utilizar cido actico glacial tanto para neutralizao quanto para acidificao da preparao amostra. Se aps a neutralizao a soluo no estiver perfeitamente lmpida, filtrar em papel de filtro isento de sulfato. Caso um volume especfico de soluo da amostra seja especificado na monografia individual, e o limite de sulfato corresponda a volume igual ou inferior a 0,2 ml de cido sulfrico padro, o ensaio deve ser realizado sem diluio adicional da soluo da amostra. Preparao padro Transferir o volume de cido sulfrico padro (H2SO4 0,005 M) indicado na monografia ou na Tabela 1 (ou calculado conforme o limite especificado) para tubo adequado e proceder conforme descrito para a preparao amostra. Procedimento Desenvolver padro e amostra paralelamente. Adicionar s preparaes padro e amostra 1 ml de cido clordrico 3 M e 3 ml de cloreto de brio SR. Diluir para 50 ml com gua e homogeneizar. Deixar em repouso durante 10 minutos. Qualquer turbidez desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. Tabela 2 Clculo de limites para sulfatos Equivalentes em parte de SO4 por milho de partes da substncia (p/p) Padro: 2,5 ml de cido sulfrico 0,005 M (0,0012008 g de SO4) Volume final 50ml Tubo Nessler de 50 ml e dimetro externo de 20 mm g de substncia 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 SO4 p/milho 2401 (= 0,240%) 2183 (= 0,220%) 2001 (= 0,200%) 1847 (= 0,185%) 1715 (= 0,171%) 1601 (= 0,160%) 1501 1412 1334 1264 1200 1001 858 750 667 600 546 500 462 429 400 g de substncia 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 SO4 p/milho 261 250 240 231 222 214 207 200 194 187 182 177 171 166 162 158 154 151 146 143 139

3,2 3,4 3,6 3,8 4,0 4,2 4,4

375 353 333 316 300 286 273

8,8 9,0 9,2 9,4 9,6 9,8 10,0

136 133 130 127 125 122 120

Exemplo: sendo o padro fixo (0,0012008 g de SO4), se o limite de sulfatos para a substncia sob exame for 500 ppm, submeter ao ensaio 2,4 g de amostra; se o limite for 151 ppm, submeter ao ensaio 8 g de amostra. V.3.2.3 ENSAIO-LIMITE PARA METAIS PESADOS O ensaio-limite para metais pesados destina-se a demonstrar que o contedo de impurezas metlicas que so coloridas pelo on sulfeto no excede o limite especificado na monografia da substncia em exame, expresso em porcentagem (p/p) ou em microgramas de chumbo por grama (ppm) da substncia, conforme determinado pela comparao visual com uma preparao padro chumbo (Pb). Substncias tipicamente detectadas por este ensaio incluem chumbo, mercrio, bismuto, arsnico, antimnio, estanho, cdmio, prata, cobre e molibdnio. Realizar o ensaio utilizando o Mtodo I, salvo indicao contrria na monografia individual. O Mtodo I utilizado para substncias que produzem preparaes lmpidas e incolores sob as condies especificadas no ensaio. O Mtodo II empregado para substncias que no produzem preparaes lmpidas e incolores sob as condies especificadas para o Mtodo I, ou para substncias que, em virtude de sua natureza complexa, interferem com a precipitao de metais pelo on sulfeto, ou para leos fixos e volteis. O Mtodo III, que inclui um processo de digesto mida, utilizado somente nos casos em que os Mtodos I e II no podem ser utilizados. REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de nitrato de chumbo Dissolver, exatamente, 159,8 mg de nitrato de chumbo em 100 ml de gua adicionada de 1 ml de cido ntrico. Diluir com gua para 1000 ml e homogeneizar. Preparar e estocar esta soluo em recipientes de vidro isentos de sais solveis de chumbo. Soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) No dia do uso, diluir 10 ml da soluo estoque de nitrato de chumbo para 100 ml com gua. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 10 g de chumbo (10 ppm Pb). Tampo acetato pH 3,5 Dissolver 25,0 g de acetato de amnio em 25 ml de gua e adicionar 38 ml de cido clordrico 6 M. Se necessrio, ajustar o pH em 3,5 com hidrxido de amnio 6 M ou cido clordrico 6 M. Diluir para 100 ml com gua e homogeneizar. MTODO I Preparao amostra Transferir para tubo adequado soluo da amostra preparada conforme especificado na monografia e diluir para 25 ml com gua, ou dissolver e diluir com gua para 25 ml a quantidade de amostra, em gramas, especificada na monografia ou calculada segundo a equao: 2 / (1000L) em que L = limite de metais pesados na amostra em porcentagem (p/p). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar.

Preparao padro Transferir para tubo adequado 2 ml de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 ml com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao controle Transferir para um terceiro tubo volume soluo da amostra preparada conforme descrito na monografia ou em preparao amostra e adicionar 2 ml de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Procedimento A cada uma das preparaes adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 ml de tioacetamida SR. Diluir com gua para 50 ml, homogeneizar e deixar em repouso por 2 minutos. Observar as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. O teste somente vlido se a intensidade da colorao desenvolvida na preparao controle igual ou superior quela observada na preparao padro. Do contrrio, aplicar o Mtodo II ao invs do Mtodo I para a substncia sob exame. MTODO II Preparao amostra Utilizar a quantidade de amostra, em gramas, especificada na monografia ou calculada segundo a equao: 2 / (1000L) em que L = limite de metais pesados na amostra em porcentagem (p/p). Transferir a amostra para cadinho adequado, adicionar cido sulfrico suficiente para umedecer a substncia e incinerar, cuidadosamente, sob temperatura baixa. Adicionar massa carbonizada 2 ml de cido ntrico e 5 gotas de cido sulfrico. Aquecer, com cuidado, at que no mais se desprendam vapores brancos. Incinerar em mufla a 500-600 C at completa combusto do carbono. Resfriar em temperatura ambiente, adicionar 4 ml de cido clordrico 6 M, cobrir, digerir em banho-maria por 15 minutos, descobrir e evaporar em banho-maria, lentamente, at secura. Umedecer o resduo com 1 gota de cido clordrico, adicionar 10 ml de gua quente e digerir em banho-maria por 2 minutos. Alcalinizar ao papel tornassol com hidrxido de amnio 6 M adicionado gota a gota. Diluir com gua para 25 ml e ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M, utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Filtrar se necessrio, lavar o cadinho e o filtro com 10 ml de gua e combinar o filtrado e as guas de lavagem em tubo adequado para comparao de cor. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao padro Proceder conforme descrito em preparao padro no Mtodo I. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 ml de tioacetamida SR. Diluir com gua para 50 ml, homogeneizar e deixar em repouso por 2 minutos. Observar as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. MTODO III

Preparao amostra Transferir a quantidade ou volume de amostra indicada na monografia para um balo de Kjeldahl de 100 ml previamente limpo e seco (um balo de 300 ml pode ser utilizado nos casos em que a reao resulta em formao excessiva de espuma). Manter o balo inclinado em um ngulo de 45. Se a substncia sob exame for slida, adicionar mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico em quantidade suficiente para umedecer completamente a amostra; se a substncia sob exame for lquida, adicionar alguns mililitros de mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico. Aquecer, brandamente, para iniciar a reao. Quando a reao abrandar, adicionar pores da mistura cida, aquecendo a cada adio. Repetir a operao at que se tenha acrescentado um volume total de 18 ml da mistura cida. Aumentar a temperatura de aquecimento e ferver, brandamente, a mistura at o escurecimento da soluo. Resfriar, adicionar 2 ml de cido ntrico e aquecer novamente at o escurecimento da soluo. Continuar o aquecimento at que nenhum escurecimento adicional seja observado, e ento aquecer vigorosamente at que se produzam vapores brancos densos. Resfriar e adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua. Aquecer, brandamente, ebulio at que vapores brancos densos sejam novamente produzidos e manter o aquecimento para reduzir o volume a 2-3 ml. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua e examinar a cor da soluo. Se a cor amarela, adicionar, cuidadosamente, 1 ml de perxido de hidrognio concentrado e aquecer ebulio at que se produzam vapores brancos densos e o volume seja reduzido a 2-3 ml. Se a soluo permanece amarela, repetir a adio de 5 ml de gua e 1 ml de perxido de hidrognio concentrado at que a soluo se torne incolor. Resfriar e diluir, cuidadosamente, com alguns mililitros de gua. Transferir para tubo adequado para comparao de cor, lavar o balo com gua, transferindo as guas de lavagem para o tubo e diluir para 25 ml com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao padro Transferir 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico para balo de Kjeldahl de 100 ml previamente limpo e seco. Acrescentar volume adicional de cido ntrico equivalente quele que foi adicionado preparao amostra. Aquecer a soluo para a produo de vapores brancos densos. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua e, caso a preparao amostra tenha sido tratada com perxido de hidrognio, adicionar volume de perxido de hidrognio concentrado equivalente quele que foi adicionado substncia sob exame. Aquecer, brandamente, ebulio at que vapores brancos densos sejam novamente produzidos. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua, homogeneizar e aquecer, brandamente, ebulio para produzir vapores brancos densos e reduzir o volume a 2-3 ml. Resfriar, diluir, cuidadosamente, com alguns mililitros de gua, adicionar 2 ml de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e homogeneizar. Transferir para tubo adequado para comparao de cor, lavar o balo com gua, transferindo as guas de lavagem para o tubo e diluir para 25 ml com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 ml de tioacetamida SR. Diluir com gua para 50 ml, homogeneizar e deixar em repouso por 2 minutos. Observar as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. V.3.2.4 ENSAIO-LIMITE PARA FERRO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de sulfato frrico amoniacal Dissolver, exatamente, 0,8634 g de sulfato frrico amoniacal dodecaidratado em gua contendo 25 ml de cido sulfrico M e diluir com gua para 500 ml. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 200 g de ferro (200 ppm Fe). Soluo padro de ferro (100, 10 e 2 ppm Fe) Imediatamente antes do uso, diluir com gua, quantitativamente, volume adequado da soluo estoque

de sulfato frrico amoniacal. cido ctrico Quanto utilizado no ensaio-limite para ferro, cumpre com o seguinte requerimento: dissolver 0,5 g em 10 ml de gua, adicionar 0,1 ml de cido tiogliclico, homogeneizar, alcalinizar com amnia 10 M e diluir com gua para 25 ml; no se desenvolve colorao rosa. Amnia Quando utilizada no ensaio-limite para ferro, cumpre com o seguinte requerimento: evaporar 5 ml secura em banho-maria, adicionar 10 ml de gua, 2 ml de cido ctrico a 20% (p/V) e 0,1 ml de cido tiogliclico, homogeneizar, alcalinizar com amnia e diluir para 25 ml com gua; no se desenvolver colorao rosa. MTODO I Preparao amostra Dissolver em gua a quantidade de amostra especificada na monografia, ou utilizar a soluo amostra especificada na monografia, transferir para tubo adequado, diluir para 40 ml com gua e adicionar 2 ml de cido ctrico a 20% (p/V). Preparao padro Transferir para tubo adequado 1 ml de soluo padro de ferro (10 ppm Fe) (ou 1 ml de soluo padro de ferro (100 ppm Fe) caso a quantidade de amostra submetida ao ensaio seja calculada segundo a Tabela 3), diluir para 40 ml com gua e adicionar 2 ml de cido ctrico a 20% (p/V). Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 2 gotas de cido tiogliclico. Homogeneizar e alcalinizar com amnia. Diluir para 50 ml com gua, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. Qualquer colorao rsea desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. MTODO II Preparao amostra Transferir para tubo adequado 10 ml de soluo da amostra especificada na monografia, adicionar 2 ml de cido clordrico 2 M e 0,5 ml de gua de bromo. Aps 5 minutos, retirar o excesso de bromo utilizando corrente de ar. Preparao padro Transferir para tubo adequado 10 ml de soluo padro de ferro (2 ppm Fe), adicionar 2 ml de cido clordrico 2 M e 0,5 ml de gua de bromo. Aps 5 minutos, retirar o excesso de bromo utilizando corrente de ar. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 3 ml de tiocianato de potssio M, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. MTODO III Preparao amostra Transferir para tubo adequado soluo da amostra especificada na monografia e diluir, se necessrio, para 45 ml com gua, ou dissolver e diluir em gua para 45 ml a quantidade, em gramas, de amostra

calculada segundo a equao: 1 / (1000L) em que L = limite de ferro na amostra em porcentagem (p/p). Adicionar 2 ml de cido clordrico e homogeneizar. Preparao padro Transferir para tubo adequado 1 ml de soluo padro de ferro (10 ppm Fe), diluir para 45 ml com gua, adicionar 2 ml de cido clordrico e homogeneizar. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 50 mg de cristais de peroxidissulfato de amnio, 3 ml de tiocianato de amnio a 30% (p/V), diluir para 50 ml com gua e homogeneizar. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. Tabela 3 Clculo de limites para ferro Equivalentes em parte de Fe por 1 milho de partes da substncia (p/p) Padro 1 ml da soluo de sulfato de amnio e ferro (III) dodecaidratado (= 0,0001 g de Fe) Volume final 50 ml Tubo Nessler de 20 mm de dimetro externo g de substncia 0,1 0,105 0,111 0,116 0,125 0,133 0,143 0,154 0,167 0,182 0,2 0,222 0,25 0,285 0,333 Fe p/milho 1000 950 9000 850 800 750 700 650 600 550 500 450 400 350 300 g de substncia 0,4 0,5 0,667 1 1,111 1,25 1,429 1,667 2 2,5 3,333 5 10 20 Fe p/milho 250 200 150 100 90 80 70 60 50 40 30 20 20 5

Exemplo: sendo o padro fixo (0,0001 g de Fe), se o limite de ferro para a substncia sob exame for 1000 ppm, submeter ao ensaio 0,1 g de amostra; se o limite for 200 ppm, submeter ao ensaio 0,5 g de amostra. V.3.2.5 ENSAIO-LIMITE PARA ARSNIO O ensaio-limite para arsnio consiste na determinao de traos de arsnio na substncia sob exame, mediante sua converso em arsina (AsH3), que pode ser detectada por comparao visual ou espectrofotomtrica. Os limites so estabelecidos em termos de arsnio (As) ou, em certos casos, em arsnico (As2O3). Nota: metais como cromo, cobalto, mercrio, molibdnio, nquel, paldio e prata ou seus respectivos sais podem interferir na gerao de arsina. REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de trixido de arsnio Pesar, exatamente, 132,0 mg de trixido de arsnio previamente dessecado em estufa a 105 C por 1

hora. Dissolver em 5 ml de hidrxido de sdio a 20% (p/V), neutralizar com cido sulfrico M e adicionar mais 10 ml de cido sulfrico M. Diluir para 1000 ml com gua isenta de dixido de carbono e homogeneizar. Soluo padro de arsnio (1 ppm As) Transferir 1 ml da soluo estoque de trixido de arsnio para balo volumtrico de 100 ml, adicionar 1 ml de cido sulfrico M, completar o volume com gua isenta de dixido de carbono e homogeneizar. Conservar a soluo em recipiente de vidro e utilizar em at 3 dias. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 1 g de arsnio (1 ppm As). Algodo de acetato de chumbo Imergir algodo absorvente em mistura de cido actico 2 M e acetato de chumbo SR (1:10). Drenar o excesso de lquido colocando o algodo entre diversas camadas de papel de filtro, sem pression-lo. Deixar secar temperatura ambiente. Estocar em recipientes perfeitamente fechados. Papel de acetato de chumbo Imergir papel de filtro branco pesando 80 g/m2 (Whatman n. 1 adequado), cortado em pedaos de 6 mm 80 mm, em mistura de cido actico 2 M e acetato de chumbo SR (1:10). Deixar secar temperatura ambiente. Estocar em recipientes perfeitamente fechados. Papel de brometo mercrico Em um recipiente adequado contendo brometo mercrico a 5% (p/V) em etanol absoluto imergir papel de filtro branco pesando 80 g/m2 (Whatman n. 1 adequado), cortado em pedaos de 20 cm 15 mm e dobrados ao meio. Decantar o excesso de lquido e secar o papel temperatura ambiente, ao abrigo da luz, suspendendo-o, verticalmente, em um fio no-metlico. Eliminar 1 cm de cada borda e cortar o pedao remanescente em quadrados de 15 mm de lado ou discos de 15 mm de dimetro. Estocar em recipientes bem-fechados, revestidos com papel preto. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO O mtodo espectrofotomtrico baseia-se na converso de traos de arsnio (As) em arsina, que passa atravs de uma soluo de dietilditiocarbamato de prata para formar um complexo vermelho. A colorao produzida comparada, visualmente ou espectrofotometricamente, com aquela produzida de forma similar por um controle contendo quantidade de arsnio equivalente ao limite especificado na monografia. Nota: antimnio, que forma estibina, interfere com o resultado produzindo cor ao reagir com o dietilditiocarbamato de prata. Quando se suspeitar da presena de antimnio, a colorao vermelha produzida com as preparaes padro e amostra deve ser comparada em espectrofotmetro ou colormetro adequado, em comprimento de onda de absoro mxima entre 535-540 nm, faixa em que a interferncia da estibina e desprezvel. Dois mtodos podem ser empregados diferindo, apenas, no tratamento preliminar da amostra e do padro. O Mtodo I, em geral, utilizado para substncias inorgnicas, enquanto o Mtodo II empregado para substncias orgnicas. O aparelho utilizado (Figura 1) compreende: (a) frasco gerador de arsina; (b e d) juntas; (c) unidade esmerilhada; (e) tubo de absoro. Eventualmente, outro aparelho adequado, que apresente as caractersticas essenciais do apresentado, pode ser utilizado.

Figura 1 Aparelho para determinao de arsnio pelo mtodo espectrofotomtrico. MTODO I Preparao amostra Transferir para frasco gerador de arsina a quantidade de amostra especificada na monografia, ou a quantidade de amostra, em gramas, calculada segundo a equao: 3/L em que L = limite de arsnio na amostra em ppm. Dissolver e diluir com gua para 35 ml. Adicionar 20 ml de cido sulfrico 2 M, 2 ml de iodeto de potssio SR, 0,5 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 1 ml de 2-propanol. Homogeneizar. Deixar em repouso por 30 minutos temperatura ambiente. Na unidade (c) do aparelho descrito, introduzir duas mechas de algodo de acetato de chumbo, deixando entre elas espao de 2 mm. As juntas (b) e (d) devem ser lubrificadas com vaselina e unidas conforme esquematizado na Figura 1. Preparao padro Transferir para frasco gerador de arsina 3 ml de soluo padro de arsnio (1 ppm As). Diluir com gua para 35 ml e proceder como descrito para a preparao amostra. Procedimento Transferir para as unidades de absoro (e) dos aparelhos contendo as preparaes padro e amostra 3 ml de dietilditiocarbamato de prata SR. Adicionar mistura do frasco gerador de arsina 3 g de zinco granulado (malha de 1 mm). Imediatamente aps adio do zinco, unir as unidades (c) e (e) ao frasco gerador. Deixar em banho de gua a 25 3 C por 45 minutos. Agitar, suavemente, com movimentos circulares, em intervalos de 10 minutos. Desconectar a unidade de absoro das demais partes do aparelho e transferir a soluo de absoro para cela com passo de 1 cm. Qualquer colorao vermelha produzida pela preparao amostra no mais intensa que aquela obtida com a preparao padro. Se necessrio, determinar as absorvncias em espectrofotmetro ou colormetro adequado em comprimento de onda entre 535 nm e 540 nm, utilizando dietilditiocarbamato de prata SR para ajuste do zero. MTODO II Nota: os seguintes cuidados e procedimentos especiais devem ser observados durante a realizao do ensaio. (1) Algumas substncias podem reagir com violncia explosiva quando digeridas com perxido de hidrognio. Observar precaues de segurana durante este procedimento. (2) Se a substncia sob exame contm halognios, utilizar temperatura mais baixa durante o aquecimento

da amostra com cido sulfrico, evitando ebulio da mistura, e adicionar o perxido de hidrognio com precauo, antes que a carbonizao da amostra se inicie, para prevenir a perda de arsnio trivalente. (3) Se a substncia sob exame reage muito rapidamente com o cido sulfrico e comea a fumegar antes do aquecimento, utilizar, no lugar de 5 ml de cido sulfrico, 10 ml de cido sulfrico a 50% (V/V) resfriado e acrescentar algumas gotas de perxido de hidrognio antes do aquecimento. Preparao amostra Transferir para frasco gerador de arsina a quantidade de amostra especificada na monografia, ou a quantidade de amostra, em gramas, calculada segundo a equao: 3/L em que L = limite de arsnio na amostra em ppm. Adicionar 5 ml de cido sulfrico e algumas prolas de vidro. Se necessrio, empregar maior quantidade do cido para umedecer completamente a substncia, no ultrapassando um volume total de 10 ml. Proceder digesto em capela, de preferncia usando placa de aquecimento, com temperatura no superior a 120 C, at o incio da combusto. Adicionar, com cuidado e gota a gota, perxido de hidrognio concentrado, permitindo o abrandamento da reao e aquecendo entre as adies. Adicionar as primeiras gotas aos poucos e muito lentamente, misturando cuidadosamente para prevenir reao rpida e interrompendo o aquecimento caso ocorra formao excessiva de espuma. Aps a diminuio da intensidade da reao, aquecer, cautelosamente, agitando o frasco ocasionalmente, com movimentos circulares, para permitir a reao da amostra aderida nas paredes do frasco. Manter condies de oxidao durante toda a digesto por meio da adio de pequenas quantidades de perxido de hidrognio concentrado sempre que a mistura se tornar marrom ou escurecer. Continuar a reao at que a mostra seja completamente digerida, aumentando a temperatura de aquecimento at que vapores de trixido de enxofre sejam abundantemente desprendidos e a soluo se torne incolor ou mantenha apenas uma colorao levemente bege. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua, evaporar at que o trixido de enxofre seja novamente desprendido e resfriar. Repetir este procedimento com mais 10 ml de gua para remover qualquer trao de perxido de hidrognio. Resfriar e adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua. Lavar as paredes do frasco com alguns mililitros de gua e diluir para 35 ml com o mesmo solvente. Prosseguir conforme descrito para preparao amostra no Mtodo I a partir de Adicionar 20 ml de cido sulfrico 2 M.... Preparao padro Transferir para frasco gerador de arsina 3 ml de soluo padro de arsnio (1 ppm As), adicionar 2 ml de cido sulfrico, homogeneizar e adicionar o mesmo volume de perxido de hidrognio concentrado empregado na preparao amostra. Aquecer a soluo at que se formem vapores densos, resfriar, adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua e aquecer novamente at formao de vapores densos. Repetir este procedimento com mais 10 ml de gua para remover qualquer trao de perxido de hidrognio. Resfriar e diluir para 35 ml com gua. Procedimento Proceder conforme descrito no Mtodo I. MTODO VISUAL O aparelho para a determinao visual de arsnio (Figura 2) consiste, basicamente, de frasco cnico adequado, geralmente de 100 ml, onde a arsina gerada. Esse frasco fechado com rolha de vidro esmerilhado. Por essa rolha passa um tubo de vidro de aproximadamente 200 mm de comprimento e dimetro interno de 5 mm. A extremidade inferior desse tubo estreita-se para um dimetro interno de 1 mm. A aproximadamente 15 mm da ponta desse tubo h um orifcio com dimetro de 2-3 mm que deve estar, no mnimo, 3 mm abaixo da superfcie mais baixa da rolha de vidro. A extremidade superior do tubo apresenta uma superfcie plana que forma, com o eixo do tubo, ngulo reto. Um outro tubo de mesmo dimetro interno e 30 mm de comprimento, com uma superfcie plana similar, ajustado em contato com o primeiro e mantido nesta posio por meio de duas espirais. Dentro do tubo inferior so inseridos 50-60 mg de algodo de acetato de chumbo, frouxamente empacotados, ou um pedao de papel de acetato de chumbo enrolado pesando 50-60 mg e um pequeno chumao de algodo. Entre as superfcies planas dos tubos colocado

um disco ou um quadrado de papel de brometo mercrico com tamanho adequado para recobrir todo o orifcio do tubo (15 mm 15 mm).

Figura 2 Aparelho para determinao de arsnio pelo mtodo visual (dimenses em mm). Preparao amostra Transferir para o frasco do aparelho a quantidade de amostra especificada na monografia, dissolver e diluir com gua para 25 ml. Se a substncia j estiver em soluo, diluir para 25 ml com gua. Adicionar 15 ml de cido clordrico, 0,1 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 5 ml de iodeto de potssio M. Deixar em repouso por 15 minutos. Preparao padro Transferir 1 ml da soluo padro de arsnio (1 ppm As) para o frasco do aparelho e diluir com gua para 25 ml. Adicionar 15 ml de cido clordrico, 0,1 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 5 ml de iodeto de potssio M. Deixar em repouso por 15 minutos. Procedimento Adicionar aos frascos contendo as preparaes padro e amostra 5 g de zinco ativado. Imediatamente, acoplar as duas partes do aparelho e imergir os frascos em banho de gua mantido temperatura tal que a liberao de arsina seja uniforme. Aps no menos que 2 horas, a mancha eventualmente obtida no papel de brometo mercrico da preparao amostra no mais intensa que aquela obtida com a preparao padro. V.3.2.6 ENSAIO-LIMITE PARA AMNIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de cloreto de amnio Dissolver 0, 741 g de cloreto de amnio em gua e diluir para 1000 ml com o mesmo solvente. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 250 g de amnio (250 ppm NH4). Soluo padro de amnio (2,5 ppm NH4)

Diluir 1 ml de soluo estoque de cloreto de amnio para 100 ml com gua. Soluo padro de amnio (1 ppm NH4) Diluir 40 ml de soluo padro de amnio (2,5 ppm NH4) para 100 ml com gua. Preparao amostra Transferir para tubo adequado quantidade de amostra especificada na monografia e dissolver com 14 ml de gua. Alcalinizar, se necessrio, com hidrxido de sdio 2 M e diluir para 15 ml com gua. Preparao padro Transferir para tubo adequado 10 ml de soluo padro de amnio (1 ppm NH4) e diluir para 15 ml com gua. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 0,3 ml de iodeto de potssio mercrico alcalino. Tampar os tubos, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. Qualquer colorao amarela desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. V.3.2.7 ENSAIO-LIMITE PARA CLCIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de carbonato de clcio Pesar, exatamente, 0,624 g de carbonato de clcio previamente dessecado, dissolver em gua contendo 3 ml de cido actico 5 M e diluir para 250 ml com gua. Soluo padro de clcio (400 ppm Ca) Pesar, exatamente, 1 g de carbonato de clcio previamente dessecado, dissolver em 23 ml de cido clordrico M e diluir para 100 ml com gua. Imediatamente antes do uso, diluir 10 ml para 100 ml com gua. Soluo padro alcolica de clcio (100 ppm Ca) Pesar, exatamente, 2,5 g de carbonato de clcio previamente dessecado, dissolver em 12 ml de cido actico 5 M e diluir para 1000 ml com gua. Imediatamente antes do uso, diluir 10 ml para 100 ml com etanol. Soluo padro de clcio (100 ppm Ca) Diluir 10 ml da soluo estoque de carbonato de clcio para 100 ml com gua imediatamente antes do uso. Soluo padro de clcio (10 ppm Ca) Diluir 10 ml da soluo estoque de carbonato de clcio para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO Em tubo adequado, adicionar 1 ml de oxalato de amnio SR a 0,2 ml de soluo padro alcolica de clcio (100 ppm Ca). Aguardar 1 minuto e adicionar mistura de 1 ml de cido actico diludo e 15 ml da soluo da amostra especificada na monografia. Agitar. Preparar o padro da mesma maneira, utilizando mistura de 1 ml de cido actico diludo, 10 ml de soluo padro de clcio (10 ppm Ca) e 5 ml de gua. Aps 15 minutos, qualquer opalescncia desenvolvida na preparao amostra no mais intensa do que aquela obtida na preparao padro. V.3.2.8 ENSAIO-LIMITE PARA MAGNSIO

REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de sulfato de magnsio Pesar, exatamente, 1,010 g de sulfato de magnsio heptaidratado, dissolver e diluir com gua para 100 ml. Soluo padro de magnsio (100 ppm Mg) Diluir 10 ml da soluo estoque de sulfato de magnsio para 100 ml com gua imediatamente antes do uso. Soluo padro de magnsio (10 ppm Mg) Diluir 10 ml da soluo estoque de sulfato de magnsio para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO Adicionar 0,1 g de tetraborato sdico a 10 ml da soluo da amostra especificada na monografia. Se necessrio, ajustar o pH da soluo na faixa de 8,8-9,2 utilizando cido clordrico SR ou hidrxido de sdio SR. Extrair com duas pores de 5 ml de hidroxiquinolina a 0,1% (p/V) em clorofrmio, agitando durante 1 minuto a cada extrao. Deixar decantar, separar e descartar a camada orgnica. Adicionar camada aquosa 0,4 ml de butilamina e 0,1 ml de trietanolamina. Se necessrio, ajustar o pH da soluo na faixa de 10,5-11,5. Adicionar 4 ml de hidroxiquinolina a 0,1% (p/V) em clorofrmio, agitar por 1 minuto e deixar separar as camadas. Utilizar a camada inferior para a comparao. Preparar o padro da mesma maneira utilizando mistura de 1 ml de soluo padro de magnsio (10 ppm Mg) e 9 ml de gua. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais intensa do que aquela obtida na preparao padro. V.3.2.9 ENSAIO-LIMITE PARA MAGNSIO E METAIS ALCALINO-TERROSOS A 200 ml de gua adicionar 0,1 g de cloridrato de hidroxilamina, 10 ml tampo cloreto de amnio pH 10, 1 ml de soluo de sulfato de zinco 0,1 M e cerca de 15 mg de negro de eriocromo T triturado. Aquecer a cerca de 40 C e titular com edetato de sdio 0,01 M SV at viragem de violeta para azul. Adicionar soluo quantidade especificada da amostra dissolvida em 100 ml de gua ou soluo da amostra especificada na monografia. Se a colorao da soluo mudar para violeta, titular com edetato de sdio 0,01 M SV at a viragem para azul. O volume de edetato de sdio 0,01 M SV gasto na segunda titulao no excede o estabelecido na monografia. V.3.2.10 ENSAIO-LIMITE PARA ALUMNIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo padro de alumnio (200 ppm Al) Pesar, exatamente, 0,352 g de sulfato de alumnio e potssio dodecaidratado, dissolver em gua, adicionar 10 ml de cido sulfrico diludo e diluir com gua para 100 ml. Soluo padro de alumnio (10 ppm Al) Pesar, exatamente, 1,39 g de nitrato de alumnio nonaidratado, dissolver e diluir com gua para 100 ml. Diluir 10 ml para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. Soluo padro de alumnio (2 ppm Al) Diluir 1 ml de soluo padro de alumnio (200 ppm) para 100 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO Transferir para funil de separao a soluo da amostra especificada na monografia e extrair com trs pores de hidroxiquinolina a 0,5% (p/V) em clorofrmio, sendo as duas primeiras pores de 20 ml e a

ltima de 10 ml. Diluir os extratos clorofrmicos combinados para 50 ml com clorofrmio. Preparar o padro da mesma maneira utilizando a quantidade prescrita de soluo padro de alumnio. Preparar o branco da mesma maneira utilizando a soluo em branco especificada na monografia. Medir a intensidade da fluorescncia (V.2.15) da soluo amostra (I1), do padro (I2) e do branco (I3) utilizando o feixe de excitao em 392 nm e um filtro secundrio com a faixa de transmisso centrada em 518 nm ou com o monocromador ajustado para transmitir neste comprimento de onda. A fluorescncia (I1 I3) da preparao amostra no superior da preparao padro (I2 - I3). V.3.2.11 ENSAIO-LIMITE PARA FOSFATOS REAGENTES ESPECIAIS Soluo padro de fosfato (5 ppm PO4) Pesar, exatamente, 0,716 g de fosfato monobsico de potssio, dissolver e diluir com gua para 1000 ml. Diluir 10 ml para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO A 100 ml da soluo da amostra especificada na monografia adicionar 4 ml de reagente sulfomolbdico e agitar. Adicionar 0,1 ml de cloreto estanoso SR e agitar. Preparar o padro da mesma maneira utilizando mistura de 2 ml de soluo padro de fosfato (5 ppm PO4) e 98 ml de gua. Aguardar 10 minutos e comparar as cores utilizando 20 ml de cada preparao. A colorao da preparao amostra no mais intensa do que a da preparao padro. V.3.2.12 ENSAIO-LIMITE PARA CHUMBO A determinao de chumbo em produtos farmacuticos pode ser realizada por dois mtodos. Para a determinao do contedo de metais pesados, geralmente expresso em chumbo equivalente, adotado o ensaio-limite (V.3.2.3). Para a determinao do chumbo extravel por ditizona, o ensaio descrito a seguir empregado. Selecionar todos os reagentes para este teste de modo a conter o mnimo de chumbo possvel e armazenar todas as solues reagentes em recipientes de vidro de borossilicato. Enxaguar toda a vidraria com soluo aquecida de cido ntrico 50% (V/V) e, em seguida com gua. REAGENTES ESPECIAIS Soluo de cianeto-amnia Dissolver 2 g de cianeto de potssio em 15 ml de hidrxido de amnio e diluir para 100 ml com gua. Soluo de citrato de amnio Dissolver 40 g de cido ctrico em 90 ml de gua. Acrescentar 2 ou 3 gotas de vermelho de fenol a 0,1% (p/V). Adicionar, cautelosamente, hidrxido de amnio at que a soluo adquira cor avermelhada. Remover qualquer chumbo eventualmente presente por meio de extrao com pores de 20 ml de soluo extratora de ditizona, at que a colorao laranja esverdeada na soluo de ditizona seja mantida. Soluo padro de chumbo (1 ppm Pb) Diluir um volume exatamente medido de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) (V.3.2.3) para 10 volumes com cido ntrico a 1% (V/V), de modo a obter soluo contendo o equivalente a 1 g de chumbo por mililitro (1 ppm Pb). Soluo extratora de ditizona Dissolver 30 mg de ditizona em 1000 ml de clorofrmio e acrescentar 5 ml de etanol. Armazenar em refrigerador. Imediatamente antes do uso, agitar volume adequado desta soluo com metade de seu volume de cido ntrico a 1% (V/V). Descartar a camada cida. Soluo de cloridrato de hidroxilamina

Dissolver 20 g de cloridrato de hidroxilamina em gua para obter, aproximadamente, 65 ml. Transferir para funil de separao. Acrescentar 5 gotas de azul de timol a 0,1% (p/V) em etanol e adicionar hidrxido de amnio at que a soluo adquira cor amarela. Adicionar 10 ml de soluo aquosa de dietilditiocarbamato de sdio a 4% (p/V), agitar e deixar em repouso por 5 minutos. Extrair esta soluo com sucessivas pores de 10 a 15 ml de clorofrmio at que uma poro de 5 ml do extrato de clorofrmio no adquira cor amarela quando agitada com sulfato cprico a 12,5% (p/V). Adicionar cido clordrico 3 M at colorao rosa (se necessrio, adicionar 1 ou 2 gotas de azul de timol a 0,1% (p/V) em etanol) e diluir para 100 ml com gua. Soluo de cianeto de potssio Dissolver 50 g de cianeto de potssio em gua suficiente para 100 ml. Remover o chumbo desta soluo por meio de extrao com pores sucessivas de soluo extratora de ditizona, at que a colorao laranja esverdeada na soluo de ditizona seja mantida. Extrair qualquer ditizona que remanescente na soluo de cianeto agitando com clorofrmio. Diluir a soluo de cianeto com gua suficiente de modo que cada 100 ml contenham 10 g de cianeto de potssio. Soluo padro de ditizona Dissolver 10 mg de ditizona em 1000 ml de clorofrmio. Conservar em frasco isento de chumbo, munido com tampa de vidro, em refrigerador, adequadamente embalado para proteger da luz. PREPARAO AMOSTRA Na ausncia de especificao na monografia, preparar a soluo da amostra como descrito a seguir. Nota: se a amostra reage muito rapidamente com o cido sulfrico e comea a fumegar antes do aquecimento, utilizar, no lugar de 5 ml de cido sulfrico, 10 ml de cido sulfrico a 50% (V/V) resfriado e acrescentar algumas gotas de perxido de hidrognio antes do aquecimento. Observar precaues de segurana neste procedimento, pois algumas substncias podem reagir com violncia explosiva quando tratadas com perxido de hidrognio. Transferir 1 g da amostra para frasco adequado, adicionar 5 ml de cido sulfrico, acrescentar algumas prolas de vidro e digerir em placa de aquecimento, em capela, at comear a fumegar. Outros meios de aquecimento adequados podem ser utilizados. Se necessrio, adicionar excesso de cido sulfrico para umedecer completamente a amostra, no ultrapassando um total de 10 ml. Adicionar, gota a gota e com precauo, perxido de hidrognio concentrado, permitindo o abrandamento da reao e aquecendo entre as adies. Adicionar as primeiras gotas aos poucos e muito lentamente, misturando cuidadosamente para prevenir reao rpida e interrompendo o aquecimento se ocorrer formao excessiva de espuma. Girar a soluo no frasco para permitir a reao da amostra aderida nas paredes (acrescentar perxido de hidrognio sempre que a mistura se tornar marrom ou escurecer). Continuar a reao at que a amostra seja completamente digerida, vapores de trixido de enxofre sejam abundantemente desprendidos e a soluo se torne incolor. Resfriar, adicionar, com cuidado, 10 ml de gua, evaporar at que o trixido de enxofre seja novamente despendido e resfriar. Repetir este procedimento com outros 10 ml de gua para remover qualquer trao de perxido de hidrognio. Diluir, cuidadosamente, com 10 ml de gua e resfriar. PROCEDIMENTO Transferir para funil de separao a preparao amostra, com auxlio de 10 ml de gua, ou o volume de soluo da amostra especificado na monografia. A menos que indicado de maneira diferente, acrescentar 6 ml de soluo de citrato de amnio e 2 ml de soluo cloridrato de hidroxilamina (para a determinao de chumbo em sais de ferro, utilizar 10 ml de soluo de citrato de amnio). Adicionar 2 gotas de vermelho de fenol a 0,1% (p/V) em etanol, adicionar hidrxido de amnio suficiente para alcalinizao (colorao vermelha) e homogeneizar. Resfriar a soluo, se necessrio, e acrescentar 2 ml de soluo de cianeto de potssio. Extrair, imediatamente, com pores de 5 ml de soluo extratora de ditizona, escoando cada extrato para outro funil de separao, at que a colorao verde da soluo de ditizona seja mantida. Agitar as fraes combinadas de ditizona durante 30 segundos com 20 ml de cido ntrico a 1% (V/V) e descartar a camada clorofrmica. Adicionar soluo cida 5 ml de soluo padro de ditizona, 4 ml de soluo de cianeto-amnia e agitar durante 30 segundos. A camada clorofrmica no apresenta colorao violeta mais intensa que a de um controle preparado com um volume de soluo padro de chumbo (1 ppm Pb) equivalente quantidade de chumbo permitida na substncia sob exame, empregando os mesmos volumes de reagentes e o mesmo tratamento utilizado para a soluo da amostra.

V.2.25 LIMPIDEZ DE SOLUES Utilizar tubos de vidro neutro, incolor e transparente, com fundo chato e de 15 a 25 mm de dimetro interno, a menos que indicado de maneira diferente na monografia. Introduzir, em tubos separados, a soluo em exame e a suspenso de referncia indicada na monografia, preparando-a por ocasio do uso, conforme especificado na Tabela 1. Encher os tubos at a profundidade de 40 mm. Cinco minutos aps o preparo da suspenso de referncia, comparar o contedo dos tubos, observando-os verticalmente, sob luz visvel difusa e contra fundo preto. A difuso da luz deve ser tal que a suspenso de referncia I seja facilmente distinguida da gua e da suspenso de referncia II. Uma soluo considerada lmpida quando, ao ser examinada nas condies anteriormente descritas, sua transparncia corresponde da gua ou do solvente utilizado, ou quando sua opalescncia no mais pronunciada que a da suspenso de referncia I. Padro de opalescncia Dissolver 1 g de sulfato de hidrazina em gua e completar o volume para 100 ml com o mesmo solvente. Deixar em repouso por 4 a 6 horas. Adicionar 25 ml desta soluo a uma soluo contendo 2,5 g de metenamina em 25 ml de gua. Misturar bem e deixar em repouso por 24 horas. Esta suspenso estvel por dois meses se conservada em recipiente de vidro, com superfcie livre de defeitos. A suspenso no deve aderir s paredes do recipiente e deve ser vigorosamente agitada, no recipiente original, antes do uso. Para o preparo do padro de opalescncia, diluir 15 ml da suspenso para 1000 ml com gua. O padro de opalescncia deve ser preparado no momento do uso e pode ser conservado por, no mximo, 24 horas. Tabela 1 Suspenses de referncia Suspenso de referncia Padro de opalescncia (ml) gua (ml) I 5 95 II 10 90 III 30 70 IV 50 50

V.3.2 ENSAIOS-LIMITE PARA IMPUREZAS INORGNICAS Ensaios-limite so ensaios quantitativos ou semiquantitativos realizados para verificar se o contedo de impurezas inorgnicas presentes em insumos farmacuticos no excede o limite especificado na monografia da substncia em exame, expresso em porcentagem (p/p) ou em microgramas por grama (ppm) da substncia. Os ensaios so realizados em tubos calibrados de vidro transparente, de dimetro interno uniforme e fundo plano, salvo indicao contrria na monografia. Os tubos devem apresentar marcas externas correspondentes aos volumes de 25 ml e 50 ml. Tubos de Nessler usualmente so adequados. A coluna de lquido observada segundo o eixo vertical do tubo, de cima para baixo, sob luz difusa, sobre fundo branco ou, se necessrio, sobre fundo negro, salvo indicao contrria. V.3.2.1 ENSAIO-LIMITE PARA CLORETOS Preparao amostra Transferir para tubo adequado a quantidade de amostra especificada na monografia e adicionar 30 ml a 40 ml de gua. Se a substncia j estiver em soluo, diluir para 30 ml a 40 ml com gua. Neutralizar, se necessrio, com cido ntrico SR. Se aps a neutralizao a soluo no estiver perfeitamente lmpida, filtrar em papel de filtro isento de cloreto. Caso um volume especfico de soluo da amostra seja especificado na monografia individual, e o limite de cloreto corresponda a volume igual ou inferior a 0,2 ml de cido clordrico padro, o ensaio deve ser realizado sem diluio adicional da soluo da amostra. Preparao padro Transferir o volume de cido clordrico padro (HCl 0,01 M) indicado na monografia ou na Tabela 1 (ou calculado conforme o limite especificado) para tubo adequado e proceder conforme descrito para a preparao amostra. Procedimento Desenvolver padro e amostra paralelamente. Adicionar s preparaes padro e amostra 1 ml de cido

ntrico SR e 1 ml de nitrato de prata SR. Diluir para 50 ml com gua e homogeneizar. Deixar em repouso ao abrigo da luz durante 5 minutos. Qualquer turbidez desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. Tabela 1 Clculo de limites para cloretos Equivalentes em parte de Cl por 1 milho de partes da substncia (p/p) Padro: 1 ml de cido clordrico 0,01 M (= 0,0003546 g de Cl) Volume final 50 ml Tubo Nessler de 50 ml e dimetro externo de 20 mm g de amostra 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6 Cl p/milho 3546 (= 0,355%) 2364 (= 0,236%) 1773 (= 0,180%) 1418 (= 0,142%) 1182 (= 0,120%) 1013 (= 0,100%) 886 788 709 645 591 545 506 473 443 417 394 373 354 285 253 221 197 177 161 148 136 126 118 111 104 98 g de amostra 3,8 4,0 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 8,8 9,0 9,2 9,4 9,6 9,8 10,0 Cl p/milho 93 88 84 80 77 74 71 68 65 63 61 59 57 55 53 52 50 49 48 46 45 44 43 42 41 40 39 38 37 37 36 35

Exemplo: sendo o padro fixo (0,0003546 g de Cl), se o limite de cloretos para a substncia sob exame for 354 ppm, submeter ao ensaio 1 g de amostra; se o limite for 71 ppm, submeter ao ensaio 5 g de amostra. V.3.2.2 ENSAIO-LIMITE PARA SULFATOS Preparao amostra Transferir para tubo adequado a quantidade de amostra especificada na monografia e adicionar 30 ml a 40 ml de gua. Se a substncia j estiver em soluo, diluir para 30 ml a 40 ml com gua. Neutralizar, se necessrio, com cido clordrico SR. Eventualmente, pode-se utilizar cido actico glacial tanto para neutralizao quanto para acidificao da preparao amostra. Se aps a neutralizao a soluo no estiver perfeitamente lmpida, filtrar em papel de filtro isento de sulfato. Caso um volume especfico de soluo da amostra seja especificado na monografia individual, e o limite de sulfato corresponda a volume igual ou inferior a 0,2 ml de cido sulfrico padro, o ensaio deve ser realizado sem diluio adicional da soluo da amostra. Preparao padro Transferir o volume de cido sulfrico padro (H2SO4 0,005 M) indicado na monografia ou na Tabela 1

(ou calculado conforme o limite especificado) para tubo adequado e proceder conforme descrito para a preparao amostra. Procedimento Desenvolver padro e amostra paralelamente. Adicionar s preparaes padro e amostra 1 ml de cido clordrico 3 M e 3 ml de cloreto de brio SR. Diluir para 50 ml com gua e homogeneizar. Deixar em repouso durante 10 minutos. Qualquer turbidez desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. Tabela 2 Clculo de limites para sulfatos Equivalentes em parte de SO4 por milho de partes da substncia (p/p) Padro: 2,5 ml de cido sulfrico 0,005 M (0,0012008 g de SO4) Volume final 50ml Tubo Nessler de 50 ml e dimetro externo de 20 mm g de substncia 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2 2,4 2,6 2,8 3,0 3,2 3,4 3,6 3,8 4,0 4,2 4,4 SO4 p/milho 2401 (= 0,240%) 2183 (= 0,220%) 2001 (= 0,200%) 1847 (= 0,185%) 1715 (= 0,171%) 1601 (= 0,160%) 1501 1412 1334 1264 1200 1001 858 750 667 600 546 500 462 429 400 375 353 333 316 300 286 273 g de substncia 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 8,8 9,0 9,2 9,4 9,6 9,8 10,0 SO4 p/milho 261 250 240 231 222 214 207 200 194 187 182 177 171 166 162 158 154 151 146 143 139 136 133 130 127 125 122 120

Exemplo: sendo o padro fixo (0,0012008 g de SO4), se o limite de sulfatos para a substncia sob exame for 500 ppm, submeter ao ensaio 2,4 g de amostra; se o limite for 151 ppm, submeter ao ensaio 8 g de amostra. V.3.2.3 ENSAIO-LIMITE PARA METAIS PESADOS O ensaio-limite para metais pesados destina-se a demonstrar que o contedo de impurezas metlicas que so coloridas pelo on sulfeto no excede o limite especificado na monografia da substncia em exame, expresso em porcentagem (p/p) ou em microgramas de chumbo por grama (ppm) da substncia, conforme determinado pela comparao visual com uma preparao padro chumbo (Pb). Substncias tipicamente detectadas por este ensaio incluem chumbo, mercrio, bismuto, arsnico, antimnio, estanho, cdmio, prata, cobre e molibdnio. Realizar o ensaio utilizando o Mtodo I, salvo indicao contrria na monografia individual. O Mtodo I utilizado para substncias que produzem preparaes lmpidas e incolores sob as condies especificadas no ensaio. O Mtodo II empregado para substncias que no produzem preparaes lmpidas e incolores sob as condies especificadas para o Mtodo I, ou para substncias que, em virtude de sua natureza complexa, interferem com a precipitao de metais pelo on sulfeto, ou para leos fixos e volteis. O Mtodo

III, que inclui um processo de digesto mida, utilizado somente nos casos em que os Mtodos I e II no podem ser utilizados. REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de nitrato de chumbo Dissolver, exatamente, 159,8 mg de nitrato de chumbo em 100 ml de gua adicionada de 1 ml de cido ntrico. Diluir com gua para 1000 ml e homogeneizar. Preparar e estocar esta soluo em recipientes de vidro isentos de sais solveis de chumbo. Soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) No dia do uso, diluir 10 ml da soluo estoque de nitrato de chumbo para 100 ml com gua. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 10 g de chumbo (10 ppm Pb). Tampo acetato pH 3,5 Dissolver 25,0 g de acetato de amnio em 25 ml de gua e adicionar 38 ml de cido clordrico 6 M. Se necessrio, ajustar o pH em 3,5 com hidrxido de amnio 6 M ou cido clordrico 6 M. Diluir para 100 ml com gua e homogeneizar. MTODO I Preparao amostra Transferir para tubo adequado soluo da amostra preparada conforme especificado na monografia e diluir para 25 ml com gua, ou dissolver e diluir com gua para 25 ml a quantidade de amostra, em gramas, especificada na monografia ou calculada segundo a equao: 2 / (1000L) em que L = limite de metais pesados na amostra em porcentagem (p/p). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao padro Transferir para tubo adequado 2 ml de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e diluir para 25 ml com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao controle Transferir para um terceiro tubo volume soluo da amostra preparada conforme descrito na monografia ou em preparao amostra e adicionar 2 ml de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb). Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M ou hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Procedimento A cada uma das preparaes adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 ml de tioacetamida SR. Diluir com gua para 50 ml, homogeneizar e deixar em repouso por 2 minutos. Observar as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. O teste somente vlido se a intensidade da colorao desenvolvida na preparao controle igual ou superior quela observada na preparao padro. Do contrrio, aplicar o Mtodo II ao invs do Mtodo I para a substncia sob exame.

MTODO II Preparao amostra Utilizar a quantidade de amostra, em gramas, especificada na monografia ou calculada segundo a equao: 2 / (1000L) em que L = limite de metais pesados na amostra em porcentagem (p/p). Transferir a amostra para cadinho adequado, adicionar cido sulfrico suficiente para umedecer a substncia e incinerar, cuidadosamente, sob temperatura baixa. Adicionar massa carbonizada 2 ml de cido ntrico e 5 gotas de cido sulfrico. Aquecer, com cuidado, at que no mais se desprendam vapores brancos. Incinerar em mufla a 500-600 C at completa combusto do carbono. Resfriar em temperatura ambiente, adicionar 4 ml de cido clordrico 6 M, cobrir, digerir em banho-maria por 15 minutos, descobrir e evaporar em banho-maria, lentamente, at secura. Umedecer o resduo com 1 gota de cido clordrico, adicionar 10 ml de gua quente e digerir em banho-maria por 2 minutos. Alcalinizar ao papel tornassol com hidrxido de amnio 6 M adicionado gota a gota. Diluir com gua para 25 ml e ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com cido actico M, utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Filtrar se necessrio, lavar o cadinho e o filtro com 10 ml de gua e combinar o filtrado e as guas de lavagem em tubo adequado para comparao de cor. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao padro Proceder conforme descrito em preparao padro no Mtodo I. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 ml de tioacetamida SR. Diluir com gua para 50 ml, homogeneizar e deixar em repouso por 2 minutos. Observar as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. MTODO III Preparao amostra Transferir a quantidade ou volume de amostra indicada na monografia para um balo de Kjeldahl de 100 ml previamente limpo e seco (um balo de 300 ml pode ser utilizado nos casos em que a reao resulta em formao excessiva de espuma). Manter o balo inclinado em um ngulo de 45. Se a substncia sob exame for slida, adicionar mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico em quantidade suficiente para umedecer completamente a amostra; se a substncia sob exame for lquida, adicionar alguns mililitros de mistura de 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico. Aquecer, brandamente, para iniciar a reao. Quando a reao abrandar, adicionar pores da mistura cida, aquecendo a cada adio. Repetir a operao at que se tenha acrescentado um volume total de 18 ml da mistura cida. Aumentar a temperatura de aquecimento e ferver, brandamente, a mistura at o escurecimento da soluo. Resfriar, adicionar 2 ml de cido ntrico e aquecer novamente at o escurecimento da soluo. Continuar o aquecimento at que nenhum escurecimento adicional seja observado, e ento aquecer vigorosamente at que se produzam vapores brancos densos. Resfriar e adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua. Aquecer, brandamente, ebulio at que vapores brancos densos sejam novamente produzidos e manter o aquecimento para reduzir o volume a 2-3 ml. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua e examinar a cor da soluo. Se a cor amarela, adicionar, cuidadosamente, 1 ml de perxido de hidrognio concentrado e aquecer ebulio at que se produzam vapores brancos densos e o volume seja reduzido a 2-3 ml. Se a soluo permanece amarela, repetir a adio de 5 ml de gua e 1 ml de perxido de hidrognio concentrado at que a soluo se torne incolor. Resfriar e diluir, cuidadosamente, com alguns mililitros de gua. Transferir para tubo adequado para comparao de cor, lavar o balo com gua, transferindo as guas de lavagem para o tubo e diluir para 25 ml com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com hidrxido de

amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Preparao padro Transferir 8 ml de cido sulfrico e 10 ml de cido ntrico para balo de Kjeldahl de 100 ml previamente limpo e seco. Acrescentar volume adicional de cido ntrico equivalente quele que foi adicionado preparao amostra. Aquecer a soluo para a produo de vapores brancos densos. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua e, caso a preparao amostra tenha sido tratada com perxido de hidrognio, adicionar volume de perxido de hidrognio concentrado equivalente quele que foi adicionado substncia sob exame. Aquecer, brandamente, ebulio at que vapores brancos densos sejam novamente produzidos. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 5 ml de gua, homogeneizar e aquecer, brandamente, ebulio para produzir vapores brancos densos e reduzir o volume a 2-3 ml. Resfriar, diluir, cuidadosamente, com alguns mililitros de gua, adicionar 2 ml de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) e homogeneizar. Transferir para tubo adequado para comparao de cor, lavar o balo com gua, transferindo as guas de lavagem para o tubo e diluir para 25 ml com gua. Ajustar o pH entre 3,0 e 4,0 com hidrxido de amnio 6 M utilizando papel indicador de faixa estreita como indicador externo. Diluir com gua para aproximadamente 40 ml e homogeneizar. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 2 ml de tampo acetato pH 3,5 e 1,2 ml de tioacetamida SR. Diluir com gua para 50 ml, homogeneizar e deixar em repouso por 2 minutos. Observar as preparaes de cima para baixo, segundo o eixo vertical do tubo, sobre fundo branco. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. V.3.2.4 ENSAIO-LIMITE PARA FERRO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de sulfato frrico amoniacal Dissolver, exatamente, 0,8634 g de sulfato frrico amoniacal dodecaidratado em gua contendo 25 ml de cido sulfrico M e diluir com gua para 500 ml. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 200 g de ferro (200 ppm Fe). Soluo padro de ferro (100, 10 e 2 ppm Fe) Imediatamente antes do uso, diluir com gua, quantitativamente, volume adequado da soluo estoque de sulfato frrico amoniacal. cido ctrico Quanto utilizado no ensaio-limite para ferro, cumpre com o seguinte requerimento: dissolver 0,5 g em 10 ml de gua, adicionar 0,1 ml de cido tiogliclico, homogeneizar, alcalinizar com amnia 10 M e diluir com gua para 25 ml; no se desenvolve colorao rosa. Amnia Quando utilizada no ensaio-limite para ferro, cumpre com o seguinte requerimento: evaporar 5 ml secura em banho-maria, adicionar 10 ml de gua, 2 ml de cido ctrico a 20% (p/V) e 0,1 ml de cido tiogliclico, homogeneizar, alcalinizar com amnia e diluir para 25 ml com gua; no se desenvolver colorao rosa. MTODO I Preparao amostra Dissolver em gua a quantidade de amostra especificada na monografia, ou utilizar a soluo amostra especificada na monografia, transferir para tubo adequado, diluir para 40 ml com gua e adicionar 2 ml de cido ctrico a 20% (p/V).

Preparao padro Transferir para tubo adequado 1 ml de soluo padro de ferro (10 ppm Fe) (ou 1 ml de soluo padro de ferro (100 ppm Fe) caso a quantidade de amostra submetida ao ensaio seja calculada segundo a Tabela 3), diluir para 40 ml com gua e adicionar 2 ml de cido ctrico a 20% (p/V). Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 2 gotas de cido tiogliclico. Homogeneizar e alcalinizar com amnia. Diluir para 50 ml com gua, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. Qualquer colorao rsea desenvolvida na preparao amostra no mais escura que aquela observada na preparao padro. MTODO II Preparao amostra Transferir para tubo adequado 10 ml de soluo da amostra especificada na monografia, adicionar 2 ml de cido clordrico 2 M e 0,5 ml de gua de bromo. Aps 5 minutos, retirar o excesso de bromo utilizando corrente de ar. Preparao padro Transferir para tubo adequado 10 ml de soluo padro de ferro (2 ppm Fe), adicionar 2 ml de cido clordrico 2 M e 0,5 ml de gua de bromo. Aps 5 minutos, retirar o excesso de bromo utilizando corrente de ar. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 3 ml de tiocianato de potssio M, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. MTODO III Preparao amostra Transferir para tubo adequado soluo da amostra especificada na monografia e diluir, se necessrio, para 45 ml com gua, ou dissolver e diluir em gua para 45 ml a quantidade, em gramas, de amostra calculada segundo a equao: 1 / (1000L) em que L = limite de ferro na amostra em porcentagem (p/p). Adicionar 2 ml de cido clordrico e homogeneizar. Preparao padro Transferir para tubo adequado 1 ml de soluo padro de ferro (10 ppm Fe), diluir para 45 ml com gua, adicionar 2 ml de cido clordrico e homogeneizar. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 50 mg de cristais de peroxidissulfato de amnio, 3 ml de tiocianato de amnio a 30% (p/V), diluir para 50 ml com gua e homogeneizar. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. Tabela 3 Clculo de limites para ferro Equivalentes em parte de Fe por 1 milho de partes da substncia (p/p)

Padro 1 ml da soluo de sulfato de amnio e ferro (III) dodecaidratado (= 0,0001 g de Fe) Volume final 50 ml Tubo Nessler de 20 mm de dimetro externo g de substncia 0,1 0,105 0,111 0,116 0,125 0,133 0,143 0,154 0,167 0,182 0,2 0,222 0,25 0,285 0,333 Fe p/milho 1000 950 9000 850 800 750 700 650 600 550 500 450 400 350 300 g de substncia 0,4 0,5 0,667 1 1,111 1,25 1,429 1,667 2 2,5 3,333 5 10 20 Fe p/milho 250 200 150 100 90 80 70 60 50 40 30 20 20 5

Exemplo: sendo o padro fixo (0,0001 g de Fe), se o limite de ferro para a substncia sob exame for 1000 ppm, submeter ao ensaio 0,1 g de amostra; se o limite for 200 ppm, submeter ao ensaio 0,5 g de amostra. V.3.2.5 ENSAIO-LIMITE PARA ARSNIO O ensaio-limite para arsnio consiste na determinao de traos de arsnio na substncia sob exame, mediante sua converso em arsina (AsH3), que pode ser detectada por comparao visual ou espectrofotomtrica. Os limites so estabelecidos em termos de arsnio (As) ou, em certos casos, em arsnico (As2O3). Nota: metais como cromo, cobalto, mercrio, molibdnio, nquel, paldio e prata ou seus respectivos sais podem interferir na gerao de arsina. REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de trixido de arsnio Pesar, exatamente, 132,0 mg de trixido de arsnio previamente dessecado em estufa a 105 C por 1 hora. Dissolver em 5 ml de hidrxido de sdio a 20% (p/V), neutralizar com cido sulfrico M e adicionar mais 10 ml de cido sulfrico M. Diluir para 1000 ml com gua isenta de dixido de carbono e homogeneizar. Soluo padro de arsnio (1 ppm As) Transferir 1 ml da soluo estoque de trixido de arsnio para balo volumtrico de 100 ml, adicionar 1 ml de cido sulfrico M, completar o volume com gua isenta de dixido de carbono e homogeneizar. Conservar a soluo em recipiente de vidro e utilizar em at 3 dias. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 1 g de arsnio (1 ppm As). Algodo de acetato de chumbo Imergir algodo absorvente em mistura de cido actico 2 M e acetato de chumbo SR (1:10). Drenar o excesso de lquido colocando o algodo entre diversas camadas de papel de filtro, sem pression-lo. Deixar secar temperatura ambiente. Estocar em recipientes perfeitamente fechados. Papel de acetato de chumbo Imergir papel de filtro branco pesando 80 g/m2 (Whatman n. 1 adequado), cortado em pedaos de 6 mm 80 mm, em mistura de cido actico 2 M e acetato de chumbo SR (1:10). Deixar secar temperatura ambiente. Estocar em recipientes perfeitamente fechados.

Papel de brometo mercrico Em um recipiente adequado contendo brometo mercrico a 5% (p/V) em etanol absoluto imergir papel de filtro branco pesando 80 g/m2 (Whatman n. 1 adequado), cortado em pedaos de 20 cm 15 mm e dobrados ao meio. Decantar o excesso de lquido e secar o papel temperatura ambiente, ao abrigo da luz, suspendendo-o, verticalmente, em um fio no-metlico. Eliminar 1 cm de cada borda e cortar o pedao remanescente em quadrados de 15 mm de lado ou discos de 15 mm de dimetro. Estocar em recipientes bem-fechados, revestidos com papel preto. MTODO ESPECTROFOTOMTRICO O mtodo espectrofotomtrico baseia-se na converso de traos de arsnio (As) em arsina, que passa atravs de uma soluo de dietilditiocarbamato de prata para formar um complexo vermelho. A colorao produzida comparada, visualmente ou espectrofotometricamente, com aquela produzida de forma similar por um controle contendo quantidade de arsnio equivalente ao limite especificado na monografia. Nota: antimnio, que forma estibina, interfere com o resultado produzindo cor ao reagir com o dietilditiocarbamato de prata. Quando se suspeitar da presena de antimnio, a colorao vermelha produzida com as preparaes padro e amostra deve ser comparada em espectrofotmetro ou colormetro adequado, em comprimento de onda de absoro mxima entre 535-540 nm, faixa em que a interferncia da estibina e desprezvel. Dois mtodos podem ser empregados diferindo, apenas, no tratamento preliminar da amostra e do padro. O Mtodo I, em geral, utilizado para substncias inorgnicas, enquanto o Mtodo II empregado para substncias orgnicas. O aparelho utilizado (Figura 1) compreende: (a) frasco gerador de arsina; (b e d) juntas; (c) unidade esmerilhada; (e) tubo de absoro. Eventualmente, outro aparelho adequado, que apresente as caractersticas essenciais do apresentado, pode ser utilizado.

Figura 1 Aparelho para determinao de arsnio pelo mtodo espectrofotomtrico. MTODO I Preparao amostra Transferir para frasco gerador de arsina a quantidade de amostra especificada na monografia, ou a quantidade de amostra, em gramas, calculada segundo a equao: 3/L em que L = limite de arsnio na amostra em ppm.

Dissolver e diluir com gua para 35 ml. Adicionar 20 ml de cido sulfrico 2 M, 2 ml de iodeto de potssio SR, 0,5 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 1 ml de 2-propanol. Homogeneizar. Deixar em repouso por 30 minutos temperatura ambiente. Na unidade (c) do aparelho descrito, introduzir duas mechas de algodo de acetato de chumbo, deixando entre elas espao de 2 mm. As juntas (b) e (d) devem ser lubrificadas com vaselina e unidas conforme esquematizado na Figura 1. Preparao padro Transferir para frasco gerador de arsina 3 ml de soluo padro de arsnio (1 ppm As). Diluir com gua para 35 ml e proceder como descrito para a preparao amostra. Procedimento Transferir para as unidades de absoro (e) dos aparelhos contendo as preparaes padro e amostra 3 ml de dietilditiocarbamato de prata SR. Adicionar mistura do frasco gerador de arsina 3 g de zinco granulado (malha de 1 mm). Imediatamente aps adio do zinco, unir as unidades (c) e (e) ao frasco gerador. Deixar em banho de gua a 25 3 C por 45 minutos. Agitar, suavemente, com movimentos circulares, em intervalos de 10 minutos. Desconectar a unidade de absoro das demais partes do aparelho e transferir a soluo de absoro para cela com passo de 1 cm. Qualquer colorao vermelha produzida pela preparao amostra no mais intensa que aquela obtida com a preparao padro. Se necessrio, determinar as absorvncias em espectrofotmetro ou colormetro adequado em comprimento de onda entre 535 nm e 540 nm, utilizando dietilditiocarbamato de prata SR para ajuste do zero. MTODO II Nota: os seguintes cuidados e procedimentos especiais devem ser observados durante a realizao do ensaio. (1) Algumas substncias podem reagir com violncia explosiva quando digeridas com perxido de hidrognio. Observar precaues de segurana durante este procedimento. (2) Se a substncia sob exame contm halognios, utilizar temperatura mais baixa durante o aquecimento da amostra com cido sulfrico, evitando ebulio da mistura, e adicionar o perxido de hidrognio com precauo, antes que a carbonizao da amostra se inicie, para prevenir a perda de arsnio trivalente. (3) Se a substncia sob exame reage muito rapidamente com o cido sulfrico e comea a fumegar antes do aquecimento, utilizar, no lugar de 5 ml de cido sulfrico, 10 ml de cido sulfrico a 50% (V/V) resfriado e acrescentar algumas gotas de perxido de hidrognio antes do aquecimento. Preparao amostra Transferir para frasco gerador de arsina a quantidade de amostra especificada na monografia, ou a quantidade de amostra, em gramas, calculada segundo a equao: 3/L em que L = limite de arsnio na amostra em ppm. Adicionar 5 ml de cido sulfrico e algumas prolas de vidro. Se necessrio, empregar maior quantidade do cido para umedecer completamente a substncia, no ultrapassando um volume total de 10 ml. Proceder digesto em capela, de preferncia usando placa de aquecimento, com temperatura no superior a 120 C, at o incio da combusto. Adicionar, com cuidado e gota a gota, perxido de hidrognio concentrado, permitindo o abrandamento da reao e aquecendo entre as adies. Adicionar as primeiras gotas aos poucos e muito lentamente, misturando cuidadosamente para prevenir reao rpida e interrompendo o aquecimento caso ocorra formao excessiva de espuma. Aps a diminuio da intensidade da reao, aquecer, cautelosamente, agitando o frasco ocasionalmente, com movimentos circulares, para permitir a reao da amostra aderida nas paredes do frasco. Manter condies de oxidao durante toda a digesto por meio da adio de pequenas quantidades de perxido de hidrognio concentrado sempre que a mistura se tornar marrom ou escurecer. Continuar a reao at que a mostra seja completamente digerida, aumentando a temperatura de aquecimento at que vapores de trixido de enxofre sejam abundantemente desprendidos e a soluo se torne incolor ou mantenha apenas uma colorao levemente bege. Resfriar, adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua, evaporar at que o trixido de enxofre seja novamente desprendido e resfriar. Repetir este procedimento com mais 10 ml de gua para

remover qualquer trao de perxido de hidrognio. Resfriar e adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua. Lavar as paredes do frasco com alguns mililitros de gua e diluir para 35 ml com o mesmo solvente. Prosseguir conforme descrito para preparao amostra no Mtodo I a partir de Adicionar 20 ml de cido sulfrico 2 M.... Preparao padro Transferir para frasco gerador de arsina 3 ml de soluo padro de arsnio (1 ppm As), adicionar 2 ml de cido sulfrico, homogeneizar e adicionar o mesmo volume de perxido de hidrognio concentrado empregado na preparao amostra. Aquecer a soluo at que se formem vapores densos, resfriar, adicionar, cuidadosamente, 10 ml de gua e aquecer novamente at formao de vapores densos. Repetir este procedimento com mais 10 ml de gua para remover qualquer trao de perxido de hidrognio. Resfriar e diluir para 35 ml com gua. Procedimento Proceder conforme descrito no Mtodo I. MTODO VISUAL O aparelho para a determinao visual de arsnio (Figura 2) consiste, basicamente, de frasco cnico adequado, geralmente de 100 ml, onde a arsina gerada. Esse frasco fechado com rolha de vidro esmerilhado. Por essa rolha passa um tubo de vidro de aproximadamente 200 mm de comprimento e dimetro interno de 5 mm. A extremidade inferior desse tubo estreita-se para um dimetro interno de 1 mm. A aproximadamente 15 mm da ponta desse tubo h um orifcio com dimetro de 2-3 mm que deve estar, no mnimo, 3 mm abaixo da superfcie mais baixa da rolha de vidro. A extremidade superior do tubo apresenta uma superfcie plana que forma, com o eixo do tubo, ngulo reto. Um outro tubo de mesmo dimetro interno e 30 mm de comprimento, com uma superfcie plana similar, ajustado em contato com o primeiro e mantido nesta posio por meio de duas espirais. Dentro do tubo inferior so inseridos 50-60 mg de algodo de acetato de chumbo, frouxamente empacotados, ou um pedao de papel de acetato de chumbo enrolado pesando 50-60 mg e um pequeno chumao de algodo. Entre as superfcies planas dos tubos colocado um disco ou um quadrado de papel de brometo mercrico com tamanho adequado para recobrir todo o orifcio do tubo (15 mm 15 mm).

Figura 2 Aparelho para determinao de arsnio pelo mtodo visual (dimenses em mm).

Preparao amostra Transferir para o frasco do aparelho a quantidade de amostra especificada na monografia, dissolver e diluir com gua para 25 ml. Se a substncia j estiver em soluo, diluir para 25 ml com gua. Adicionar 15 ml de cido clordrico, 0,1 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 5 ml de iodeto de potssio M. Deixar em repouso por 15 minutos. Preparao padro Transferir 1 ml da soluo padro de arsnio (1 ppm As) para o frasco do aparelho e diluir com gua para 25 ml. Adicionar 15 ml de cido clordrico, 0,1 ml de cloreto estanoso fortemente cido SR e 5 ml de iodeto de potssio M. Deixar em repouso por 15 minutos. Procedimento Adicionar aos frascos contendo as preparaes padro e amostra 5 g de zinco ativado. Imediatamente, acoplar as duas partes do aparelho e imergir os frascos em banho de gua mantido temperatura tal que a liberao de arsina seja uniforme. Aps no menos que 2 horas, a mancha eventualmente obtida no papel de brometo mercrico da preparao amostra no mais intensa que aquela obtida com a preparao padro. V.3.2.6 ENSAIO-LIMITE PARA AMNIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de cloreto de amnio Dissolver 0, 741 g de cloreto de amnio em gua e diluir para 1000 ml com o mesmo solvente. Cada mililitro desta soluo contm o equivalente a 250 g de amnio (250 ppm NH4). Soluo padro de amnio (2,5 ppm NH4) Diluir 1 ml de soluo estoque de cloreto de amnio para 100 ml com gua. Soluo padro de amnio (1 ppm NH4) Diluir 40 ml de soluo padro de amnio (2,5 ppm NH4) para 100 ml com gua. Preparao amostra Transferir para tubo adequado quantidade de amostra especificada na monografia e dissolver com 14 ml de gua. Alcalinizar, se necessrio, com hidrxido de sdio 2 M e diluir para 15 ml com gua. Preparao padro Transferir para tubo adequado 10 ml de soluo padro de amnio (1 ppm NH4) e diluir para 15 ml com gua. Procedimento Aos tubos contendo as preparaes padro e amostra adicionar 0,3 ml de iodeto de potssio mercrico alcalino. Tampar os tubos, homogeneizar e deixar em repouso por 5 minutos. Qualquer colorao amarela desenvolvida na preparao amostra no mais intensa que aquela observada na preparao padro. V.3.2.7 ENSAIO-LIMITE PARA CLCIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de carbonato de clcio Pesar, exatamente, 0,624 g de carbonato de clcio previamente dessecado, dissolver em gua contendo 3 ml de cido actico 5 M e diluir para 250 ml com gua.

Soluo padro de clcio (400 ppm Ca) Pesar, exatamente, 1 g de carbonato de clcio previamente dessecado, dissolver em 23 ml de cido clordrico M e diluir para 100 ml com gua. Imediatamente antes do uso, diluir 10 ml para 100 ml com gua. Soluo padro alcolica de clcio (100 ppm Ca) Pesar, exatamente, 2,5 g de carbonato de clcio previamente dessecado, dissolver em 12 ml de cido actico 5 M e diluir para 1000 ml com gua. Imediatamente antes do uso, diluir 10 ml para 100 ml com etanol. Soluo padro de clcio (100 ppm Ca) Diluir 10 ml da soluo estoque de carbonato de clcio para 100 ml com gua imediatamente antes do uso. Soluo padro de clcio (10 ppm Ca) Diluir 10 ml da soluo estoque de carbonato de clcio para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO Em tubo adequado, adicionar 1 ml de oxalato de amnio SR a 0,2 ml de soluo padro alcolica de clcio (100 ppm Ca). Aguardar 1 minuto e adicionar mistura de 1 ml de cido actico diludo e 15 ml da soluo da amostra especificada na monografia. Agitar. Preparar o padro da mesma maneira, utilizando mistura de 1 ml de cido actico diludo, 10 ml de soluo padro de clcio (10 ppm Ca) e 5 ml de gua. Aps 15 minutos, qualquer opalescncia desenvolvida na preparao amostra no mais intensa do que aquela obtida na preparao padro. V.3.2.8 ENSAIO-LIMITE PARA MAGNSIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo estoque de sulfato de magnsio Pesar, exatamente, 1,010 g de sulfato de magnsio heptaidratado, dissolver e diluir com gua para 100 ml. Soluo padro de magnsio (100 ppm Mg) Diluir 10 ml da soluo estoque de sulfato de magnsio para 100 ml com gua imediatamente antes do uso. Soluo padro de magnsio (10 ppm Mg) Diluir 10 ml da soluo estoque de sulfato de magnsio para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO Adicionar 0,1 g de tetraborato sdico a 10 ml da soluo da amostra especificada na monografia. Se necessrio, ajustar o pH da soluo na faixa de 8,8-9,2 utilizando cido clordrico SR ou hidrxido de sdio SR. Extrair com duas pores de 5 ml de hidroxiquinolina a 0,1% (p/V) em clorofrmio, agitando durante 1 minuto a cada extrao. Deixar decantar, separar e descartar a camada orgnica. Adicionar camada aquosa 0,4 ml de butilamina e 0,1 ml de trietanolamina. Se necessrio, ajustar o pH da soluo na faixa de 10,5-11,5. Adicionar 4 ml de hidroxiquinolina a 0,1% (p/V) em clorofrmio, agitar por 1 minuto e deixar separar as camadas. Utilizar a camada inferior para a comparao. Preparar o padro da mesma maneira utilizando mistura de 1 ml de soluo padro de magnsio (10 ppm Mg) e 9 ml de gua. Qualquer colorao desenvolvida na preparao amostra no mais intensa do que aquela obtida na preparao padro.

V.3.2.9 ENSAIO-LIMITE PARA MAGNSIO E METAIS ALCALINO-TERROSOS A 200 ml de gua adicionar 0,1 g de cloridrato de hidroxilamina, 10 ml tampo cloreto de amnio pH 10, 1 ml de soluo de sulfato de zinco 0,1 M e cerca de 15 mg de negro de eriocromo T triturado. Aquecer a cerca de 40 C e titular com edetato de sdio 0,01 M SV at viragem de violeta para azul. Adicionar soluo quantidade especificada da amostra dissolvida em 100 ml de gua ou soluo da amostra especificada na monografia. Se a colorao da soluo mudar para violeta, titular com edetato de sdio 0,01 M SV at a viragem para azul. O volume de edetato de sdio 0,01 M SV gasto na segunda titulao no excede o estabelecido na monografia. V.3.2.10 ENSAIO-LIMITE PARA ALUMNIO REAGENTES ESPECIAIS Soluo padro de alumnio (200 ppm Al) Pesar, exatamente, 0,352 g de sulfato de alumnio e potssio dodecaidratado, dissolver em gua, adicionar 10 ml de cido sulfrico diludo e diluir com gua para 100 ml. Soluo padro de alumnio (10 ppm Al) Pesar, exatamente, 1,39 g de nitrato de alumnio nonaidratado, dissolver e diluir com gua para 100 ml. Diluir 10 ml para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. Soluo padro de alumnio (2 ppm Al) Diluir 1 ml de soluo padro de alumnio (200 ppm) para 100 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO Transferir para funil de separao a soluo da amostra especificada na monografia e extrair com trs pores de hidroxiquinolina a 0,5% (p/V) em clorofrmio, sendo as duas primeiras pores de 20 ml e a ltima de 10 ml. Diluir os extratos clorofrmicos combinados para 50 ml com clorofrmio. Preparar o padro da mesma maneira utilizando a quantidade prescrita de soluo padro de alumnio. Preparar o branco da mesma maneira utilizando a soluo em branco especificada na monografia. Medir a intensidade da fluorescncia (V.2.15) da soluo amostra (I1), do padro (I2) e do branco (I3) utilizando o feixe de excitao em 392 nm e um filtro secundrio com a faixa de transmisso centrada em 518 nm ou com o monocromador ajustado para transmitir neste comprimento de onda. A fluorescncia (I1 I3) da preparao amostra no superior da preparao padro (I2 - I3). V.3.2.11 ENSAIO-LIMITE PARA FOSFATOS REAGENTES ESPECIAIS Soluo padro de fosfato (5 ppm PO4) Pesar, exatamente, 0,716 g de fosfato monobsico de potssio, dissolver e diluir com gua para 1000 ml. Diluir 10 ml para 1000 ml com gua imediatamente antes do uso. PROCEDIMENTO A 100 ml da soluo da amostra especificada na monografia adicionar 4 ml de reagente sulfomolbdico e agitar. Adicionar 0,1 ml de cloreto estanoso SR e agitar. Preparar o padro da mesma maneira utilizando mistura de 2 ml de soluo padro de fosfato (5 ppm PO4) e 98 ml de gua. Aguardar 10 minutos e comparar as cores utilizando 20 ml de cada preparao. A colorao da preparao amostra no mais intensa do que a da preparao padro.

V.3.2.12 ENSAIO-LIMITE PARA CHUMBO A determinao de chumbo em produtos farmacuticos pode ser realizada por dois mtodos. Para a determinao do contedo de metais pesados, geralmente expresso em chumbo equivalente, adotado o ensaio-limite (V.3.2.3). Para a determinao do chumbo extravel por ditizona, o ensaio descrito a seguir empregado. Selecionar todos os reagentes para este teste de modo a conter o mnimo de chumbo possvel e armazenar todas as solues reagentes em recipientes de vidro de borossilicato. Enxaguar toda a vidraria com soluo aquecida de cido ntrico 50% (V/V) e, em seguida com gua. REAGENTES ESPECIAIS Soluo de cianeto-amnia Dissolver 2 g de cianeto de potssio em 15 ml de hidrxido de amnio e diluir para 100 ml com gua. Soluo de citrato de amnio Dissolver 40 g de cido ctrico em 90 ml de gua. Acrescentar 2 ou 3 gotas de vermelho de fenol a 0,1% (p/V). Adicionar, cautelosamente, hidrxido de amnio at que a soluo adquira cor avermelhada. Remover qualquer chumbo eventualmente presente por meio de extrao com pores de 20 ml de soluo extratora de ditizona, at que a colorao laranja esverdeada na soluo de ditizona seja mantida. Soluo padro de chumbo (1 ppm Pb) Diluir um volume exatamente medido de soluo padro de chumbo (10 ppm Pb) (V.3.2.3) para 10 volumes com cido ntrico a 1% (V/V), de modo a obter soluo contendo o equivalente a 1 g de chumbo por mililitro (1 ppm Pb). Soluo extratora de ditizona Dissolver 30 mg de ditizona em 1000 ml de clorofrmio e acrescentar 5 ml de etanol. Armazenar em refrigerador. Imediatamente antes do uso, agitar volume adequado desta soluo com metade de seu volume de cido ntrico a 1% (V/V). Descartar a camada cida. Soluo de cloridrato de hidroxilamina Dissolver 20 g de cloridrato de hidroxilamina em gua para obter, aproximadamente, 65 ml. Transferir para funil de separao. Acrescentar 5 gotas de azul de timol a 0,1% (p/V) em etanol e adicionar hidrxido de amnio at que a soluo adquira cor amarela. Adicionar 10 ml de soluo aquosa de dietilditiocarbamato de sdio a 4% (p/V), agitar e deixar em repouso por 5 minutos. Extrair esta soluo com sucessivas pores de 10 a 15 ml de clorofrmio at que uma poro de 5 ml do extrato de clorofrmio no adquira cor amarela quando agitada com sulfato cprico a 12,5% (p/V). Adicionar cido clordrico 3 M at colorao rosa (se necessrio, adicionar 1 ou 2 gotas de azul de timol a 0,1% (p/V) em etanol) e diluir para 100 ml com gua. Soluo de cianeto de potssio Dissolver 50 g de cianeto de potssio em gua suficiente para 100 ml. Remover o chumbo desta soluo por meio de extrao com pores sucessivas de soluo extratora de ditizona, at que a colorao laranja esverdeada na soluo de ditizona seja mantida. Extrair qualquer ditizona que remanescente na soluo de cianeto agitando com clorofrmio. Diluir a soluo de cianeto com gua suficiente de modo que cada 100 ml contenham 10 g de cianeto de potssio. Soluo padro de ditizona Dissolver 10 mg de ditizona em 1000 ml de clorofrmio. Conservar em frasco isento de chumbo, munido com tampa de vidro, em refrigerador, adequadamente embalado para proteger da luz. PREPARAO AMOSTRA

Na ausncia de especificao na monografia, preparar a soluo da amostra como descrito a seguir. Nota: se a amostra reage muito rapidamente com o cido sulfrico e comea a fumegar antes do aquecimento, utilizar, no lugar de 5 ml de cido sulfrico, 10 ml de cido sulfrico a 50% (V/V) resfriado e acrescentar algumas gotas de perxido de hidrognio antes do aquecimento. Observar precaues de segurana neste procedimento, pois algumas substncias podem reagir com violncia explosiva quando tratadas com perxido de hidrognio. Transferir 1 g da amostra para frasco adequado, adicionar 5 ml de cido sulfrico, acrescentar algumas prolas de vidro e digerir em placa de aquecimento, em capela, at comear a fumegar. Outros meios de aquecimento adequados podem ser utilizados. Se necessrio, adicionar excesso de cido sulfrico para umedecer completamente a amostra, no ultrapassando um total de 10 ml. Adicionar, gota a gota e com precauo, perxido de hidrognio concentrado, permitindo o abrandamento da reao e aquecendo entre as adies. Adicionar as primeiras gotas aos poucos e muito lentamente, misturando cuidadosamente para prevenir reao rpida e interrompendo o aquecimento se ocorrer formao excessiva de espuma. Girar a soluo no frasco para permitir a reao da amostra aderida nas paredes (acrescentar perxido de hidrognio sempre que a mistura se tornar marrom ou escurecer). Continuar a reao at que a amostra seja completamente digerida, vapores de trixido de enxofre sejam abundantemente desprendidos e a soluo se torne incolor. Resfriar, adicionar, com cuidado, 10 ml de gua, evaporar at que o trixido de enxofre seja novamente despendido e resfriar. Repetir este procedimento com outros 10 ml de gua para remover qualquer trao de perxido de hidrognio. Diluir, cuidadosamente, com 10 ml de gua e resfriar. PROCEDIMENTO Transferir para funil de separao a preparao amostra, com auxlio de 10 ml de gua, ou o volume de soluo da amostra especificado na monografia. A menos que indicado de maneira diferente, acrescentar 6 ml de soluo de citrato de amnio e 2 ml de soluo cloridrato de hidroxilamina (para a determinao de chumbo em sais de ferro, utilizar 10 ml de soluo de citrato de amnio). Adicionar 2 gotas de vermelho de fenol a 0,1% (p/V) em etanol, adicionar hidrxido de amnio suficiente para alcalinizao (colorao vermelha) e homogeneizar. Resfriar a soluo, se necessrio, e acrescentar 2 ml de soluo de cianeto de potssio. Extrair, imediatamente, com pores de 5 ml de soluo extratora de ditizona, escoando cada extrato para outro funil de separao, at que a colorao verde da soluo de ditizona seja mantida. Agitar as fraes combinadas de ditizona durante 30 segundos com 20 ml de cido ntrico a 1% (V/V) e descartar a camada clorofrmica. Adicionar soluo cida 5 ml de soluo padro de ditizona, 4 ml de soluo de cianeto-amnia e agitar durante 30 segundos. A camada clorofrmica no apresenta colorao violeta mais intensa que a de um controle preparado com um volume de soluo padro de chumbo (1 ppm Pb) equivalente quantidade de chumbo permitida na substncia sob exame, empregando os mesmos volumes de reagentes e o mesmo tratamento utilizado para a soluo da amostra. V.3.4.10 ENSAIO IODOMTRICO DE ANTIBITICOS O ensaio iodomtrico de antibiticos destina-se ao doseamento de frmacos antibiticos penicilmicos e de seus produtos farmacuticos elaborados, para os quais a titulao iodomtrica particularmente adequada. PREPARAO PADRO Dissolver quantidade adequada, exatamente pesada, da substncia qumica de referncia (SQR) especificada na monografia individual, utilizando o solvente descrito na Tabela 1. Diluir, quantitativamente, com o mesmo solvente, de modo a obter soluo com concentrao final conhecida, especificada na Tabela 1. Transferir 2 ml desta soluo para erlenmeyer de 125 ml com tampa. PREPARAO AMOSTRA A menos que especificado de outra forma na monografia individual, dissolver quantidade adequada, exatamente pesada, da amostra, utilizando o solvente descrito na Tabela 1. Diluir, quantitativamente, com o mesmo solvente, de modo a obter soluo com concentrao final conhecida, especificada na Tabela 1. Transferir 2 ml desta soluo para erlenmeyer de 125 ml com tampa.

Tabela 1 Solventes e concentraes finais Antibitico Amoxicilina triidratada Ampicilina Ampicilina sdica Ampicilina triidratada Benzilpenicilina benzatina Benzilpenicilina potssica Benzilpenicilina procana Solvente* gua gua Soluo 1 gua Soluo 1 Soluo 1 Soluo 1 Concentrao final 1,00 mg/ml 1,25 mg/ml 1,25 mg/ml 1,25 mg/ml 2000 U/ml 2000 U/ml 2000 U/ml

Benzilpenicilina sdica 2000 U/ml Soluo 1 * A menos que especificado de outra forma, a Soluo 1 aquela definida na seo Solues em Ensaio microbiolgico de antibiticos (V.5.2.17), exceto que a esterilizao no necessria. PROCEDIMENTO Inativao e titulao A cada erlenmeyer contendo, respectivamente, 2 ml das preparaes padro e amostra, adicionar 2 ml de hidrxido de sdio M, homogeneizar com movimentos circulares e deixar em repouso por 15 minutos. Adicionar 2 ml de cido clordrico 1,2 M, 10 ml de iodo 0,005 M SV, tampar imediatamente e deixar em repouso por 15 minutos. Titular com tiossulfato de sdio 0,01 M SV. Prximo ao ponto final, adicionar 3 gotas de amido SI e prosseguir com a titulao at o desaparecimento da cor azul. Ensaios em branco Adicionar 10 ml de iodo 0,005 M SV a erlenmeyer de 125 ml contendo 2 ml da preparao padro. Se a preparao padro contiver amoxicilina ou ampicilina, adicionar imediatamente 0,1 ml de cido clordrico 1,2 M. Titular imediatamente com tiossulfato de sdio 0,01 M SV. Prximo ao ponto final, adicionar 3 gotas de amido SI e prosseguir com a titulao at o desaparecimento da cor azul. Proceder de forma similar para erlenmeyer contendo 2 ml da preparao amostra. Clculos Calcular o fator de equivalncia (F), em g ou Unidades, para cada mililitro de tiossulfato de sdio 0,01 M SV consumido pela preparao padro segundo a equao:

F=
em que

2(C P PP ) (B P I P )

CP = concentrao, em mg/ml, da substncia qumica de referncia na preparao padro; PP = potncia, em g/mg ou Unidades/mg, da substncia qumica de referncia; BP = volume de titulante, em ml, consumido no Ensaio em branco da preparao padro; IP = volume de titulante, em ml, consumido na Inativao e titulao da preparao padro. Calcular a potncia da amostra ou a quantidade de antibitico penicilmico no medicamento segundo a equao indicada na monografia individual. V.4 MTODOS DE FARMACOGNOSIA V.4.1 EXAME VISUAL E INSPEO MICROSCPICA V.4.1.1 EXAME VISUAL, ODOR E SABOR

A identidade, pureza e qualidade de um material vegetal devem ser estabelecidas mediante detalhado exame visual, macroscpico e microscpico. Sempre que possvel, o material vegetal deve ser comparado com matria-prima autntica, oriunda de amostra perfeitamente identificada na Farmacopia. A amostra que no for semelhante em cor, consistncia, odor e sabor deve ser descartada por no apresentar os requisitos mnimos especificados nas monografias. A identificao macroscpica das drogas, quando inteiras, baseada na forma, tamanho, cor, superfcie, textura, fratura e aparncia da superfcie de fratura. Em virtude de essas observaes serem subjetivas e existirem adulterantes muito parecidos, necessrio realizar, ao mesmo tempo, anlises microscpica e fsico-qumica da amostra. A inspeo microscpica indispensvel quando o material estiver rasurado ou em p. Tamanho Medidas de comprimento, largura e espessura devem coincidir com aquelas citadas nas monografias. Frutos e sementes pequenos exigem uma amostra igual a 10 unidades e posteriores clculos da mdia e do desvio padro. Cor Examinar a matria-prima antes de qualquer tratamento, luz do dia ou sob lmpadas de comprimento de onda similares aos da luz do dia. A cor da amostra deve ser comparada com o material de referncia. Superfcie, textura e fratura Examinar a matria-prima antes de qualquer tratamento. Quando necessrio, utilizar lente de 5 at 10 aumentos. Quando indicado na monografia, umedecer com gua ou reagente especificado para observar caractersticas da superfcie de fratura. Tocar o material para verificar se macio ou duro, dobrar e partir o material para a obteno de informaes quanto fragilidade e aparncia da fratura, se fibrosa, lisa, rugosa, granulada, entre outras. Odor Antes de verificar o odor do material, certificar-se de que no existe risco. Colocar uma pequena amostra na palma da mo ou em recipiente de vidro e inalar devagar e repetidamente. Se o odor for indistinto, pressionar parte do material entre os dedos e inalar novamente. Quando a monografia indicar material txico, colocar um pouco de material esmagado em gua quente. Primeiramente, determinar a intensidade do odor: nenhum, fraco, distinto ou forte e, a seguir, a sensao causada pelo odor: aromtico, frutoso, mofado ou ranoso. Quando possvel, importante a comparao do odor com substncia definida, como, por exemplo, hortel-pimenta deve ter odor similar ao mentol e cravo-da-ndia, similar ao eugenol. Sabor Testar o sabor apenas quando exigido na monografia. V.4.1.2 PREPARAO DO MATERIAL PARA ANLISE MICROSCPICA AMOLECIMENTO DO MATERIAL Como normalmente os rgos e tecidos vegetais empregados se apresentam secos, para serem observados ao microscpio, conveniente primeiro amolec-los mediante tratamento com gua quente. O tempo necessrio para o amolecimento de cada rgo vegetal varia de acordo com a sua textura. Tratandose de rgo recm-colhido, apenas os de consistncia mais firme necessitam de tal tratamento. Mtodo de hidratao para materiais secos Colocar a amostra em soluo de hidratao, preparada com 5 partes de gua, 4 partes de etanol, uma parte de glicerina e 5 gotas de detergente comercial para cada 200 ml de soluo, em estufa a 60 C, no mnimo por 48 horas.

EXECUO DOS CORTES Uma vez amolecidos, proceder preparao dos cortes dos rgos vegetais a serem observados. Os cortes podem ser realizados com o auxlio de objeto cortante como navalha, lmina de barbear ou bisturi. Incluir a amostra em material adequado que permita fixar o fragmento, a fim de ser seccionado. Cortes melhores e mais precisos podem ser obtidos com o emprego de micrtomos. H, basicamente, trs tipos de micrtomos: os de congelamento, usados para os materiais mais frgeis; os rotativos, para cortes em srie de material includo em parafina; e os de guia, para aqueles materiais mais resistentes, como ramos, partes de caules e de razes. Neste ltimo caso, um mtodo relativamente fcil de preparo do material a ser cortado consiste em sua incluso em macrogol solvel em gua ou em historresina. Incluso do material em parafina Ferver a amostra em gua, quando seca, para amolecer e retirar o ar; desidratar a amostra em srie de etanol diludo em gua: 50, 70, 80, 96% e, por ltimo, em etanol absoluto; transferir a amostra para mistura de etanol absoluto e xilol na proporo 3:1 (V/V) e, a seguir, para 1:1 e 1:3; transferir a amostra para xilol puro; transferir a amostra para xilol em parafina na proporo 1:1, mantendo-a em estufa; transferir a amostra para parafina aquecida, para que ocorra a infiltrao, mantendo-a na estufa at que permanea depositada no fundo do recipiente; emblocar e deixar esfriar em recipiente com gua gelada; aparar o bloco para introduo no micrtomo; cortar o material e colocar em lmina de vidro previamente untada com adesivo de Haupt ou Bissing; colocar as lminas sobre placa aquecedora para distender os cortes; desparafinizar; aguardar, no mnimo, uma hora antes de corar. Incluso do material em macrogol (polietilenoglicol PEG 4000 ou PEG 6000) Ferver a amostra em gua, quando seca, para amolecer e retirar o ar; colocar a amostra em bquer, contendo macrogol a 20% (p/V); marcar o bquer, a partir da superfcie do lquido, dividindo-o em cinco partes aproximadamente iguais; deixar o material em estufa a 65 C por 3 a 4 dias; quando a soluo evaporar at 1/5 de seu volume inicial, transferir a amostra para macrogol puro e fundido onde deve permanecer durante 12 a 25 horas, em estufa a 65C; retirar da estufa, emblocar e deixar esfriar temperatura ambiente; aparar os blocos para introduo no micrtomo; cortar o material a seco; lavar os cortes com gua e corar.

Incluso em historresina Existem diferentes marcas de historresina no mercado, comercializadas em kits, sendo a metodologia para emblocamento caracterstica de cada fabricante. Obedecer ao manual de instrues. Todas contm trs elementos principais: uma resina, um agente endurecedor e um agente acelerador ou catalisador. A mistura e temperatura devem seguir as especificaes, para que haja completa interao, obtendo-se como produto final um polmero. Os materiais vegetais devem ser previamente fixados e desidratados. Sugere-se que as seces a serem emblocadas sejam imersas na resina durante uma noite, para que haja completa infiltrao. S aps, substituir a resina de infiltrao pela mistura de nova poro de resina, agente endurecedor e agente acelerador. A resina de infiltrao pode ser reutilizada por duas a quatro vezes, devendo ento ser descartada. Os cortes so colocados sobre as lminas sem adesivo. Corar. MTODOS DE COLORAO Os mtodos de colorao podem compreender a aplicao de um s corante (colorao simples) ou de dois ou trs corantes diferentes (colorao composta).

Colorao simples (alguns corantes que podem ser usados) Soluo de safranina a 1% (p/V) em etanol: colorao de cutina, lignina e suberina. Soluo de Fast Green a 0,5% (p/V) em etanol: colorao de celulose. Azul de Astra a 1% (p/V) em etanol: colorao de compostos pcticos da lamela mdia e parede. Soluo de floroglucina a 1% em etanol: colorao de lignina.

Colorao composta (algumas misturas de corantes que podem ser usadas) Safranina-Azul de Astra: colore a lignina de vermelho e a celulose de azul. Colocar a amostra em safranina aquosa a 1% (p/V) por 5 a 25 minutos. Lavar duas vezes com gua destilada. Colocar em Azul de Astra por 10 a 25 minutos. Lavar duas vezes com gua destilada. Passar por bateria de etanol a 50%, 70%, 90%, 96%, e etanol absoluto (duas vezes), xilol. Montar em lminas com blsamo do Canad ou resina sinttica. Safranina-Fast Green: colore a lignina de vermelho e a celulose de verde. No desparafinizar as lminas. Colocar em safranina aquosa a 1% (p/V) por 10 a 20 minutos (ou mais). Lavar em gua corrente. Colocar em gua destilada por 1 minuto. Escorrer a gua da lmina. Colocar em Fast Green a 0,5% (p/V) em etanol por 10 a 40 minutos. Lavar em gua corrente. Colocar em gua destilada por 1 minuto. Repetir a operao. Escorrer a gua da lmina. Secar em placa aquecedora por 30 minutos. Remover a parafina com xilol em duas trocas de 5 minutos. Montar em lminas com blsamo do Canad ou resina sinttica. PREPARO E MONTAGEM DAS LMINAS Os cortes histolgicos so montados, entre lmina e lamnula, em gua, glicerol, hidrxido de potssio a 30% (p/V), hidrato de cloral a 50% (p/V), ou outro lquido qualquer que permita a observao. O glicerol mais usado nos estudos microqumicos de mucilagens, goma, inulina e aleurona. O hidrxido de potssio agente diafanizador, tendo ao sobre protenas, amido, gordura, resinas e matrias corantes. O hidrato de cloral tambm agente diafanizador e, embora de ao mais lenta que os hidrxidos alcalinos, tem a vantagem de no dissolver o oxalato de clcio. Dependendo da finalidade a que se destina, podem-se montar os cortes em lminas para observao imediata ou em lminas ditas permanentes. Nas preparaes para observao imediata, depois de selecionados e corados, montam-se os cortes em meio adequado, tomando-se o cuidado de evitar a formao de bolhas de ar. Se o exame promete ser mais prolongado, recomenda-se revestir os bordos da lamnula de um luto (selo), que pode ser esmalte de unhas, blsamo do Canad ou soluo alcolica de goma-laca, para evitar a evaporao do meio de montagem, todos eles aplicveis com o auxlio de pincel macio e pequeno. Nas preparaes permanentes, depois de selecionados e corados, os cortes devem ser montados entre lmina e lamnula, com resina sinttica, blsamo do Canad ou outro meio conveniente. Deve-se manter a montagem comprimida por meio da aplicao de pequenos pesos sobre a lamnula, em posio perfeitamente horizontal e sobre papel de filtro, com a finalidade de evitar possveis extravasamentos do meio de montagem. MACERAO DOS TECIDOS Seces de caules, razes, cascas ou outras partes vegetais nem sempre do idia precisa da natureza real de suas clulas. O mesmo acontece com matria-prima comercializada, quando rasurada ou em p. Para se revelar algumas particularidades, como, por exemplo, espessamentos e pontuaes, deve-se empregar um dos mtodos indicados para a dissociao de tecidos. Nesses mtodos, a estrutura a ser estudada tratada com substncias qumicas capazes de dissolver a lamela mdia e, desta forma, permitir a separao das clulas. Mtodo de dissociao de tecidos Cortar o material em pequenos fragmentos ou em fatias com cerca de 300 nm de espessura e colocar em gua;

 retirar todo o ar do material, fervendo e resfriando rapidamente; macerar o material em soluo de Jeffrey. O tempo de macerao varia com a natureza do material. Geralmente as clulas comeam a se separar em cerca de 24 horas. Se necessrio, pode ser usado basto de vidro de ponta arredondada para amassar muito levemente o material. Havendo dificuldade na separao das clulas, renovar a soluo maceradora; lavar muito bem o material com gua de torneira, para remover os cidos. Verter a mistura com o tecido macerado para um funil contendo papel de filtro; fechar a abertura inferior do funil e cobrir o macerado com soluo aquosa de safranina a 1% (p/V), durante tempo suficiente para boa colorao do material (de 15 minutos a 6 horas); abrir a ponta do funil e lavar novamente com gua, at retirar o excesso de corante; desidratar pela adio de solues de etanol a 50%, 70%, 90% e etanol absoluto; retirar com pina o macerado do papel de filtro e colocar em xilol; montar entre lmina e lamnula, com resina sinttica ou blsamo do Canad; manter a lmina em posio horizontal, porm no utilizar peso sobre a lamnula, pois as clulas maceradas so muito frgeis. OBSERVAO DA EPIDERME FOLIAR E NDICE ESTOMTICO Separao da epiderme com soluo de Jeffrey Para obter epiderme foliar, seccionar pequenos pedaos de folha e coloc-los em soluo de Jeffrey diluda em gua destilada a 50% (V/V), tampar o recipiente e deixar de 12 a 48 horas, de acordo com a textura da folha (a soluo atacar o mesofilo, deixando a epiderme isolada); quando o mesofilo estiver destrudo, lavar as amostras vrias vezes com gua destilada; colocar uma amostra sobre lmina, seccionar entre as epidermes e colocar as duas partes de forma que as faces externas estejam voltadas para cima; corar o material sobre a lmina com soluo etanlica de safranina a 1% (p/V); preparar a lmina com gelatina glicerinada e selar. Separao da epiderme com hidrato de cloral Usar fragmentos de folhas de cerca de 0,5 cm de largura por 0,5 cm de comprimento; colocar os fragmentos em um tubo de ensaio, adicionando 5 ml de hidrato de cloral, aquecer em banhomaria por cerca de 15 minutos ou at que os fragmentos fiquem transparentes; transferir os fragmentos para uma lmina, cuidando para que a face abaxial fique disposta para cima; adicionar uma gota de hidrato de cloral e uma gota de etanol glicerinado e cobrir com lamnula para impedir a desidratao. Selar. REAES HISTOQUMICAS As reaes podem ser feitas com material fresco seccionado ou material cortado em micrtomo e includo em parafina ou macrogol, adicionando-se uma gota dos reativos sobre uma lmina com uma seco da amostra. Amido. Adicionar uma gota de Reativo de Lugol SR. O amido adquire colorao azul ou azul-violeta. Carbonato de clcio. Adicionar cido actico a 6% (p/V) ou cido clordrico a 7% (p/V). Cristais ou depsitos de carbonato de clcio dissolvem-se lentamente, com produo de efervescncia. Hidroxiantraquinonas. Adicionar uma gota de hidrxido de potssio a 5% (p/V). As clulas que contm 1,8-diidroxiantraquinonas coram de vermelho. Inulina. Adicionar 1 gota de 1-naftol e cido sulfrico. Esferocristais de inulina coram-se de roxoavermelhado e se dissolvem. Lignina. Adicionar 1 gota de floroglucina SR, aquecer rapidamente a lmina e adicionar uma gota de cido clordrico a 25% (p/V). A lignina cora-se de vermelho.

Lipdios. Adicionar Sudan III ou IV por 10 minutos, lavar rapidamente com etanol a 70% (V/V). Lipdios, cutina e suberina coram-se de laranja-avermelhado. Mucilagens. Adicionar 1 gota de tinta nanquim sobre amostra seca. A mucilagem aparece como fragmentos esfricos dilatados e transparentes sobre um fundo negro. A caracterizao tambm pode ser realizada pela adio de 1 gota de tionina SR amostra seca, deixando repousar por 15 minutos, seguida de lavagem em etanol a 20% (V/V). A mucilagem toma-se violeta-avermelhada (lignina e celulose coram-se de azul ou azul-violeta). Oxalato de clcio. Cristais de oxalato de clcio so insolveis em cido actico a 6% (p/V) e solveis em cido clordrico a 7% (p/V), sem produzir efervescncia. Protenas. Adicionar ninidrina a 0,5% (p/V) em etanol absoluto, e manter a 37 C por 24 horas. Lavar em etanol absoluto e em gua destilada, adicionar Reagente de Schiff SR e deixar em contato por 10 a 30 minutos. Lavar em gua e adicionar bissulfito de sdio a 2% (p/V), deixar em contato por 1 a 2 minutos. Lavar em gua corrente por 10 a 20 minutos, desidratar e montar a lmina. As protenas coram-se de vermelho prpura. Realizar este procedimento somente com material fresco. Saponinas. Adicionar uma gota de cido sulfrico. Ocorre uma seqncia de cor amarela, seguida de cor vermelha e, finalmente, cor violeta ou azul-esverdeada. Taninos. Adicionar cloreto frrico a 10% (p/V) e uma pequena quantidade de carbonato de sdio, deixar em contato por 2 a 3 minutos, lavar com gua destilada. Os taninos coram-se de azul-esverdeado. ANLISE DO P (IDENTIFICAO DE MATRIA-PRIMA COMERCIALIZADA EM P) Colocar 1 ou 2 gotas de gua, ou glicerol-etanol (1:1) ou hidrato de cloral em uma lmina; acrescentar um pouco do p e misturar com uma agulha histolgica; cobrir com lamnula e observar ao microscpio; outros fluidos podem ser usados com a mesma tcnica; corantes ou reaes histoqumicas podem ser utilizados.

________________________________________________________________________________ XII.2 REAGENTES E SOLUES REAGENTES Soluo de Jeffrey Preparao Misturar partes iguais de cido ntrico a 10% (p/V) e cido crmico a 10% (p/V). Gelatina glicerinada Preparao Dissolver 1 g de gelatina em 100 ml de gua aquecida temperatura no superior a 30 C. Acrescentar 1 ml de salicilato de sdio a 2% (p/V) e 15 ml de glicerina; agitar bem e filtrar a mistura aquecida em l de vidro. Etanol glicerinado Preparao Misturar 20 ml de glicerina e 80 ml de etanol a 70% (V/V). Reativo de Lugol SR Preparao Dissolver 1 g de iodeto de potssio em 100 ml de gua, acrescentar 1 g de iodo, agitar, deixar em repouso por algumas horas e filtrar em l de vidro. Conservar em frasco mbar. Floroglucina SR Preparao Dissolver 1 g de floroglucinol em etanol e diluir para 100 ml com o mesmo solvente. Sudan III Preparao Dissolver 0,5 g de Sudan III em 100 ml de etanol 80%, aquecido a 60C, esfriar e filtrar. Sudan IV Preparao Dissolver 2 g de Sudan IV em 100 ml de etanol a 92% (V/V) aquecido a 60 C, esfriar, filtrar e adicionar 5 ml de glicerina. Tionina SR

Preparao Adicionar 1 g de tionina a 2,5 g de fenol e completar o volume de 100 ml com gua. Reagente de Schiff Preparao Dissolver 1 g de fucsina bsica e 1,8 g de metabissulfito de sdio em 100 ml de cido clordrico a 0,15 M. Agitar ocasionalmente at que a soluo fique amarelo-clara ou marrom-clara. Adicionar 0,5 g de carvo recm-ativado, agitar por 1 a 2 minutos e filtrar, lavando o resduo com gua para restaurar o volume de 100 ml original. V.4.1.3 DETERMINAO DO NDICE DE ESTMATOS ESTMATOS Os tipos de estmatos (ver figura), que se distinguem pela forma e disposio das clulas que os rodeiam, so: 1) O tipo anomoctico (clulas irregulares), o qual se caracteriza por estarem os estmatos rodeados por um nmero varivel de clulas que no diferem, em geral, em nenhuma caracterstica das outras clulas da epiderme. 2) O tipo anisoctico (clulas desiguais), em que os estmatos esto normalmente rodeados por 3 clulas anexas, uma delas nitidamente menor que as outras.

3) O tipo diactico (clulas transversais), em que os estmatos esto acompanhados por 2 clulas anexas cujas paredes comuns formam um ngulo reto com as clulas guardas dos estmatos. 4) O tipo paractico (clulas paralelas), em que os estmatos apresentam de cada lado uma ou vrias clulas anexas paralelas ao eixo longitudinal do ostolo e clulas guardas dos estmatos. NDICE DE ESTMATOS O ndice de estmatos calculado segundo a equao 100S / (E + S), sendo S o nmero de estmatos em uma rea determinada da superfcie da folha e E o nmero de clulas epidrmicas, incluindo os tricomas, existentes na mesma superfcie da folha. Para cada amostra de folhas, efetuar e calcular a mdia de, no mnimo, 10 determinaes. V.4.2 MTODOS DE ANLISE DE DROGAS VEGETAIS V.4.2.1 AMOSTRAGEM Os procedimentos de amostragem especificados levam em considerao trs aspectos: (a) nmero de embalagens que contm a droga; (b) grau de diviso da droga e (c) quantidade de droga disponvel. NMERO DE EMBALAGENS

Examinar a integridade dos recipientes de embalagem e a natureza da droga neles contida. Havendo homogeneidade, recolher amostras segundo o esquema a seguir. Nmero de embalagens 1a3 4 a 10 11 a 20 21 a 50 51 a 80 81 a 100 Mais de 100 Nmero de embalagens a serem amostradas Todos 3 5 6 8 10 10% do total de embalagens

GRAU DE DIVISO E QUANTIDADE DE DROGA Consistindo a droga de componentes de dimenses inferiores a 1 cm ou quando ela se constituir de material finamente fragmentado ou pulverizado, empregar aparelho de amostragem (tubo provido de dispositivo de fechamento na base). Recolher amostras de cima para baixo e de baixo para cima (direo vertical) e lateralmente (direo horizontal), perfazendo amostra de, no mnimo, 250 g para at 100 kg de droga. Havendo mais de 100 kg a amostrar, proceder amostragem seguida de seleo por quarteamento, gerando amostra de 250 g no final do processo. Para drogas com dimenses superiores a 1 cm, proceder amostragem manual. Combinar as amostras retiradas de cada embalagem aberta, tomando a precauo de no aumentar seu grau de fragmentao durante a manipulao. Para quantidades de droga at 100 kg, a amostra deve constituir-se de, no mnimo, 500 g. Havendo mais de 100 kg de droga a amostrar, proceder amostragem seguida de seleo por quarteamento, gerando amostra de 500 g no final do processo. Em ambos os casos (drogas com dimenses inferiores ou superiores a 1 cm), permissvel amostrar quantidades inferiores s especificadas acima desde que a quantidade total de droga disponvel seja inferior a 10 kg. Todavia, a amostra final no dever ser inferior a 125 g. QUARTEAMENTO Distribuir a droga sobre rea quadrada, dividida em quatro partes iguais. Com a mo distribuir a droga sobre a rea de modo homogneo e rejeitar as pores contidas em dois quadrados opostos, em uma das diagonais do quadrado. Juntar as duas pores restantes e repetir o processo, se necessrio. Havendo diferena acentuada em dimenses de fragmentos, executar separao manual e anotar as porcentagens aproximadas dos componentes de diferentes graus de diviso encontrados na amostra. V.4.2.2 DETERMINAO DE MATRIA ESTRANHA Matria estranha droga classificada em trs tipos: (a) partes do organismo ou organismos dos quais a droga deriva, excetuados aqueles includos na definio e descrio da droga, acima do limite de tolerncia especificado na monografia; (b) quaisquer organismos, pores ou produtos de organismos alm daqueles especificados na definio e descrio da droga, em sua respectiva monografia; e (c) impurezas de natureza mineral ou orgnica, no-inerentes droga. PROCEDIMENTO Determinar a quantidade de amostra a ser submetida ao ensaio conforme especificado a seguir. Razes, rizomas, cascas, planta inteira e partes areas: 500 g Folhas, inflorescncias, sementes e frutos: 250 g Materiais particulados ou fracionados (peso mdio inferior a 0,5 g/componente): 50 g Ps: 25 g

Colher, por quarteamento, a quantidade de amostra especificada, a partir da amostra obtida, segundo o procedimento descrito anteriormente, e espalh-la em camada fina sobre a superfcie plana. Separar, manualmente os materiais estranhos droga, inicialmente a olho nu e, em seguida, com auxlio de lente de aumento (5 a 10 vezes). Pesar o material separado e determinar sua porcentagem com base no peso da amostra submetida ao ensaio.

V.4.2.3 DETERMINAO DE GUA EM DROGAS VEGETAIS Trs mtodos so empregados: gravimtrico (dessecao), azeotrpico (destilao com tolueno) e volumtrico (Karl Fischer). O primeiro, tecnicamente mais simples e rpido, no aplicvel quando a droga contm substncias volteis. Os demais requerem equipamentos especiais e compreendem tcnicas mais complexas. PREPARO DA AMOSTRA Reduzir por corte, granulao ou fragmentao drogas no pulverizadas ou trituradas de forma a limitar a dimenso de seus componentes a, no mximo, 3 mm de espessura. Sementes e frutos, mesmo de dimenses inferiores a 3 mm, devem ser quebrados. Evitar moinhos de alta velocidade ou outros procedimentos que acarretem perda de umidade da amostra. Mtodo gravimtrico Transferir cerca de 2 a 5 g, ou o especificado na monografia, exatamente pesados, de amostra preparada conforme instrues anteriores, para pesa-filtro tarado, previamente dessecado nas mesmas condies a serem adotadas para a amostra, durante 30 minutos. Dessecar a amostra a 100-105 C durante 5 horas, at peso constante. Calcular a porcentagem de gua em relao droga seca ao ar. Mtodo volumtrico Proceder conforme descrito em Determinao de gua (V.2.20.1). Mtodo azeotrpico Proceder conforme descrito em Determinao de gua (V.2.20.2). V.4.2.4 DETERMINAO DE CINZAS TOTAIS As cinzas totais incluem cinzas fisiolgicas e de materiais estranhos e cinzas no-fisiolgicas. PROCEDIMENTO Pesar, exatamente, cerca de 3 g da amostra pulverizada, ou a quantidade especificada na monografia, transferir para cadinho (de silcio ou platina) previamente tarado. Distribuir a amostra uniformemente no cadinho e incinerar aumentando gradativamente a temperatura at, no mximo, 600 25 C, at que todo o carvo seja eliminado. Um gradiente de temperatura (30 minutos a 200 C, 60 minutos a 400 C e 90 minutos a 600 C) pode ser utilizado. Resfriar em dessecador e pesar. Nos casos em que o carvo no puder ser eliminado totalmente, resfriar o cadinho e umedecer o resduo com cerca de 2 ml de gua ou soluo saturada de nitrato de amnio. Evaporar at secura em banho-maria e, em seguida, sobre chapa quente, e incinerar at peso constante. Calcular a porcentagem de cinzas em relao droga seca ao ar. V.4.2.5 DETERMINAO DE CINZAS INSOLVEIS EM CIDO Cinzas insolveis em cido compreendem o resduo obtido na fervura de cinzas totais ou sulfatadas com cido clordrico diludo, aps filtragem, lavagem e incinerao. O mtodo destina-se determinao de slica e constituintes silcicos da droga. PROCEDIMENTO Ferver o resduo obtido na determinao de cinzas totais durante 5 minutos com 25 ml de cido clordrico a 7% (p/V) em cadinho coberto com vidro de relgio. Lavar o vidro de relgio com 5 ml de gua quente, juntando a gua de lavagem ao cadinho. Recolher o resduo insolvel em cido sobre papel de filtro isento de cinza, lavando-o com gua quente at que o filtrado se mostre neutro. Transferir o papel de filtro contendo o resduo para o cadinho original, secar sobre chapa quente e incinerar a cerca de 500 C at peso constante. Calcular a porcentagem de cinzas insolveis em cido em relao droga seca ao ar.

V.4.2.6 DETERMINAO DE LEOS ESSENCIAIS EM DROGAS VEGETAIS O teor de leos essenciais em drogas vegetais determinado pelo processo de destilao por arraste de vapor, com auxlio de equipamento descrito a seguir. O equipamento (Figura), confeccionado em vidro resistente, de qualidade apropriada, compreende:

1) balo de fundo redondo de 500 ml a 1000 ml de capacidade, de colo curto, provido de uma junta 24/40, fmea; 2) condensador, adaptvel ao balo por meio de uma junta esmerilhada 24/40, macho, construdo em pea nica de vidro, compreendendo as partes descritas a seguir, com as respectivas medidas: 2.1) tubo vertical (AC) de 210 a 260 mm de comprimento e 13-15 mm de dimetro interno; 2.2) tubo dobrado, com segmentos (CD) e (DE) medindo 145-155 mm de comprimento cada e dimetro interno de 7-8 mm; 2.3) condensador de bolas, tipo Allihn (FG), de 145-155 mm de comprimento e dimetro interno de 15 mm nas bolas e 8-10 mm nos estreitamentos; 2.4) rolha (junta esmerilhada 14/20) (K) que obtura uma sada lateral (K) provida de junta esmerilhada 14/20 fmea, na extremidade; 2.5) tubo (GH) de 30-40 mm de comprimento e 7-8 mm de dimetro interno, formando as partes (HK) ngulo (GHK) de 30 a 40; 2.6) alargamento em forma de pra (J) de 3 ml de capacidade; 2.7) tubo (JL) provido de escala graduada de 100-110 mm, de 3 ml de capacidade e subdividida em vigsimos de mililitro; 2.8) alargamento em forma de bola (L) de aproximadamente 2 ml de capacidade; 2.9) torneira de 3 vias; 2.10) tubo de conexo (BM) de 7-8 mm de dimetro, provido de tubo de segurana. O ponto de insero (B) encontra-se a 20-25 mm acima da parte mais alta da escala graduada; 3) fonte de calor que pode ser aquecedor eltrico ou bico de gs dotado de regulagem fina da chama; 4) suporte vertical adequado.

Antes da utilizao, o aparelho deve ser limpo por lavagens repetidas e sucessivas com acetona, gua, mistura sulfocrmica e novamente gua. Depois de seco, deve ser montado em local protegido de correntes de ar. A escala graduada deve ser aferida e, se necessrio, estabelecer fator de correo para cada aparelho. PROCEDIMENTO Introduzir no balo o volume do lquido indicado na monografia e fragmentos de porcelana porosa ou contas de vidro para regularizar a ebulio. Adaptar o condensador ao balo. Retirar a rolha esmerilhada (K) e, pela abertura (K), introduzir a gua at que esta comece a escorrer em (B). Com auxlio de pipeta volumtrica, introduzir xilol, na quantidade prescrita, apoiando-se a ponta da pipeta no fundo da sada lateral (K). Aquecer o lquido no interior do balo at o incio da ebulio e destilar na razo de 2 a 3 ml por minuto, ou conforme prescrito na monografia. Para determinar a velocidade da destilao, escoar a gua com auxlio de torneira de trs vias, at que o menisco esteja no nvel do trao de referncia inferior (Figura abaixo). Fechar a torneira e cronometrar o tempo necessrio para encher o volume compreendido entre os traos de referncia inferior e superior (3 ml). Abrir a torneira e continuar a destilao por 30 minutos. Desligar o aquecimento, deixar esfriar por 10 minutos e fazer a leitura do volume de xilol no tubo graduado.

Introduzir no balo a quantidade de droga prescrita na monografia e destilar por arraste de vapor, como descrito acima, pelo tempo e na velocidade indicada na monografia. Terminada a operao, deixar esfriar por 10 minutos e ler o volume do leo essencial recolhido no tubo graduado. Subtrair da leitura o volume do xilol determinado anteriormente. A diferena representa a quantidade de leo essencial contida na amostra. Calcular o resultado em mililitros de leo essencial por 100 g da droga. V.4.2.7 DETERMINAO DE LEOS FIXOS A determinao de leos fixos baseia-se na sua extrao por solvente que, depois de evaporado, deixa como resduo o leo cuja quantidade determinada por pesagem. Caso a amostra contenha teor elevado de componentes hidrossolveis (carboidratos, uria, cido ltico, entre outros), cabe pr-tratamento da amostra a fim de evitar interferncia na determinao de matrias graxas. Para tanto, transferir a tomada de ensaio para funil contendo papel de filtro, lavar com gua e secar o resduo em estufa a 105 C durante 2 horas. Empregar o aparelho de Soxhlet (Figura). O equipamento, confeccionado em vidro resistente, de qualidade apropriada, compreende balo de fundo redondo (A), com 500 ml a 1000 ml de capacidade, conectado ao extrator Soxhlet (B) e condensador de refluxo (C).

Antes da utilizao, o aparelho deve ser limpo por lavagens repetidas e sucessivas com acetona, gua, mistura sulfocrmica e, novamente, gua. Depois de seco, deve ser montado em local protegido de correntes de ar. PROCEDIMENTO Transferir, exatamente, cerca de 10 g de droga previamente dessecada conforme descrito em Determinao de gua em drogas vegetais (V.4.2.3), Mtodo gravimtrico, e transferir para aparelho extrator de Soxhlet (B), cobrindo-a com algodo desengordurado. Pesar o balo (A) limpo e seco (contendo fragmentos de porcelana ou contas de vidro) e mont-lo no aparelho sobre banho-maria, tomando a precauo de assegurar vedao na junta esmerilhada do balo (recomenda-se operao em capela). Transferir para o extrator ter de petrleo em quantidade suficiente para realizar trs sifonagens e encaixar o condensador de refluxo (C). Proceder extrao sob aquecimento suficiente para manter o solvente em ebulio moderada durante 4 horas. Concluda a extrao, aguardar esfriamento, transferir o contedo do cartucho para almofariz de porcelana e juntar quantidade aproximadamente igual de areia lavada e seca. Pulverizar a droga e transferila novamente, no interior do cartucho, para o extrator. Reiniciar e manter a extrao nas condies acima por perodo adicional de 2 horas. Desconectar o balo do aparelho e evaporar o solvente (de preferncia por destilao sob corrente de dixido de carbono). Transferir o balo para estufa a 105 C, resfriar e pesar. Repetir a operao at peso constante. Calcular a porcentagem de leos fixos na droga com base na massa de droga pesada e na massa de leo obtida. V.4.2.8 DETERMINAO DE 1,8-CINEOL EM LEOS ESSENCIAIS A determinao de cineol compreende a determinao do ponto de congelamento (criometria) do composto de combinao molecular entre cineol e o-cresol-cresineol. Sendo esta temperatura proporcional ao contedo de cineol no composto, possvel estabelecer-se seu teor pela tabela a seguir. O mtodo empregado na dosagem de cineol em essncias de eucalipto e niauli. Determinaes em outras essncias no so recomendadas sem comprovao prvia de exatido em vista de alguns constituintes do leo essencial solubilizarem o cresineol (mesmo na essncia de eucalipto, h riscos de erro quando o contedo de alfa-terpineol for superior a 12,5%).

Erros tambm advm da presena de umidade, seja na essncia ou no o-cresol. O o-cresol empregado deve ser puro e seco, apresentando ponto de fuso superior a 30 C. Deve ser conservado em frasco hermtico, por ser higroscpico. PROCEDIMENTO Secar a amostra do leo essencial em ensaio, agitando-a com sulfato de sdio ou cloreto de clcio, ambos anidros, em tubo de ensaio ou erlenmeyer provido de tampa esmerilhada. Deixar em contato durante 24 horas e filtrar. Transferir para tubo de ensaio (cerca de 15 mm de dimetro e 80 mm de altura) 3,0 g de leo essencial, exatamente pesados, e adicionar 2,1 g de o-cresol em sobrefuso. Agitar a mistura com bulbo de termmetro (0-60 C, graduado em dcimos de grau) suspenso sobre o tubo de modo que a extremidade do bulbo no ultrapasse o limite de 5 mm da base do tubo e sem tocar em suas paredes, at induo de cristalizao. Anotar a temperatura mxima observada no termmetro durante a cristalizao. Aquecer o tubo a cerca de 5-10 C acima da temperatura lida e introduzi-lo em outro tubo maior (cerca de 60 mm de dimetro e 100 mm de altura) de modo a criar camada de ar. Fixar o tubo menor dentro do outro com auxlio de placas de cortia adaptadas ou por qualquer outro meio e mergulhar o conjunto em banho de gua com temperatura controlada, mantendo a temperatura cerca de 5 C abaixo do ponto de congelamento previamente anotado para o cresineol. Agitar a mistura com movimentos verticais do termmetro e, ao iniciar-se a cristalizao (turvao do lquido), observar a estabilizao da temperatura. Havendo flutuaes durante a cristalizao, considerar sempre a temperatura mxima lida durante o perodo de congelamento. Repetir a determinao quantas vezes for necessrio para que duas leituras sucessivas acusem variao mxima de 0,1 C. Teor de 1,8-cineol em leos essenciais. Temperatura (C) 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 0,0 45,6 46,9 48,2 49,5 50,8 52,1 53,4 54,7 56,0 57,3 58,6 59,9 61,2 62,5 63,8 65,2 66,8 68,6 70,5 72,3 74,2 76,1 78,0 80,0 82,1 84,2 0,1 45,7 47,0 48,3 49,6 50,9 52,2 53,5 54,8 56,1 57,4 58,7 60,0 61,3 62,6 63,9 65,4 67,0 68,8 70,7 72,5 74,4 76,3 78,2 80,2 82,3 84,4 0,2 45,9 47,2 48,5 49,8 51,1 52,4 53,7 55,0 56,3 57,6 58,9 60,2 61,5 62,8 64,1 65,5 67,2 69,0 70,9 72,7 74,6 76,5 78,4 80,4 82,5 84,6 0,3 46,0 47,3 48,6 49,9 51,2 52,5 53,8 55,1 56,4 57,7 59,0 60,3 61,6 62,9 64,2 65,7 67,3 69,2 71,0 72,9 74,8 76,7 78,6 80,6 82,7 84,8 0,4 46,1 47,4 48,7 50,0 51,3 52,6 53,9 55,2 56,5 57,8 59,1 60,4 61,7 63,0 64,4 65,8 67,5 69,4 71,2 73,1 75,0 76,9 78,8 80,8 82,9 85,0 0,5 46,3 47,6 48,9 50,2 51,5 52,8 54,1 55,4 56,7 58,0 59,3 60,6 61,9 63,2 64,5 66,0 67,7 69,6 71,4 73,3 75,2 77,1 79,0 81,1 83,2 85,3 0,6 46,4 47,7 49,0 50,3 51,6 52,9 54,2 55,5 56,8 58,1 59,4 60,7 62,0 63,3 64,6 66,2 67,9 69,7 71,6 73,4 75,3 77,2 79,2 81,3 83,4 85,5 0,7 46,5 47,8 49,1 50,4 51,7 53,0 54,3 55,6 56,9 58,2 59,5 60,8 62,1 63,4 64,8 66,3 68,1 69,9 71,8 73,6 75,5 77,4 79,4 81,5 83,6 85,7 0,8 46,6 47,9 49,2 50,5 51,8 53,1 54,4 55,7 57,0 58,3 59,6 60,9 62,2 63,5 64,9 66,5 68,2 70,1 71,9 73,8 75,7 77,6 79,6 81,7 83,8 85,9 0,9 46,8 48,1 49,4 50,7 52,0 53,3 54,6 55,9 57,2 58,5 59,8 61,1 62,4 63,7 65,1 56,6 68,4 70,3 72,1 74,0 75,9 77,8 79,8 81,9 84,0 86,1

50 51 52 53 54 55

86,3 88,8 91,3 93,8 96,3 99,3

86,6 89,1 91,6 94,1 96,6 99,7

86,8 89,3 91,8 94,3 96,9 100,0

87,1 89,6 92,1 94,6 97,2

87,3 89,8 92,3 94,8 97,5

87,6 90,1 92,6 95,1 97,8

87,8 90,3 92,8 95,3 98,1

88,1 90,6 93,1 95,6 98,4

88,3 90,8 93,3 95,8 98,7

88,6 91,1 93,6 96,1 99,0

V.4.2.9 DETERMINAO DO NDICE DE ESPUMA Pesar, exatamente, 1 g do material vegetal reduzido a p fino (malha de 180 m, V.2.11) e transferir para erlenmeyer contendo 50 ml de gua fervente. Manter sob fervura moderada durante 30 minutos. Resfriar, filtrar para balo volumtrico de 100 ml. Completar o volume, atravs do filtro, at 100 ml. Distribuir o decocto obtido em 10 tubos de ensaio com tampa (16 mm de dimetro por 16 cm de altura), em uma srie sucessiva de 1, 2, 3, at 10 ml, e ajustar o volume do lquido em cada tubo a 10 ml com gua. Tampar os tubos e agit-los com movimentos verticais por 15 segundos, com 2 agitaes por segundo. Deixar em repouso por 15 minutos e medir a altura da espuma. Se a altura da espuma de todos os tubos for inferior a 1 cm, o ndice de espuma menor do que 100. Se, em qualquer um dos tubos, a altura da espuma medida for 1 cm, a diluio do material vegetal nesse tubo (A) o ndice observado. Se esse tubo for o primeiro ou segundo na srie, necessrio fazer uma diluio intermediria, pelo mesmo mtodo descrito anteriormente, para obter um resultado mais preciso. Se a altura da espuma for maior do que 1 cm em todos os tubos, o ndice de espuma maior do que 1000. Nesse caso, a determinao precisa ser feita com uma nova srie de diluies do decocto para se obter um resultado preciso. O ndice de espuma calculado segundo a equao 1000/A, sendo A o volume, em mililitros, do decocto usado para preparao da diluio no tubo onde a espuma foi observada. V.4.2.10 DETERMINAO DE SUBSTNCIAS EXTRAVEIS POR LCOOL (EXTRATO ALCOLICO) Pesar, exatamente, cerca de 2 g da droga e transferir a amostra para cartucho do extrator de Soxhlet, previamente tarado e seco. Introduzir no balo do extrator 0,2 g de hidrxido de sdio e etanol absoluto em quantidade suficiente. Extrair por 5 horas, retirar o cartucho com o resduo e sec-lo em estufa a 105 C por 30 minutos. Pesar o resduo seco e calcular o teor de substncias extraveis por etanol por diferena entre o peso da amostra e o peso do resduo seco. Referir o resultado em relao droga seca (Determinao de gua em drogas vegetais, V.4.2.3). V.4.2.11 DETERMINAO DO NDICE DE AMARGOR As propriedades amargas dos materiais vegetais so determinadas pela comparao da concentrao limiar de amargor de um extrato com a de uma soluo diluda de cloridrato de quinina. O valor do ndice de amargor expresso em termos de unidades, equivalentes a uma soluo de cloridrato de quinina a 0,05% (p/V). Para a extrao dos materiais vegetais e para a lavagem da boca depois de cada degustao, deve-se utilizar gua potvel como veculo. A dureza da gua raramente tem influncia significativa sobre o amargor. A sensibilidade ao amargor pode variar de indivduo para indivduo ou, mesmo para um indivduo em situaes diferentes (fadiga, fumo, ingesto de alimentos). Portanto, a determinao da concentrao limiar de amargor do material a ser testado com cloridrato de quinina deve ser feita pela mesma pessoa, dentro de um curto espao de tempo. A sensao de amargor no percebida por toda a superfcie da lngua, mas restrita s partes superior e lateral da base da lngua. A determinao da concentrao limiar da soluo requer treinamento do analista. Primeiramente, feita a determinao da concentrao limiar do cloridrato de quinina e, em seguida, a do material a ser testado. Indivduos insensveis sensao amarga induzida por uma soluo contendo 0,058 mg de cloridrato de quinina em 10 ml de gua no so indicados para a realizao do teste. A preparao da soluo-estoque de material vegetal a ser testado (ST) deve ser especificada na monografia correspondente. Em sries nicas de teste, a determinao sempre inicia com a menor concentrao (a menos que outra ordem seja especificada na monografia) para manter a sensibilidade dos botes gustativos. PREPARO DAS SOLUES Soluo estoque e soluo diluda de cloridrato de quinina

Dissolver 0,1 g de cloridrato de quinina em quantidade suficiente de gua potvel para completar 100 ml. Diluir 5 ml desta soluo para 500 ml com gua potvel. Esta soluo padro de cloridrato de quinina (SQ) contm 0,01 mg/ml. Para o teste inicial, utilizar 9 tubos de ensaio para a diluio em srie, como indicado na tabela para o teste inicial. Teste inicial 2 3 4 4,4 4,6 4,8 5,6 5,4 5,2 0,044 0,046 0,048

SQ (ml) gua potvel (ml) Cloridrato de quinina (mg/10 ml) (c)

1 4,2 5,8 0,042

5 5,0 5,0 0,050

6 5,2 4,8 0,052

7 5,4 4,6 0,054

8 5,6 4,4 0,056

9 5,8 4,2 0,058

Soluo estoque e soluo diluda do material vegetal Preparar a soluo estoque como especificado na monografia (ST). Utilizar 10 tubos de ensaio para a diluio em srie, como indicado na tabela para o segundo teste. Segundo teste 3 4 5 3,00 4,00 5,00 7,00 6,00 5,00

ST (b) (ml) gua potvel (ml) PROCEDIMENTO

1 1,00 9,00

2 2,00 8,00

6 6,00 4,00

7 7,00 3,00

8 8,00 2,00

9 9,00 1,00

10 10,0 -

Aps enxaguar a boca com gua potvel, provar 10 ml da diluio, girando-a na boca, principalmente perto da base da lngua por 30 segundos. Sempre comear com a soluo menos concentrada da srie, exceto quando prescrito de maneira diferente na monografia. Se a sensao de amargor no mais sentida, remover a soluo e esperar 1 minuto para assegurar que no h sensibilidade retardada. Enxaguar a boca com gua. Aguardar, pelo menos, 10 minutos para testar a prxima diluio. A concentrao limiar de amargor a diluio de menor concentrao em que o material ainda provoca sensao de amargor. Aps a primeira srie de testes, enxaguar bem a boca com gua, at que o amargor no seja mais percebido e esperar, no mnimo, 10 minutos antes de fazer a segunda srie de testes. Nesta srie de testes, para maior rapidez, aconselhvel assegurar que a soluo no tubo nmero 5 (contendo 5 ml de ST em 10 ml de soluo) provoque sensao de amargor. Se percebida, encontrar a concentrao de amargor do material, provando as diluies nos tubos de nmeros 1 a 4. Se a soluo no tubo de nmero 5 no provocar sensao de amargor, encontrar a concentrao limiar de amargor nos tubos de nmeros 6 a 10. Todas as solues e a gua devem estar numa temperatura entre 20 C e 25 C. O ndice de amargor calculado segundo a equao: V = 2000c / (ab) em que V = valor de amargor, em unidades/g; a = quantidade de material, em mg/ml, na ST; b = volume de ST em 10 ml da diluio da concentrao limiar de amargor; c = quantidade de cloridrato de quinina, em mg/10 ml, na diluio da concentrao limiar de amargor. V.4.2.12 DETERMINAO DA ATIVIDADE HEMOLTICA A atividade hemoltica de extratos vegetais, ou de uma preparao contendo saponinas, determinada por comparao com a atividade de uma referncia de saponina com atividade hemoltica de 1000 unidades por grama. Uma suspenso de eritrcitos misturada com volumes iguais de uma diluio em srie do extrato. A menor concentrao a provocar hemlise completa determinada aps deixar o sistema em repouso por um perodo especfico de tempo. Um teste similar feito simultaneamente com soluo de referncia de saponina.

PROCEDIMENTO Para a preparao da suspenso de sangue, colocar citrato de sdio 3,65% (p/V) em um frasco com tampa at 1/10 de sua capacidade. Agitar para molhar totalmente as paredes do frasco e adicionar sangue bovino fresco, com nova agitao. O sangue com citrato de sdio assim preparado pode ser armazenado por 8 dias a uma temperatura entre 2 C e 4 C. Em balo volumtrico de 50 ml, diluir cuidadosamente 1 ml de sangue com citrato de sdio em quantidade suficiente de tampo fosfato pH 7,4 para completar 50 ml. Esta suspenso de sangue diluda (2%) pode ser utilizada durante o tempo em que o lquido sobrenadante permanecer lmpido e incolor, sendo mantida fria. Para a soluo de referncia, transferir, exatamente, 10 mg de saponina R para balo volumtrico de 100 ml e completar o volume com tampo fosfato pH 7,4. Esta soluo deve ser recm-preparada. O extrato vegetal e diluies devem ser preparados como especificado na monografia, utilizando-se, tambm, soluo tampo fosfato pH 7,4. Teste preliminar Preparar uma diluio em srie do extrato vegetal com a soluo tampo fosfato e suspenso de sangue (2%), usando 4 tubos de ensaio conforme quadro abaixo: Tubo Extrato vegetal (ml) Tampo fosfato pH 7,4 (ml) Suspenso de sangue (2%) (ml) 1 0,10 0,90 1,00 2 0,20 0,80 1,00 3 0,50 0,50 1,00 4 1,00 1,00

Logo que os tubos forem preparados, invert-los cuidadosamente para misturar, evitando a formao da espuma. Aps 30 minutos, agitar novamente e deixar descansar por 6 horas temperatura ambiente. Examinar os tubos e anotar em qual diluio ocorreu hemlise total, o que ser indicado por uma soluo lmpida, vermelha e sem depsito de eritrcitos. Se a hemlise total for observada apenas no tubo de nmero 4, usar o extrato vegetal original diretamente para o teste principal. Se a hemlise total for observada nos tubos 3 e 4, diluir duas vezes o extrato original com tampo fosfato. Se a hemlise total for observada nos tubos 2, 3 e 4, preparar uma soluo diluda cinco vezes, como descrito acima. Se, aps 6 horas, todos os tubos contiverem uma soluo lmpida e vermelha, preparar uma soluo diluda 10 vezes e fazer o teste preliminar, como descrito acima. Se a hemlise total no for observada em nenhum dos tubos, repetir o teste preliminar, usando um extrato mais concentrado. Teste principal Preparar a diluio em srie do extrato vegetal, diluindo ou no, como determinado pelo teste preliminar, com tampo fosfato pH 7,4 e suspenso de sangue (2%), utilizando 13 tubos de ensaio, conforme especificado no quadro a seguir. Tubos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Extrato vegetal (ou 0,40 0,45 0,50 0,55 0,60 0,65 0,70 0,75 0,80 0,85 0,90 0,95 1,00 diluio) (ml) Tampo fosfato (ml) 0,60 0,55 0,50 0,45 0,40 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 Suspenso de sangue 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 2% (ml) Fazer as diluies e avaliaes como no teste preliminar, observando os resultados aps 24 horas. Calcular a quantidade de material vegetal em gramas, ou proporo em g/ml que produz hemlise total (b). Teste para saponinas

Para eliminar o efeito de variaes individuais na resistncia de suspenso de sangue soluo de saponina, preparar uma srie de diluies de saponina da mesma maneira descrita anteriormente para o extrato vegetal. Calcular a quantidade de saponinas (g) que produz hemlise total (a). Atividade hemoltica A atividade hemoltica calculada segundo a equao 1000 a / b em que 1000 = atividade hemoltica da saponina, em relao ao sangue bovino; a = quantidade, em gramas, de saponina; b = quantidade, em gramas, de material vegetal. V.4.2.13 DETERMINAO DO NDICE DE INTUMESCNCIA O ndice de intumescncia ou ndice de intumescimento a medida do volume ocupado pelo intumescimento de 1 g da droga, pela adio de gua ou outro agente intumescente, sob condies definidas. Conduzir simultaneamente, no mnimo, trs determinaes. Pesar, exatamente, 1 g da droga vegetal pulverizada e colocar em proveta de 25 ml com tampa esmerilhada. O comprimento da parte graduada deve ser de, aproximadamente, 125 mm e o dimetro interno, prximo a 16 mm, subdividido em 0,2 ml, marcado de 0 a 25 ml, de forma ascendente. Adicionar 25 ml de gua, ou outro agente definido, e agitar a cada 10 minutos, por uma hora. Deixar a mistura repousar por 3 horas, temperatura ambiente. Medir o volume, em mililitros, ocupado pelo material vegetal acrescido da mucilagem ou qualquer outro material aderido subtrado do volume inicial da droga. Calcular o valor mdio obtido a partir das vrias determinaes individuais realizadas e relacionar a 1 g de material vegetal. V.4.3 MTODOS DE ANLISE DE EXTRATOS VEGETAIS V.4.3.1 DETERMINAO DE METANOL E 2-PROPANOL EM EXTRATOS FLUIDOS Proceder destilao do extrato conforme descrito em Determinao de etanol (V.3.4.8.1). Examinar o destilado por Cromatografia a gs (V.2.17.5), utilizando cromatgrafo provido de detector de ionizao de chama, coluna cromatogrfica de vidro com 2 m de comprimento e 2 mm de dimetro interno, empacotada com copolmero de etilvinilbenzeno/divinilbenzeno, partculas de 125 m a 150 m, e nitrognio para cromatografia como gs de arraste, com fluxo de 30 ml/min. Manter a temperatura da coluna em 130 C, a temperatura do injetor em 200 C e a temperatura do detector em 220 C. Soluo padro interno: soluo de 1-propanol a 2,5% (V/V) em gua. Soluo amostra: adicionar a um volume determinado do destilado 2 ml da soluo padro interno. Diluir para 50 ml com gua ou etanol a 90% (V/V), ajustando o teor de etanol para 10% (V/V). Soluo padro: preparar 50 ml de soluo contendo 2 ml de soluo padro interno, 10% de etanol (V/V), 0,05% de 2-propanol (V/V) e 0,05% de metanol anidro (V/V). Procedimento: injetar, separadamente 1 l das solues padro e amostra, registrar os cromatogramas e medir as reas dos picos. Calcular os teores de metanol e 2-propanol em relao amostra submetida destilao a partir das respostas obtidas com as solues padro e amostra. V.4.3.2 DETERMINAO DE RESDUO SECO EM EXTRATOS FLUIDOS E MOLES

Transferir 2 ml ou 2 g de extrato para pesa-filtros ou placa de Petri, medindo, aproximadamente, 50 mm em dimetro e 30 mm de altura. Evaporar at secura em banho-maria e dessecar em estufa a 100-105

C, por 3 horas. Deixar esfriar em dessecador, sobre pentxido de fsforo e pesar. Calcular o resduo seco em porcentagem sobre a massa ou sobre o volume. V.4.3.3 DETERMINAO DE RESDUO SECO EM EXTRATOS SECOS Pesar, em placa de Petri medindo, aproximadamente, 50 mm em dimetro e 30 mm de altura, 0,50 g de extrato seco finamente pulverizado. Dessecar em estufa a 100-105 C por 3 horas. Deixar esfriar em dessecador, sobre pentxido de fsforo e pesar. Calcular o resduo seco em porcentagem sobre a massa. EXTRATOS FLUIDOS Extracta fluida DEFINIO Extratos fluidos so preparaes lquidas nas quais, exceto quando especificado de maneira diferente, uma parte do extrato, em massa ou volume, corresponde a uma parte, em massa, da droga seca, utilizada na sua preparao. Se necessrio, os extratos fluidos podem ser padronizados, em termos de concentrao do solvente, teor de constituintes ou resduo seco. Se necessrio, podem ser adicionados de conservantes inibidores do crescimento microbiano. OBTENO Os extratos fluidos podem ser obtidos por percolao, macerao ou por dissoluo de extratos secos ou moles utilizando como solvente unicamente etanol, gua ou misturas etanol/gua de proporo adequada. Se necessrio, o extrato obtido pode ser filtrado. Qualquer que seja o processo de obteno, os extratos fluidos apresentam composio e caractersticas comparveis. A formao de um ligeiro sedimento durante a armazenagem aceitvel, desde que a composio do extrato no sofra modificaes significativas.

ENSAIOS DE PUREZA Densidade relativa (V.3.3.1). Quando for o caso, os extratos fluidos devem cumprir com os limites prescritos na monografia. Determinao de etanol (V.3.4.8). Determinar teor de etanol em extratos fluidos obtidos com etanol ou misturas etanol/gua. O teor de etanol deve cumprir o especificado na monografia. Determinao de metanol e 2-propanol (V.4.3.1). A menos que especificado de maneira diferente, os extratos fluidos devem conter no mais de 0,05% (V/V) de metanol e no mais de 0,05% (V/V) de 2propanol. Determinao do resduo seco (V.4.3.2). O resduo seco deve cumprir com o especificado na monografia. EMBALAGEM E ARMAZENAMENTO Em recipientes bem-fechados, ao abrigo da luz. ROTULAGEM O rtulo deve conter as seguintes informaes: nomenclatura botnica da droga que deu origem ao extrato; se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for o caso);

composio do solvente e o teor de etanol em porcentagem (V/V) no solvente utilizado na preparao; quando for o caso o teor de etanol em porcentagem (V/V) no produto final; teor de princpios ativos e/ou relao droga/extrato final; nome e concentrao de conservantes antimicrobianos adicionados.

EXTRATOS MOLES Extracta spissa DEFINIO Os extratos moles so preparaes de consistncia pastosa obtidos por evaporao parcial do solvente utilizado na sua preparao. So obtidos utilizando-se como solvente unicamente etanol, gua ou misturas etanol/gua na proporo adequada. Apresentam no mnimo 70% de resduo seco (p/p). Os extratos moles podem ser adicionados de conservantes para inibir crescimento microbiano. ENSAIOS DE PUREZA Resduo seco (V.4.3.2). O resduo seco deve cumprir com o especificado na monografia. EMBALAGEM E ARMAZENAMENTO Em recipientes bem-fechados, ao abrigo da luz. ROTULAGEM O rtulo deve conter as seguintes informaes: nomenclatura botnica da droga que deu origem ao extrato; nome e quantidade do material inerte utilizado; se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for o caso); composio do solvente e o teor de etanol em porcentagem (V/V) no extrato lquido que lhe deu origem; teor de princpios ativos e/ou relao droga/extrato final; nome e concentrao de conservantes antimicrobianos adicionados.

EXTRATOS SECOS Extracta sicca DEFINIO Extratos secos so preparaes slidas obtidas pela evaporao do solvente utilizado na sua preparao. Apresentam, no mnimo, 95% de resduo seco, calculados como porcentagem de massa. Os extratos secos podem ser adicionados de materiais inertes adequados. Os extratos secos padronizados tm o teor de seus constituintes ajustado pela adio de materiais inertes adequados ou pela adio de extratos secos obtidos com a mesma droga utilizada na preparao. Quando necessrio, a monografia poder prescrever realizao de ensaio limite para o solvente utilizado na preparao. ENSAIOS DE PUREZA Resduo seco (V.4.3.3). O resduo seco deve cumprir com o especificado na monografia. EMBALAGEM E ARMAZENAMENTO Em recipientes hermeticamente fechados, ao abrigo da luz. ROTULAGEM O rtulo deve conter:

nomenclatura botnica da droga que deu origem ao extrato; nome e quantidade do material inerte utilizado; se o extrato foi preparado com planta fresca (quando for o caso); nome do solvente e o teor de etanol em porcentagem (V/V) no solvente utilizado na preparao; teor de princpios ativos e/ou relao droga/extrato final.

V.5.1 TESTES DE SEGURANA BIOLGICA V.5.1.1 ESTERILIDADE Os testes de esterilidade aplicam-se a insumos farmacuticos, medicamentos e correlatos que, de acordo com a Farmacopia, devem ser estreis, sendo adequados para revelar a presena de bactrias, fungos e leveduras. Contudo, um resultado satisfatrio indica somente que no foi encontrado microrganismo contaminante na amostra examinada. A extenso deste resultado ao restante do lote requer a segurana de que todas as unidades do mesmo lote tenham sido preparadas de modo a garantir grande probabilidade de que todo o lote passaria pelo teste. Obviamente, isso depende das precaues tomadas durante os processos operacionais de fabricao, de acordo com as Boas Prticas de Fabricao. PRECAUES DURANTE O TESTE Os testes devem ser realizados sob condies asspticas, utilizando, por exemplo, capela de fluxo laminar classe A (3500 partculas 0,5 m/m3), que deve estar instalada em sala limpa classe B (350 000 partculas 0,5 m/m3). No devem ser realizados testes sob exposio direta de luz ultravioleta ou em reas sob tratamento com aerossis. As condies devem ser adequadas de forma a evitar contaminao acidental da amostra durante o teste e, tambm, no afetar a deteco de possveis contaminantes. Controles ambientais das reas de trabalho devem ser realizados regularmente (controle do ar e de superfcies, contagens de partculas, determinao de velocidade e direo do fluxo de ar, entre outros). MEIOS DE CULTURA Os meios de cultura usualmente utilizados para testes de esterilidade so o Meio lquido de tioglicolato e o Caldo de casena-soja. O primeiro utilizado primariamente para cultura de bactrias anaerbicas, embora tambm possa detectar o crescimento de bactrias aerbicas. O segundo adequado para a cultura de leveduras, fungos e bactrias aerbicas. Os meios utilizados devem cumprir com os requisitos dos Testes de adequao dos meios de cultura. Preparar os meios de cultura conforme descrito a seguir. Formulaes desidratadas tambm podem ser utilizadas, devendo-se demonstrar que, aps reconstituio conforme indicaes do fabricante, os requisitos dos Testes de adequao dos meios de cultura. Meio lquido de tioglicolato L-Cistina Cloreto de sdio Dextrose gar granulado (umidade no superior a 15%) Extrato de levedura (solvel em gua) Casena de digesto pancretica Tioglicolato de sdio (ou cido tiogliclico) Resazurina sdica a 0,1% (p/V) recentemente preparada gua pH do meio aps esterilizao 7,1 0,2 0,5 g 2,5 g 5,5 g 0,75 g 5,0 g 15,0 g 0,5 g (0,3 ml) 1,0 ml 1000 ml

Misturar a L-cistina, cloreto de sdio, dextrose, extrato de levedura e casena de digesto pancretica com 1000 ml de gua e aquecer at dissoluo total. Dissolver o tioglicolato de sdio ou cido tiogliclico nesta soluo e ajustar o pH com hidrxido de sdio M de modo que, aps a esterilizao, o pH da soluo seja de 7,1 0,2. Se houver necessidade de filtrao, aquecer a soluo novamente, sem deixar alcanar a ebulio e filtrar, ainda quente, em papel de filtro. Adicionar a soluo de resazurina sdica, misturar e

distribuir em frascos adequados. O meio deve apresentar uma colorao rsea na sua superfcie que no exceda um tero da altura da sua massa lquida. No caso de se obter um meio com colorao rsea em mais de um tero de sua massa lquida, restaurar o meio por um nico aquecimento em banho-maria ou em vapor fluente. Esterilizar utilizando processo validado. Se no for utilizar imediatamente, estocar em temperatura entre 2 C e 25 C. No utilizar o meio por um perodo de estocagem superior quele para o qual ele foi validado. O Meio lquido de tioglicolato deve ser incubado a 30-35 C sob condies aerbicas. Meio lquido de tioglicolato alternativo Proceder conforme descrito para Meio lquido de tioglicolato sem a adio do gar e da resazurina sdica. O Meio lquido de tioglicolato alternativo deve ser incubado a 30-35 C sob condies anaerbicas. Caldo de casena-soja Casena de digesto pancretica Farinha de soja de digesto papanica Cloreto de sdio Fosfato de potssio dibsico Dextrose gua pH do meio aps esterilizao 7,3 0,2 17,0 g 3,0 g 5,0 g 2,5 g 2,5 g 1000 ml

Dissolver todos os componentes em gua, aquecendo brandamente. Resfriar temperatura ambiente e ajustar o pH com hidrxido de sdio M de modo que, aps a esterilizao, o pH da soluo seja de 7,3 0,2. Se necessrio, filtrar para clarificao do meio. Distribuir em frascos adequados e esterilizar utilizando processo validado. Se no for utilizar imediatamente, estocar em temperatura entre 2 C e 25 C. No utilizar o meio por um perodo de estocagem superior quele para o qual ele foi validado. O Caldo de casena-soja deve ser incubado a 20-25 C sob condies aerbicas. Meios para penicilinas e cefalosporinas Nos casos em que os meios de cultura so utilizados para o teste de esterilidade de penicilinas e cefalosporinas pelo mtodo de Inoculao direta, a preparao do Meio lquido de tioglicolato e do Caldo de casena-soja deve ser modificada conforme descrito a seguir. Transferir, assepticamente, para os frascos esterilizados contendo cada meio, quantidade de -lactamase suficiente para inativar o antibitico presente na amostra. Nmero representativo de frascos contendo meio com -lactamase sem amostra devem ser incubados durante o perodo do teste (controle negativo). Controles positivos tambm devem ser includos. Para verificar se toda penicilina ou cefalosporina foi inativada, proceder ao Teste de validao para bacteriostase e fungistase, utilizando Staphylococcus aureus (ATCC 6538) como microrganismo teste. A observao de crescimento microbiano tpico constitui confirmao de que a concentrao de -lactamase utilizada apropriada. PADRONIZAO DO INCULO Usualmente, so necessrios ajustes para se obter densidade especfica de clulas microbianas viveis (no mais que 100) no meio de cultura. Para estabelecer um volume que contenha a densidade recomendada de clulas, diluies em srie devem ser realizadas a partir de uma suspenso estoque, procedendo-se a contagens em placas para determinar a densidade bacteriana obtida com cada diluio. Se o procedimento estiver bem padronizado, possvel reproduzir os resultados com a mesma cepa de bactrias. Nota: os meios de cultura utilizados na padronizao do inculo so aqueles descritos na monografia Contagem de microrganismos viveis totais (V.5.1.6) para cada microrganismo. Procedimento Com o auxilio de ala de cultivo, transferir o crescimento do microrganismo especfico para tubo de ensaio contendo gar inclinado indicado para o seu crescimento. Semear a cultura sobre a superfcie do gar inclinado, de modo a obter pelcula uniforme de crescimento. Incubar nas condies timas de

crescimento do microrganismo teste. Aps o perodo de incubao lavar o crescimento do microrganismo com 1 ml de gua estril (soluo estril de cloreto de sdio a 0,9% (p/V)) e transferir para frasco contendo 99 ml de gua estril (soluo estril de cloreto de sdio a 0,9% (p/V) - (suspenso estoque). Homogeneizar a suspenso manualmente ou em agitador de tubos do tipo vrtex. Preparar diluies em srie (1:100, 1:10 000 e 1:1 000 000) a partir da suspenso estoque utilizando soluo estril de cloreto de sdio a 0,9% (p/V) como diluente. Incorporar 1 ml de cada diluio em meio slido adequado para o microrganismo, homogeneizar e incubar. Proceder contagem do nmero de colnias que se desenvolveram no meio slido e escolher, a partir dos resultados, a diluio a ser utilizada para obter-se no mais que 100 clulas por frasco de meio de cultura. Repetir o procedimento para cada microrganismo utilizado. TESTES DE ADEQUAO DOS MEIOS DE CULTURA Os meios de cultura utilizados devem cumprir com os testes descritos a seguir, realizados antes ou paralelamente ao Teste de esterilidade da amostra. Esterilidade Confirmar a esterilidade de cada lote de meio esterilizado incubando pores dos meios nas condies especificadas durante, no mnimo, 14 dias. No ocorre crescimento de microrganismos. Promoo de crescimento Cada lote de meio deve ser testado quanto sua capacidade em promover o crescimento de microrganismo. Inocular, separadamente, em duplicata, frascos de cada meio com volume de inculo contendo no mais que 100 clulas microbianas viveis de cada cepa listada na Tabela 1 e incubar conforme as condies especificadas para cada meio. O teste de promoo de crescimento considerado vlido se h evidncia de crescimento microbiano, visualizado pela turvao e/ou por mtodos microscpicos, aps 3 dias de incubao dos meios inoculados com bactrias e aps 5 dias de incubao dos meios inoculados com fungos. Tabela 1 Microrganismos indicados para utilizao em testes de promoo de crescimento e de validao Meio Meio lquido de tioglicolato Microrganismo Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Clostridium sporogenes* Tioglicolato alternativo Caldo de casena-soja Clostridium sporogenes Bacillus subtilis Candida albicans Aspergillus niger Cepa ATCC 6538, NCTC 10788 ATCC 9027, NCIMB 8626 ATCC 19404, NCTC 532 ou ATCC 11437 ATCC 19404, NCTC 532 ou ATCC 11437 ATCC 6633, NCIMB 8054 ATCC 10231 NCPF 3179 ATCC 16404

* Bacteroides vulgatus (ATCC 8482) pode ser utilizado alternativamente a Clostridium sporogenes, quando no for necessrio o uso de um microrganismo esporulado. FLUIDOS DE DILUIO E LAVAGEM Fluido I Tecido animal de digesto pptica gua pH aps esterilizao 7,0 0,2 1,0 g 1000 ml

Dissolver o tecido animal de digesto pptica em gua, filtrar ou centrifugar para clarificao do meio, se necessrio, e ajustar o pH em 7,1 0,2. Distribuir em frascos adequados e esterilizar utilizando processo validado.

Para a realizao do teste de esterilidade de penicilinas ou cefalosporina pelo mtodo de Filtrao em membrana, adicionar, assepticamente, ao Fluido I esterilizado, quantidade de -lactamase suficiente para inativar qualquer atividade antibitica residual na membrana aps a filtrao da amostra. Fluido II Para cada litro de Fluido I, adicionar 1 ml de polissorbato 80 antes da esterilizao. Ajustar o pH em 7,1 0,2. Distribuir em frascos adequados e esterilizar utilizando processo validado. Fluido III Tecido animal de digesto pptica Extrato de carne Polissorbato 80 gua pH aps esterilizao 6,9 0,2 5,0 g 3,0 g 10,0 g 1000 ml

Misturar todos os componentes e aquecer, brandamente, at dissoluo. Filtrar, se necessrio, e ajustar o pH de modo que, aps a esterilizao, o pH da soluo seja de 6,9 0,2. Distribuir em frascos adequados e esterilizar utilizando processo validado. TESTE DE VALIDAO PARA BACTERIOSTASE E FUNGISTASE Antes de se estabelecer um procedimento para o teste de esterilidade de insumos farmacuticos, medicamentos ou correlatos, deve-se garantir que qualquer atividade bacteriosttica ou fungisttica inerente ao produto no tem influncia adversa sobre a confiabilidade do teste, demonstrando-se que o procedimento utilizado adequado para o produto sob exame. O teste de validao para bacteriostase e fungistase deve ser realizado quando o teste de esterilidade for realizado pela primeira vez para um produto e sempre que houver modificaes na formulao do produto e/ou nas condies experimentais do teste. A validao pode ser feita prvia ou simultaneamente ao teste de esterilidade do produto sob exame. Procedimento Para realizar o teste de validao, proceder conforme descrito em Procedimentos para o teste de esterilidade, empregando exatamente os mesmos mtodos, exceto para as modificaes que se seguem. Nota: para ambos os mtodos descritos a seguir, utilizar os microrganismos previamente especificados (Tabela 1). Realizar testes de Promoo de crescimento (Testes de adequao dos meios de cultura) como controle positivo. Incubar todos os frascos contendo os meios por no mais que 5 dias. Mtodo de filtrao em membrana Aps transferncia do contedo do recipiente ou recipientes sob exame (conforme especificado na Tabela 3) para o dispositivo de filtrao, adicionar no mais que 100 clulas do microrganismo teste ltima alquota do fluido estril utilizado para lavagem da membrana. Mtodo de inoculao direta Aps transferncia do contedo do recipiente ou recipientes sob exame (conforme especificado na Tabela 3) para frascos com os meios de cultura, adicionar no mais que 100 clulas dos microrganismos testes aos frascos. Interpretao Se o crescimento de microrganismos obtido aps a incubao visivelmente comparvel quele obtido no controle positivo (frasco sem adio de amostra), a amostra no apresenta atividade antimicrobiana sob as condies do teste ou tal atividade foi satisfatoriamente eliminada. O teste de esterilidade pode, ento, ser conduzido sem necessidade de modificaes. Se o crescimento de microrganismos no obtido na presena da amostra, ou se ele no visivelmente comparvel quele obtido nos controles positivos, a amostra apresenta atividade antimicrobiana que no foi

satisfatoriamente eliminada sob as condies do teste. Nesse caso, devem ser feitas modificaes nas condies do teste para eliminar a atividade antimicrobiana, tais como diluio, uso de substncias neutralizantes, aumento do nmero de lavagens no mtodo de filtrao em membrana ou uma combinao delas. O teste de validao deve ser repetido para verificar se a atividade antimicrobiana foi eliminada pela modificao proposta. PROCEDIMENTOS PARA O TESTE DE ESTERILIDADE O teste de esterilidade pode ser realizado utilizando os mtodos de filtrao em membrana ou de inoculao direta, exceto quando um dos mtodos for especificado na monografia individual. Em ambos os casos, controles negativos apropriados devem ser includos. Antes de proceder ao teste, efetuar assepsia das paredes externas dos frascos e ampolas, mergulhando-os em soluo antimicrobiana adequada. No caso de artigos cujas embalagens no resistam a esse tratamento, fazer assepsia das amostras por meio de gaze ou pano estril, embebido em soluo antimicrobiana. Nota: o teste de esterilidade deve ser realizado utilizando dois ou mais dos meios de cultura previamente especificados. AMOSTRAGEM A menos que especificado de forma diferente na monografia individual, testar o nmero de unidades da amostra especificado na Tabela 2. Se as unidades da amostra apresentam contedo em quantidade suficiente (Tabela 3), o contedo de cada unidade pode ser dividido em duas pores iguais para cada tipo de meio de cultura utilizado. Se as unidades da amostra no apresentam contedo em quantidade suficiente para cada meio, separar o dobro do nmero de unidades especificado na Tabela 2 para realizao do teste. Tabela 2 Nmero mnimo de unidades a serem testadas em funo do tamanho do lote Nmero de unidades no lote Preparaes parenterais At 100 Acima de 100 at 500 Acima de 500 Parenterais de grande volume Antibiticos slidos Frascos com capacidade < 5 g Frascos com capacidade 5 g Oftlmicos e outras preparaes no injetveis At 200 Acima de 200 Correlatos mdicos cirrgicos At 100 Acima de 100 at 500 Acima de 500 Produtos slidos At 4 Acima de 4 at 50 Acima de 50
a

Nmero mnimo de unidades a serem testadasa,b 10% ou 4 unidades (o que for maior) 10 unidades 2% ou 20 unidades (o que for menor) 2% ou 10 unidades (o que for menor) 20 unidades 6 unidades 5% ou 2 unidades (o que for maior) 10 unidades 10% ou 4 unidades (o que for maior) 10 unidades 2% ou 20 unidades (o que for menor) Cada unidade 20% ou 4 unidades (o que for maior) 2% ou 10 unidades (o que for maior)

Amostragem especificada considerando-se que o contedo de um recipiente suficiente para inocular ambos os meios de cultura. Para matrias-primas, a amostragem satisfatria pode ser baseada na raiz quadrada do nmero total de recipientes do lote.

Tabela 3 Quantidades mnimas a serem utilizadas para cada meio de cultura uantidade por recipiente Lquidos (no antibiticos) enos de 1 ml e 1 a 40 ml ima de 40 ml at 100 ml ima de 100 ml Antibiticos (lquidos) Outras preparaes solveis em gua ou em solvente do tipo miristato de isopropila Cremes e pomadas insolveis suspensos ou emulsificados Slidos enos de 50 mg ima de 50 mg at 0,3 g ima de 0,3 g at 5 g ima de 5 g a serem olume mnimo a ser inoculado em cada meio (ml) do o contedo etade do contedo mas no menos que 1 ml ml % do contedo do produto mas no menos que 20 ml 1 ml Contedo total mas no menos que 0,2 g Contedo total mas no menos que 0,2 g

do o contedo etade do contedo mas no menos que 50 mg 15 g 5g

Correlatos uturas cirrgicas partes do fio (30 cm de comprimento cada) paradrapo cirrgico/gaze/algodo em embalagem 0 mg por embalagem mltipla uturas e outros materiais em embalagens individuais do o material utros correlatos mdicos do o material cortado em pedaos.

MTODO DE FILTRAO EM MEMBRANA Utilizar membranas filtrantes com porosidade nominal no superior a 0,45 m cuja eficincia em reter microrganismos tenha sido estabelecida. Filtros de nitrato de celulose, por exemplo, so utilizados para solues aquosas, oleosas e fracamente alcolicas, e filtros de acetato de celulose, por exemplo, para solues fortemente alcolicas. Filtros especialmente adaptados podem ser requeridos para determinados produtos, como antibiticos. Os procedimentos descritos a seguir aplicam-se a membranas com dimetro de aproximadamente 50 mm. Se filtros com dimetros diferentes so utilizados, os volumes das diluies e lavagens devem ser ajustados conforme o dimetro da membrana empregada. O dispositivo de filtrao e a membrana so esterilizados por processo adequado. O dispositivo apresenta configurao tal que a soluo a ser examinada pode ser introduzida e filtrada sob condies asspticas. O dispositivo de filtrao deve permitir, ainda, a remoo assptica da membrana para sua transferncia ao meio de cultura ou ser adequado para proceder incubao aps adio do meio de cultura ao prprio dispositivo. O tipo de fluido utilizado na lavagem da membrana depende da natureza do produto, sendo especificado na monografia individual, quando for o caso. Controles negativos ou brancos devem ser includos para os fluidos e solventes utilizados, para os quais no se deve observar crescimento de microrganismos. Deve-se verificar, ainda, se os fluidos utilizados no apresentam atividade antimicrobiana nas condies do teste. Lquidos miscveis em veculos aquosos Transferir pequena quantidade de diluente estril, como o Fluido I, para a membrana e filtrar. O diluente pode conter substncias neutralizantes e ou inativantes, como no caso de antibiticos. Transferir para a membrana os contedos dos recipientes a serem testados ou a diluio apropriada (previamente definida no Teste de validao para bacteriostase e fungistase) em quantidades no inferiores s recomendadas nas Tabelas 2 e 3 e filtrar imediatamente. Se o produto apresentar atividade antimicrobiana, lavar a membrana no menos que trs vezes filtrando, a cada vez, o volume do diluente estril escolhido e utilizado no Teste de validao para bacteriostase e fungistase. A quantidade de fluido de lavagem utilizada no deve ser superior a cinco pores de 200 ml, mesmo se durante o teste de validao tenha sido demonstrado que tal ciclo de lavagens no elimina completamente a atividade antimicrobiana. Transferir a membrana inteira para

o meio de cultura ou seccion-la, assepticamente, em duas partes iguais e transferir cada metade para os meios selecionados. Utilizar os mesmos volumes de meio empregados no teste de validao. Incubar os meios por pelo menos 14 dias. leos e solues oleosas Utilizar, para cada meio de cultura, quantidade de amostra especificada nas Tabelas 2 e 3. leos e solues oleosas de baixa viscosidade podem ser filtradas sem diluio atravs da membrana seca. leos viscosos devem ser diludos em solvente adequado como, por exemplo, miristato de isoproprila, desde que demonstrado no possuir atividade antimicrobiana nas condies do teste. Deixar o leo penetrar na membrana, filtrar utilizando vcuo ou suco, gradualmente. Lavar a membrana com, no mnimo, trs pores do Fluido III. Prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos. Pomadas e cremes Utilizar, para cada meio de cultura, quantidade de amostra especificada nas Tabelas 2 e 3. Pomadas de base oleosa e emulses do tipo gua em leo podem ser diludas para 1% em solvente adequado (miristato de isopropila ou outro) como descrito no item anterior, aquecendo, se necessrio, a 40 C (no mximo at 44 C). Filtrar o mais rapidamente possvel e prosseguir conforme descrito em leos e solues oleosas. No caso de utilizao do miristato de isopropila como diluente, este deve ser esterilizado antes do uso, por filtrao em membrana, e seu extrato aquoso deve apresentar pH no inferior a 6,5. Slidos solveis (no antibiticos) Utilizar, para cada meio de cultura, quantidade de amostra especificada nas Tabelas 2 e 3. Dissolver o produto em fluido adequado, como o Fluido I, e prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos. Slidos para preparaes injetveis (no antibiticos) Reconstituir o produto como descrito no rtulo e prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos ou leos e solues oleosas, dependendo do caso. Se necessrio, pode ser utilizado um excesso de diluente para auxiliar na reconstituio e filtrao do produto. Antibiticos slidos para preparaes injetveis Para embalagens com menos de 5 g retirar, assepticamente, de cada um dos 20 recipientes recomendados, cerca de 0,3 g de amostra, dissolver em 200 ml de Fluido I e misturar. Alternativamente, reconstituir o produto conforme descrito no rtulo, transferir o equivalente, em lquido, a 0,3 g de amostra e diluir para 200 ml com Fluido I. Para embalagens com 5 g ou mais transferir, assepticamente, de cada seis recipientes, 1 g de amostra para frasco adequado, dissolver em 200 ml de Fluido I e misturar. Alternativamente, reconstituir as seis unidades do produto como recomendado pelo fabricante, transferir quantidade de lquido equivalente a 1 g da amostra para frasco adequado, diluir para 200 ml com Fluido I e misturar. Prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos. Aerossis estreis Para produtos lquidos pressurizados, congelar o contedo em mistura de etanol e gelo seco a -20 C, por 1 hora. Se possvel, antes da abertura da embalagem, deixar o propelente escapar e transferir o contedo para frasco adequado. Adicionar 100 ml de Fluido II e homogeneizar. Prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos ou leos e solues oleosas, conforme o caso. Seringas j preenchidas Expelir o contedo de cada seringa diretamente sobre a(s) membrana(s) ou em frascos separados e depois filtrar. Prosseguir conforme descrito para Lquidos miscveis em veculos aquosos. Algodo purificado, gaze e material relacionado (categute, suturas, etc.) Fazer amostragem de acordo com as Tabela 2 e 3. Transferir o total de amostras para frasco contendo volume suficiente de Fluido I ou, quando for o caso, passar o fluido pelo interior dos tubos ou do equipamento. Agitar vigorosamente. Transferir o lquido para conjunto de funil e membrana e filtrar. Prosseguir conforme descrito em Lquidos miscveis em veculos aquosos.

MTODO DE INOCULAO DIRETA EM MEIO DE CULTURA Transferir, direta e assepticamente, para os meios de cultura, quantidade da amostra especificada nas Tabelas 2 e 3, de tal forma que o volume da amostra no seja maior que 10% do volume do meio de cultura, a menos que especificado de maneira diferente na monografia individual ou nessa seo. Se a amostra apresentar atividade antimicrobiana, realizar o teste aps a neutralizao do efeito, com substncia neutralizante ou por diluio em quantidade suficiente de meio de cultura. Quando for necessrio o uso de grandes volumes da amostra, pode-se trabalhar com meio de cultura concentrado, preparado levando-se em conta a diluio subseqente adio do produto. Se o recipiente comportar, o meio concentrado pode ser adicionado diretamente amostra. Lquidos Transferir as quantidades especificadas da amostra para os tubos contendo os meios utilizando pipeta estril ou seringa e agulha estreis. Misturar o lquido com o meio, sem arear excessivamente. Incubar nas condies especificada para cada meio durante 14 dias. leos lquidos Utilizar meio de cultura contendo agente emulsificante em concentrao que tenha se mostrado adequada no teste de validao, por exemplo, polissorbato 80 a 1% (p/V). Pomadas e cremes Preparar diluio da amostra a 10% utilizando um agente emulsificante adequado adicionado a um diluente estril como o Fluido I. Transferir a amostra diluda para meios de cultura sem emulsificante. Incubar os meios inoculados por, no mnimo, 14 dias. Observar os meios durante todo o perodo de incubao. Agitar, suavemente, os frascos de meio de cultura contendo leo, diariamente, durante todo o perodo de incubao. Os frascos contendo Meio lquido de tioglicolato ou outro meio similar devem ser agitados de forma a no prejudicar as condies de anaerobiose. Slidos Transferir quantidade de amostra especificada nas Tabelas 2 e 3 ou preparar uma soluo ou suspenso do produto adicionando volume no superior a 20 ml de diluente estril ao recipiente. Transferir o material assim obtido para 200 ml de Meio lquido de tioglicolato. Do mesmo modo, transferir a mesma quantidade do material para 200 ml de Caldo de casena-soja. Misturar e prosseguir conforme descrito para Lquidos. Categute e outras suturas cirrgicas Para cada meio, utilizar a quantidade de amostra especificada nas Tabelas 2 e 3. Abrir a embalagem assepticamente e remover trs pores do fio para cada meio de cultura. Essas pores devem ser retiradas no incio, no meio e no final e terem 30 cm de comprimento. Cobrir cada parte do fio com volume suficiente dos meios (20 ml a 150 ml). Algodo purificado, gaze, bandagem e material relacionado De cada embalagem de algodo, gaze em rolo ou gaze em bandagem a ser analisada, retirar, com instrumentos estreis, duas pores de 0,1 g a 0,5 g das partes mais internas da amostra. Para materiais em embalagem individual, tais como chumao de gaze, retirar duas pores individuais de 0,25 g a 0,5 g, ou duas unidades totais, no caso de unidades pequenas (ex: bandagens menores que 25 mm a 75 mm). Transferir uma poro para tubo com 40 ml de Meio lquido de tioglicolato e outra para tubos com 40 ml de Caldo de casena-soja. Prosseguir conforme descrito para Lquidos. Aparelhos parenterais Para aparelhos de formas e dimenses que permitam sua imerso em volume de meio que no ultrapasse 1000 ml, fazer a sua imerso utilizando as quantidades especificadas nas Tabelas 2 e 3 e proceder conforme descrito em Lquidos. Para aparelhos muito grandes, fazer a imerso de partes que entrem em contato com o paciente em volume de meio suficiente para a imerso de todas as partes. Para cateteres cujos lumens, interno e externo, devam ser estreis, passar o meio dentro do lmen ou preencher

o lmen com o meio e promover a imerso do aparelho inteiro. OBSERVAES E INTERPRETAO DOS RESULTADOS Durante o perodo de incubao e at o seu trmino, examinar os meios quanto a evidncias macroscpicas de crescimento microbiano. Se a amostra sob exame provoca turvao dos meios de cultura, de modo a impedir a observao do crescimento microbiano, transferir pores adequadas de cada frasco (no menos que 1 ml) para frascos novos dos mesmos meios 14 dias aps o incio da incubao. Incubar os frascos originais e os frascos novos por um perodo adicional de no menos que 4 dias. Se, ao final do perodo de incubao, no houver evidncias de crescimento microbiano, a amostra sob exame cumpre com o requisito de esterilidade. Se for evidenciado crescimento de microrganismos, a amostra no cumpre com o requisito de esterilidade, a no ser que se evidencie falha durante a execuo do teste como, por exemplo, contaminao no relacionada com o produto em anlise. O teste de esterilidade pode ser considerado invlido se uma ou mais das seguintes condies forem observadas. a) b) c) d) Os dados de monitoramento microbiolgico do local de realizao do teste demonstram falha. Uma reviso dos procedimentos utilizados durante o teste revela falha. Crescimento microbiano observado nos controles negativos. Aps a identificao do microrganismo (ou microrganismos) isolado a partir do teste, o crescimento desta espcie (ou espcies) pode ser atribudo, indubitavelmente, a falhas relacionadas ao material utilizado e/ou a tcnicas utilizadas na execuo do teste de esterilidade.

Se for considerado invlido, o teste de esterilidade deve ser repetido com o mesmo nmero de unidades do teste inicial. Se, aps a repetio do teste, no for observado crescimento microbiano, a amostra cumpre com o requisito de esterilidade. Se for observado crescimento microbiano aps a repetio do teste, a amostra sob exame no cumpre com o requisito de esterilidade. APLICAO DO TESTE DE ESTERILIDADE A PREPARAES PARENTERAIS, OFTLMICAS E OUTRAS PREPARAES NO-INJETVEIS COM REQUERIMENTO PARA ESTERILIDADE Ao empregar a tcnica de filtrao em membrana, utilizar, sempre que possvel, todo o contedo do recipiente, mas no menos que a quantidade indicada nas Tabelas 2 e 3, diluindo, quando necessrio, para aproximadamente 100 ml com uma soluo estril adequada, como o Fluido I. A empregar a tcnica de inoculao direta, utilizar as quantidades indicadas nas Tabelas 2 e 3, a menos que de outra forma indicado e justificado. Os testes para bactrias e fungos so realizados com uma mesma unidade da amostra sob exame. Quando o volume ou a quantidade em um nico recipiente insuficiente para a realizao do teste, os contedos de dois ou mais recipientes so utilizados para inocular os diferentes meios. XI SUBSTNCIAS CORANTES

Substncia corante qualquer composto orgnico ou inorgnico, natural, sinttico ou idntico ao natural reproduzido por sntese que, independente de possuir ou no atividade farmacolgica, adicionado s formas farmacuticas com a finalidade nica de cor-las ou de alterar a sua cor original. As substncias corantes podem ser classificadas em corantes orgnicos naturais, corantes orgnicos sintticos e corantes minerais. Aos medicamentos destinados aplicao por via oral, retal, vaginal ou cutnea podem ser adicionadas substncias corantes constantes nas Tabelas 1, 2 e 3 ou a mistura destas substncias nos casos e em quantidades compatveis com as boas prticas de fabricao farmacutica. As substncias corantes empregadas devem satisfazer as exigncias descritas nas respectivas monografias. Tabela 1 Corantes orgnicos naturais Cor Amarela Amarela Nome oficial Curcumina Riboflavina N. C.I. 72.220 Descrio 1,7-bis-(4-Hidroxi-3-metoxifenil)-1,6-heptadieno-3,5-diona 7,8-Dimetil-10-(D-ribo-2,3,4,5-tetraidroxipentil)isoaloxazina

Laranja Laranja Laranja Laranja

Beta-caroteno Cantaxantina Apo-8carotenal Urucum

40.800 40.850 40.820 75.120

-Caroteno extrado de fontes naturais ou obtido por sntese ,-Caroteno-4.4-diona extrada de fontes naturais ou obtida por sntese -Apo-8-carotenal extrado de fontes naturais ou obtido por sntese Extrato obtido pelo tratamento de Bixa orellana L. por solventes orgnicos, leos e gorduras vegetais comestveis, mono e diglicerdeos obtidos por hidrlise destes leos ou por solues aquosas, alcolicas ou propilenogliclicas de lcalis, ou seus componentes principais, bixina (ster monometlico do cido 6,6diapo-,-carotenociico) e norbixina (cido 6,6-diapo-,carotenociicoisolados ou reproduzidos por sntese e seus sais sdicos ou potssicos Produto obtido pelo aquecimento de sacarose ou outros acares de uso alimentar ou por tratamento controlado de glicdeos de qualidade alimentar com um ou mais de um dos seguintes reagentes: cidos actico, ctrico, fosfrico, sulfrico e sulfuroso, dixido de enxofre, hidrxidos de sdio e de potssio, carbonatos, fosfatos, sulfatos e sulfitos de sdio e de potssio. Carvo vegetal farmacopico Mistura de clorofilas a e b. Clorofila a: C55H72MgN4O5, ster ftlico do complexo magnesiano de [(1,3,5,8-tetrametil-4-etil-2-vinil-9oxo-10-metoxicarbonil)forbinil]-7-propionato. Clorofila b: C55H70MgN4O6, ster do complexo magnesiano de [1,5,8-trimetil3-formil-4-etil-2-vinil-9-oxo-10-metoxicarbonil)-forbinil]-7propionato Sal sdico do complexo cprico da clorofila Laca de alumnio ou de clcio, em substrato de hidrxido de alumnio, de cido carmnico e outros componentes obtidos pela extrao aquosa da cochonilha, Dactylopus cacti Costa (Coccus cacti L.)

Marrom

Caramelo

Preta Verde

Carvo vegetal Clorofila

75.810

Verde Vermelha

Clorofilina cupro-sdica Carmin de cochonilha

75.810 75.470

Tabela 2 Corantes orgnicos sintticos Cor Amarela Amarela Amarela Laranja Azul Nome oficial Amarelo crepsculo Amarelo cido Tartrazina Laranja GGN Azul brilhante N. C.I. 15.985 13.015 19.140 15.980 42.090 Descrio Sal dissdico do cido 1-p-sulfofenilazo-2-naftol-6-sulfnico Sal dissdico do cido 5-(4-sulfofenilazo)-2-naftolsulfnico Sal trissdico do cido 1-p-sulfofenil-4-p-sulfofenilazo-5hidroxipirazol-3-carboxlico Sal dissdico do cido 1-(3-sulfofenilazo)-2-naftolsulfnico Sal dissdico do sal interno de hidrxido de N-etil-N-[4-[[4-[etil(3sulfofenil)metil]amino]fenil](2-sulfofenil)metileno]-2,5-cicloexadien1-ilideno]-3-sulfobenzenometanamnio N,N-diidro-1,2-antraquinonazina Sal dissdico do cido indigotin-5,5-dissulfnico

Azul Azul

Azul de idantreno Indigotina

69.800 73.015

Vermelha Vermelha Vermelha Vermelha

Amaranto Eritrosina Vermelho 40 Ponceau 4R

16.185 45.430 16.035 16.255

Sal trissdico do cido 3-hidroxi-4-[(4-sulfo-1-naftalenil)azo]-2,7naftalenodissulfnico Sal dissdico monoidratado de 3,6-diidroxi-2,4,5,7tetraiodospiro[isobenzofuran-1(3H),9-[9H]xanten]-3-ona Sal dissdico do cido 6-hidroxi-5-(2-metoxi-5-metil-4sulfofenilazo)-2-naftalenossulfnico Sal trissdico do cido 1-(4-sulfo-1-naftilazo)-2-naftol-6,8dissulfnico

Tabela 3 Corantes minerais Cor Branca Branca Amarela Vermelha Preta Nome oficial Carbonato de clcio Dixido de titnio xido de ferro xido de ferro xido de ferro N. C.I. 72.220 77.891 77492 77.491 77.499 Descrio Carbonato de clcio, CaCO3 Dixido de Titnio, TiO2 xido frrico hidratado Sesquixido de ferro anidro xido ferroso-frrico

Os corantes sintticos podem ser usados na forma de lacas (sobre substrato de alumina), na forma descrita nas respectivas monografias. O uso dos corantes tartrazina e laca de tartrazina deve ser obrigatoriamente declarado no rtulo.