MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS

As se denominan genricamente a un importante nmero de mtodos instrumentales que utilizan tcnicas en las que se genera una seal de tipo ptico y cuyo fundamento est basado en la interaccin de la radiacin electromagntica con el analito.

Propagacin de las ondas electromagnticas

Los campos E y B de la onda electromagntica son perpendiculares entre s. Ambos son perpendiculares a la direccin de propagacin de la onda (onda transversal).

 Longitud de onda ( ): Espacio que recorre una onda desde el inicio hasta el final de una oscilacin. Velocidad de transmisin ( v ): velocidad a la que se propaga.
velocidad = longitud de onda x frecuencia frecuencia= 1/perodo

Interaccin entre la radiacin electromagntica con la muestra que contiene el analito origina distintos fenmenos: absorcin y emisin de luz (ms relevantes) dan lugar a los mtodos espectrofotomtricos de absorcin y emisin. La mayora de los mtodos espectroscpicos son de absorcin. Los mtodos pueden ser de absorcin molecular o atmica, dependiendo de que el analito se encuentre en estado molecular o atmico. Tambin existen mtodos fluorescentes, en los que existe una absorcin de la radiacin seguida de una emisin a una longitud de onda mayor. Todos estos mtodos se denominan tambin espectroscpicos, porque estn basados en los espectros de absorcin o emisin del analito.

Espectro electromagntico
TIPO DE RADIACION Rayos Gamma Rayos X Ultravioleta Intervalos de las longitudes de onda inferiores a 10-2 nanmetros entre 10-2 nanmetros y 15 nanmetros entre 15 nanmetros y 4.102 nanmetros 2 nanmetros y 7,8.102 entre 4.10 nanmetros (4000 Angstroms y 7800 Angstroms) entre 7,8.102 nanmetros y 106 nanmetros 6 nanmetros y 3.108 entre 10 nanmetros mayores de 3.108 nanmetros

ESPECTRO VISIBLE

Infrarrojo Regin de Microondas Ondas de Radio

Colores de la luz visible

Longitud de onda de la absorcin mxima (nm).
380 420 420 440 440 470 470 500 500 520 520 550 550 580 580 620 620 680 680 780

Color absorbido
Violeta azul - violeta Azul Verde - azulado Verde Verde amarillento Amarillo Naranja Rojo Prpura

Color observado
Amarillo - verdoso Amarillo Naranja Rojo Prpura Violeta Azul - violeta Azul Verde - azulado Verde

El color que se aprecia en un objeto se debe a las longitudes de onda no absorbidas, es decir a las transmitidas o reflejadas. Cuando incide luz blanca (contiene todas las longitudes de onda del visible) sobre un objeto, ste absorber ciertas longitudes de onda y transmitir las que no absorbe que son las que darn "el color del objeto", un color que es complementario del absorbido. La radiacin electromagntica usada para un anlisis por absorcin en el visible debe ser de color complementario al color de la disolucin del analito; si una solucin de un analito es amarilla, la mxima absorcin se obtendr para la longitud de onda correspondiente al azul.

Caractersticas de la radiacin electromagntica

Energa fotn =

frecuencia

longitud de onda

Cuando aumenta, disminuye la energa y frecuencia del fotn ,

ABSORCIN DE RADIACIN ELECTROMAGNTICA

M + h = M*
La ABSORCIN de luz por una sustancia tiene lugar cuando la luz posee la energa precisa para provocar los cambios precisos. Estos cambios ( siempre discretos), pueden ser: Electrnicos (tomos o molculas) Vibracionales (slo molculas) Rotacionales ( slo molculas)

una radiacin electromagntica interacciona con un compuesto qumico ste puede absorber una parte de la radiacin cuya energa debe corresponderse exactamente con la diferencia de energa entre los estados normal y excitado de las molculas del compuesto. Esto ocurre a una frecuencia determinada.

Cuando

Los cambios en una molcula ocasionados por absorcin de luz pueden ser:

electrnicos cambios en la energa de los electrones de los tomos de la molcula vibracionales cambios en la separacin promedio de los ncleos de dos o ms tomos rotacionales rotacin de un dipolo qumico

Las transiciones electrnicas son ocasionadas por absorcin de luz visible y ultravioleta, mientras que los cambios rotacionales y vibracionales por absorcin de radiacin infrarroja o de longitud de onda mayor.

Espectroscopa de absorcin

Absorcin Molecular Absorcin Atmica

En la absorcin por molculas, entran en juego transiciones de tipo vibracional, rotacional entre subniveles electrnicos. El resultado final se traduce en un espectro de bandas. El espectro est constituido por lneas, debido al gran nmero de transiciones posibles, que incluyen la de los subniveles electrnicos dentro de cada nivel

TRANSICIONES ENERGTICAS

energa

E2 2 2
uv visible

E 1 1

E3 3 3 E4 4 4

IR

IR MO

estado estado estado electrnico vibracional rotacional

E=h= hc

TIPOS DE ESPECTROS

ESPECTRO DE LNEAS

ESPECTRO CONTINUO

Espectrofotometra de absorcin molecular

Es til tanto para anlisis cualitativo como cuantitativo
Transacciones electrnicas

Interacciones de enlace

Espectro

Variando la longitud de onda dentro de cada zona del espectro electromagntico se puede obtener el espectro de absorcin de una sustancia en cada regin. Informacin cualitativa: Se obtiene comparando el espectro de la muestra con el de un material de referencia. Esta informacin es ms relevante en espectroscopa IR y menor en el caso de espectroscopa Vis-UV. Los espectros Vis-UV se pueden obtener usando un mismo equipo. La espectroscopia IR (mayor informacin), requiere otro tipo de instrumento

Si el enlace se alarga, aparece una fuerza restauradora que hace que los dos tomos tiendan a aproximarse hasta su longitud de enlace de equilibrio. Si el enlace se comprime, la fuerza restauradora hace que los tomos se separen. Cuando el enlace se alarga o se comprime, y a continuacin se deja en libertad, los tomos vibran

La frecuencia de una vibracin disminuye al aumentar la masa atmica. Las vibraciones moleculares dependen de las masas de los tomos. Los tomos pesados vibran lentamente, por lo que tendrn una frecuencia ms baja que los tomos ms ligeros. La frecuencia tambin aumenta con la energa de enlace, por lo que un doble enlace C=C tendr una frecuencia ms elevada que un enlace sencillo C-C.

Espectro infrarrojo del n-octano.

La espectroscopa IR se utiliza para identificar la presencia de grupos funcionales en una molcula. Un alcano mostrar frecuencias de tensin y flexin solamente para C-H y C-C. La tensin C-H es una banda ancha entre 2800 y 3000 cm-1, una banda presente en prcticamente todos los compuestos orgnicos.

X + h X*

Espectros de absorcin

E (incidente) = E (estado excitado) -E (estado fundamental) h = Ef - Ei Ecuacin de Bohr Ei = E de la especie absorbente en el estado fundamental (X) Ef= estado permitido de E superior (X*) Espectros de emisin Proceso contrario a la absorcin X* X + h Procesos de emisin:

Emisin de R- caractersticos Emisin despus de absorber la radiacin Emisin por resonancia

Emisin del ncleo radiactivo (igual ); Emisin por fluorescencia/fosforescencia (mayor ) Emisin no electromagntica (elctrica o trmica)

Intensidad de la luz incidente

Intensidad de la luz transmitida?

P0

LEYES DE ABSORCIN DE LA RADIACIN La disminucin relativa en intensidad del haz es proporcional al nmero de molculas absorbentes que interaccionan con la radiacin en su recorrido. Ley de Lambert
Efecto del espesor de la muestra sobre la fraccin de radiacin absorbida: La disminucin relativa en intensidad del haz es proporcional al espesor (b)

dP = -K P db Ley de Beer
Efecto de la concentracin (c) del soluto absorbente Igual efecto que un aumento proporcional en la distancia recorrida por la radiacin a travs de la muestra

dP = -a P dc

LEY DE LAMBERT - BEER

A=ebc
Absorbancia concentracin

LEY DE LAMBERT - BEER

potencia del haz antes de atravesar la muestra Absorbancia total medida a la longitud de onda absortividad concentracin molar de las especies absorbentes

P0 AT, = log =bc P

camino ptico

potencia del P = Transmitancia (T) haz luego P0 de atravesar la muestra

A = - logT

La fraccin de luz incidente absorbida por una sustancia es proporcional al nmero de molculas que interaccionan con la radiacin en su recorrido.

P0 AT, = log =bc P

Incremento del camino ptico
1er cubeta: P/Po = 0.70 ; T = 70% ; A = - log10(0.70) = 0.155 2da cubeta: La solucin transmite el 70% de la luz que recibe, o 49% (0.70 x 70%) de la luz original: P/Po = 0.49 ; T = 49% ; A = - log10(0.49) = 0.310

Incremento de la concentracin

ABSORTIVIDAD MOLAR
DEPENDE DE: CARACTERSTICAS DEL DISOLVENTE ESPECIE ABSORBENTE LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO UNIDADES L /mol.cm

Pueden realizarse determinaciones cuantitativas

PROPIEDAD ADITIVA DE LA ABSORBANCIA

LA ABSORBANCIA TOTAL DE UNA MUESTRA A UNA LONGITUD DE ONDA DETERMINADA ES LA SUMA DE LAS ABSORBANCIAS DE CADA UNO DE SUS CONSTITUYENTES A DICHA LONGITUD DE ONDA.

A T, =
1,6 1,4 1,2 1,0 0,8

A
i

i,

0,6 0,4 0,2 0,0 0 200 400 600 800

longitud de onda (nm)

Debe seleccionarse la de acuerdo al analito de inters.

Colorante rojo absorbancia mxima a 525nm

Colorante azul absorbancia mxima a 625nm

Colorante prpura

LIMITACIONES DE LA LEY DE BEER

REALES variacin de la absortividad debida al disolvente Concentracin

APARENTES

instrumentales: radiacin policromtica qumicas: cambios qumicos de las especies absorbentes por interaccin con el disolvente

Desviaciones a la ley de Beer La mayor parte de las especies cumplen con la ley en un determinado intervalo de concentraciones. Fuera de l, experimentan desviaciones positivas o negativas. absorbancia
intervalo

Variacin de la estructura molecular

respuesta del blanco, interferencias o escasa sensibilidad

concentracin

Se debe trabajar en el intervalo lineal

SELECCIN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

banda A A banda C banda B A banda C banda A banda B

concentracin

Se deben medir las absorbancias en el entorno ms prximo a la lmax. de absorcin en el espectro (se minimizan errores) y se logran mximas sensibilidades. Si no se realiza la determinacin en las cercanas del mximo : pequeas variaciones en la medida se traducen en grandes errores.

Se supone que la muestra es una solucin, cuyo soluto es la sustancia absorbente. Pasos a seguir en un anlisis:

Seleccin de la longitud de onda. Se elige para la determinacin cuantitativa una longitud de onda donde la absorbancia sea mxima en el espectro de absorcin .

Preparacin de una curva de calibracin. Para preparar una curva de calibracin se miden las absorbancias de varias soluciones de concentraciones conocidas. Se mide la absorbancia de cada solucin a la longitud de onda analtica. La grfica de absorbancia en funcin de la concentracin deber ser una lnea recta.

Medicin de la absorbancia de la muestra y manejo de diluciones.

Midiendo la absorbancia de la solucin de la muestra se puede leer directamente su concentracin en la curva de calibracin. La concentracin de la solucin de la muestra deber estar ajustada (mediante diluciones) para que, al efectuar la medicin en el espectrofotmetro, la absorbancia est dentro del intervalo de 0.12 a 1 aproximadamente, o la transmitancia est aproximadamente entre 10 y 75 %. Para determinar la concentracin de la muestra original es necesario tener en cuenta el factor de dilucin.

Espectrofotmetro

CUBETAS
CARAS NORMALES A LA DIRECCIN DEL HAZ

IR

VIS-UV

ABSORCIN MNIMA A LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

1. 2. 3. Vidrio ordinario o slice (VIS). Slice fundida o cuarzo (UV). NaCl, NaI, etc (IR).

Espectrofotmetros

Pueden ser :
1 Monohaz o haz simple

2 Espectrofotmetro de doble haz

Se puede desdoblar el haz a intervalos regulares con la ayuda de un choper La mitad de la luz atraviesa la muestra y la otra un blanco La absorbancia medida tiene en cuenta la relacin de absorcin muestra/blanco y permite corregir las desviaciones en el detector y en la fuente de salida

Aplicaciones analticas La espectrofotometra de absorcin molecular se puede aplicar tanto al anlisis cualititativo como cuantitativo. Anlisis cualitativo: los espectros de la muestra se comparan con los correspondientes a estndares con el fin de identificar las bandas de absorcin coincidentes. Este tipo de anlisis es ms frecuente en UV e IR para identificar compuestos orgnicos y mas rara vez se utiliza el Vis. Anlisis cuantitativo: est basado en la ley de Beer-Lambert en el intervalo de concentraciones de cumplimiento de la ley. Se establece la curva de calibrado usando estndares y la absorbancia de la muestra de concentracin desconocida se remite a la curva ( a veces basta con un solo estndar). En espectrofotometra Vis., el analito se suele incorporar a una especie compleja que presente bandas de absorcin intensas.

APLICACIONES ANALTICAS
AMPLIO CAMPO DE APLICACIONES
(anlisis orgnico e inorgnico)

ALTA SENSIBILIDAD BUENA SELECTIVIDAD BUENA PRECISIN FACILIDAD OPERATIVA APLICACIN A ESPECIES NO ABSORBENTES (FORMACIN DE COMPLEJOS)