(artigo de Yves L. M.

Gayard de Abril 2002 para a revista da SBCC)

Media-Fill para reas de Envase assptico

Introduo O Media-Fill um teste de simulao das operaes asspticas em que se substitui o produto por um meio de cultura (nutriente de microrganismos). Os recipientes envasados devem em seguida ser incubados. Para passar no teste, os recipientes no devem apresentar crescimento microbiano ou alm de um limite pr-definido, e bem pequeno -- um recipiente em 1000 pela norma brasileira RDC 134, ou um em 4750 pelas recomendaes associativas norte-americana e inglesa. um teste desafiador, pois as reas asspticas costumam envasar, pelo contrrio, produtos que no favorecem o crescimento microbiano. Muitas envasam antibiticos. Envasar meio de cultura representa para os operadores a ocasio de provarem a qualidade de sua tcnica assptica. Representa para os responsveis da rea desafiar oficialmente o complexo conjunto formado pelos operadores, as mquinas, o fluxo de materiais, o processo de esterilizao, o sistema de ar condicionado filtrado, as utilidades adequadas (ar comprimido filtrado, vapor puro, gua para injeo etc.) O objetivo do teste Media-Fill, como diz a associao farmacutica norte-americana PDA (Ref. 1 1.4) de: demonstrar a capacidade do processo de manusear produtos de forma estril qualificar ou certificar os operadores da rea assptica cumprir com os requisitos das boas prticas de fabricao.

um teste de qualificao da rea, portanto. Ou de validao do processo, se quisermos enfocar o processo, uma vez que o termo validao mais usado para processos e qualificao para pessoas, reas e equipamentos. O termo Media-Fill provm do ingls: envase de meio (de cultura). A RDC 134 (Ref. 2) prefere usar a perfrase enchimentos com meio de cultura. Usam-se tambm os termos: "desafio da esterilidade" e, para os processos de farmoqumicos, "simulao de processo estril". Diversos tipos de Media-Fill Nota 1: em todos os tipos de Media-Fill devem-se simular as operaes de rotina, as intervenes, os tempos de espera. Entraremos em mais detalhes adiante, na seo de princpios e conceitos. as recomendaes abaixo so na maioria tiradas de experincia de empresas e do relatrio tcnico PDA (Ref. 1). No so todas elas requerimentos de todas as agncias regulamentadoras. A esses, o leitor dever reportar-se para conhecer o que poder ser dele exigido. vrios tipos de Media-Fill no puderam ser detalhados aqui, por apresentarem muitas particularidades, a ponto de merecer um texto to extenso quanto o presente artigo. Alm disso, no so da experincia do autor. Entre eles esto: os processos de fabricao de farmoqumicos, para os quais existe uma monografia norteamericana (Ref. 5), os de liofilizao, os em isoladores. O presente artigo quer to somente detalhar os processos de envase de lquidos, ps, suspenses.

Nota 2:

Nota 3:

Para a preparao de lquidos e solues estreis ---

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Nesse caso, o meio colocado no mesmo tanque em que o seria o produto na sua rotina, e a esterilizao realizada por autoclavao ou filtrao estril como se realiza com o produto. Em seguida, transfere-se o meio para os gales de envase. Todas as operaes de rotina devem ser simuladas, tais como: amostragens, testes de integridade dos filtros, manipulaes asspticas e intervenes (re-filtraes, recirculaes, reconexes etc). Os maiores tempos esperados na rotina para as diversas etapas em que o produto mantido estril (como tempo de estocagem ou espera em fila de produo ou espera de turno etc.) devem ser replicados (hold times). Em reas de envase de antibiticos, o meio de cultura acrescido de um desativador, tal que penicilinase, para dirimir dvidas quanto a eventuais traos remanescentes de produto que mascarariam a possvel contaminao.

Para o envase de solues e lquidos --Para validar o envase, a preparao da soluo ou lquido (detalhada no pargrafo anterior) deve ser tambm simulada. No seria aceitvel fazer o Media-Fill com o galo previamente aprontado e estril sem a devida simulao da rotina dessa preparao. Porm aceitvel executar a validao em dois momentos: a esterilizao da soluo, e o envase assptico. Para o Media-Fill do envase propriamente dito, a preparao da mquina e suas peas, a esterilizao dos recipientes (frascos, ampolas etc), das rolhas e selos, se houver, devem representar a rotina. O envase deve ser na velocidade pr-determinada para o recipiente envasado. Os recipientes so todos inspecionados para garantir integridade e presena de meio, e, na classificao, invertidos e levemente agitados para assegurar o contato do meio com a zona de fechamento. Em seguida so colocados por tempo determinado em temperatura controlada para incubao. recomendado que os recipientes sejam armazenados em bandejas ou caixas identificadas com a hora de envase de maneira a poder-se rastrear o perodo em que ocorreu a contaminao, no caso de alguns recipientes mostrarem crescimento microbiano durante a incubao. Dentre as intervenes a reproduzir no teste, esto, tipicamente: o controle de dose, a troca de bombas dosadoras, de bicos injetores, de filtro estril, a remoo de recipientes tombados etc. Para o envase de ps --Nesse caso, o processo mais complicado, pois a soluo de se envasar meio de cultura em p no aplicvel na prtica: um produto que apresenta uma reologia muito desfavorvel ao escoamento pelo sistema de dosagem das mquinas de envase. Uma das solues, dosar meio de cultura lquido por todo o sistema que, na rotina, dosa o p. Detalharemo-la mais adiante. Outra soluo, muito mais comumente adotada, de adicionar-se meio de cultura lquido, nos recipientes, a um placebo em p, dosado pela mquina (Fig. 1). O uso do placebo sem o meio lquido no suficiente, pois no comprovaria que a operao estril, uma vez que no promove o crescimento. Os placebos comumente usados so: lactose, manitol, polietileno glicol 6000, cloreto de sdio. A escolha do qual usar deve levar em conta que: deve poder ser embalado em recipientes ou sacos equivalentes ao da matria prima rotineiramente alimentada ao processo. Deve poder ser esterilizado de maneira prtica e comprovvel. Deve dissolver-se facilmente em pequenas quantidades do meio de cultura lquido (isso porque a avaliao da ausncia de contaminao faz-se pela observao visual da limpidez do meio de cultura aps incubao) Deve apresentar ausncia de inibio ao crescimento microbiano Deve apresentar facilidade de manuseio e envase semelhante da matria prima envasada na rotina. 69814730.doc pg. 2 de 24

O placebo deve ser desafiado quanto ausncia de inibio ao crescimento microbiano. Essa uma atividade do laboratrio microbiolgico: o growth promotion (promoo do crescimento). Consiste em inocular o placebo com Bacillus subtilis e Candida Albicans, e os organismos comumente encontrados na rea (Ref. 1 apndice 1). Tipicamente, inocula-se um conjunto de placas de soluo de placebo e meio em concentrao similar envasada nos recipientes. Inocula-se tambm outro conjunto de soluo do meio sem o placebo. Ambos os conjuntos devem apresentar crescimento. Mais detalhes sobre a preparao e o desafio do placebo podem ser encontradas no relatrio PDA (Ref. 1) Da mesma forma que para os processos de envase de lquidos, nas reas de antibiticos, o meio de cultura que se adiciona ao placebo deve ser acrescido de um desativador. As estratgias usadas para realizar o envase so vrias, e apresentam-se como segue, com suas vantagens e desvantagens: A passagem de meio de cultura lquido por todo o sistema de dosagem que, na rotina, dosa p. Sem o placebo. Tal estratgia, mencionada acima, s aplicvel em poucas mquinas de envase, especiais.Tem a vantagem de no necessitar a montagem de configuraes diferentes da rotina, porm requer a comprovao de que o manuseio e as intervenes simulam adequadamente a rotina. A adio do meio lquido nos recipientes, por um sistema complementar de seringas e bicos injetores, na prpria mquina onde est se envasando o placebo. Tal estratgia tambm necessita de mquina adaptada. A configurao de operao diferente da rotina, porm os parmetros de dosagem so adequadamente simulados.

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A adio de lquido em estgios diferentes do processo: manualmente, ou em mquina adicional de envase de lquidos, montante ou jusante da envasadora de ps. Em linha com esta mquina, ou em outra batelada, antes ou aps adicionar o p. So vrias variantes dessa estratgia, as quais tm em comum a desvantagem de acrescentar um passo muito grande ao processo, diferente da rotina. Isso, em reas asspticas, duplica ao risco de contaminao, alm de multiplicar a dificuldade de investigao quando surge a contaminao (lembrando que toda contaminao deve ser investigada, mesmo se inferior ao limite de aceitao). O risco maior ainda quando a adio do lquido manual, pelo manuseio dos recipientes. H ainda a opo de perfazer o envase de lquido numa rea separada, se no houver condies de espao ou de trabalho (bancada) disponvel na mesma rea. Neste caso, deve-se descontaminar o recipiente por fora, antes de abr-lo para introduzir o lquido. Para contornar essa dificuldade, pode-se envasar o lquido em condies no estreis, e em seguida esterilizar o recipiente em autoclave antes de aliment-lo envasadora de p. Porm a esterilizao preliminar dever nesse caso estar validada.

FLUXO UNIDIRECIONAL

Meio de cultura

P (placebo)

Fig. 1: uma das configuraes possveis de simulao Media-Fill de um processo de envase de produto em p (o meio de cultura acrescentado ao recipiente por meio de bico adicional na mquina de envase)

Para processos de fabricao de farmoqumicos --Nesse caso, o processo fundamentalmente diferente de todos os outros acima e abaixo citados, por envolver operaes qumicas e/ou bioqumicas em vasos e reatores e transportes de fluidos e supenses atravs de tubulaes extensas. Usualmente, tais operaes processam-se por campanhas de vrios dias, e devem portanto ser simuladas por perodos semelhantes. Os requerimentos de pior caso, intervenes, nmero de pessoas, condies de incubao etc. aplicam-se tambm a esse tipo de Media-Fill. Duas dificuldades principais, porm, ainda fazem com que as expectativas dos grupos de estudo para esse tipo de processo no estejam to bem delineadas quanto para os processos acima. Primeiramente, no adequado usar meio de cultura, pelo risco de no se garantir a descontaminao da instalao aps os testes. Costumam-se usar placebos inertes. Em 69814730.doc pg. 4 de 24

segundo lugar, os limites de aceitao da contaminao no se expressam em nmeros inteiros, como se fossem recipientes. Para determinar esses limites, a abordagem mais utilizada a de contar a quantidade de colnias observadas ao fim da incubao, relacionando-as com a quantidade de doses que se prevem envasar a partir de uma batelada de produto igual simulada. Pede-se ao leitor referir-se ao relatrio PDA especfico de Media-Fill de farmoqumicos (Ref. 5) para uma lista das estratgias possveis de simulao desses processos.

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Outros tipos de Media-Fills --Para produtos liofilizados, acrescentam-se, complexidade do envase, os seguintes passos: --- o transporte do recipiente da envasadora ao liofilizador, e --- a operao do liofilizador. O transporte dos recipientes, por sua parte, no se apresenta complexo quanto simulao, bastando-se reproduzir a rotina (assumindo-se que a rea seja adequada, com fluxos unidirecionais instalados ao longo do percurso, ou integrados ao carrinho de transporte). A operao do liofilizador, por outro lado, apresenta desafios especficos: Como ocorre sob vcuo, o meio de cultura tende a vaporizar. Como ocorre por perodo longo, o risco de contaminao maior. Como provoca congelamento do produto, h o risco do meio de cultura perder a capacidade de promover o crescimento microbiano.

Pede-se ao leitor referir-se ao relatrio PDA (Ref. 1) para uma lista das estratgias comumente empregadas de abordagem das peculiaridades acima (uso de meio de cultura diludo, de tempos reduzidos de ciclo, de vcuo parcial etc). Para produtos em suspenso, a operao rotineira basicamente igual de envase de lquidos, com a diferena do passo adicional que a adio do slido ao lquido de suspenso. A simulao consiste ento em adicionar o placebo estril ao meio de cultura lquido. Os tanques de recirculao so portanto necessrios para manusear a suspenso, assim como a lgica Media-Fill obrig-los-ia de qualquer forma a serem simulados. A simulao do envase enfrenta os mesmos desafios que o envase de lquidos, e a seleo do placebo, os mesmos que o envase de p. Para cremes, pomadas e gel, o maior desafio est na inspeo aps incubao: os recipientes sendo usualmente opacos, como tambm a maioria dos produtos dessa categoria, costumam-se esvaziar os recipientes em vidros transparentes, e inspecionar com cuidado redobrado.

Princpios e Conceitos Nmero e freqncia dos testes --Sendo um teste de qualificao da rea, a expectativa de no mnimo trs Media-Fills ao incio de um processo novo, ou de um processo que sofreu modificaes. Em seguida, Media-Fills peridicos devem ser realizados, razo de um a cada vez. As agncias norteamericana e inglesa esperam dois deles por ano. Se a rea sofrer alguma manuteno grande, ou estiver implicada numa investigao por falha injustificada de esterilidade do produto ou se o monitoramento ambiental revelar resultados continuamente alm dos limites de alerta ou ao, espera-se que se realize um ou mais Media-Fills para comprovao da adequao da rea s condies operacionais. (Vide relatrio PDA Ref. 1 9) Processos diferentes de uma mesma linha podem ser s vezes combinados em uma estratgia comum de validao para reduzir o nmero de Media-Fills dessa linha. Assim por exemplo, a troca de formatos (recipientes pequenos, mdios ou grandes) consegue manterse validada com somente duas corridas por ano, pela permutao lote a lote de todos os formatos. As corridas iniciais nesse caso podero ser trs, sendo um do recipiente mais delgado (sujeito a mais tombos) e dois do de maior abertura de boca (sujeito a maior exposio do seu interior ao ambiente). Tal estratgia, assim como os critrios de escolha

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dos casos extremos (recipientes maior e menor ou recipientes da boca maior e menor) devero ser precisamente explicados em protocolo previamente aprovado e documentado. Por outro lado, modificaes que possam influir na qualidade do ar e/ou no seu padro de fluxo devem ser revalidadas trs vezes. Isso porque as zonas onde o produto exposto, nas reas asspticas, devem permanecer sob fluxo unidirecional, por requerimento das agncias reguladoras como a Anvisa (RDC n 134 Ref. 2 - pargrafo 17.1.3). H muito se demonstrou que fluxos turbulentos aumentam por demais a probabilidade de partculas slidas levantarem-se das mesas e paredes vizinhas e virem a contaminar o produto (Ref. 3 - captulo 01).

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Modificaes em procedimentos de operao assptica tambm so consideradas "significativas", implicando trs Media-Fills. Isso porque a tcnica dos operadores est no corao da operao. As posies e velocidades dos movimentos de um executante de qualquer interveno em meio ao fluxo unidirecional foram validadas pelos trs Media-Fills iniciais, e no devem ser alteradas sem se revalidar. Tambm modificao significativa a introduo de um turno a mais na Produo. O maior impacto de tal alterao, de aumentar (geralmente de 30 a 50%) o tempo de operao e conseqentemente a probabilidade de degradao das condies da rea. Alm do que, introduz-se uma turbulncia adicional ao processo: sua parada e retomada por uma equipe diferente. Para os processos em que a mquina de envase pode ser parada e reiniciada sem perder os ajustes de velocidade e dose, a troca de turno no representa uma interveno grande. Porm determinados processos e determinados procedimentos de operao podem requerer uma demora mais longa e reajustes mais complexos. No de se estranhar portanto a expectativa das associaes reguladoras, de que adies de turno sejam validadas por trs Media-Fills.

Intervenes --Por interveno, entende-se uma ao no processo, diferente do envase propriamente dito, como por exemplo: Fornecimento / refornecimento de materiais (recipientes, tampas, selos, produto etc.) Acoplamento do produto mquina de envase Ajustes de dose Ajustes de peas Troca de peas de dosagem (seringas, mangueiras, bicos, discos de dose etc.) Troca de peas da mquina (guias, canaletas etc.) Desbloqueio de peas da mquina (canaleta engarrafada, transportadores travados, guias soltas etc) Retirada de recipiente tombado (com pina estril !) Remoo dos cacos de recipiente quebrado Troca de luvas Troca de vestimenta assptica Etc.

(No se deve entretanto pensar em simular intervenes que firam as boas prticas de fabricao. Significaria a inteno de justific-las para a rotina). As intervenes tm que ser repetidas nos Media-Fills, tanto nos iniciais como nos de revalidao peridica. Se no se puderem realizar, por exemplo porque a operao com meio de cultura impe restries ao uso de certos ajustes ou certas peas, devem ser simuladas: o executante perfar os mesmos movimentos, e colocar recipientes (cheios ou prestes a ser enchidos) na mesma regio onde se encontraro nos lotes de rotina quando se apresentar essa situao. Os recipientes assim simulados devero ser incubados. A freqncia de repetio de cada interveno deve ser calculada ou estimada para representar o mais fielmente possvel a freqncia esperada de sua ocorrncia na rotina. O clculo ou estimativa deve ser documentado(a). Nos lotes de rotina, normal rejeitarem-se os recipientes presentes nas regies vizinhas da localizao da interveno, pelo risco que correm naquele momento. No Media-Fill, devem ser segregados e/ou identificados, e incubados em separado. Se contaminados, no sero computados juntos com os demais no total a ser comparado com o limite de aceitao.

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Devero somente ser investigados quanto causa raiz da contaminao, para garantir que esse risco no se estende aos frascos comercializados. As intervenes, assim como a quantidade e a localizao dos recipientes a rejeitar conseqentemente a elas, devem estar claramente listadas e descritas nos procedimentos da operao assptica dos lotes de rotina. Devem ser periodicamente reavaliadas. Intervenes no planejadas que tenham ocorrido durante a execuo do Media-Fill, constantes ou no dos procedimentos operacionais, devero tambm ser documentadas. Podero assim auxiliar em investigaes sobre esse teste, e serem avaliadas para eventual validao e incluso nos procedimentos da rea.

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FLUXO UNIDIRECIONAL Recipien tes a segrega r

FLUXO UNIDIRECIONAL

FLUXO UNIDIRECIONAL Recipientes a segregar

Interveno n 1 ajuste da dosagem

Interveno n 2 reposio de produto (recipientes previamente retirados)

Interveno n 3 retirada de recipiente tombado

Fig. 2: Trs exemplos de intervenes a efetuar ou simular em Media-Fill

Ocorrncias --Alm das intervenes, executadas pelo pessoal da rea, algumas ocorrncias podem ser provocadas e/ou simuladas no Media-Fill, de maneira a valid-las para a rotina, por exemplo: Entrada de instrumentos, que possam ser necessrios para avaliao mecnica ou eletro-eletrnica das mquinas ou da rea, periodicamente, rotineiramente, ou emergencialmente. Tais aparelhos usualmente no suportam a passagem por autoclave ou mesmo cmaras ultra-violetas, e adentram a rea assptica por vestirio ou antecmara, dentro de sacos plsticos externamente sanitizados. Queda de energia, por um espao definido de tempo, durante o qual os executantes do Media-Fill seguiro um procedimento definido de operao (por exemplo: sair da sala e, se a energia voltar em menos de x minutos, executar uma sanitizao definida e reiniciar o envase) Parada para curto reparo mecnico ou eltrico.

Tais ocorrncias planejadas, devem ser justificadas e documentadas previamente ao MediaFill. Ocorrncias no-planejadas, entretanto, tambm devero ser documentadas (pelos mesmos motivos que para as intervenes no planejadas).

Monitoramento ambiental --O monitoramento ambiental no depende do Media-Fill para se qualificar (Vide Ref. 4). Podese entretanto aproveitar a ocasio para estabelecer ou consolidar nveis de ao para as operaes de rotina da rea. Freqentemente, dados adicionais tais como: monitoramento de roupas, Rodac em pontos especiais etc, so coletados para tal fim. Nesse caso, deve-se justificar e documentar o monitoramento adicional. O plano de limpeza e sanitizao (que parte do programa de monitoramento ambiental vide Ref. 4) no deve ser, antes do Media-Fill, mais extenso do que o rotineiro, com a seguinte exceo: entre dois lotes Media-Fill, poder-se- efetuar uma limpeza especfica de remoo de resduos ou vazamentos de meio de cultura. No se dever estender tal limpeza a ponto de deixar o ambiente mais assptico do que na rotina. Por outro lado dever-se-, 69814730.doc pg. 10 de 24

sim, efetuar uma limpeza especialmente reforada aps o ltimo Media-Fill de uma campanha.

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Caractersticas dos recipientes --Os recipientes podem ser do mesmo formato, ou aproximadamente, e ento seguir a estratgia j delineada acima ("nmero e freqncia dos Media-Fills"). Se forem substancialmente diferentes quanto ao formato, espera-se uma estratgia mais sofisticada, por exemplo com trs Media-Fills de cada pior caso levando-se em conta parmetros crticos tais como: abertura da boca e estabilidade fsica (como j mencionado) alm de velocidade de produo, especificidade das intervenes, variaes no padro do fluxo de ar limpo etc. Sistemas diferentes de fechamento, tais como: tampa mais selo, ampolas, cobertura plstica (tipo "AddVantage") etc., devem ser cada um objeto de validao completa (trs Media-Fills). Velocidade do Processo --Uma velocidade maior de envase provoca maiores dificuldades operacionais (tombamento de recipientes, desajustes, travamentos etc.) e representa portanto um maior desafio da tcnica assptica dos executantes. Em compensao, uma velocidade menor resulta em tempo maior de exposio ao ambiente, aumentando assim a probabilidade de contaminao. Adicionalmente, o Media-Fill pode requerer uma velocidade menor ainda devido s limitaes impostas pelo envase com meio de cultura. A abordagem mais comumente empregada a de perfazer o envase menor velocidade esperada para o processo rotineiro, ou ainda menor, e executar ou simular a quantidade de intervenes estimadas para as piores condies de rotina. Volume de meio de cultura a envasar --O volume de meio a envasar no precisa igualar o volume envasado na rotina, bastando somente: Ser suficiente para fcil deteco das contaminaes, durante as inspees Ser suficiente para molhar todo o interior do sistema de fechamento (abertura, tampa e selo, no caso de frascos, ou zona de solda no caso de ampolas) durante a inverso e leve agitao que se deve dar aos recipientes antes de p-los para incubar (Ref. 1 - 6.6 e Ref. 6 - 5.3.4).

Durao e tamanho do lote Media-Fill --Os tempos de montagem ('setup" ) e ajustes so parte do Media-Fill. Entretanto, conveniente definir separadamente o tempo de produo de um lote (por exemplo, desde o momento em que se conecta o produto, ou desde o primeiro fornecimento de recipientes, ou de tampas etc., at o ltimo recipiente envasado, ou at desconectar a alimentao do produto etc.). Tal abordagem permitir validar com mais facilidade os tempos de montagem, ajuste e operao para os lotes de rotina. A expectativa que o tempo de produo do lote Media-Fill seja superior de uma ou mais horas ao tempo mximo esperado para o envase de um lote de rotina. Com isso, valida-se uma folga para completar um lote de produo se tiverem ocorrido perdas de tempo (devidas a problemas mecnicos, ou de envase, ou paradas de fora, ou desajustes da condio da rea etc.) No necessrio permanecer envasando recipientes continuamente por todo o perodo do lote Media-Fill: pode-se encher parte dos recipientes no incio, e completar o envase mais no fim. Tal estratgia no fere o conceito de tempo de lote, pois continua sendo desafiada a capacidade da rea (incluindo-se os recipientes a envasar, as tampas, os sistemas de

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dosagem, os volumes de produto etc.) em manter as condies asspticas por todo esse perodo. A fig. 3 mostra como se desenrola no tempo tal seqncia de atividades. Quanto quantidade de frascos a envasar, a norma brasileira RDC 134 pede o mnimo de 3000 recipientes. As associaes norte-americana (PDA -Ref. 1 - 6.8) e inglesa (PS Ref. 6 - 6.1) atribuem empresa a responsabilidade de envasar um nmero estatisticamente aceitvel (recomendando 3000) embora reconhecendo que alguns processos (tais como a produo de equipamentos teraputicos) apresentam tipicamente tamanhos de lote menores, para os quais o Media-Fill deveria ter o tamanho do lote. Entretanto, o entendimento de um auditor pode ser mais abrangente, e algumas empresas preferem precaver-se adotando regras adicionais, como: Se o processo for de mais de um turno, sero no mnimo 3000 por turno. Se os 3000 levarem menos de uma hora, envasar por, no mnimo, uma hora (arbitrariamente) em cada turno.

Outrossim, a obrigatoriedade de perfazer intervenes durante o Media-Fill normalmente resulta num nmero maior de recipientes, pois, alm dos segregados determinados pelo procedimento de cada interveno, conveniente envasar mais alguns antes e depois da interveno.Com isso, garantir-se- a validade da segregao, em termos de quantidade e localizao, no caso de contaminao dentro do conjunto segregado. (Num exemplo particular de Media-Fills de validao de um envase de p em frascos de 10 ml, 50 ml, e 100 ml produziram-se em mdia aproximadamente 40 % a mais unidades devido s intervenes). As intervenes tambm resultam num aumento considervel do tempo de envase propriamente dito: no exemplo particular citado acima, esse tempo variou de 6 a 10 horas por turno em lugar daquela 01 hora mnima obrigatria que teria sido suficiente sem as intervenes.

Incio do lote Incio do turno

TEMPO DE LOTE MEDIA-FILL

_ _ _ _ _ _ _ _

1 TURNO 2 TURNO ... _ _ _ _ _ _ _ _ Montagem troca de turno envase propriamente dito: mnimo de 01 hora ou 3000 unid. por turno intervenes: N recipientes (segregados) alm dos 3000 acima envasados. ajuste de dose envase parado, mas produto e materiais expostos
_ _ _ _ _

(repetio das atividades do 1 turno)

_ _ _ _ _

8:00

10:00

12:00

14:00

16:00

18:00

fig. 3:

ESTRATGIA POSSVEL PARA A DISTRIBUIO DAS ATIVIDADES NO TEMPO EM UM LOTE MEDIA-FILL

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Inspeo e manuseio pr-incubao Aps enchidos e tampados ou soldados, conveniente que os recipientes passem por inspeo, de modo a rejeitar os que apresentam defeitos crticos tais como: Trincas profundas Defeitos graves de fechamento Ausncia de fechamento Ausncia de meio de cultura

Ou seja: sero rejeitados os que representam recipientes que na rotina o so tambm, e que com certeza iriam apresentar contaminao durante a incubao. No faria sentido incub-los e ento ter que abrir uma investigao para eles. Esses recipientes devem ser contabilizados e registrados, com indicao da categoria pela qual foram rejeitados. Convm tambm passar por essa inspeo os recipientes segregados por interveno. Todos os demais recipientes devero ser incubados. Aps a inspeo, ou ao mesmo tempo, obrigatrio que os recipientes sejam invertidos e levemente agitados, de maneira a forar o contato entre o meio de cultura e o sistema de fechamento, desafiando assim este ltimo, como j mencionado acima (em "volume do meio de cultura"). A inspeo pr-incubao tambm deve classificar os recipientes no-rejeitados em 03 classes principais, conforme o quadro Q-1 ao lado ("Classificao dos recipientes para incubao").

QUADRO Q-1 CLASSIFICAO DOS RECIPIENTES PARA INCUBAO A classificao a seguir feita durante a inspeo pr-incubao. Os recipientes devem ser estocados na rea de incubao em pallets ou conjuntos identificados. a) Os recipientes que no apresentam nenhum problema, representando assim os que, na rotina, seguiriam para embalagem e em seguida para o mercado. b) Os recipientes que apresentam defeitos cosmticos, e portanto no seriam liberados em lotes de rotina (deformaes, manchas, bolhas, trincas pouco profundas, perda da tampa plstica em selo flip-off etc). Tais defeitos devem constar do procedimento operacional de rotina da rea. Esses recipientes sero contabilizados ao fim da incubao junto com a categoria acima, para comparao com o limite de aceitao. c) Os recipientes que foram segregados por interveno (incluindo-se ajustes de dose e testes em-processo tais como teste de torque do selo). Esses no precisam ser separados por defeitos cosmticos. No sero contabilizados para comparao com o limite de aceitao. Porm qualquer contaminao neles dever tambm ser investigada. 69814730.doc pg. 14 de 24

Incubao e promoo do crescimento --A incubao deve durar 14 dias (Ref. 1- 6.10 e Ref. 6 - 5.3). A temperatura deve ser controlada durante todo o perodo. A faixa de controle da temperatura deve ter sido validada como adequada ao crescimento dos microrganismos historicamente encontrados no ambiente da rea e/ou na carga microbiana dos produtos manuseados. Antes da incubao, alguns recipientes dentre os no segregados devem ser amostrados e enviados ao laboratrio microbiolgico para teste de promoo do crescimento. Provar-se- assim que foi por tcnica assptica adequada que os recipientes incubados mantiveram-se ilesos, e no por falha do meio de cultura ou por introduo de traos de antibitico ou por outras falhas das condies de crescimento. A lista dos microrganismos utilizados para o teste de promoo do crescimento deve ser a mesma que serviu para a validao da faixa de temperatura da incubao. A faixa de temperatura pode ser uma s pelos 14 dias de incubao. Geralmente a faixa escolhida est no intervalo de 20 a 35 C (Ref. 1- 6.10 e Ref. 6 - 5.3). H uma tendncia, porm, de uso de duas faixas: 20 a 25C por 7 dias e 30 a 35C pelos outros sete, de maneira a assim favorecer igualmente o crescimento de bactrias e de fungos. Para desafiar mais ainda o sistema de fechamento, algumas empresas incubam os recipientes de ponta cabea, durante todo o perodo, ou parte dele.

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Inertizao Se as condies para o processo rotineiro forem de envasar o produto sob cobertura de gs inerte, deve este ser substitudo, no Media-Fill, por ar estril, em condies de velocidade semelhantes. O gs inerte inibiria o crescimento microbiano que revelaria uma eventual contaminao. No caso de o histrico dos testes de esterilidade e /ou do monitoramento ambiental ter revelado a presena de microrganismos anaerbicos, deve ser avaliada a escolha entre o gs e o ar, justificada, e documentada. A cobertura deve existir no Media-Fill, pois o padro do fluxo unidirecional existente na rotina deve ser mantido. Adicionalmente, se o gs empregado na rotina tiver caractersticas muito diferentes do ar (por exemplo, o nitrognio lhe muito parecido, enquanto que o dixido de carbono tem densidade maior) deve se avaliar o quanto a substituio afeta o padro do fluxo na zona crtica. Testes de fumaa nessa regio podem ser teis para ajustar uma vazo de ar estril que consiga um padro equivalente.

Aceitao Segundo o PDA (Ref. 1) o critrio de aceitao para Media-Fills de envase assptico ainda assunto de debate entre os peritos. Por um lado, consensual que o objetivo do Media-Fill deva ser de contaminao zero, pela importncia do processo que assim se quer validar. Por outro lado, consensual tambm que so muitas as diferenas entre o processo real e o simulado, pela presena de meio de cultura, de peas adicionais, de procedimentos adaptados, o que permite propor um limite diferente de zero, dependendo de quo fielmente se consegue retratar o processo na simulao Media-Fill. A taxa de contaminao, para a RDC 134, no deve ser superior a 01 em 1000 (Ref. 2 - 17.10.3.c) ou ainda inferior (Ref. 2 - 19.6.1.2.1). Para a associao inglesa a taxa de 1 em 1000 deve ser garantida estatisticamente, e para a norte-americana de responsabilidade da empresa garantir um critrio de aceitao baseado em sua experincia operacional e na tecnologia empregada. A norte-americana tambm cita a abordagem estatstica como uma das possibilidades. Algumas empresas, inclusive no Brasil, j incorporaram esse critrio em seus procedimentos de Media-Fill. A matemtica envolvida (ilustrada no quadro Q2 - "o nvel de confiana de 95 %") conduz rejeio do Media-Fill se 01 recipiente se apresentar contaminado em 3000. Com lotes maiores, pode-se aceitar que mais recipientes apresentem contaminao (Tabela T-1). O limite de aceitao aplicado para cada turno, quando o Media-Fill for executado por vrios turnos. Nota: Essa abordagem pode no ser aceitvel para lotes de tamanhos muito diferentes (mais de 100 000 recipientes ou menos de 3000). Pede-se ao leitor referir-se ao relatrio PDA (Ref. 1) ou monografia PS (Ref. 6) para uma discusso mais detalhada das abordagens possveis nesses casos. Para processos em isoladores, que representam uma tecnologia com risco muito menor de contaminao, a exigncia maior: a taxa de contaminao de 1 por 10 000 (vide quadro Q-3 e tabela T-2). No se trata de uma "injustia" contra quem investiu em tecnologia e validao. exigncia normal que se demonstre a capacidade de operar a tecnologia adquirida.

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QUADRO Q-2 O NVEL DE CONFIANA DE 95 % Numa populao em que a proporo dos elementos com determinada caracterstica dada por p %, a probabilidade de aparecerem k desses elementos numa amostragem de n elementos da populao calculada por: Prob = Cnk pk (1-p)(n-k) (distribuio binomial) a combinao de k elementos de um conjunto n Cnk = n ! / ( k ! * (n k ) ! )

Onde: Cnk

A abordagem de aceitao do Media-Fill ento a seguinte: Se o processo Media-Fill realmente conseguir que menos de 0,1 % de recipientes contaminem, ento, a probabilidade de aparecerem zero recipientes contaminados dentre os n incubados, ser de mais que 95 %. Em outros termos: se aparecerem mais que zero recipientes contaminados dentre n incubados, no teremos tanta confiana que o processo Media-Fill consegue contaminar 0,1 % ou menos dos recipientes. Pela frmula acima, portanto: 95 % = Cn0 (0,1%)0 (1-0,1%)(n-0) (probabilidade de aparecer zero recipientes contaminados) donde se deduz n (por tentativas): n = 2994 (arredondando: 3000) O raciocnio pode ser estendido a 01 ou menos recipientes contaminados: 95 % = Cn1 (0,1%)1 (1-0,1%)(n-1) + Cn0 (0,1%)0 (1-0,1%)(n-0) (soma das probabilidades de aparecer 01 e zero recipientes contaminados) donde se deduz n: n = 4742 (arredondando: 4750) 95 % O raciocnio pode ser estendido a 02 ou menos recipientes contaminados: = Cn2 (0,1%)2 (1-0,1%)(n-2) + Cn1 (0,1%)1 (1-0,1%)(n-1) + Cn0 (0,1%)0 (10,1%)(n-0) (soma das probabilidades de 02, 01 e zero contaminados) donde se deduz n: n = 6293 (arredondando: 6300) e assim por diante: n = 7751 n = 9151 etc. etc. (arredondando: 7760) (arredondando: 9160)

03 ou menos contaminados: 04 ou menos contaminados:

QUADRO Q-3 NVEL DE CONFIANA 95 % PARA ISOLADORES O raciocnio o mesmo que para processos convencionais, porm a expectativa de um proporo de contaminados muito menor: Assim, por exemplo, para zero contaminados: 95 % = Cn0 (0,01%)0 (1-0,01%)(n-0) donde n = 29 955 (arredondando: 29 960) 69814730.doc pg. 17 de 24 0,01%

etc. etc.

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Tabela T-1: limites de ao para recipientes contaminados (processos convencionais) Incubados (1) 3 000 4 750 6 300 7 760 9 160 10 520 11 850 13 150 Contamina dos 1 2 3 4 5 6 7 8 Incubados (1) 14 15 16 18 19 20 21 23 440 710 970 210 440 670 890 100 Contamina dos 9 10 11 12 13 14 15 16

Tabela T-2: limites de ao para recipientes contaminados (processos em isoladores) Incubados (1) 29 47 62 77 960 440 960 540 Contamina dos 1 2 3 4 Incubados (1) 91 540 105 130 118 421 Contamina dos 5 6 7

Nota (1):

para a quantidade de incubados, considerar somente os recipientes das classes a) e b) descritas no quadro Q-1 ("classificao dos recipientes para incubao")

Inspeo ps-incubao --Todos os recipientes incubados devem ser inspecionados visualmente ao fim da incubao, por inspetores(as) especificamente treinados(as) para tal. Deve-se observar a evidncia de crescimento microbiano. Recipientes com trincas profundas ou defeitos de fechamento, no vistos por ocasio da inspeo pr-incubao ou que apareceram depois, no devem ser contabilizados no conjunto a comparar com o limite de aceitao da contaminao. Devem entretanto ser investigados quanto s causas desses defeitos. Podem-se efetuar inspees em meio ao perodo de incubao. Devem ento tambm ser feitas por inspetores(as) treinados(as). Recipientes apresentando crescimento devem ser precisamente identificados, contabilizados com os demais da categoria em que foram classificados, removidos da incubao, e submetidos a investigao.

Interpretao dos resultados e investigao de falhas -Todo recipiente contaminado dever ser investigado. Os microrganismos devero ser identificados quanto ao gnero, e, se possvel, quanto espcie. As identificaes devero 69814730.doc pg. 19 de 24

ser comparadas com o histrico dos organismos da rea. As fontes possveis dessa contaminao devero ser investigadas. A investigao dever ser documentada. Os recipientes devero ser avaliados pela classe qual foram atribudos antes da incubao, conforme definidas no quadro Q-1 ("Classificao dos recipientes para incubao"). O nmero de contaminados dentre as classes a) e b) somados, deve ser comparado com o limite de aceitao (tabelas 1 ou 2). Se o limite for igualado ou superado, o Media-Fill falhou. Uma falha em Media-Fill deve ser sempre comunicada imediatamente aos responsveis pela Produo e Qualidade. A investigao dever avaliar todos os sistemas ligados rea (monitoramento microbiolgico, ar condicionado, ar ou gases comprimidos, guas, vapor, sistemas de esterilizao etc.) no somente os relacionados falha. Dever rastrear a contaminao em relao sua posio no tempo (donde a recomendao, acima citada, de se numerarem e identificarem com o horrio as caixas de embalagem). A investigao poder assinalar uma causa para a falha. Nesse caso, aes corretivas devero ser tomadas e documentadas. A causa-raiz e as aes corretivas levaro deciso de quantos novos media-Fills dever-se-o fazer para demonstrar que as aes surtiram efeito e que o processo est novamente operando dentro dos parmetros. Se a causa for extrnsica ao processo (por exemplo, queda de energia) geralmente aceita-se que um novo media-Fill basta. Se a investigao no apontar uma causa extrnsica para a falha, toda a revalidao MediaFill dever ser reiniciada, com as estratgias mencionadas acima ("Nmero e freqncia dos testes") para validaes iniciais.

Validaes decorrentes do Media-Fill Por ser esta sua funo, o Media-Fill tem como resultados imediatos a manuteno da qualificao da rea e de vrios parmetros da operao: operadores, tempos de espera de materiais e produtos, tempo de montagem, tempo de envase etc. Apresentamos a seguir vrios deles, dentre os mais relevantes: Operadores-Os executantes de um Media-Fill bem sucedido provaram sua tcnica assptica, em condies, como vimos, muito desafiadoras. requerido que todos os operadores de rea assptica passem por tal teste (Ref. 1 - 6.16), ao menos uma vez por ano (Ref. 6 4.3.2.5). Mais precisamente: para serem qualificados devem ter executado, no MediaFill, as mesmas tarefas que so chamados a executar na produo de rotina. Isso tambm vale para os operadores que perfazem a montagem (set-up), e os que auxiliam na operao, se algumas das tarefas, por exemplo a entrega de materiais, se fizer em zonas crticas. Tempos de espera ("hold times") Denominam-se Tempos de Espera os perodos durante os quais materiais, peas e produto podem ser estocados na rea sem perder a validade da assepsia. Assim, por exemplo, tampas, peas etc podem sair da autoclave e ser guardados sob fluxo unidirecional por uma semana ou mais, se assim tiver ocorrido nos Media-Fills da rea.

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Portanto, mais um dos aspectos a planejar para o Media-Fill: se a rea no dispuser de conjunto de peas de reserva, a produo dever parar por um tempo conveniente antes da execuo do Media-Fill, de maneira a poder autoclavar as peas e deix-las estocadas sob fluxo unidirecional pelo tempo que se quer validar. Tempo de envase e nmero de turnos Como j discutido acima ("durao e tamanho de lote"), a durao de um lote de produo tem que ter sido validada no Media-Fill. No necessrio que se tenha efetivamente envasado meio de cultura por um tempo extenso, mas o Media-Fill deve ter sido planejado, executado e documentado claramente quanto ao incio da montagem, o incio do lote e o fim deste. As duraes assim definidas para a montagem e o lote sero desse modo validadas, e no podero ser ultrapassadas na rotina. Do mesmo modo, no se poder operar com mais turnos de operao que quantos houve no Media-Fill.

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Documentao A documentao a nica prova que sobrar para mostrar ao auditor. Nem mesmo referncia futura h no Media-Fill. Deve-se, no mnimo, documentar: Toda informao normalmente constante da documentao de um lote de produto: ficha de fabricao, datas pessoal envolvido, em qual o turno e exercendo quais atividades cdigos e nmeros de lote dos materiais utilizados nmero de recipientes envasados, contabilizao, reconciliao e classificao dos recipientes pr- e ps-incubao relao das intervenes executadas dados do monitoramento ambiental dados de condio da rea (mais particularmente, do ar condicionado) etc. O protocolo executado e avaliado, do prprio exerccio de Media-Fill, no caso de um Media-Fill inicial de validao de um processo. Ocorrncias planejadas (com o protocolo executado e avaliado, ou a referncia dele) Avaliao das eventuais contaminaes frente ao limite de aceitao, e investigaes. Disposio pelo Controle da Qualidade. Toda documentao adicional, tal que vdeo ou notas manuscritas tomadas por observadores do processo.

Os vdeos e anotaes, mesmo que tomados com o propsito de treinamento ou preventivamente para auxiliar em eventual investigao futura sero considerados como documentao oficial. Podem ser utilizados para auditoria da acuracidade do resto da documentao e/ou da adequao da tcnica assptica dos executantes etc.

Concluso O Media-Fill um teste de qualificao exigente, mas realizvel. As expectativas das agncias reguladoras e das associaes farmacuticas no representam uma barreira intransponvel, e sim o resultado da evoluo normal do nvel da qualidade, resultante das interaes entre auditores e indstrias, e das estratgias desenvolvidas por essas. O autor do presente artigo testemunhou e participou de dezenas de Media-Fills realizados nos moldes acima. Tambm participou, no passado, de outros cujos critrios e exigncias eram menos severos e entretanto representavam tambm um autntico desafio. As exigncias aumentaram, mas os conhecimentos e competncias das reas de operao, laboratrios, engenharia e manuteno tambm se afinaram. Hoje estamos com reas mais precisamente projetadas e construdas, com sistemas de utilidades mais complexos, mais finamente monitorados (em particular o sistema de ar condicionado) com fluxos unidirecionais testados mais detalhadamente, com maiores recursos de monitoramento ambiental, com sistemas de treinamentos e procedimentos mais sofisticados. Porm, muito das experincias passadas ainda vale, pois o intervalo de seis meses entre Media-Fills um perodo extenso demais. No se arrisca portanto iniciar um Media-Fill sem reunio com o grupo inteiro, desde os supervisores at os operadores (preparao, operao, inspeo, limpeza etc.) incluindo os grupos de apoio (utilidades, em particular: o ar condicionado, manuteno etc) e de monitoramento ambiental. Relembram-se os 69814730.doc pg. 22 de 24

conceitos, repassam-se as funes de cada um, e sobretudo, d-se a palavra a qualquer um que possa se lembrar de algum detalhe fora do lugar...

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Referncias Ref. 1: Relatrio Tcnico -- Technical Report n 22 "Process Simulation Testing for Aseptically Filled Products" Journal of Pharmaceutical Science and Technology (50) PDA (1996).

Ref. 2:Resoluo RDC n 134 de 13 de Julho 2001 - DOU de 16/07/01 Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Ref. 3:Cleanroom Design - edited by W. Whyte Ed. John Wiley & sons 1991 - Copyright

Ref. 4:Mrcia C. V. S. M. Baroni - Monitoramento Ambiental na Manufatura de Produtos Estreis Revista da SBCC n 5 (nov/dez 2001) Ref. 5:Relatrio Tcnico -- Technical Report n 28 "Process Simulation Testing for Sterile Bulk Pharmaceutical Chemicals" PDA (International Association for Pharmaceutical Science and Technology) -- April 1999. Ref. 6:Monografia Tcnica da Parenteral Society Technical Monograph n 4 -- "The use of Process Simulation Tests in the Evaluation of Processes for the Manufacture of Sterile Products" The Parenteral Society (1993)

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