Reaccin 1. Citrato sintasa: Condensacin del acetilo y el oxalacetato.

Es una reaccin muy

exergnica (-32,2 Kj/mol).

Mecanismo de reaccin de la citrato sintasa

La reaccin es semejante a una condensacin aldlica El carbono metilico del grupo acetilo pierde un protn por medio de un residuo de histidina del enzima. El carbanin resultante realiza un ataque nucleoflico al carbono carbonlico del oxalacetato. La reaccin genera un compuesto muy inestable citroil-CoA, que espontneamente se hidroliza mientras est undo al enzima para dar productos.

Reaccin 2. Aconitasa: Isomerizacin a isocitrato. La aconitasa es una protena de hierro-azufre (o una protena con hierro no-hemo), contiene como grupo prosttico un centro Fe4S4.

Mecanismo de reaccin de la aconitasa

Centro activo de la aconitasa

Centro ferro-sulfurado en la aconitasa. El centro est coloreado en rojo y el citrato en azul. Tres residuos Cys del enzima unen tres tomos de hierro, el cuarto est unido a uno de los grupos carboxilo del citrato. Un residuo bsico. :B, en el enzima ayuda a posicionar el citrato en el centro activo. El centro ferro-sulfurado acta tanto en la unin al sustrato como en la catlisis.

Reaccin 3. Isocitrato deshidrogenasa: primera decarboxilacin (deshidrogenacin a oxalsuccinato

y decarboxilacin espontnea de ste).

G= - 20,9 KJ/mol

Mecanismo de reaccin de la isocitrato deshidrogenasa

El oxalosuccinato aparece entre corchetes debido a que no se disocia del enzima

Reaccin 4. Complejo -cetoglutarato deshidrogenasa: segunda descarboxilacin. Reaccin

anloga y comparable a la catalizada por la piruvato deshidrogenasa. El complejo multienzimtico consta delas siguientes enzimas:

-oxoglutarato deshidrogenasa (E1) Dihidrolipoil transsuccinilasa (E2) Dihidrolipoil deshidrogenasa (E3)

Regeneracin del oxalacetato Reaccin 5. Succinil-CoA sintetasa: Fosforilacin a nivel de sustrato

Reaccin de la succinil-CoA sintetasa

1) Formacin del succinil fosfato, un anhdrido mixto de alta energa. 2) Formacin del fosforil-His, un intermediario de alta energa. 3) Transferencia del grupo fosforilo al GDP, formandose GTP.

Reaccin 6. Succinato deshidrogenasa: oxidacin dependiente de flavina. La enzima (flavoprotena) contiene FAD unido covalentemente a un residuo de histidina y est fuertemente unida a la membrana interna mitocondrial. El enzima es fuertemente inhibido por malonato, anlogo estructural del succinato y es un ejemplo clsico de inhibidor competitivo.

Unin covalente del FAD a un resto de his de la succinato deshidrogenasa

Cadena de transporte electrnico

La actividad de la succinato deshidrogenasa es estereoespecfica, y slo se forma el ismero trans, el fumarato. El ismero cis el maleato no se forma

10

Reaccin 7. Fumarasa (Fumarasa hidratasa): hidratacin reversible del doble enlace C - C. El enzima es altamente estereoespecfico, cataliza la hidratacin del doble enlace en trans del fumarato, pero no el doble enlace en cis del maleato (el ismero cis del fumarato). En la reaccin inversa (de L-malato a fumarato), la fumarasa es igualmente esteroespecfica, el D-malato no es sustrato.

+ H2 O - H2O

G = - 3,8 kJ/mol

G = - 3,8 kJ/mol

Reaccin 8. Malato deshidrogenasa: Oxidacin del grupo hidroxilo del L-malato a una cetona en una reaccin dependiente de NAD+.

El G de esta reaccin es de + 29,7 kJ/mol. La concentracin de oxalacetato formado en el equilibrio es, por tanto, muy pequea. sin embargo la reaccin catalizada por la citrato sintasa , es muy exergnica (G = -31,5 kJ/mol) debdo a la hidrlisis del enlace tioester del citril-CoA. Esto hace que que la formacin de citrato sea exergnica, incluso a concentraciones fisiolgicas pequeas de oxalacetato.

11

Regulacin del cido ctrico

1) Disponibilidad de sustrato. (acetil-CoA y oxalacetato) 2) Inhibicin por producto. (NADH) 3) Inhibicin competitiva por retroalimentacin de los intermediarios que se encuentran ms adelante a lo largo del ciclo. (NADH, succinil-CoA) Reaccin 1 2 3 4 5 6 7 8 Enzima Citrato sintasa Aconitasa Isociotrato deshidrogenasa -cetoglutarato deshidrogenasa Succinil-CoA sintetasa Succinato deshidrogenasa Fumarasa Malato deshidrogenasa G (kJ/mol) - 31,5 5 - 21 - 33 - 2,1 +6 - 3,4 + 29,7 G (kJ/mol) Inhibicin Activador Oxalacetato ADP y Ca2+ Ca2+

Negativa NADH, citrato y Succinil-CoA 0 Negativa NADH y ATP Negativa 0 0 0 0 NADH y Succinil-CoA

Diagrama del cido ctrico y de la reaccin de la piruvato deshidrogenasa que indica los puntos de inhibicin (octgonos rojos) y los intermediarios que actan como inhibidores (flechas rojas a trazos). El ADP y el Ca2+ son activadores.

Estequiometra de la ruta metablica

Acetil-CoA + 2H2O + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi 2CO2 + 3NADH + FADH2 + CoA-SH + GTP Una vuelta del ciclo del cido ctrico genera un fosfato de alta energa, tres NADH y un FADH2

12

Alanina Cistena Isoleucina Leucina Triptofano Leucina Lisina Fenilalanina Triptfano

Aminocidos

Glucosa

Glicina Serina Triptofano

Cuerpos Cetnicos

Fosfoenol piruvato
P ir u car vato box ilas a
ca PE P rb ox iq ui na

Piruvato

Tirosina

Acetoacetil-CoA Acetil.CoA Ac. grasos Colesterol Esteroides Citrato

sa

Aspartato
Asparagina

Oxalacetato

Pirimidinas Ciclo UREA

Malato Enzima Mlico

Piruvato

Fumarato

Isocitrato

Succinato
Fenilalanina Tirosina

Succinil-CoA

-cetoglutarato

Isoleucina

Porfirinas Hemo

Metionina Treonina Valina

glutamato

Arginina Glutamina Histidina

Purinas

Prolina

Reacciones anaplerticas
Reaccin Piruvato + HCO3- + ATP oxalacetato + ADP + Pi piruvato carboxilasa Tejidos Higado y rion Corazn, musculo esqueltico Ubiquo, eucariotas y procariotas

Fosfoenolpiruvato + CO2 + GDP oxalacetato + GTP PEP carboxiquinasa Piruvato + HCO3- + NAD(P)H malato + NAD(P)+ Enzima mlico