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Introduccin
Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) es el agente causal de la tuberculosis, una de las enfermedades infectocontagiosas ms letales y antiguas que afecta al ser humano y que posee una amplia distribucin en el mundo, produciendo cada ao la muerte de alrededor de 2 millones de personas (1, 2). En la actualidad la tuberculosis constituye una enfermedad reemergente como consecuencia de la aparicin de cepas multirresistentes a los frmacos tradicionalmente empleados en el tratamiento de la enfermedad, ya que representa la primera causa de muerte en pacientes con VIH/SIDA (3). Se estima que en la actualidad un tercio de la poblacin mundial est infectada con el bacilo de tuberculosis, constituyendo un reservorio a partir del cual se producirn futuros casos (4). Desafortunadamente an no se conoce con claridad cules son los principales factores de virulencia de M. tuberculosis involucrados en el desarrollo de la patogenicidad de este microorganismo. Esto se debe a que M. tuberculosis no tiene los factores de virulencia clsicos que poseen otras bacterias patgenas, entre los cuales cabe mencionar las toxinas como las producidas por Corynebacterium diphtheriae, Escherichia coli O157:H7, Shigella dysenteriae y Vibrio cholerae. Por esta razn muchas investigaciones han estado encaminadas a tratar de encontrar una definicin precisa de la virulencia de M. tuberculosis mediante la bsqueda de factores que sean importantes para la progresin de la enfermedad (1). El desarrollo de mtodos para crear mutaciones en genes especficos, as como la secuenciacin del genoma completo de M. tuberculosis ha ofrecido herramientas muy tiles para
* Mster en Microbiologa. Departamento de Biologa Molecular. Instituto Finlay.
el estudio de la fisiologa y patogenicidad de este microorganismo (5,6), ya que se ha logrado identificar una serie de genes que desempean un rol importante en la virulencia de M. tuberculosis. Entre estos se encuentran los reguladores que codifican para protenas que se expresan en la superficie de la clula y los que codifican para productos involucrados en la sntesis o el metabolismo de lpidos de pared celular asociados a la patogenicidad (1,7). A pesar de que tradicionalmente los principales factores de virulencia de muchas bacterias son protenas codificadas por genes contenidos en el cromosoma bacteriano, plsmidos o bacterifagos, los lpidos de pared celular de M. tuberculosis son considerados como atributos patognicos sumamente importantes (8), pero ninguno en particular es considerado como un factor de virulencia esencial, pues la patogenia del bacilo parece ser un fenmeno multifactorial an poco dilucidado. Muchos lpidos, adems, se encuentran unidos a grupos azcares (glicolpidos) y presentan estructuras sumamente especficas e inductoras de una respuesta inmunosupresora (7). Por ello, definir factores de virulencia y comprender mejor los eventos que desencadenan, resulta una herramienta fundamental que permitir comprender mejor la patogenia de la enfermedad y desarrollar nuevas estrategias para su control. En el presente trabajo abordamos los principales elementos estructurales, tanto de naturaleza proteica como lipdica de M. tuberculosis, involucrados de manera directa en el establecimiento de la infeccin y la produccin de daos en el hospedero.
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animales y pueden desarrollar una infeccin crnica que es muy similar a la producida en los humanos (15,16). Los cobayos son muy sensibles a la infeccin por M. tuberculosis y las etapas de la enfermedad, incluyendo las primeras fases de la formacin de los granulomas que son similares a las de los seres humanos (14). Las desventajas de este modelo consisten en la falta de lneas puras de cobayos y reactivos, as como los altos costos de mantenimiento. El empleo de conejos tiene como gran ventaja sobre los otros modelos animales que los granulomas formados en el pulmn durante la enfermedad muestran la misma progresin de etapas, es decir, caseificacin, licuefaccin y la cavitacin, como se observa en casos avanzados de tuberculosis humana (1,17). Sin embargo, las desventajas de los conejos son similares a los cobayos, pero el costo de su mantenimiento es an mayor. Debido a que M. tuberculosis es un patgeno intracelular que infecta primeramente a macrfagos, estas clulas fagocticas tambin se utilizan para analizar la virulencia de cepas de esta micobacteria. Este tipo de clulas sirve como modelo para el estudio de las primeras etapas de la infeccin, que incluyen la fagocitosis de M. tuberculosis por los macrfagos residentes en los alvolos pulmonares. Los macrfagos que se emplean en estos estudios pueden ser de ratones o humanos, debido a la alta disponibilidad de reactivos que existen para ambos casos y pueden ser de cultivos primarios o lneas celulares (1). Entre los macrfagos de ratones ms empleados para el estudio de la virulencia de M. tuberculosis se encuentran la lnea J774 y las clulas MH-S, siendo esta ltima una lnea celular de macrfagos alveolares inmortalizados cuyo comportamiento es muy similar al de los macrfagos alveolares primarios de ratn (18). La utilizacin de clulas primarias de ratn permite la preparacin de macrfagos de animales con mutaciones definidas de modo que pueda estudiarse el efecto de la interaccin entre los factores especficos del hospedero y M. tuberculosis a nivel de macrfagos (19). Los macrfagos de humanos tambin han sido ampliamente utilizados y tienen como gran ventaja que permiten estudiar las etapas tempranas de la enfermedad. Algunos de los macrfagos de origen humano que se aplican para estos estudios son cultivos primarios obtenidos a partir de monocitos de periferia de sangre (MDMs), los cuales pueden diferenciarse en macrfagos (1). Tambin se utilizan con frecuencia monocitos pertenecientes a la lnea de clulas THP-1 y U937 (20). Diversos estudios demuestran que los macrfagos THP-1 diferenciados producen una respuesta muy similar a la de los MDMs de humanos ante la infeccin por M. tuberculosis (21) y adems tienen como ventaja que
Entre los factores de virulencia proteicos se encuentra la protena Hspx, la cual es anloga de la protena de 16 kDa. Esta protena es considerada como un importante elemento controlador de la latencia de M. tuberculosis, debido a que la sobreexpresin de la misma inhibe el crecimiento del microorganismo (28). Otros elementos importantes son Esat6/CF-10, protenas de filtrado celular cuyos genes estructurales estn contenidos en la regin RD1, la cual est presente en todas las cepas virulentas de M. tuberculosis y M. bovis (29). Por otra parte, la lipoprotena de 19 kDa induce la expresin y secrecin de ciertos pptidos antimicrobianos a travs de TLRs en clulas epiteliales de pulmn, los cuales son capaces de eliminar a la micobacteria. Sin embargo, se observ que cepas avirulentas no inducen la expresin de este tipo de pptido y es posible que la presencia de esta molcula est ligada a factores de resistencia natural y pueda variar entre individuos debido a polimorfismos genticos. La sealizacin de TLRs en forma prolongada por M. tuberculosis y la lipoprotena 19 kDa, inhibe ciertas respuestas del macrfago al IFN-, particularmente aquellas relacionadas a la expresin de MHC-II y la presentacin de antgenos. Esta inhibicin posiblemente promueve la evasin del M. tuberculosis a la respuesta inmunitaria mediada por las clulas T, lo que implica la persistencia de la infeccin en la enfermedad (30). Se conoce adems que OmpA, protena familia de las porinas y encontrada en M. tuberculosis H37Rv, juega un papel fundamental en la respuesta bacteriana frente a condiciones de pH cido (31). Otro de los factores de virulencia proteicos reportados son HBHA, MTP40 y el complejo antignico 85 (Ag85). Tambin se conocen factores de virulencia de naturaleza lipdica, entre ellos los glicolpidos, lipoglicanos y polisacridos. Se ha descrito que estos compuestos confieren proteccin, lo cual est basado en hallazgos de que estas molculas son potentes factores de virulencia que proveen a M. tuberculosis ventajas en diferentes ambientes. El lipoarabinomanano y los fosfatidilinositol mansidos, son los mayores contribuyentes a la evasin de M. tuberculosis a la respuesta inmune del hospedero debido a que ambas molculas participan en la inhibicin de la activacin de los macrfagos infectados (32). Otro estudio relacionado con la seguridad y la potencia vacunal de algunos mutantes de M. tuberculosis como candidatos vacunales contra la tuberculosis demostr que la delecin de varios genes involucrados en la patogenicidad y virulencia confiri a los mutantes la capacidad de generar respuestas inmunes protectoras frente al reto con M. tuberculosis en modelos animales, comparable a la obtenida por la vacuna BCG. Algunos de los genes delecionados fueron purC, leuD, proC, erp, phoP hbhA, entre , otros, as como la regin de diferencia (RD1) que contiene 36
genes estructurales para 9 protenas, dentro de las que se incluyen ESAT-6 y CFP-10, consideradas como altamente inmunognicas (33).
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Por otro lado, un estudio sobre la inactivacin del gen phoP , responsable de la supervivencia de M. tuberculosis intracelularmente, demostr la elevada atenuacin que se obtena al inactivar este gen que codifica para el factor transcripcional del sistema de dos componentes phoP/phoR. Este estudio demostr que phoP regula funciones esenciales requeridas para la virulencia y persistencia de M. tuberculosis, por lo que se destaca su potencial aplicacin como candidato vacunal contra la tuberculosis (34). En la actualidad se ha logrado determinar una serie de genes involucrados en la virulencia de M. tuberculosis, mediante la utilizacin de diferentes modelos de experimentacin animal y diversas tcnicas de biologa molecular. El empleo de la bioinformtica y la protemica, as como la secuenciacin completa del genoma de M. tuberculosis, han permitido corroborar la funcin de los productos codificados por estos genes en la patognesis de la tuberculosis. Estos resultados evidencian que la patogenia del bacilo es un fenmeno multifactorial donde estn involucrados, de forma directa o indirecta, molculas con diferente funcin y localizacin en la clula bacteriana.
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