Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 40, n. 2, abr./jun.

, 2004

Anlise qumico-farmacutica do fluconazol e especialidade farmacutica cpsula

Helenilze Coelho1, Audrei Nunes Fernandes Matinatti1, Magali Benjamim de Arajo1*, Ana Maria Bergold2, Francie Bueno2
1

Departamento de Farmcia-Escola de Farmcia e Odontologia de Alfenas/Centro Universitrio Federal, 2 Departamento de Farmcia, Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul.

*Correspondncia: M. B. Arajo Depto. de Farmcia Efoa/Ceufe Rua Gabriel Monteiro da Silva, 714 37.130-000 Alfenas MG - Brasil E-mail:magali@int.efoa.br

O fluconazol, derivado triazlico, apresenta atividade antifngica sendo indicado no tratamento de grande variedade de infeces fngicas. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de estabelecer parmetros de controle de qualidade para a matriaprima de fluconazol e forma farmacutica cpsula, subsidiando a elaborao da monografia para a Farmacopia Brasileira. A matria-prima do fluconazol pode ser caracterizada pelos seguintes testes: aspecto, solubilidade e faixa de fuso. As impurezas do fluconazol podem ser detectadas por ensaio-limite de cloreto, sulfato, ferro, metais pesados, perda por dessecao e cinzas sulfatadas. Entre as provas de identificao pode-se reconhecer o frmaco por reaes qumicas de grupos funcionais e por tcnicas instrumentais. Para determinao quantitativa do fluconazol na matria-prima, empregou-se a volumetria com cido perclrico, em meio actico e deteco do ponto final por indicadores e a espectrofotometria na regio do ultravioleta, utilizando hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm. Os parmetros estabelecidos para o controle de qualidade das amostras de cpsulas dos laboratrios analisados foram aspecto, variao do peso, desintegrao, teste de dissoluo e perfil de dissoluo. O mtodo de doseamento do fluconazol, na forma farmacutica cpsula, por espectrofotometria na regio do ultravioleta apresentou linearidade, especificidade, preciso e exatido dentro dos critrios de aceitao. Os lotes dos laboratrios C, D apresentaram perfis de dissoluo similares ao medicamento de referncia (laboratrio E), demonstrando haver um comportamento homogneo para estes medicamentos. Os lotes dos laboratrios A e B no apresentaram homogeneidade quanto ao perfil de dissoluo, quando comparado com os demais laboratrios.

Unitermos Fluconazol Cpsulas Anlise Farmacutica Perfil de dissoluo Espectrofotometria

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H. Coelho, A. N. F. Matinatti, M. B. Arajo, A. M. Bergold, F. Bueno

INTRODUO
O fluconazol derivado triazlico resultante da substituio do anel imidazlico por triazlico, o que favoreceu amplo espectro de ao e seletividade para o citrocromo P450 da clula fngica. Exerce atividade sobre vrias espcies de fungos causadores de micoses profundas e mucocutneas, como Cryptococcus neoformans, Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis e vrias espcies de cndida (Janssen et al., 1987; Kowalsdy et al., 1990; Korolkovas, 2003). A resoluo n84 (Brasil, 2002a) disciplina o registro, a comercializao, a dispensao de medicamentos genricos e faz referncia necessidade de assegurar a qualidade, segurana e eficcia dos produtos farmacuticos. A intercambialidade dos medicamentos deve ser assegurada no somente pela avaliao da qualidade das matrias-primas empregadas nos processos de fabricao, mas tambm mediante estudos de equivalncia farmacutica, bioequivalncia e biodisponibilidade. A necessidade de tais estudos est relacionada probabilidade de variao de efeito teraputico dos medicamentos que contenham o mesmo frmaco (Bermudez, 1994; Moretto, 1999). Considerando os medicamentos genricos e possveis similares do mercado nacional, o presente trabalho objetiva subsidiar a elaborao da monografia farmacopica do fluconazol para matria-prima e forma farmacutica cpsula, de forma a garantir a qualidade e segurana dos produtos farmacuticos contendo esse frmaco.

Os reagentes e os solventes utilizados nas anlises foram de grau pr-anlise. Aparelhagem Foram utilizados os seguintes equipamentos: aparelho para determinao de ponto de fuso Bchi, modelo 535; estufa de secagem Olideff, modelo CZ; forno de mufla, modelo 315-s; medidor de pH Analion; balana analtica Kern, modelo 410; espectrofotmetro Shimadzu, modelo 1601 2PC; sistema de purificao de gua TKAHPW; modelo LAB-HPW, aparelho de desintegrao tica, modelo 300-1; aparelho de dissoluo tica, modelo 299/6, e Infravermelho Bomem. Mtodos Matria-prima Caracterizao Os testes de caracterizao desenvolvidos para matria-prima basearam-se em relatos da literatura e informaes dos fornecedores, podendo ser caracterizada pelo aspecto, ponto de fuso, solubilidade, determinao de impurezas como cloreto, sulfato, metais pesados, ferro cinzas sulfatadas e perda por dessecao (Merck, 1995; Connors, 1982; Korolkovas, 1984). Identificao Identificou-se o fluconazol na matria-prima por reaes qumicas de grupamentos funcionais e por tcnicas espectrofotomtricas (Ewing, 1988; Cheronis et al., 1963; Shriner et al., 1983; Soares et al. 1988). Reconhecimento da funo alcolica: (Teste de Jones): Dissolveram-se cerca de 50,0 mg de fluconazol em 20 gotas de acetona pura, adicionaram-se com agitao, 8 gotas de cido crmico. O aparecimento de precipitado verde confirma a presena da funo alcolica. Reconhecimento do tomo de flor: (Teste de Keller): Adicionaram-se a cerca de 50,0 mg de fluconazol, 3,0 mL de cloreto frrico 1% SR em cido actico glacial e agitou-se. Adicionou-se cido sulfrico R pelas paredes do tubo. Considera-se positivo a colorao que passa de laranja a amarelo. Espectrofotometria na regio do ultravioleta: Preparou-se soluo de fluconazol, contendo 200,0 mg/mL em soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Procedeu-se varredura espectral da amostra em cubeta de quartzo de 1 cm de espessura aps o aparelho ter sido calibrado com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Espectrofotometria na regio do infravermelho: O espectro do fluconazol na regio do infravermelho foi

MATERIAL E MTODOS
Material Frmaco, produtos farmacuticos, reagentes e solventes O fluconazol substncia qumica de referncia, lote 53692199/ZA000805, foi cedido pelo laboratrio Pfizer. A matria-prima lote FZ070299, fabricada em 02/99 com validade em 01/02, foi adquirida do laboratrio Biolab/ Sanus. As amostras das cpsulas contendo fluconazol 150 mg adquiridas dos laboratrios fabricantes foram codificadas por letra, Laboratrio A, lote 9901219 A, fabricao em 04/99 e validade em 04/02; Laboratrio B, lote 2056, fabricao em 03/99, validade em 03/01; Laboratrio C, lote AA917, fabricao em 06/99, validade em 06/01; Laboratrio D, lote 905225, fabricao em 05/99, validade em 05/01 e Laboratrio E (medicamento de referncia), lote 904-92003 B, fabricao em 04/99 com validade em 04/01, todos envasados em blister.

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obtido pela tcnica de KBr, por comparao com o padro de referncia. Doseamento volumtrico A determinao quantitativa da matria-prima em meio no-aquoso, utilizando soluo de cido perclrico 0,1 M como titulante e cloreto de metilrosanilnio e pnaftolbenzena como indicadores, usual no doseamento de substncias de carter base fraca, seguiram procedimentos descritos na literatura (Becket et al., 1988; Korolkovas,1984). Validao do mtodo de doseamento do fluconazol por espectrofotometria Para determinao da linearidade, preparou-se soluo contendo 1000,0 mg/mL de fluconazol padro, que foram dessecados em estufa a 105 C por duas horas, em hidrxido de sdio 0,1 M. Desta soluo transferiram-se 5 alquotas, medidas em bureta, cujos volumes variavam de 2,5 a 7,0 mL para bales volumtricos de 25 mL. Completaram-se os volumes dos bales com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Obtiveram-se, assim, concentraes que variaram de 100,0 a 280,0 mg/mL de fluconazol padro. As solues foram preparadas em triplicata e as leituras das absorvncias efetuadas contra branco de hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm. A especificidade do mtodo foi determinada preparando-se solues de padro e da forma farmacutica cpsula, do medicamento de referncia, contendo 200,0 mg/mL de fluconazol em soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Efetuaram-se as leituras das solues em 261 nm, em cubeta de quartzo de 1 cm de espessura, aps o aparelho ter sido calibrado com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Na avaliao da preciso, preparou-se soluo de fluconazol em soluo de hidrxido de sdio 0,1 M com concentrao final de 200,0 mg/mL. Efetuaram-se as leituras de absorvncias contra branco de soluo de hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm. Os ensaios foram realizados inter-

dias com 5 rplicas preparados em triplicata. Para o teste de recuperao, foram preparadas solues dos produtos farmacuticos e do padro com concentrao de 1000,0 mg/mL em soluo de hidrxido de sdio 0,1 M, transferindo-se alquotas para bales volumtricos de 50 mL, conforme o esquema da Tabela I. Foram feitas duas determinaes para cada concentrao e calculadas as percentagens de recuperao (% R). Determinao do teor de fluconazol na matria-prima Para determinao do teor de fluconazol na matriaprima preparam-se em triplicata solues de fluconazol padro e 10 rplicas de solues da matria-prima com concentraes finais de 200,0 mg/mL. As leituras de absorvncias dessas solues foram efetuadas contra branco de hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm. O teor de fluconazol, na matria-prima, foi calculado atravs dos valores das absorvncias obtidas em relao ao padro. Determinao do teor de fluconazol na forma farmacutica cpsula Pesaram-se 20 cpsulas correspondente a cada laboratrio determinando-se os pesos mdios. O p foi misturado e homogeneizado. Pesaram-se exatamente o equivalente a 200,0 mg de fluconazol, que foram transferidos para balo volumtrico de 200 mL, completando-se o volume do balo com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Homogeneizou-se em ultra-som por 10 minutos e filtrou-se em papel de filtro quantitativo, desprezando-se os primeiros 10 mL. Retirou-se alquota de 5 mL do filtrado, transferindo-se para balo volumtrico de 25 mL e completando-se o volume do balo com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. A soluo final contm 200,0 mg/mL de fluconazol. Foram efetuadas as leituras das absorvncias das solues, de cada laboratrio, a 261 nm. O teor de fluconazol nas amostras das cpsulas, de cada laboratrio, foi calculado atravs dos valores das absorvncias obtidas em relao ao padro.

TABELA I - Preparo das solues para o teste de recuperao de fluconazol, por espectrofotometria na regio do UV, utilizando soluo de hidrxido de sdio 0,1 M Produtos farmacuticos 1000,0 g/mL (mL) 5,0 5,0 5,0 5,0 Soluo padro 1000,0 g/mL (mL) 2,5 5,0 7,5 5,0 Concentrao final (g/mL) 100,0 150,0 200,0 250,0 100,0

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Cpsulas Anlises fsica e fsico-qumica, identificao do princpio ativo atravs dos grupos funcionais da molcula, variao do peso e teste de desintegrao foram realizados para avaliao da qualidade das cpsulas (F. Bras., 1988; Soares et al., 1989). Para o teste de dissoluo utilizou-se aparato 2, com 900 mL de soluo de tampo fosfato 0,2 M pH 7,0 como meio de dissoluo mantido a 37,0 0,5 C, velocidade de agitao igual a 100 rpm, analisando-se 5 cpsulas de cada fabricante. Coletaram-se alquotas de 10 mL do meio no tempo de 60 minutos, filtrando-se em papel de filtro quantitativo Whatman 44. Soluo de padro foi preparada na concentrao de 166,67 mg/mL. Procedeu-se leitura das absorvncias das solues em espectrofotmetro na regio do UV a 261 nm, utilizando tampo fosfato monobsico 0,2 M pH 7,0 como branco. O ensaio foi feito em duplicata. A curva de percentagem dissolvida do frmaco em funo do tempo foi obtida, utilizando-se os parmetros estabelecidos no ensaio de dissoluo, porm, coletandose as amostras nos intervalos de 10, 20, 30, 40, 50 e 60

minutos, aps a introduo da cpsula no meio de dissoluo. O ensaio foi realizado em triplicada. Aps a retirada de cada alquota, efetuou-se a reposio do volume do meio de dissoluo, empregando-se tampo fosfato monobsico 0,2 M pH 7,0. Alquotas de 10 mL foram filtradas em papel de filtro quantitativo Whatman 44 e as leituras das absorvncias das solues efetuadas em espectrofotmetro na regio do UV a 261 nm, usando tampo fosfato monobsico 0,2 M pH 7,0 como branco. A comparao entre os perfis de dissoluo dos lotes analisados, obtidos em condies idnticas, foi feita empregando-se o mtodo modelo independente calculando-se o fator de diferena f1 e fator de semelhana f2 (Brasil, 2002b).

RESULTADOS
Matria-prima A caracterizao, identificao e doseamento do fluconazol na matria-prima originaram os resultados expostos na Tabela II.

TABELA II - Valores experimentais obtidos no controle de qualidade de fluconazol matria-prima. ANLISES APLICADAS CARACTERIZAO Descrio (forma, odor e cor) Solubilidade * Faixa de fuso Cloreto Sulfato Metais pesados Ferro Perda por dessecao Cinzas sulfatadas IDENTIFICAO Varredura espectral na regio do UV ESPECIFICAES P branco e inodoro gua, n-hexano (PS), etanol, metanol (FS), acetona, dioxano, HCl 0,1 M, NaOH 0,1 M (S), acetato de etila, clorofrmio e ter etlico (LS) 138 C a 140 C Mximo 350 ppm Mximo 0,10% Mximo 25 ppm Mximo 25 ppm Mximo 0,50% Mximo 0,20% O espectro de absoro na faixa de 200 a 400 nm exibe mximo em 261 nm Precipitado verde Colorao deve passar a laranja e amarelo Espectro semelhante ao do padro RESULTADOS De acordo De acordo 139-139,6 C Menor que 350 ppm Negativo Menor que 25 ppm Negativo 0,38% 0,01% Positivo Positivo Positivo Positivo

Reconhecimento da funo alcolica Reconhecimento do tomo de flor Espectro no infravermelho DOSEAMENTO Volumetria em meio no aquoso - Cloreto de metilrosanilnio - p-naftolbenzena Mnimo 98% mximo 102% Espectrofotometria na regio do UV * Nomenclatura de acordo com a Farmacopia Brasileira 4 edio (1988)

98,19 0,39 98,63 0,39 100,15 0,92

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Validao da metodologia analtica Os parmetros de validao da metodologia analtica esto representados nas Tabelas de III a V. A curva de calibrao est representada na Figura 1.

Teste de recuperao Os resultados do teste de recuperao para fluconazol, nas especialidades farmacuticas cpsulas dos diversos laboratrios, podem ser observados na Tabela V.

FIGURA 1 - Curva de calibrao para fluconazol padro por espectrofotometria de absoro no UV, utilizando soluo de hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm.

TABELA III Dados relativos especificidade do mtodo para fluconazol, por espectrofotometria na regio do UV, utilizando soluo de hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm Amostra 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Absorvncia da soluo* 0,521 0,528 0,528 0,516 0,518 0,528 0,518 0,519 0,519 0,523 Concentrao encontrada (g/mL) 200,00 202,69 202,69 198,08 198,85 202,69 198,85 199,23 199,23 200,77 Absorvncia Concentrao Percentual de da soluo** encontrada (g/mL) concordncia (%) 0,551 0,546 0,547 0,539 0,550 0,549 0,549 0,547 0,548 0,549 208,72 206,82 207,20 204,16 208,34 207,96 207,96 207,20 207,58 207,96 104,36 102,03 102,22 103,07 104,77 102,60 104,58 104,00 104,19 103,58

*na ausncia de excipiente; **na presena de excipientes; Mdia da concordncia = 103,54; desvio padro relativo = 0,97%

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TABELA IV - Valores experimentais obtidos na determinao da preciso inter-dias para fluconazol pelo mtodo espectrofotomtrico na regio do UV, em meio hidrxido de sdio 0,1 M 261 nm AMOSTRA (N) 1 2 3 4 5 Mdia CV (%) ABSORVNCIA 1 dia 0,551 0,546 0,547 0,539 0,550 0,547 0,910 ABSORVNCIA 2 dia 0,549 0,549 0,547 0,548 0,549 0,548 0,180

TABELA V - Valores experimentais obtidos no teste de recuperao realizado nas especialidades farmacuticas cpsulas dos laboratrios A, B, C, D e E, pelo mtodo espectrofotomtrico no UV em meio hidrxido de sdio 0,1 M a 261 nm AMOSTRAS Concentrao terica (g/mL) 150,00 200,00 250,00 150,00 200,00 250,00 150,00 200,00 250,00 150,00 200,00 250,00 150,00 200,00 250,00 Quantidade de padro incorporada (g/mL) 050,00 100,00 150,00 050,00 100,00 150,00 050,00 100,00 150,00 050,00 100,00 150,00 050,00 100,00 150,00 Quantidade de padro recuperada (g/mL) 049,63 102,26 147,75 049,25 100,00 148,12 049,62 100,00 147,36 049,25 100,38 147,17 049,25 098,52 150,38 Percentual de resposta (%) 099,26 102,26 098,50 098,50 100,00 098,75 099,24 100,00 098,24 098,50 100,38 098,11 098,50 098,52 100,25 Mdia (%) 100,01 099,08 099,16 099,00 099,09

Laboratrio A Laboratrio B Laboratrio C Laboratrio D Laboratrio E

Cpsulas Os resultados das anlises realizadas para as cpsulas dos diferentes laboratrios esto expostos na Tabela VI. Teste de dissoluo Os resultados obtidos no teste de dissoluo das cpsulas encontram-se na Tabela VII. Os perfis de dissoluo das amostras dos diferentes laboratrios esto representados na Figura 2 e, na Tabela VIII encontram-se os valores correspondentes ao clculo dos fatores de diferena (f1) e semelhana (f2) entre os perfis de dissoluo dos

laboratrios A, B, C, D com o medicamento de referncia (laboratrio E).

DISCUSSO
A integrao do setor produtivo com o controle de qualidade, na indstria de medicamentos, exerce papel fundamental na garantia da execuo das boas prticas de fabricao e de laboratrio para que o frmaco possa alcanar sua forma farmacutica final, garantindo ao paciente medicamento de tima qualidade (Santoro, 1988). A inobservncia dos critrios relativos qualidade das matrias-primas empregadas na produo dos medicamentos pode interferir na qualidade biofarmacutica,

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TABELA VI - Valores experimentais obtidos no controle de qualidade da forma farmacutica cpsula dos diferentes laboratrios ANLISES APLICADAS CARACTERIZAO Aspecto IDENTIFICAO Varredura espectral na regio do UV Reconhecimento da funo alcolica Reconhecimento do tomo de flor Variao de peso* Laboratrio A Laboratrio B Laboratrio C Laboratrio D Laboratrio E Teste de desintegrao* Laboratrio A Laboratrio B Laboratrio C Laboratrio D Laboratrio E DOSEAMENTO Espectrofotometria na regio do UV Laboratrio A Laboratrio B Laboratrio C Laboratrio D Laboratrio E 99,14 0,60 102,42 0,26 102,53 0,50 96,32 0,56 103,69 0,65 Exibe mximo em 261 nm na faixa de 200 a 400 nm Precipitado verde Colorao deve passar a laranja e amarelo Positivo Positivo Positivo 319,60 7,5% 263,72 10% 309,05 7,5% 215,48 10% 361,51 7,5% 5 min 5 min 5 min 5 min 20 min Cpsulas gelatinosas contendo p branco De acordo ESPECIFICAES RESULTADOS

At 300 mg ....... 10% Acima de 300 mg ...... 7,5%

Mximo 30 min

Mnimo 90% e mximo 110%

* Testes realizados de acordo com a Farmacopia Brasileira 4 edio sendo fundamental a realizao de anlises fsico-qumica e qumica da matria-prima a ser utilizada na fabricao dos medicamentos para certificar sua adequao aos compndios farmacuticos. Por outro lado, estudos de dissoluo in vitro so relevantes, devido o reconhecimento dos fatores responsveis pelas alteraes na liberao do frmaco, a partir de sua forma farmacutica. Os resultados desses estudos auxiliam na resoluo de muitos problemas relativos biodisponibilidade de medicamentos (Ferraz, 1994; Storpirtis et al., 1999). Seguindo estes pressupostos, a matria-prima de fluconazol foi caracterizada pela descrio, apresentandose como p, branco, livre de partculas estranhas, compatvel com o descrito na literatura (Merck, 1995). A diferena de solubilidade do fluconazol nos diversos solventes tem relevncia para auxiliar os ensaios de impurezas, identificao e doseamento do princpio ativo. A maior solubilidade do frmaco foi verificada em solventes polares como etanol e metanol. Mostrou-se solvel em acetona, soluo de cido clordrico 0,1 M, dioxano e soluo de hidrxido de sdio 0,1 M e pouco solvel em acetato de etila e clorofrmio. As caractersticas para determinao de ponto de fuso observadas mostram uma faixa de fuso para o fluconazol de 139 C a 139,6 C, que confere com dados da literatura (Merck, 1995). O reconhecimento dos grupos funcionais da molcula do frmaco foi efetuado por reaes qumicas descritas na literatura para funo alcolica e o tomo de flor (Farmacopia,1988; Fitzgerld et al., 1973; Korolkovas,

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1984; Melentyeva et al., 1998; Shriner et al., 1983). O valor de absoro na regio do ultravioleta no comprimento de onda de 261 nm corresponde absoro mxima do fluconazol em soluo de hidrxido de sdio 0,1M e pode ser utilizado para identificao do frmaco. Os ensaios de impurezas realizados na matria-prima representados inicialmente pela perda por dessecao TABELA VII - Valores experimentais obtidos no teste de dissoluo para fluconazol nas amostras de cpsulas provenientes dos laboratrios A, B, C, D e E, aps 60minutos, em meio de dissoluo tampo fosfato monobsico 0,2 M pH 7,0 a 261 nm AMOSTRAS Laboratrio A Q* Q (% de dissoluo) (mdio) (%) 84,72 80,97 87,64 88,75 88,61 111,61 112,92 109,27 112,40 110,57 84,95 84,82 83,33 84,55 85,09 76,94 73,05 76,24 74,30 77,78 89,56 81,97 84,95 84,69 88,88 86,14

Laboratrio B

111,35

Laboratrio C

84,55

Laboratrio D

75,66

Laboratrio E

86,01

*Os ensaios foram realizados em duplicata.

visou determinar a quantidade de substncias volteis de qualquer natureza. O valor mdio das trs determinaes foi de 0,38% no alterando significativamente o grau de pureza da matria-prima. A quantidade de impurezas inorgnicas presentes na matria-prima foi avaliada pela determinao de cinzas sulfatadas apresentando valor baixo dessa impureza (0,01%). Para os ensaios-limites, preconizaram-se os limites estabelecidos pelo fornecedor do padro de referncia. A quantidade de metais pesados na amostra, verificada pela reao do metal pesado com tioacetamida, ficou abaixo do limite estabelecido de 25 ppm. Para o teste de ferro, cujo limite de 25 ppm, observou-se que a amostra no apresentou nenhum trao de ferro, reconhecida pela colorao violcea, resultante da complexao de ons frrico com cido tiogliclico SR. O ensaio para sulfato, com limite mximo estabelecido em 0,10%, foi realizado na amostra e no apresentou turbidez caracterizada pela reao de ons sulfato presentes com cloreto de brio SR. O ensaio-limite para cloreto foi proposto para detectar presena de cloreto na amostra decorrente da utilizao da gua utilizada no processo de sntese. A amostra apresentou turbidez, caracterizada pela reao qumica de nitrato de prata SR com cloreto, bem inferior ao limite estabelecido de 350 ppm. O espectro de absoro, com melhor resoluo para o fluconazol, foi obtido na concentrao de 200 g/mL utilizando soluo de hidrxido de sdio 0,1 M como solvente, apresentando absoro mxima em 261 nm, permitindo desenvolver metodologia analtica para determinao do teor de fluconazol na matriaprima e na forma farmacutica cpsula. Para estabelecer as caractersticas de desempenho do mtodo analtico ao uso pretendido, parmetros de linearidade, faixa de avaliao, sensibilidade, especificidade, preciso e exatido foram determinados conforme recomendao da literatura (Brittain, 1988; Leite, 1998; Guia, 2000; Roque, 2001). A linearidade avaliada pelo coeficiente de correlao R2 = 0,9997 permite concluir a existncia de correlao linear entre as concentraes de fluconazol e as absorvncias das solues. A faixa de avaliao representada pelos intervalos de concentraes dos nveis superior e inferior foram definidas pelas concentraes de 280,0 g/mL

TABELA VIII - Valores correspondentes determinao dos fatores de diferena (f1) e semelhana (f2) dos lotes dos laboratrios A, B, C e D com medicamento de referncia (laboratrio E) Laboratrio A Fator de diferena (f1) Fator de Semelhana (f2) 26,56 115,19 Laboratrio B Laboratrio C 3,41 68,27 Laboratrio D 4,15 61,45

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FIGURA 2 Perfis de dissoluo do fluconazol nas especialidades farmacuticas cpsulas provenientes dos laboratrios A, B, C, D e E em meio de dissoluo tampo fosfato monobsico 0,2 M pH 7,0 261 nm. e 100,0 g/mL de fluconazol e a sensibilidade avaliada pela inclinao da curva de calibrao (Figura 1). A especificidade do mtodo extremamente importante durante a validao de um mtodo no cromatogrfico, porque este no contm uma fase de separao que garanta a no interferncia dos excipientes. Os mtodos no cromatogrficos contam com diferenas intrnsecas s propriedades fsicas ou qumicas para garantir sua capacidade de determinar com exatido a concentrao da substncia em exame, mesmo em amostras contendo misturas complexas (Brittain, 1988). Nas anlises realizadas, o desvio padro relativo de 0,97% permite comprovar que os excipientes da formulao no interferem na determinao do fluconazol. A preciso sob condies fixadas foi determinada atravs do coeficiente de variao, por aplicao do mtodo amostra em condies idnticas. Os valores do coeficiente de variao de 0,91% e 0,18% demonstram que o mtodo possui preciso quando analisado em dias diferentes. So aceitveis valores de coeficiente de variao igual ou abaixo de 1,0% (Brittain, 1988, Roque, 2000). A exatido do mtodo foi determinada pelo teste de recuperao. Os valores mdios obtidos para as cpsulas dos diversos laboratrios de 100,01%, 99,08%, 99,16%, 99,00% e 99,09%, correspondentes aos laboratrios A, B, C, D e E, indicam boa recuperao e o processo de preparo das amostras no causador de perdas. Valores de percentagem de recuperao entre 98% e 102% so aceitveis (Brittain, 1988 ). O doseamento desenvolvido para o fluconazol em meio no-aquoso com cido perclrico foi proposto devido pouca solubilidade do fluconazol em gua e a possvel protonizao dos nitrognios do anel triazlico (Catalan et al.,1987). Os valores obtidos para a matriaprima de 98,19 % 0,39 utilizando cloreto de metilrosanilnio e 98,63 0,39 com p-naftolbenzena, no diferem entre si em mais que 1%. O teor de fluconazol na matria-prima foi determinado, tambm, com base na curva de calibrao do fluconazol substncia qumica de referncia apresentando teor de 100,15% 0,92. Para os ensaios de controle de qualidade das cpsulas foram considerados os parmetros aspecto, variao de peso, desintegrao, doseamento, teste de dissoluo e perfil de dissoluo. Quanto ao aspecto as cpsulas dos laboratrios A, B, C, D e E so do tipo gelatinosa e apresentam superfcie lisa. Embora padronizadas com cores diferentes, h homogeneidade quanto cor e ao aspecto para cada laboratrio. Os resultados da variao de peso, na forma farmacutica cpsula, mostraram que os laboratrios B e E apresentaram todas as unidades dentro dos limites especificados, os laboratrios A e D apresentaram 1 unidade fora das especificaes e o laboratrio C apresentou 2 unidades fora dos limites especificados (Farmacopia,1988). Todos os laboratrios em nenhum dos casos excedem o dobro do limite, portanto cumprem os requisitos do teste. O teste de desintegrao avalia o tempo necessrio para que a cpsula se desintegre. A Farmacopia Brasilei-

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ra 4 edio considera a desintegrao completa quando nenhum resduo da cpsula, salvo fragmentos de matriz de cpsula insolveis, permanece na tela metlica do aparelho de desintegrao. Considera-se, tambm, como desintegradas as unidades que durante o teste se transformam em massa pastosa, que permanece sobre a tela do aparelho. Os laboratrios B, C e D tiveram todas as cpsulas desintegradas em 5 minutos, o laboratrio E teve todas as cpsulas desintegradas em 20 minutos e o laboratrio A teve aos 5 minutos todas as cpsulas desintegradas, mas aos 45 minutos restavam fragmentos insolveis de consistncia mole. Como as amostras dos laboratrios se desintegraram dentro de 30 minutos, todos os laboratrios cumpriram os requisitos para o teste. A presena do frmaco nas cpsulas dos diversos laboratrios estudados foi demonstrada pelas reaes qumicas dos grupos funcionais descritas na identificao da matria-prima. Em todos laboratrios foi comprovada a presena de fluconazol. Para a determinao quantitativa do fluconazol presente nas cpsulas adotou-se o critrio de aceitao das especificaes farmacuticas cpsulas da Farmacopia Brasileira 4 edio, com variao mnima de 90% e mxima de 110% do valor rotulado. Todos os laboratrios avaliados apresentam teores dentro desta faixa, com valores de desvio padro relativo baixos (Tabela VI). O tempo de dissoluo foi realizado tendo como base a solubilidade e a permeabilidade do frmaco seguindo o sistema de classificao biofarmacutica (Brasil, 2002b). Para tanto, analisaram-se as melhores condies para realizao do teste. A percentagem da quantidade de princpio ativo, declarado no rtulo do produto, liberado no meio de dissoluo, dentro de um perodo de tempo, quando o produto submetido ao de aparelhagem especfica, sob condies experimentais, deve ser de, no mnimo 85% (Brasil, 2002b). As amostras dos laboratrios C e D apresentaram valores de percentual de cedncia abaixo da especificao, as amostras dos laboratrios A e E demonstraram boa capacidade de liberao do frmaco nas condies estabelecidas para o teste de dissoluo. Por outro lado, as amostras do laboratrio B apresentaram percentual elevado de liberao do frmaco (Tabela VII). A avaliao do perfil de dissoluo do princpio ativo ferramenta valiosa para diferenciar produtos similares do mercado farmacutico (Del Comune, 1994). Frmacos altamente permeveis so aqueles cuja biodisponibilidade absoluta maior que 90%. O fluconazol praticamente absorvido do trato gastrintestinal aps administrao por via oral. A biodisponibilidade superior a 90% em jejum (Lacaz et al., 1994; Korolkovas,

2003). O perfil de dissoluo pode ser til para avaliar a qualidade lote a lote, alm de verificar o comportamento da formulao aps alguma modificao no processo de fabricao ou mudana de formulao (Brasil, 2002b). As cpsulas contendo fluconazol do laboratrio A apresentaram, no teste de dissoluo, aproximadamente 86% de cedncia no tempo estabelecido para o ensaio, de 60 minutos. O perfil de dissoluo do lote mostrou, neste mesmo tempo, percentual de liberao menor (82,62%), no havendo homogeneidade em relao aos demais laboratrios. Pelos valores do teste de dissoluo, a amostra de fluconazol do laboratrio B apresentou percentual de cedncia acima de 100% em 60 minutos. No perfil de dissoluo desse medicamento, em 10 minutos, o lote liberou 102,78% do frmaco, mostrando dissoluo rpida, indicando que o lote no homogneo em relao aos demais laboratrios. No lote do laboratrio C, observou-se percentual de cedncia de 84,55%, no teste de dissoluo, em 60 minutos. No perfil de dissoluo este percentual de liberao ocorreu em 40 minutos. Na amostra do laboratrio D o percentual de cedncia observado no teste de dissoluo, de aproximadamente 76% em 60 minutos, foi visto no perfil de dissoluo no tempo de 40 minutos. O lote do laboratrio E apresentou 86% de cedncia, no teste de dissoluo, no tempo de 60 minutos. O perfil de dissoluo do lote mostrou homogeneidade com os lotes dos laboratrios C e D. Os lotes dos laboratrios C e D foram considerados semelhantes ao lote do medicamento de referncia, pois os valores do fator de diferena f1=3,41 e 4,15 e fator de semelhana f2= 68,27 e 61,45, respectivamente, mantiveram-se dentro da faixa estabelecida pela legislao, f1=0 a 15 e f2=50 a 100 (Brasil, 2002b). O lote do laboratrio A apresentou fator de diferena fora da faixa de 0 a 15 e valor do fator de semelhana acima da faixa estabelecida pela legislao. No foi possvel calcular o fatores de diferena (f1) e semelhana (f2) para o lote do laboratrio B. A falta de homogeneidade entre os lotes dos laboratrios A e B, em relao aos demais laboratrios, deve ser corrigida para garantir a reprodutibilidade do comportamento das cpsulas contendo fluconazol.

CONCLUSO
Os laboratrios oficiais produtores de medicamentos necessitam de parmetros farmacopicos para garantir a qualidade dos insumos farmacuticos utilizados no

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desenvolvimento farmacotcnico para obterem produtos com qualidade, segurana e estabilidade. O fluconazol no possui, ainda, monografia para matria-prima e produto acabado em nenhum cdigo oficial. Este fato tem gerado ausncia de homogeneidade, pois cada laboratrio produtor realiza as anlises seguindo parmetros prprios. No presente trabalho, a matria-prima analisada apresentou qualidade satisfatria. O aspecto e a solubilidade foram compatveis com a especificao encontrada. Os valores obtidos nos ensaios de impureza (faixa de fuso, umidade, cinzas sulfatadas, metais pesados, cloreto, sulfato e ferro) foram adequados atendendo os limites propostos pelos prprios laboratrios. A identidade do frmaco foi demonstrada por reaes de grupos funcionais e por tcnicas instrumentais. O teor de fluconazol na matria-prima, tanto por volumetria em meio no-aquoso quanto por espectrofotometria no ultravioleta, demonstram a pureza do frmaco, . Todos os lotes das cpsulas analisados quanto a variao de peso e desintegrao apresentaram resultados condizentes frente s especificaes estabelecidas pela Farmacopia Brasileira 4 edio para a forma farmacutica cpsula. A metodologia analtica desenvolvida para o doseamento do fluconazol por espectrofotometria na regio do UV apresentou valores de desvio padro relativo inferiores a 2%, para concentraes de 100 a 280mg/ mL, para a especificidade, preciso e exatido. Os lotes dos laboratrios B e D no apresentaram bons resultados no teste de dissoluo. Nos perfis de dissoluo os lotes dos laboratrios A e B no apresentaram comportamento homogneo quando comparados com os demais laboratrios, o que foi constatado pelo clculo dos fatores de diferena (f1) e semelhana (f2) para comparao dos perfis avaliados.

to establish parameters for the quality control of fluconazole itself, and the pharmaceutical specialities capsules, for elaboration of a monography for Brazilian Pharmacopeia. The raw material of fluconazol was characterized by the following tests: aspect, solubility and fusion range. The fluconazol impurities can be detected through limit assay of chloride, sulphate, iron, heavy metals, lost on drying and residue on ignition. Among the identification tests this drug can be recognized by chemical reactions of functional groups and instrumental methods. To determine the quantitative value of fluconazol in raw material it was used perchloric acid volumetry in acetic medium and period detection by indicators and ultraviolet spectrophotometry utilizing 0,1 M sodium hydroxide in 261 nm was used. Capsules samples from the analysed were aspect, average weight determination, disintegration, dissolution test and dissolution profile. The determination of drug in capsules by ultraviolet spectrophotometry demonstrated linearity, specificity, precision and accuracy. The lots of C, D, and E laboratories showed similar release profiles demonstrating a homogeneous behaviour. The lots of A and B laboratories did not show homogeneity in dissolution profile when compared to other laboratories. UNITERMS: Fluconazole. Capsules. Pharmaceutical analyses. Dissolution profile. Spectrometry.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BECKET, A. H.; STENLAKE, J. E. Practical pharmaceutical chemistry. 4. ed. London: Athlone Press, 1988. v.1, p. 165-172, v.2, p. 275-337. BERMUDEZ, J. Medicamentos genricos: uma alternativa para o mercado brasileiro. Cad. Sade Pbl., So Paulo, v. 10, p. 368-378, 1994. BRASIL. Resoluo RDC n 84, de 19 de maro de 2002. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 20 mar. 2002a. Seo 1. [A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria aprova o regulamento tcnico para medicamentos genricos]. BRASIL. Resoluo RDC n 483, de 19 de maro de 2002. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 20 de maro de 2002b. Seo 1. [A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria aprova o Guia para Ensaio de Dissoluo de Formas Farmacuticas Slidas Orais de Liberao Imediata].

AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem aos laboratrios Pfizer, pelo fornecimento da substncia qumica de referncia, e ao Programa Institucional de Bolsas de Iniciao Cientfica PIBIC/CNPq da Efoa/Ceufe, pelo apoio financeiro.

ABSTRACT
Chemical pharmaceutical analysis of fluconazole and its pharmaceutical speciality capsule Fluconazole is a triazole derivated drug with an antifungal activity which is used in the treatment of a large variety of fungal infections. The objective of this work is

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BRITTAIN, H. G. Validao de mtodos no cromatogrficos. Pharm. Technol., So Paulo, v.2, p.4-9, 1988. CATALAN, J.; ABBOUD, J.L.; ELGUERO, M. Basicity and acidity of azoles. Adv. Heterocycl. Chem., New York, v.41, p. 186-265, 1987. CHERONIS, N. O. D.; ENTRIKIN, J. B. Identification of organic compounds. New York: Wiley, 1963. 477 p. CONNORS, K. A. A textbook of pharmaceutical analysis. 3. ed. New York: Wiley Interscience, 1982. p. 46-65, 111153. DEL COMUNE, A. P. Avaliao biofarmacutica in vitro de medicamentos contendo piroxicam e piroxicam-betaciclodextrina: Estudo comparativo do perfil de dissoluo. 1994. 119p. [Dissertao de Mestrado em Frmaco e Medicamentos Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo]. EWING, G. W. Mtodos instrumentais de anlise qumica. So Paulo: Editora Edgard Blucher, 1988. v.1, p.41-72. FARMACOPIA dos Estados Unidos do Brasil. 4. ed. So Paulo: Atheneu, 1988. V.1.1, V.1.4,V.1.5, V.2.2, V.2.9, V.2.10, V.3.2, V.3.4.5. FERRAZ, H. G. Fatores determinantes da dissoluo de formas farmacuticas slidas - Parte 1: formulao e tecnologia de fabricao. Infarma, Braslia, v.3, n.1/6, p.17-19, 1994. FITZGERLD, T. J.; WALASZEK, E. J. Drug detection with color test. Clin. Toxicol., New York, v.6, p.599-605, 1973. GUIA para laboratrios qumicos: um auxlio organizao e ao credenciamento/ INMETRO. Rio de Janeiro: Intercincia Ltda, 2000. p. 39- 41. LACAZ, C. S.; DEL NERO, G. Drogas antifngicas teraputica das micoses. In: SILVA, P., ed. Farmacologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1994. p. 11561190. JANSSEN, P. A. J.; VANDEN BOSSCHE, H. Mode of action cytochrome P450 monooxygenase inhibitors. Focus on azole derivates. Arch. Pharm. Chem. Sci., Copenhagen, v. 15, p. 23-40, 1987.

KOROLKOVAS, A. Anlise farmacutica. Rio de Janeiro: Guanabara Dois, 1984. 207 p. KOROLKOVAS, A. Dicionrio teraputico guanabara. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003, p.18.18-18.19. KOWALSDY, S. F.; DIXON, D. M. Fluconazole: a new antifungal agent. Clin. Pharmacy, New York, v. 10, p. 179-190, 1990. LEITE, F. Validao em anlise qumica. 3. ed. Campinas: tomo, 1988. p.21- 39, 67. MELENTYEVA, G.; ANTONOVA, L. Pharmaceutical chemistry. Moscou: Mir Publishers, 1998. 564p. MERCK index. 12ed. Rahway: Merck & CO., INC., 1995. p. 1094. MORETTO, L. D. Fatores que influem na biodisponibilidade de frmacos e medicamentos. Pharm. Technol., So Paulo, v.3, n.2, p.46-48,1999. ROQUE, R. F. Produo de medicamentos na indstria farmacutica. O controle de qualidade na nova realidade da indstria farmacutica. Racine, So Paulo, 2001, p. 92 - 99. SANTORO, M. I. R. M. Introduo ao controle de qualidade de medicamentos, So Paulo: Atheneu, 1988. 121p. SHRINER, R. L.; FUSON, R. C.; CURTIN, O Y.; MORRIL, T. C. Identificao sistemtica dos compostos orgnicos. 6ed. Rio de Janeiro: Guanabara Dois, 1983. p. 65-70. SOARES, B. G.; SOUZA, N. A.; PIRES, D. X. Qumica orgnica: teoria e tcnicas de preparao, purificao e identificao de compostos orgnicos. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1988. p.284-291. STORPIRTIS, S.; OLIVEIRA, P. G.; RODRIGUES, D.; MARANHO, D. Consideraes biofarmacotcnicas relevantes na fabricao de medicamentos genricos: fatores que afetam a dissoluo e absoro de frmacos. Rev. Bras. Cien. Farm., So Paulo, v.35, p.1-16, 1999. Recebido para publicao em 12 de setembro de 2003.