BIOQUMICA O setor de bioqumica em laboratrio de anlises clinicas um dos departamentos do laboratrio que processa o maior nmero de exames ao mesmo

o tempo, por ser um setor que trabalha com pequenas medidas como microlitros, o aprendizado neste setor requer muita aplicao e dedicao do tcnico que busca esse conhecimento, que pode ser um diferencial em relao aos outros setores do laboratrio. Todos os exames realizados na bioqumica so atravs de reaes qumicas onde o aparelho utilizado como espectofotometro, determina a densidade tica de cada reao. A seguir estarei exemplificando de maneira tcnica os principais exames realizados na bioqumica. CIDO RICO A determinao do cido rico direta utilizando apenas 0,02 mL de amostra (soro ou urina), as substncias utilizadas na reao encontram distribudas adequadamente em dois reagentes que so vendidos no comrcios especializados como cido rico para anlises, que so misturado e formando um reagente de trabalho. PROCEDIMENTO Pegar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir. BRANCO DE 2,0 mL PADRO 2,0 mL 0,004 --------TESTE 2,0 mL --------0,04 mL

REAGENTE TRABALHO PADRO -------AMOSTRA (soro ou -------urina)

Incubar em banho Maria 37C por dez minutos, fazer a leitura em filtro varde( 490- 540). Zerar o aparelho com o branco e determinar a absorbncias do padro e teste. CLCULO CIDO RICO= ABSORBNCIA DE TESTE ABSORBNCIA DO PADRO Tambm pode ser usado o mtodo de fatorao para obter os resultados mais rpido e sem modificar o resultado: FATOR= 6 --PADRO X6

FATOR X LEITURA=RESULTADO

EXEMPLO: ABSORBNCIA DO TESTE=0,169 ABSORBNCIA DO PADRO=0,135

AU=0, 169 X 6 0,135

AU=7,5

FATOR= 6 =44,44 0,135

0,169 X44,44=7,5

VALORES DE REFERNCIA: Homens =2,5 a 7,0 Mulheres =1,5 a 7,0 Urina 24 horas =250 a 270 Para dosar o cido rico no soro do paciente permanecer 8 horas em jejum. Essa tcnica usada em espectofotometro, em aparelho automatizado semi automatizado usa o reagente pela metade e respectivamente a amostra. SIGNIFICADO CLNICO: Numerosas doenas condies fisiolgicas, alteraes bioqumicas, fatores sociais e ambientais esto associados a elevaes nas concentraes de cido rico. O cido rico pode est aumentando na obesidade aterosclerose, diabetes melitus, hipertenso, a gota uma das principais patologias causadas pelo aumento significativo do cido rico. So poucas as freqentes causas de hipourecemia ocorrendo na sndrome de Falconl, ocorrendo tambm em algumas doenas malignas como linfoma de Hodgkin. ALBUMINA A albumina tem a propriedade de se ligar a uma grande variedade de anion orgnico e molculas complexas de corantes. Os mtodos mais comumente utilizados para a dosagem de albumina baseiam-se na ligao com corantes de bromo cresol que reagem com a amostra produzindo uma colorao esverdeada, quanto maior for o tom verde maior ser a concentrao de albumina na amostra analisada. PROCEDIMENTO: Pegar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:

REAGENTE Reagente de cor Padro amostra

BRANCO 2,0 mL

TESTE 0,02 mL

PADRO 0,02 mL 0,02 mL

Misturar e aps 2 minutos, determinar absorbncias do teste e padro em filtro vermelho (630) zerando o aparelho com o branco. CLCULOS: ALBUMINA = Absorbncia do teste Absorbncia do padro Tambm pode ser determinada pelo mtodo de fator: FATOR= 3,8 = 3,8 Padro 0,302 abs. Padro = 0,302 = 12,6 * FXL = R X 3,8

Ex.: abs. Teste = 0,242

Albumina = FLX = 12,6 X 0,242 = 3,0 Albumina = 0,242 X 3,8 * ALB = 3,0 g/DL VALORES DE REFERNCIA = 3,5 a 5,5 g/DL. SIGNIFICADO CLNICO: A albumina usada como parmetro para avaliao do estado nutricional e funo heptica. Diminuio da albumina ocorre na cirrose e outras doenas hepticas incluindo o alcoolismo crnico, sndrome nefrtica e em alguns casos de neoplasia. A elevao de albumina encontrada somente na desidratao. BILIRRUBINA A bilirrubina dosada por diazotizao e formao de azobilirrubina vermelha. A bilirrubina direta (diglicuronide) dosada em meio aquoso, enquanto total (direta e indireta) dosada por ao de um potente solubilizador de ao catalisadora. PROCEDIMENTO Preparo do diazo. 1,5 mL de cido sulfanilico, uma gota de nitrito de sdio. Pegar trs tubos e proceder como a seguir: (TECNICA MACRO)

REAGENTE gua destilada Acelerador Acido sulfanlico Diazo reagente Amostra (soro)

BRANCO 4,5 mL --0,5 mL --0,3 mL

DIRETA 4,5 mL ----0,5 mL 0,3 mL

TOTAL --4,5 mL --0,5 mL 0,3 mL

Misturar e esperar 5 minutos. Determinar as absorbncias de bilirrubina diretas e totais em 525 nm ou filtro verde acertando o zero com o brao. TECNICA MICRO: Usada para determinar a bilirrubina de recm- nascido. PROCEDIMENTO: Pegar 3 tubos e proceder como segue: REAGENTE gua destilada Acelerador Acido sulfanlico Diazo reagente Amostra (soro) BRANCO 1,8 mL --0,15 mL --0,05 mL DIRETA 1,8 mL ----0,15 mL 0,05 mL TOTAL --1,8 mL --0,15 mL 0,05 mL

Misturar e esperar 5 minutos. Determinar as absorbncias das bilirrubinas diretas e totais em 525 nm ou filtro verde acertando o zero com o brao. TECNICA DE DETERMINAO DO PADRO DE BILIRRUBINA. O padro da bilirrubina diferente das demais dosagens, vendido separado do kit de teste da bilirrubina. Tcnica macro: Pegar 3 tubos e proceder como segue: REAGENTE gua destilada Acelerador diazo Acido sulfanilico padro BRANCO 4,5 mL --0,5 mL PADRO --4,5 mL 0,5 mL --0,3 mL

Misturar e esperar 5 minutos, determinar as absorbncias das bilirrubinas direta e total em 525 nm ou filtro verde acertando o zero com o branco. CALCULO DO FATOR: FATOR= 10 ABS DO PADRO Ex: 10 =22,88 0,437

CALCULO DA BILIRRUBINA: ABS DO TESTE X FATOR EXEMPLO: ABS DIRETA = 0,125 ABS TOTAL = 0,212 B. TOTAL B. DIRETA= BI. TOTAL = 0,212 x 22,88= 4,85 mg/dl DIRETA =0,125 x 22,88=2,86 mg/ dl INDIRETA= 4,85- 2,86=1,99 mg/dl VALORES DE REFERNCIA: BT= at 1,2 mg/dl BD=at 0,4 mg/dl SIGNIFICADO CLNICO: A causa mais comum de aumento da bilirrubina direta so as doenas: hepatocelulares e da rvore biliar. Aumento da bilirrubina total indica presena de doenas biliares como: hepatite, cirrose heptica. CLCIO Dentre os vrios mtodos para dosagem do clcio a preferncia de clcio tem sido dada aos que utilizam a prpura de ftalena em meio cido, que em muitos casos instvel. O clcio reage com a prpura de ftalena em meio alcalina formando um complexo de cor violeta que medido em 570 (filtro laranja). Preparo do reagente de trabalho. Mistura 3 partes o reagente n (1) em uma parte do reagente n (2) de acordo com o n de teste. PROCEDIMENTO Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:

REAGENTE Reagente de trabalho Padro Amostra

BRANCO 2,0 mL -----

PADRO 2,0 mL 0,04 mL ---

TESTE 2,0 mL 0,04 mL

Acertar o aparelho em 570 nm ou em filtro laranja, zerando como o branco e determinar as absorbncias do padro e teste. Essa tcnica est voltada para espectofotometro CALCULOS: Clcio = Absorbncia do teste Absorbncia do padro Exemplo: Absorbncia do teste = 1,270 Absorbncia do padro= 1,346 CLCIO= 1,270 1,346 CALCIO IONIZADO = 3 P = protena total A=albumina (0,19 x P)+ A +6 Clcio urinrio (mg/24horas) = clcio urinrio (mg/dL) x volume urinrio (mL) 100 VALORES DE REFERNCIA Soro = 8,8 a 10,8 Clcio inico = 4,8 a 5,5 Urina 24 horas =5,0 a 40 SIGNIFICADO CLNICO Na maioria das vezes a hipercalcemia indica a presena de hipertireoidismo ou de doenas malignas. X 10=9,4 mg /dL # F= 10 1,346 6 x Ca {( 0,19x P)+ A} Ca=clcio srico =7,43 # 7,43 X 1,270 = 9,4 X 10 OU Fator = 10 padro *F X L=R

As causas mais comuns de hipocalcemia so: hipoparatireoidismo idioptico, insuficincia renal, desordens no metabolismo, vitamina D, pancreatite, deficincia de alimentao rica em clcio. CREATINA A creatina e outras componentes do soro reagem com a soluo de picrato em meio alcalino, formando um complexo de cor vermelha que medido fotometricamente. A adio de um acidificante abaixa o pH para 5,0 promovendo a decomposio do picrato. A diferena entre as duas leituras fornece o valor da creatinina verdadeira PROCEDIMENTO Tomar 3 tubos e proceder como segue REAGENTE Tampo Acido pcrico Amostra (soro) Padro Agua destilada BRANCO 2,0 mL 0,5 mL ----0,25 mL PADRO 2,0 mL 0,5 mL --0,25mL TESTE 2,0 mL 0,5 mL 0,25 mL -----

Misturar e colocar em banho maria 37C por 10 minutos. Determinar as absorbncias do padro e teste em filtro verde (500-530) acertando o zero no aparelho com o branco. A absorbncia do teste ser A1 acidificante 0,1 mL ----------------------0,1 mL

Misturar e deixar na temperatura ambiente 5 minutos e determinar A2 Essa tcnica est voltada para espectofotometro CALCULO: Creatina = A1- A2 Padro CREATININA= 0,106-0,043 x 4 0,264 Urina (mg/24 horas)= mg/dL x volume ( em mL) VALORES DE REFERNCIAS # CREATININA= 0,95 x4 ex. A1= 0,106 A2=0,043 PADRO = 0,264

SORO=0,4 a 1,3mg/dL URINA= 21 A 26 IMPORTNCIA CLNICA Est aumentada nas doenas do trato urinrio principalmente nas nefrites agudas, na sndrome nefrticas. CLORETOS Os ons cloreto reagem com tiocionato de mercrio formando cloreto de mercrio e ons tiocianato, que reagem o soro do paciente produzido a cor amarelo proporcional a concentrao de cloretos na amostra que medida em filtro verde-azul (450-500). PROCEDIMENTO Tomar 3 tubos e proceder como segue. REAGENTE Reagente de cor Ativador Padro Amostra (soro) BRANCO 3,5 mL 0,1mL ------TESTE 3,5 mL 0,1 mL ---0,01 mL PADRO 3,5 mL 0,1 mL 0,01 mL ----

Misturar e esperar 2 minutos. Determinar as absorbncias do padro em filtro verdeazul (450- 500) zerando o aparelho com o branco. Essa tcnica est voltada para o espectofotometro. Clculos: CLORETOS(mEq/L)=ABS do teste ABS do padro # Ex: ABS do teste = 0,356 ABS do padro =0,319 # Cl= 0,356 x 100=112 mEq/L 0,319 X 100 OU F=100 # 100 = FxL=R P 0,319

313 X 0,356= 112mEq/ Lxvolume (L) VALORES DE REFERNCIAS SORO= 96 A 105 URINA =170 a 254 SIGNIFICADO CLNICO O cloreto, como grande nion do liquido extra celular .

Ele desenvolve o principal papel na manuteno da neutralidade eletroqumica do liquido extra-celular, incluindo o plasma. A hipocloremia observada nos vmitos, com perda de HCL e nos estados acidtico. A hipercloremia acontece de vrias formas de acidose metablicas, diarreias prolongadas. COLESTEROL Um dos mais importantes teste bioqumica realizado em laboratrio, o kit de colesterol composto de um nico reagente pronto para o uso, com estabilidade que garante desempenho consistente em sua forma liquida original e manuteno das manuteno das condies timas da reao. PROCEDIMENTO Tomar 3 tubos e proceder como a seguir REAGENTE Reagente de cor padro Amostra (soro) BRANCO 2,0 mL ----TESTE 2,0 mL --0,02 mL PADRO 2,0 mL 0,02 mL

Misturar e incubar em banho maria 37C a 10 minutos. Determinar as absorbncias de teste e padro em filtro verde (490-530) Essa tcnica est voltada para o espectofotometro. CALCULOS=COLESTEROL=ABS DO TESTE X 200 # OU F= 200 # 200 =580 ABS DO PADRO FXL=R Ex.: ABS TESTE =0,290 # COL=0,290 X 200 =168 mg/Dl # 580 x 0,290=168 ABS PADRO=0,345 VALORES DE REFERENCIA SORO=150 A 200 SIGNIFICADO CLNICO Valores aumentados de colesterol so encontrados na nefrose, hipotireoidismo DCI doenas coronariana isqumica. Doenas colestticas do fgado, e excesso ingerido na alimentao e hipertenso. Nveis diminudos so encontrados no hipertireoidismo e desnutrio. P # 0,345

COLESTEROL HDL As lipoprotenas de muita baixa densidade (VLDL) e as lipoprotenas de baixa densidade (LDL) so quantitativamente precipitadas por centrifugao, e aps o colesterol ligado as lipoprotenas de alta densidade (colesterol HDL) determinado no sobrenadante. PROCEDIMENTO Em um tubo de ensaio colocar: Soro----------------------0,25mL Precipitante-------------0,25mL Agitar por 30 segundos e centrifugar a 3500 rpm por 15 minutos para obter um sobrenadante lmpido. Determinao do HDL Tomar 3 tubos e proceder como a seguir REAGENTE Reagente colesterol sobrenadante padro BRANCO 2,0 mL PADRO 2,0 mL 0,200 mL TESTE 2,0 mL 0,200mL

Misturar e incubar em banho maria 37C por 10 minutos, determinar as absorbncias do teste e padro em filtro verde (490 a 540), acertando o zero com o branco. CALCULOS: HDL= ABS DO TESTE X 40# OU 40 = F # FxL=R P

ABS DO PADRO

Ex.: ABS DO TESTE =0,290 # HDL = 0,290 X 40 = 36 # 40 =125# 125X0,290=36 ABS DO PADRO=0,320 SIGNIFICADO CLINICO No h duvida que o colesterol um fator de risco para DCI (doenas coronarianas isqumica) e que ele marcha junto com o fumo, hipertenso. Em 1977 ficou demonstrado que o colesterol HDL tem um efeito protetor contra a DCI. Os estudos comprovou que os nveis de colesterol HDL so inversamente proporcionais a prevalncia de DCI. 0,320 0,320

COLESTEROL VLDL O colesterol VLDL no dosado obtido a partir de clculos matemticos, conhecendo o valor de triglicrides s seguir a formula. VLDL= TRIGLICERIDES 5 Ex.:triglicrides=150 VLDL=150=30 5

Triglicrides acima de 380 prejudica as fraes do colesterol, neste caso recomenda no calcular as fraes (VLDL E LDL). COLESTEROL LDL Tambm no dosado obtido apartir de clculos matemticos obedecendo a formula a seguir: LDL=HDL + VLDL- COLEST. TOTAL Ex.: colesterol total= 185 Colesterol HDL=60 Colesterol VLDL=30 SIGNIFICADO CLINICO Est bem estabelecido que nveis de elevados de colesterol LDL esto associados com o risco aumentado de DCI. Tambm no h duvida de que tanto o colesterol total e as fraes LDL e VLDL podem ser diminudas com dieta. VALORES DESEJADOS E RECOMENDADOS Mg/dL Colesterol LDL Colesterol total Colesterol HDL(m) Colesterol HDL (h) D=desejvel M=risco moderado FOSFATASE ALCALINA A fosfatase alcalina de soro hidrolisa a timolftaleina monofosfato liberando timolftaleina, que tem cor azul em meio alcalino. A cor formada diretamente proporcional atividade enzimtica, medida em 590 ou filtro laranja, a cor proporcional a quantidade de fosfastase do soro. D <130 <200 <55 >65 130-159 200-239 35-55 45-65 h=sexo masculino m=sexo feminino M ALTO RISCO >160 >240 >35 >45 LDL=60+30-185=95

PROCEDIMENTO Tomar 3 tubos e proceder como a seguir REAGENTE Substrato Tampo Padro BRANCO 0,05mL 0,5 mL --PADRO 0,05 mL 0,5 mL 0,05 mL TESTE 0,05 mL 0,5 mL ---

Incubar em banho maria 37C por 2 minutos Amostra (soro) --------0,05mL

Incubar em banho maria 37C por 10 minutos, determinar as absorbncias do padro e teste acertando zero no aparelho com o branco. CALCULO= ABSORBNCIA DO TESTE X 45 ABSORBNCIA DO PADRO FATOR= 45 =FXL= R PADRO Ex.: ABS TESTE=0,295 ABS PADRO=0,360 F= 45 = 125 # 125 X 0,295= 37 mg/dL # FA= 0,295 X 45 =37 0,360 GLICOSE A glicose essencial para a funo do crebro e dos eritrcitos. O excesso de glicose armazenado na forma de glicognio no fgado e nas musculares. A dosagem de glicose no sangue dos exames mais solicitados aos laboratrios clnicos e tem como finalidade diagnosticar e acompanhar o tratamento de portadores de alguns distrbios no metabolismo de carboidratos que leva a situao de hipo ou hiperglicemia. 0,360