Marie-Li DION PARENTEAU et Maryana KOSTENKO

tude du taux dexcrtion rnale de la riboflavine Rapport de laboratoire

Prsent Mme Myriam Brunet Cours de Biologie Groupe 01

Collge Jean-de-Brbeuf Dpartement de Biologie 2 novembre 2011

Table des matires

Introduction ..................................................................................................................................... 3 Contexte thorique ......................................................................................................................... 4 Rsultats .......................................................................................................................................... 8 Discussion ...................................................................................................................................... 11 Conclusion ..................................................................................................................................... 16 Mdiagraphie ................................................................................................................................ 17 Annexe ........................................................................................................................................... 18

Introduction
Les reins sont des organes sans lesquels il serait impossible de fonctionner. Il est ds lors important den connatre le mode daction et ses fonctions. Ltude du taux dexcrtion rnale de la riboflavine permettra de mettre en vidence et de quantifier les fonctions du rein, cest--dire de voir si le rein dbarrasse le sang des produits terminaux du mtabolisme et sil ajuste les concentrations sanguines en ce qui concerne diffrents ions et molcules. Nous tenons galement tablir un lien entre la quantit de substance excrte et celle absorbe initialement, cest--dire 30 mg de riboflavine, qui ont pralablement t ingrs et dont on fera un suivi dans lurine pendant 5 heures. Selon nous, la quantit totale de riboflavine excrte sera infrieure celle qui a t ingre prcdemment par le cobaye. Ceci sera d au fait quune partie du mdicament sera absorbe et utilise dans diffrentes rgions du corps. Nous pouvons galement supposer que la quantit de riboflavine va dabord augmenter dans le temps, puisque la digestion va se faire graduellement. Ensuite, elle va diminuer dans le temps car la plus grosse partie du comprim sera digre et il restera vacuer le surplus de ce comprim de riboflavine, qui diminuera de plus en plus dans le temps. Pour raliser cette exprience, il nous faudra dabord dterminer le spectre dabsorption de la riboflavine dans le but de connatre quelle longueur donde la riboflavine absorbe la lumire. Cette tape sera excute laide du spectrophotomtre. Cette technique a pour but de parvenir quantifier la riboflavine excrte dans lurine. Son fonctionnement est assez simple : un faisceau lumineux dont on choisit la longueur donde doit traverser une cuvette qui contient une solution de la substance quon prvoit analyser. Si la substance en question parvient absorber la lumire cette longueur donde, la quantit de cette lumire absorbe sera alors directement proportionnelle avec la concentration de la substance tudie. (cahier de laboratoire) Par la suite, nous allons effectuer le dosage de la riboflavine dune solution inconnue partir dune
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solution 5% mg de riboflavine qui nous permettra de prparer les 5 solutions standard. Cette tape nous permettra de raliser la courbe talon. Enfin, nous allons procder la mesure du taux dexcrtion rnale de la riboflavine, ce qui nous permettra de trouver la quantit de riboflavine excrte chaque heure et la quantit totale excrte.

Contexte thorique
Constitution de lurine :
Lurine est compose 95 % deau et 5 % de soluts. Son constituant le plus abondant aprs leau est lure, qui drive de la dgradation normale des acides amins. Les autres dchets azots prsents dans lurine sont lacide urique et la cratinine. Les soluts normalement prsents dans lurine sont, par ordre dcroissant de concentration, lure, les ions Na+, K+, H2PO4-. (Marieb, 2010)

Description de la riboflavine :
La riboflavine, communment appele vitamine B2, est une vitamine hydrosoluble du complexe vitaminique B servant la respiration tissulaire et affectant indirectement le maintien de lintgrit des rythrocytes. En raison de sa couleur jaune fluorescent, la vitamine B2 a une proprit chimique dintrt de causer une coloration prononce de lurine. Elle a la proprit dabsorber slectivement certaines longueurs donde de la lumire visible, ce qui rend possible le dosage de sa concentration dans lurine au moyen du

spectrophotomtre. (Cahier de laboratoire) Cette vitamine est rapidement absorbe partir du tractus gastro-intestinal suprieur, sauf en prsence de syndromes de malabsorption. Limportance de labsorption gastro-intestinale crot lorsque le mdicament est administr avec de la nourriture. La riboflavine est inactive jusquau moment o elle est phosphoryle en mononuclotide de flavine (MNF) dans les cellules de la muqueuse gastro-intestinale, les rythrocytes et le foie. Chez des sujets en sant, la demi-vie biologique varie de 66 84 minutes la suite dune administration par voie orale. Seulement 9 % du

mdicament est excrt sous forme inchange, le sort de ce qui reste est inconnu. Lexcrtion semble comprendre une scrtion rnale tubulaire ainsi quune filtration glomrulaire. Les quantits excdentaires aux besoins du corps sont excrtes dans lurine. Les besoins journaliers de la riboflavine sont de 1 2 mg/jour et on la retrouve dans plusieurs aliments tels que le lait, les champignons et les viandes. (e-CPS-date!)

Cheminement thorique de la riboflavine dans le corps depuis son ingestion orale jusqu son limination :
Afin de dcrire le cheminement de la riboflavine dans le corps, nous allons utiliser les principes de la pharmacocintique car nous allons tudier la manire dont la riboflavine se comporte dans lorganisme. Plus prcisment, nous allons tudier le devenir de la substance active contenue dans la riboflavine dans lorganisme. Pour ce faire, nous allons observer 4 phases qui se droulent simultanment : labsorption, la distribution, le mtabolisme et llimination de la substance active, qui comprend son tour la filtration glomrulaire, la rabsorption tubulaire et la scrtion tubulaire. (auteur date 1) Dabord, entre son administration et son limination, le mdicament doit traverser un certain nombre de compartiments : sang, espace extra-cellulaire, espace intracellulaire. Il doit donc franchir des barrires qui sont des membranes biologiques. (auteur date-1) Pour ce qui est de la riboflavine, ce mdicament sous forme de capsule est administr sous voie indirecte, puisque les principes actifs doivent traverser une barrire physiologique avant darriver dans la circulation sanguine (date auteur-2). De plus, la riboflavine a t ingre sous forme orale, donc par la cavit buccale. Elle a travers lsophage afin darriver lestomac, suite quoi elle est absorbe partir du tractus gastro-intestinal suprieur. Le mdicament a donc du franchir des membranes biologiques qui sparent les cellules les unes des autres. Ce passage mme permet la rsorption, cest dire la disparition plus ou moins complte dune substance par absorption progressive (auteur date 1). Cette premire tape de la pharmacocintique correspond en fait un processus par lequel le mdicament

passe de son site dapplication dans la circulation sanguine.4 La diffusion sen suit et le mdicament se rpartit dans les tissus et les organes par le sang afin datteindre ses sites rcepteurs. Une fois dans ces tissus, le mdicament peut se distribuer dans l'eau de l'organisme ou se combiner des structures lipidiques, ou encore se lier des protines tissulaires et peut induire un effet pharmacologique.5 La plupart des mdicaments sont mtaboliss (transforms) dans l'organisme mais ce n'est pas l'tape primordiale, cest--dire que le mdicament nest pas forcment mtabolis et souvent, il ne le sera quen partie. Ces biotransformations tant plus ou moins compltes, les mdicaments sont limins sous forme intacte et sous forme de mtabolites. La substance d'origine peut tre active ou inactive et donner par biotransformation des composs qui sont eux aussi actifs ou inactifs. La mtabolisation peut se produire dans de nombreux tissus, tant donn que les seules conditions ncessaires sont d'une part que la substance atteigne le site de transformation et que ce site possde l'quipement enzymatique ncessaire. Le mdicament est alors mtabolis par les enzymes du mtabolisme cellulaire.
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Enfin, aprs avoir t absorb et

distribu, le mdicament va tre limin par les monctoires (toutes les voies possibles d'limination)5. En ce qui nous concerne, nous allons nous concentrer sur lexcrtion rnale, voie d'limination la plus importante permettant l'limination des mdicaments ou des produits hydrosolubles. Cette limination se fait trois nivaux diffrents, cest--dire la filtration glomrulaire, la rabsorption tubulaire et la scrtion tubulaire. Dabord, la filtration glomrulaire correspond ltape pendant laquelle les reins vont filtrer le sang. Cette tape se produit dans les glomrules, qui sont des paquets de capillaires artriels qui forment une partie du nphron.1 De plus, la filtration glomrulaire est un processus passif et non slectif pendant lequel les liquides et soluts du sang sont pousss travers les capillaires du glomrule la capsule glomrulaire.2 Autrement dit, les lments solides de taille assez large, comme par exemple les protines, vont tre retenus et le liquide contenant leau et les substances
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Marieb, chapitre 25 Notes de cours, excrtion urinaire de la riboflavine, Mme Myriam Brunet

hydrosolubles va tre rcupr sparment dans les tubules rnaux et les tubules collecteurs. Par la suite, la rabsorption tubulaire est la rcupration des soluts importants partir du filtrat vers le sang8. Les tubules rnaux vont donc rcuprer dans le liquide quils viennent de filtrer tout ce qui est jug comme tant ncessaire pour les besoins de lorganisme. Tout ce qui reste (ce qui na pas t rabsorb) va former lurine. Finalement, la scrtion tubulaire est le mouvement des substances indsirables ou inutiles du sang au filtrat. 8. vrai dire, la scrtion tubulaire est en quelque sorte linverse de la rabsorption tubulaire puisque les dchets reviennent au filtrat. Il y a galement possibilit dajout de manire slective de certains lments au contenant par scrtion tubulaire. La scrtion tubulaire consiste donc en le transport du liquide constitu par du sang qui a dj t filtr et qui est dornavant appauvri de substances prsentant de faibles poids molculaires vers la lumire tubulaire 3. PAS DE GUILLEMETS

http://www.pharmacorama.com/Rubriques/Output/Pharmacocinetiquea8.php#56938

Rsultats

Longueur d'onde en fonction de la densit optique

1.600 1.400 1.200 Densit optique 1.000 0.800 0.600 0.400 0.200 0.000 300 350 400 450 longueur d'onde (nm) 500 550 600

Ce graphique reprsente la densit optique en fonction de la longueur donde. une longueur donde de 360, on observe dj un pic de la courbe. Toutefois, une longueur donde relativement prs de 440 (environ 445), il y a un pic encore plus haut qui se cre avant que la courbe rechute avec les longueurs donde de 460, 480, 500, et 520. Lorsque la densit optique est son apoge ( la longueur donde de 440 nm), la transmittance correspondante sera son minimum. * Jsais pas comment mettre les 3 pages de rsultats en mode paysage! Au pire on sarrangera demain !

talonnage de la densit optique en fonction de la concentration de riboflavine

1.6 1.4 1.2 Densit optique 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 1 2 3 4 5 6 Concentration de riboflavine (mg%) Inconnu #1

Ce graphique reprsente la densit optique en fonction de la concentration de riboflavine en mg%. Pour linconnu, nous avons obtenu une valeur de 1,484 mg% de riboflavine pour une densit optique de 0,469. Ce dernier se retrouve sur la courbe de ltalonnage de la densit optique en fonction de la concentration de riboflavine. De plus, nous observons une augmentation de la densit optique lorsquil y a augmentation de la concentration de riboflavine (mg%). Nous constatons donc que la courbe forme est pratiquement linaire, ce qui nous permet de dduire que la concentration de riboflavine (mg%) est suppose tre directement proportionnelle la densit optique.

Temps (heure) 0 1 2 3 4 5 total

Quantit riboflavine excrte (mg) quipe 1 quipe 2 quipe 3 quipe 4 1,44 2,33 5,16 0.007 1,62 1,95 1,38 0.014 2,90 1,74 3,83 0.022 3,37 0,84 2,82 0.017 2,35 0,60 1,22 0.017 1,58 0,33 1,0 0.016 11,82 5,46 10,25 0,093

quipe 5 0.012 0.035 0.060 0.049 0.021 0.006 0,182

Moyenne 0.012 0.027 0.040 0.032 0.021 0.012 0,143

cart-type 0,0028 0,0124 0,0222 0,0244 0,0142 0,0088 0,0776

Excrtion rnale de la riboflavine en fonction du temps

8.000 Quantit de riboflavine excrte (mg) 7.000 6.000 5.000 4.000 3.000 2.000 1.000 0.000 0 1 2 3 Temps (heure) 4 5 6 Notre courbe Courbe moyenne

Au temps 0, nous avons excrt une plus petite quantit de riboflavine que la moyenne. Toutefois, la quantit excrte augmente rapidement lors des deux heures suivantes. ce moment-l, la quantit de riboflavine excrte est plus grande que celle obtenue par la moyenne des diffrentes quipes. La quantit totale de riboflavine que nous avons excrte est de 13,05 mg.

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Discussion
Dabord, afin de dterminer le spectre dabsorption de la riboflavine, nous devons prendre plusieurs mesures de transmittances des longueurs dondes diffrentes. Nous voulons trouver cette valeur du spectre dans le but de connatre quelle longueur donde la riboflavine absorbe la lumire. Ce spectre dabsorption correspond en fait la longueur donde qui permet une densit optique maximale. Thoriquement, selon UNE SOURCE INCONNUE PARCE QUON A COPI SUR LAURENCE, il existe 4 pics du spectre dabsorption de la riboflavine. Toutefois, un seul pic prdomine les autres (cest celui qui est visible) et il est 440 nm. Au laboratoire, nous avons galement trouv le spectre dabsorption 440 nm car en traant une courbe des valeurs des diffrentes transmittances, nous avons pu voir que le pic (minimum) est la longueur donde de 440 nm. Ce minimum de transmittance correspond un maximum dabsorbance. En ce qui concerne la courbe talon de la densit optique en fonction de la concentration de la riboflavine excrte, mentionnons dabord quen principe, la courbe obtenue aurait d tre une droite parfaitement linaire. Toutefois, certaines erreurs minimes, dont il sera question plus tard dans la discussion, ont dvi quelque peu certaines valeurs de la droite. Ceci a contribu au fait que notre droite est lgrement dvie et nest donc pas parfaitement linaire. Cette droite permet entre autres de dterminer la valeur de linconnu qui nous a t assign. En effet, puisque celui-ci se situe sur la droite, il devient possible den dterminer la valeur de la concentration. Effectivement, en prenant deux points appartenant la droite, nous sommes aptes, laide de calculs mathmatiques prcis, de dterminer la valeur dun autre point sur la droite, qui, dans notre cas, est linconnu. Dans notre cas, linconnu correspond une valeur denviron 1,5 (mg%) pour une densit optique denviron 0,45. Cette courbe reprsentant ltalonnage de la densit optique en fonctions de la concentration de riboflavine excrte nous indique que labsorbance augmente de manire relativement proportionnelle laugmentation de la concentration de riboflavine excrte.
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(#3) En ce qui nous concerne, nous avons excrt 13 mg de riboflavine dans lurine, sur 30 mg qui ont t ingrs. Ceci dit, nous devons prciser que le type dexcrtion sur lequel nous avons fait tude est lexcrtion rnale. Toutefois, le mdicament en question a probablement t vacu sous dautres formes dexcrtions. Selon des donnes thoriques (e-CPS), seulement 9 % de la riboflavine est excrt sous forme inchange. De plus, la quantit du mdicament non ncessaire aux diffrents besoins du corps sera excrte dans lurine. En ce qui nous concerne, les 13,05 mg excrts correspondent en fait 43,3 %. Nous pouvons observer que cette valeur est considrablement suprieure celle prdite thoriquement. Ceci peut tre d diffrentes raisons. Premirement, il est primordial de comprendre que le 9 % excrt est seulement la forme inchange de la riboflavine. Ceci dit, au cours de son cheminement dans le corps, les molcules de riboflavine peuvent tre transformes selon les besoins de lorganisme. Ceci implique le fait que nos 13,05 mg comprennent non seulement la riboflavine sous forme inchange, mais galement celle qui a t transforme au cours de son passage dans lorganisme. En effet, comme nous lavons vu dans le contexte thorique, le mdicament, une fois rendu dans les tissus, peut se combiner { dautres structures, comme des structures lipidiques ou des protines tissulaires et il est devient ainsi transform. En dautres mots, la riboflavine initialement pure peut subir des biotransformations relativement importantes et consquemment, lorsquelle sera limine par le corps, elle comprendra une partie intacte et une autre partie sous forme de mtabolites. De plus, il est trs probable que nombreuses transformations soient survenues pour la riboflavine puisque les seules conditions ncessaires la mtabolisation de celle-ci sont le fait que la substance doit atteindre le site de transformation et que le site en question aie lquipement enzymatique ncessaire. Plus prcisment, la riboflavine aurait pu se transformer en la flavine adnine dinuclotide (FAD), enzyme trs importante des voies oxydatives.4 Dautre part, le mdicament aurait galement pu tre transform en composs plus hydrosolubles, qui savreront plus faciles { liminer.

Marieb, p.1067, chapitre 24

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Dautre part, lalimentation aurait pu influencer la quantit de riboflavine excrte dans lurine. Effectivement, sachant que le lait et la viande sont deux sources importantes de la vitamine B25 et que le cobaye en ait consomm avant la prise du comprim, ceci a trs probablement contribu modifier les besoins du corps en ce qui concerne cette vitamine. Lorganisme avait donc dj{ eu une dose importante de la riboflavine provenant de lalimentation. Ainsi, suite la prise du comprim, une plus grande partie a d en tre excrte puisquelle ntait pas ncessaire pour le corps. En ce qui concerne le sort du mdicament qui est non excrt par la voie urinaire, cest--dire le 56,7 % qui reste, il peut sexpliquer par divers faits. Premirement, il serait important de mentionner leffet de premier passage, duquel rsulte une perte de mdicament par mtabolisme avant que celui-ci soit arriv dans la circulation gnrale. 6 Leffet de premier passage survient ds le premier contant du mdicament avec un tissu ou un organe. Deuximement, lorsquon voque leffet de premier passage, on doit galement voquer la biodisponibilit. Elle reprsente la fraction de principe actif qui atteint la circulation gnrale. Elle implique donc le fait quil y a une partie du mdicament qui natteint pas la circulation sanguine et de ce fait, on revient au principe de leffet de premier passage. Troisimement, nous savons quune partie du mdicament est limine directement par les reins dans lurine, mais le corps possde dautres monctoires. Parmi plusieurs, on retrouve le foie (limination hpatique), la peau, les glandes salivaires, les poumons, etc. Pour ce qui est du foie, il est assez bien muni en ce qui concerne les enzymes et a lui permet de mtaboliser efficacement en secrtant de la bile. Il peut donc liminer une quantit considrable de mdicaments. Tout ceci tant dit, il ne faut pas oublier de mentionner quune partie du mdicament sera absorbe et utilise directement par lorganisme selon ses besoins, sans que celle-ci doive tre transforme ou modifie de quelconque faon. Aprs tout, un mdicament (ou une vitamine) est prescrit afin de donner { lorganisme un
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Marieb, p. 1062 www.scribd.com/.../DCEM1-Pharmacologie-Chapitre 3

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lment qui lui est manquant. Il y a donc forcment une bonne partie de la riboflavine qui a t utilise par diffrents organes ou tissus avant que les excs de celle-ci soient limins par lexcrtion rnale et autres.

#4 Plusieurs facteurs peuvent expliquer les erreurs effectues lors de notre laboratoire. Dentre de jeu, une premire cause derreur peut se trouver tre les mesures du volume de la miction prisent lors de exprimentalement. En effet, ces donnes ntaient pas tout fait prcises, d au matriel utilis et la prcision des instruments tels le cylindre gradu. Par ailleurs, le lapse de temps coul entre chaque nouvelle mesure, soit une heure, ntait pas tout fait prcise. Ensuite, puisque la solution ntait pas suffisamment opaque lors de lanalyse, nous avons d filtrer nos chantillons. Cette mthode na peut-tre pas suffisamment clairci notre substance, ce qui a possiblement caus des erreurs lors de la prise des donnes. De plus, nous avons perdu un peu de la quantit de la miction d au passage de cette dernire de bcher en prouvette. Ajoutons galement que la prcision du spectrophotomtre peut galement expliquer les erreurs. Effectivement, le nombre indiqu fluctuait de 1 chiffre ou 2 lors de lanalyse de notre substance. Puis, les erreurs dinattention, par exemple : oublier de rincer lprouvette ou le bcher, sont aussi source derreur. En second lieu, lalimentation du cobaye ntait pas trs quilibre. Cela a fortement influenc laltitude de notre courbe dexcrtion rnale, et galement influencer les rsultats. En effet, tel quindiqu dans le E-CPS?, la nourriture ingurgit acclre le passage de la vitamine B2 (Riboflavine) dans notre corps. Par la suite, En troisime lieu, afin damliorer ce laboratoire, nous pourrions employer du matriel plus prcis. De plus, ce serait une bonne initiative dadopter une alimentation plus saine et plus quilibre quelques jours avant la prise des chantillons. BLABLABLA .
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Conclusion
Reformuler -> Nous venons de dcrire les diffrentes tapes physiologiques qui interviennent sur le devenir du mdicament dans lorganisme.. voir guide

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Mdiagraphie
1) MARIEB, E.N. et HOEHN, K., 2010, Anatomie et physiologie humaines, dition du renouveau pdagogique, Saint-Laurent (version franaise de la quatrime dition (2010) de Human Anatomy and Physiology de Elaine N. Marieb ralis par Ren Lachane). 2) E-CPS 3) PROFESSEURS DU DPARTEMENT DE BIOLOGIE-CHIMIE, 20112012, Cahier de laboratoire, A11-25, pp.68-79. 4) PRONOVOST, M. et coll., aot 2008, Guide mthodologique pour la rdaction dun rapport de laboratoire en sciences de la nature, Montral, troisime dition. 5) FICHIER PDF

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Annexe
Jsais pas trop ce que tu veux rajouter en annexe demain on imprimera les feuilles (tableaux) ajouter! -e-CPS -rsultats des autres - dfinitions de mots difficuiles ??

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