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Introduo
O que so Enzimas ?
Conceito: so protenas catalisadoras que aumentam a velocidade das reaes, sem sofrerem alteraes no processo global.
Introduo
O que so Enzimas ?
Introduo
Meados do sculo XX: com avanos tecnolgicos e cientficos em reas como a bioqumica, as enzimas passaram a ser extradas de clulas produtoras:
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Introduo
ENZIMAS
XILANASES FOSFATASES
INVERTASES
OXIDORREDUTASES
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Vantagens do xarope (acar invertido): possui poder edulcorante 20% superior ao da sacarose; no cristaliza em concentraes elevadas. Indstria de alimentos: confeitarias; panificao; formulao de cremes para recheios e gelias.
Sua presena na cerveja pasteurizada uma clara indicao de que o tratamento trmico no foi efetuado corretamente.
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Rafinose
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Estaquiose
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35 % carboidratos solveis
Fonte abundante e de baixo custo de protenas
e carboidratos.
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Enzima extracelular
7 6
'
Atividade (U/mL)
-Galactosidases
5 4 3 2 1
)
0,015 0,01 0,005
Protena (mg/mL)
Extracelulares
Intracelulares
31
' 0) 1
) '
) '
) '
32
) '
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) '
) '
64
) '
) '
) '
'
92
'
' )
' )
112
' )
' )0
ENZIMA PURIFICADA
32
Fraes
66.0
CRIOPRECIPITAO
Enzima intracelular
0,6 0,06
45.0 36.0
0,2
14.2
) '
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20 40 60 80 100 120 140 Fraes
ENZIMA PURIFICADA
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Figure 1 - SDS-PAGE (12.5%) das etapas de purificao da -galactosidase extracelular de D. hansenii UFV-1. (1) padres; (2) liofilizado; (3) Filtrao em gel; (4) Troca-inica.
34
100
80
60
40
Troca-inica
0,26
51,60
202,33
17,06
58,42
20
pH
35 36
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100
80
60
40
20
0 0 20 40 60 80 100
Temperatura (oC)
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Seqenciamento automtico da poro N-terminal da galactosidase extracelular. Protena presente no Gel de Poliacrilamida Western blotting
Recorte da banda
Picotada
Membrana de PVDF
40
PPSQ-21/23
N-TERMINAL
YENGLNLVPQMGWN YENGLGLTPQMGWN NGLNLVPQMGWN NGLGLTPQMGWN NGLGLTPQMGWN NGLGLTPQMGWD NGLGLTPQMGWD NGLGLTPQMGWD NGLGLTPQMGWD NGLAITPQMGWN NGLAITPQMGWN
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Economia e praticidade
Vantagens
Aumento da estabilidade
No contaminao do produto
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-galactosidase
Slica
Glutaraldedo
3-aminopropiltrietoxisilano
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-Galactosidase (10,5U)
Liofilizao 6 horas, 60 oC
5 mL Leite de soja
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Liofilizao
Figura 3 - Cromatograma comparativo da hidrlise do leite de soja pela enzima -galactosidase extracelular de D. hansenii. Controle - 0 h (A) 2 h (B) e 4 h (C). 49
HPLC
Rafinose
Estaquiose
Outras aplicaes:
D
Figura 4 - Cromatograma comparativo da hidrlise do leite de soja pela enzima -galactosidase extracelular imobilizada de D. hansenii. Controle-0 h (A), 2 h (B,) 4 h (C) e 10 h (D). 51
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