PROCEDIMIENTO DE ENSAYO (MTODO POR DILUCIN): El objeto del ensayo consiste en medir la cantidad de oxgeno diatmico disuelto en un medio

de incubacin al comienzo y al final de un perodo de cinco das, durante el cual la muestra se mantiene al abrigo del aire, a 20 C y en la oscuridad, para inhibir la eventual formacin de oxgeno por las algas mediante fotosntesis. Las condiciones de la medida, en las que el agua a estudiar est en equilibrio con una atmsfera cuya presin y concentracin en oxgeno permanecen constantes, se acercan as a las condiciones reales de la autodepuracin de un agua residual. Para su determinacin se dispone de mtodos de dilucin (el que se explica a continuacin) y mtodos instrumentales que se derivan de mtodos respiromtricos que permiten seguir automticamente la evolucin de la DBO en el curso de oxidacin de las materias orgnicas contenidas en el agua. Reactivos:

Agua destilada Agua residual urbana reciente Solucin de fosfatos:

Monohidrgenofosfato de sodio: 8,493 g Dihidrogenofosfato de potasio: 2,785 g Agua destilada hasta enrase a 1000 ml

Homogeneizar perfectamente la solucin:

Solucin de sulfato de magnesio de 20 g/l Solucin de cloruro de calcio de 25 g/l Solucin de cloruro de hierro de 1,5 g/l Solucin de cloruro de amonio de 2 g/l

Preparacin del agua de dilucin. Se prepara a partir de agua destilada introduciendo en un recipiente:

Solucin de fosfato5 ml Solucin de sulfato magnsico1 ml Solucin de cloruro clcico1 ml Solucin de cloruro de hierro1 ml Solucin de cloruro amnico1 ml Agua destilada hasta enrase a 1000 ml

Esta solucin se mantiene a 20 C y debe de airearse procurando evitar toda contaminacin por metales, materias orgnicas, oxidantes o reductores. Se detendr la aireacin cuando la solucin

contenga 8 mg/l de oxgeno disuelto. Dejar en reposo durante 12 horas manteniendo el recipiente destapado. Aadir 5 ml de agua residual urbana por litro de esta solucin. (Esta agua de dilucin, deber utilizarse dentro de las 24 horas siguientes a su preparacin). Procedimiento: La tcnica utilizada de medicin es la siguiente: Se introduce un volumen definido de la muestra lquida en un recipiente opaco que evite que la luz pueda introducirse en su interior (se eliminarn de esta forma las posibles reacciones fotosintticas generadoras de gases), se introduce un agitador magntico en su interior, y se tapa la boca de la botella con un capuchn de goma en el que se introducen algunas lentejas de sosa. Se cierra la botella con un sensor piezoelctrico, y se introduce en una estufa refrigerada a 20 C. Las bacterias irn oxidando la materia orgnica del interior de la disolucin, con el consecuente gasto de oxgeno del interior de la botella. Estas bacterias, debido al proceso de respiracin, emitirn dixido de carbono que ser absorbido por las lentejas de sosa. Este proceso provoca una disminucin interior de la presin atmosfrica, que ser medida con el sensor piezoeltrico. En detalle: 1. Introducir un volumen conocido de agua a analizar en un matraz aforado y completar con el agua de dilucin. 2. Verificar que el pH se encuentra entre 6-8. ( En caso contrario, preparar una nueva dilucin llevando el pH a un valor prximo a 7 y despus ajustar el volumen) 3. Llenar completamente un frasco con esta solucin y taparlo sin que entren burbujas de aire. 4. Preparar una serie de diluciones sucesivas. 5. Conservar los frascos a 20 C 1 C y en la oscuridad. 6. Medir el oxgeno disuelto subsistente al cabo de 5 das. 7. Practicar un ensayo testigo determinando el oxgeno disuelto en el agua de dilucin y tratar dos matraces llenos de esta agua como se indic anteriormente. 8. Determinar el oxgeno disuelto. En el curso del ensayo testigo, el consumo de oxgeno debe situarse entre 0,5 y 1,5 g/l. En el caso contrario, la inoulacin con el agua destilada no es conveniente y se necesitar modificar la preparacin. Para la determinacin de oxgeno disuelto (OD) se puede emplear cualquiera de los dos mtodos establecidos en la norma mexicana NMX-AA-012-SCFI. Expresin de los resultados: DBO= F (To-T5)-(F-1)(D0-D5) Donde: D0 = Contenido de oxgeno (mg/l) del agua de dilucin al principio del ensayo.

D5 = Contenido medio de oxgeno (mg/l) del agua de dilucin al cabo de 5 das de incubacin. T0 = Contenido de oxgeno (mg/l) de una de las diluciones de la muestra al principio del ensayo. T5 = Contenido de oxgeno (mg/l) de una de las diluciones de la muestra al cabo de 5 das de incubacin. F = Factor de dilucin. Valores por encima de 30 mgO2/litro pueden ser indicativos de contaminacin en aguas continentales, aunque las aguas residuales pueden alcanzar una DBO de miles de mgO2/litro.