BACTERIOLOGIA - CAPTULO TRS NUTRIO, CRESCIMENTO E METABOLISMO ENERGTICO

Dr. Alvin Fox Traduo: Dr. Paulo E. Moretti

Os requerimentos para o crescimento das bactrias incluem fontes de energia, carbono "orgnico" (por exemplo, acares e cidos graxos) e ons metlicos (por exemplo, ferro). Outros fatores importantes so: temperatura tima, pH timo e a presena (ou ausncia) de oxignio.

Requerimentos de oxignio
Bactrias aerbicas obrigatrias requerem a presena de oxignio para poderem crescer; estas no realizam fermentao. Bactrias anaerbicas obrigatrias no efetuam a fosforilao oxidativa. Alm disso, elas so mortas pelo oxignio. Essas bactrias no expressam certas enzimas tais como a catalase [que quebra perxido de hidrognio, H2O2, em gua e oxignio], a peroxidase [pela qual NADH + H2O so convertidos a NAD e O2] e a superxido dismutase [pela qual o superxido, O2 , convertido a H2O2]. Estas enzimas detoxificam os radicais livres de perxido e de oxignio produzidos durante o metabolismo na presena de oxignio. Organismos anaerbicos aerotolerantes so bactrias que respiram anaerobicamente, mas que podem sobreviver na presena de oxignio. Bactrias anaerbicas facultativas podem realizar tanto fermentao quanto respirao. Na presena de oxignio, a respirao anaerbica geralmente desligada e esses microrganismos respiram aerobicamente. Bactrias microaerfilas crescem bem em baixas concentraes de oxignio, mas so mortas em altas concentraes.

Requerimentos nutricionais
Estes incluem fontes de carbono orgnico, nitrognio, fsforo, enxofre e ons metlicos incluindo ferro. As bactrias secretam pequenas molculas que se ligam ao ferro (siderforos, por exemplo, enterobactina e micobactina). Os siderforos (com ferro ligado) so internalizados pela clula bacteriana aps ligarem-se a receptores especficos. O hospedeiro humano tambm tem protenas transportadoras de ferro (por exemplo, a transferrina). Desta forma, bactrias que no competem eficazmente com o hospedeiro pelo ferro disponvel so pouco patognicos.

Temperatura
As bactrias podem crescem em uma variedade de temperaturas desde muito prximas do congelamento at prximas do ponto de ebulio da gua. Aquelas que crescem melhor em temperaturas medianas neste espectro so denominadas mesfilas, as quais incluem todos os patgenos e oportunistas humanos. Aquelas que crescem melhor em temperaturas mais baixas ou mais altas so respectivamente denominadas psicrfilas e termfilas.

pH

Muitas bactrias crescem melhor em pH neutro. Contudo, certas bactrias podem sobreviver e mesmo crescer em condies de pH muito baixo ou muito alto.

Medindo a massa de culturas bacterianas em meio lquido

Os mtodos mais comuns incluem medidas: a) da turbidez (a opacidade de uma cultura bacteriana em meio lquido - a medida das bactrias totais [vivas e mortas] - isto usualmente quantificado com um espectrofotmetro). Figura 1. b) do nmero de bactrias viveis em uma cultura - usualmente obtido pela contagem do nmero de colnias que crescem em meio slido - em placa de Petri - aps a semeadura de um volume conhecido da cultura (contagem de unidades formadoras de colnia). Em cada um dos mtodos, grficos construdos com o logartmo das medidas de turbidez ou o nmero de clulas viveis versus unidades de tempo so denominados curvas de crescimento. O tempo de gerao definido como o tempo requerido para a massa bacteriana dobrar de tamanho.

METABOLISMO DE ACARES (como exemplo de vias metablicas) Gliclise (Via de Embden, Meyerhof and Parnas [EMP])
Esta a via metablica mais comum em bactrias para o metabolismo de acar ( tambm encontrada na maioria das clulas animais e vegetais). Uma srie de processos enzimticos resultam na converso de acares em piruvato, gerando ATP e NADH (nicotinamida adenina dinucleotdio). A energia qumica necessria para propsitos biossintticos armazenada nos compostos formados (ATP e NADH). NAD ---> NADH -----------------------------> ADP ---> ATP

Glicose (C6)*

Piruvato (C3)
*

* nmero de carbonos na molcula H alternativas para essa via para catabolizar acares com a finalidade de se produzir energia armazenada na forma de ATP. Estas incluem a via da pentose fosfato (derivada da via hexose monofosfato) que encontrada na maioria das plantas e animais. O NADH gerado atravs dessa via. Outra via, a Entner Doudoroff, s encontrada em algumas bactrias.

Respirao anaerbica
A respirao anaerbica inclui a gliclise e a fermentao. Durante os ltimos estgios deste processo, o NADH (gerado durante a gliclise) convertido a NAD pela perda de um hidrognio. O hidrognio adicionado ao piruvato e, dependendo da espcie da bactria, so produzidos uma variedade de produtos metablicos finais. NADH ---> NAD Piruvato ---------------------- lcoois de cadeia curta ou cidos ----> graxos (tais como cido ltico ou etanol, C2-C4)

Respirao aerbica
A respirao aerbica envolve a gliclise e ao ciclo do cido tricarboxlico (ciclo de Krebs). O piruvato completamente degradado a dixido de carbono (C1) e, no processo, o NAD convertido a NADH. Desta forma, na fermentao aerbica, o NADH gerado a partir de duas rotas (gliclise e ciclo de Krebs). A oxidao fosforilativa converte o excesso de NADH a NAD

e, no processo, mais ATP (energia armazenada) produzido. As ubiquinonas e os citocromos so componentes da cadeia de transporte de eltrons envolvida neste ltimo processo. A converso de oxignio a gua o passo final deste processo. Ciclo de Krebs (compostos intermedirios C4-C6) NADH ---> NAD ------------------------->

Piruvato (C3)

3CO2 (C1)

Fosforilao oxidativa
NADH ---> NAD -------------------------> ADP ---> ATP O ciclo de Krebs (Figura 2) contm intermedirios de 4 e 6 carbonos. O piruvato (C3) supre o ciclo de Krebs de tal maneira que o nmero de intermedirios de C4/C6 permanece o mesmo ou aumenta. a) a perda de CO2 (C1) do piruvato para formar acetil CoA, seguida de sua adio a um componente C4 do ciclo (oxaloacetato) produz um componente C6 (cido ctrico). Assim, o nmero de molculas de C6 produzidas se iguala ao nmero de molculas de C4 inicialmente presentes. - CO2 C3 C4 ---> C2 C6 C2

O2

H2O

b) pela adio de CO2 ao piruvato um composto C4 produzido. Nesta circunstncia, so formadas molculas adicionais de C4 (um componente do ciclo). + CO2 C3 ---> C4

Desta forma, se alguns dos componentes do ciclo so removidos para uso em outras vias biossintticas, estes podem ser repostos por meio desta reao.

Metabolismo de cidos graxos

Os cidos so degradados a grupos acetil (C2) que suprem o ciclo de Krebs por sua adio a um intermedirio C4 produzindo uma molcula C6. Durante o ciclo, o C2 adicionado perdido como CO2 e C4 produzido. No ocorre aumento no nmero de molculas intermedirias do ciclo. Assim, se cidos graxos so a nica fonte de carbono, nenhum intermedirio do ciclo de Krebs pode ser removido sem que o ciclo se interrompa. + C2 C4 ---> C6

Ao invs, as bactrias utilizam o ciclo do glioxilato (Figura 2) (um ciclo de Krebs modificado) no qual no acontecem os passos enzimticos em que duas molculas de CO2 so removidas do C6 intermedirio. Este ltimo convertido a dois compostos C4 (ambos componentes do ciclo). Desta forma, para cada grupo acetil (dos cidos graxos) um ciclo intermedirio pode ser

produzido. Usualmente, a via do glioxilato no encontrada em clulas animais uma vez que so utilizados cidos graxos pr-formados presentes no alimentos. C6 ---> C4 + C2 C2 ---> C4

Em resumo, o ciclo de Krebs funciona para produzir energia e compostos de carbono. Contudo, se os intermedirios forem removidos para uso em outras vias metablicas, estes devem ser repostos. O processo de reposio diferente quando da utilizao de acares ou cidos graxos.