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Medios de cultivo
El crecimiento microbiano es un hecho gobernado por los principios de la conservacin. Materia clulas Energa Informacin productos Se requiere entradas de Materia nutrientes Energa generada por la transformacin de energa qumica a energa libre Informacin cdigo gentico
Balance de masa: deben existir en el medio aquellos elementos que se requieren para construir la clula. Es posible representar crecimiento microbiano como una ecuacin qumica
CaHbOc + mNH3+.........+nO2 (clulas) qCdHeOfNg + rCO2 + H2O + uChHiOjNk (productos)
Analisis elemental de la clula y requeridos para formulacin de medios de cultivo C, H, O, N : constituyen entre el 90 al 95% del total Mg, P, S : constituyen magnitud intermedia otros : constituyen trazas
FUENTES DE CARBONO fuente orgnica de carbono---- m.o. heterotrofos fuente inorgnica-----------------m.o. fotisinteticos (autrofos) FUENTE DE NITRGENO Amonio, nitrgeno, amino de aa y proteinas, urea, nitrato??? o nitrgeno elemental ???
En general las clulas son capaces de sintetizar todo tipo de material celular a partir de compuestos simples, por diferencias genticas en su sistema enzimtico, algunas cepas requieren de FACTORES DE CRECIMIENTO o NUTRIENTES ESCENCIALES (vitaminas, amino cidos, nucletidos)
MEDIOS DE CULTIVO DEFINIDOS DEFINIDO: Sabemos su composicin , definido qumicamente. Formulado en base a compuestos puros Preferibles para investigacin y desarrollo Problemas: costo a nivel industrial COMPLEJO: Composicin compleja y variables Producto de desecho, mas barato, nutricionalmente mejor (contiene factores de crecimiento , protenas) se requiere suplementar con algunos nutrientes
Ejemplo para nitrgeno Yx/s = % de sustrato en en el nutriente % de sustrato en la clula Yx/s = masa de nitrgeno en el (NH4)2SO4/masa de (NH4)2SO4
masa de nitrgeno en clula/masa de clula
Caso de carbono diferente Fermentacin aerobia 60% de carbono va a la clula 40% de carbono va a CO2 Yx/c= % de Carbono en Sustrato * 0.6 % de Carbono en clula 0.5-0.6
Otros requerimientos
Para el estudio en matraces se debe considerar la variacin de pH por efecto de Consumo de fuente de nitrgeno Produccin de metabolitos como cidos orgnicos (ac. ctrico).
pH Constante
Se requiere agregar soluciones buffer para mantener pH constante Soluciones ms comunes: utilizar soluciones tampn (buffer) Fosfato** Citrato ** a []de fosfato entre 10 a 15 g/L hay inhibicin
Cuantificacin de Oxigeno
(requerido) Oxigeno se requiere administrar en forma continua debido a su baja solubilidad en agua (de 7 mg/l a Temperatura de 28 30C) No interesa la concentracin sino la velocidad con que es suministrado.
En equilibrio Velocidad de consumo O2 = Velocidad de demanda O2 Adems la velocidad de demanda de oxigeno es proporcional a la velocidad de crecimiento de la poblacin
Na = dO2=(x) dt YO2
x;gr clula/litro
Na = (x)= YO2
_=
gr clulas/ gr oxigeno
Na = mili moles de oxigeno /litro hora ** por razones de eficiencia se suministra ms de lo necesario
Orden de Na < 50 mM /hr bajo - normal 90 150 mM /h limite superior > 120 500 mM /h difcil de cubrir CALOR DE FERMENTACIN Todo crecimiento de m.o genera calor residual
Velocidad de respiracin o velocidad de consumo de oxigeno. Q02 = Na ssi cultivo no esta limitado por O2
Aerobio
** Qf = 0.12 QO2
Ec. Empirica
CO2 velocidad de consumo de oxigeno CO2 Na ssi cultivo no est limitado por oxigeno
+Q
combustin de productos
Combustin celular
-Q
combustin de productos
QF= [Hs* Cs ( Hp Cp)- Hc Cc] 1 t Hs, Hp , Hc Calor de combustin de sustrato, productos y clulas. Cs, Cp , Cc Diferencia entre la concentracin de sustrato, productos y clulas. UTILIZA METODOS TERMODINAMICOS
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