ANTI IgG (Soro de Coombs)

Soro Anti Gamaglobulinas Humanas

PROTHEMO Produtos Hemoterpicos Ltda.

PARA TESTES EM LMINA OU TUBO

SOMENTE PARA USO DIAGNSTICO IN VITRO

Conservar entre: 2 e 8C

No congelar

Conservante: Azida de Sdio 0,1 %

Responsvel Tcnico: Janaina Martins CRF: 30.331

PRINCPIO DO TESTE O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo destina-se pesquisa de anticorpos da frao gamaglobulina humana, quer estejam adsorvidos s hemcias humanas in vivo (Teste de Coombs Direto), quer estejam livres no plasma, o que se detecta aps adsoro in vitro (Teste de Coombs Indireto). Este reagente NO SE DESTINA a demonstrar anticorpos NO GAMAGLOBULINAS HUMANAS os quais so detectados por sua propriedade de fixar fraes do complemento s hemcias, tais como os anticorpos dos Sistemas Kidd, Lewis, Etc. Para a pesquisa destes anticorpos dever ser utilizado o soro Anti-Humano (Poliespecifico) Prothemo que, alm de Anticorpos Anti-IgG contm anticorpos contra a frao do complemento (C3d). DESCRIO DO PRODUTO O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) Prothemo preparado a partir de soro de coelhos e/ou cabras imunizados frao IgG (gamaglobulina) do soro humano. O diluente do reagente contm: Cloreto de Sdio, Albumina Bovina, Tampo Fosfato, Potencializadores e Azida de Sdio 0,1%. Os reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos sem adies ou diluies. O produto fornecido em frascos de 10 mL, acompanhados de contaGotas. Cada gota equivale a 50 L. SORO ANTI-IgG (SORO DE COOMBS) PROTHEMO Cdigo Embalagem 1082 10 ml 1083 5x10 ml MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Teste em Lmina: lminas de vidro, pipetas Pasteur e soluo salina 0,9%. Teste em Tubo: tubos de vidro (0x75mm ou 12x 75mm), pipetas Pasteur, Banho-Maria a 37C, centrfuga e soluo salina 0,9%. ARMAZENAMENTO E PRECAUES Conservar em geladeira entre 2 e 8C. No congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas. No utilizar aps o vencimento. No utilizar o produto se observar ntida turvao, o que pode indicar contaminao bacteriana ou deteriorao do produto. Evitar a contaminao do reagente. No reutilizar os frascos vazios. SOMENTE PARA USO DIAGNSTICO IN VITRO

Os materiais de origem biolgica devem ser considerados como se fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos mtodos adequados para o manuseio e descarte equivalente aos utilizados para as amostras de sangue. O no seguimento das instrues de uso pode resultar na diminuio da performance tima do produto. COLETA DA AMOSTRA O sangue deve ser coletado por procedimento assptico aprovado, com ou sem adio de anticoagulante. As hemcias obtidas de cogulo podem ser utilizadas em at 5 dias aps sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser utilizadas em at 48 horas. Se a demora para a execuo do teste for inevitvel, hemcias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em soluo preservativa de glbulos. Estocar a 2 a 8 C, por no mximo, 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser utilizado at a data de expirao, se armazenado entre 2 e 8C. O armazenamento prolongado de hemcias antes da execuo do teste pode causar deteriorao de antgenos e resultar em reaes mais fracas. PROCEDIMENTO DO TESTE TESTE DE COOMBS DIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETO Este teste empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas) j fixados s hemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do RecmNascido, Anemia Hemoltica Adquirida e em pacientes que tenham recebido transfuses incompatveis. 1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de hemcias do paciente a 5%, previamente preparadas em soluo salina 0,9%. 2. Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina 0,9%. Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo na ltima lavagem para retirar toda a soluo. 3. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO. Misturar bem. 4. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 5. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de aglutinao.

TESTE DE COOMBS INDIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA INDIRETO Este teste utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores (incompletos), os quais se fixam s hemcias in vitro mas no as aglutinam. Para que a reao seja observada necessria adio do Soro AntiIgG (Soro de Coombs) PROTHEMO ao teste. O teste de Coombs Indireto realizado nas pesquisas de anticorpos bloqueadores, nas pesquisas de antgenos (usando o soro classificador apropriado) e nas provas de compatibilidade, desde que tais reaes no dependam de complemento para a sua deteco. Nos casos em que a reao pode ser mais bem detectada pela fixao de complemento, deve-se usar o Soro Anti-Humano (Anti-IgG e AntiC3d) Poliespecfico PROTHEMO. PROCEDIMENTO DO TESTE 1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de hemcias a 5% escolhidas para o teste, previamente preparadas em soluo salina 0,9%. 2. Adicionar duas gotas de soro a ser testado. 3. Acrescentar duas gotas de Albumina Bovina a 22% PROTHEMO. 4. Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37C. 5. Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina 0,9%, secando as bordas do tubo na ltima lavagem para retirar toda a soluo. 6. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO. Misturar bem. 7. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 8. Agitar suavemente o tubo para pesquisar aglutinao INTERPRETAO: POSITIVO: (Presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no soro do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos presentes nas hemcias usadas no teste.

CONTROLE POSITIVO E CONTROLE NEGATIVO PARA O TESTE DE COOMBS INDIRETO 1. Na execuo do teste de Coombs Indireto de primordial importncia realizar em paralelo os controles positivo e negativo. 2. Colocar em dois tubos de hemlise uma gota de suspenso a 5% de hemcias O Rh Positivo, previamente preparadas em soluo salina 0,9%. Identific-los.

3. Adicionar ao tubo controle negativo uma gota de soluo salina 0,9% e ao tubo controle positivo uma gota de reagente Anti-D PROTHEMO. 4. Executar o mesmo procedimento tcnico descrito para o teste de Coombs Indireto a partir do item no 3. TCNICAS PARA PESQUISA DAS FORMAS FRACAS DO ANTGENO D (DU ) O antgeno Du uma variante do antgeno D e embora se comporte de maneira diferente nas tcnicas rotineiras de determinao do antgeno D to antignico quanto este. O indivduo portador do antgeno Du deve ser, para todos os efeitos, considerado como Rh Positivo. 1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota de reagente Anti-D PROTHEMO. Identific-lo e em um segundo tubo, colocar uma gota de Controle Rh PROTHEMO como controle negativo. 2. A cada tubo acrescentar uma gota de suspenso de hemcias a 5% previamente preparadas em soluo salina 0,9%. Misturar bem. 3. Incubar os dois tubos a 37C durante 15 a 30 minutos 4. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos. 5. Agitar suavemente os dois tubos para pesquisar a presena ou no de aglutinao. 6. Lavar as hemcias dos dois tubos por trs vezes com soluo fisiolgica. Aps a ltima lavagem, desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo para retirar toda soluo fisiolgica. 7. A cada tubo adicionar duas gotas de Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) PROTHEMO. Misturar bem. 8. Centrifugar a 3.400 rpm por 15 segundos. 9. Agitar suavemente os tubos para pesquisar a presena ou no de aglutinao. INTERPRETAO DOS RESULTADOS Se no houver aglutinao em nenhum dos tubos, o sangue deve ser classificado como Rh negativo. Se houver aglutinao apenas no tubo que recebeu o reagente Anti-D PROTHEMO o sangue portador do Fator Du e deve ser considerado como Rh positivo. Se houver aglutinao em ambos os tubos, a determinao do Fator Du fica prejudicada e portanto, estaremos diante de hemcias j sensibilizadas por algum anticorpo. Se o sangue for de um doador, o mesmo no poder ser usado para fins transfusionais. LIMITAES DO PROCEDIMENTO TCNICO I - Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: 1. Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das antiglobulinas humanas. 2. Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao

inadequada, no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos. 3. Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente conservados na temperatura indicada, perdendo a reatividade. 4. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste.

II - Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer: 1. Quando hemcias com teste de Coombs Direto positivo so usadas durante o procedimento tcnico do teste de Coombs Indireto. 2. Quando so utilizadas amostras de sangue contaminado. 3. Quando for realizada uma centrifugao excessiva. 4. Quando o soro, as hemcias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs) estiverem excessivamente frios, detectando a presena de aglutininas frias. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11th Edition. Bethesda: AABB, 1993. 2-Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers,1975. 3-Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7th Edition. Oxford Blackwell Scientific, 1983. 4-Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O. GARANTIA Este produto garantido por Prothemo Produtos Hemoterpicos Ltda durante o prazo de validade indicado no rtulo se conservado e utilizado segundo as instrues recomendadas. PROTHEMO PRODUTOS HEMOTERPICOS LTDA. CNPJ 44.058.162/0001-56 Rua Augusto Ferreira de Morais, 328 - Socorro - CEP: 04763-000 So Paulo - SP - BRASIL Atendimento ao consumidor: Fone (11) 5521-1808 e FAX (11) 5523-9232 Data da edio: Nov/2009