You are on page 1of 60

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Nada Sobre la tierra se pierde, todo se transforma (Antoine Laurent Lavoisier (1743-1794), Cientfico Francs)

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

INDICE

1. 2. 3. 4.

Objetivos ...................................................................................................................Pg. 3 Plan de trabajo .........................................................................................................Pg. 4 Introduccin .............................................................................................................Pg. 5 Desarrollo del trabajo. .............................................................................................Pg.10

4.1. Limpieza biolgica. Estado de la cuestin ..............................................................Pg.10 4.1.1. Las Enzimas. Antecedentes de la limpieza con Bacterias. .....................................Pg.10 4,2. Bacterias utilizadas como agentes de limpieza en restauracin ...........................Pg.12 4,2.1. Bateras reductoras de sulfatos (BRS ......................................................................Pg.12 4,2.2.Bacterias que eliminan nitratos y materia orgnica..................................................Pg.13 4,2.3. Metodologa descrita en la bibliografa consultada .................................................Pg.13 4,2.4. Comparativa entre bacterias y enzimas ...................................................................Pg.18 4.3. Pseudomonas.............................................................................................................Pg.19 4.3.1. Caractersticas. .......................................................................................................Pg.19 4.3.2.Clasificacin.............................................................................................................Pg.20 4.3.3.Hbitats ....................................................................................................................Pg.21 4.3.4.Ps. stutzeri ................................................................................................................Pg.21 4.3.5.Condiciones .............................................................................................................Pg.22 4.3.6.Cultivo......................................................................................................................Pg.22 5. 6. 7. 8. 9. Materiales y mtodos ...............................................................................................Pg.24 Resultados .................................................................................................................Pg.45 Conclusiones .............................................................................................................Pg.50 Bibliografa ...............................................................................................................Pg.51 Agradecimientos.......................................................................................................Pg.54

10. Anexos .......................................................................................................................Pg.55

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

1. Objetivos.

Profundizar en el conocimiento del uso de las bacterias para la limpieza de pinturas murales. Introducir mejoras en los sistemas de aplicacin de la bacteria, partiendo de los estudios realizados por Giancarlo Ranalli. Comprobar la eficacia de dichas bacterias para la eliminacin de colas y su interaccin con la superficie. Desarrollo de la metodologa de la aplicacin de dicha bacterias.

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

2. Plan de trabajo

Esto se pretende llevar a cabo mediante el siguiente plan de trabajo: 1. Revisin bibliogrfica. 2. Adquisicin de las cepas de Ps. Stutzeri de las colecciones de cultivo tipo DSMZ 5190 y CECT 4899. 3. Precipitacin y cultivo de las cepas liofilizadas para su utilizacin. 4. Cultivo en un medio lquido para obtener masa celular. 5. Aplicacin a la probeta. 6. Retirada de los empacos y evaluacin de los resultados.

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

3. Introduccin Esta investigacin surgi a raz de los trabajos realizados en Italia en el Camposanto de Pisa para la limpieza y recuperacin de las pinturas murales arrancadas de Spinello Aretino mediante el uso de bacterias, que segn los artculos consultados (Anexo I) dieron muy buen resultado. El abordar la limpieza de una obra siempre es complicado, ya que se trata del proceso ms comprometido de la restauracin. La limpieza se define como la remocin en la superficie de la obra de toda sustancia extraa a la propia naturaleza de la obra, pudiendo llegar a ser nociva para sta, ya que no slo afecta al aspecto esttico, de legibilidad y apariencia, sino tambin a la estabilidad estructural de la obra pudiendo llegar a provocar reacciones qumicas dainas sobre la superficie. Este aspecto es el que hace de la limpieza uno de los tratamientos de restauracin ms complicados y controvertidos debido a su cualidad de irreversibilidad, por lo que tambin es uno de los procesos de intervencin ms polmicos y criticados. Y por ello debe ser uno de los procesos de conservacin ms delicados ya que, lo eliminado no se puede reponer. Uno de los trminos ms asociados a la limpieza es la ptina, la cual debe ser considerada siempre a la hora de abordar una limpieza, estableciendo una correcta separacin entre la materia a eliminar y el original para evitar posibles abrasiones sobre el estrato pictrico. Por todo esto, nos damos cuenta que la limpieza de una obra siempre es complicada y comprometida ya que, existe una polmica histrica sobre el cmo, cuando y hasta dnde llegar con dicho proceso. Y al respecto, encontramos dos corrientes, que son: El planteamiento objetivo. El planteamiento crtico.

1. El planteamiento objetivo. Por el cual se considera que la limpieza es una tcnica de recuperacin y por ello se debe eliminar del original todos los elementos que lo distorsionan. La meta de este planteamiento es la recuperacin del estado original, atendiendo a una serie de preceptos, como son: La comprensin rigurosa y objetiva de la ejecucin de la estructura pictrica. La identificacin y calificacin de las estructuras extraas. La desnitrificacin del aspecto oscurecido de la pintura antigua y la confusin que pueden llegar a provocar trminos como veladura, barniz y ptina.

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

El reconocimiento de que el barniz slo tiene funcin de protector. La creencia de que los procedimientos utilizados son fiables y que si no lo fueran la pericia de los restaurados lo subsana.

De la aplicacin de estas posturas surge la llamada limpieza integral, que defiende que los barnices oscurecidos, repintes y cualquier material ajeno al original deben ser eliminados. 2. El planteamiento crtico que surge de la teora de la restauracin de Brandi1 al reconocer la obra de arte, en su consistencia fsica y en su doble polaridad esttica e histrica. Sus criterios son, que: La limpieza se entiende como apoyo a los estudios histricos y estticos sin confiar tanto en la ayuda cientfica. El barniz no es considerado como algo ajeno a la obra de arte sino como algo que forma parte de la misma y de su historia. La limpieza realizada con disolventes no es inocua para la obra de arte.

Este concepto terminar desembocando en la llamada limpieza parcial. Teniendo en cuenta que las intervenciones sobre cualquier obra son irreversibles una intervencin parcial nos dar margen para que puedan realizarse intervenciones futuras. En esta misma lnea encontramos la llamada limpieza selectiva en la cual se defiende una eliminacin no homognea del barniz dependiendo de la funcin que tenga ste con el equilibrio total de la obra. Con todo esto podemos concluir, que la tcnica a utilizar en la limpieza de una obra y la filosofa en la que nos basamos para seleccionar el mtodo de limpieza se asientan en el conocimiento de tres elementos, que son: La tcnica pictrica. La sustancia a eliminar. Y el estado de conservacin.

Y del conocimiento de estos tres elementos surgir el mtodo de restauracin. Podemos encontrar muchos sistemas y materiales utilizados para la limpieza de las superficies pictricas. Dichos sistemas se pueden clasificar en: Sistemas de limpieza no acuosos. Sistemas de limpieza acuosos.

BRANDI; C. Teora de la restauracin. Madrid: Alianza Editorial, 1998, p.15

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Los mtodos fsico-qumicos los podemos aplicar a: Pincel. Hisopo. Esponja. Por vaporizacin. Por empaco. Este mtodo nos proporciona: Que el disolvente se aplique en un material soportante. Reblandece las pelculas insolubles. Reduce la accin mecnica. Permite prolongar el tiempo de contacto del reactivo. Nos permite regular la cantidad de reactivo.

Por tampn. Que nos permite: La accin directa del disolvente sobre un rea de poca extensin. Precisa de una continua accin mecnica. El tiempo de contacto de los reactivos son breves. Este mtodo no nos permite controlar la cantidad de reactivo. La operacin se suele realizar a pincel, esponja o hisopo de algodn. Este mtodo es aconsejable para materiales en suspensin.

Medios que modifican las cualidades de una sustancia acuosa: Espesantes: Son sustancias macromoleculares que se pueden mezclar con agua o disolventes orgnicos formando soluciones de una alta viscosidad. Suele utilizarse para modificar la densidad de los disolventes, poder controlarlos y trabajar en reas pequeas. Soportantes: Estos no forman geles verdaderos, sino emulsiones o empastos como la sepiolita, el papel, el papel japons, etc.

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Comparativa entre los Mtodos de limpieza a Seco y los Fsico-Qumicos

Sistemas de limpieza

Ventajas

Desventajas

Sistema no acuosa o seco

No aporta humedad. No disuelve nada. Los materiales no interaccionan. Desprenden sedimentos.

Pueden erosionar la superficie. Algunos de estos medios tienen infraestructuras complicadas. Es difcil de controlar. No es selectivo. Se trata de un trabajo mecnico.

Sistema Fsico-Qumico

Disuelve total o parcialmente sobre la superficie porosa. Permite la accin directa sobre un rea concreta. Tiempos de contactos cortos. Permiten la eliminacin de la suciedad sin demasiada accin mecnica.

Disuelve total o parcialmente sobre la superficie porosa. Sobre superficies porosas puede provocar interacciones Fsicoqumicas con los materiales pictricos. La limpieza no es homognea por toda la superficie de la obra.

Ventajas e inconvenientes entre los disolventes y los sistemas acuosos

Sistemas Fsico-qumicos

Ventajas

Inconvenientes

Disolventes

Acelera la disolucin de la suciedad.

Txico para el ser humano. Difcil de controlar. Posibles interacciones con los materiales de la obra.

Sistemas acuosos

Acelera la disolucin de la suciedad.

Interaccin del agua distintos materiales.

con

Interaccin del agua con el disolvente.

Isabel Casanova Bevi

Mster oficial en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

A todos estos sistemas, lo que les pedimos, sobre todo a los acuosos, es que sean selectivos a la hora de eliminar la suciedad de la obra para que tengan una accin localizada. Y para evitar la accin superficial se le puede aadir tensoactivos. Despus de esta breve introduccin a los sistemas de limpieza aplicados en pintura mural, podemos concluir que hay elementos ajenos a la obra, sustratos a eliminar, que son difcilmente eliminables con cualquiera de los mtodos expuestos, o bien, al eliminar dichos elementos, eliminamos tambin elementos constituyentes de la obra. Como hemos visto, el lser es un mtodo muy selectivo, pero hoy, contamos con otros sistemas de limpieza igualmente selectivos, como son la aplicacin de enzimas o bacterias. Esta investigacin, como se ha adelantado en el capitulo de objetivos, se centra en el estudio del uso de bacterias como mtodo de limpieza. Para ello haremos un pequeo repaso del uso de enzimas, pues supone el antecedente al uso de las bacterias en nuestro campo.

Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

4. Desarrollo del trabajo 4.1. La limpieza biolgica: Estado de la cuestin 4.1.1. Las Enzimas. Antecedentes de la limpieza con Bacterias. En los ltimos aos se ha estado investigando y experimentando con nuevos mtodos acuosos basados en la presencia de principios activos de origen biolgico. Y dentro de estos nuevos mtodos encontramos: La limpieza biolgica con enzimas. La limpieza biolgica con bacterias.

Como ya hemos mencionado con anterioridad una de las cualidades que necesitamos de los sistemas de limpieza es que sean selectivos a la hora de eliminar la suciedad y estas nuevas tecnologas de limpieza son interesantes precisamente por este aspecto, por su gran selectividad, ya que actan sobre sustancias y materiales muy especficos. Las enzimas son protenas extradas y aisladas de los sistemas biolgicos en los que operan y actan como catalizadoras2, es decir son capaces de acelerar las reacciones bioqumicas de transformacin de un sustrato concreto y en relacin a ese sustrato se suelen seleccionar. La actividad de una enzima queda afectada por la temperatura, el pH, la concentracin del sustrato y algunos otros factores fsico-qumicos. Tradicionalmente se clasificaran segn el tipo de accin que catalizan, como por ejemplo: Oxido-reductoras: son enzimas de oxidoreduccin. Transferasas: son las que aceleran el paso de ciertos grupos de un sustrato a otro. Hidrolasas: son las que hidrolizan determinadas molculas. Son las utilizadas en restauracin. Isomerasas: intervienen en el proceso de reconversin estructural de algunas molculas.

En concreto las empleadas en sistemas de limpiezas de obras de arte son las hidrolasas: proteasas, lipasas, amilasas, dependiendo de la naturaleza del sustrato a hidrolizar. El uso de las enzimas en la limpieza de pintura mural no se halla muy extendido y son pocas lar referencias bibliogrficas que relatan su empleo.
2

Las acciones catablicas liberan energa.

10 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Por ejemplo, en: G. Ranalli3 y otros experimentan para la eliminacin de residuos de cola animal con cinco clases de enzimas. Dos de ellas son dos tipos de proteasa (extradas de dos sistemas biolgicos diferentes). Las proteasas son adecuadas para la remocin de sustancias protenicas. Otra de las enzimas utilizadas en este estudio es la lipasa, que es apropiada para la eliminacin de productos grasos, leo, ceras e incluso resinas sintticas. Adems de estudiarse la colagenasa que es otra variante de la proteasa tratndose de una enzima proteasa gstrica. En otro estudio4, menos satisfactorio, se han obtenido algunas conclusiones, que son: - Para la eliminacin de colas en probetas y bajo condiciones de laboratorio ha funcionado la proteasa. - Para la eliminacin de huevo se utilizaron tanto proteasa como la lipasa y con la nica, que obtuvieron algn tipo de resultado, fue la lipasa aunque no demasiado bueno. - Tambin se observ que las casenas se hidrolizan ligeramente con la proteasa, reblandecindola. - Se observ, que para la pintura a caballete los tiempos de contacto eran cortos y para la pintura mural dichos tiempos se alargaban, incluso hasta 30 minutos. Tambin Paolo Cremonesi5 ha estudiado sobre el tema: emplearon la enzima proteasa Alcalina de Phase para la eliminacin de un empapelado de proteccin aplicado con cola animal o restos de cola en unos murales arrancados. Dicha enzima se aplic espesada, se cubra con Melinex y se dejaba actuar durante 30 minutos. Posteriormente se lavaba la zona con tensoactivo y agua tras su aplicacin. Y el tratamiento se realiz en verano a una temperatura de 30C. Otro estudio de la aplicacin de la misma enzima, que se menciona en el mismo libro, se realiz para el reblandecimiento de un repinte de casena sobre un fresco. Tras 20 30 minutos de contacto y con la superficie del muro calentada artificialmente se proceda a la eliminacin mecnica del repinte. Y por ltimo el estudio con una proteasa bsica consisti en la eliminacin de una cola animal empleada como consolidante en una pintura mural realizada al leo.

G. Ranalli, G. Alfano, C. Belli, G. Lustrato, M.P. Colombini, I. Bonaduce, E. Zanardini, P. Abbruscato, F. Cappitelli and C. Sorlini; 2003-2004; Biotechnology applied to cultural heritage: biorestauration of frescoes using viable bacterial cells and enzymes. Journal of Applied Microbiology 2005, 98, 73-83. 4 AAVV. Scienza e bevi Culturali XXI 2005, Cap: Gli enzima: limiti e potencialita nell campo Della pulitura delle Pitture murali4, Cristina Todazo. 5 Paolo Cremonesi; 1999; Luso degli enzima nella pulitura di opera policrome, Il prato, 2002.

11 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

4.2. Bacterias La utilizacin de bacterias para la limpieza de obras de arte ha surgido a raz de las investigaciones realizadas por un equipo de la Universidad de Miln que ha trabajado en los frescos del claustro del Camposanto de Pisa (noroeste). Se trata de Conversione di SantEfigio e battaglia, unas pinturas murales ejecutadas en el s.XIV por Spinello Aretino que forman parte de un monumental ciclo muy deteriorado por el paso del tiempo, la accin blica y por su posterior extraccin del muro. Dicha extraccin fue por arranque mediante la tcnica del strappo. El adhesivo utilizado para este proceso se endureci hasta el punto de afectar a los pigmentos e impedir que las pinturas fueran despegadas de las telas utilizadas para el arranque. Para separar las pinturas del lienzo se intent emplear tanto medios mecnicos como medios fsico-qumicos. Pero estos mtodos tradicionales de limpieza no resultaban efectivos sino, al contrario. Debido a esto fue cuando se pens en el empleo de bacterias para su restauracin, con muy buenos resultados6. Las bacterias con las que se est experimentando en el campo de la restauracin en estos momentos son de dos tipos: 4.2.1. Bacterias reductoras de sulfatos (BRS). Y dentro de estas se estudian: Desulfovibrio DSMZ63, para la desulfatacin en obras de arte. D. desulfuricans ATCC 13541, para la desulfatacin en obras de arte. D. vulgaris ATCC 29577, para la desulfatacin en obras de arte. D. vulgaris subps. vulgaris ATCC 29579 para la desulfatacin en obras de arte.

Se trata de unas bacterias de crecimiento anaerbico7 que es tambin un modo de clasificacin de ciertas bacterias ya que responde a su necesidad de oxgeno o no. Estas bacterias reducen los sulfatos en suelos anegados y aguas residuales al transformarlos en sulfato de hidrgeno.

Paolo Antonioli, Giacomo Zapparoli, Pamela Abbruscato, Claudia Sorlini, Giancarlo Ranalli and Pier Giorgio Righetti; Art-loving bugs: 2005; The resurrection of Spinello Aretino from Pisas cementery; Proteomics 2005, 5, 2453-2459. 7 Se trata aquellas bacteria que no necesitan o no precisan de la presencia de oxigeno para sobrevivir.

12 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Una de sus caractersticas es que las BRS estn representadas tanto por microorganismos hetertrofos como auttrofos adems de ser anaerbicas obligatorias. 4.2.2. Bacterias reductoras de nitratos. Y dentro de stas encontramos: Pseudomonas aeruginosa RZ 94, para la desnitrificacin y eliminacin de materia orgnica en obras de arte. Pseudomonas stutzeri GB 94, para la desnitrificacin y eliminacin de materia orgnica en obras de arte. Pseudomonas stutzeri A29, para la desnitrificacin eliminacin de materia orgnica en obras de arte. y

4.2.3. Antecedentes de la limpieza con Ps. Stutzeri: En los estudios publicados de Antonioli y otros (2005), seleccionaron la cepa en relacin tonto a su alta actividad tanto metablica como de reproduccin. Dichas bacterias a seleccionar, se pueden obtener de muy diversas maneras: Se pueden obtener a travs de las colecciones Internacionales de cultivo tipo (bacterias, levaduras y mohos de ATCC, DSMZ, CBS, etc). O por aislamiento de los hbitats diferentes (suelos, aguas residuales o muestras del patrimonio cultural). O extraerla de una actividad metablica especifica (como es nuestro caso).

Para establecer condiciones de los microorganismos se tienen en cuenta factores como: El pH. El medio y las fuerzas inicas del medio. Las condiciones (que en este caso como ya hemos mencionado con anterioridad deben ser anaerbicas). La viscosidad que interviene en el proceso de cristalizacin de biopolmeros. La higrometra necesaria para el desarrollo de las mismas. Las fuentes de energa. Los carbones.

13 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Es importante obtener las condiciones metablicas ptimas en laboratorio porque si no, en el exterior no funcionara.

Una vez seleccionadas las cepas, se selecciona el portante considerando: Que sea inerte para no interferir con el metabolismo de la bacteria. La capacidad de proporcionar una buena y adecuada hidratacin sin interferir en el sustrato por el lanzamiento de iones con los procesos metablicos de las bacterias. Debera ser fcil de eliminar. No debe modificar ni qumica, ni fsica, ni cromticamente la obra. Debera de dejar pasar la bacteria y evitar las precipitaciones residuales (lo que evitara el manchado de la superficie). Nos debera proporcionar un buen contacto entre las clulas y la superficie a tratar. Tambin debera permitir la remocin despus de su aplicacin. Debera ser capaz de mantener unos ciertos niveles de clulas viables adems de un nmero elevado. Tendra que mantener una buena actividad microbiana en la matriz.

Hay que tener cuidado con: Manchar la superficie. Con la posible corrosin que podemos provocar debido al metabolismo de las bacterias que se podra evitar a travs de la eliminacin de los subproductos en nuestras bacterias en concreto debera evitar la precipitacin de hierros.

14 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Los tipos de portantes8 investigados fueron: - Sepiolita: Segn su ficha: Arcilla absorbente utilizada como carga inerte en la preparacin de papetas de limpieza, para superficies ptreas y frescos, a las cuales confiere propiedades soportantes y absorbentes. Como portante para bacterias, segn Francesca Cappitelli (2006): se trata de un material que debe ser colonizado por la bacteria antes de su aplicacin. Tardan en colonizar este material entre 10 a 14 das. Nos permite un buen contacto con la superficie. Se trata de un material inorgnico, aunque no evita la precipitacin del hierro y con ello la formacin del sulfuro de hierro. - Carbogel: Segn su ficha: El Carbogel, es el resultado de una investigacin efectuada sobre productos condensantes para papetas, formado por cido poliacrlico neutralizado, que permite la preparacin de un gel con el simple aadido de agua, y cuya viscosidad puede variarse a placer. Es suficiente una cantidad variable del 0,5 al 4% en peso de Carbogel en solucin acuosa para obtener un gel de alta viscosidad, particularidad que resuelve los problemas de eliminacin del soporte por los geles utilizados hasta ahora, ligados tambin a la cantidad de materiales slidos en juego. Carbogel tiene una alta capacidad de retencin de agua, por lo que evapora en tiempos muy largos. El cido poliacrlico modificado Carbogel puede adicionarse a las papetas de pulpa de papel y a las clsicas soluciones de amonio carbonato o bicarbonato, EDTA, etc. Como portante para bacterias, segn los artculos de Francesca Cappitelli (2006): Se trata de un material en el cual, se debe encerrar la batera durante la formacin del gel. Se trata de un gel orgnico. - Hidrobiogel- 97: Segn su ficha: No se encuentran referencias. Como portante para bacterias, segn los estudios que se han hecho de este soportante con bacterias de Francesca Cappitelli (2006): se trata de un material en el cual se debe encerrar la batera durante la formacin del gel.

Francesca Cappitelli, Improved methodology for bioremoval of Historical stone artworks by use of sulphate-reducing bacteria. (2006):

15 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Se trata de un gel orgnico. El uso y tiempo de contacto del tratamiento se debe considerar en relacin a diversos factores, como son: La naturaleza de la materia tanto de la obra a intervenir como del material a eliminar. La composicin qumica tanto del material de la obra como de la materia a eliminar. El grosor de la materia a eliminar. La localizacin de dicha materia a eliminar (interior, exterior o sobre una zona importante de la obra) que quedara ubicada a travs de un mapa de daos. El clima de la zona y temperatura (convendra un estudio climtico y de las variaciones de temperatura tanto si es dentro o fuera, para poder prever cmo reaccionaran las bacterias). La uniformidad de la costra que se quiera eliminar. La contaminacin atmosfrica. Tambin depende de la concentracin de la biomasa. Del contacto con la superficie, por lo que es importante el portante.

Los tiempos suelen ser largos. Aunque los tiempos de un tratamiento se suelen evaluar para la eficacia del proceso biolgico. La aplicacin de los microorganismos puede ser: Aerosol. Empaco. Compresin. Cepillado. Pincel. Esponja. Hisopo.

El mtodo de aplicacin depende de: 16 Isabel Casanova Bevi El tipo de alteracin. El material sobre el que se aplica. La localizacin de las reas donde se aplica el tratamiento. El tamao de las mismas.

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

La actividad metablica de los organismos seleccionados (si son anaerbicos o aerbicos).

La estructura del material de la obra y su estado.

Se debe tener cuidado porque se puede provocar: La corrosin de los materiales como consecuencia de una acidificacin de la superficie despus de un tratamiento prolongado.

Por lo que se debera establecer una comisin tcnica para el uso en restauracin de dicha metodologa de trabajo. Se debera hacer una estricta supervisin de los procesos biolgicos durante el tratamiento. Se deberan de evitar los procesos metablicos indeseados. Se debe retirar cuidadosamente los residuos de los procesos biolgicos y microflora. Y se debera definir una estrategia apropiada respecto a la actuacin y proteccin de la obra. Metodologa de aplicacin: Tendremos que humedecer la zona donde aplicamos las bacterias. Tras lo cual se cubrir la zona con Tissue antes de cualquier aplicacin, que nos permitir un mejor retiro despus del tratamiento. Debera dar el mismo tiempo de contacto tanto a las muestras sobre obra real como las de laboratorio como en la muestra control (que no tenga sulfatos). Tendremos que asegurarnos que tienen ms o menos las mismas condiciones todas las pruebas. Si tras la aplicacin cubrimos sta con una pelcula de cloruro de polivinilo reduciremos la evaporacin indeseada del agua adems de reducir el oxgeno y mejorar la capacidad de la bacteria para quitar sulfatos. Debemos controlar el medio portante y las clulas viables a travs de un kit enzimtico. Tras el retiro de la superficie y con la superficie an mojada retiraremos el material residual, ya ablandado con un ligero cepillado.

17 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Metodologa de eliminacin de los mismos. El proceso de eliminacin de las bacterias tras su aplicacin sera: Un retiro mecnico suave. Seguido por un proceso de limpieza con agua desmineralizada o mejor estril. Tambin podran utilizarse biocidas o tensoactivos (si fuera necesario). Y se podra utilizar antibiticos para su eliminacin.

Tambin debemos tener cuidado con los posibles contratiempos, por una mala eliminacin de las mismas.

4.2.4. Ventajas y desventajas de las bacterias y enzimas:

Ventajas

Desventajas

Ninguno de los dos mtodos es txico Las enzimas necesitan tiempos ms cortos para el ser humano. de contacto pero a la hora de obtenerlas son ms caras que las bacterias (segn: Nos ahorra el uso de disolventes nocivos Biotechnology applied to cultural para el ser humano. heritage: biorestauration of frescoes using viable bacterial cells and enzymes, G. Son selectivos, a la hora de la Ranalli -ver Anexo I-). eliminacin de suciedades distintas. Las bacterias por el contrario son baratas Sencillos de eliminar tras su aplicacin. pero necesitan tiempos de contacto ms largos (segn: Biotechnology applied to Ms baratas de obtener que las enzimas cultural heritage: biorestauration of (segn: Biotechnology applied to cultural frescoes using viable bacterial cells and heritage: biorestauration of frescoes enzymes, G. Ranalli -ver Anexo I-). using viable bacterial cells and enzymes, G. Ranalli -ver Anexo I-). Al tratarse de medios acuosos debemos tener cuidado con la movilizacin de las sales de la superficie de la obra. Tambin deberemos tener cuidado con la aparicin de hongos (sobre todo con los tiempos de contacto largos). Tendremos que vigilar a las bacterias y enzimas que pueden reaccionar en los medios cidos.

18 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

4.3. Pseudomonas Las bacterias que vamos a utilizar para nuestra investigacin pertenecen al gnero Pseudomonas y encontramos las cepas de Ps. Stutzeri ya que, ha sido la utilizada en todos los estudios citados en el Anexo I. Es fcil su cultivo in vitro y ampliamente disponibles en nmero, por lo que ciertas cepas son excelentes para investigaciones cientficas. Se trata de una bacteria de crecimiento aerbico9 estricto aunque en algunas ocasiones puede utilizar nitratos como aceptadores de electrones. Pertenece a un gnero de bacilos10 rectos o ligeramente curvados, Gram negativos11, oxidasa12 positivos. No forman esporas y es comn la presencia de plsmidos. Tambin son hetertrofas en condiciones anxicas utilizando el sustrato orgnico como fuente de carbono. Con el reciente anlisis de secuencias del RNAr 16S se ha definido la taxonoma de muchas especies bacterianas y como resultado, el gnero Pseudomonas incluye algunas cepas clasificadas anteriormente dentro de las Chryseomonas y Flavimonas. Otras cepas clasificadas previamente en el gnero Pseudomonas, ahora son agrupadas en los gneros Burkholderia y Ralstonia. 4.3.1. Caractersticas: Los miembros de este gnero generalmente son mviles gracias a uno o ms flagelos polares que poseen. Son catalasas13 positivas y no forman esporas. Dentro de este gnero algunas son patgenas. Las especies de Pseudomonas son tpicamente oxidasa positivas, con ausencia de formacin de gas a partir de glucosa, son hemolticas (en agar sangre), prueba del indol negativas, rojo de metileno negativas y Voges Proskauer negativas.
Se denomina aerobios a los organismos que necesitan del oxgeno diatmico para vivir o a los procesos que lo necesitan para poder desarrollarse. 10 Los bacilos son bacterias que tienen forma de bastn, cuando se observan al microscopio. 11 En microbiologa, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que no se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram: de ah el nombre de "Gram-negativas" o tambin "gramnegativas". Esta caracterstica est ntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana. 12 Una oxidasa es una enzima que cataliza una reaccin de oxidacin/reduccin envolviendo oxgeno molecular (O2) como aceptor de electrones. En estas reacciones el oxgeno se reduce a agua (H2O) o a perxido de hidrgeno (H2O2). 13 La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua.
9

19 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Este gnero es uno de los ms proclives a la degradacin de compuestos orgnicos; esta condicin es la que nos interesa para nuestro estudio. 4.3.2. Clasificacin cientfica14: Reino: Bacteria. Filo: Proteobacteria. Clase: Gamma Proteobacteria. Orden: Pseudomonadales. Familia: Pseudomonadaceae. Gnero: Pseudomonas (Migula, 1894). Especies:

P. aeruginosa P. fluorescens P. fragi P. putida P. syringae P.denitrificans P.oleovorans P.phaseolica P.stutzeri P.pseudoalcaligenes P.mallei P.maltophilia P.acidovorans P.alcaligenes P.testosteroni P.vesicularis, etc

http://es.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas (13:21)19-septiembre-08

14

20 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

4.3.3. Hbitats: Se han aislado bacterias de este gnero tanto en suelos limpios como en suelos contaminados por productos biognicos y xenobiticos15. Tambin son microbiota predominante en la rizosfera16 y en la filosfera de plantas. Del mismo modo, se han aislado de ambientes acuticos, tanto de agua dulce como de aguas marinas. En general inocuas para el hombre tambin existen: patgenos oportunistas como P.aeruginosa; patgenos de animales y patgenos de plantas como P.syringae. La ubicuidad de las bacterias del gnero Pseudomonas y su capacidad para explotar una amplia variedad de nutrientes refleja un sistema de adaptacin al medio ambiente que no se encuentra en bacterias de otros gneros.

4.3.4. Pseudomona stutzeri: Microorganismo comn en diversos hbitats. Ha recibido una especial atencin debido a sus especiales capacidades metablicas como degradador de compuestos aromticos (Garca-Valds et al., 1988). Se han diseado mtodos moleculares que permiten la identificacin y el seguimiento de P. stutzeri en muestras naturales.

La identificacin de P. stutzeri se consigui utilizando cebadores especficos para amplificar el gen rDNA 16S seguido por el anlisis RFLP ("restriction frament length polymorphism") al tratar los productos de PCR con la endonucleasa BamHI. Por otra parte, se han utilizado mtodos moleculares de tipado basados en la amplificacin por PCR con cebadores para secuencias consenso derivadas de regiones invertidas repetidas palindrmicas altamente conservadas encontradas en enterobacterias (ERIC).

15

La palabra xenobitico deriva del griego "xeno" ("extrao") y "bio" ("vida"). Se aplica a los compuestos cuya estructura qumica en la naturaleza es poco frecuente o inexistente debido a que son compuestos sintetizados por el hombre en el laboratorio. La mayora han aparecido en el medio ambiente durante los ltimos 100 aos. 16 La rizosfera es una parte del suelo inmediata a las races donde tiene lugar una interaccin dinmica con los microorganismos. Las caractersticas qumicas y biolgicas de la rizosfera se manifiestan en una porcin de apenas 1 mm de espesor a partir de las races.

21 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Finalmente, se ha utilizado un mtodo de Western Blot y "fingerprinting" inmunolgico para la diferenciacin de las cepas de P. stutzeri. 4.3.5. Condiciones que influyen en su actividad metablica y porqu. El gnero demuestra una gran diversidad metablica, y consecuentemente son capaces de colonizar un amplio rango de nichos ecolgicos. Es fcil su cultivo in vitro y ampliamente disponibles en nmero, por lo que ciertas cepas son excelentes para investigaciones cientficas. Las cepas del gnero Pseudomonas son capaces de procesar, integrar y reaccionar a una amplia variedad de condiciones cambiantes en el medio ambiente, y muestran una alta capacidad de reaccin a seales fsico-qumicas y biolgicas. Se han descrito cepas capaces de adquirir resistencia a metales pesados, disolventes orgnicos y detergentes, lo cual les permite explotar una amplia gama de fuentes de carbono como nutrientes, as como colonizar ambientes y que difcilmente son colonizables por otros microorganismos. Por ello no es sorprendente que se considere a las bacterias del gnero Pseudomonas un paradigma de versatilidad metablica, y microorganismos claves en el reciclado de materia orgnica, en los compartimentos aerbicos de los ecosistemas, jugando, por tanto, un papel esencial en la mejora y el mantenimiento de la calidad medioambiental. Adems de su uso en biodegradacin las especies del gnero Pseudomonas se emplean en distintos procesos industriales, tales como la fabricacin de bioplsticos o en tcnicas de biocontrol. La posicin taxonmica de las distintas especies del gnero se encuentra sujeta a revisin. 4.3.6. Cultivo: Las Pseudomonas crecen en medios simples. En caldo crecen abundantemente formando un anillo y un sedimento de color verde azulado. En agar simple forman colonias brillantes, confluentes, de borde continuo y a veces ondulado con un centro opaco. Los pigmentos se difunde en el medio dndole tonalidad. Este pigmento tiene cualidades bactericidas sobre otras bacterias Gram positivas y Gram negativas. El medio de cultivo empleado para Ps. stutzeri segn bibliografa como base es: M9 (Mineral).

22 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

El Biofilm17 y su importancia: Definicin: Estructuras complejas de poblaciones heterogneas. Estas estructuras estn moldeadas por el medio fsico, fisiolgico y gentico en el cual se encuentran las poblaciones microbianas. Caractersticas del Biofilm: 1. Estado ms habitual de las bacterias en la naturaleza. Superficies como el lugar preferencial para el crecimiento. 2. Clulas adheridas a superficies. Embebidos en matriz polisacrido (producida por los propios microorganismos). Compuestos por constituyentes orgnicos e inorgnicos. 3. Se forman en mltiples etapas. Crecimiento estructurado. A menudo con arquitecturas complejas. 4. Colonias o comunidades normalmente mixtas. 5. Gradientes fsico-qumicos dentro de los biofilms maduros, resultan en un gran nmero de microambientes potenciales dentro de un rea muy pequea. 6. Presentan caractersticas fenotpicas diferentes que sus equivalentes planctnicos. 7. Muy resistentes a los antibiticos y desinfectantes. 8. Implican comunicacin clula a clula. 9. Biofilms maduros pueden contener alrededor de 1010 clulas/ml. Parte de las clulas se liberan y pasan al agua. Ventajas y desventajas del Biofilm: 1. Ambiente resguardado. 2. Proteccin frente a txicos y biocidas. 3. Interaccin entre microorganismos. 4. Mejor captacin de nutrientes. 5. Metabolismo ms activo. 6. Mayor crecimiento. 7. Posibilidad de intercambio de material gentico. 8. Intercambio de metabolitos.
17

Grupos de clulas (bacterias) normalmente en poblaciones mixtas (comunidades), que se adhieren a una superficie y forman una estructura en 3 dimensiones, unida por substancias polimricas extracelulares (matriz de polisacridos) producidas por ellos mismos.

23 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

5. Material y Mtodos.

5.1 Preparacin de las probetas: 10 losetas color crema de Maylica de 10x10. Balanza digital Cmara digital compacta (BENQ, DC E300, 4x Digital zoom). Agua Destilada. Cola Zurigo (cola fuerte de carpintero) Eye-one (medicin del blanco). Tabla de yeso preparada con motero de cal. Paletina. Etiquetas. Regla. Calculadora. Cinta de reserva.

Preparacin de la cola para su aplicacin: Hidratacin de la cola (1 parte de cola por 3 de agua destilada) en la proporcin empleada para efectuar arranques por medio de strappo. Y a esta proporcin le aadimos medio litro ms de agua destilada. La cantidad de cola para hidratar es de 925 g con 276 g de agua destilada ms 500 ml para conseguir la textura de trabajo, consiguindose una cola de trabajo al 10%, con un pH = 7.

24 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

La tabla de yeso con mortero de cal: Medidas: 59x49cm

59 cm

49 cm Divisin de la tabla de yeso con mortero de cal:

1 5 9 13

2 6 10 14

3 7 11 15 19

4 8 12 16 20

17 18

25 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Tamao de las cuadrculas: Las 4-8-12-16-20. Miden 10x127cm El resto mide 10x10 cm Aplicacin de la cola: La cola se ha aplicado mediante paletina sobre la superficie. Antes y despus de cada aplicacin se pesa la cola en el balanza digital, de esta manera podremos saber la proporcin de cola aplicada por centmetro cuadro (cm2). Hemos aplicado en cada una de las 20 porciones ~ 012g por cm2.

Las losetas de maylica crema:

10 losetas Medidas: 10x10cm Numeradas por el reverso

26 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Medicin de blanco de la tabla (Eye-one) Se ha empleado el espectrofotmetro Eye-one para medir el blanco de las losetas que utilizaremos para las mismas prcticas en el laboratorio. Los datos obtenidos antes de la aplicacin de la cola son:
LGOROWLENGTH 01 CREATED "11/7/2008" # Time: 11:47 INSTRUMENTATION "eye-one" MEASUREMENT_SOURCE "Illumination=D50 KEYWORD "SampleID" KEYWORD "SampleName" BEGIN_DATA_FORMAT SampleID SampleName XYZ_X XYZ_Y END_DATA_FORMAT NUMBER_OF_SETS 2 BEGIN_DATA 1 A1 89.17 92.42 73.82 2 B1 57.80 57.05 35.88 END_DATA

ObserverAngle=2

WhiteBase=Automatic

Filter=No"

XYZ_Z

Lab_L

Lab_a

Lab_b

96.99 80.21

0.11 6.92

2.08 14.34

Estos datos nos permitirn apreciar los cambios de tonalidad real de nuestras probetas. Aplicacin de la cola: A paletina. Antes y despus de cada aplicacin, pesado de la cola en el balanza digital. De esta manera podremos saber la proporcin de cola aplicada por centmetro cuadro (cm2). Hemos aplicado en cada una de las partes (en las 10 losetas): ~ 013g por cm2

27 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Medicin de blanco de la tabla (Eye-one) Los datos obtenidos despus de la aplicacin de la cola son:
LGOROWLENGTH 01 CREATED "11/7/2008" # Time: 11:52 INSTRUMENTATION "eye-one" MEASUREMENT_SOURCE "Illumination=D50 KEYWORD "SampleID" KEYWORD "SampleName" BEGIN_DATA_FORMAT SampleID SampleName XYZ_X XYZ_Y END_DATA_FORMAT NUMBER_OF_SETS 2 BEGIN_DATA 1 A1 76.26 79.27 57.54 2 B1 50.29 48.81 26.97 END_DATA

ObserverAngle=2

WhiteBase=Automatic

Filter=No"

XYZ_Z

Lab_L

Lab_a

Lab_b

91.35 75.34

-0.33 8.80

7.72 19.70

De todos estos datos, que aparecen en las tablas del Eye.one los que nos interesan son, los 3 ltimos donde observamos la diferencia entre el antes y el despus de la aplicacin de la cola:
Antes de la cola Lab_L 96.99 80.21 Lab_a 0.11 6.92 Lab_b 2.08 14.34 Despus de la cola Lab_L 91.35 75.34 Lab_a -0.33 8.80 Lab_b 7.72 19.70

Una vez que ya hemos preparado las probetas pasamos a realizar las experiencias con bacterias en el Laboratorio de Microbiologa del Departamento de Biotecnologa de la Escuela de Ingenieros Agrnomos de la Universidad Politcnica de Valencia.

28 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

5.2 Ensayos microbiolgicos En este ensayo lo que se pretende es: El cultivo en un medio lquido para obtener masa celular. Aplicacin a la probeta. Retirada de los empacos y evaluacin de los resultados.

- Materiales: Las probetas: 10 losetas con cola aplicada. Tabla de mortero de cal con cola aplicada Los portantes: Sepiolita y papel japons. Algodn. Agar. Las bacterias empleadas: DSMZ 5190 Pseudomonas stutzeri CECT 4899 Pseudomonas stutzeri

Medios de cultivo: Medios lquidos: Medio base mineral M9 Caldo de agua marina Caldo Comn Medios slido: Agar nutritivo y adicionado con cola. Agar Plate Count. Otros materiales de laboratorio: Matraz. Placas Petri. Agitador orbital. Centrifuga Autoclave. Tubos estriles desechables con tapa de rosca, etc 29 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Otros materiales necesarios para la prctica: Agua estril Esptula. Bisturi. Pinzas. Alcohol, etc

- Obtencin de las bacterias: Se adquieren las dos cepas de Ps. stuzeri. Una obtenida a travs de la Coleccin de Cultivos Tipo Alemana DSMZ 5190, y que es una de las estudiadas en la bibliografa consultada18. La otra cepa fue obtenida a travs de la Coleccin Espaola de Cultivo Tipo; se trata de la cepa CECT 4899 la cual, aun no est estudiada en este campo. Las bacterias llegan al laboratorio liofilizadas19 por lo cual tienen que rehidratarse para su activacin y para ello, primero se introducen en un medio lquido y despus en uno slido. En la primera fase el medio lquido empleado es caldo comn para la cepa DSMZ 5190 y para la cepa CECT 4899 se emple caldo agua marina. Y el segundo paso es resembrarlas en medio slido y para ello se emple el agar nutritivo donde se observaba crecimiento y agar adicionado con cola donde la bacteria no creci hasta una segunda resiembra (el porcentaje era de un 1% de cola y un 2% de agar). Una vez que se observ crecimiento en el medio slido se pas a inocular las cepas en el medio mineral M9 con cola, y para observar el crecimiento se ensayaron tres concentraciones del medio M9 con la cola. El medio Mineral M9 empleado se compone de (g/l): Na2 PO4: K H2 PO4: NH4 Cl: NaCl: 6 3 1 05

Process For Bio-Cleaning of The surfaces of objects of various chemical Natures and Building. La liofilizacin es un proceso en el que congela el alimento y una vez congelado se introduce en una cmara de vaco para que se separe el agua por sublimacin. Mediante diversos ciclos de congelacinevaporacin se consigue eliminar prcticamente la totalidad del agua libre contenida en el producto original.
19

18

30 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Se trata de un medio tan slo provisto de sales que obliga a la bacteria a activar la capacidad enzimtica que nos interesa ya que, su nica fuente de carbono es a travs de la cola que le hemos aadido al medio M9. Se ensayaron tres concentraciones para observar el crecimiento de la bacteria y ver cul de los tres porcentajes de cola, era el ms propicio para el desarrollo de sta. Los porcentajes de cola en medio mineral M9 fueron: Al 05% de cola Al 1% de cola Al 5% de cola Se inocularon matraces de 300 ml de medio lquido con 3 ml de una suspensin bacteriana, obtenida del crecimiento en placa resuspendido en un tubo de agua estril. Estos matraces se incubaron a 28 C en agitador orbital a 130 r.pm. durante 24 horas. Se observ crecimiento en todas las concentraciones de cola ensayadas y se escogi la concentracin del 1% por ser la utilizada en la bibliografa consultada. Para la obtencin de masa celular se inocularon tres matraces de 300 ml de medio mineral M9 adicionado con el 1% de cola de cada una de las cepas, CECT 4899 y DSMZ 5190. El cultivo se incub a 28 C durante 24 horas en agitacin orbital de 130 r.p.m. Las clulas bacterianas de los 900 ml del cultivo se concentraron mediante centrifugacin a 4200 r.p.m. durante 15 minutos. Las bacterias concentradas se resuspendieron en 500 ml de medio mineral M9, siendo sta la solucin bacteriana utilizada para los ensayos microbiolgicos.

- Diseo de la prctica:

Sepiolita Agar Algodn

31 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Leyenda:

Agua slo con los portantes Cepa CECT 4899 Cepa DSMZ 5190
Para este ensayo se han dispuesto tres bandejas una por cada cepa de la bacteria.

Una para la cepa DSMZ 5190. Otra para la cepa CECT 4899. Y otra en la que slo hemos puesto los portantes con agua destilada estril como control.

Para la Cepa DSMZ 5190

Para la Cepa CECT 4899

CONTROL

32 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

- Portantes. Preparacin y aplicacin.

Agar: Se prepara agar al 2% a doble concentracin y se esteriliza a 121 C durante 15 minutos, una vez atemperado a 45 C se aade igual volumen de solucin bacteriana en M9 obtenindose agar al 2% para su aplicacin sobre la probeta. El modo de aplicacin ha sido por vertido de 50 ml en las probetas. Dejndolo secar hasta que solidificara.

Enfriamiento del Agar hasta obtener la temperatura de 45C

Mezclando el Agar con la bacteria

Vertido del Agar con la bacteria sobre la probeta

Vertido del Agar con la bacteria sobre la probeta

33 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Sepiolita: Se utiliz la solucin bacteriana para humectar la sepiolita hasta conseguir una pasta homognea de textura apta para la aplicacin, por cada 40g de sepiolita se necesitaron 70 ml del medio M9 con la bacteria. Modo de aplicacin: Para esta aplicacin se ha seguido la misma metodologa que se utiliza para su aplicacin sobre obra mural. Se ha aplicado una primera capa de papel japons (la cual nos ayudar despus al retiro de la sepiolita de la superficie) y sobre sta se aplica la sepiolita. Y una vez aplicada se vuelve a cubrir con otra capa de papel japons que mantendr el portante hmedo y evitar la excesiva evaporacin del agua.

Detalle de la aplicacin

Una vez aplicada

34 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Algodn: El algodn se cort a la medida de cada loseta y se aplic sobre la superficie dos capas de algodn. Modo de aplicacin: Sobres las dos capas de algodn se vierte la solucin bacteriana. Para cada empaco de algodn se necesit 100 ml del medio M9 con la bacteria. ste fue el empaco empleado tambin para la probeta del mortero de cal.

Vertido del medio en las losetas

Vertido del medio en las losetas

Vertido del medio en el mortero de cal

Vertido del medio en el mortero de cal

En el mortero de cal, se colocaron dos empacos de algodn para cada cepa bacteriana ensayada y dos empacos con agua destilada estril. Los empacos con bacterias se inocularon, uno con 100 ml de la solucin bacteriana en M9 y el otro se inocula con 100 de medio M9 con 1 % de cola crecido. Una vez aplicados los portantes se cubrieron las bandejas con bolsas de plstico y la tabla de mortero de cal para evitar la evaporacin rpida del agua. La tabla de mortero se incuba a temperatura ambiente.

35 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Las losetas se incubaron en estufa a 28 C durante dos das, revisndolas peridicamente para comprobar que los portantes seguan hmedos y si no fuera as, volver a humectarlos.

Estufa de hongos

Estufa de hongos

En la primera revisin se observ qu probetas inoculadas con bacterias no necesitaban ser humectadas mientras que las probetas control de sepiolita presentaban un aspecto ms reseco y agrietado por lo que se procedi a humectarla con agua destilada estril.

36 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Humectacin de la sepiolita en la bandeja control

Detalle del empaco de sepiolita

Se ensayaron dos tiempos de contacto de los portantes con las probetas. Transcurridos dos das, se procedi a retirar la mitad de todos los empacos para ver los resultados del ensayo a las 48 horas y la segunda parte se retir 3 das ms tarde.

Las bandejas con los portantes transcurridos dos das Control

Las bandejas con los portantes transcurridos dos das CECT 4899

Las bandejas con los portantes transcurridos dos das DSMZ 5190

37 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Fotografas del proceso de retirada de la mitad de los portantes (transcurridos dos das) De las losetas.

Retirada del agar

Retirada del agar

Retirada de la sepiolita

Retirada de la sepiolita

Retirada del algodn

Retirada del algodn

38 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Foto de las bandejas retirado la mitad del portante CECT 4899

Foto de las bandejas retirado la mitad del portante DSMZ 5190

Foto de las bandejas retirado la mitad del portante

Fotografas del proceso de la retirada de la mitad de los portantes (transcurridos dos das) De la tabla del mortero de cal.

La tabla antes del retiro de la mitad del portante

Retiro de la mitad del portante

Detalle tras el retiro del portante

Detalle tras el retiro del portante

39 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

El material retirado de cada una de las mitades de los portantes, fue introducido en recipientes estriles, para realizar un recuento de clulas viables y comprobar, de esta manera, cuantas bacterias estn vivas transcurridos dos das.

Cepa DSMZ 5190

Cepa CECT 4899

Tras esto se volvieron a introducir las bandejas, en la estufa a 28C. No se han limpiado las zonas donde se retiraron los empacos para poder comprobar si quedaban restos de cola. Transcurridos los cinco das pasamos a retirar el resto del empaco con la bacteria. La retirada se realiz de igual modo que la anterior.

Fotografas del proceso de retirada de la otra mitad de los portantes (transcurridos cinco das) De las losas

Detalle retiro empaco de sepiolita

Detalle retiro del empaco de agar

Detalle del retiro del empaco de Algodn

40 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Fotografas del proceso de retirada de la otra mitad de los portantes (transcurridos cinco das) De la tabla del mortero de cal

Detalle del retiro del empaco de algodn

Detalle del retiro del empaco de algodn

Detalle del retiro del empaco de algodn

Detalle del retiro del empaco de algodn

41 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Parte prctica con las enzimas - Materiales: Preparado enzimtico Mix Enzimi. Se trata de un kit compuesto por tres elementos, que son: La enzima. La sustancia tampn. La saliva artificial.

Arbocel BWW 40. Una de las losetas. - Realizacin de la prctica: En primer lugar se ha dividido la loseta en cuatro partes.

42 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

A cada una de estas porciones se dieron tiempos de contactos distintos. Los tiempos fueron:

Para la primera 20 minutos. Para la segunda 40 minutos. Para la tercera 60 minutos. Para la cuarta 80 minutos.

1 3

2 4

Para mantener la humedad de la enzima se aplic sobre sta Arbocel BWW 40. Y a medida que se va retirando la encima de la superficie se lava la zona con la saliva artificial. Durante este proceso no se emple ningn objeto metlico para evitar los iones metlicos, ya que pueden influir en la actividad enzimtica.

43 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Fotografas de la aplicacin de las enzimas

Aplicacin de la enzima

Medicin del Ph

Arbocel BWW 40

Empaco de arbocel con la enzima

44 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

6. Resultados. LOSETAS Bacterias: De los empacos retirados a las 48 horas de su aplicacin se realizaron recuentos en placa de clulas viables mesfilas en agar plate count.

Resultado de los recuentos (n de clulas viables/gramo de empaco) Portante Agar Cepa CECT 4899 14106 Cepa DSMZ 5190 10107

Sepiolita

>30108

2108

Algodn

86107

>30108

A la vista de los resultados de los recuentos podemos deducir que la carga microbiana original de los empacos de sepiolita y algodn se ha desarrollado durante la incubacin dando como resultado recuentos ms altos que los obtenidos en el agar estril, que slo estaba inoculado por las cepas de pseudomonas. Por lo tanto slo resultan fiables, en cuanto a la viabilidad de las pseudomonas en las probetas, los empacos de agar. A los cinco das de actuacin se realizan recuentos de viables mesfilos en placa de los dos empacos de agar siendo los resultados mayores a 3.0 108 clulas viables/gr de empaco. Esto demuestra que la carga de pseudomonas no slo se ha mantenido viva en el empaco en contacto con la cola sino que ha aumentado considerablemente su numero, lo que nos lleva a pensar que se han adaptado al medio y a la utilizacin del sustrato como nutriente. Despus el contacto durante 48 horas los resultados fueron satisfactorios en las losetas, ya que pareca haberse retirado la gran mayora de la cola aplicada sobre todo en las que se aplic la cepa CECT 4899. En las que aplic la cepa DSMZ 5190 se poda observar que aun quedaban restos de cola.

45 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Portantes (dos das): El algodn no deja restos en superficie y parece retirar la gran mayora de la cola. Adems de mantener la humedad que la bacteria necesita. La sepiolita tampoco deja restos aunque no mantiene la humedad que necesita la bacteria y se debe controlar ms. Y el agar, no deja restos, no mancha la superficie, es sencillo de quitar y mantiene la humedad que la bacteria necesita para que acte sobre la cola.

- Resultados a los cinco das: Despus de trascurridos cinco das de contacto los resultados fueron ms satisfactorios, ya que pareca haberse retirado la totalidad de la cola aplicada tanto con la cepa CECT 4899 como con la cepa DSMZ 5190. Aunque tambin podemos apreciar cierta coloracin de las losetas sobre todo donde se aplic el portante de sepiolita. Portantes (cinco das): El algodn en las losetas, no deja resto en superficie, parece retirar la gran mayora de la cola. Adems mantiene la humedad que la bacteria necesita. La sepiolita tampoco deja restos, aunque sigue sin mantener la humedad que necesita la bacteria por lo que se debe controlar ms. Parece colorear la superficie. Y el agar, no deja restos, no mancha la superficie, es sencillo de quitar y mantiene la humedad que la bacteria necesita para que acte sobre la cola.

El control realizado con agua destilada estril removi la cola, dejndola reblandecida y eliminando parte de ella al eliminar el empaco, sin embargo a los cinco das los empacos de sepiolita y agar haban sido colonizados por hongos filamentosos que no haban aparecido en los empacos inoculados por pseudomonas. Al retirar los empacos quedaron restos de algodn adheridos a la superficie y en el caso de la sepiolita manch la zona tratada.

TABLA DE CAL En la tabla de mortero de cal s que se not cierta diferencia entre las cepas obteniendo un mejor resultado en las zonas donde se aplic la cepa CECT 4899. En los empacos de algodn inoculado con medio de 1 % de cola crecido, al retirar los empacos a los 5 das pareca llevarse parte del mortero adems de dejar restos en superficie, aunque lo suficientemente reblandecida para retirarla con una accin mecnica leve.

46 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Fotografas tras la retirada de los empacos con bacterias

Losetas Detalle de una de la losetas

Detalle de una de la losetas

Restos de la cola, empaco de la cepa Alemana

Restos de la cola, empaco de la cepa alemana

Zona de la cepa espaola, parece no quedar restos

47 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Observacin de las losetas con luz ultravioleta.

En estas fotografas, podemos apreciar una cierta fluorescencia de las bacterias sobre todo de la cepa CECT 4899 (espaola)

48 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Enzimas: Tras realizar la prctica con las enzimas se observ que a mayor tiempo de contacto de las enzimas con la superficie, mayor era su poder de limpieza. Aunque no se consigue la eliminacin por completo de los retos de cola. A menos tiempo de contacto los retos de cola se quedan en superficie y son fcilmente visibles. Y a mayor tiempo de contacto los retos de cola que quedan se han introducido en la superficie de la probeta, porque ha tenido una mayor disolucin. Por lo que los resultados obtenidos de la experimentacin con las enzimas siguen siendo insatisfactorios.

Fotografas del proceso limpieza con enzimas tras su retirada

Fotografa de la loseta tras la retirada de la enzima

49 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

7. Conclusiones

Como ya hemos dicho que a los sistemas de limpieza se les pide, y sobre todo a los acuosos, que sean selectivos a la hora de eliminar la suciedad de la obra y adems que tengan una accin localizada, podemos concluir que hay elementos ajenos a la obra, sustratos a eliminar, que son difcilmente eliminables con cualquiera de los mtodos expuestos. Las bacterias segn las investigaciones, seran un buen sistema para la eliminacin de colas animales envejecidas, nitratos y sulfatos, nada fciles de eliminar con los mtodos tradicionales, por ello el uso de bacterias nos facilitara la eliminacin de tales sustancias. La Pseudomona, que es la bacteria sobre la que trata este pequeo estudio, nos facilita la eliminacin de colas animales, sin daar la superficie mural, ni la ptina de la misma. De hecho en la bibliografa consultada el empleo de estas bacterias les ha dado muy buen resultado. Se presentan como una alternativa y rival a los disolventes tan nocivos para el ser humano, ya que se trata de una sustancia no txica. La desventaja que tiene este tratamiento sera los tiempos de contacto con la superficie de la obra, ya que se trata de tiempos ms largos que los tratamientos tradicionales. En este estudio el portante que mejor resultado ha dado ha sido el agar, ya que no ha dejado manchas ni restos sobre la superficie, mantiene la humedad y esto evita tener que controlar frecuentemente el empaco para aportarle humedad manteniendo de este modo las condiciones ms adecuadas para la bacteria. Adems de ser muy sencillo de retirar de la superficie. Y a la inversa, el que peor resultados ha dado es la sepiolita, llegando a colorear la superficie de la probeta transcurridos cinco das del empaco. Adems de ser el empaco sobre el que ms control debemos ejercer, pues es el que antes pierde la humedad. Los empacos de algodn son los que han dado un resultado intermedio ya que mantienen la humedad, lo que no evita el continuo control, aunque por otro lado deja algunos restos en superficie, aunque fcilmente eliminables. Sin llegar a establecer las condiciones ms apropiadas para nuestras bacterias, los resultados han sido bastante positivos. En el futuro se pueden hacer estudios para averiguar las condiciones ms apropiadas para potenciar su accin selectiva. Esto tan slo, ha sido un pequeo acercamiento a las grandes posibilidades que aportan las bacterias dentro del campo de la Restauracin.

50 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

8. Bibliografa. Libros: CREMONESI Paolo; Luso degli enzimi nella pulitura di opere policrome; pp. 160- Il prato.

Artculos: RANALLI, Giancarlo; MATTEINI, Mauro; TOSINI, Isetta; ZANARDINI, Elisabetta; and SORLINI, Claudia. Bioremediation of Cultural Heritage: Renoval of Sulphates, Nitrates and Organic Substances. CAPPITELLI, Francesca; ZANARDINI, Elisabetta; RANALLI, Giancarlo; MELLO, Emilio; DANFFONCHIO, Daniele, and SORLINI, Claudia. Improved methodology for bioremoval of Historical stone artworks by use of sulphatereducing bacteria. Appllied and Enviromental Microbiology, May 2006, p. 37333737 CAPPITELLI, Francesca; TONIOLO, Lucia; SANSONETTI, Antonio; GULOTTA, Davide; RANALLI, Giancarlo; ZANARDINI, Elisabetta; and SORLINI Claudia. Advantages of using microbial technology over tradicional chemical tecnology in renoval of black crust from stone surface of historical monuments. Appllied and Enviromental Microbiology, Sept. 2007, p. 56715675. ATLAS, R. M.; CHOWDHURY, A. N.; and GAURY, L. K.; 1988; Microbial Clacification of gypsum-rock and sulphated marble. GAURI, K. L., and CHOWDHURY, A. N. Experimental studies on conversion of gypsum to calcite by microbes. 1988. ANTONIOLI, Paolo; ZAPPAROLI, Giacomo; ABBRUSCATO, Pamela; SORLINI, Caludia; RANALLI Giancarlo; and RITHETTI. Pier Giorgio. Artloving bugs: Te resurrection of Spinello Aretino from Pisas cementery. Proteomics 5, 2005, pp.2453-2459. RANALLI, G.; ALFANO, G.; BELLI, C.; LUSTRATO, G.; COLOMBINI, M.P.; BONADURE, I.; ZANARDINI, E.; ABBRUSCATO, P.; CAPPITELLI F.; and SORLINI, C.; Biotechnology applied to cultural heritage: biorestoration of frescoes using viable bacterias cells an enzymes. Journal of Applied Microbiology 2005, pp. 98, 73-83. RANALLI, Giancarlo; ZANARDINI, Elisabetta; CAPPITELLI, Francesca; and SORLINI Claudia. Impregno di microorganismo nella biopolitura di affreschi Il Camposanto de Pisa: Un Progetto di Restauro Intagrato; 6- 7- 8 Marzo 2008

51 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Webs: Art12: http://www.scielo.cl/pdf/rcp/v46n1/art12.pdf 10:28 (16- septiembre-08) Wikipedia(Ingles) http://en.wikipedia.org/wiki/Pseudomonas_stutzeri 10:32 (16- septiembre-08) Sobre la pseudomonas (ingles) http://www.britannica.com/EBchecked/topic/481323/Pseudomonas-stutzeri 10:33 (16- septiembre-08) http://www.thelabrat.com/restriction/sources/Pseudomonasstutzeri.shtml 10:35 (16- septiembre-08) http://www.egr.msu.edu/schoolcraft/strainkc.htm 10:36 (16- septiembre-08) Artculos sobre estas bacterias http://mic.sgmjournals.org/cgi/content/abstract/144/2/569 10:37 (16- septiembre-08) Nitratos Wikipedia http://es.wikipedia.org/wiki/Nitrato 10:39 (16- septiembre-08) SEM27 http://www.semicro.es/Actualidad/PDFS/SEM27_18.pdf 10:43 (16- septiembre-08) 07-Biopelculas microbianas (DEFINICION DE BIO FILM) http://www.tecspar.org/Documentos/07-Biopeliculasmicrobianas.pdf 10:50 (16- septiembre-08) Boletn del Centro de Investigaciones Biolgicas

ISSN 0375-538X versin impresa

http://www.serbi.luz.edu.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375538X2005004000003&lng=es&nrm=iso 10:56 (16- septiembre-08) MICROBIOLOGIA, 2 http://www.cibernetia.com/tesis_es/CIENCIAS_DE_LA_VIDA/MICROBIOLOG IA/2 13:35 (18- septiembre-08) MTODOS MOLECULARES DE ESTUDIO DE LAS POBLACIONES DE PSEUDOMONAS STUTZERI. http://www.cibernetia.com/tesis_es/CIENCIAS_DE_LA_VIDA/MICROBIOLOG IA/2 52 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

13:35 (18- septiembre-08)

53 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

9. Agradecimientos

Al Departamento de Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales de la Universidad Politcnica de Valencia. A mis tutores por darme la oportunidad de realizar este trabajo tan distinto a lo que estamos acostumbrados. A mis compaeras y amigas por haberme apoyado en mis momentos ms bajos. A mis padres porque sin ellos no podra haber llegado hasta aqu.

54 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Anexo I Artculos consultados

55 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Autores Giancarlo Ranalli, Mauro Matteini, Isetta Tosini, Elisabetta Zanardini, and Claudia Sorlini

Titulo del Articulo Bioremediation of Cultural Heritage: Renoval of Sulphates, Nitrates and Organic Substances.

Ao

Investigacin realizada
Desarrollo de un sistema mltiple de tratamiento para el retiro biolgico de sulfatos, nitratos y material orgnicos a travs de la utilizacin y seleccin de bacterias. Dicho estudio consisti en la investigacin de microorganismos con una alta capacidad de reduccin de sulfatos, de desnitrificacin y biodegradacin de materiales orgnicos. Bacterias empleadas en la investigacin por su capacidad desnitrificacnte: Pseudomona stutzeri (RZ94). Pseudomona stutzeri (GB94). La bacteria empleada para la capacidad de biodegradacin fue: Pseudomona (A29). Y las utilizadas para la reduccin de sulfatos fueron: Desulfovibrio vulgaris. D. Desulfuricans. Tambien se realizo un estudio entre diferentes portantes para ver cual era el mejor Biofilm para las bacterias. Se estudiaron: Sepiolita. Hydrobiogel 97 Las bacterias utilizadas en esta investigacin son las bacterias reductoras de sulfatos (BRS) para el retiro de costras negras. Las bacterias con las que se realizo esta investigacin fuero: Desulfovibrio vulgaris subps. Vulgaris ATCC29579. En este estudio se avanzo evitando la precipitacin del sulfuro de hierro a travs de un filtrado del medio que quedo desprovisto del mismo. Tambin se realizaron un estudio con tres portantes para ver cual era el Biofilm ms apropiado. Dichos portantes fueron: Sepiolita Hydrobiogel-97 Carbogel. Quedando demostrado que el Carbogel es el que mantiene las condiciones mas apropiadas

Francesca Cappitelli, Elisabetta Zanardini, Giancarlo Ranalli, Emilio Mello, Daniele Danffonchio, and Claudia Sorlini.

Improved methodology for bioremoval of Historical stone artworks by use of sulphatereducing bacteria.

2006

Autores Francesca Cappitelli, Lucia Toniolo, Antonio Sansonetti, Davide Gulotta, Giancarlo 56

Titulo del Articulo Advantages of using microbial technology over tradicional chemical tecnology in renoval of black crust from stone

Ao 2007

Investigacin realizada
En este artculo se realizo una comparativa entre dos mtodos de limpieza para el retiro de la llamada corteza negra de los monumentos. El mtodo tradicional empleado en el estudio fue el de EDTA de carbonato de amonio que fue comparado con el mtodo biolgico en el cual se emplearon BRS.

Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Ranalli, Elisabetta surface of Zanardini, and monuments Claudia Sorlini.

historical

Atlas, R. M., A. N. Microbial Clacification of Chowdhury, and L. gypsum-rock and K. Gaury sulphated marble.

1988

Gauri, K. L., and A. Experimental studies on N. Chowdhury. conversion of gypsum to calcite by microbes.

1988

Webster, A., and E.

Bioremediation of weathered-building stone surface.

2006

Gauri, L.K., L. Removal of sulphatesParks, J. Jaynes, and crust from marble using R. Atlas. sulphate-reducing bacteria.

1992

Las bacterias RS utilizadas fueron: D. vulgaris subps. Vulgaris ATCC 29579 Dicha bacteria fue suspendida en un medio de almacenamiento intermedio de fosfato que contena lactato, como donante de electrones. Esto evita la colonizacin de microorganismos subsecuentes al uso de dichas bacterias. Propusieron el uso de bacterias reductoras de sulfatos(BRS) en particular: Desulfovibrio. Desulfuricans Y segn sus estudios decan que dichas bacterias podan transformar el yeso. Por lo que sugirieron que esto era tanto un tratamiento de limpieza como conservativo. Tambien sugirieron que el uso de BRS era tanto un tratamiento de limpieza como conservativo. Y se observo la formacin de carbonatos nuevo lo que implicaba que tambin poda ser til para la consolidacin. Se observo que los carbonatos nuevos eran: - Menos solubles. - Eran ms resistentes a la accin mecnica. Se mejoro el sistema de envi de las bacterias reductoras de sulfatos (BRS) evitando la precipitacin del sulfato. Utilizando la especie: D. vulgaris subps. Vulgaris ATCC 29579 Aunque en este estudio se dice aun que las ventajas y desventajas de este mtodo quedan por probar. En este estudio fue la primera vez que se utilizaron las bacterias reductoras de sulfatos (BRS) para la eliminacin de la llamada corteza negra. Y durante su utilizacin en este estudio de puso al descubierto que era necesario antes de su utilizacin la consolidacin de la pieza. Ya que, este mtodo se utiliza por inmersin. Y debido quedaron al descubierto tambin dos desventajas: - La pieza a trata deba de ser de pequeo tamao. - Y que era importante la previa consolidacin de la pieza.

Autores Giancarlo Ranalli, Elisabetta Zanardini, Francesca Cappitelli, and Claudia Sorlini

Titulo del Articulo Impregno di microorganismo nella biopolitura di affreschi, Il Camposanto de Pisa: Un Progetto di Restauro Intagrato.

Ao 2008

Investigacin realizada
Se realizo un proyecto en el cual se estudiaron bacterias y se utilizaron bacterias para la eliminacin de cola animal envejecida. Ya que, los mtodos tradicionales utilizados para la eliminacin de dichas colas no funcionaban de ah que se buscara un mtodo alternativo menos agresivo con la obras de arte.

Como mtodo mejorado en este estudio se empleo como portante de

57 Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Ranalli, G., Chiavarini, Guidetti, Marsala, Matteini, Zanardini, and Sorlini.

M. V. F. M. E. C.

The use of micro organisms from the removal sulphates on artisties stoneworks.

1997

las bacterias BRS la sepiolita por su cualidad de inorgnica. Se utilizaron para el estudio tres tipos de bacterias reductoras de sulfatos(BRS) que fueron: - D. Desulfuricans ATCC13541 y ATCC 29577. - D. vulgaris subps. Vulgaris ATCC 29579. Esta ltima BRS demostr ser la que tenia las mejores cualidades para el retiro de sulfatos incluso bajo condiciones de tensin baja. En este estudio se observo la neo formacin de carbonatos y se sugiri el uso de varios tipos de bacterias para esto. Las bacterias sugeridas por el estudio fueron: - Micrococo. - Bacilo.

Tiano, P., Biagiotti, and Mastromeni.

L. Bacterial bio-mediated G. calcite precipitation for monumental stone conservation: methods of evaluation. Conservation of ornamental stone by Myxococcus Xantus indice carbonate biomineralization.

1999

RodrguezNavarro, C., M. Rodrguez-Gallego, K. B. Chekroun, and M.T. GonzlezMuoz.

2003

Se sugiere la idea del uso del Myxococcus Xantus para inducir la mineralizacin del carbonato. Tambin se observo un crecimiento negativo de microorganismos al evitarse la presencia de alimento orgnico.

Tiano, P., E. Biomedited reinforcement Cantisani, I. of weathered calcareous Sutherland, and J. stone. M. Pager.

2006

Se reconoce la formacin de una matriz orgnica producida por las bacterias. Tambin recomiendan que durante los estudios de dichas bacterias se haga un seguimiento de las enzimas responsables de esto. Al que las bacterias que son capaces de esto.

Autores Paolo Antonioli, Giacomo Zapparoli, Pamela Abbruscato, Caludia Sorlini, Giancarlo Ranalli and Pier Giorgio Rithetti.

Titulo del Articulo Art-loving bugs: Te resurrection of Spinello Aretino from Pisas cementery.

Ao 2005

Investigacin realizada
Se describe la metodologa empleada para establecer las mejores condiciones de las bacterias mejorando de este modo la eficacia de esta en el tratamiento. Tambin exponen que usando bacterias viables es mucho mas bajo que otros mtodos convencionales.

G. Ranalli, G. Alfano, C. Belli, G. Lustrato, M.P. Colombini, I. Bonadure, E. 58

Biotechnology applied to cultural heritage: biorestoration of frescoes using viable bacterias cells an

20032004

Se demostr la eficacia de las bacterias Stuzari para la retirada de las gasas que cubran las pinturas de Spinello ya que, la bacteria era capaz de digerir

Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Zanardini, P. enzymes. Abbruscato, F. Cappitelli and C. Sorlini.

completamente el pegamento envejecido.

Otros artculos, ha los que se hacen referencias en los textos anteriores, en relacin al uso de bacterias y sus posibilidades en el campo de la Restauracin. Autores Krumbein y Krumbein y Giele Ao (1979) (1979) Investigacin realizada
Estudiaron la deposicin de carbonatos causado por el crecimiento y la actividad metablica de los estromatolitos del desierto que producirn la interceptacin y precipitacin del sedimento. Comenta la posibilidad del uso de microorganismos desnitrificantes. Y la importancia de la pruebas preelimnales para una buena identificacin de las condiciones de vida de las bacterias( Ph, medio de cultivo, condiciones(anaerbica o aerbica), etc)

Gabrielli

(1981)

Knowles,

(1982)

Se habla de la Pseudomona y que en condiciones anaerbicas pueden reducir los nitratos dando lugar a productos gaseosos tales como el oxido nitroso y el nitrgeno. Determinan el grado de agotamiento del sulfuro en una solucin de Desulfovibrio (BRS) experimentado en laboratorio. Optimizaron el medio microbiano para evitar la precipitacin negra del hierro y mejoraron su funcin de limpieza. Observaron que algunas caractersticas ambientales podan influir en la precipitacin de los carbonatos, tales como las fuerzas inicas el medio. Estudio bajo condiciones del laboratorio para obtener la biocomversin del yeso de la roca de calcita.

Gauri y Gwinn

(1983)

Rivadeneyra y otros

(1985)

Heselmeyer y otros 59

(1991)

Isabel Casanova Bevi

Mster en Conservacin y Restauracin de Bienes Culturales Limpieza de obra mural mediante el uso de bacterias

Rivadeneyra y otros

(1994)

Se consigui aislar la tensin perteneciente al gnero vibrion demostrando que podan provocar la formacin cristales de magnesio y que podan variar la concentracin de la misma dependiendo del medio proporcionado. Los ensayos demostraron que Mg2+ posee un efecto inhibidor sobre la precipitacin del carbonato.

60 Isabel Casanova Bevi

You might also like