ARTCULO ARTCULO DE REVISIN

MED INT MEX 2001;17(2):69-79

Molculas que intervienen en la cicatrizacin

SAMUEL LEN TAPIA, * ARTURO ORTEGA SOTO, ** ROLANDO RAMREZ VARGAS, *** BRBARA GUZMN JIMNEZ****

RESUMEN
La cicatrizacin es el proceso ms simple de reparacin de los tejidos cuando sufren algn dao, entendiendo a la reparacin como una reaccin del organismo para restaurar el tejido perdido. En la cicatrizacin intervienen molculas que integran a la matriz extracelular, el citoesqueleto y factores de crecimiento. Este artculo es una introduccin al conocimiento bsico sobre estas molculas para lograr una mayor comprensin del proceso de cicatrizacin. Palabras clave: cicatrizacin, citoesqueleto, factores de crecimiento, matriz extracelular.

ABSTRACT
The wound healing is the simplest way that tissues use when they are injured in order to repair themselves; in the process of restoration some molecules take place, which form the extracellular matrix, the citoskeleton and growth factors. This article reviews the basic knowledge about these molecules for better understanding of wound healing.

Key words: citoskeleton, extracellular matrix, growth factors, wound healing.

Desde que Claude Bernard, Walter B. Cannon y Hans Selye acuaron los trminos de medio interno, homeostasis y estrs, respectivamente, el avance en el conocimiento de estos procesos naturales del organismo a nivel celular y molecular ha sido tan extraordinario que cuando uno consulta, por ejemplo, el tema de la cicatrizacin, en la cual intervienen estos mecanismos fisiolgicos, ya no se mencionan, y aparecen nuevos trminos que slo los dedicados a este campo entienden perfectamente. Para un mdico clnico, la alusin a estos vocablos resulta a veces bastante vaga, de tal manera que dificulta la comprensin de los mecanismos. Este artculo pretende facilitar el conocimiento de un proceso tan comn como la cicatrizacin al revisar someramente la biologa molecular de la misma.

La cicatrizacin de una herida quirrgica es la forma ms simple de reparacin, que es una reaccin del organismo para reemplazar al tejido perdido.1 En la reaccin de reparacin concurren la actividad de la matriz extracelular y las clulas del tejido lesionado. MATRIZ EXTRACELULAR La matriz extracelular es una red organizada de materiales extracelulares que pueden adoptar formas diferentes en los tejidos y que est constituida por un nmero relativamente pequeo de familias moleculares (protenas verstiles y polisacridos). La matriz extracelular es algo ms que un material inerte y pasivo; desempea un papel clave en la forma y actividad celular, influyendo su desarrollo, migracin y proliferacin. Una variedad bien organizada son las membranas basales de algunos tejidos.2 Las protenas y polisacridos de la matriz extracelular son secretadas y ensambladas localmente formando una red ordenada que rodea a las clulas que la producen. En la mayor parte de los tejidos conectivos, las macromolculas de la matriz extracelular son excretadas primordialmente por los fibroblastos. 69

Mdico internista del Hospital General Dr. Aurelio Valdivieso, SSA. Estudiante de la Maestra en Ciencias Mdicas, UABJO. ** Ph D Gentica y Biologa Molecular, CINVESTAV, IPN. *** Cirujano plstico. **** Mdico residente de ciruga general. Hospital General Dr. Aurelio Valdivieso. Correspondencia: Dr. Samuel Len Tapia. Calzada Porfirio Daz nm. 400, Col. Reforma, CP 68050, Oaxaca, Oax. Recibido: diciembre, 2000. Aceptado: enero, 2001.

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Los dos principales tipos de macromolculas son las cadenas de polisacridos de la clase llamada glucosaminoglicanos (GAGs), que cuando se encuentran unidas a protenas reciben el nombre de proteoglicanos, y dos formas de protenas, las estructurales (colgena y elastina) y las adhesivas o fibras elsticas (fibronectina y laminina).3 Glucosaminoglicanos Los glucosaminoglicanos (GAGs) son cadenas no ramificadas de polisacridos compuestas por unidades de disacridos que se repiten. Se les llama GAGs porque uno de los residuos del sacrido en el disacrido repetido es siempre un aminosacrido (N-acetil glucosamina) y el segundo azcar suele ser un cido urnico (glucurnico o idurnico). Se puede ilustrar, esquemticamente, de la manera siguiente A-B-AB-A, donde A y B representan un sacrido diferente. Los GAGs se han clasificado en cuatro grupos principales de acuerdo con sus residuos de azcar, su tipo de enlace, nmero y localizacin de los grupos sulfato y son: a) cido hialurnico (hialuronan). b) Condroitn sulfato y dermatn sulfato. c) Heparn sulfato y heparina. d) Queratn sulfato. Los GAGs tienden a adoptar una conformacin muy extendida que ocupa un volumen grande en relacin con su masa y forman geles. Las cargas negativas atraen principalmente al Na+ , lo que ocasiona que una gran cantidad de agua quede embebida y sea posible la difusin rpida de molculas hidrosolubles y la migracin celular, adems de soportar altas cargas compresivas.2,3 cido hialurnico Es el ms simple de los GAGs y est constituido por una secuencia repetida de 25,000 unidades de disacridos no sulfatados. Es producido en grandes cantidades durante el proceso de cicatrizacin y es degradado por la enzima hialuronidasa. Proteoglicanos Un GAG unido a una protena forma un proteoglicano. La cadena proteica central es un derivado de mem70

branas ribosomales; en un segmento de esta protena central que contenga un residuo de serina (iniciador) se fijar un tetrasacrido, que servir de base a la cadena del polisacrido. Este ensamblaje ocurre en el aparato de Golgi. En el condroitn sulfato, el disacrido est compuesto por el D-cido glucurnico y N-acetil-D galactosamina. En el heparn sulfato (perlecan), el disacrido es el D-glucosamino o el cido idurnico y en el Queratn sulfato est compuesto por la D-galactosa y Nacetil-D-glucosamino. Un proteoglicano secretado por los fibroblastos es el decorin, el cual se fija a las fibras de colgena. Los proteoglicanos, por sus caractersticas moleculares, forman geles con poros de diversos tamaos y sirven como filtros selectivos en el trfico de molculas y clulas de acuerdo con su magnitud. Al unirse a los factores de crecimiento juegan un papel importante en la sealizacin qumica de las clulas, tomemos como ejemplo al factor de crecimiento de los fibroblastos (FGF), que se vincula al heparn sulfato (perlecan) y que estimula a una variedad de tipo celular para su proliferacin; o el factor transformador del crecimiento (TGF-), que se une a la protena central de proteoglicanos de la matriz extracelular. Los proteoglicanos regulan la actividad de algunas protenas; al unirse a ellas restringen su radio de accin bloqueando su actividad, establecen un reservorio proteico para su liberacin posterior, las protegen de su degradacin y, por ende, alargan su accin y las ayudan a contactar con los receptores de superficie celular. Los proteoglicanos no slo son secretados como componentes de la matriz extracelular, sino que tambin son integrantes de vesculas intracelulares o de las membranas plasmticas; con la protena central insertada en la membrana bilipdica actan tambin como correceptores. Los proteoglicanos de la membrana plasmtica mejor conocidos son los sindecanos que, junto con las integrinas, sirven como receptores para la colgena, fibronectina y otras protenas de la matriz extracelular, adems de que fijan la clula a la matriz; tambin se unen al FGF exponindolo al recepMedicinaInternadeMxico Volumen17,Nm.2,marzo-abril,2001

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tor del FGF en la membrana celular. El betaglicano fija y presenta al TGF-. Los GAGs y los proteoglicanos forman un complejo polimrico enorme, gelado, poroso e hidratado que acta como material de empaque para resistir las fuerzas de compresin.

Cuadro 1. Tipos de colgena Tipo I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII Cadenas a1(I), a2(I) a1(II) a1(III) a1(IV), a2(IV) a1(V), a2(V) a1(VI)a2(VI)a3(VI ) a1(VII) a1(VIII) a1(XI), a2(XI), a3(XI) a1(X) a1(XI)a2(XI)a3(XI) a1(XII) Estructura Fibrilar Fibrilar Fibrilar No fibrilar Fibrilar Fibrilar No fibrilar ? ? ? Fibrilar ? Localizacin Piel, tendn, hueso, etc. Cartlago, humor vtreo Piel, msculo, etc. Membranas basales Tejidos intersticiales Tejidos intersticiales Fijacin de fibrillas Clulas endoteliales Cartlago Cartlago mineralizado Cartlago Piel, tendn

Protenas estructurales Colgena Las colgenas constituyen 25% del total de protenas del cuerpo humano y son una familia de glucoprotenas fibrosas que forman parte exclusivamente de matrices extracelulares. Son secretadas por clulas de tejido conectivo, principalmente por los fibroblastos. Toda molcula de colgena es un trmero que consta de tres cadenas polipetdicas, llamadas cadenas que contienen una secuencia repetida de tres aminocidos Gli-X-Y y son ricas en dos aminocidos hidroxilados: hidroxiprolina e hidroxilisina. Las cadenas se tuercen sobre s mismas en sentido antihorario y entre s en el sentido de las manecillas del reloj, formando una triple hlice caracterstica. La colgena tiene un alto contenido de prolina y glicina. La prolina sirve como estabilizador de la cadena en su estructura helicoidal, debido a su molcula anular. La glicina se localiza en cada tercer residuo de y por su pequeo tamao permite que las tres cadenas de la colgena se junten estrechamente formando una supercadena. Se conocen, a la fecha, 25 distintas cadenas de colgena, cada una codificada en un gen distinto, y 19 tipos de esta protena, que representan el producto de 33 genes. Los tipos que constituyen, principalmente, el tejido conectivo son el I, el II, el III, el V y el XI, siendo la colgena I el mayor componente de la piel (cuadro 1). La nomenclatura de la colgena se expresa de la siguiente manera: La cadena polipeptdica individual codificada en cada uno de sus genes se designa con la letra . Un nmero arbigo despus de denota la cadena constituyente del trmero, por ejemplo: la colgena tipo I est constituida por dos 1 y una 2. Los
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trmeros diferentes son designados por nmeros romanos y representan al tipo de colgena, por ejemplo: 1(I), 1(III). Una molcula de colgena homopolmera est compuesta por tres cadenas iguales. Una heteropolmera est conformada, por lo menos, por dos cadenas diferentes. Las colgenas son sintetizadas en las membranas ribosomales y son inyectadas en la luz del retculo endoplsmico (RE) como pro cadenas , que cuentan con propptidos seal localizados en los extremos amino y carboxil; el primero dirige a la procolgena al RE, en donde la prolina y la lisina son hidroxiladas y algunos residuos de la hidroxilisina son glucosilados. Entonces, la cadena pro se une a otras dos para formar una hlice de procolgena; estas fibrillas de procolgena son secretadas y convertidas en molculas de colgena en el espacio extracelular cuando los propptidos son removidos por enzimas proteolticas (los propptidos sirven para guiar a las cadenas para la integracin de la triple hlice de colgena y para prevenir la formacin intracelular de fibrillas largas de colgena).1-3 Una vez convertidas las fibras de procolgena en colgena, stas se ensamblan en el espacio extracelular y forman grandes fibrillas de clagena, que se alinean en paralelo y forman fibras con un aspecto caracterstico en bandas a cada 67 nm, y tambin se alinean paralelamente y conforman haces de colgena. La estructura fibrilar de la colgena la hace resistir fuerzas tensionales, aunque en cada tejido el arreglo de las fibras estar regido por las mismas clulas 71

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(ver ms adelante). En esta composicin tambin intervendr la interaccin con otros tipos de fibras de colgena (tipo I y XII) que tienen las siguientes propiedades: a lo largo de su triple cadena existen uno o dos dominios no torcidos, lo que las hace ms flexibles; no son ancladas despus de su secrecin, retienen sus proptidos y no se agrupan entre s para formar fibrillas, sino que se fijan a otro tipo de colgena. Las clulas organizan a las fibrillas de colgena que secretan por mediacin de los fibroblastos, los cuales se mueven sobre las fibras compactndolas en capas y tirando de ellas para formar haces, lo que produce una tensin contrctil. Los fibroblastos influyen en la alineacin de las fibras de colgena y stas, a su vez, afectan la distribucin de los fibroblastos.1-4 Elastina La resistencia a esfuerzos tensionales es proporcionada por molculas de la familia de la colgena, mientras que la habilidad del tejido para recogerse despus de un estiramiento corresponde a las fibras elsticas, como la elastina. La elastina es una protena estructural formada por aproximadamente 750 aminocidos con un alto contenido de prolina y glicina, poca hidroxiprolina y nada de hidroxilisina. La molcula de elastina tiene dos componentes que se alternan a lo largo de la cadena: un segmento hidrofbico, que es la parte elstica, y un fragmento rico en alanina y lisina que moldean los enlaces cruzados con molculas adyacentes. La protena central de la elastina est recubierta con una capa de microfibrillas, principalmente por la glicoprotena fibrilina (una mutacin en el gen que codifica la fibrilina ocasiona el sndrome de Marfan). 2,3 Protenas adhesivas Fibronectina La fibronectina es una protena adhesiva compuesta por dos cadenas polipeptdicas (dmero); cada cadena contiene aproximadamente 2,500 AA y est plegada en cinco o seis dominios con aspecto de rodillos conectados por segmentos flexibles de polipptidos. Las dos cadenas estn unidas por un par de enlaces disulfuros cerca del extremo carboxil. 72

La fibronectina existe en dos formas principales: la plasmtica y la tisular. La fibronectina plasmtica es secretada por los hepatocitos mientras que la tisular por clulas mesenquimatosas, fibroblastos y endoteliales. Los sitios especficos de enlace de la fibronectina se localizan en los dominios y le permiten unirse rpidamente a la colgena, a los proteoglicanos, a los GAGs, al fibringeno, a la fibrina, a superficies celulares, a bacterias y al ADN. Esta capacidad de enlace es de gran importancia en las fases iniciales de la reparacin tisular. En el dominio que se une a la superficie celular existe una secuencia de aminocidos que permiten que a sta se adhiera la fibronectina (integrinas) y que est constituida por los aminocidos Arg-Gli-Asp o RGD, por lo que desde hace tiempo se ha usado en el cultivo de clulas, ya que proporciona una superficie de adhesin y crecimiento. Las fibrillas de fibronectina se sitan en las vas que las clulas usan para desplazarse, lo que se ha observado en los embriones de vertebrados. La tenascina es una glucoprotena de la matriz extracelular compuesta por seis cadenas polipeptdicas idnticas que adopta la forma de una rueda con ejes. Al igual que la fibronectina, sus cadenas polipeptdicas tienen secuencias de aminocidos repetidos varias veces. La tenascina juega un papel importante en la migracin celular y se le encuentra principalmente en la matriz extracelular de tejidos embrionarios. 2,3,5 Laminina La laminina es un complejo flexible compuesto por tres cadenas largas de polipptidos arreglados en forma de una cruz asimtrica, y que estn unidas por enlaces disulfuros. La laminina es un componente de la matriz extracelular parecida a la fibronectina por los dominios distintos con sitios de enlace especficos. Se une fuertemente a los receptores de las superficies celulares y puede enlazarse a otras molculas de laminina, heparn sulfato y colgena tipo IV para integrar las membranas basales. La laminina puede regular e influir en el crecimiento y diferenciacin celular, as tambin sirve como va rpida de la migracin celular.
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Entactina La entactina es una glucoprotena adhesiva altamente sulfatada que slo se encuentra en la membrana basal (membranas basales), interacta con la laminina, fija iones de Ca2 + y participa en el ensamblaje de las membranas basales. Receptores celulares de la matriz extracelular Integrinas La manera en la que la matriz extracelular interacta con las clulas se explica por la existencia de molculas que se encuentran en la superficie celular y que funcionan como receptores de la matriz extracelular. Estas molculas son protenas transmembranales denominadas integrinas que son diferentes a los proteoglicanos que actan como correceptores y a los receptores de los factores de crecimiento, hormonales, etc. Las integrinas se unen a las protenas de la matriz extracelular, incluyendo a la colgena, la fibronectina, etc. Las integrinas estn compuestas de dos subunidades de glicoprotenas transmembranales llamadas y y unidas por enlaces no covalentes. Estas subunidades participan en la vinculacin de las protenas de la matriz extracelular y las clulas. A la fecha existen 20 diferentes tipos y se han identificado 14 subunidades y 9 . Su enlace con un ligando depende de la presencia de Ca2+ y Mg2 + y se da con la parte ms grande de la integrina, la cual se localiza extracelularmente. Un dominio citoplsmico (40-50 AA) contiene sitios de enlace para componentes del citoesqueleto, especialmente para los haces de actina, por lo que las integrinas enlazan y permiten el paso de seales entre los elementos que se encuentran a ambos lados de la membrana celular. El sitio de enlace entre las integrinas y las protenas de la matriz extracelular se da en la secuencia ya conocida RGD (Arg-Gli-Asp) de la fibronectina, colgena y laminina. La interaccin entre la matriz extracelular y el citoesqueleto es recproca, de tal manera que los filamentos intracelulares de actina pueden influir en la orientacin de las molculas de fibronectina secretada, por el desplazamiento de fuerzas tensionales a la matriz extracelular que excretan las mismas clulas. Estas fuerzas dirigirn la organizacin de las molMedicinaInternadeMxico Volumen17,Nm.2,marzo-abril,2001

culas de la matriz extracelular. Asimismo, las molculas de la matriz extracelular secretadas influyen y ordenan el citoesqueleto de las clulas vecinas, creando as una estructura grande y bien organizada. Las integrinas tambin median la accin de las molculas de la matriz extracelular que influyen en la forma, polaridad, metabolismo, conducta, desarrollo y diferenciacin celular, efectos que, en su mayor parte, inducen cambios en la expresin gentica.2,3,6 Citoesqueleto La habilidad de las clulas eucariotas para adoptar diferentes formas, coordinar y dirigir movimientos obedece a una red de protenas filamentosas que se distribuyen en todo el citoplasma, esta red se llama citoesqueleto. Las diversas cualidades del citoesqueleto dependen de tres tipos de filamentos proteicos: Microtbulos Filamentos intermedios Microfilamentos (actina) Cada tipo de filamentos est constituido por diferentes subunidades, los microtbulos por tubulina, los filamentos intermedios por vimentina o laminina y los microfilamentos por actina. Estos filamentos conectan los complejos proteicos y organelos en diferentes regiones de la clula y sirven como vas de transporte, proveen soporte mecnico. Los tres tipos de filamentos que constituyen el citoesqueleto son polmeros helicoidales con arreglo y funcin diferentes. Microtbulos Los microtbulos son polmeros largos y rgidos que se extienden a travs del citoplasma y organizan la localizacin de los organelos y otros componentes celulares. Tienen un dimetro de 24 nm y una pared cuyo espesor es de 5 nm. La pared del microtbulo es un polmero compuesto de subunidades globulares que consta de una sola molcula de la protena tubulina; las subunidades se disponen en hileras longitudinales llamadas profilamentos, alineadas con el eje mayor del tbulo, lo que le da una forma cilndrica. En un corte transversal, la circunferencia del 73

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cilindro est compuesta por 13 unidades de protofilamentos. El ensamble de los microtbulos se da por incorporacin de bloques de construccin dimrica; cada uno de estos bloques es una unidad integrada por dos molculas, una de tubulina y una de tubulina. Al analizar el protofilamento, en un extremo existe una tubulina y en el otro una , por lo que se dice que un microtbulo tiene una estructura polar, distinguindose un extremo plus o ms (crecimiento rpido) y un minus o menos (crecimiento lento). La formacin de los microtbulos ocurre en dos fases distintas: una lenta, llamada nucleacin y otra rpida, de alargamiento. La nucleacin de los microtbulos ocurre en estructuras especializadas, los denominados centros organizadores de microtbulos (COMT); los dos ms importantes son los centrosomas y los corpsculos basales.2,3 Centrosomas El centrosoma es el sitio de mayor organizacin de los microtbulos; es una estructura compleja que contiene dos centriolos en forma de barril, rodeada por un material peri-centriolar, electrodenso y amorfo. Es en esta parte donde ocurre la nucleacin de los microtbulos. Existe aqu un tipo de tubulina especial: la tubulina. El centrosoma se sita en el centro de la clula, justo afuera del ncleo. En esta regin convergen numerosos microtbulos. Los microtbulos recin ensamblados irradian del centrosoma; el extremo menos se relaciona con el centrosoma, el plus se sita en el lado opuesto. No todos los COMT contienen centriolos; los microtbulos que forman cilios y flagelos se organizan en un corpsculo basal. En clulas de hongos a los COMT se les denomina corpsculo polar del huso y en las vegetales son regiones electrodensas pobremente definidas. Cualquiera que sea el aspecto de las clulas, los COMT controlan el nmero de protofilamentos que forman sus paredes, el sitio y momento en el cual se ensamblan, y su polaridad. Los COMT comparten una protena comn, la tubulina. Esta protena es un elemento vital para el ensamblado de los microt74

bulos, ya que forma una plantilla anular sobre la que se acoplan los dmeros y . En los cultivos de fibroblastos se ha observado que la red de microtbulos se organiza rpidamente. Su vida media es de aproximadamente 10 min, mientras que el tiempo total desde su formacin hasta su desnaturalizacin es un poco ms de 20 min. Las molculas de tubulina participan en la creacin y desmantelamiento de muchos microtbulos en su periodo de vida. En todo momento, algunos microtbulos crecen en longitud en tanto que otros se encogen; el encogimiento es ms rpido que el alargamiento, por lo que estos microtbulos desaparecen y se vuelven a formar cerca del centrosoma. A este comportamiento de alternancia se le llama inestabilidad dinmica y ocurre de manera predominante en el extremo plus del microtbulo (lado opuesto al COMT). Los microtbulos del citoesqueleto de las clulas vivas pueden ser desensamblados en formas diversas sin interferir con la mayor parte de las otras estructuras celulares, especialmente cuando un organismo recibe algn tratamiento con vinblastina, vincristina, colquicina, podofilotoxina o nocodazol, por ejemplo, o al bajar la temperatura y la presin hidrosttica, o al elevarse la concentracin de Ca2+. Los tratamientos antes mencionados despolimerizan a los microtbulos.7 Los microtbulos del citoesqueleto siempre estn sujetos a la despolimerizacin y repolimerizacin, segn sean las necesidades de la clula en un momento dado, por ejemplo en la mitosis. 8,9 Para el ensamblado de los microtbulos se requiere de energa, misma que es suministrada por el guanosn trifosfato (GTP). El GTP se une a cualquiera de las subunidades o tubulina; cuando lo hace con la se crea un complejo GTP- tubulina. El GTP se hidroliza a GDP despus de haberse enlazado a un polmero del microtbulo; en cambio, si se une un GTP a una tubulina no hay hidrlisis del primero. La importancia de este suceso al parecer radica en permitir que los microtbulos se despolaricen por el debilitamiento de los enlaces entre las unidades de estos polmeros. Cuando un dmero de un microtbulo se libera durante el desensamblado, el GDP intercambiable es sustituido por un nuevo GTP, lo que permite al dmero
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servir una y otra vez como bloque de construccin de estos polmeros. La mayor afinidad de los dmeros con el GTP que con el GDP podra explicar el crecimiento o encogimiento de los microtbulos, dependiendo de la combinacin en uno de los extremos. La estabilidad de los microtbulos se incrementa por las protenas relacionadas con microtbulos (PRM), que estn constituidas por una porcin globular (cabeza) que se fija al lado del polmero y una porcin filamentosa (cola) que se extiende hacia afuera. Las PRM interconectan a los microtbulos para formar haces visibles, alteran su rigidez e influyen en la velocidad de su ensamblado. Las funciones principales de los microtbulos se pueden resumir de la siguiente manera: a) Sirven como armazn o esqueleto interno. b) Forman rieles o vas donde se mueven las cinesinas y dinenas durante el proceso de desplazamiento de materiales y organelos celulares, de una parte a otra de la clula. c) Son los elementos mviles de cilios y flagelos. d) Son componentes primarios del mecanismo encargado de la mitosis y meiosis durante la divisin celular. Filamentos intermedios Los filamentos intermedios (FI) son protenas fibrosas que se encuentran exclusivamente en clulas animales (y abundan en las que estn sometidas a tensiones mecnicas) formando una red extensa que rodea al ncleo y se extienden hacia la periferia celular. Son un grupo de estructuras qumicas heterogneas codificadas en el ser humano en, por lo menos, 60 genes diferentes. Las subunidades de los polipptidos de los FI se pueden dividir en seis clases principales. Cada polipptido contiene un dominio central a helicoidal en forma de barra con un tamao aproximado de 310 aminocidos y una secuencia homloga de siete aminocidos que se repite a todo lo largo. En los extremos de la barra existen dominios globulares, uno con la terminacin N (cabeza) y otro con la terminacin C (cola). Dos de estos polipptidos se alinean en paralelo con la misma orientacin y se tuercen entre s formando un dmero en forma de cuerda, con una longi5,6

tud de 45 nm y con una polaridad por sus terminaciones N y C. Entonces, dos dmeros se colocan lado a lado en forma escalonada con sus extremos C y N opuestos para formar un tetrmero. Los tetrmeros, a su vez, se agrupan para integrar los filamentos intermedios en un arreglo parecido a un cordn. El ensamblado y desensamblado de los FI no requiere la hidrlisis del nucletido, su unidad bsica para el ensamblado es un tetrmero. Los tetrmeros se unen a los lados y con los extremos de otros para formar filamentos finales, que son muy resistentes a fuerzas de traccin. Los FI son ms estables a la fragmentacin qumica que otros elementos del citoesqueleto, pero una vez que han sido extrados, se pueden ensamblar y desensamblar repetidamente in vitro, lo que indica que las subunidades tienen toda la informacin necesaria para este proceso. Los FI pueden agruparse en tres clases principales: a) Filamentos de queratina. b) Filamentos de vimentina. c) Neurofilamentos. La queratina es la forma ms amplia de los FI y se encuentra principalmente en las clulas epiteliales. Existen dos tipos de queratinas, la tipo I (cida) y la tipo II (neutro/bsica). Cuando existe un defecto en la sntesis de queratina por mutacin en el gen que codifica al polipptido K14 o K5 no se puede efectuar el arraigo de las clulas epiteliales, lo que ocasiona una enfermedad como la epidermlisis bullosa simple. La vimentina es la protena que se encuentra ms distribuida en las clulas de origen mesodrmico, como los fibroblastos y las clulas endoteliales. Los FI no participan en procesos como la mitosis o la citoquinesia, proporcionan estabilidad mecnica a las clulas y realizan funciones especializadas en tejidos especficos. Los neurofilamentos forman parte del citoesqueleto de los axones neuronales. Existen tres tipos nominados por su peso molecular: NFL, NFM y NFH (bajo, medio y alto PM). La lmina nuclear est constituida por FI y, a diferencia de los otros FI, s se desensambla cuando existe la divisin celular; ade75

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ms, contiene en el dominio central un polipptido seal que lo mantiene dentro del ncleo. Microfilamentos Actina La motilidad celular est mediada por microfilamentos, uno de cuyos elementos es comn a todas las clulas y est compuesto por la protena actina. Los filamentos de actina se encuentran justo debajo de la membrana plasmtica y constituyen una red cruzada por varias protenas para formar la corteza celular. Los microfilamentos de actina miden casi 8 nm de dimetro y cada molcula tiene aproximadamente 375 aminocidos; su aspecto es de un cacahuate con dos dominios separados por una hendidura y conectados entre s por una unin o bisagra en el eje longitudinal. Existen tres tipos de actina, clasificados de acuerdo con su punto isoelctrico y son , y . La actina se encuentra en las fibras musculares y la y la en clulas no musculares. Los monmeros de actina deben enlazarse con un nuclesido de adenosina (ATP) antes de polimerizarse. El papel desempeado aqu por el ATP es semejante al que juega el GTP en el ensamblado de los microtbulos. Los filamentos de actina crecen en ambos extremos, pero en un lado el crecimiento es 5 a 10 veces mayor (extremo plus) y en el otro (minus) crece ms lentamente. El lado minus es preferido para la despolimerizacin. La despolimerizacin de los microfilamentos ocurre ante la presencia de citocalasina; en cambio, la faloidina estabiliza a los microfilamentos. La exposicin de la clula a cualquiera de estas sustancias frena de inmediato los procesos mediados por los filamentos.2,3 Los filamentos de actina y los motores de miosina se encargan de una gran variedad de actividades en relacin con el movimiento en las clulas no musculares: la locomocin celular, la fagocitosis, el trfico vesicular, la adhesin a sustratos, etc.10,11 El apego a un sustrato se realiza mediante unos haces alineados de filamentos de actina llamados fibras de esfuerzo y la locomocin de una clula sobre un sustrato se da a travs de la formacin de un lamelipodio. La protrusin de un lamelipodio se 76

acompaa de la creacin de los filamentos de actina y su organizacin con protenas enlazadas a la actina (protenas de unin rgida). Conforme un fibroblasto avanza sobre el sustrato, se aplana y adopta la forma de un abanico con un extremo frontal ancho y una cola estrecha. Se han considerado dos mecanismos para la formacin de los lamelipodios: la membrana plasmtica sobresale al exterior como resultado de la unin de subunidades de actina y de filamentos corticales y la protrusin se debe a las fuerzas generadas por la interaccin de molculas de miosina y los filamentos corticales. Interacciones entre clulas La influencia ejercida por el contacto fsico de las clulas con su matriz extracelular y el existente entre ellas, provoca que algunas respondan secretando protenas solubles llamadas citoquinas, las cuales tienen bsicamente tres funciones: se fijan a receptores celulares especficos, actan como factores de crecimiento y modulan el comportamiento celular. La produccin programada de estas citoquinas es muy importante para la embriognesis, la homeostasis, la inflamacin, la respuesta inmunitaria y la cicatrizacin.2,3,12,13 Los principales factores que intervienen en la cicatrizacin son: Factor de crecimiento derivado de los macrfagos (MDGF). Bajo circunstancias apropiadas los macrfagos producen el MDFG que estimula la proliferacin de fibroblastos en reposo, de clulas endoteliales y de fibras musculares lisas. Factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF). Es un polipptido con accin mitgena potente que acta sobre los fibroblastos al ser liberado de las plaquetas durante la hemostasia, lo que ocasiona que los fibroblastos, las clulas endoteliales, las fibras musculares lisas y las clulas inflamatorias se muevan hacia el sitio de una herida. Factor de crecimiento epidrmico (EGF). Es un pequeo polipptido que se liga a un receptor glicosilado transmembrana, que se encuentra en todas las clulas, especialmente las epiteliales, ocasionando una desdiferenciacin y proliferacin,
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lo que acelera la cicatrizacin de la piel, de la crnea y de las lceras gastrointestinales. Incrementa el depsito de colgena durante la cicatrizacin al estimular la proliferacin de los fibroblastos. Factor de crecimiento de los fibroblastos (FGF). Es una protena glucosilada de una cadena, estimula el crecimiento de los capilares y la mitosis de los fibroblastos, de las clulas endoteliales y de las fibras musculares lisas, causando un incremento de colgena, protenas y ADN, lo que genera una cicatrizacin rpida. Existe en forma cida y bsica, sta ltima es 10 veces ms activa que la cida y ambas son codificadas por un solo gen del cromosoma 4. Factor transformador del crecimiento (TGF-). Recibe este nombre por ser secretado en cultivos de clulas transformadas. El TGF- est involucrado en terminar la proliferacin celular en el hgado e inhibe el crecimiento de muchos tipos de clulas en cultivo; sin embargo, es un potente mitognico para los fibroblastos, lo que incrementa la cantidad de colgena y otras protenas durante la cicatrizacin, e induce la formacin de tejido de granulacin. El TGF- es una citoquina clave cuya produccin sostenida fomenta el desarrollo de tejido fibrtico.1,14-17 La aplicacin de TGF-, PDGF o FGF en una herida cambia el tiempo de la cicatrizacin, el tipo de matriz extracelular depositada y de clulas presentes en el sitio de reparacin. Una vez revisados los factores que intervienen en la cicatrizacin, analizaremos las etapas que sigue un tejido lesionado para su recuperacin, llamadas cascada de reparacin. Cuando ocurre la solucin de continuidad en el tejido se manifiesta la hemostasia, en la que intervienen las plaquetas, la fibrina, la fibronectina plasmtica y las transglutaminasas. La hemostasia es seguida por la inflamacin, en donde concurren principalmente neutrfilos, macrfagos, linfocitos y protenas plasmticas. Despus, aparece la demolicin, mediada por macrfagos y colagenasas; a continuacin se observa la proliferacin, en la que se forma el tejido de granulacin (angiognesis, sntesis de matriz extracelular y contraccin de la herida) 1,18,19 finalmenMedicinaInternadeMxico Volumen17,Nm.2,marzo-abril,2001

te, sucede la maduracin, en la que se dan los enlaces cruzados de colgena, la remodelacin y la resorcin capilar. La hemostasia y la inflamacin sern consideradas en este artculo a grosso modo. Despus de la fase de inflamacin, la cicatrizacin es ejecutada por tres mecanismos: contraccin, reparacin y regeneracin, las cuales inician sincrnicamente. Cuando sucede la solucin de continuidad, la herida se llena de sangre con la formacin de un cogulo. La fibronectina plasmtica forma puentes cruzados con los componentes de la matriz extracelular entre los tejidos y el cogulo. Los productos de degradacin de las clulas daadas (fibronectina y enzimas lisosomales de los leucocitos) inducen la quimiotaxis para la migracin de macrfagos, fibroblastos y miofibroblastos a este sitio 48 a 72 horas despus de la lesin.1,18,19 Las clulas fagocticas remueven parte del cogulo mientras que los fibroblastos y miofibroblastos producen una nueva matriz extracelular constituida principalmente por fibronectina, cido hialurnico (perlecan), proteoglicanos y colgenas tipo I y III. La accin de los miofibroblastos y las propiedades de las protenas estructurales de la matriz extracelular disminuye el tamao de la lesin acercando los bordes de la herida (contraccin) en el cuarto o quinto da.11,20,21 Los proteoglicanos, por su propiedad de retencin de agua dan un aspecto edematoso a la herida. Al mismo tiempo, las clulas epidrmicas de los bordes pierden contacto con sus vecinas y con su membrana basal, ocupan un rea mayor mostrando aplastamiento y recubren la superficie sin realizar an mitosis, migran secretando colagenasas y otras enzimas y limpian su camino de los restos de la matriz extracelular. La cabeza de playa establecida est constituida slo por una capa de clulas y a lo sumo dos. Cuando la lesin est recubierta, las clulas migratorias establecen contacto con otras y con su membranas basales y recobran su forma normal, por lo que las clulas basales epidrmicas adyacentes a las que migraron inician su proliferacin. La migracin ocurre por la disolucin de los enlaces con la membrana basal.12,22-25 Tambin las clulas endoteliales empiezan a proliferar, dando paso a la formacin del 77

LEN TAPIA S Y COL.

Cuadro 2. Factores que influyen en la cicatrizacin Factores locales Factores sistmicos

Tipo, tamao y localizacin de la herida Estado circulatorio Irrigacin vascular Infeccin Infecciones Estado metablico Movimiento Desnutricin Radiacin ionizante Medicacin hormonal Luz UV

tejido de granulacin a las 48 a 72 horas;24 este proceso de reparacin se inicia con la angiognesis, arborizacin y anastomosis de una nueva red capilar y la diferenciacin entre arteriolas y vnulas. La fibrognesis antes comentada se incluye en la reparacin. Todos estos procesos estn mediados por diferentes factores de crecimiento, especialmente FGF, TGF y PDFG.1,25 Al sexto o sptimo da comienza la remodelacin de la cicatrizacin, en la que ocurre la degradacin de la colgena mediada por macrfagos y fibroblastos. La colgena tipo III es removida y sustituida por tipo I, dando como resultado el incremento en el esfuerzo tensional debido al reacomodo que sufren las fibras de colgena, y la consiguiente creacin de nuevas lneas de fuerza. Asimismo, hay obliteracin y reabsorcin de los capilares neoformados.1,4,15,16,26 El proceso de cicatrizacin de una herida quirrgica es la forma ms simple de reparacin, como ya mencionamos, y se conoce como cicatrizacin de primera intencin; pero se complica cuando hay prdida excesiva de tejidos, por lo que la reparacin no restablece completamente la arquitectura original (cicatrizacin por segunda intencin). Los factores que influyen en la cicatrizacin se dividen en locales y sistmicos (cuadro 2). La cicatrizacin normal puede sufrir dos tipos de alteraciones: a) Exceso en la formacin de tejido de granulacin (cicatriz hipertrfica). b) Formacin anormal de tejido conjuntivo, con bandas de colgena acelulares eosinoflicas gruesas (cicatriz queloide).27-31 Los mecanismos de la cicatrizacin que se encuentran alterados en la formacin de una cicatriz queloide 78

son: la interaccin celular, la colagenizacin y la resistencia de la herida. Se ha considerado que la apoptosis, la necrosis y la proliferacin estn implicadas en la formacin de la cicatriz queloide. Durante la maduracin hay degeneracin progresiva celular ocasionada por la apoptosis, mientras que la proliferacin persistente de los fibroblastos en la interfase de la cicatriz queloide propaga la fibrosis,27-34 que tambin est influida por el FTG-, el factor de crecimiento parecido a la insulina y la interleucina 1. 26 Con los avances futuros en el conocimiento de la fisiopatologa de la cicatrizacin ser posible evitar sus complicaciones para obtener una reparacin casi perfecta.
REFERENCIAS 1. 2. Martnez-Hernndez A. Repair, regeneration and fibrosis. Pathology. USA: Lippincott-Raven, 1999:77-103. Karp G. Interacciones entre las clulas y su entorno. Citoesqueleto y motilidad celular en: Biologa celular y molecular. Mxico: McGraw-Hill, 1998:239-388. Alberts B, et al. The celular matrix of animals. The cytoskeleton. En: The cell. USA: Garland, 1994:787-847,971-1000. Prez Tamayo R. Pathology of collagen degradation. Amer J Path 1978:92;507-53. Zhang S, Shiels MA, et al. Pirfenidona reduces the fibronectin synthesis in culture Australian and New Zeland. J of Ophta 1998:26(suppl):574-6. Rudolph A, Grengard P, et al. Effects of colchicine on cyclic AMP levels in human leukocytes. Proc Natl Acad Sci USA 1977;74:3404-8. Liaw, Schwartz. Microtubule disruption stimulates DNA synthesis in bovine endothelial cells. Am J Pathol 1993:143;937-48. Rouan, et al. Reversal of colchicineinduced mitotic arrest in Chinese hamster cells with a colchicine specific antibody. Am J Pathol 1990;137:779-87. Brown AR, Talas G. Balanced mechanical forces and microtubule contribution to fibroblast contraction. J Cell Phys 1996;169:439-47. Pratt, et al. Mechanism of cytoskeleton regulation. Am J Pathol 1984;117:3499-554. Doillon, et al. Actin filaments in normal dermis and during wound healing Am J Pathol 1987;126:164-70. Riddelle KS, et al. Hemidesmosomes in the epithelial cell line 804G:Their fate during wound closure. J Cell Sci 1992;103:475-90. Kenneth D, et al. Colchicine inhibits epidermal growth factor degradation in 3T3 cells. Proc Natl Acad Sci USA 1980;77:480-4. Yang, et al. Active Transforming growth factor b in wound repair. Am J Pathol 1988;132:430-9.

3. 4. 5.

6.

7.

8.

9.

10. 11. 12.

13.

14.

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15. Wayne A. Border transforming growth factor b in tissue fibrosis. NEJM 1994:331. 16. Bello MY, Phillips JT. Recent advances in wound healing. JAMA 2000;283(6). 17. Sharon M, et al. Regulation of macrophage collagenase, prostaglandin, and fibroblast-activating factor production by cell. Immunology 1985;92:302-12. 18. Dipietro LA, Nissen NN, Gamelli RL, et al. Trombospodin 1 synthesis and function in wound repair. Am J Pathol 1996;148:1851-60. 19. Nickoloff BJ, Mitra RS, Riser BL, et al. Modulation of keratinocyte motility, correlation with production of extracellular matrix. Am J Pathol 1988:132;543-51. 20. Bell E, Ivarsson B, Merril Ch. Production of a tissue-like structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts. Proc Natl Acad Sci USA 1979;76:1271-8. 21. Santiago FS, Lowe CH, Fiona L, et al. Effects of colchicine and vinca alcaloids on human platetes. Am J Pathol 1968;53:281-91. 22. Dunlap KM, Donaldson JD. Inability of colchicine to inhibit new epidermal cell migration or prevent concanavalin. Ex Cell Res 1978;116:15-19. 23. Brown LF, Lanir N, McDonagh J. Fibroblast migration in fibrin gel matrices. Am J Pathol 1993:142;273-83. 24. Selden CS, Rabinovitch SP, Schwartz MS. Effects of cytoskeletal disruption on replication of bovine endothelium. J Cell Phys 1981;108:195-211.

25. Martin P. Wound healing aiming for perfect skin regeneration. Science 1997;75-81. 26. Singer JA, Clark AF. Cutaneous wound healing. NEJM 1999;341:738-46. 27. Arora DP, Narani N, McCulloch AG. The compliance of collagen gels regulates TGFb induction of smooth muscle actin in fibroblast. Am J Pathol 1999;154:871-82. 28. McLennan SV, Fisher JE, Yue DK, Turtle JR. High glucose concentration causes decrease in mesangium degradation. Diabetes 1994;43:1041-6. 29. Dajmi KF, Rootman J, Palcic, Thurston. Pharmacological modulation of human subconjuntival fibroblast behavior in vitro. Ophthalmic Surgery 1990;21:32-43. 30. Desmouliere A, Redard M, Darby I, Gabbiani G. Apoptosis mediates the decrease in celularity during transition between granulation tissue. Am J Pathol 1995;146:56-66. 31. Appleton I, Brown NJ, Willoughby DA. Apoptosis, necrosis and proliferation: possible implication in the etiology of keloids. Am J Pathol 1996;149:1441-7. 32. Machesney M, Tidman N, Waseem A, Kirby L, Leigh I. Activated keratinocytes in the epidermis of hypertrophic scars. Am J Pathol 1998;152:1133-41. 33. Blackburn WR, et al. Histologic basis of keloid and hypertrophic scar differentiation. Clinicopathologic correlation. Arch Path 1966;82:65-71. 34. Murray JC, et al. Keloids and hypertrophic scars. Clinics in Dermatology 1984;2:121-33.

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