AVANCE HISTORICO DE LA TECNOLOGIA EN LA FARMACIA

INTRODUCCION

La teraputica farmacolgica, por su impacto en el cuidado de la salud y en la prevencin de la enfermedad, constituye uno de los avances cientficos ms relevantes de la segunda mitad del siglo XX. Actualmente, los medicamentos reducen la mortalidad prematura, disminuyen la morbilidad y en el tratamiento de las enfermedades crnicas, mejoran la calidad de vida. Adems, han contribuido al progreso de la ciruga y de los transplantes que han aumentado las expectativas de salud para muchos pacientes (1). Los progresos ms recientes y con mayor repercusin se han producido en el tratamiento del SIDA, hepatitis C, cncer, infarto de miocardio y artritis reumatoide (2).

La teraputica farmacolgica se ha visto favorecida por el progreso cientfico y el desarrollo tecnolgico que se han incorporado progresivamente a la produccin de medicamentos durante las ltimas dcadas, tal como se recoge en la figura 1.

La industria farmacutica innovadora, mediante el impulso a la investigacin bsica y clnica, ha promovido el desarrollo del 90% de los medicamentos utilizados en la actualidad, siendo atribuido el 10% restante a diversos organismos pblicos de carcter sanitario (3). Para desarrollar esta actividad, los laboratorios farmacuticos invierten importantes recursos que han llegado a alcanzar en los ltimos aos, el 18% de sus ventas en EE.UU. y porcentajes algo inferiores en Europa y Japn.

El principal objetivo de la Galnica, denominacin ya clsica que engloba a la Tecnologa Farmacutica, es el diseo, fabricacin y control de formulaciones farmacuticas. stas se consideran el producto resultante del proceso tecnolgico que confiere a los medicamentos las caractersticas adecuadas para facilitar su administracin, asegurar una correcta dosificacin y alcanzar una eficacia teraputica ptima. Por tanto, los comprimidos, cpsulas, parches transdrmicos, etc. no son simples soportes de principios activos sino que pueden llegar a modular la eficacia teraputica y la seguridad de uso de los principios activos.

La aparicin de los medicamentos biotecnolgicos ha planteado la necesidad de incorporar nuevas formulaciones farmacuticas que permitan superar algunas de las limitaciones que presentan los pptidos y protenas para su utilizacin clnica. Finalmente, algunas estrategias teraputicas nuevas como la terapia celular, la interferencia ARN o bloqueo gnico posttranscripcional y la terapia gnica, obligan a tomar en consideracin las posibilidades que ofrecen las formulaciones farmacuticas desarrolladas a partir de la micro y nanotecnologa y de la microfabricacin (8)

Avances en Tecnologa Farmacutica A. DOMNGUEZ-GIL HURL y

A. MARTN SUREZ Departamento de Farmacia y Tecnologa Farmacutica. Universidad de Salamanca

La figura 2 presenta los eventos ms relevantes en el desarrollo de la biotecnologa gentica moderna. La biotecnologa moderna utiliza la informacin de los genes para manipular los productos que codifican. Manipulando las clulas y tejidos se pueden obtener masivamente productos purificados; utilizando el ADN original, modificndolo, e incorporndolo en otros organismos se pueden lograr productos nuevos.

Figura 2 Eventos mas relevantes en el desarrollo de la Biotecnologa moderna (Roca 2003, basado en Persley, 1997)

SIGLO XIX. INDUSTRIALIZACIN

Con la industria se pasa a fabricar grandes cantidades de productos iguales. El artesano se convierte en obrero asalariado que fabrica muchas unidades

idnticas para competir. Esta proletarizacin har que haya enfrentamientos entre comunistas y partidarios de la empresa. En este siglo, los bilogos descubren la unidad en Biologa, pasando de los tejidos a las clulas. Se plantear la vida desde el punto de vista celular, pero queda fuera el sistema nervioso, porque es atpico y se cree que es una malla que regula la funcin nerviosa. La enfermedad ser un trastorno de la clula y cobra mucho auge la Patologa celular, aunque la clula es tan compleja que hablar de patologa celular es como no decir nada. Pasteur estableci que se puede atribuir una enfermedad a un determinado microorganismo despus de haberlo aislado e investigado. Fue tambin quien termin con la creencia de la Generacin espontnea a travs de unos experimentos sencillos que demostraron que la fermentacin era debida a una contaminacin ambiental, surgiendo as la Pasteurizacin (proceso que se llev a la industrias con mltiples aplicaciones). Tambin tiene lugar la elaboracin de vacunas a nivel industrial y as como de antibiticos. A principios de este siglo, los boticarios, qumicos o los propietarios de herbolarios obtenan partes secas de diversas plantas, recogidas localmente o en otros continentes. stas ltimas se compraban a los especieros, que fundamentalmente importaban especias, pero como negocio secundario tambin comerciaban con productos utilizados con fines medicinales, entre ellos el opio de Persia o la ipecacuana de Suramrica. Los productos qumicos sencillos y los minerales se adquiran a comerciantes de aceites y gomas.

Los boticarios y qumicos fabricaban diversos preparados con estas sustancias, como extractos, tinturas, mezclas, lociones, pomadas o pldoras. Algunos profesionales elaboraban mayor cantidad de preparados de los que necesitaban para su propio uso y los vendan a granel a sus compaeros.

Algunas medicinas, como las preparadas a partir de la quina, de la belladona, de la digitalina, del centeno cornudo (Claviceps purpurea) o del opio (ltex seco de la adormidera Papaver somniferum), eran realmente tiles, pero su actividad presentaba variaciones considerables. En 1820, el qumico francs Joseph Pelleterier prepar el alcaloide activo de la corteza de la quina y lo llam quinina. Despus de este xito aisl diversos alcaloides ms, entre ellos la atropina (obtenida de la belladona) o la estricnina (obtenida de la nuez vmica). Su trabajo y el de otros investigadores hizo posible normalizar diversas medicinas y extrajo de forma comercial sus principios activos. Una de las primeras empresas que extrajo alcaloides puros en cantidades comerciales

fue la farmacia de T.H. Smith Ltd. en Edimburgo, Escocia. Pronto los detalles de las pruebas qumicas fueron difundidos en las farmacopeas, lo cual oblig a los fabricantes a establecer sus propios laboratorios. Tras estas nociones sobre la Historia de la Farmacia se podra decir que en un principio la profesin farmacutica estaba absolutamente ligada a la prctica mdica, sin embargo con el paso del tiempo estas profesiones se van separando.

Durante sus primeras etapas la prctica farmacutica no tena unas normas establecidas, por lo que muchos de los remedios utilizados slo conocan su composicin los propios fabricantes, consiguiendo as beneficios por la comercializacin del producto. Pero finalmente, todas las diferencias en la utilizacin y tratamiento de productos, as como las condiciones de venta, fueron reguladas y an hoy se siguen regulando. Aunque ya desde el principio esto se ve que es un gran negocio. Siempre habr gente que caiga enferma y que necesite seguir un tratamiento, el cual si no lo puede pagar, no podr disponer de l, y ah est en juego la propia salud del individuo.

LA INDUSTRIA FARMACUTICA MODERNA

Las compaas farmacuticas fueron creadas en diferentes pases por empresarios o profesionales, en su mayora antes de la II Guerra Mundial. Allen & Hambury y Wellcome, de Londres, Merck, de Darmstadt (Alemania), y las empresas norteamericanas Parke Davis, Warner Lambert y Smithkline & French fueron fundadas por farmacuticos. La farmacia de Edimburgo que produjo el cloroformo utilizado por James Young Simpson para asistir en el parto a la reina Victoria tambin se convirti en una importante empresa de suministro de frmacos. Algunas compaas surgieron a raz de los comienzos de la industria qumica, como por ejemplo Zeneca en el Reino Unido, Rhne-Poulenc en Francia, Bayer y Hchst en Alemania o Hoffmann-La Roche, Ciba-Geigy y Sandoz (estas dos ltimas ms tarde fusionadas para formar Novartis) en Suiza. La belga Janssen, la norteamericana Squibb y la francesa Roussell fueron fundadas por profesionales de la Medicina. Las nuevas tcnicas, la fabricacin de molculas ms complicadas y el uso de aparatos cada vez ms caros han aumentado segn las empresas farmacuticas enormemente los precios. Estas dificultades se ven incrementadas por la presin para reducir los precios del sector, ante la

preocupacin de los gobiernos por el envejecimiento de la poblacin y el consiguiente aumento de los gastos sanitarios, que suponen una proporcin cada vez mayor de los presupuestos estatales

LAS PRIMERAS MEDICINAS SINTTICAS

El primer frmaco sinttico fue la acetofenidina (ver Figura 1), comercializada en 1885 como analgsico por la empresa Bayer, de Leverkusen (Alemania) bajo la marca Phenacetin. El paracetamol, utilizado hoy como analgsico, deriv posteriormente de aquel compuesto.

El segundo frmaco sinttico importante, comercializado en 1899, fue el cido acetilsaliclico, sintetizado de forma pura por el doctor Felix Hoffmann dos aos antes en los laboratorios de investigacin de Bayer. Este frmaco se vendi en todo el mundo con el nombre comercial de Aspirina (Ver Figura 2), propiedad de Bayer, y supuso un tratamiento nuevo y eficaz para los dolores reumticos. A partir de estos primeros comienzos, Bayer creci hasta convertirse en la gigantesca empresa IG Farbenindustrie.

LAS FERMENTACIONES INDUSTRIALES

A principios del siglo XX, los cientficos ya haban adquirido una mejor comprensin de los fenmenos microbiolgicos y comenzaron a explorar nuevas formas de fabricar algunos productos. As, en 1917, Chaim Weizmann us por primera vez un cultivo microbiano puro en un proceso industrial para la fabricacin de acetona a partir de almidn de maz usando Clostridium acetobutylicum; de esta manera el Reino Unido pudo fabricar a partir de acetona el explosivo cordita durante la Primera Guerra Mundial. Tambin en la misma guerra, Alemania produjo glicerina por fermentacin para la fabricacin de nitroglicerina. As como la biotecnologa ayud a matar soldados, tambin contribuy a curarlos. En 1928, Alexander Fleming not que todas las bacterias que crecan en una placa de cultivo murieron alrededor de un moho que contaminaba al cultivo. Para 1938, Howard Florey y Ernst Chain de la Universidad de Oxford en Inglaterra, aislaron el compuesto causante de este efecto: la penicilina, pero fue hasta la dcada de 1940 que se logr la produccin de penicilina a gran escala, que probara ser altamente exitosa en el tratamiento de heridos durante la guerra. Fleming obtuvo el Premio Nobel de Medicina en 1945 gracias a este descubrimiento.

LA PRIMERA COMPAA BIOTECNOLGICA

En 1976, Herbert Boyer y Robert Swanson fundan Genentech, Inc., la primera compaa biotecnolgica, dedicada al desarrollo y comercializacin de productos basados en el ADN recombinante, y al ao siguiente Genentech reporta la produccin de la primera protena humana fabricada en una bacteria: la somatostatina. Por primera vez se usa un gen sinttico recombinante para producir una protena por lo que muchos consideran a este hecho como el inicio de la Era de la Biotecnologa. En 1978 Genentech se convierte en la primera empresa biotecnolgica en entrar a la bolsa de valores de Nueva York, y ese mismo ao, junto con The City of Hope National Medical Center, anuncia la produccin exitosa en laboratorio de insulina humana usando la tecnologa del ADN recombinante; en 1982 Genentech recibe aprobacin de la FDA para comercializarla, lo que la convierte en el primer medicamento de origen recombinante aprobado (Humulin). La biotecnologa moderna y la industria A partir del inicio de la Era de la Biotecnologa, los avances en el campo han sucedido a gran velocidad. As, en 1980 la Suprema Corte de los Estados Unidos determin que los organismos modificados genticamente podan ser patentados, lo que permiti a la compaa Exxon patentar un microoganismo (derivado del gnero Pseudomonas) diseado para comer petrleo y utilizarse en derrames. Ese mismo ao se consigue introducir exitosamente un gen humano (el que codifica para la produccin de interfern) en una bacteria y al ao siguiente Bill Rutter y Pablo Valenzuela publican un reporte en la revista Nature sobre un sistema de expresin en levaduras para producir el antgeno de superficie del virus de la hepatitis B y que llevara ms adelante a que la FDA aprobara a Chiron Corporation, en 1986, la produccin de la primera vacuna recombinante: Recombivax HB. Tambin en 1981, un grupo de cientficos de la Universidad de Ohio produjeron los primeros animales transgnicos al transferir genes de otros animales a ratones y en 1988 los bilogos moleculares Philip Leder y Timothy Stewart recibieron la primera patente para un animal genticamente modificado, un ratn altamente susceptible a desarrollar cncer. No tardaron en obtenerse otros medicamentos provenientes de tcnicas de biologa molecular: interfern alfa 2a (Roferon-A por Hoffmann-La Roche) en 1986, interfern alfa 2b (Intron A por Schering-Plough) en 1986, eritropoyetina (Epogen por Amgen) en 1989, filgrastim (Neupogen por Amgen) en 1991, interfern beta 1b (Betaseron por Chiron) en 1993, molgramostim (Leukin por Immunex) en 1994 e interfern beta 1a (Avonex por Biogen) en 1996, entre otros. En 1993 se funda la Organizacin de Industria Biotecnolgica (Biotechnology Industry Organization, BIO) de la fusin de otras dos organizaciones industriales ms pequeas, con la intencin de apoyar el avance de este sector.

ADN RECOMBINANTE Y TRANSGNESIS (1973)

Mediante esta tecnologa se combinan genes a nivel molecular para la obtencin de protenas nuevas. Estos genes recombinantes pueden ser transferidos selectivamente entre organismos. Esta tecnologa se basa en el aislamiento y caracterizacin de un gen de inters y su introduccin en el organismo que se busca modificar. La transformacin gentica mediante la tecnologa de ADN recombinante puede realizarse en bacterias u otros microorganismos, y ms recientemente en plantas. En este ltimo caso, la transformacin es mediada por Agrobacterium tumefasciens, en el cual la transferencia de genes ocurre mediante un plsmido que contiene el gen o los genes de inters, los que se integran al genoma de la planta. La expresin de los transgenes resulta en la produccin de protenas de inters. La aplicacin de la tecnologa del ADN recombinante ha sido usada para la produccin de compuestos en farmacia, productos teraputicos para uso mdico; incluyendo hormonas, protenas sanguneas y drogas; vacunas para uso humano y animal; alimentos derivados de cultivos genticamente modificados, con mejores caractersticas nutricionales y post-cosecha; plantas con mejor resistencia a enfermedades y de menor impacto ambiental; produccin de bioinsecticidas; produccin de enzimas para los procesos de fermentacin. La Figura 3 muestra 3 rutas posibles de modificacin gentica de clulas vegetales, microorganismos o plantas para la produccin de productos nuevos y derivados, susceptibles de comercializacin.

Figura 3. Representacin esquematica de diferentes rutas que la Biotecnologia ofrece para la obtencion de microorganismos y productos derivados nuevos, mediante manipulacin de celulas y modificacin de ADN de plantas y microorganismos

Dentro de los productos aplicados en salud humana, hay una larga lista de protenas de uso farmacutico (biofarmaceticos, anticuerpos recombinantes y subunidades para vacunas) producidas en plantas modificadas; por ejemplo la produccin de hormonas de crecimiento, albmina de suero humano, eritropoyetina, colgeno, IgG1, IgM, Inmunotoxina scFv-bryodina 1, protenas de la cubierta de los virus de Hepatitis y Rabia, todos estos producidos en tabaco transgnico; mientras que, en arroz se ha producido interfern- y 1- antitripsina, entre otros (Ma et al. 2003).

INGENIERA DE PROTENAS

Mediante esta tecnologa se modifican y mejoran las protenas mediante la construccin de protenas recombinantes como enzimas, anticuerpos y receptores celulares. La investigacin en esta rea se enfoca en la comprensin de la estructura y funcin de las protenas y el desarrollo de tecnologas asociadas para el diseo de protenas y pptidos, cuyas funciones sern tiles en la bsqueda de frmacos, procesamiento de alimentos y aplicaciones industriales. Por ejemplo, un estudio realizado por Yang et al. (2003) en la sntesis de la insulina recombinante, demostr que este proceso puede ser mejorado agregando un pptido sinttico durante el plegamiento de la molcula de insulina, permitiendo as una produccin ptima de insulina en biorreactores.

ANTICUERPOS MONOCLONALES

Los anticuerpos monoclonales provienen de la fusin de una clula productora de anticuerpos con una clula cancerigena, formando las clulas llamadas hibridomas. La clula inmune le da la caracterstica de producir un tipo particular de anticuerpos mientras que la clula cancerigena le otorga inmortalidad en cultivo; este hibridoma se divide

produciendo grandes cantidades de un solo tipo de anticuerpo, un anticuerpo monoclonal.

Actualmente los anticuerpos son producidos en clulas de mamferos, que actan como biorreactores, y recientemente se han usado plantas transgnicas productoras de anticuerpos que estn en el mercado. Los hibridomas se cultivan en grandes fermentadores, o inmovilizados en superficies slidas, donde los anticuerpos son segregados en el medio de cultivo, lo cual permite luego cosecharlos. Para que la unin antgeno-anticuerpo sea detectada y cuantificada, los anticuerpos son marcados enzimticamente, catalizando una reaccin especfica que resulta en un producto fcilmente identificable mediante ELISA. Por ejemplo, Goel y Kapil (2001) generaron, en ratones BALB/c, anticuerpos pertenecientes a un isotipo de las IgM que presenta actividad bactericida contra Acinetobacter baumanii en condiciones in vitro. La sntesis de biocompuestos de inters mediante los anticuerpos monoclonales es una herramienta muy til para el aprovechamiento de la biodiversidad y la aplicacin integrada de diferentes biotecnologas.

T Te en nd de en nc ci ia as s e en n e el l d de es sa ar rr ro ol ll lo o d de e c ca ap pa ac ci id da ad de es s b bi io ot te ec cn no ol l g gi ic ca as s io on na al le es s p pa ar ra a e el l ee i in ns st ti it tu uc ci l la a b bi io A An

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Informe preparado para la Comisin Econmica para Amrica Latina y el Caribe (CEPAL) y la Corporacin Andina de Fomento (CAF) Julio, 2004 W. Roca* Centro Internacional de la Papa (CIP)

Lima-Per

NANOBIOTECNOLOGA
En 1959 el fsico estadounidense Richard Feynman (que consigui el Premio Nbel en 1965), reflexionaba, nada a no ser la ausencia de las herramientas adecuadas, impedira un da a los cientficos trabajar directamente a la propia escala de los tomos. Y que este da sera una revolucin, ya que se saldra as de la fsica clsica para entrar en un universo regido por las lgicas singulares de las leyes cunticas. Desde hace unos 10 aos, el prefijo nano caracteriza los enfoques que en numerosos campos estudian y manipulan la materia a escala atmica. Los instrumentos adecuados empezaron a aparecer en los aos ochenta cuando algunos investigadores inventaron una nueva familia de microscopios que permitan a la vez observar y manipulear a los tomos uno a uno. Estas herramientas, primero confinadas en los laboratorios de fsica, empezaron a utilizarse en otras disciplinas. Poco a poco, a partir de 1995, se forj as el doble concepto de las nanociencias y de las nanotecnologas, en referencia al nanmetro. Esta unidad de longitud equivale a un mil millonsimo de metro, es decir, el intervalo ocupado por una decena de tomos de tamao medio. Desde hace una dcada, un invasivo trmino, nano se ha adueado del mundo de la investigacin. Este prefijo se infiltra en todos lados, y podemos decir entonces, nanopartculas, nanomquinas, nanomateriales, nanoelectrnica, nanoqumica, nanobiotecnologas, nanomedicinas, etc. Todos ellos designan enfoques de estudio y de manipulacin de la materia, tanto viva como inanimada, a escala atmica.

Ing. Osvaldo Jos Carrera* Presidente Comit de Biotica Sanatorio Franchin La Biotica y las Biotecnologas en medicina.

La importancia de la nanotecnologa farmacutica para la terapia con frmacos reside en la posibilidad de suministrar tanto frmacos de bajo peso molecular as como macromolculas como los pptidos, protenas y genes, de manera localizada o dirigida, hacia un cierto tejido de inters. La nanotecnologa farmacutica se enfoca al desarrollo de formulaciones de agentes teraputicos en nano-complejos biocompatibles entre los que se cuentan las nano- partculas, las nano-cpsulas, los sistemas micelares, los dendrmeros, los fulerenos o nanoestructuras de carbono, las huellas cunticas, los nanocomponentes derivados de la bioimitacin o biomimtica y los productos conjugados derivados de los anteriores. Estos sistemas se podran utilizar para dar direccin al suministro de los frmacos, hacia un tipo de clulas o tejido especficos. Tambin se podran utilizar para mejorar la biodisponibilidad oral, para sostener el efecto de frmacos o genes en un tejido seleccionado, para solubilizar frmacos para una administracin intravascular, y para mejorar la estabilidad de los agentes teraputicos contra la degradacin enzimtica de las nucleasas y proteasas, especialmente en el caso de los frmacos en forma de protenas, pptidos y cidos nucleicos. Aunque pudiera haber algunos factores de preocupacin con respecto al uso de nanopartculas in vivo, hay estudios en proceso para determinar la naturaleza y extensin de los efectos adversos. Se considera que las regulaciones deban aumentarse de tal manera que las nanopartculas sean seguras. La falta de evidencia acerca de los riesgos de la fabricacin de los nanomateriales genera una gran incertidumbre. Se considera que aun debe estudiarse ms la toxicidad, la epidemiologa, la persistencia y bioacumulacin de los nanomateriales que se fabrican. De cualquier manera, las perspectivas de aplicacin de la nanotecnologa en el sector de la salud y para el desarrollo de una medicina personalizada parecen ser excelentes.

La nanotecnologa es el rea del conocimiento que trata acerca del saber y el control de la materia en dimensiones cercanas al intervalo de 1 a 100 nanmetros. En esta escala la materia o materiales muestran caractersticas y aplicaciones nuevas a las ya tradicionales o conocidas. La nanotecnologa comprende la representacin grfica, la medicin, el modelado y la manipulacin de la materia en una escala nanomtrica. La nanotecnologa es el estudio y fabricacin de estructuras y dispositivos en una dimensin de nanmetros donde el prefijo nano significa 10-9. En otras palabras, significa la ingeniera de mquinas complejas, de materiales y de circuitos formados tomo por tomo o molcula por molcula. La nanotecnologa se orienta al estudio y desarrollo de mejores materiales, de dispositivos y de sistemas que explotan las nuevas propiedades que se

descubren de la materia. Propiedades nuevas que muestran la utilizacin de los materiales en los niveles fsicos, qumicos y biolgicos. Dentro de la nanotecnologa, los nanobots (nanotechnology robots), an por desarrollarse, seran la siguiente generacin de las nanomquinas. Los nanobots avanzados seran capaces de sensar y adaptarse a estmulos del medio ambiente como el calor, la luz, los sonidos, las texturas de las superficies y a los materiales qumicos. Adems, los nanobots seran capaces de ejecutar clculos complejos, de moverse, de comunicar y de trabajar en grupo; de conducir el ensamble de molculas y, de alguna manera, de repararse o aun de multiplicarse ellos mismos. Los nanobots incluiran pequeos dispositivos que puedan interaccionar con las clulas en el cuerpo humano, a un nivel molecular, para un diagnstico y para un tratamiento ms preciso de una enfermedad (Nanobot, 2005). La meta final de la nanotecnologa farmacutica es el desarrollo de componentes con funciones individuales que se integran en una arquitectura que cumple funciones mltiples, mquinas biomoleculares revolucionarias que se puedan ensamblar para formar nanodispositivos con mltiples grados de libertad; que sean capaces de, por ejemplo, reconocer clulas cancergenas, de diagnosticar las causas del cncer, de suministrar frmacos a un rgano o tejido especfico, de reportar la localizacin de un tumor y de reportar los resultados de una terapia (muerte de clulas cancerosas). Estos sistemas seran capaces de transferir informacin desde el nivel nano hacia un macromundo y seran tambin capaces de viajar en un nanoambiente. De estos sistemas se espera que sean muy eficientes, econmicos en una produccin masiva, que sean controlables y capaces de trabajar con poca supervisin. La visin es que estos sistemas ultra miniaturizados as como los dispositivos nanoparticulados se apliquen en los sistemas de produccin futuros y que tengan aplicaciones biomdicas e industriales. La figura 1 muestra una representacin esquemtica de uno de estos dispositivos hipotticos, aun no desarrollados, adherido a un glbulo rojo y liberando su carga de molculas de frmaco.

Considerando que los sistemas biolgicos interactan con su medio ambiente a travs de molculas y estructuras mltimoleculares que operan en la nanoescala, es fcil comprender porque la nanotecnologa tiene tanto potencial en el rea de la salud, en los productos farmacuticos y en la biotecnologa. Una gran parte de la maquinaria superficial de las clulas y de los organuelos intracelulares operan al nivel de nanmetros: regulando las acciones de las molculas mensajeras como las hormonas y los mediadores, manteniendo la estabilidad inica y fabricando una gran variedad de bloques de construccin para el organismo. Las molculas de tamao nanomtrico como los azcares y pptidos (1-10 nm) se transforman en molculas de tamao nanomtrico mayores (10-100 nm), para mediar funciones especficas, o son procesadas a travs de sitios activos de receptores y enzimas. De esta manera, es muy prometedor para el futuro de la farmacia y la salud la creacin y el control de la materia en forma de sistemas moleculares y dispositivos en la escala nanomtrica a travs de la integracin de la qumica, la fsica y la ingeniera molecular.

Se considera que existan dos diferentes maneras de abordar la nanotecnologa. La primera sera la produccin de arriba hacia abajo (Topdown) en la cual se toman materiales y se transforman en la estructura deseada, por ejemplo, a travs de maquinado y de gravado o impresin. La produccin de abajo hacia arriba (Bottom-up) se refiere a la construccin de estructuras orgnicas e inorgnicas tomo por tomo y molcula por molcula.

Entre los mtodos de produccin y procesamiento tenemos la manufactura de nanomateriales y la manufactura de nanosuperficies. En la primera se consideran la produccin de partculas con al menos una nanofase, la funcionalizacin de partculas y la integracin sencilla de nanocomplejos. En la manufactura de nanosuperficies se consideran la creacin de nanosuperficies, la funcionalizacin de superficies y la formacin de monocapas as como la nanoestructuracin y recubrimiento de superficies. Las nanopartculas con una nanofase se definen como partculas slidas con cuando menos una fase (cara, parte) con dimensiones entre 1nm y 100nm (Schfer et al., 2006).

Despus de la produccin y purificacin de las nanopartculas, hasta un nivel satisfactorio, puede ser necesario funcionalizarlas. Este es un proceso intermedio que les prepara para ciertas aplicaciones. Las nanopartculas pueden funcionalizarse de muchas diferentes maneras, entre ellas por recubrimiento y por modificacin qumica. La funcionalizacin es un paso extra en la preparacin que agrega costos a la cadena de produccin pero que puede tener tan marcados efectos que le hacen necesaria en algunos casos. La incorporacin en nanocomplejos, como una siguiente etapa de la nanomanufactura, significa el colocar nanomateriales (nanofases, nanofibras, nanopartculas) en forma de bloques de construccin para formar complejos que proveen de: a) propiedades especficas en la nanoescala. Por ejemplo la fluorescencia de las huellas cunticas (quantum dots), b) la actividad cataltica especfica de nanopartculas o propiedades especficas en la macroescala, por ejemplo propiedades mecnicas o tribolgicas.

LA NANOFARMACIA En la nanotecnologa, la nanofarmacia se podra definir como el uso de la nanotecnologa para la prevencin, diagnstico y tratamiento de enfermedades y heridas as como para mejorar la salud y funcionamiento del organismo humano y de otros seres vivientes. Las aplicaciones de la nanofarmacia incluiran el descubrimiento de nuevos agentes farmacuticos, el desarrollo de sistemas de liberacin de frmacos con localizacin o direccionamiento especfico; adems de la creacin de laboratorios en un chip que desempeen mltiples funciones in Vitro e in Vivo as como implantes y plataformas para tejidos.

A la nanomedicina as como a la nanofarmacia se les pueden asignar como propsito el seguimiento, control, construccin, reparacin, defensa y mejoramiento de los sistemas biolgicos humanos, trabajando desde el nivel molecular y utilizando la ingeniera de dispositivos y las nanoestructuras para lograr beneficios a la salud. En este contexto se incluyen componentes nanomtricos adecuados para integrarse en microdispositivos (que puedan tener una macro-interfase) o a un medio biolgico. El enfoque se centrara en las nanointeracciones dentro del marco de un dispositivo mayor o biolgicamente, dentro de un sistema celular o subcelular. El futuro de la nanofarmacia se derivara, por un lado, de las tecnologas basadas en chips y por el otro de los sofisticados materiales nanonizados as como de los ensambles qumicos que ya actualmente proveen de nuevas herramientas que contribuyen a la salud. Se espera poder disear elementos de diagnstico y biosensores, mejores tcnicas para obtencin de imgenes as como productos farmacuticos y tecnologas para la regeneracin y reparacin de los tejidos. Este desarrollo requerir de reglamentos que garanticen la seguridad y la confiabilidad de los productos al pasar de la escala de laboratorio a la produccin y a su utilizacin. El desarrollo de la nanofarmacia requiere de aumentar los conocimientos acerca del escalamiento de los procesos de manufactura y acerca de la caracterizacin de los materiales que permitan asegurar su reproducibilidad, un control de calidad efectivo y la eficiencia en los costos. Se considera que el desarrollo durante la prxima dcada estar centrado en la necesidad de nuevos materiales capaces de percibir mltiples procesos a la vez y de sistemas combinados que permitan el diagnstico y el suministro de frmacos (teragnsticos). En lo que se refiere a las tcnicas analticas y la formacin de imgenes, estos aspectos se ven como complementarios. Se espera que la nanotecnologa o las nanotcnicas permitan analizar tejidos normales y tejidos patolgicos, para identificar el inicio y el progreso de las enfermedades. Para este fin se espera en el futuro cercano: La identificacin de nuevas sondas biolgicas para obtener imgenes. Para observar en tiempo real e in vivo los procesos celulares y moleculares. La obtencin de mecanismos para trasladar desde modelos animales hacia aplicaciones clnicas las investigaciones de obtencin de imgenes moleculares utilizando herramientas de nanoescala. El desarrollo de dispositivos con propsito multimodal o mltiple para las tecnologas de obtencin de nano-imgenes; para el diseo de las nanoherramientas analticas aplicadas in vivo con elevada reproducibilidad, sensibilidad y confiabilidad. Estas herramientas seran un ejemplo para dar seguimiento a una enfermedad desde la etapa anterior a los sntomas. El

reto actual sera la deteccin simultnea de varias molculas, el anlisis de componentes subcelulares a nivel molecular as como el reemplazo de los anticuerpos como reactivos de deteccin.

Transportadores de frmacos y sistemas de liberacin de genes, supramoleculares autoensamblables. Nanopartculas y nanocpsulas. Tecnologas de anticuerpos. Conjugados de polmero-frmaco. Conjugados de polmero-protena y anticuerpo. Nanoprecipitacin y nanocristales. Tecnologas de emulsificacin. Tecnologa de los liposomas. Polimerizacin in situ. Reparacin e ingeniera de los tejidos. Tecnologas con dendrmeros. Impresin molecular.

De cualquier manera, la nanotecnologa farmacutica seguir requiriendo, aunque con nuevos argumentos, las tcnicas tradicionales como el desarrollo de formas de dosificacin, validacin de mtodos analticos y los estudios de estabilidad.

Una de las aplicaciones de la nanofarmacia o nanotecnologa farmacutica que ms promete es la encapsulacin de frmacos para dar direccin o localizacin al sistema de suministro de frmacos. Para muchos casos del uso de medicamentos se requiere obtener cantidades efectivas del frmaco en un tejido en particular, dentro del organismo, mientras

Se considera que la nanotecnologa, al enfocarse en lo ms pequeo, es un medio adecuado para la creacin o diseo de sistemas que puedan suministrar mejor los frmacos en reas especificas del organismo. El suministro de frmacos mediado por la nanotecnologa hara factible la

permeacin a travs de las membranas celulares, lo cual es crtico para impulsar el desarrollo de la medicina gentica.

Las estructuras en nano-dimensiones se cree promuevan la generacin de nuevos mecanismos de suministro de los frmacos. Las nanoestructuras tendran la ventaja de ser capaces de evitar el sistema inmune y de atravesar algunas barreras que el cuerpo utiliza para evitar la penetracin de sustancias extraas o no deseadas; barreras como la hemato-enceflica y la pared del tracto gastrointestinal. Se considera que los compuestos farmacuticos reformulados como nanopartculas tambin podran ser biolgicamente ms activos, debido a su rea superficial muy grande que podra aumentar su biodisponibilidad. Algunas empresas farmacuticas han empleado las tcnicas para nanoencapsular frmacos. Las nanocpsulas podran ser dotadas de funciones especficas (funcionalizadas) para adherirse o unirse a ciertas partes del organismo. Ms aun, podran disearse de tal manera que fueran activadas por un disparador externo, por ejemplo un pulso magntico o ultrasonido. Estos sistemas farmacuticos dotados de ciertas funciones particulares (funcionalizados) se han denominado sistemas farmacuticos inteligentes (Nanomedicine).

Algunos ejemplos de la utilizacin de nanotecnologa en los sistemas de suministro defrmacos se incluyen al menos en dos reas: tecnologas basadas en nanopartculas y lastecnologas basadas en materiales nanoestructurados (Aston et al., 2005). Entre las tecnologas basadas en nanopartculas tenemos: Los liposomas furtivos o encubiertos (stealth), estos liposomas son fabricados por Alza/J&J y funcionan como transportadores de frmacos. Su objetivo es mantener o aumentar el tiempo de residencia del sistema suministro de frmacos en la circulacin sangunea. La tecnologa de nanocristales es utilizada por la empresa Elan. En este caso los frmacos se reducen hasta partculas de tamao nanomtrico a travs de molienda en hmedo. Estos nanocristales se formulan con estabilizadores para prevenir o evitar la reaglomeracin. El objetivo de los nanocristales es el aumentar la solubilidad de los frmacos. La tecnologa Bioral, de la empresa BioDelivery Sciences International se basa en la utilizacin de cocleados como vehculos para la administracin de frmacos. Los cocleados son precipitados estables obtenidos de la interaccin de fosfolpidos con un catin. El objetivo de esta nanotecnologa es la administracin oral de frmacos que de otra manera solo podran administrarse en forma inyectable as como de vacunas.

La tecnologa de las nanopartculas de fosfato de calcio, de la empresa BioSante tiene como objetivo el suministro de protenas, por ejemplo la insulina, adems de utilizarse como adyuvante de vacunas. Las tecnologas Nanocap System, Medicelle System y NanoCoat System, de la empresa Nanocarrier son tecnologas de nanopartculas micelares basadas en polmeros. Su objetivo es mejorar la solubilidad de los frmacos y su utilizacin como medio de suministro de DNA y protenas. Entre las tecnologas basadas en materiales nanoestructurados tenemos:

La tecnologa del BioSilicn, de la empresa pSivida/pSimedica, utiliza micropartculas de Biosilicn u otras estructuras de BioSilicn como telas, fibra e implantes que contienen de manera nanoestructurada frmacos o agentes teraputicos. Se utilizan para mejorar la solubilidad de frmacos hidrofbicos, para controlar la velocidad de liberacin de una amplia variedad de compuestos; para suministrar frmacos a travs de productos ortopdicos y otras aplicaciones. Podra tener potencial para utilizarse en sistemas inteligentes de suministro de frmacos. La tecnologa DebioSTAR, de la empresa DebioTECH, Se fundamenta en membranas de silicn porosas, como parte de un dispositivo implantable.

NANOTECNOLOGAS FARMACUTICOS

APLICADAS

LOS

PRODUCTOS

Algunos ejemplos de la aplicacin de la nanotecnologa farmacutica, circunscritos a algunos elementos que sobresalen del conjunto, son las nanopartculas, los dendrmeros, las nanoestructuras de carbn, las huellas cunticas y la bioimitacin o biomimtica. De estos, dada la amplitud del tema, se mencionan solo brevemente las nanopartculas. Las nanopartculas son el resultado de la continua reduccin del tamao de las partculas que ya se hacia en la tecnologa farmacutica convencional. La nanonizacin de las partculas se considera el primer paso o la puerta de entrada a la nanotecnologa farmacutica. La tecnologa de las nanopartculas inici su desarrollo como una estrategia para atacar problemas de formulacin asociados con frmacos que son poco solubles en agua o que son poco solubles tanto en agua como en lpidos. Las nanopartculas son partculas slidas coloidales en un intervalo de tamao de 1 nm a 1000 nm que se utilizan como agentes de dosificacin de frmacos. La reduccin de las partculas de los frmacos al nivel de nanoescala aumenta la velocidad de disolucin y el lmite de saturacin de la solubilidad, lo cual permite un mejor desempeo del frmaco in Vivo (Kharb et al., 2006).

Entre las ventajas de usar frmacos nanoparticulados se encuentran una mejor biodisponibilidad, una disminucin de la variabilidad en la respuesta obtenida entre los estados de ayuno y no-ayuno y una rpida instalacin del efecto teraputico en la administracin oral. La utilizacin de frmacos nanoparticulados permite alcanzar niveles de sobresaturacin que solo podran ser logrados cuando se pasa de un frmaco cristalino a uno amorfo. El tamao de partcula juega un papel importante en la velocidad de disolucin de los frmacos. La reduccin del tamao de partcula puede aumentar la velocidad de disolucin y con esto dar una mayor biodisponibilidad. Por ejemplo, la biodisponibilidad absoluta del frmaco donazol en forma de nanopartculas fue de 82.310.1%, comparada con la biodisponibilidad de 5.11.9% de una suspensin convencional de donazol (Shah et al., 2006). Las nanopartculas lipdicas slidas (SLN) se desarrollaron a principios de 1990, como una alternativa a sistemas de frmacos como las emulsiones, liposomas y a las nanopartculas polimricas. En comparacin con los liposomas y las emulsiones las partculas slidas poseen algunas ventajas, por ejemplo, proteccin del principio activo incorporado contra la degradacin qumica y una mayor flexibilidad en la modulacin en la liberacin de los frmacos y compuestos en general. Sin embargo, entre las ventajas actuales de los liposomas y de las emulsiones se cuenta l que sus componentes se reconocen como excipientes bien tolerados por el organismo y que pueden producirse a gran escala, lo que es un requisito para su produccin industrial. En la fabricacin de las SLN se conjuntan las ventajas de las partculas slidas con las de las emulsiones y las de los liposomas. Las SLN se han generado simplemente intercambiando el lpido lquido de las emulsiones por un lpido slido, lo que significa que las SLN son slidas a temperatura ambiente as como a la temperatura del cuerpo.

Las ventajas de la utilizacin de las nanopartculas lipdica como transportadores de frmacos son la utilizacin de lpidos fisiolgicos para su preparacin, la posibilidad de evitar el uso de solventes orgnicos en su preparacin y un espectro de utilizacin amplio ya que se utilizan para la administracin sobre la piel, por va oral y por va intravenosa. Adems, se puede tambin que sea una ventaja el que existan mtodos de fabricacin bien establecidos como la homogeneizacin a presin elevada. Las nanopartculas lipdicas presentan una mejor biodisponibilidad, protegen las molculas de frmacos susceptibles de degradarse bajo la influencia de agentes externos como la luz y el agua y podran ser de liberacin prolongada para frmacos poco solubles en agua incorporados en la matriz lipdica slida. Entre sus desventajas estaran el crecimiento de las partculas, una tendencia hacia una gelificacin impredecible, cambios inesperados en sus transiciones polimrficas y su inherente baja capacidad de incorporacin de los frmacos debido a la estructura cristalina del lpido slido (Jores et al., 2003; Jores et al., 2004).

Una nueva generacin de nanopartculas lipdicas slidas son los transportadores lipdicos nanoestructurados (NLC). Estos sistemas de transporte de frmacos tendran las mismas ventajas de las SLN. Sin embargo los SLC minimizan o evitan algunos posibles problemas asociados a las SLN. Entre estos posibles problemas se encuentran una baja capacidad de carga, segregacin durante el almacenamiento y el alto contenido de agua de las dispersiones de las SLN. A diferencia de un estado al menos parcialmente cristalino de la fase lipdica en las SLN, en los NLC presentan una matriz slida lipdica menos ordenada. Esta circunstancia se considera un prerrequisito para aumentar la capacidad de carga de los frmacos en el seno de las nanopartculas. En trminos generales, las nanopartculas incorporan a los frmacos entre las cadenas de los cidos grasos, entre las capas lipdicas o en las imperfecciones conocidas como depsitos amorfos del frmaco. Cuando se utilizan como fase lipdica molculas espacialmente muy parecidas, por ejemplo monogliceridos de cidos de un elevado grado de pureza como la triestearina, la carga de frmaco es muy limitada. Podra ocurrir la segregacin del frmaco en un intervalo de horas o das, debido a la formacin de una estructura cristalina (Mller et al., 2002).

Las molculas amfiflicas como los fosfolpidos forman espontneamente membranas formadas por bicapas que pueden convertirse en vesculas. Estas vesculas se denominan liposomas. Los liposomas se forman espontneamente cuando ciertas mezclas de fosfolpidos se dispersan en una fase acuosa. Los liposomas son estructuras esfricas formadas por una o mas capas que contienen en su interior un espacio acuoso separado del resto del medio, tambin acuoso, en que se encuentran suspendidos. La bicapa que forma la esfera sirve de barrera, por lo que siempre se ha considerado que fuera un vehiculo adecuado para transportar frmacos. Esta barrera protegera a los frmacos de su degradacin en el medio biolgico en que encontraran despus de ser administrados. Al estar formados por enlaces no-covalentes, los liposomas pueden manipularse con facilidad para alterar su composicin qumica, la fluidez de las cadenas hidrocarbonadas, la hidrofilicidad de su superficie y su tamao promedio. Los sistemas de liberacin de frmacos con liposomas se han utilizado para mejorar el efecto teraputico de frmacos muy potentes. Actualmente la mayora de las formulaciones de liposomas se considera que reducen la toxicidad y que en alguna medida aumentan la concentracin de los frmacos en el sitio de accin. Las formulaciones actuales conteniendo liposomas inhiben su rpida eliminacin biolgica a travs del control de su tamao, de su carga e hidratacin superficial. La experiencia clnica

obtenida con estos sistemas de liberacin de frmacos permite el diseo de liposomas localizados activamente en ciertos tejidos o clulas, con o sin molculas que reconocen una determinada localizacin, colocadas sobre la membrana del liposoma. Los frmacos que han mejorado su seguridad y eficacia con los liposomas incluyen a los agentes contra el cncer, a los antivirales, los antifngicos, los antibiticos, las vacunas y los agentes teraputicos genticos (Lian y Ho, 2001).

Hasta el 2003 se haban comercializado 4 formulaciones de liposomas, una con agentes antifngicos y tres con frmacos antitumores. Entre ellas es quiz la tecnologa de los liposomas STEALTH una de las mas conocidas. Esta tecnologa es relativamente nueva y provee de un medio pasivo de localizar frmacos encapsulados, en lugares especficos de enfermedad. Liposomas de <50 nm fabricados con colesterol y lpidos con transiciones de fase elevadas resistieron la degradacin durante su circulacin en sangre por varias horas. El tiempo de circulacin de los liposomas se aument tambin al introducir en su estructura algunos glicolpidos. El aumento en el tiempo de circulacin mejora su biodistribucin hacia los tumores. Sin embargo, los mejores resultados se obtuvieron cuando se unieron covalentemente, sobre la superficie de los liposomas, grupos de polmero hidroflico. El Doxil es una formulacin de liposomas pegilados (injertados en su superficie con polietilenglicol) conteniendo doxorubicina. Este tipo de liposomas tiene injertados particularmente segmentos de un polmero hidroflico, el metoxipolietilenglicol. El dimetro promedio de los liposomas permite un balance con capacidad de transporte de frmaco, con un tiempo de circulacin mayor y que permite la extravasacin hacia los tumores, a travs de los defectos y barreras endoteliales en los tumores (Martin y Huang, 2003).

Un mtodo alterno para la administracin y mejora de la eficiencia teraputica de protenas como el interfern-gama (IFN-, del grupo de las citocinas, que son una amplia variedad de protenas de familias estructurales muy diversas y de protenas individuales que son conocidas por jugar algn papel en la funcin del sistema inmune) es su transporte o carga sobre nanopartculas protenicas, por ejemplo nanopartculas de albmina. Las nanopartculas presentan un elevado nivel de transporte hacia el interior de las clulas en comparacin con las micropartculas, adems de presentar, en trminos generales, mejores caractersticas de liberacin prolongada que otros elementos como los liposomas. Las nanopartculas de albmina pueden incorporar o cargarse con una amplia variedad de frmacos hidroflicos, de una manera relativamente no especfica, incluyendo molculas catinicas como el ganciclovir y aninicas como los oligonucleotidos antisentido. Las nanopartculas protenicas se

consideran medios de transporte biodegradables que se pueden preparar fcilmente por coacervacin o a travs de procesos de desolvatacin controlada, evitando la utilizacin de solventes orgnicos y con esto, minimizando las posibilidades de degradacin (Segura et al., 2005). Las nanopartculas de polmeros biodegradables se consideran importantes para los sistemas de liberacin de frmacos ya que son muy estables, se adaptan fcilmente a los procesos industriales de fabricacin y se pueden modificar en sus superficies para modular sus propiedades. Estas nanopartculas se pueden disear para controlar tanto la velocidad de liberacin de los frmacos as como para controlar su localizacin en algn lugar especfico del organismo. La modulacin de sus caractersticas se logra a travs de las caractersticas del polmero y de la composicin qumica de la superficie de las mismas. Por ejemplo, se ha encontrado que estos nanotransportadores se pueden concentrar preferentemente en ciertos sitios como los tumores en virtud de una mayor permeabilidad y retensin en el tumor. Las nanopartculas que se han concentrado en el tumor serviran como depsito de frmacos los cuales, dependiendo de sus caractersticas, proveeran de un suministro constante al tumor. Para prolongar el tiempo de circulacin de las nanopartculas en la sangre se han implementado diferentes estrategias. Entre ellas se han utilizado recubrimientos hidroflicos. Todo esto con el fin de facilitar la localizacin pasiva en el tumor. La mayora de estos sistemas de liberacin de frmacos utiliza cadenas de poli (etilenglicol)/poli (xido de etileno), para modificar la superficie de las nanopartculas. La unin se realiza a travs de adsorcin fsica, durante la formacin de la partcula, o a travs de un enlace covalente con el polmero que forma el ncleo de la nanopartcula (Shenoy et al., 2005). Aunque las micelas polimricas no son realmente una nanopartcula sino ms una nanoesfera, se pueden catalogar dentro del mismo grupo de las nanopartculas de polmeros biodegradables. Una micela polimrica es un ensamble supramolecular de copolmeros en bloque con una estructura de ncleo-cascarn. El ncleo donde se cargan los frmacos se puede rodear con una capa externa de polietilenglicol, para hacerlo ms biocompatible. Recientemente se ha iniciado el desarrollo de micelas con ciertas funciones (micelas funcionalizadas) como la localizacin activa en ciertos tejidos especficos y con sensibilidad a ciertos estmulos fsicos y qumicos. Estas micelas se disean con la finalidad de aumentar la eficacia de los frmacos cargados as como para minimizar los efectos secundarios (Nishiyama et al., 2005). Acerca de las posibilidades de absorcin y efecto teraputico de los sistemas con nanopartculas, se acepta de manera general que la absorcin aumenta conforme se disminuye el tamao de las partculas. Estudios con partculas de poliestireno de entre 50 nm y 3 m muestran que la mxima absorcin ocurre con partculas en el intervalo de 50-100 nm. Partculas de ms de 1 m quedan atrapadas en los parches de Peyer. Estas no pasan a

la circulacin sistmica ya que los nodos linfticos actan como filtros, retenindolas. La carga de la superficie de las partculas es un factor que aun existiendo permite la absorcin de las nanopartculas. Sin embargo, la absorcin de partculas con carga superficiales es menor comparada con la mayor absorcin de partculas no-inicas e hidrofbicas.

Los ligandos agregados para dar una interaccin selectiva y de mayor afinidad con los receptores de las clulas epiteliales producen generalmente una mayor captacin de las nanopartculas por un rgano o tejido especfico. Sin embargo, esto no necesariamente se traduce en una mayor translocacin o traslado al interior y exterior de las clulas. Otro factor importante en la captura y translocacin de las nanopartculas, despus de su administracin oral, es su estabilidad fsica y qumica. Los sistemas coloidales (dispersiones de nanopartculas) son poco estables. Esta inestabilidad puede provocar su agregacin y floculacin, lo cual alterara su tamao de partcula y con esto sus posibilidades de captura y translocacin. La estabilidad qumica del ncleo de las nanopartculas as como de los ligandos colocados sobre su superficie es de vital importancia para su biodegradabilidad, para la liberacin de los frmacos encapsulados y para asegurar la unin del vehculo que transporta el frmaco a los receptores. Aun despus de la absorcin se debe considerar que existe una situacin compleja en la cual las nanopartculas deben viajar a travs de los capilares sanguneos y que debe haber un proceso postabsorptivo que podra complicar y limitar el resultado que se obtiene de ellas. Algunos de los factores importantes involucrados en la administracin oral de las nanopartculas que enfatizan la parte postabsoptiva de la translocacin o transado incluyen (Florence, 2005): El flujo en el tracto gastrointestinal Acceso y adhesin a las clulas M de los parches de Peyer o enterositos Paso al interior del sistema linftico mesentrico Flujo dentro de los vasos linfticos y el entrampamiento en los nodos linfticos Transporte entre el sistema linftico y la sangre Otros factores a considerar son el flujo de la sangre, la adhesin a las paredes capilares, la extravasacin y flujo en los tejidos, el flujo en las bifurcaciones de los vasos, el movimiento hacia el interior de los tumores, la presencia de reas de los tumores con fugas en el suministro capilar. Cada va de transporte involucra una secuencia compleja del movimiento de las nanopartculas, la mayora de ellas involucrando los sistemas de transporte de la sangre y el sistema linftico.

Nanotecnologa Farmacutica Villafuerte-Robles Leopoldo 1 Departamento de Farmacia de la Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional de Mxico. Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas, C. P. 11340, Distrito Federal, Mxico.

MICROARREGLOS DE ADN

Los microarreglos consisten en fragmentos de ADN adheridos a lminas de vidrio (chips). Estos biochips son hibridizados con muestras de cDNA marcados con fluorescencia. Luego de la hibridacin los chips son ledos con un detector de fluorescencia de alta velocidad y la intensidad de cada fragmento es cuantificada. La cantidad y la identidad de cada gen, presente en la muestra hibridizada, son reveladas por la intensidad y localizacin de cada fragmento. Luego los datos generados son analizados usando herramientas bioinformticas. Se aplican en diagnstico de enfermedades mediante la deteccin de mutaciones, tales como SIDA, cncer, otros retrovirus, enfermedades bacterianas. Mediante el anlisis de expresin gentica, tambin provee datos de molculas blanco presente slo durante la enfermedad para la produccin de frmacos y pueden servir para una deteccin rpida de compuestos qumicos usados en la guerra biolgica. Por ejemplo en papa, se proyecta un estudio para desarrollar un microchip para detectar expresin diferencial durante condiciones de estrs, permitiendo as identificar genes implicados en rutas bioqumicas de inters.

Utilizando microarreglos, Aharoni et al. (2000), identificaron el gen alcohol aciltransferasa de fresa (SAAT), el cual juega un rol crucial en la biognesis del sabor durante la maduracin del fruto, estudiando su expresin bajo diferentes condiciones.

PROTEMICA

La protemica es el estudio de un grupo completo de protenas (proteoma) producidas por una clula o un organismo en particular y en un momento determinado, con la finalidad de identificar el nmero total de genes en un genoma dado, identificar la funcin del proteoma, caracterizar las modificaciones post-transduccionales de las protenas, localizar cada protena a nivel sub- celular y comprender las interacciones proteicas mediante un mapa tridimensional de todas las interacciones proteicas de la clula. El estudio protemico involucra la separacin y aislamiento de las protenas de una muestra, usando electroforesis uni y bidimensional, y la identificacin y caracterizacin proteica mediante el uso de secuenciamiento Edman y/o espectrofotometra de masa, estos datos son almacenados en una base de datos para un anlisis bioinformtico (Fig. 5).

Figura 5. Estudios realizados empleando la tecnologa protemica La protemica tiene aplicacin en la biofarmacutica y la toxicologa para:

- El anlisis de co-expresin de las protenas para la identificacin de vas biolgicas. - El desarrollo de nuevas drogas, que regulen la produccin de protenas especificas durante el desarrollo de la enfermedad. - La seleccin de nuevas drogas mediante la verificacin de la eficacia y efectos secundarios; anlisis de toxicidad. La identificacin de nuevos marcadores para diagnostico de enfermedades, mediante el estudio de expresin proteica durante el desarrollo de la enfermedad. - El control de alimentos dietticos o la clasificacin de productos para el consumo humano.

Sobre la aplicacin de la protemica a la produccin de nuevos frmacos, se puede citar el trabajo de Jacbos et al. (2002), en Catharanthus roseus, que es fuente de importantes drogas (alcaloides) antitumorales (vinblastina y vincristina); mediante un enfoque protemico. Se detectaron aproximadamente 2000 protenas involucradas en la biosntesis de estos alcaloides. La identificacin de estas protenas puede llevar a un mejor entendimiento de las vas metablicas involucradas en biosntesis de alcaloides, lo cual permitir desarrollar estrategias para incrementar la produccin de vinblastina y vincristina en C. roseus (vincapervinca de Madagascar o vicaria).

METABOLMICA

La metabolmica est basada en el anlisis integral y cuantitativo de todos los metabolitos en una muestra con el objetivo de realizar perfiles de los metabolitos hallados en los diferentes estatus fisiolgicos (usando cromatografa de gases, resonancia magntica nuclear o espectroscopia de masas), lo cual permite identificar los metabolitos asociados en cada estatus fisiolgico. Estos metabolitos pueden servir de gua para el descubrimiento o elucidacin de nuevas vas metablicas envueltas en el desarrollo de enfermedades, o en la respuesta del paciente al tratamiento de las mismas; o para la identificacin y cuantificacin de biocompuestos o ingredientes activos aislados de la biodiversidad.

Comparando los datos de los perfiles metablicos con bases de datos ya sea de genes (genomas), transcriptos de genes (transcriptomas), protenas (proteomas) mediante tcnicas bioinformticas, se puede hallar la funcin

que estos metabolitos cumplen dentro de la clula, a que genes estaran asociados y en que vas metablicas estaran involucradas. Luego estos metabolitos pueden ser utilizados como molculas blanco (targets) para realizar los bioensayos para el descubrimiento de nuevos frmacos derivados de la bioprospeccin de productos naturales. (Fig. 6).

Figura 6. Componentes de herramientas metabolomicas

una

investigacin

empleando

Estos metabolitos tambin pueden cumplir la funcin de marcadores biolgicos clnicos de tal manera que pueden servir para el desarrollo de nuevas tcnicas de diagnstico de enfermedades. Conociendo los metabolitos involucrados en las vas metablicas importantes en la obtencin de metabolitos secundarios, se puede optimizar la formulacin de medios de cultivo para obtencin de stos. Nuevamente, con la ayuda de la bioinformtica, se analizan los datos de los mapas genmicos, y as identificar la funcin de genes que an no se conocen y de genes metablicos, caracterizacin funcional de organismos y expresin gentica diferencial. Dentro del uso de datos metabolmicos para el estudio de actividad biolgica relevante a la industria de alimentos, de Vos et al. (2002) presentan un trabajo relacionado a la produccin de flavonoides en tomate transgnico y no transgnico comparando los perfiles metablicos de

flavonoides, mediante un anlisis metabolmico empleando tcnicas de separacin e identificacin. Se encontr que la acumulacin de flavonoides estaba presente en forma de glucsidos diferentes y que la mayora de los flavonoides inducidos en las plantas transgnicas fueron buenos antioxidantes. Este tipo de estudios es til para el mejoramiento de cultivos con mayores concentraciones de sustancias nutritivas, y para la produccin de alimentos funcionales.

BIORREACTORES
Un biorreactor es un entorno cerrado y controlado para dirigir catalizadores biolgicos con la finalidad de obtener molculas de inters con la mxima eficiencia. (Figura 7)

Dentro de las aplicaciones de los biorreactores tenemos:

- Animales y plantas transgnicas usados como biorreactores para la produccin de protenas teraputicas (fibringeno, colgeno) del plasma humano, o en leche de animales transgnicos: ratones, cerdos, cabras. - Produccin de anticuerpos monoclonales en la leche de animales transgnicos: anticuerpos monoclonales anticancergenos. - Anticuerpos y protenas humanas producidas en plantas. - Produccin de metabolitos secundarios en biorreactores vegetales. - Sistema de cultivos celulares para la produccin de tejido humano.

Yang et al. (2003), desarrollaron un sistema de biorreactor para extraer, transportar y colectar metabolitos secundarios, de inters comercial, a partir de clulas vegetales, manteniendo su viabilidad. La produccin se dirigi hacia: betalaninas inicas, betanina en su mayora cargadas negativamente, desde clulas de Beta vulgaris y alcaloides inicos, ajmalicina y yombina cargadas positivamente desde clulas de Catharanthus roseus. Estos sistemas de produccin son importantes dado que optimizan la eficiencia y mantienen la viabilidad celular, lo que permite reutilizar el material biolgico.

Figura 7 Biorrecator de Tanque agitado

QUMICA COMBINATORIA

Es la industrializacin de la sntesis qumica orgnica con ayuda de la robtica y la bioinformtica, para la bsqueda de nuevas sustancias activas. Consiste en procedimientos de sntesis qumica optimizados donde pequeas unidades qumicas son combinadas entre s para formar un gran nmero de nuevas sustancias con diferentes aplicaciones; luego son purificadas mediante HPLC u otra tcnica; finalmente su estructura y propiedades son estudiadas, as como las interacciones con enzimas y otros sitios de accin, mediante programas de modelamiento molecular y/o mediante ensayos con molculas blanco. (Fig. 12)

Dentro de las aplicaciones ms importantes tenemos:

- El descubrimiento de sustancias activas para produccin de nuevos frmacos o insecticidas - La bsqueda de molculas blanco para drogas, molculas envueltas en mecanismos moleculares no comprendidos an, como la apoptosis, transduccin de seales, etc. - Produccin de nuevos frmacos e insecticidas - Molculas involucradas en procesos celulares

- Materiales funcionales: material biodegradable, electrnica

Hong et al. (1998), desarrollaron una librera combinatoria a partir de la cual sintetizaron un decapptido que inhiba irreversiblemente el crecimiento de Candida albicans, presentado un amplio rango de actividad antibacterial pero no hemoltica. El blanco de este pptido fue ubicado en la membrana del microorganismo. Los cambios en la secuencia de aminocidos del pptido identificado pueden proveer informacin valiosa sobre los factores que afectan la actividad antimicrobiana. Con esto se puede acelerar considerablemente la identificacin y sntesis de compuestos de inters.

BIOINFORMTICA

Es un campo interdisciplinario que involucra ciencias biolgicas, ciencias informticas, matemticas y estadstica para analizar los datos de sistemas biolgicos, el contenido y arreglo de genes en los genomas, para predecir la funcin y estructura de macromolculas. Emplea y desarrolla tecnologas, algoritmos, interfases y otros- que permiten que las computadoras puedan manejar toda la compleja informacin biolgica almacenada en base de datos (Fig. 8).

Figura 8. Pasos que comprende la investigacin mediante la bioinformatica

T Te en nd de en nc ci ia as s e en n e el l d de es sa ar rr ro ol ll lo o d de e c ca ap pa ac ci id da ad de es s b bi io ot te ec cn no ol l g gi ic ca as s io on na al le es s p pa ar ra a e el l ee i in ns st ti it tu uc ci l la a b bi io A An

a ap pr ro ov ve ec ch ha am mi ie en nt to o d de e od di iv ve er rs si id da ad d e en n l lo os s p pa a s se es s nd di in na a d de e l la a

C Co om mu un ni id da ad d

Informe preparado para la Comisin Econmica para Amrica Latina y el Caribe (CEPAL) y la Corporacin Andina de Fomento (CAF) Julio, 2004 W. Roca* Centro Internacional de la Papa (CIP) Lima-Per *Colaboradores: C. Espinoza, A. Panta, G. Trujillo

FARMACIA ROBOTIZADA
Con los robots de farmacia la recepcin diaria de pedidos es solucionada de manera muchsimo ms simple y rpida. Se sitan en la cinta transportadora de recepcin los envases, identificndolos de manera manual o mediante el laser automticamente. Con el Robot Apostore la recepcin diaria de pedidos es realizada de forma simple y rpida. Los envases son colocados en la cinta de recepcin e identificados mediante escaneo manual o automtico. La unidad de transferencia los coloca entonces en las bandejas interiores mviles. Durante su recepcin, las medidas de los envases son registradas por la unidad de lectura 3-dimensional. Para garantizar un rendimiento superior y una mxima fiabilidad, los robots Apostore estn equipados con 2 brazos automticos. Cada uno tiene acceso a todos los medicamentos y los dos funionan de forma independiente, asegurando la continuidad delfuncionamiento en caso de que uno se parara.

Su perfecta coordinacin en cada momento est garantizada por la unidad de control. La insuperable densidad del almacenamiento se consigue mediante el sistema 3-dimensional de colocacin (hasta 3 envases en profundidad). Cada envase, incluido el situado al fondo, es directamente accesible para los brazos del robot. Apostore es tambin el nico robot que permite las entregas mltiples (de varios envases al mismo tiempo).

CONCLUSIONES

El significado de la nanotecnologa para la terapia con frmacos reside en la posibilidad de suministrar tanto frmacos de bajo peso molecular as como macromolculas como los pptidos, protenas y genes, de manera localizada o dirigida, hacia un cierto tejido de inters. El tamao de estos sistemas de suministro de frmacos en un intervalo de nanmetros ofrece ciertas ventajas. Debido a su tamao subcelular, las nanopartculas pueden penetrar profundamente en los tejidos a travs de capilares muy finos, atravesando la capa interna del epitelio, adems de ser capturados eficientemente por las clulas. Esto permite un suministro eficiente de los agentes teraputicos hacia los sitios particularmente escogidos en el cuerpo. Modulando las caractersticas de los polmeros tambin se puede controlar la liberacin del agente teraputico desde las nanopartculas, para lograr el nivel deseado del agente teraputico en el tejido escogido y por la duracin requerida para una ptima eficacia teraputica. Ms aun, las nanopartculas pueden ser suministradas a sitios escogidos distantes ya sea por el suministro localizado utilizando un catter, con un procedimiento invasivo mnimo o podran conjugarse a un ligando bio-especfico que le pueda dirigir hacia un tejido u rgano seleccionado.

La nanotecnologa es considerada como un rea de trabajo excitante, particularmente para la salud y para los sistemas de suministro de frmacos. El potencial que tiene para beneficiar la salud es enorme. En muchos casos se considera como un paso valioso en el proceso de desarrollo de nuevos medicamentos y dispositivos para la salud. Las nanopartculas tienen un gran potencial de utilizacin en sistemas de suministro de frmacos capaces de suministrar muchos agentes teraputicos de manera dirigida y/o sostenida. Los temas relacionados con los sistemas de suministro de frmacos se vuelven cada vez ms importantes con los frmacos ms potentes y especficos derivados del

conocimiento del genoma humano. Estos agentes teraputicos requieren de un suministro y un mecanismo ptimos para liberarlos en los tejidos escogidos, sin reducir su eficacia teraputica. Conforme se entiendan mejor las condiciones fisio-patolgicas de lasenfermedades, el diseo de los sistemas de suministro de frmacos se puede adecuar para optimizar la eficacia teraputica. Se considera que las nanopartculas, debido a la versatilidad de su formulacin, propiedades de liberacin sostenida, tamao subcelular y biocompatibilidad con el tejido y las clulas sean un sistema muy prometedor para cumplir este objetivo.