ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MORFOLOGICAS EMBRIOLOGIA HUMANA

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PRCTICA 1 APLICACIN DE LA GENTICA HUMANA EN EL DESARROLLO PRENATAL.

INTRODUCCIN: Los cromosomas fueron vistos y nombrados por primera vez en el siglo XIX, en 1959 Lejeune, fue el primero en descubrir un cromosoma extra en los pacientes con sndrome de Down. En el mismo ao Ford et al (1959) reportaron pacientes con un desarrollo sexual anormal y talla baja con cariotipo 45,X. La citogentica ha evolucionado y actualmente es una disciplina bien desarrollada y establecida. Las anormalidades cromosmicas contribuyen de una forma importante a la morbilidad y mortalidad, y muchas de ellas que permiten la sobrevida causan un retraso en el desarrollo psicomotor y retraso mental. El desbalance cromosmico se detecta en aproximadamente 0.6% de todos los recin nacidos, 25% de los abortos u bitos y en 50 a 60% de los abortos del primer trimestre (Borgaonkar, DS 1994). Las anomalas ms frecuentes son los rearreglos estructurales balanceados (4.3%) y dentro de las alteraciones desbalanceadas se encuentran las alteraciones de los cromosomas sexuales (3.9%), las trisomas autosmicas de los pares 13,18 y 21 (1.4%), los rearreglos estructurales (0.7%) y las triploidas (0.02%) (Gardner et al,2003). Los cromosomas se distribuyen a cada clula hija durante la divisin celular en un proceso preciso, aunque pueden ocurrir errores en la segregacin de los cromosomas, ocasionalmente existe tendencia a distribuciones errneas. La mayora de las alteraciones cromosmicas ocurren por un proceso de no-disyuncin durante la meiosis I II lo que ocasiona un gameto cromosmicamente anormal. La alteracin cromosmica que se encuentra presente desde la concepcin e involucra a todo el organismo se denomina anormalidad constitutiva. Las anormalidades cromosmicas se producen por varios mecanismos patogenticos como: 1. Un efecto de dosis con disminucin o exceso de material cromosmico el cual puede ser de todo un cromosoma (trisoma o monosoma, total ) o solo parte de ste ( parcial ). 2. Un efecto directo de dao con disrupcin de un gen en el punto de ruptura del rearreglo. 3. Efecto debido al origen parental sin equidad de origen de un cromosoma o segmento cromosmico (impronta genmica) 4. Un efecto de posicin, en donde un gen funciona diferente al encontrarse en un nuevo segmento cromosmico (Gardner et al,2003). Las alteraciones cromosmicas se pueden dividir en numricas y estructurales. Existen dos tipos de alteraciones numricas:

Poliploidas (Triploidas y Tetraploidas):en las que el nmero de cromosomas es mltiplo exacto del nmero haploide (69 o 92 cromosomas) y, en general, dan como resultado abortos del primer trimestre aunque pueden ser encontradas en pacientes con mosaico. Aneuploidas: el nmero de cromosomas no es mltiplo exacto del set haploide. En estas se incluyen a las trisomas (presencia de un cromosoma extra) y monosomas (ausencia de un cromosoma). Cuando la aneuploida se presenta en todas las clulas analizadas se denomina regular y en la mayora de los casos es causada por no disyuncin durante la meiosis I II, esta alteracin puede ocurrir a cualquier edad reproductiva pero es ms frecuente en mujeres con edad materna avanzada. Una alta proporcin de sndromes cromosmicos cursan con retardo en el crecimiento el cual se puede presentar desde la etapa prenatal. Ciertos desbalances cromosmicos son la causa de prdida gestacional en el primer trimestre del embarazo o de algunos defectos mayores y menores detectables al nacimiento. Se ha observado que las anomalas de los cromosomas sexuales tienen un efecto menos severo que las de los autosomas. El trmino mosaico se refiere a la existencia de dos o ms lneas celulares en un mismo individuo y la causa es diferente ya que se debe a un error en la divisin mittica (ISCN,1995). Balanceadas: cuando el estado de disoma persiste para todos los autosomas y cromosomas sexuales, an cuando la posicin de los segmentos homlogos de los cromosomas han sido cambiados por lo que no existe prdida ni ganancia de material gentico. Las alteraciones balanceadas son: translocaciones, inversiones (paracntricas y pericntricas) e inserciones. Existen dos tipos principales de translocaciones:las recprocas, en donde no se observa una prdida de cromatina; y las robertsonianas, en donde los brazos largos de los cromosomas acrocntricos se unen, con prdida de los brazos cortos (Moore and Best,2001). En general, los pacientes con estas alteraciones son sanos y tienen riesgo de tener un hijo con alteraciones fsicas y/o mentales causadas por una aneusoma segmentaria. El desbalance se debe a que un segmento de uno de los cromosomas involucrados se encuentra duplicado y el segmento en el otro cromosoma est ausente, lo que causa una trisoma y una monosoma parciales. Pocas translocaciones se han asociado con un riesgo alto de tener un hijo con defectos y retraso mental (20%), la mayora implican un riesgo intermedio entre 5 a 10% y aproximadamente en el 3% de las parejas con prdida gestacional recurrente se encuentra una translocacin balanceada. El asesoramiento gentico se otorga en base a cuatro factores: la manera de haberse realizado el diagnstico en la familia, la prediccin del modo de segregacin que puede originar gametos potencialmente viables, el sexo del padre que transmite el rearreglo y el desbalance estimado de los gametos potencialmente viables. Las translocaciones se producen cuando se produce un intercambio de material gentico entre dos cromosomas, el cromosoma con el rearreglo se denomina derivativo (der). Aproximadamente uno de cada 625 personas es portadora de una translocacin recproca (Jacobs, 1977), el rearreglo pudo ocurrir como un evento de novo o pudo ser transmitido por alguno de los padres. Durante la meiosis I, el apareamiento de los homlogos se encuentra alterado cuando se forma el cuadrivalente durante paquiteno cada segmento se aparea con su homlogo. La distribucin de los homlogos hacia los extremos se conoce como segregacin, existen 4 patrones bsicos de segregacin. Las alteraciones cromosmicas se reconocen como una importante causa de discapacidad y mltiples malformaciones que generan un gran conflicto en la atencin del recin nacido. Aproximadamente el 0.8% de los recin nacidos presentan una alteracin

numrica o estructural de los cromosomas que resulta en un fenotipo anormal. La identificacin de alteraciones congnitas en el recin nacido son clnicamente orientadoras para indicar un estudio citogentico que permita reconocer una aneuploidia y oriente hacia el manejo y pronstico del recin nacido, adems de permitir proporcionar un asesoramiento real a los padres sobre el acontecimiento. Con el conocimiento de las secuencias del genoma humano es posible indicar estudios cromosmicos de alta definicin aplicando tcnicas moleculares que nos permitan un diagnstico ms especfico por lo que es importante aplicar estas tcnicas citogenticas a todos aquellos pacientes que lo requieran y poder obtener y establecer el diagnstico de una aneuploidia. El estudio incluye la deteccin y abordaje clnico de todo recin nacido que presente defectos congnitos mayores o estigmas fenotpicos que orienten a una cromosomopata a los cules despus de registrar las caractersticas clnicas se le practica estudio citogentico en linfocitos de sangre venosa perifrica con la tcnica convencional primaria de bandas GTG (Guiemsa-Tripsina-Guiemsa) o bien aplicar otra tcnica de bandas dependiendo de la necesidad como C, R o NOR. una gua clnica para la identificacin, manejo y asesora de los recin nacido con aneuplodias. Es necesario conocer nuestra incidencia a la vez que aprender la identificacin clnica rpida y expedita de recin nacidos con posibilidades de presentar una cromosomopata, implementar un programa de estudio citogentico convencional y/o molecular que permita diagnosticar estos casos brindando de esta manera una medicina neonatal de alta calidad y alta especialidad. OBJETIVO: El anlisis citognico de alta resolucin en recin nacidos permite determinar la incidencia de aneuploidias numricas y estructurales acompaadas de defectos congnitos o datos de riesgo para cromosomopata que permitir implementar las guas clnicas para el manejo en neonatologa.

MATERIAL Y METODO: En el microscopio ptico a 10 X se busca el campo de un preparacin de linfocitos de sangre perifrica tratados con la tcnica de cultivo y tincin de GiemsaTripsina- para bandas GTG, donde se identifique una mitosis abierta se enfoca en el centro, se le coloca una gota de aceite de inmersin y se observa en 100X . Identificar los cromosomas ms largos y ms cortos en el campo en relacin a las manecillas del reloj. ACTIVIDADES A DESARROLLAR 1.- Observe cuidadosamente los siguientes cariogramas, y ubique si existe alguna alteracin y coloque las respuestas en los espacios.

CARIOGRAMA
CASO 1

CARIOTIPO: DIAGNSTICO: CARIOGRAMA CASO 2

CARIOTIPO: DIAGNSTICO:

CARIOGRAMA CASO 3

CARIOTIPO: DIAGNSTICO:

CARIOGRAMA CASO 4

CARIOTIPO: DIAGNSTICO:

2.-Observe cuidadosamente la mitosis completa, que se le entrega e identifique los cromosomas por grupos de la A a la G para recortar y elaborar un cariograma con su respectivo cariotipo.

3.-- De los siguientes casos clnicos las alteraciones cromosmicas numricas, se realizaron en la etapa prenatal por amniocentsis y cordocentsis, en relacin a los hallazgos por ultrasonido lo que permiti obtener un diagnstico. Lea cuidadosamente

y anote el diagnstico en el espacio vaci, tomando en cuenta los datos clnicos morfolgicos con el cariotipo.

A.- Una paciente present monosoma del X, con los siguientes antecedentes: gesta 1 de madre de 36 aos de edad con pareja de 30 aos, ambos sanos. Enviada al INPer por alteraciones ultrasonogrficas, lo cual se corrobora por medio de USG nivel II reportndose derrame pericrdico, edema cutneo y cardiopata, por lo que se realiza el diagnstico de hydrops no inmune. Se ofrecen los mtodos de diagnstico prenatal, aceptando la cordocentesis por el oligohidroamnios severo. El resultado de cordocentesis en 15 clulas de sangre de cordn umbilical reporta: 45,X. Al nacimiento present puente nasal ancho, epicanto bilateral, paladar alto, pabellones auriculares con rotacin posterior, cuello corto con piel redundante, trax ancho con coartacin de la aorta diagnosticada por ecocardiograma y genitales externos femeninos. El USG renal fue reportado como normal.

DIAGNSTICO: _______________________________________________

B.- Recin nacido masculino gesta 1 de madre de 22 aos de edad. Padre de 32 aos, ambos sanos. Referida al INPer por USG con labio y paladar hendido. Se realiza USG nivel II a las 29 semanas de gestacin reportndose labio hendido derecho y defecto lumbosacro. Atendida por parto eutcico a las 35.1 semanas por capurro. A la revisin clnica present microcefalia (PC:29), aplasia cutis, encefalocele fronto-etmoidal, labio y paladar hendido derecho, cardiopata tipo comunicacin interventricular, genitales externos masculinos con criptorquidia bilateral, defecto lumbosacro, polidactilia postaxial en manos y pies con sobreposicin de dedos. Se realiz ultrasonido posnatal reporta probable secuencia de Arnold-Chiari tipo II con disgenesia del cuerpo calloso. El resultado del cariotipo en linfocitos corresponde a : 47,XY + 13 en 15 clulas analizadas.

DIAGNSTICO: ___________________________________________________