La Misin del CONAP se define como: Somos la institucin rectora del sistema guatemalteco de reas protegidas, y de la proteccin, regulacin

y fomento del uso sostenible de la biodiversidad en el mbito nacional, con el propsito de asegurar la permanencia y equilibrio de los bienes y servicios del patrimonio natural para el beneficio de las presentes y futuras generaciones. Los fines principales del CONAP son: a. Propiciar y fomentar la conservacin y el mejoramiento del patrimonio natural de Guatemala. b. Organizar, dirigir y desarrollar el Sistema Guatemalteco de Areas Protegidas, SIGAP. c. Planificar, conducir y difundir la Estrategia Nacional de Conservacin de la Diversidad Biolgica y los Recursos naturales Renovables de Guatemala. d. Coordinar la administracin de los recursos de flora y fauna silvestre y de la diversidad biolgica de la Nacin, por medio de sus respectivos rganos ejecutores. e. Planificar y coordinar la aplicacin de las disposiciones en materia de conservacin de la diversidad biolgica contenidos en los instrumentos internacionales ratificados por Guatemala f. Constituir un fondo nacional para la conservacin de la naturaleza, nutrido con recursos financieros provenientes de cooperacin interna y externa. (Artculo 62, de la Ley de Areas Protegidas)

www.conap.gob.gt

GEF
Esta publicacin fue posible gracias al apoyo financiero del Global Enviormental Facility (GEF) y United Nations Enviormental Program (UNEP).

Orozco, Carlos. 2004. Situacin actual de la Biotecnologa en Guatemala. Consejo Nacional de reas Protegidas. Guatemala. 86 p.

El presente documento es producto del proyecto GUA/02/G21 Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnologa para Guatemala, ejecutado por el Consejo Nacional de reas Protegidas CONAP-, a travs de la Oficina Tcnica de Biodiversidad OTECBIO-, Financiado por ell Fondo Mundial para el Medio Ambiente (GEF por sus siglas en ingls) y el Programa de Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA). Las conclusiones e informacin expresadas en este documento son exclusiva responsabilidad del Proyecto y puede no coincidir con los del Programa de Naciones Unidas para el Medio Ambiente. Publicacin patrocinada gracias al apoyo de: GEF-PNUMA

CONSEJO NACIONAL DE REAS PROTEGIDAS Documento Tcnico No. 17 (06-2004) Director Oficina Tcnica de Biodiversidad: Coordinadora Nacional del Proyecto: Asistente de Proyecto: Ing. Giovanni Fernando Garca Barrios M. Sc. Ileana Catalina Lpez Glvez Jacqueline Valeska Landaverde Leal

Asosores Comit Nacional Coordinador de Bioseguridad: Nidia lvarez Carlos Alfaro Vctor Jimnez Ileana Catalina Lpez Glvez MARN CMVZ MSPAS PNUMA-CONAP

Autor: Dr. Carlos Orozco Castillo Revisin de Texto: M. Sc. Ileana Catalina Lpez Glvez Ing. Giovanni Fernando Garca Barrios Licda: Cecilia Isabel Cleaves Herrera Diseo de Portada y Contraportada: Sara Chin Primera edicin: 500 ejemplares Guatemala, Junio 2004 Consejo Nacional de reas Protegidas CONAP5. Avenida 6-06, Zona 1, Edificio IPM, 5, 6, 7. Nivel Telfonos: (502) 253-2158, 230-4234, 238-0000, 238-1188 Fax: (502) 253- 4141 Pagina web: www.conap.gob.gt Oficina Tcnica de Biodiversidad otecbio@conap.gob.gt Todos los derechos reservados: CONAP GEF-PNUMA GUATEMALA

Guatemala, C.A.

SITUACIN ACTUAL DE LA BIOTECNOLOGA EN GUATEMALA

Carlos Orozco Castillo, Ph.D.

ndice
LISTA DE ACRNIMOS Y ABREVIATURAS ...................................................................................................6 DE DNDE SURGE ESTA PUBLICACIN ......................................................................................................8 RESUMEN EJECUTIVO .......................................................................................................................................9 NDICE DE CUADROS .......................................................................................................................................15 NDICE DE FIGURAS .........................................................................................................................................15 1. ANTECEDENTES ............................................................................................................................................21 2. INTRODUCCIN ............................................................................................................................................21 3. OBJETIVOS 21 4. MARCO TERICO ..........................................................................................................................................22 4.1. DEFINICIN DE BIOTECNOLOGA...............................................................................................22 4.2. CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES..............................................................................................22 4.2.1. TCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES.........................................................22 4.3. EQUIPO Y PROCEDIMIENTOS........................................................................................................29 4.3.1. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL CULTIVO DE TEJIDOS .....................................................................................................................29 4.4. EMPLEO DE TCNICAS IN VITRO PARA LA MEJORA DE CULTIVOS: REQUISITOS EN EL LABORATORIO Y MTODOS GENERALES ......................................................................................................................................30 4.5. CONTROL DE LA CONTAMINACIN ..............................................................................................33 4.5.1. FUENTES DE CONTAMINACIN.........................................................................................33 4.5.2. ESTERILIZACIN ...................................................................................................................34 4.5.3. PREPARACIN DEL EXPLANTE ..........................................................................................34 4.5.4. PROCEDIMIENTO PARA LA ESTERILIZACIN ................................................................34 4.5.5. ASEPSIA....................................................................................................................................36 4.5.6. ANTIBITICOS........................................................................................................................37 4.6. CONSERVACIN DE GERMOPLASMA ............................................................................................39 4.6.1. TCNICAS PARA LA CONSERVACIN IN VITRO DE GERMOPLASMA......................................................................................................................39 4.7. MARCADORES BIOQUMICOS Y MOLECULARES .......................................................................44 4.7.1. MARCADORES BIOQUMICOS ............................................................................................44 4.7.2. MARCADORES MOLECULARES .........................................................................................44 4.8. LA INGENIERIA GENTICA...............................................................................................................47 5. METODOLOGA .............................................................................................................................................49 6. RESULTADOS Y DISCUSIN........................................................................................................................50 6.1. LABORATORIOS, INSTITUCIONES Y/O CENTROS DE ESTUDIOS SUPERIORES VINCULADOS/RELACIONADOS AL USO DE LA BIOTECNOLOGA Y/O LA SEGURIDAD DE LA BIOTECNOLOGA .............................................................................................................................50

6.2. TIPOS DE INSTITUCIONES ................................................................................................................51 6.3. LABORATORIOS POR TIPO DE INSTITUCIN ............................................................................51 6.4. CAPITAL HUMANO PROFESIONAL ..............................................................................................52 6.5. CAPITAL HUMANO TCNICO Y DE APOYO ...............................................................................52 6.6. INFRAESTRUCTURA .......................................................................................................................53 6.7. RAMA DE LA BIOTECNOLOGA QUE TRABAJAN LOS LABORATORIOS ...............................................................................................................................54 6.8. REA DE LA BIOTECNOLOGA QUE TRABAJAN LOS LABORATORIOS ...............................................................................................................................55 6.9. TCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS ...............................................................................................................................55 6.10. TCNICAS DE MARCADORES MOLECULARES QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS.......................................................................................................................56 6.11. TCNICAS DE INGENIERA GENTICA QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS ...............................................................................................................................57 6.12. OBJETIVOS DE LOS LABORATORIOS ...........................................................................................57

6.13. CIENCIAS CON LAS QUE SE RELACIONAN LOS LABORATORIOS ...............................................................................................................................58 6.14. COLECCIONES DE ESPECIES O VARIEDADES DE ANIMALES Y/O VEGETALES, TANTO VIVOS COMO PRESERVADOS .........................................................58 6.15. CONEXIONES A REDES GLOBALES ..............................................................................................59 6.16. LABORATORIOS QUE TRABAJAN CON ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS..................................................................................................................................60 6.17. OBJETIVOS DE TRABAJAR CON ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS..................................................................................................................................60 6.18. INTRODUCCIN DE ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS AL PAS

61

6.19. POSIBILIDAD DE INTRODUCIR ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS AL PAS...................................................................................................................61 6.20. PROGRAMAS Y/O EXPERIENCIA SOBRE EVALUACIN DEL IMPACTO SOCIAL QUE PUEDAN UTILIZARSE ANTE LA POSIBILIDAD DE INTRODUCCIN DE OVMs EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN O PRODUCCIN .................................................................62

6.21. MEDIDAS DE SEGURIDAD DE LA BIOTECNOLOGA PARA LA REALIZACIN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIN Y/O PRODUCCIN....................................................................................................................................62 6.22. POBLACIN O GRUPO SOCIAL META BENEFICIARIO DE PROYECTOS DE BIOTECNOLOGA ..............................................................................................63 6.23. PLAZO DE LOS PROYECTOS PARA QUE LOS RESULTADOS LLEGUEN A LOS GRUPOS META ..................................................................................................63 6.24. RELACIN DE LOS PROYECTOS CON COMUNIDADES O PUEBLOS INDGENAS .....................................................................................................................64 6.25. EVALUACIN DE IMPACTO AMBIENTAL DE LOS PROYECTOS .............................................64 6.26. EVALUACIN DE IMPACTO SOCIAL DE LOS PROYECTOS......................................................65 6.27. RELACIN DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIN O PRODUCCIN DE LOS LABORATORIOS CON LAS CIENCIAS HUMANSTICAS ...............................................................................................................................65 6.28. PROGRAMAS, PROYECTOS Y FUENTE DE FINANCIAMIENTO...............................................66 6.29. SONDEO A EMPRESAS PRIVADAS AGRCOLAS QUE NO TIENEN LABORATORIO, PERO QUE TRABAJARON O PIENSAN TRABAJAR CON OVMs A NIVEL DE ENSAYOS DE CAMPO ...................................................71 6.30. CONOCIMIENTO DEL PBLICO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO VIVO MODIFICADO ................................................................................................73 6.31. CONOCIMIENTO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO TRANSGNICO .................................................................................................................................74 6.32. CONOCIMIENTO DEL PBLICO SOBRE EL CONSUMO DE ALIMENTOS PROVENIENTES DE OVMs ....................................................................................74 6.33. CONOCIMIENTO SOBRE LA UTILIZACIN DE LOS ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS .........................................................................................75 7. CONCLUSIONES ............................................................................................................................................76 8. RECOMENDACIONES ...................................................................................................................................79 9. BIBLIOGRAFA...............................................................................................................................................81 10. APNDICE 83

lista de acrnimos y abreviaturas empleadas

ABA ADN AFLP AGROCYT AID ANACAF ARN BAP BCH oC CENGICAA CES CIAT CNCB CONAP 2,4-D EDTA ELISA FAUSAC Fe FMVZ FODECYT GEF g/l Ha HGSJDD ICTA INCAP INIA IPGRI LENAP LNS M MAGA m2 m3 mg/l ml mM Acido abscsico Acido desoxirribonuclico Amplified Fragment Length Polymorphism Fondo para la Investigacin Agropecuaria en Ciencia y Tecnologa Agencia Internacional para el Desarrollo Asociacin Nacional del Caf Acido ribonuclico Bencilaminopurina Mecanismo de Intercambio de Informacin de Bioseguridad Grados centgrados Centro Guatemalteco de Investigacin y Capacitacin de la Caa deAzcar Centro de Estudios en Salud de la UVG Centro Internacional de Agricultura Tropical Comit Nacional de Coordinacin de Bioseguridad Consejo Nacional de reas Protegidas cido 2,4 diclorofenoxiactico cido etilendiaminotetraactico Enzime Linked Immunosorbent Assay Facultad de Agronoma de la USAC Hierro Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la USAC Fondo de Desarrollo para la Ciencia y Tecnologa General Environmental Foundation Gramos por litro Hectreas Hospital General San Juan de Dios Instituto de Ciencia y Tecnologa Agrcolas Instituto de Nutricin de Centroamrica y Panam Instituto Nacional de Investigaciones Agrcolas de Chile International Plant Genetic Resources Institute Laboratorio de Entomologa Aplicada y Parasitologa (Escuela de Biologa de la USAC) Laboratorio Nacional de Salud del MSPAS Micromol Ministerio de Agricultura Ganadera y Alimentacin. Metros cuadrados Metros cbicos Miligramos por litro Mililitros Milimolar

m-2s-2 MS MSc MSPAS NaOCl No. ONG OMS OTECBIO OVM PCR pH Ph.D. PROMECAFE p/v RAPD RFLP RT-PCR SCAR SIDA SSR TDR UNEP UNR URL USAC UVG VIH v/v %

Metro cuadrado por segundo Murashige y Skoog Magister Scientieae Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social Hipoclorito de sodio Nmero Organizacin No Gubernamental Organizacin Mundial de la Salud Oficina Tcnica de Biodiversidad del CONAP Organismo Vivo Modificado Polymerase Chain Reaction Potencial de hidrgeno Philosophy Doctor Proyecto de Mejoramiento de Caf Peso sobre volumen Random Amplified Polymorphic DNA Restriction Fragment Length Polymorphism Reverse Transcryptase Polymerase Chain Reaction Sequence Characterized Amplified Region Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida Simple Sequence Repeat Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases Programa de las Naciones Unidad para el Medio Ambiente Unidad de Normas y Regulaciones del MAGA. Universidad Rafael Landvar Universidad de San Carlos de Guatemala Universidad del Valle de Guatemala Virus de Inmunodeficiencia Adquirida Volumen sobre volumen Porciento

De dnde surge esta publicacin?

El presente documento es producto del proyecto GUA/02/G21 Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnologa para Guatemala, ejecutado por el Consejo Nacional de reas Protegidas CONAP- a travs de la Oficina Tcnica de Biodiversidad OTECBIO-, financiado por el Fondo Mundial para el Medio Ambiente (GEF por sus siglas en Ingls) y el Programa de Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA-UNEP). El perodo de ejecucin del proyecto fue de noviembre del 2002 a julio del 2004. El Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnologa (MNSB) para Guatemala es un proyecto impulsado por el GEF como una Estrategia inicial para ayudar a los pases a prepararse para la entrada en vigor del Protocolo de Cartagena sobre la seguridad de la biotecnologa, as como proveer un Marco regulatorio tcnico administrativo, legal y de consulta pblica que vele por la diversidad biolgica y la salud de los guatemaltecos. La Agenda 21 acordada por la Conferencia de las Naciones Unidas para el Ambiente y Desarrollo (UNCED, por sus siglas en ingls) en 1992 en Ro de Janeiro, establece previsiones para el manejo ambiental de la biotecnologa. En la introduccin al capitulo 16, se reconoce que aunque la biotecnologa no puede proveer soluciones a todos los problemas fundamentales de ambiente y desarrollo, si podra, sin embargo, contribuir sustancialmente a un desarrollo sustentable. El protocolo ha sido elogiado como un importante instrumento que proporciona un marco normativo internacional para reconciliar las necesidades respectivas de proteccin del comercio y del medio ambiente en la industria mundial en rpido crecimiento de la biotecnologa moderna. De acuerdo con el principio precautorio contenido en el Principio 15 de la Declaracin de Ro sobre el Medio Ambiente y Desarrollo, el objetivo del Protocolo es: Contribuir a garantizar un nivel adecuado de proteccin en la esfera de la transferencia, manipulacin y utilizacin seguras de los organismos vivos modificados resultantes de la biotecnologa moderna que puedan tener efectos adversos para la conservacin y la utilizacin sostenible de la diversidad biolgica, teniendo tambin en cuenta los riesgos para la salud humana, y centrndose concretamente en los movimientos transfronterizos. El proyecto vino a consolidar las capacidades nacionales para la instrumentacin del Protocolo de Cartagena sobre Bioseguridad. Uno de los principales logros del proyecto fue la creacin del Comit Nacional de Coordinacin de Bioseguridad CNCB- mediante resolucin No. ALC/14/2003 de Secretara Ejecutiva del Consejo Nacional de reas Protegidas CONAP-. El CNCB- est conformado entre otros por el Ministerio de Agricultura, Ganadera y Alimentacin MAGA, el Ministerio de Economa -MINECO-, el Ministerio de Ambiente y Recursos Naturales -MARN-, el Ministerio de Relaciones Exteriores MINEX-, el Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social MSPAS-, el Ministerio de Educacin MINEDUC-, el Consejo Nacional de reas Protegidas CONAP-, Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa CONCYT-, Academia, Mesa Nacional Alimentaria y varios representantes de la Sociedad Civil. Durante la primera fase de ejecucin del proyecto se realizaron cinco consultoras con el propsito de realizar un diagnstico de la situacin actual de la biotecnologa en Guatemala, priorizar la diversidad biolgica del pas en riesgo potencial por la introduccin de organismos vivos modificados, elaborar un inventario y anlisis de normativa en el tema, establecer un anlisis de competencias institucionales y una base de datos para organizar la informacin. Asimismo, se realizaron veintids talleres a nivel metropolitano y regional con los diferentes actores de la sociedad civil y gobierno donde se socializaron los resultados de las cinco consultoras de la fase de diagnstico con el propsito de sensibilizar e informar a los guatemaltecos en el tema. Posteriormente se procedi a consultar a los mismos grupos sobre los elementos para la elaboracin de una propuesta de iniciativa de ley que regule los organismos vivos modificados. El resultado de este proceso de consulta es el anteproyecto de iniciativa Ley de Seguridad de la Biotecnologa Moderna para Guatemala.

El captulo 12 de la referida Agenda tambin enfatiza que la comunidad mundial puede obtener muchos beneficios de la biotecnologa si sta la desarrolla y utiliza adecuadamente. El uso y liberacin al ambiente de Organismos Genticamente Modificados (OGM) resultantes de la biotecnologa moderna podra tener impactos negativos para la conservacin y uso sustentable de la diversidad biolgica. Por lo tanto sta agenda, busca garantizar la seguridad en el desarrollo, aplicacin, intercambio y transferencia de la biotecnologa, a travs de acuerdos internacionales basados en la evaluacin y manejo del riesgo. El uso seguro de la biotecnologa moderna tambin es una preocupacin en la Convencin sobre Diversidad Biolgica (CDB). Esta convencin reconoce que, si es desarrollada y utilizada con adecuadas medidas de seguridad para el ambiente y la salud humana, la biotecnologa puede contribuir al logro de los objetivos de la Convencin. En sus artculos 8(g) y 19(3) exhorta a las partes a establecer medidas de control en la liberacin de los OVM y la necesidad de establecer un protocolo apropiado para garantizar la conservacin y uso sustentable de la diversidad biolgica. El Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnologa del Convenio sobre Diversidad Biolgica, adoptado en enero del 2000 fue aprobado por el Honorable Congreso de la Repblica de Guatemala el 17 de septiembre de 2003 y ratificado por el poder ejecutivo el 13 de octubre del mismo ao. Actualmente el Protocolo de Cartagena est en Cancillera del Ministerio de Relaciones Exteriores pendiente de depositarse en el seno de la Secretara de las Naciones Unidas.

resumen ejecutivo
La presente publicacin se basa en un estudio referente a la situacin actual de la Biotecnologa en Guatemala. El mismo se deriv de la necesidad de cumplir con los acuerdos sobre el Protocolo de Cartagena, acerca de la seguridad de la biotecnologa, cuyo propsito establece Contribuir a garantizar un nivel adecuado de proteccin en la esfera de la transferencia, manipulacin y utilizacin seguras de los OVMs". El estudio cont con el apoyo de UNEP, GEP y CONAP. Dado que en Guatemala, adems de la Biotecnologa Moderna, se estn usando otras tcnicas biotecnolgicas, en diferentes instituciones, con distintos propsitos, en las reas de: salud humana, produccin vegetal y animal, se consider importante incluir tambin la situacin actual en el pas en el uso de todas estas herramientas y procedimientos biotecnolgicos. Los objetivos del estudio en mencin fueron: elaborar un diagnstico actual de la biotecnologa en Guatemala y realizar un inventario de recurso humano y fsico con que cuenta el pas en el campo de la biotecnologa. Para ello, se reunieron datos e informacin sobre la situacin actual de la Biotecnologa en Guatemala, a travs de una boleta de encuesta, la cual fue revisada y aprobada por la coordinacin general de OTECBIO. As tambin se hicieron entrevistas personales en empresas que no tienen laboratorio, pero que realizaron ensayos de campo con OVMs. Paralelamente se hizo un sondeo en una muestra de la poblacin para conocer su grado de conocimiento de la Biotecnologa. Seguidamente se tabularon los resultados y se hizo el anlisis y discusin de los mismos, de los cuales se derivaron las conclusiones y recomendaciones correspondientes. Los resultados, se presentan en forma resumida en la matriz de tabulacin que incluye cuatro tablas, que se presentan en la parte final del resumen ejecutivo. De los resultados obtenidos, se infiere el anlisis siguiente: de acuerdo al trabajo realizado, se encontraron 27 laboratorios vinculados o relacionados al uso de la Biotecnologa y/o la seguridad de la Biotecnologa, pertenecientes a 17 instituciones, de las cuales 4 son gubernamentales (8 laboratorios), 8 privadas (10 laboratorios) y 5 acadmicas (9 laboratorios). Las capacidades existentes en materia de Biotecnologa son: 199 ambientes (reas de trabajo dentro de los laboratorios), con un rea total de 12,597 m2, 28 cuartos de crecimiento con un rea de 908 m2, 12 invernaderos, con un total de 2,718 m2, 39 autoclaves, 52 cmaras de flujo laminar y 14 termocicladores. En cuanto al nmero de expertos los resultados indican 70 profesionales con nivel de licenciatura, 18 con grado de maestra y 15 con grado de doctorado. Adems, laboran en ste campo 87 tcnicos y 66 personas de apoyo. El estudio indica que, hasta el momento, hay 106 proyectos y/o programas, tanto en ejecucin como finalizados. De los 27 laboratorios, 18 trabajan en el rea de Cultivo de Tejidos, 13 con Marcadores Moleculares y 2 con Ingeniera Gentica. Algunos laboratorios trabajan varias reas simultneamente por lo que el nmero total es de 33 laboratorios. Existe una gran gama de ciencias relacionadas con los laboratorios de Biotecnologa, tanto de la rama vegetal, animal, como humana, fundamentalmente la primera y la segunda con propsitos de mejoramiento gentico y produccin, y la tercera con fines de prevencin de enfermedades y mejoramiento de la salud. Los laboratorios estn en buena medida relacionados con algunas de las ciencias humansticas, por ejemplo: Sociologa (11 laboratorios), Economa (9 laboratorios), Pedagoga (8 laboratorios), Antropologa (5 laboratorios) y Psicologa (5 laboratorios). Esto demuestra que en los laboratorios estn concientes de la importancia de la Biotecnologa en el rea humanstica y social. En cuanto a inventarios/colecciones de especies/variedades/animales y vegetales, tanto vivos como preservados, 14 laboratorios indicaron que s tienen colecciones y de stos, 13 poseen bases de datos y 14 tienen conexiones a redes globales. La mayora de proyectos trabajan con fondos propios o provenientes de donantes nacionales e internacionales y ONGs. La mayora de laboratorios trabajan en el mbito de la diversidad biolgica, tanto en la rama

animal, humana, como la vegetal; en donde se observa especialmente el uso de las reas de Cultivo de Tejidos y Marcadores Moleculares para estudios de diversidad biolgica; por ejemplo: gentica de poblaciones, variabilidad gentica, caracterizaciones, identificacin de genotipos, etc. De los 27 laboratorios, 22 indican que tienen un grupo social meta beneficiario. Los laboratorios que respondieron positivamente mencionan a los siguientes grupos: caficultores, pequeos y medianos productores, estudiantes, granjeros y finqueros, productores y exportadores de berries, poblacin centroamericana, poblacin guatemalteca susceptible de contraer la enfermedad de Chagas, productores de caa de azcar y consumidores. De acuerdo con los programas de Biotecnologa encontrados, la participacin del pblico de manera directa es nula. El pblico participa, pero de forma indirecta; por ejemplo, en el caso de la salud humana, hay grupos o poblaciones que son utilizadas como elementos para la prueba de tratamientos mdicos, o en otros casos, como en el rea de Cultivo de Tejidos, los agricultores llevan muestras de plantas para ser cultivadas y probadas en sus campos de produccin.

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De los 27 laboratorios, nicamente siete indican que sus proyectos tienen relacin con comunidades o pueblos indgenas. Esto refleja que, en general, la Biotecnologa no est dirigida, en especial, a los pueblos indgenas. nicamente un laboratorio seala que hace estudio de impacto ambiental, especficamente en el campo de la Proteccin Vegetal en la UVG, y lo hace mediante la evaluacin de daos producidos por enfermedades vegetales en cultivos y dispersin de sus vectores, a nivel de campo. En el caso de impacto social solamente dos laboratorios lo hacen, siendo stos los del INCAP, con evaluacin de tipo cualitativo, cuantitativo y sistematizacin. De 27 laboratorios encuestados, nicamente uno hace evaluacin y/o gestin de riesgo a nivel de OVMs, pero en el laboratorio. A nivel de campo slo dos empresas indicaron haber realizado una evaluacin de riesgo, de acuerdo con los requerimientos que les solicit la UNR del MAGA. La situacin actual del pas indica que el uso de OVMs es el siguiente: investigacin (3 laboratorios), uso confinado (2 laboratorios) y evaluacin de riesgo (1

laboratorio). A nivel de campo existen dos empresas que no tienen laboratorio, pero que realizaron ensayos de campo y cuya cosecha y rastrojos fueron incinerados. Siempre en trminos de realidad de la situacin de OVMs, a nivel de laboratorios nicamente un laboratorio import una bacteria recombinante, para uso confinado. Dos laboratorios han hecho sus propias transformaciones, clonaciones y transferencia de genes. A nivel de campo dos empresas introdujeron en el pasado intencionalmente 4 OVMs, con fines de investigacin, cumpliendo con los requisitos del rea Fitozoogentica de la UNR del MAGA. Al final del ciclo todos los materiales fueron incinerados, por lo que no se puso en riesgo, en ningn momento el patrimonio gentico del pas. El mbito actual de los OVMs refleja que slo tres laboratorios estn trabajando con ellos, perteneciendo dos a la UVG, y el otro al LENAP, y lo hacen bsicamente con fines de investigacin. En la UVG, un laboratorio hace transformacin, clonacin, y transferencia de genes resistentes al virus de papaya (Carica papaya); el cual es el laboratorio de Proteccin Vegetal. Otro Laboratorio de la UVG, que es un laboratorio del CES, hace aislamientos de genes de Plasmodium y tripanosomas; transformndolos, utilizando Escherichia coli, para ser clonados y transferidos a los vectores de las enfermedades malaria y dengue. En cuanto al LENAP, est produciendo Taq ADN polimerasa, usando una bacteria recombinante de E. coli introducida al pas. Esto ratifica, que la Ingeniera Gentica est incipiente en Guatemala, a nivel de laboratorio; pero sus fines son tambin claramente de carcter benfico, desde el punto de vista social. Todos los laboratorios sealan que no tienen intencin de importar o exportar OVMs; sin embargo, dos laboratorios estn, y piensan seguir produciendo OVMs. De acuerdo al diagnstico realizado, las prioridades nacionales, con relacin a OVMs son salud y proteccin vegetal. Los laboratorios de Microbiologa y Virologa del INCAP, son los nicos laboratorios, a nivel nacional, que cuentan con un programa o experiencia sobre evaluacin de impacto social que se puede utilizar ante la posibilidad de introduccin de un OVM. En cuanto a OVMs, actualmente no existe ningn programa o experiencia sobre evaluacin de impacto ambiental. nicamente 22 laboratorios poseen medidas de seguridad de la Biotecnologa para la realizacin de

Cuadro 1. de Resumen Ejecutivo. Sntesis de informacin de los laboratorios que formaron parte del estudio realizado. CAPITAL HUMANO INFRAESTRUCTURA
# Ambiente rea Total No. Cuartos crecimiento 1 4 1 16 1 1 1 2 1 200 210 40 400 480 20 100 1 2 100 600 rea Cuartos crecimiento No. Invernadero rea invernadero TIPO INST. LIC MSc PhD Tcnico Apoyo

LABORATORIO

2 2 1

1 1 3 1 1 1 1 1 1 1 4 1 2 6 12 6

El grado de conocimiento pblico sobre lo que es un OVM reflej que la mayora de las personas no conoce este tema.

sus proyectos de investigacin y/o produccin. La mayora de estos laboratorios tienen niveles de seguridad 1 y 2. Solamente un laboratorio (LNS) tiene nivel de seguridad 3.

2 1 1 1 1 2 1 1 1 1

2 3

1 3 1 3 1 4 2

2 2 5 1 2 48

1 2 1 2 5 5 1 1 1 1 1 1

20 24 20 57.5 200 200 68 26 20

138 250 300

2 1 1 2 1 6

38

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIN INGENIO PANTALEN INGENIO SANTA ANA ANACAF JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGA INCAP, MICROBIOLOGA Y VIROLOGA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS 3 2 2 3 2 1 1 16 4 2 2 2 10 2 5 3 2 1 1 18 15 87 66 3 2 3 2 13 2 37 3 1 2 18 1 60 199 12597 28 907.5 12 2718 50 70 27

G G A A A A P A P P P P P P A P A A A A G G G G

5 22 2 4 1 6 8 4 8 25 25 10 4 6 4 10 2 6 3 16 8 7 11 5

900 800 325 72 81 63 800 200 255 2500 2500 315 52 60 100 1600 72 144 38 1200 118 252 90 2

El cuadro 1, en este resumen, muestra una sntesis de la investigacin realizada.

TOTALES

11

12

Cuadro 1. continuacin... EQUIPO REA

Rama Biotec. CT MM IG DOC INV PROD. COM NO

OBJETIVOS

COLECCIONES
SI

Autoclaves 1 5 1 1 1 3 5

Flujo Laminar

Termociclad

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1

1 1 1 1 1 1 1 1 1

1 2 1 1 1

1 1

1 1 1 1 1

1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

1 1 2 1 4 1 1 1

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIN INGENIO PANTALEN INGENIO SANTA ANA ANACAF JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGA INCAP, MICROBIOLOGA Y VIROLOGA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS 1 1 1 1 2 1 2 2 1 1 1 1 2 2 2 2 2 4 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 14 18 1 13 2 1 1 1 1 10 2 39 52 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 23 6 2 1 2 1 5 2 1 1 5 3 3 1 3 1 1 1 3 3 4 1

V VV An V V V V An V V V V V V V An HH AN H Am H H HH H H H

2 1 1 1 13

1 1 2 1 1 1 1 1

TOTALES

14

Cuadro 1. continuacin... BASE DE DATOS

NO 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 14 13 2 1 1 1 1 2 1 1 1 24 3 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 26 1 1 2 1 2 1 1 1 1 1 SI NO SI NO SI NO SI NO

REDES GLOBALES

TRABAJA OVM

HA TRABAJADO OVM

PIENSA INTRO OVM

SI

1 1

1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIN INGENIO PANTALEN INGENIO SANTA ANA ANACAF JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGA INCAP, MICROBIOLOGA Y VIROLOGA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS 1 13

1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 27 0

TOTALES

13

14

Cuadro 1. continuacin... 14*

NO SI NO SI 1 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 2 1 1 1 5 22 20 7 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 NO SI NO SI NO SI NO SI ANT. PED. DER. PSI. ECO.

15*

16*

17*

18*

19*

CIENCIAS HUMANSTICAS
SOC 1 2

1 2 1 1 1 1 1

1 2 1 1

1 2 1 1 1 1 1

1 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 1 2 1 2 1

1 1 1 1

1 2 1 1 1 1

1 2

1 2 2 1 1 26 1 24 3 5 1 8 0 1 1 5 9 11

ICTA QUETZALTENANGO ICTA BRCENA (2) FMVZ URL FAUSAC MARC. MOLEC. FAUSAC CULT. TEJ. CENGICAA UVG- PROTEC. VEG INGENIO MAGDALENA INGENIO LA UNIN INGENIO PANTALEN INGENIO SANTA ANA ANACAF JARDINES MIL FLORES USAC, ESC. BIOLOGA INCAP, MICROBIOLOGA Y VIROLOGA (2) UVG-ESTUDIOS DE GEN POBLACIONES UVG - LEISH MANIASIS UVG - ANLISIS DE AGUA UVG - CENT. DE EST. SALUD LAB. NAC. SALUD (2) HGSJDD LAB. CLNICO HGSJDD - MED. NUCLEAR HNA - UNIDAD QUEMADOS 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1 5 22 1 1 1 1 2 1 1 26 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 1 1 1 2 1 1 1

TOTALES

* los nmeros en la parte superior de las tablas de la matriz corresponden a los nmeros de las respectivas preguntas en la boleta de encuesta (ver apndice).

ndice de cuadros y figuras

CUADROS Cuadro 1. Relacin entre presin, temperatura y tiempo de autoclaveado, cuando el autoclave tiene presin variable. ..........................................................................................................35 Cuadro 2. Tiempo mnimo de autoclaveado segn volumen de medio de cultivo...................................35 Cuadro 3. Algunos ejemplos de los procedimientos que se usan para la desinfeccin de explantes.........................................................................................................................38 Cuadro 4. Otros ejemplos de soluciones desinfectantes usadas en la preparacin de explantes. .............................................................................................................................................38 .................................................................................................................................................................. 66

FIGURAS Figura 1. Dos tipos de ambientes de dos laboratorios visitados. A. ambiente con medidas de bioseguridad en el Laboratorio Nacional de Salud; B. ambiente de laboratorio de marcadores moleculares en el ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................50 Figura 2. Nmero de instituciones, por sector, dedicadas a la Biotecnologa en Guatemala. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...................................................................51 Figura 3. Nmero de instituciones, por sector, dedicadas a la Biotecnologa (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................51 Figura 4. Nmero de laboratorios por tipo de institucin. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ................................................................................................................................51 Figura 5. Nmero de laboratorios por tipo de institucin (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................52 Figura 6. Capital humano profesional (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................52 Figura 7. Nmero de profesionales, segn grado acadmico, trabajando actualmente en Biotecnologa. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). .........................................................52 Figura 8. Personal tcnico y de apoyo que laboran en el campo de la Biotecnologa. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................52 Figura 9. Personal tcnico y de apoyo que laboran en el campo de la Biotecnologa (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................53 Figura 10. Ambiente de sala de preparacin de medios en el laboratorio de Biotecnologa del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) ...............................................53

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Figura 11. Ambiente de cuarto de crecimiento en el laboratorio de cultivo de tejidos del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)...........................................................53 Figura 12. Vista general de un invernadero en la URL. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................53 Figura 13. Equipo bsico en un laboratorio de Biotecnologa. A. Termociclador en el laboratorio de Marcadores Moleculares del ICTA; B. Cmara de Flujo Laminar en el laboratorio de Cultivo de Tejidos del ICTA; C. Autoclave en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la URL. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ..............54 Figura 14. Nmero de laboratorios por rama de la Biotecnologa que trabajan. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................54 Figura 15. Nmero de laboratorios por rama de la Biotecnologa que trabajan (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................54 Figura 16. Nmero de laboratorios por rea de la Biotecnologa que trabajan. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................55 Figura 17. Nmero de laboratorios por rea de la Biotecnologa que trabajan (expresado en porcentaje). (Fuente: el autor, 2003). ................................................................................55 Figura 18. Nmero de laboratorios por tcnica de Cultivo de Tejidos empleada. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................55

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Figura 19. Nmero de laboratorios por tcnica de Cultivo de Tejidos empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................56 Figura 20. Nmero de laboratorios que utilizan las tcnicas de Marcadores Moleculares. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)..................................................................56 Figura 21. Nmero de laboratorios por tcnica de Marcadores Moleculares empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)............................56 Figura 22. Nmero de laboratorios por tcnica de Ingeniera Gentica empleada (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................57 Figura 23. Nmero de laboratorios por tcnica de Ingeniera Gentica empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................57 Figura 24. Nmero de laboratorios segn sus objetivos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................58 Figura 25. Nmero de laboratorios segn objetivos que persiguen (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................58 Figura 26. Nmero de laboratorios y su relacin con algunas de las ciencias ms importantes. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ............................................58

Figura 27. Nmero de laboratorios y su relacin con algunas de las ciencias ms importantes (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................58 Figura 28. Nmero de laboratorios que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................59 Figura 29. Nmero de laboratorios que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................59 Figura 30. Nmero de laboratorios que poseen bases de datos de sus colecciones (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) .......................................................................................59 Figura 31. Nmero de laboratorios que poseen bases de datos de sus colecciones (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................59 Figura 32. Nmero de laboratorios que poseen conexiones a redes globales. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................59 Figura 33. Nmero de laboratorios que poseen conexiones a redes globales (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) ............................................60 Figura 34. Nmero de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................60 Figura 35. Nmero de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................60 Figura 36. Nmero de laboratorios por objetivos de trabajar con Organismos Vivos Modificados. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).......................................................61 Figura 37. Nmero de laboratorios por objetivos de trabajar con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).......................61 Figura 38. Nmero de laboratorios que han introducido OVMs al pas. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................61 Figura 39. Nmero de laboratorios que han introducido OVMs al pas (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ............................................................61 Figura 40. Nmero de laboratorios que tienen planificado introducir OVMs al pas. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................61 Figura 41. Nmero de laboratorios que tienen planificado introducir OVMs al pas (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)...........................................61 Figura 42. Nmero de laboratorios con programas y/o experiencia sobre evaluacin del impacto social que puedan utilizarse ante la posibilidad de introduccin de OVMs en proyectos de investigacin o produccin. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...............62

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Figura 43. Nmero de laboratorios con programas y/o experiencia sobre evaluaci del impacto social que puedan utilizarse ante la posibilidad de introduccin de OVMs en proyectos de investigacin o produccin (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................62 Figura 44. Nmero de laboratorios que aplican alguna medida de Bioseguridad. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................62 Figura 45. Nmero de laboratorios que aplican alguna medida de Bioseguridad (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................62 Figura 46. Nmero de laboratorios que tienen una poblacin o grupo social meta de sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)................................................................63 Figura 47. Nmero de laboratorios que tienen una poblacin o grupo social meta de sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ....................63 Figura 48. Ejemplos de grupos sociales meta de algunos de los laboratorios encuestados. A. Finca Esquipulas, Guanagazapa, Escuintla ; B. Finca Pretoria, Guanagazapa, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ..............................................63 Figura 49. Nmero de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados lleguen a los grupos meta. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).............................................63

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Figura 50. Nmero de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados lleguen a los grupos meta (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................64 Figura 51. Nmero de laboratorios cuyos proyectos tienen o no relacin con comunidades o pueblos indgenas. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)................................64 Figura 52. Nmero de laboratorios cuyos proyectos tienen o no relacin con comunidades o pueblos indgenas (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................64 Figura 53. Comunidades indgenas que reflejan la importancia de orientar los beneficios de la biotecnologa hacia estas poblaciones. A. Finca Pretoria, Guanagazapa, Escuintla ; B. Finca Pretoria, Guanagazapa, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................64 Figura 54. Nmero de laboratorios que incluyen en sus proyectos una evaluacin de impacto ambiental. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).................................65 Figura 55. Nmero de laboratorios que incluyen en sus proyectos una evaluacin de impacto ambiental (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................65 Figura 56. Nmero de laboratorios que hacen evaluacin de impacto social en sus proyectos...............65 Figura 57. Nmero de laboratorios que hacen evaluacin de impacto social en sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)............................65

Figura 58. Nmero de laboratorios por ciencia humanstica que se relacionan sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)......................................................................65 Figura 59. Nmero de laboratorios por ciencia humanstica que se relacionan sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)............................66 Figura 60. Ensayo de campo de maz del evento biotecnolgico Yieldgard. Resistencia a Lepidpteros. A. Empresa Cristiani Burkard, finca Las Vegas, Tiquisate, Escuintla ; B. Empresa Cristiani Burkard, finca Las Vegas, Tiquisate, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................72 Figura 61. Ensayo de campo de algodn del evento biotecnolgico Liberty. Resistencia a glufosinato de amonio. Empresa Algodones Mayas S.A., finca El Naranjo, Masagua, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2001). ..............................73 Figura 62. Ensayo de campo de algodn del evento biotecnolgico Liberty. Seleccin de progenies resistentes al herbicida Liberty (glufosinato de amonio). Empresa Algodones Maya S.A., finca El Naranjo, Masagua, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2002). ......................................................................................73 Figura 63. Porcentaje del pblico que considera saber o no que es un OVM. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................73 Figura 64. Porcentaje del pblico que considera saber que es un Organismo Transgnico. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)..................................................................74 Figura 65. Porcentaje del pblico que considera saber o no si est consumiendo alimentos provenientes de OVMs. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). .............................75 Figura 66. Porcentaje del pblico que considera saber o no sobre la utilizacin de los OVMs. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)....................................................................75 Figura 67A. Identificacin de muestras en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003). ..............................................................................................83 Figura 68A. Cabinas de seguridad en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003). ..............................................................................................83 Figura 69A. Medidas de Bioseguridad en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003). ..............................................................................................83 Figura 70A. Laboratorio con nivel 3 de seguridad en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003). ...................................................................................83 Figura 71A. Condiciones mnimas de Bioseguridad en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003). .....................................................................83 Figura 72A. Aspecto general de un ambiente de trabajo en el Laboratorio Nacional de Salud. (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003). ..............................................................................83

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Figura 73A. Cuarto de crecimiento del laboratorio de Cultivo de Tejidos del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) .......................................................................................84 Figura 74A. Espectrofotmetro de luz ultravioleta en el laboratorio de Marcadores Moleculares del ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)..................................................84 Figura 75A. Detalle de cmara de flujo laminar en laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003).......................................................................................84 Figura 76A. Carga de gel de electroforesis en el laboratorio de Marcadores Moleculares de FAUSAC. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ...........................................84 Figura 77A. Estufa con agitacin magntica y potencimetro en laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003) ........................................................84 Figura 78A. Transiluminador en el laboratorio de Marcadores Moleculares de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) .......................................................................................84 Figura 79A. Enraizamiento de pia en laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) .......................................................................................84 Figura 80A. Planta de chipe en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). ......................................................................................84

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Figura 81A. Planta cactcea in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003) .......................................................................................84 Figura 82A. Planta de mora in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL. (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003)......................................................................................................84 Figura 83A. Planta de camote in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la FAUSAC. .............84 Figura 84A. Plantas de caf in vitro en laboratorio de Cultivo de Tejidos de ANACAF. (Fuente: Ing.Agr. Amauri Molina, 2002) ............................................................................84 Figura 85A. RAPD en gel de agarosa en cultivo de caf en laboratorio de FAUSAC. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1997). ......................................................................................86 Figura 86A. SSR en gel de poliacrilamida (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1999) ..................86 Figura 87A. AFLP en gel de poliacrilamida. (Fuente: manual del kit de AFLP, 2003). ..........................86 Figura 88A. Deteccin de colonias recombinantes en laboratorio de Marcadores Moleculares de FAUSAC. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1999) ...........................................86

1. antecedentes
A principios del ao 2000 se definieron acuerdos sobre el Protocolo de Cartagena, acerca de la seguridad de la biotecnologa, cuyo propsito establece Contribuir a garantizar un nivel adecuado de proteccin en la esfera de la transferencia, manipulacin y utilizacin seguras de los organismos vivos modificados resultantes de la biotecnologa moderna que puedan tener efectos adversos para la conservacin y la utilizacin sostenible de la diversidad biolgica, teniendo tambin en cuenta los riesgos para la salud humana, y centrndose concretamente en los movimientos transfronterizos. En la bsqueda de sistemas jurdicos-administrativos de adopcin de decisiones y de participacin popular de la poblacin en la esfera de la seguridad de la biotecnologa que sean viables e idneos, Guatemala necesita contar con una amplia perspectiva de lo que los cientficos, agricultores y empresarios estn llevando a cabo realmente en los sectores relacionados con la biotecnologa y la seguridad de la biotecnologa dentro de sus fronteras. En ese contexto, el estudio sobre la utilizacin y situacin de la biotecnologa y Organismos Vivos Modificados (OVMs), en el pas, proporcionar orientacin sobre la forma de evaluar los mecanismos de seguridad en el uso de la biotecnologa en el pas y el estado del conocimiento y disponibilidad de informacin sobre la manipulacin, transporte y utilizacin de los OVMs de los diferentes grupos de opinin que tendrn que desempear un papel en la elaboracin de un Marco Nacional de Seguridad.

2. introduccin
El presente estudio se enmarca dentro del proyecto No. GUA/02/G21, titulado Desarrollo del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnologa para Guatemala, y fue realizado en forma conjunta con otros estudios, incluidos dentro de dicho proyecto, de una manera integral y paralela, tales como: Anlisis de la Priorizacin de la Diversidad Biolgica Guatemalteca en Riesgo Potencial por la Introduccin y Utilizacin de la Biotecnologa, Especialmente la Biotecnologa moderna, como lo es el uso de OVMs; as como el Estudio del Sistema Jurdico Regulatorio del Uso de la Biotecnologa en el Pas; y la Formulacin y Organizacin de una Base de Datos para el Manejo y Consulta de la Informacin Generada. Todos los estudios indicados, incluyendo el presente, tuvieron el apoyo institucional del Consejo Nacional de reas Protegidas (CONAP) por medio de la Oficina Tcnica de Biodiversidad (OTECBIO), con el apoyo financiero del Programa de las Naciones Unidas Para el Medio Ambiente (UNEP) y el Fondo Mundial para el Ambiente (GEF), cuyo objetivo principal es la preparacin del Marco Nacional de Seguridad de la Biotecnologa para Guatemala, de acuerdo a las disposiciones pertinentes del protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnologa. Una de las primeras fases del proyecto consisti en reunir datos e informacin sobre la situacin actual de la Biotecnologa en Guatemala, y el anlisis y discusin de estos resultados. Dado que en Guatemala, adems de la Biotecnologa Moderna, se estn usando otras tcnicas biotecnolgicas, en diferentes instituciones, con distintos propsitos, en las reas de: salud humana, produccin vegetal y animal, se consider importante incluir como esta tambin la situacin actual en el pas en el uso de todas estas herramientas y procedimientos biotecnolgicos.

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3. objetivos
3.1. Elaborar un diagnstico actual de la Biotecnologa en Guatemala 3.2. Realizar un inventario de recurso humano y fsico con que cuenta el pas en el campo de la Biotecnologa.

4. marco terico
4.1. DEFINICIN DE BIOTECNOLOGA La BIOTECNOLOGA se define como la: utilizacin de organismos vivos, modificados o no, con aplicacin de tcnicas biolgicas, para la produccin de bienes y servicios. La BIOTECNOLOGA se divide en tres grandes reas que son: a) Cultivo de Tejidos Vegetales. b) Marcadores Moleculares. c) Ingeniera Gentica. (George, 1993). 4.2. CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES. El CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES se define como: ciencia (o arte) de hacer crecer tejidos, rganos o clulas de plantas, aislados de una planta madre y cultivados sobre un medio artificial (George, 1993). 4.2.1. TCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES Algunos cultivos importantes no se reproducen sexualmente debido a que son altamente heterocigticos y a que sus descendientes son atpicos; por otra parte, la reproduccin asexual permite mantener plantas genticamente idnticas al cultivar padre. En el caso de las plantas de cultivo, tales como los rboles frutales, los pltanos, los tubrculos, las legumbres y los ornamentales que producen pocas semillas o ninguna, la multiplicacin vegetativa es la nica forma de reproduccin. Como puede verse en el ejemplo de los claveles, la horticultura tradicional se basa en el empleo de grandes propgulos como medio de multiplicacin, ste mtodo tiene dos grandes desventajas, a saber: Un bajo coeficiente de multiplicacin. Transmisin de enfermedades, particularmente virus, a travs de las partes vegetativas de las plantas (FAO-OIEA, 1985). A. Cultivo de puntas de brotes (pices y meristemos), propagacin de clones y eliminacin de agentes patgenos. Las tcnicas de cultivo de tejidos brindan un nuevo enfoque a la reproduccin clonal de las plantas de cultivo. El cultivo de puntas de vstagos aislados, el llamado cultivo meristemtico, es una tecnologa importante de la reproduccin in vitro, frecuentemente denominada microreproduccin. La punta del vstago se extrae quirrgicamente de la planta y se utiliza como explante en el cultivo in vitro. De las plantas sanas se pueden extraer explantes ms grandes, de hasta 5 milmetros, que se utilizan para la reproduccin; mientras que para la eliminacin de patgenos se utilizan pequeas estructuras meristemticas de hasta 0.5 milmetros. La estructura meristemtica consiste en una cpula meristemtica y varios primordios de hojas. La pequea punta del vstago se corta cuidadosamente bajo el estereomicroscopio. Para evitar que se seque se transfiere inmediatamente, con una aguja fina, a la superficie de los medios nutrientes. El meristemo aislado es una estructura autnoma que, en

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Entre los USOS o APLICACIONES que tiene el Cultivo de Tejidos Vegetales podemos mencionar los siguientes: Mejoramiento Gentico. Mediante la aplicacin individual o conjunta de las siguientes tcnicas: cultivo de embriones, cultivo de anteras, variacin somaclonal, cultivo de callos, cultivo de suspensiones celulares, cultivo de protoplastos, ingeniera gentica (transformaciones o transferencia de genes).

Conservacin de Germo-plasma. Para lo cual se utilizan las tcnicas de: microtuberizacin, crioconservacin y mnimo crecimiento. Limpieza de Patgenos. Mediante la utilizacin del cultivo de meristemos. Propagacin Masiva. Utilizando las tcnicas: germinacin de semillas, microinjertacin, cultivo de pices (brotes o puntas), cultivo de nudos (microesquejes) e induccin de brotes.

un ambiente nutritivo adecuado, da origen a un vstago. Generalmente, se inducen yemas axilares en medios de citoquinina y durante el subcultivo el vstago forma un conjunto de ramas. La mayora de los cultivos reproducidos vegetativamente estn sistemticamente contaminados con uno o ms patgenos. Las vides, por ejemplo, pueden ser atacadas por 15 virus distintos que reducen drsticamente su rendimiento. La termoterapia se ha utilizado eficazmente para obtener plantas sin virus. Este mtodo se basa en la inactivacin trmica de los virus causando poco o ningn dao en la planta husped. A veces se requiere una exposicin a altas temperaturas durante largo tiempo. En las plantas contaminadas, el meristemo apical, generalmente, no contiene virus o es portador de bajas concentraciones. Para obtener plantas sin virus las puntas de los meristemos pueden ser aisladas y cultivadas in vitro. Los vstagos se extraen en condiciones aspticas de las plantas en crecimiento activo. El procedimiento se realiza bajo el estereomicroscopio, ya que para la eliminacin de los virus se necesitan explantes muy pequeos. La estructura misma consiste en una cpula meristemtica y una parte de primordios de hojas. Dependiendo de su concentracin, los reguladores de crecimiento determinan la reproduccin de las puntas de los vstagos. La dominancia apical est controlada por la interaccin de las hormonas vegetales (reguladores del crecimiento). La punta de un meristemo da origen a un vstago con bajas concentraciones de hormonas. Las concentraciones de hormonas no equilibradas, y elevadas, promueven la formacin de callos. Las citoquininas intensifican, generalmente, la ramificacin axilar. La regeneracin de yemas adventicias tiene lugar en medios ricos en citoquininas. Los vstagos desarrollados en presencia de una citoquininina carecen, generalmente, de races. Para obtener plantas completas, los vstagos deben transferirse a un medio de enraizamiento que contiene, generalmente, auxina. Las plantas bien enraizadas estn en condiciones de ser transplantadas al suelo. Se extrae el medio de las races y se cultivan las plntulas en varios sustratos. La humedad debe mantenerse a niveles elevados durante varios das despus del transplante. Las plantas sin virus, derivadas de las puntas de los vstagos, son vigorosas y crean la base para la obtencin de clones de rendimiento elevado. Actualmente, las tcnicas in vitro pueden utilizarse para la reproduccin de plantas, la fitotecnia con fines de man-tenimiento y la eliminacin de patgenos de

numerosas especies hortcolas, ste es el caso de los rboles frutales. Estas tcnicas tambin constituyen un instrumento potencial para la mejora de cultivos tropicales (FAO-OIEA, 1985). B. Cultivo de embriones cigticos. La extraccin y cultivo de embriones de plantas superiores fue uno de los primeros mtodos eficaces de aplicacin de tcnicas in vitro. Con embriones aislados es posible desarrollar estructuras de plantas completas. Esta tcnica tiene importantes aplicaciones en la fitotecnia. Un embrin maduro puede cultivarse fcilmente en medios nutrientes sencillos. La principal ventaja del cultivo de embriones es, sin embargo, la posibilidad de obtener plantas, a partir de embriones inmaduros, en una etapa temprana del desarrollo. El medio de cultivo proporciona los nutrientes necesarios, simulando as la funcin del endosperma. Durante el desarrollo in vitro el embrin tiene la capacidad metablica de sintetizar las hormonas vegetales endgenas y, por consiguiente, no es necesario que el medio nutriente contenga un regulador de crecimiento exgeno. Entre otros, los aminocidos, las sustancias complejas, o los extractos vegetales naturales, pueden promover el desarrollo de vstagos y races. Las plantas derivadas de embriones constituyen un valioso material de cultivo, especialmente en el caso de los cereales. La aplicacin ms til del cultivo de embriones cigticos, es la hibridacin remota. La fertilizacin y el desarrollo inicial del embrin tienen lugar en muchos cruces interespecficos e intergenricos. Como consecuencia del desarrollo endosprmico anormal, el embrin hbrido muere prematuramente, pero los embriones deben cortarse antes de que se produzca el aborto y cultivarse in vitro. Esta tcnica se ha utilizado ampliamente para producir hbridos econmicamente tiles tales como el triticale, que es la primera especie cereal artificialmente creada por el hombre (FAOOIEA, 1985). C. Cultivo de callos y clulas. En las plantas, las clulas diferenciadas conservan su capacidad para volver a entrar en la fase meristemtica y formar una masa no organizada del tejido llamada callo. Prcticamente todas las partes de la planta pueden formar el callo en ambientes nutrientes y hormonales favorables. La mdula del tallo del tabaco es un sistema

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modelo para estudiar el desarrollo y la diferenciacin del callo. Los explantes se colocan sobre la superficie del medio de cultivo que contiene cantidades exactamente equilibradas de auxinas y citoquininas. En el plazo de dos a tres semanas, el callo se reproduce sobre la superficie del explante. El subcultivo continuo sobre medios que poseen la misma composicin hormonal garantiza el desarrollo continuo del callo. La diferencia entre los distintos tipos de callos reside en las necesidades hormonales durante el cultivo a largo plazo. Algunos de ellos son independientes de las hormonas, lo que es tpico de los tejidos habituados. El rgimen de cultivo influye sobre la contextura del callo. Existen dos tipos de callos, a saber: friables y compactos. Los callos friables pueden dispersarse fcilmente en el medio lquido para obtener una suspensin celular. Los trozos de callos en el medio lquido se colocan en un agitador. Para dispersar completamente stos agregados y grupos celulares, as como las clulas separadas, hay que pasar la suspensin por tamices de acero inoxidable. La suspensin celular se cultiva en el medio lquido agitado. Bsicamente existen dos tipos de cultivos: los efectuados por lotes y los efectuados por agitacin. Se prefieren los agitadores giratorios. La suspensin celular en desarrollo se subcultiva en medios frescos. Se necesitan subcultivos de crecimiento rpido para mantener la dispersibilidad de la suspensin y reducir la agregacin celular. El material vegetal, el rgimen de cultivo y la composicin hormonal de los medios influyen sobre la forma de crecimiento de los cultivos. La densidad celular elevada favorece el crecimiento rpido y la produccin de biomasa. Los agregados celulares se producen, comnmente, en cultivos ms viejos. El desarrollo de los cultivos de clulas vegetales en suspensin se mide, generalmente, contando las clulas; para ello es sumamente til un hematocitmetro. La magnitud del crecimiento en suspensin tambin puede expresarse como volumen celular total o incremento del peso con agua. Inicialmente, el cultivo atraviesa por una fase de retardo, seguida de una fase de crecimiento exponencial y, despus de tres a cuatro generaciones celulares, los cultivos entran en una fase estacionaria. La viabilidad de las clulas cultivadas puede estimarse mediante varios mtodos de coloracin. Existen numerosas tcnicas de cultivo en placas que pueden utilizarse para cultivar una variedad de clulas vegetales. La suspensin celular puede cultivarse en una placa fina sobre el medio slido. La tcnica

corriente para obtener colonias de clulas separadas consiste en mezclar las alcuotas del cultivo lquido y el agar fundido que se enfran a una temperatura de 35oC. La mezcla se vierte rpidamente en una placa Petri. La suspensin celular y la tcnica del cultivo en placa son medios tiles demostrados para aislar mutantes en las plantas superiores (FAO-OIEA, 1985). D. Regeneracin de plantas. Muchos cultivos de tejidos vegetales pueden regenerar plantas completas. Existen dos procesos morfogenticos que conducen a la regeneracin de la planta, a saber: la organognesis y la embriognesis somtica. La diferenciacin organogentica supone la formacin de yemas de vstagos en el tejido cultivado, que puede inducirse cambiando la razn auxina/citoquinina; sin embargo, las necesidades de reguladores de crecimiento exgenos varan en los distintos sistemas de cultivo de tejido. El ciclo de la regeneracin de la planta completa termina con el enraizamiento del vstago. A condicin de que se coloque en el medio apropiado la clula vegetal somtica, puede convertirse en una planta completa de la misma forma que un embrin cigtico. El fenmeno de la embriognesis asexual est controlado por los factores de crecimiento que dependen de las caractersticas del material vegetal. Los embriones somticos maduros se convierten en plantas completas que se pueden transplantar al suelo. La transferencia de tejidos a las condiciones que contribuyan a la organognesis conduce, en primer lugar, a la diferenciacin de estructuras localizadas semejantes a los meristemos. Estos meristemoides son unidades monopolares, generalmente vascularizadas. Las hormonas del crecimiento determinan si los explantes o los callos regeneran vstagos o races. Ambos rganos, es decir, los vstagos y las races, rara vez se producen simultneamente. Por ste motivo se separan los vstagos diferenciados y se transfieren a los medios de enraizamiento que tienen una composicin hormonal distinta. Las plantas enraizadas se trasplantan a medios no estriles. La morfognesis in vitro est controlada principalmente por la razn auxina/citoquinina. Cuando los niveles de ambos reguladores son iguales se produce, generalmente, un desarrollo no organizado de callos. Las concentraciones relativamente elevadas de auxinas favorecen la diferenciacin radicular y, cuando las cantidades de citoquininas son ms elevadas, se promueve la

regeneracin de vstagos. Muy frecuentemente los vstagos se enraizan sobre medios de auxina, sin embargo, ste modelo no puede generalizarse. El fenmeno de la embriognesis en la suspensin celular cultivada constituye una excelente prueba de la totipotencia de las clulas de las plantas superiores. Es muy probable que cada embrin se derive de una sola clula. Los embriones somticos pasan por etapas en las que adquieren forma globular y de torpedo. Una caracterstica tpica de las poblaciones de embriones somticos es la amplia gama de tamaos y de etapas de desarrollo por las que atraviesan; adems, la embriognesis somtica es, algunas veces, repetitiva, y de los embriones en maduracin surgen otros nuevos. La capacidad morfogentica del cultivo celular es extremadamente elevada. Los embriones asexuales maduran y comienzan a germinar inmediatamente en el cultivo. Dado que los embriones son unidades bipolares, se forman vstagos y races. Las plantas derivadas de embriones se trasplantan al suelo despus de un corto perodo de cultivo in vitro. Recientemente, se ha conseguido regenerar plantas a partir de clulas somticas en muchos cultivos econmicamente importantes. Esta tcnica constituye un nuevo instrumento para la reproduccin vegetal y la fitotecnia. En el caso del maz, al igual que en el de otros cereales, el callo embriognico puede inducirse sobre medios de auxina. Este nuevo sistema ofrece excelentes posibilidades de regeneracin en masa de plantas. Los regenerantes del maz pueden convertirse en un valioso material de reproduccin (FAO-OIEA, 1985). E. Inestabilidad gentica de las clulas cultivadas. Los cultivos in vitro son objetos adecuados para los estudios citogenticos. La heterogeneidad citolgica es una caracterstica tpica de los cultivos de callos y clulas de la mayora de las especies vegetales. El origen de la variacin cromosmica est relacionada con el tipo de explante y las condiciones de cultivo. Algunos componentes del medio nutriente, como por ejemplo 2-4-D, influyen sobre la formacin de las clulas que tienen un nivel ms elevado de ploida. La

poliploidizacin es el proceso ms comn durante la induccin y el desarrollo de callos. La poliploida in vitro est relacionada con la endomitosis o la endoreduplicacin. Las clulas poliploides representan una fraccin permanente de tejidos no organizados. Algunas de ellas alcanzan un grado extremadamente elevado de poliploida. La presencia de aneuploida en clulas cultivadas tambin est bien documentada. La fragmentacin nuclear es frecuente. En diferentes cultivos de callos y clulas se han observado cambios careotpicos como consecuencia de aberraciones cromosmicas. A veces hay fragmentos tricntricos, cromosomas rezagados y puentes cromosmicos. Actualmente el anlisis detallado de las estructuras cromosmicas se realiza mediante las pruebas tcnicas de coloracin, tales como: la formacin de Bandas de Gimpsa y el intercambio de cromatidios hermanos (FAO-OIEA, 1985). F. Variabilidad gentica de los regeneradores. En las plantas regeneradas in vitro tambin puede encontrarse una notable variabilidad. En la poblacin de regenerantes se producen cambios fenotpicos en las caractersticas morfolgicas, fisiolgicas y agronmicas. La transmisin de las caractersticas a la generacin siguiente se ha demostrado, tanto en las progenies reproducidas en forma sexual como en las reproducidas en forma vegetativa. La variabilidad gentica en el sistema in vitro, que se denomina variacin somaclonal, puede aplicarse al cultivo de plantas reproducidas en forma vegetativa, como en el caso del ajo. Se dice que las plantas reproducidas por semillas, tales como el maz, tambin pueden modificarse genticamente in vitro. En la poblacin de regenerantes de cultivos de tejidos se han observado variantes morfolgicas parecidas a mutantes de un solo gen. Mediante la manipulacin in vitro puede inducirse una nueva variabilidad gentica. Las posibilidades del sistema aumentan con los mtodos de seleccin de clulas. Ya se est demostrando la aplicabilidad de la gentica de las clulas somticas y las tcnicas de cultivo de clulas para la mejora de cultivos (FAOOIEA, 1985).

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G. Andrognesis in vitro y produccin de haploides. En el cultivo de anteras, la andrognesis es sumamente importante para la produccin haploide de muchas especies de cultivos. El tabaco fue la segunda especie, despus de la Datura, en la que se utiliz eficazmente el cultivo de anteras para la produccin haploide en masa. Las anteras slo son sensibles en ciertas fases del desarrollo que dependen del genotipo y las condiciones del cultivo. Los signos externos, tales como la aparicin de la corola del cliz, pueden utilizarse para seleccionar la fase adecuada de las yemas. Tras la esterilizacin de la superficie, se abren los capullos y se retiran cinco estambres. Cada antera debe separarse de su filamento para evitar la formacin de callos a partir de los tejidos somticos. Las anteras intactas se colocan sobre la superficie de los medios nutrientes. En el caso del tabaco, la andrognesis tiene lugar en medios sencillos. El carbn es til para absorber inhibidores del agar. En los ltimos aos se han realizado progresos en la mejora de la tcnica de cultivo de anteras en los cereales, especialmente en el arroz, la cebada y el trigo; sin embargo, los procedimientos todava son muy empricos y los resultados no pueden an generalizarse. El xito del cultivo de anteras, en el caso de los cereales, depende, predominantemente, del genotipo de las plantas donantes. Las condiciones de cultivo podran mejorarse en el caso de cada genotipo, pero sta labor es bastante tediosa. El estado fisiolgico de la planta en el momento de la excisin de las anteras tambin influye sobre las posibilidades de desarrollo de las microsporas. Un factor descisivo es el aislamiento de las anteras en la fase adecuada de desarrollo del polen. Muy frecuentemente se utilizan medios especficos, en forma lquida, complementados con hormonas del crecimiento y otros componentes. Existen suficientes indicios del importante papel que corresponde a la pared de las anteras en el desarrollo del embrin polnico. En el caso de la mayora de las especies vegetales la fase polnica adecuada para la induccin de la andrognesis es la comprendida entre inmediatamente antes de la primera mitosis del polen y durante la misma. En las primeras fases del cultivo de anteras del tabaco las microsporas embriognicas inician la divisin repetitiva, forman estructuras multicelulares en la cavidad de las anteras que pasan por todas las fases del desarrollo embrionario y dan origen a cientos de embriones polnicos. Durante las

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etapas ulteriores del cultivo, las paredes de las anteras se rompen y dentro de la cavidad polnica germinan embriones polnicos. Despus de 20 a 40 das, aparecen en el cultivo de anteras plntulas verdes. El desarrollo directo del polen que da origen a plantas completas slo se produce en algunas especies, mientras que en otras, se produce el proceso de andrognesis indirecta, que abarca la proliferacin de microsporas en el callo y la regeneracin de plantas por organognesis. Este fenmeno se observ, por ejemplo, en los cereales. Las plantas haploides se trasplantan al suelo, donde continan desarrollndose hasta alcanzar la madurez. Una caracterstica tpica de los haploides es la esterilidad, debida a meiosis irregulares. Para obtener plantas frtiles es necesario duplicar el nmero de cromosomas, lo que se realiza, generalmente, mediante un tratamiento de colchicina. La diploidizacin da lugar a lneas plenamente homo-cigticas que constituyen un material de reproduccin sumamente valioso. Dado el creciente aumento de la poblacin mundial, la necesidad de producir cada vez ms alimento se ha convertido en un gran desafo. La tcnica del cultivo de tejidos vegetales es un instrumento poderoso que, en manos de botnicos fitotcnicos, puede ayudar a solucionar el problema del hambre en el mundo (FAO-OIEA, 1985). H. Micropropagacin. Si el cultivo de tejidos consiste en cultivar aspticamente diferentes explantes constituidos por fracciones de un tejido u rgano que se extrae de la planta, la micropropagacin es prcticamente una multiplicacin masiva in vitro. Actualmente, la micropropagacin se practica con xito en especies hortcolas (Murashige, 1978) ornamentales (Hughes, 1981) y, en especies leosas (Thorpe, 1983). En general las ventajas de la micropropagacin son las siguientes: Incremento acelerado del nmero de plantas derivadas por genotipo. Reduccin del tiempo de multiplicacin. Posibilidad de multiplicar grandes cantidades de plantas en una superficie reducida, a bajos costos y en tiempos econmicamente costeables. Mayor control sobre la sanidad del material que se propaga. Facilidad para transportar el material in vitro de un pas a otro, con menos restricciones aduaneras.

 Posibilidad de multiplicar rpidamente una variedad de la cual slo existan pocos individuos. I. Manejo de plantas, producidas por cultivo de tejidos, en el vivero. El cultivo de tejidos o micro-propagacin se ha tornado importante para la produccin de plantas ornamentales en Florida. El cultivo de tejidos permite la rpida multiplicacin de nuevos hbridos y cultivares, y es la mejor forma de producir, uniforme y libre de enfermedades, material madre de propagacin vegetativa. La micropropagacin es, actualmente, ampliamente utilizada tambin para la produccin de plantas de follaje. Muchos viveros de plantas de follaje regularmente compran plantas provenientes de cultivo de tejidos, que han crecido a un tamao comercial. Las plntulas producidas por cultivo de tejidos requieren especial atencin durante la transcisin desde el laboratorio al invenadero y muchas prdidas ocurren durante ste perodo crtico. El ambiente en el cual los tejidos han estado cultivados es de baja intensidad de luz, relativamente libre de plagas y enfermedades, cerca del 100% de humedad relativa y estril, muy diferente de las condiciones tpicas de un invernadero o casa sombreada (Universidad de Florida, 1995b). El proceso del cultivo de tejidos se divide en cuatro etapas. La etapa I ocurre completamente en el laboratorio. Los procesos del vivero relacionados con el material de cultivo de tejidos conciernen nicamente a las etapas II a IV. Los materiales de la etapa II, o microesquejes, son brotes no enraizados o parcialmente enraizados, cosechados de cultivos proliferados. Las plntulas en etapa III tienen ambos, brotes y races. Las plntulas en etapa IV son plantas provenientes de cultivo de tejidos que ya estn completamente establecidas y que se cultivan en un medio de crecimiento stndard y que, por lo tanto, reciben las condiciones tpicas para esas condiciones. Los lineamientos de la etapa IV son los ms caros en la produccin del material de cultivo de tejidos, pero necesita menos cantidad de cuidados especiales. Los microesquejes en la etapa II son los menos caros, pero son muy delicados. Plntulas enraizadas en la etapa III representan un rango medio, tanto en costo como en atencin especial requeridos para cultivarlos en el vivero. De especial atencin es la sanidad durante el proceso de plntulas provenientes de cultivo de tejidos,

ya que este material vegetal ha sido producido bajo cuidadosas y controladas condiciones, libres de plagas y enfermedades (Universidad de Florida, 1995b). Plntulas o microesquejes, recibidos del laboratorio de cultivo de tejidos, deben ser atendidos lo ms pronto posible. Las prdidas pueden ser reducidas si el material es establecido en el ambiente de transicin, lo ms pronto posible. Deben lavarse las manos muy bien antes de manejar el material. El rea de trabajo debe prepararse antes de manejar el material vegetal. Los contenedores deben ser llenados con medio para plntulas y con la ayuda de herramientas para un acceso fcil. Contenedores especiales, como bandejas, son a menudo usadas para enraizar microesquejes o establecer plntulas provenientes de cultivo de tejidos. Comprimidos (pellets) de musgo (peat moss) y bloques de espuma (foam) tambin pueden ser usadas para enraizar microesquejes. La mezcla de suelo ms comnmente usada para establecer plntulas provenientes de cultivo de tejidos o enraizar microesquejes debe contener, al menos, 50% de musgo (peat moss), combinado con materiales variados como vermiculita, broza, perlita o ceniza. Fertilizantes de liberacin lenta y micronutrientes son comnmente mezclados con el medio. El pH del suelo necesita ser ajustado de acuerdo a las necesidades del material vegetal. Es tambin importante que la mezcla est libre de partculas demasiado grandes, una mezcla fina es ms fcil de colocar en los pequeos contenedores y disminuye la posibilidad de daos a las tiernas plntulas o microesquejes. Las bandejas se sobresaturan con agua y se deja drenar el exceso. Es ms fcil plantar en un medio hmedo que en uno seco. Las plntulas enraizadas, a menudo se reciben con el medio de agar en el cual han crecido. Los microesquejes deben ser enjuagados con agua limpia a temperatura ambiente. Los microesquejes no enraizados deben llegar en bolsas plsticas o recipientes con la mayora del agar removido, los cuales deben ser lavados con agua limpia a temperatura ambiente. Es importante que la humedad alrededor de las plntulas o microesquejes permanezca arriba del 75% durante el proceso de transferencia, ya que estas plntulas han estado en una humedad relativa cercana al 100% en el laboratorio. Los microesquejes pueden, tambin, ponerse a flotar en recipientes con agua. El ambiente en el cual la siembra toma lugar debe ser diseado para disminuir el stress de las plntulas provenientes del cultivo de tejidos. Una baja

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intensidad de luz y una moderada temperatura debe ser mantenida mientras se trabaja. Un dispositivo simple para plantar pequeas plntulas en pequeos recipientes, y que funciona muy bien, es una navaja, haciendo una depresin poco profunda en el medio del recipiente, lo suficientemente profundo para poner el sistema radical de las plantas en etapa III o los tallos de los microesquejes en etapa II. Cuidadosamente se toma una plntula o microesqueje del recipiente de manejo, teniendo cuidado de no aplastar el tallo o las hojas, colocando la plntula enraizada en el agujero lo suficientemente profundo para asegurar la planta. La yema del dedo puede ser usada para acomodar el sustrato en el agujero para cubrir las races. No se debe compactar demasiado el sustrato alrededor de las races, ya que se daar la plntula. Un microesqueje sin races puede ser sembrado un poco ms profundo pero slo lo suficiente para mantenerlo en su lugar durante el perodo de enraizamiento. Es importante trabajar rpido cuando se manejan plntulas de cultivo de tejidos recin llegadas para reducir la posibilidad de que sufran stress. Al mismo tiempo, el material debe ser manejado con el suficiente cuidado para evitar daos a los tejidos de las plantas. Las bandejas para plntulas se colocan en una banca con microaspersin (niebla o neblina). La disponibilidad de condiciones de crecimiento iniciales son determinantes y se le deben proveer durante los primeros das crticos que siguen al transplante. En el laboratorio, el material de cultivo de tejidos est expuesto a un nivel bajo de luz, usualmente entre 100 y 1000 pies candela. Estas plantas deben ser expuestas gradualmente a niveles ms altos en el invernadero. Muchas cubiertas para sombreado necesitan ser erigidas directamente sobre el rea del invernadero usado para plantas provenientes de cultivo de tejidos. Una buena regla que puede seguirse es doblar el nivel de luz cada una a dos semanas, hasta que las plantas se ajusten a las condiciones tpicas de invernadero. Bandejas fabricadas especialmente para plntulas provenientes de cultivo de tejidos vienen equipadas con tapas de plstico que actan como invernaderos miniaturizados, manteniendo una alta humedad alrededor de las plntulas. Una neblina fina o sistema de propagacin por neblina es probablemente la mejor forma de establecer plntulas de cultivo de tejidos, as como tambin para enraizar microesquejes. La microaspersin debe ser frecuente, en primer lugar, para prevenir la deshidratacin de las plntulas. El

intervalo de la frecuencia puede ser lentamente incrementada conforme el material madura. Debe ser suministrado sombreado. El contenedor del sustrato no debe mantenerse demasiado mojado, ya que causa daos. Los sistemas de neblina son caros pero tiles, porque mantienen la humedad alta pero el sustrato no se satura directamente por las gotas de agua. En cultivo de tejidos, las plantas no son sometidas a cambios extremos de temperatura. Material tropical en cultivo, usualmente se mantiene a cerca de 78 grados Fahrenheit (25.5 grados centgrados). El rango de fluctuacin de temperatura encontrado en la mayora de invernaderos puede ser demasiado extremo para plntulas frescas de cultivo de tejidos. Una temperatura diurna de 80 a 85 grados (26.6 a 29.C) y una cada de 5 grados en la noche (2.8C) es recomendable. Un programa regular de aplicacin de fungicidas durante la primera semana de establecimiento ayuda a prevenir prdidas de plntulas por enfermedades de las races. Sobre todo, los niveles de humedad en el contenedor del sustrato debe ser pareja. Los pequeos contenedores usados para plntulas de cultivo de tejidos mantienen un pequeo volumen de sustrato y pueden secarse muy rpido. Es necesario monitorear el material varias veces al da, al principio. En unas pocas semanas, vigorosas plntulas de cultivo de tejidos o microesquejes, debern llenar los pequeos contenedores con races saludables. A ste tiempo ya estn listas para ser tratadas como otra planta producida por cualquier mtodo tradicional de propagacin. La mayora de plantas provenientes de cultivo de tejidos son uniformes, ocasionalmente aparecen variantes, las cuales debern ser removidas de la bandeja. En resumen, los pasos para el apropiado establecimiento de plntulas de cultivo de tejidos o microesquejes son: estar preparado para sembrar las plntulas provenientes de cultivo de tejidos tan pronto se reciban del laboratorio; enjuagar cualquier remanente de medio de agar del material antes de sembrar; mantener altos niveles de sanidad cuando se manejen plantas de cultivo de tejidos; mantener alta humedad, moderada temperatura y baja luminosidad durante el proceso de siembra; durante la primera semana crtica de establecimiento, proteger las plntulas o micro-esquejes de la luz intensa, extrema temperatura y stress por humedad. Con solo algunos pequeos esfuerzos la micropro-pagacin puede proveer un cultivo con plantas

vigorosas, libres de enfermedades y uniformes, que rpidamente pueden crecer a un tamao comercial (Universidad de Florida, 1995b). 4.3. EQUIPO Y PROCEDIMIENTOS 4.3.1. PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL CULTIVO DE TEJIDOS Cada ao, millones de plantas leosas y herbceas son producidas por cultivo de tejidos o micropropagacin. Este procedimiento de alta tecnologa involucra el cultivo de una nueva planta a partir de un pice o seccin de tallo de una planta preexistente. El cultivo de tejidos ha venido incrementando su importancia en la produccin de viveros en los ltimos 15 aos. Existen ms de 100 laboratorios comerciales en los Estados Unidos, con ms de 30 de ellos localizados en Florida. Estos laboratorios, rutinariamente, producen plantas frutales, flores, follajes y ornamentales, utilizando cultivo de tejidos (Universidad de Florida, 1995a). El cultivo de tejidos permite la rpida multiplicacin de una gran gama de especies y es la mejor forma de producir material vegetal uniforme y libre de enfermedades. El material vegetal es una parte o pedazo de una planta. El cultivo de tejidos es tanto una ciencia, como un arte. Como ciencia, el cultivo de tejidos requiere un laboratorio y exactitud y cuidado en la preparacin del medio de crecimiento formulado. Tambin requiere la precisa manipulacin del material vegetal bajo condiciones controladas. Como arte, el cultivo de tejidos requiere habilidad manual para trabajar con pequeas y delicadas porciones de material vegetal, mientras se previene la contaminacin de los cultivos. El alto grado de sanidad necesario es denominado como condiciones aspticas. El cultivo de tejidos difiere de los mtodos convencionales de propagacin de plantas, no solamente en los mtodos aspticos usados, sino tambin por el tipo de equipo necesario. La cmara de flujo laminar es la estacin de trabajo para el procedimiento de cultivo de tejidos. El aire ingresa a travs de ductos situados por debajo de la superficie de trabajo. Contaminantes como: polvo, suciedad, esporas de hongos y bacterias, son filtrados y el aire limpio es soplado hacia el trabajador. Toda la cristalera, sujetadores de instrumentos, toallas de papel, agua e inclusive el medio de cultivo debe ser esterilizado a alta presin y alta temperatura, en una limpiadora

a vapor llamada autoclave. Las herramientas ms frecuentemente utilizadas en cultivo de tejidos son pinzas y bistur. Mientras trabaja, las herramientas deben ser esterilizadas en un el incinerador, colocando las pinzas y bistur en el l por cerca de 5 segundos. La temperatura del aire en el incinerador est entre 1500 y 1600 grados Fahrenheit. Deben esterilizarse 4 juegos de herramientas, de tal manera que un juego siempre est fro. Despus de la esterilizacin las herramientas deben colocarse en un soporte, a menudo una gradilla de tubos de ensayo, la cual debe ser esterilizada en un autoclave. Tambin se utilizan toallas de papel y alcohol para esterilizar (Universidad de Florida, 1995a). Tcnica de asepsia. La tcnica de asepsia empieza con la limpieza personal, sencillamente con el lavado de manos, uas y antebrazos, con agua y jabn, antes de empezar el trabajo en la cmara. Debe mantenerse a mano una botella de etanol al 70% en la estacin de trabajo, para la limpieza de manos y rea de trabajo mientras se est trabajando. Casi siempre se usan batas de laboratorio. El cabello largo debe recogerse hacia atrs y colocarse dentro de un gorro. Si la cmara de flujo laminar se encuentra apagada, debe encenderse por lo menos 15 minutos antes de empezar a trabajar. Tambin debe lavarse el rea de trabajo con alcohol y colocar una toalla de papel esterilizada. Las herramientas deben colocarse de tal forma que no se crucen los brazos sobre el rea de trabajo cuando se les alcanza. No deben tocarse las toallas de papel estril o el material vegetal con las manos mientras se trabaja. Al hablar, la cabeza debe moverse hacia afuera de la cmara y se debe evitar, por todos los medios, estornudar o toser dentro de la cmara (Universidad de Florida, 1995a). Procesos de cultivo de tejidos. La etapa I es la etapa inicial de establecimiento del material vegetal en el medio de cultivo estril. El material vegetal puede, o no, estar establecido. En cultivo de tejidos se usa un medio especial a base de agar. El medio contiene: agar, azcar, nutrientes para plantas y un balance especial de hormonas vegetales (reguladores del crecimiento) que estimulan el crecimiento. El medio es cuidadosamente mezclado, colocado en recipientes de cultivo y esterilizado en el autoclave. Diminutos pices o secciones de tallo son removidos del material madre sano, stos son llamados explantes. Los explantes son desinfectados en una solucin diluida de cloro y

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transferidos cuidadosamente al medio especial. Estos cultivos deben ser mantenidos en un ambiente cuidadosamente controlado, llamado cuarto de crecimiento. El balance de las hormonas vegetales en el medio, induce a las plantas a producir muchos nuevos brotes. Estos cultivos proliferados se encuentran en la etapa II. El material obtenido de la etapa II ser dividido en subcultivos, lo cual resultar en posteriores proliferaciones de la etapa II; o bien, puede cosechar los brotes individuales, tambin llamados microesquejes y colocarlos en un medio que estimule la formacin de races. Una vez se formen las races, los microesquejes se encuentran en la etapa III. La importancia de mantener una tcnica asptica debe ser reenfatizada cuando se trabaja con cultivo de tejidos de plantas en la cmara de flujo laminar, ya que el medio estril de agar usado en micropropagacin ayuda al crecimiento de bacterias y hongos, al igual que los cultivos de plantas (Universidad de Florida, 1995a). Los cultivos de tejidos en la etapa II pueden ser divididos y colocados de nuevo en el mismo tipo de medio que se us en los explantes o bien, colocados en un medio con diferente balance de hormonas vegetales para estimular el enraizamiento. Cuidadosamente, se remueve la tapadera y se pone a un lado. Posteriormente se remueve el grupo de brotes con la ayuda de una pinza estril y se coloca sobre una de las toallas de papel estril. Se debe sealar que es importante trabajar rpido para que el material vegetal no se deshidrate. Con su bistur estril, cuidadosamente se separan los brotes ms grandes en grupos ms pequeos. Sobre los brotes grandes la tendencia tambin puede de ser mantenerlos del mismo tamao. Siempre debe mantenerse enfrente de la cmara mientras se trabaja, con las manos hacia enfrente y el material vegetal enfrente de las mismas, para prevenir su contaminacin. Deben esterilizarse las herramientas en el incinerador despus de cada operacin. El recipiente que contiene el medio fresco, debe desinfectarse con alcohol, previo retirrsele cuidadosamente la tapa la cual, si es lo suficientemente pequea para hacerlo cmodamente, debe mantenerse en las manos mientras se trabaja. De lo contrario, debe colocarse sobre una toalla de papel estril. Con una pinza tambin estril se toma una de las divisiones ms pequeas y, cuidadosamente, se inserta en el medio fresco, justamente lo suficientemente profundo para mantenerla estable, teniendo cuidado de no tocar con

la pinza el medio o la pared del recipiente. Posteriormente, se vuelve a colocar la tapa del tubo o frasco. Debe etiquetarse el nuevo subcultivo de acuerdo con el sistema seguido por cada laboratorio. Despus de que los subcultivos se han establecido, deben ser enviados al vivero como cultivos no enraizados multiplicados en la etapa II, microesquejes no enraizados, microesquejes enraizados en la etapa III o plntulas en etapa IV, que son enraizadas en sustrato con medio tpico de condiciones de vivero. Una vez ms, es importante recordar las reglas de la tcnica asptica, ya que con slo unos pocos segundos de descuido en la cmara, meses de trabajo pueden ser fcilmente destruidos (Universidad de Florida, 1995a). 4.4. EMPLEO DE TCNICAS IN VITRO PARA LA MEJORA DE CULTIVOS: REQUISITOS EN EL LABORATORIO Y MTODOS GENERALES. Desde tiempos inmemoriales el ser humano se ha esforzado por mejorar las plantas de cultivo y aumentar su rendimiento mediante la seleccin de variedades con caractersticas ventajosas. Antiguamente la seleccin era ms bien un proceso accidental que dependa, en cierta medida, de la habilidad y la intuicin humana. El descubrimiento, en 1865, de las leyes de Mendel, fue el acontecimiento decisivo; sin embargo, fue slo a comienzos del presente siglo que se tom conciencia de su importancia y, desde entonces, la fitotecnia (fitomejoramiento) se considera sobre una base cientfica. Los mtodos de fitotecnia actuales han permito aumentar espectacularmente los rendimientos de la mayora de las plantas de cultivo. El procedimiento de fitotecnia comienza con la seleccin de progenitores apropiados para realizar cruzamientos. El fitotcnico selecciona dentro de la descendencia resultante del cruce las plantas que poseen las caractersticas deseadas, las cuales dependen de una cierta combinacin de genes. Adems del cruzamiento, el fitotcnico utiliza otros mtodos genticos para aumentar la variabilidad de las plantas. El mtodo de la mutagnesis inducida, por ejemplo, permite producir cultivares de rendimiento elevado. Actualmente, los fitotcnicos trabajan, no slo en el terreno, sino tambin en el laboratorio con un medio ambiente controlado. Los progresos realizados en las disciplinas cientficas, como la fisiologa vegetal y la fitogentica, permiten realizar manipulaciones genticas con las plantas, a nivel de clulas y partes aisladas (FAO-OIEA, 1985).

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Un laboratorio corriente de cultivo de tejidos debe disponer de los instrumentos y aparatos necesarios para lavar y almacenar la vidriera (cristalera), preparar y esterilizar medios nutrientes, realizar manipulaciones aspticas, efectuar cultivos en condiciones controladas y evaluar los cultivos. El primer paso importante de la tcnica general de cultivo de tejidos es el lavado adecuado de la vidriera. Despus de lavarse con detergente, la vidriera se enjuaga cuidadosamente, primero con agua del grifo y luego con agua destilada. Las lavavajillas automticas son muy tiles, especialmente en los laboratorios grandes. Los tubos de ensayo (tubos de cultivo), las pipetas y los objetos pequeos, tales como: los portafiltros, los tamices y los instrumentos de laboratorio se lavan en la lavadora ultrasnica. El agua de tubera convencional no es adecuada para los medios de cultivo de los tejidos vegetales, ni para ser utilizada en el laboratorio. Mediante mtodos de purificacin se obtiene agua exenta de pirgenos, gases y materias orgnicas. El mtodo ms comn, y preferido, para purificar el agua es el tratamiento por desionizacin, seguido de una o dos destilaciones del agua, en alambique de vidrio (destilador). Para la preparacin de medios nutrientes es necesario utilizar productos qumicos de alta calidad. Las sustancias se pesan, preferiblemente, en balanzas de laboratorio (balanzas analticas o de precisin). En matraces aforados se preparan, regularmente, soluciones con una concentracin 10 veces superior a la normal. Las soluciones se almacenan en un refrigerador o congelador para su futura utilizacin. La fusin del agar es el primer paso en la preparacin de medios slidos. El agar se disuelve, generalmente, para obtener concentraciones comprendidas entre el 0,6 y el 1,2%. El agar se calienta, corrientemente, al bao de Mara, pero, para ahorrar tiempo, se recomienda el empleo de un horno de microondas. Los cultivos de tejidos vegetales requieren una fuente de carbn en los medios nutrientes. La ms comnmente utilizada es la sucrosa (sacarosa), con una concentracin del 2 al 5% (FAO-OIEA, 1985). Los elementos minerales son esenciales para el desarrollo de partes aisladas de las plantas. Los principales macronutrientes son: el nitrgeno, el fsforo, el azufre, el calcio, el potasio y el magnesio. Para un desarrollo in vitro adecuado el medio debe contener, por lo menos, 25 mM de nitrato y potasio. Todas las especies de plantas necesitan seis

microelementos esenciales que son: magnesio, zinc, cobre, boro, molibdeno y cloro. Las concentraciones de los macro y micronutrientes varan en funcin de las distintas composiciones de los medios. Los medios, actualmente utilizados, contienen hierro, ligado por quelatos (mezcla de Fe y EDTA). El EDTA frrico (cido etilendiaminotetraactico) contina disponible independiente del pH de los medios. La tiamina es, con mucho, el aditivo vitamnico ms importante. El cido nicotnico, la piridoxina y el pantotenato, as como otras vitaminas del complejo B, tambin son tiles para el crecimiento in vitro. El inositol, con una concentracin de aproximadamente 100 miligramos por litro estimula, generalmente, el crecimiento del trozo extrado de una planta, denominado explante (FAO-OIEA, 1985). Se sabe que hay varias clases de hormonas del crecimiento (reguladores del crecimiento) que son importantes para el cultivo de tejidos vegetales. La caracterstica comn de las auxinas (cido indolbutrico, cido naftalenactico, cido indolactico, cido 2-4 diclorofenoxiactico, etctera) es que estimulan la divisin celular y la iniciacin radicular. Las citoquininas (kinetina, bencil aminopurina, zeatina, 2 isopentil adenina, etctera) son derivados de la adenina, que desempean un papel importante en la induccin de vstagos. Algunas citoquininas son tiles para la reproduccin in vitro. Las giberelinas tambin pueden estimular un nuevo crecimiento. Por lo regular, los reguladores de crecimiento no se utilizan solos, sino en combinaciones, que dependen del material vegetal y las pautas de crecimiento. Ya existen medios nutrientes empaquetados, listos para su uso. Estos medios permiten ahorrar tiempo y evitar, durante la preparacin, los errores. Los medios comunes, tales como: Murashigue y Skoog, Nitch y otras composiciones, ya se encuentran en el mercado. El agar, la sucrosa y todos los dems nutrientes, se mezclan en el recipiente aforado, que se llena, con agua destilada, hasta la marca de calibracin. El pH de los medios se ajusta, generalmente, antes del autoclaveado, utilizando hidrxido de sodio (NaOH) poco concentrado. El pH determina la solubilidad y disponibilidad de iones minerales y afecta las propiedades gelificantes del agar. El pH vara, generalmente, entre 5 y 6, y puede calcularse con la ayuda de un medidor de pH (potencimetro) o de papeles indicadores del pH. El medio de agar caliente

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se vierte en recipientes de cultivo, que se sellan con papel de aluminio. Para los cultivos de tejidos vegetales se utilizan recipientes de distintas formas. Los tubos de ensayo (tubos de cultivo) son apropiados para los cultivos de meristemos o embriones, mientras que los matraces, o recipientes de plstico, se utilizan para el cultivo de callos y clulas. El autoclavado es un procedimiento corriente de esterilizacin a alta presin. El tiempo de exposicin vara en funcin del volumen del lquido que ha de esterilizarse, por ejemplo, 15 minutos son suficientes para esterilizar 20 mililitros del medio, a una temperatura de 121 grados centgrados y a una presin de 0,122 megapascales (15 libras por pulgada cuadrada). Si no se dispone de una autoclave puede utilizarse una olla a presin de uso domstico. La esterilizacin por filtracin es otro mtodo de esterilizacin de lquidos. Para este procedimiento se utilizan membranas filtrantes a prueba de bacterias y con poros de 0,22 m (micrmetros). Las membranas se ajustan a los portafiltros y todo el equipo es autoclaveado. La solucin se vierte, gradualmente, a travs de la membrana en el recipiente estril. El paso siguiente se realiza, en condiciones estriles, sobre un banco transportador (cmara de flujo laminar). La solucin esterilizada se aade directamente al medio de agar lquido o en solidificacin. La esterilizacin por filtracin es el mtodo que se prefiere para tratar compuestos termolbiles. Algunos reguladores de crecimiento, mutgenos qumicos, toxinas, etctera, no deben ser autoclaveados (FAO-OIEA, 1985). Los experimentos continan, luego, en un invernadero. Prcticamente todas las partes de una planta pueden utilizarse como fuente de explantes. Los explantes deben ser esterilizados (desinfectados) a fondo antes de ser cultivados. Para ello se sumerge el material en una solucin desinfectante, como por ejemplo, 70% de etanol o hipoclorito sdico, etctera. Unas pocas gotas de un agente superficie activo, como por ejemplo Tween 80, aumenta la eficacia desinfectante. Todas las operaciones de cultivo de tejidos deben realizarse en condiciones estrictamente aspticas, por ejemplo, en una habitacin sin polvo, dotada de un ventilador impelente, con un filtro a prueba de bacterias. La zona de transferencia (cuarto de transferencia) est equipada con luces ultravioletas. Actualmente, la mayora de laboratorios de cultivo de tejidos cuenta con cmaras de flujo de aire laminar, que se pueden obtener en varias formas y tamaos.

Esencialmente en una cmara de flujo de aire laminar el aire pasa primero por un filtro de polvo, donde se filtran las partculas de gran tamao, despus, el aire se extrae a travs de un filtro fino, que elimina las partculas de tamao superior a 0,3 m. El aire, exento de contaminantes fungosos y bacterianos, circula por la zona de trabajo. Es necesario fregar la superficie de trabajo del banco con desinfectantes. Aunque la mayora de los instrumentos se esterilizan con aire seco y caliente, es necesario reesterilizarlos constantemente durante la manipulacin asptica. El calentamiento con soplete se utiliza comnmente para los instrumentos en metal y de vidrio. Es conveniente comprobar la esterilidad de los objetos tocando la superficie de los medios de ensayo, por ejemplo, la mezcla de bactopeptona y agar. Muchos lugares de las instalaciones de cultivo de tejidos pueden ser fuentes permanentes de microorganismos contaminantes. Este problema se ve agravado en los ambientes tropicales, por la mayor temperatura y humedad del aire. La humedad continua, cerca del autoclave, genera millones de esporas bacterianas y fungosas que, inevitablemente, agravan los problemas de contaminacin en un laboratorio de cultivo de tejidos. La principal fuente de contaminacin en la zona de transferencia, son los propios seres humanos. El equipo, el material vegetal y otros objetos llevados a la zona de transferencia, pueden estar muy infestados. Los propios cultivos contaminados son una posible fuente de esporas microbianas. Dicha contaminacin debe eliminarse siempre mediante autoclaveado, antes de abrir el recipiente para lavarlo. Se preparan explantes apropiados a partir del material esterilizado en su superficie, utilizando instrumentos desinfectados. Las partes de las plantas se cortan en placas de Petri estriles. Todo el equipo que se encuentra en el banco de operaciones, como el estereo-microscopio, debe ser esterilizado en su superficie antes de utilizarse. El inculo estril se coloca dentro de recipientes de cultivo sobre la superficie de los medios nutrientes. Los recipientes se sellan herm-ticamente como medida de proteccin contra la contaminacin por partculas en suspensin en el aire. El cultivo de tejidos vegetales debe incubarse en condiciones controladas. La luz de lmparas fluorescentes es el tipo de luz principal que se prefiere para el cultivo de plantas in vitro. Factores tales como: la temperatura durante el da y durante la noche, la intensidad de la luz, la calidad y fotoperodo de la luz, influyen sobre el desarrollo y la reaccin de

diferenciacin de los cultivos. La temperatura oscila, generalmente, entre los 20 y 28 grados centgrados. Todo el ciclo del cultivo de tejidos vegetales termina con la regeneracin y transplante a un sustrato no estril de la planta completa. Sin embargo, las plntulas cultivadas in vitro son, generalmente, ms sensibles a las condiciones ambientales, especialmente a la fuerza del agua y a las enfermedades. El sustrato inerte, como la perlita, es la mezcla adecuada para la primera fase del transplante a macetas. En condiciones de invernadero, o de campo, los regenerantes continan creciendo y desarrollndose, hasta alcanzar la madurez. El fenmeno nico de la diferenciacin de las plantas es un punto clave que permite aplicar las tcnicas in vitro a la reproduccin vegetal, la fitotecnia y la ingeniera gentica (FAO-OIEA, 1985). 4.5. CONTROL DE LA CONTAMINACIN. Uno de los requisitos bsicos para el xito de la tcnica de cultivo de tejidos es mantener los cultivos libres de microorganismos contaminadores. Los microbios ms comunes que contaminan los tejidos vegetales son: nemtodos, hongos, bacterias, virus, micoplasmas y rikettsias. Los microbios pueden encontrarse en la superficie del explante, en cuyo caso se les denomina exgenos, o en el interior de las clulas o en los espacios intercelulares, en cuyo caso se les denomina endgenos (George, 1993). 4.5.1. FUENTES DE CONTAMINACIN. Las siguientes son las fuentes de donde proceden los contaminadores; cada una requiere diversas medidas de prevencin: Los tejidos. Pueden llevar contaminadores en su superficie o en su interior, o en ambas partes. Los que lleva el explante sobre su superficie se pueden eliminar mediante la desinfeccin, pero los que se encuentran dentro del tejido son difciles de eliminar. En este ltimo caso puede ser til la inclusin de fungistticos o bacteriostticos en el medio de cultivo; el sulfato de gentamicina, la penicilina y el sulfato de estreptomicina (10 a 50 mg/l), son algunos de los productos de amplio espectro que se pueden usar. El tratamiento de las plantas donantes del explante por medio de altas temperaturas (35 a 40C) tambin es efectivo para la obtencin de segmentos de tejidos libres de bacterias y hongos

sistmicos (CIAT, 1991). El rea de trabajo. Los contaminadores ms comunes son las bacterias y las esporas de hongos que habitan en el ambiente. La utilizacin de cabinas o cuartos adaptados con un sistema de flujo laminar de aire, el cual penetra a travs de filtros a prueba de microbios, permite mantener la asepsia durante el trabajo. Si el rea de trabajo carece de estas instalaciones, se hace necesario limpiar las paredes y las mesas con desinfectantes y trabajar en lo posible durante cortos perodos de tiempo (CIAT, 1991). Los instrumentos. Los instrumentos de trabajo se deben esterilizar antes de usarlos. Se debe tener en cuenta, sin embargo, que los instrumentos inicialmente estriles pueden contaminarse con microbios del aire, de superficies vegetales mal desinfectadas, de las manos o de la exhalacin del investigador. Lo ms aconsejable es trabajar con varios juegos de las mismas herramientas y mantener la asepsia de las que se han usado, colocando los instrumentos en alcohol etlico al 70% de 2 a 3 minutos y flamendolos luego cuidadosamente. La exposicin excesiva a la llama (flameo) hace que el metal pierda temple y se oxide; adems, se propicia la acumulacin en el metal de materia orgnica carbonizada difcil de remover. Por lo tanto, se debe alternar el flameo hecho despus de la inmersin de los instrumentos en alcohol, con la colocacin de los mismos contra la corriente de aire de la cabina de trabajo para mantener su esterilidad mientras que el alcohol residual se evapora (CIAT, 1991). El exterior de los recipientes de cultivo. Existe la posibilidad de que, durante el tiempo transcurrido entre la esterilizacin de los recipientes con los medios de cultivo y el momento de usarlos, se localicen en su exterior ciertos contaminadores, de tal manera que se mantenga estril slo el interior de los tubos; por lo tanto, se debe flamear obliga-toriamente la boca de cada tubo antes y despus de sembrar el explante (CIAT, 1991). El investigador. El investigador es una fuente primaria de contaminadores. El uso de batas de laboratorio y de guantes limpios y la proteccin del cabello, la boca y la nariz reducen la contaminacin. Las batas limpias y las mscaras son necesarias, sobre todo cuando se trabaja en un laboratorio sin flujo laminar de aire. Es esencial

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que el investigador se limpie bien las manos y los brazos (lavndolos con jabn y agua y enjuagndolos con alcohol al 70%) antes de iniciar una sesin de trabajo (CIAT, 1991). 4.5.2. ESTERILIZACIN. La esterilizacin es el proceso mediante el cual cualquier material, sitio o superficie se libera completamente de cualquier microorganismo vivo o espora. Se dice que tales materiales o sitios son estriles o se han esterilizado. En la terminologa mdica se utiliza generalmente la palabra asepsia para designar la condicin en la que estn ausentes los microorganismos patgenos; quienes trabajan en el cultivo de tejidos de plantas utilizan la palabra asptico como sinnimo de estril. La desinfeccin se limita generalmente al proceso de destruccin de los microorganismos mediante mtodos qumicos; la esterilizacin se refiere a menudo al mtodo fsico para la destruccin de los microorganismos. Se utiliza la palabra axnico para las preparaciones que estn libres de virus, viroides o micoplasmas (George, 1993).

de bicloruro de mercurio (HgCl2). Sin embargo, este producto es altamente txico y se debe utilizar con mucha cautela; generalmente, basta con una solucin acuosa entre 0.1% a 1.5% (p/v) y una exposicin de 3 a 10 minutos para que la esterilizacin tenga efecto. El problema principal del bicloruro de mercurio no slo es su naturaleza altamente venenosa y corrosiva, sino la dificultad para removerlo mediante el enjuague; a pesar de esto, tiene su valor en la esterilizacin (Yao et al., 1981). 4.5.4. PROCEDIMIENTO PARA LA ESTERILIZACIN. El calor es uno de los agentes que se utiliza con ms frecuencia en la esterilizacin. Se puede usar en forma de llama directa, de calor hmedo (vapor) o de calor seco (aire caliente); cuando se utiliza el calor hmedo, puede ser en forma de vapor abierto o de vapor bajo presin. Ocasionalmente se puede usar agua caliente pero no hirviendo. Como es bien conocido, el xito en el logro de esterilidad en cualquier preparacin depende de muchos factores, como son la naturaleza de la sustancia que se esteriliza, el volumen contenido en cada unidad, el tamao del recipiente y el nmero de unidades que se pueden manejar en una sola operacin. Por consiguiente, no se pueden dar instrucciones especficas relacionadas con el mtodo de esterilizacin que se utiliza para una preparacin individual; en contraposicin, se presentan sugerencias generales relacionadas con los procedimientos de esterilizacin (CIAT, 1991). Calor seco. Los recipientes de vidrio secos que se utilizan para operaciones estriles se pueden esterilizar por medio de aire caliente; para el efecto se colocan en una estufa de aire caliente a una temperatura mnima de 170C, preferiblemente durante dos horas, pero nunca menos de una hora. El algodn (debidamente envasado) a menudo se esteriliza por intervalos ms largos, ya que tiende a contener esporas altamente resistentes; puesto que tanto el algodn como el papel toman un color marrn a temperaturas de 190C o superiores, para estos materiales se debe usar una temperatura menor de 170C, mantenindolos bajo ella por lo menos durante una hora. Es obvio que todos los materiales esterilizados mediante calor seco debern estar limpios, e incluso libres de trazas de materia orgnica (CIAT, 1991).

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4.5.3. PREPARACIN DEL EXPLANTE. Generalmente se considera que los tejidos de las plantas intactas y sanas son aspticos internamente y que la principal tarea de limpieza del material para explantes est limitada a la esterilizacin superficial. Si esta generalizacin se justifica o no, es debatible, pero en esta breve discusin se supone que tal es el caso. La solucin de hipoclorito de sodio (NaOCl), en concentraciones de 1% a 3%, es una de las preparaciones ms tiles como germicida y agente oxidante. Sirve para la esterilizacin superficial de materiales de todo tipo, siempre y cuando no se produzcan lesiones debido a su accin blanqueadora. Durante muchos aos se ha utilizado el NaOCl como un esterilizante superficial en los tejidos de las plantas (Wilson, 1915). Se supone que tiene la ventaja de que se enjuaga ms fcilmente de las superficies despus de la esterilizacin y as se eliminan los residuos oxidantes indeseables. A causa de la indeseable alcalinidad de cualquier hipoclorito residual, en algunas situaciones podra ser til un enjuague rpido con agua acidulada (HCl en una solucin muy diluida y en cantidad suficiente para neutralizar cualquier exceso de bases). Como esterilizante superficial tambin se utiliza la solucin

Vapor bajo presin (autoclave). El vapor bajo presin es muy eficiente para destruir todas las formas de bacterias y hongos y sus esporas, y es el mtodo ms utilizado para esterilizar diferentes materiales incluyendo los medios de cultivo (siempre y cuando no contengan componentes termolbiles). El autoclave ms utilizado actualmente en el laboratorio es la contraparte de mayor tamao de la olla de presin comn. Al utilizarlo, es necesario extraer todo el aire antes de empezar el proceso de esterilizacin ya que, a presiones iguales, la temperatura de una mezcla de aire y vapor no es tan alta como la del vapor puro; la extraccin del aire se logra automticamente al permitir que el vapor expulse el aire del aparato, antes de cerrar la vlvula correspondiente. La temperatura dentro del autoclave se regula mediante la presin y es

directamente proporcional a sta. La presin se lee en un manmetro que forma parte del autoclave.Para esterilizar los materiales relacionados con el cultivo de tejidos se acostumbra usar una presin de 15 libras por pulgada cuadrada durante 20 minutos; a esta presin, la temperatura del vapor es aproximadamente 121C, suficiente para matar virtualmente todas las formas de vida en cinco minutos. Sin embargo, se debe recalcar que el tiempo de exposicin requerido depender tanto del tipo del material que se va a esterilizar como de su cantidad. Si se desea que la esterilizacin sea completa, el calor debe penetrar en cada porcin del material; ninguna sustancia es estril si queda en ella un organismo viable o espora. La siguiente es una gua para presiones variables: (CIAT, 1991).

Cuadro 1. Relacin entre presin, temperatura y tiempo de autoclaveado, cuando el autoclave tiene presin variable PRESIN (LIBRAS POR PULGADA CUADRADA) 10 15 20 TEMPERATURA(C) TIEMPO (MINUTOS)

115.5 121.5 126.5

30 20 15

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Para las operaciones mayores se recomienda colocar detectores de esterilizacin en diferentes puntos dentro del autoclave o dentro de la masa de material que se trata, para asegurarse de que todas las partes han alcanzado la temperatura deseada (CIAT, 1991).

El tiempo de esterilizacin (a presin constante de 15 libras por pulgada cuadrada) depende del volumen del medio a esterilizar, como gua se sugiere la siguiente tabla: (CIAT, 1991).

Cuadro 2. Tiempo mnimo de autoclaveado segn volumen de medio de cultivo. VOLUMEN DE MEDIO (MILILITROS) 25 50 100 250 500 1000 2000 4000 TIEMPO MNIMO DE AUTOCLAVEADO (MINUTOS 20 25 25 31 35 40 48 63

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Calor hmedo a 100 C. Con este mtodo probablemente sea suficiente una sola exposicin de 15 minutos al calor vivo (100C) para matar todas las formas vegetativas microbianas. Sin embargo, as no se matan necesariamente todas las formas de esporas y puede ser prctico, por consiguiente, efectuar la esterilizacin intermitente, siempre y cuando se disponga de cierto equipo. En este caso, la exposicin puede ser de 30 a 60 minutos y se repite diariamente durante tres das consecutivos, conservando el material a la temperatura del cuarto o en una incubadora entre una exposicin y otra. Tericamente la primera exposicin destruye todas las formas microbianas; durante las prximas 24 horas, generalmente germinan las esporas convirtindose en formas vegetativas que mueren en la segunda exposicin; la tercera exposicin es simplemente un medio de prevencin para destruir las esporas vivas que hayan podido tener una germinacin lenta. A veces, el procedimiento se modifica utilizando temperaturas inferiores a la del agua hirviendo y aumentando el nmero de las exposiciones hasta cuando haya una seguridad razonable de esterilidad. Se utilizan temperaturas de 60 a 80C y se repiten sucesivamente las exposiciones durante 4 a 7 das. Este mtodo del calor hmedo a 100C, conocido como mtodo de Koch se utiliza en la esterilizacin de medios que contienen componentes capaces de soportar la exposicin a temperaturas de vapor vivo, pero no a las temperaturas mayores que tiene el vapor bajo presin. No obstante, este mtodo no est exento de problemas; las esporas pueden no desarrollarse en las soluciones no nutritivas como el agua corriente, por lo cual se recomienda reemplazarlo, cuando sea posible, por el mtodo de filtracin. Sin embargo se menciona, incluso en este caso, como una alternativa cuando no se dispone de las instalaciones o medios para esterilizar por filtracin (CIAT, 1991). Filtracin. La esterilizacin de lquidos va acompaada rutinariamente de la filtracin a travs de filtros especiales a prueba de hongos y bacterias. Es claro que los filtros y otros aparatos se deben esterilizar antes de tratar de utilizarlos para remover los contaminantes de un lquido. Obviamente el tamao del poro es el principal factor en la capacidad de retencin de bacterias de estos filtros; otros factores que afectan la penetrabilidad del filtro por los microorganismos son el pH, la carga elctrica del

material filtrado, la temperatura, la presin y la duracin del procedimiento de filtracin as como el efecto de la absorcin de protenas y otras sustancias en el filtro. Tambin puede haber contaminacin en el filtrado a causa de una presin excesiva en el filtro o de fugas de las lneas al vaco cuando se utiliza presin negativa. En el mercado se encuentra una amplia gama de aparatos de filtracin entre los cuales est el Millipore. Se encuentran disponibles adems, los filtros desechables que, aunque costosos, pueden ahorrar tiempo y son preesterilizados (CIAT, 1991). 4.5.5. ASEPSIA. La asociacin explante-medio y las condiciones fsicas en que normalmente se incuban los cultivos conforman un ambiente propicio para la proliferacin de microorganismos (bacterias, hongos), los cuales pueden destruir tales cultivos, competir con el explante por el medio de cultivo o modificarlo. Evitar las contaminaciones con microorganismos es un aspecto bsico que se debe tener en cuenta para el xito, no solamente en el establecimiento de los cultivos sino en su ulterior incubacin y manipulacin. Es difcil lograr cultivos completamente estriles en el estricto sentido de la palabra; por ejemplo, es probable que los virus presentes en el explante persistan en los cultivos. Hecha esta salvedad, para establecer cultivos aspticos es conveniente o necesario: a) trabajar en ambientes adecuados; b) esterilizar los medios de cultivo; c) desinfectar superficialmente los explantes, liberndolos de bacterias y hongos exgenos y d) realizar los cultivos respetando ciertas normas de asepsia. Existe una vasta gama de compuestos qumicos que se pueden utilizar como desinfectantes para los explantes, pero en la actualidad es casi generalizado el empleo de etanol (70% v/v) y de hipoclorito de sodio (NaOCl) del 1% al 3% contenido en productos de uso domstico (Clorox, Magia Blanca, etc.). Con menor frecuencia se usan el hipoclorito de calcio [Ca(Ocl)2, 6% a 12%] y el cloruro de mercurio (HgCl2, 0.1% a 1.5%), aunque hay que recalcar que este compuesto es altamente txico y que no es fcilmente removible del explante. En algunos casos resulta til el agregar algn agente tensoactivo (por ejemplo, Tween-20, del 0.001% al 0.1%; es decir, unas dos a tres gotas por cada 50 ml), pero puede ser innecesario en los procedimientos de desinfeccin que incluyan un primer paso con etanol al 70%. Asimismo, es conveniente agitar (80-150 rpm)

el explante conjuntamente con la solucin desinfectante. Despus de tratar el explante con las soluciones desinfectantes, es necesario remover de l los restos del producto, mediante varios lavados con agua destilada estril y operando en la cmara de flujo laminar o cmara de transferencia. Es aconsejable lavar los explantes con un volumen por lo menos 10 a 20 veces mayor de agua estril haciendo un mnimo de tres enjuagues sucesivos. El procedimiento para la desinfeccin superficial de los explantes debe permitir eliminar los microorganismos con el menor dao posible para los explantes. No es factible recomendar un procedimiento general para este propsito, y se deben considerar de manera especial las especies vegetales y el tipo de explante. En el cuadro 3 se incluyen varios procedimientos utilizados para la desinfeccin de explantes. Es interesante observar que, si bien en ocasiones se emplea slo etanol o solamente NaOCl, lo ms frecuente es la utilizacin de ambos; es decir, una inmersin (generalmente de corta duracin) en etanol al 70%, seguida de una en NaOCl y de varios lavados con agua estril (George, 1993). Otros procedimientos incluyen una doble desinfeccin, como ocurre con el cultivo de hojas jvenes del man (Arachis hypogea) (Mroginski et al., 1981c). En este caso las semillas se sumergen en etanol al 70% (10 segundos), luego en NaOCl al 1.2% (10 minutos) y despus se lavan con agua destilada estril; luego se retiran de ellas las hojas jvenes para los cultivos. Un procedimiento similar se utiliz en arveja (Pisum sativum) (Mroginski et al., 1981b). Algunos procedimientos emplean la preincubacin de los explantes. En el caso de las hojas del caf, se desinfectan con Ca(OCl)2 al 1% (15 minutos), se lavan con agua estril y se cortan en pequeos trozos que se incuban en una solucin salina (sales de Murashige et al, 1962, diluidas a la mitad) y sacarosa. Al cabo de 48 horas se seleccionan los explantes no contaminados y que mantienen la coloracin normal, para establecer los cultivos (Sondahl et al, 1979). Litz et al. (1979) emplearon un procedimiento similar para la desinfeccin de pecolos de Carica stipulata. Los pices caulinares del manzano utilizados en micropropagacin se desinfectan levemente, se incuban por 24 horas en el medio de cultivo, se desinfectan de nuevo y se cultivan (Jones et al, 1977).

Los explantes provenientes de vegetales que crecen en invernaderos o en cuartos climatizados son relativamente ms fciles de desinfectar que los provenientes de plantas que crecen en el campo; tambin es ms fcil la desinfeccin de explantes de rganos jvenes que la de explantes provenientes de materiales adultos. El uso de fungicidas o bactericidas, aplicados previamente a las plantas, puede ser de utilidad (George, 1993). 4.5.6. ANTIBITICOS. Los antibiticos aplicados al medio de cultivo pueden ser de utilidad para la desinfeccin de los explantes. Sin embargo, en general, su empleo solamente se justifica en casos de excepcin y en cultivos de corta duracin, ya que la alta especificidad de los antibiticos implica que no previenen la proliferacin de todos los microorganismos. Adems, tales productos modifican la composicin del medio de cultivo y pueden ser metabolizados por los explantes. Los antibiticos pueden ser efectivos, rociados sobre las plantas madre, en reducir el nivel de contaminacin (George, 1993). Algunos ejemplos de antibiticos que han sido utilizados para la eliminacin directa de microbios del material usado como explante son: 0.15% de estreptomicina + 0.01% de mertiolate agregado a una solucin de NaOCl al 4% para la desinfeccin superficial de frutos de Euterpe (12 horas de exposicin) (Guerra y Handro, 1988). 100 g/l de una mezcla de penicilina/estreptomicina por 15 minutos baj la contaminacin en pices de rboles de melocotn en crecimiento activo a niveles ms bajos que los logrados con NaOCl. pices tomados al inicio de la etapa de crecimiento fueron daados por los antibiticos (Hammerschlag, 1980, 1982a). 17% de Alcide por una hora, seguido por el antibitico rifampicina (50 g/ml) fue el mejor tratamiento para remover contaminantes superficiales de tallos y nudos de la madera dura tropical, Nauclea (Mathias et al, 1987). En los cuadros 3 y 4 se muestran algunos ejemplos de los procedimientos que se usan para la desinfeccin de explantes y soluciones desinfectantes usadas en la preparacin de explantes.

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Cuadro 3. Algunos ejemplos de los procedimientos que se usan para la desinfeccin de explantes. (Fuente: George, 1993). PARTE VEGETAL DESINFECTADA pices Caulinares Inflorescencias EXPLANTE CULTIVADO Meristemo Meristemo Hoja joven Antera Antera Ovario vulo Frutos Hojas Semillas Tallo Raz Nucela Lam. foliar Lam. foliar Cotiledn Meristemo Mdula Raz Tuberosa Lycopersicum esculentum Manihot esculenta Ilex paraguariensis Arachis hypogaea Oryza sativa Paspalum almum Carica papaya Citrus spp. Stylosanthes guianensis Lycopersicon esculentum Lotononis bainesii Coffea arabica Nicotiana tabacum Daucus carota ESPECIE ETANOL 70% (seg.) 10 60 10 4 20 NaOCl (%) 1.2 0.8 2.0 0.8 0.8 2.0 0.5 1.2 1.2 1.6 1.2 2.0 2.0 NaOCl (min.) 10 10 15 5 10 20 10 20 10 10 20 30 30 Kartha, 1977 Rey, 1978 Rey, no publicado Mroginski, 1979 Oono, 1981 Bovo, 1983 Litz, 1981 Evans, 1981 Mroginski, 1981a Kartha, 1976 Bovo, no publicado Kartha, 1981a Reinert, 1982 Reinert, 1982 REFERENCIA

Cuadro 4. Otros ejemplos de soluciones desinfectantes usadas en la preparacin de explantes. CONCENTRACIN EXPOSICIN (%) NaOCl (min) MATERIAL PARTE DE UNA SECUENCIA O TRATAMIENTO? REFERENCIA

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0.26 0.50 0.53 0.53 0.53 0.8 0.53 0.5 1.6 1.5 1.05 Ca(OCl)2 2.75 6 5 HgCl2 1 0.05 1 0.1 0.05 0.1 0.1 0.2

45 10 15 15 30 10 15-20 30 30 30 30 5 15 0.16-14 h 10 30 10 10 3 10 4 15 ?

Yemas de Anthurium Inflorescencias jvenes de Typha Yemas de Populus Yemas de Trillium pices y nudos de Sophora Brotes de Elaeagnus Secciones de nudo de Quercus Nudos con yemas de Persea Tejidos subterrneos Yemas de conferas Semillas sin testa de Corylus Hojas de Armoracia Semillas sin pericarpio de Quercus Semillas de orqudeas Yemas de rboles forestales Races de Stangeria Yemas dormantes de manzana Nudos de Simmondsia Cormos de Crocus Segmentos de brotes de Pinaceae Yemas florales de Echinochloa Brotes de Eucalyptus crecidos en campo Semillas de alfalfa

No No No No No* No* S S No S S S S No S S S S No

Kunisaki (1980) Zimmermann y Read (1986) Garton y Moses (1986) Pence y Soukup (1986) Froberg (1986) Economou y Spanoudaki (1988) Bennet (1987) Cooper (1987) Duncan y Lineberger (1981) Kurz (1986) Prez et al, (1985) Gorecka (1987) Bellarosa (1988) Van Waes y Debergh (1986) Chalupa (1979) Osborne y Van Staden (1987) Hennerty et al, (1988) Jacoboni y Standardi (1987) Homes et al, (1987) Gupta y Durzan (1985) Wang y Yan (1984) Lakshmi Sita y Shoba Rani (1985) Brown (1988)

* = Planta madre tratada con antibiticos.

4.6. CONSERVACIN DE GERMOPLASMA. El material vegetal es conservado para futuro insumo, y como fuente para posterior propagacin. Reservas son necesarias con los siguientes objetivos: Plantarlas cuando las condiciones son favorables o haya una renovada demanda del cultivo. Conservar stocks de especies o variedades hortcolas de inters. Para retener genotipos hasta que sean necesitados en programas de fitomejoramiento. Para preservar el mayor rango posible de genes (germoplasma) para posible uso en el futuro (especies, variedades, cultivares o ecotipos). Para hacer intercambio de germoplasma en forma segura entre pases (George, 1993). 4.6.1. TCNICAS PARA LA CONSERVACIN IN VITRO DE GERMOPLASMA. A. Conservacin a corto plazo a. Desecacin de embriones de semillas Desde 1982, muchos investigadores se han dedicado a desarrollar mtodos por medio de los cuales los embriones somticos puedan ser sembrados directamente en el suelo, pero ha habido xito limitado en sembrar embriones deshidratados, o embriones rodeados por una cpsula protectora (George, 1993). Intentos de inducir dormancia en embriones somticos encapsulados han incluido el uso del cido abscsico (ABA) y deshidratado. Embriones no deshidratados han sido almacenados por perodos cortos, pero se ha encontrado que embriones deshidratados de varias plantas tienen un perodo de vida relativamente corto. Gray (1987b); por ejemplo, encontr que cuando embriones de grama fueron deshidratados hasta un 13% de contenido de agua, el 18% germin despus de 7 das, pero solamente un 4% despus de 14 das. Sin embargo, embriones de Medicago sativa madurados

en presencia de cido abscsico y deshidratados hasta un contenido de humedad de entre 8-15%, permanecieron completamente viables a humedad y temperatura ambiente por 12 meses (Redenbaugh et al., 1991). Embriones deshidratados pueden sobrevivir por perodos de tiempo ms largos si son encapsulados con una cubierta de polmero (Kitto y Janick, 1985a,b). B. Conservacin de corto a mediano plazo. Tomando las debidas precauciones, el genotipo de plantas propagadas por nudos o cultivo de brotes puede ser preservado sin cambios. Este tipo de cultivo in vitro puede, por lo tanto, ser usado para mantener genotipos por largos perodos. Sin embargo, el costo y riesgo de prdidas por contaminacin o errores es alto. Afortunadamente se han desarrollado mtodos para reducir la tasa de crecimiento del material cultivado y as poder conservarlo, sin atencin, por un moderado perodo de tiempo. Las especies varan en tiempo durante el cual los cultivos pueden ser conservados: perodos entre 6 y 24 meses son frecuentemente descritos. Brotes individuales, grupos de brotes no enraizados, embriones somticos o plantas enraizadas son factibles de conservar. La conservacin de plntulas es frecuentemente la ms satisfactoria (George, 1993). Hay varias tcnicas por medio de las cuales la vida de los cultivos de tejidos u rganos puede ser extendida, stas tcnicas se conocen como tcnicas de mnimo crecimiento. Entre stas tcnicas se encuentran las siguientes: a. Libre crecimiento Es la tcnica ms simple, consiste en dejar que los cultivos crezcan libremente en el cuarto de crecimiento. Su crecimiento disminuye conforme el medio es consumido: brotes o tejidos se mantienen vivos hasta que se deshidratan; o hasta que el medio se agota o se convierte en txico. Gunning y Lagerstedt (1986) registraron los siguientes tiempos de conservacin: Mentha spp. 6-13 meses. Rubus spectabilis 12-15 meses. Mora 13-16 meses. Vaccinium ovatum 17 meses.C

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b. Control de temperatura y luminosidad. Los intervalos entre transferencias pueden, a menudo, ser reducidas manteniendo los cultivos en luz dbil (o en oscuridad) y a una temperatura menor a la ptima para crecimiento activo. La preferencia de luz u oscuridad y el uso de la temperatura ms adecuada para la conservacin, depende del genotipo. c. Conservacin a baja temperatura Brotes y plntulas. Brotes y plntulas de muchas especies han sido reportadas como conservadas exitosamente a temperaturas cercanas al congelamiento, por ejemplo: puntas de brotes de manzana, a temperaturas entre 1 a 4oC, se han conservado durante un ao en oscuridad, dando buenas tasas de proliferacin de brotes cuando se regresaron a 26C. Cultivos que contienen brotes iniciados directamente de Pinus radiata pudieron ser almacenados por al menos, 8 meses a 2oC y reasumieron su crecimiento normal cuando se les retorn a entre 23 y 27C; de papa pudieron ser conservados a 3oC durante 1 ao; Drosera se pudo conservar 18 meses cuando se conserv entre 1 y 8oC; Prunus se pudo conservar durante 10 meses cuando se puso a 3 o C y en oscuridad; Populus se conserv entre 1 y 2 aos cuando se coloc entre 3 y 4oC y en oscuridad; Chrysanthemum se conserv durante 6 meses a una temperatura de 2oC; Trifolium repens se conserv durante 10 meses a una temperatura de 5oC y en oscuridad (George, 1993). Embriones somticos. Embriones somticos pueden ser conservados a temperaturas justo debajo del congelamiento. Santalum album y conferas se han reportado conservadas durante 45 das a 4o. Embriones somticos de zanahoria se pueden conservar, por al menos 120 das a 10oC sin efectos deletreos (George, 1993). Callos. Callos de Lithospermum erythrorhizon, Phytolacca americana y Bupleurum falcatum fueron conservados durante 6 meses a 4C, mientras que callos de tabaco fueron conservados durante 2 meses a 4C (George, 1993).

d. Conservacin a altas temperaturas. Cultivos de brotes y plntulas de algunas plantas de zonas templadas, y muchas especies tropicales y subtropicales, pierden su viabilidad si se almacenan a bajas temperaturas. Para muchas de estas especies un mnimo crecimiento es mejor cuando se conservan entre 14 y 20oC. Cultivo de brotes de camote se deterioran a temperaturas menores de 20oC y son beneficiados cuando son iluminados entre 500 y 1000 lux. Una coleccin internacional de germoplasma de Musa spp. se mantiene como cultivo de brotes a 15oC bajo una iluminacin de 1000-2000 lux, pudindose conservar entre 13 y 17 meses, dependiendo del genotipo. Cultivos de Musa mueren en 6 semanas si se mantienen a 5C, y dentro de 3 meses a 10C. Algunas plantas leosas que son tolerantes al fro durante la etapa de descanso, requieren relativamente altas temperaturas para la conservacin de brotes vegetativos. Cultivos de brotes de Actinidia chinensis pueden ser conservados en oscuridad por 1 ao a 8oC; almacenado a 4C fue menos exitoso. Se ha encontrado que brotes de Vitis mantienen su viabilidad por al menos 11 meses entre 9 y 12oC en un medio diluido, la sobrevivencia no fue satisfactoria a 2 o 7 C. Remolacha y papa son ejemplos de plantas de clima fro que se conservan mejor a temperaturas intermedias. Plantas de papa solamente requieren subcultivos a intervalos de cada 18 semanas si se mantienen a 12oC. Cultivo de brotes de papa y de especies emparentadas han sido mantenidas a entre 6 y 10oC hasta por 1 ao. La temperatura mnima es crtica y vara de acuerdo al genotipo; a 2C hay muy pobre sobrevivencia (George, 1993). e. Reduccin de la tensin de oxgeno. Colocar los cultivos en un ambiente con una baja presin parcial de oxgeno parece tener potencial para limitar su crecimiento in vitro, y la reduccin en la tensin de oxgeno indudablemente tiene un rol para la exitosa conservacin de cultivos en recipientes sellados. Una forma muy simple para reducir el suministro de oxgeno en tejidos y rganos es colocarlos en recipientes largos y estrechos, en los cuales la distancia entre el cultivo y el punto de intercambio de gases con la atmsfera externa es mxima. Conforme

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la distancia es incrementada, la tasa de crecimiento del tejido decrece y esto permite que la frecuencia de subcultivos sea reducida (George, 1993). f. Alteracin de los constituyentes de cultivo. del medio

Reduccin del suministro de carbohidratos y nutrientes. El crecimiento de un cultivo disminuye conforme los constituyentes del medio son utilizados; pero un medio gastado, el cual puede contener productos txicos y tener un pH desfavorable, no puede ser un substrato ideal para conservar brotes o plntulas por un perodo considerable. Cultivos de brotes de caf pueden ser conservados efectivamente durante 2 aos a 26C, con un fotoperodo de 16 horas de luz (7500 lux) en un medio MS modificado a la mitad de su concentracin sin sacarosa. La yuca fue mejor conservada al mantenerla entre 20 y 22C en un medio con 20-40 mM de nitrgeno (iones de nitrato y amonio) y 4% de sacarosa. El crecimiento de embriones somticos es inhibido por la ausencia de azcar (George, 1993). Reduccin del suministro de nutrientes inorgnicos. El crecimiento restringido de plntulas de caf puede deberse en parte, al reducido suministro de sales inorgnicas. Experimentos en tomate mostraron que al subcultivar brotes de tomate, se formaron races; pero el crecimiento de brotes fue considerablemente reducido cuando fueron puestos en un medio '5f MS con 5% de sacarosa. La reduccin en crecimiento fue causado por la baja concentracin de sales, debido a que brotes en un medio MS completo fue cuatro veces ms alto. Una significante reduccin en crecimiento de plntulas de clavel requiri la reduccin en el nivel de las sales MS a 25 o 50% del normal. Las condiciones estndar de un cultivo de brotes de Vitis en un medio MS, modificado para contener una concentracin reducida de nitrato de amonio, fueron de 28C, 35-40 mol m-2s-1. Nudos subcultivados de tres especies sobrevivieron mejor cuando la cantidad de NH4NO3 agregada al medio MS fue 6-25% de la normal. Los cultivos fueron suplidos con 3% de sacarosa y 1 M BAP (George, 1993).

Cambios en el potencial osmtico. Conforme la concentracin de un medio alto en sales es incrementada arriba de un 4-5%, la sacarosa empieza a tener un efecto inhibitorio, pero no txico, sobre el crecimiento de las clulas de las plantas. Niveles altos de sacarosa pueden, por lo tanto, ser usados para mantener cultivos en una condicin dormante por largos perodos. Esto parece ser un efecto osmtico debido a que se ha demostrado que el manitol (200-385 mM), agregado al medio de cultivo, crea una solucin hipertnica que puede prevenir la muerte rpida de clulas que, de otra forma, ocurre cuando clulas que requieren auxina son cultivadas en un medio sin auxina. Algunos autores sugieren que el manitol es capaz de preservar la integridad de la membrana y prevenir la prdida de solutos. Agregando 1-4% de manitol a un medio, mejor la viabilidad de brotes de Cinchona ledgeriana almacenados a 12C, a pesar de que a entre 26 y 28C fue inhibitorio. El azcar en altas concentraciones previene el crecimiento de embriones somticos. Se ha reportado la conservacin de cultivos de algunas plantas leosas de forma ms satisfactoria en medio lquido que en slido. En contraste, en cultivos de brotes de mora Merton Thornless, Mentha x dunetorum, Vaccinium ovatum y V. uliginosum se encontr que retuvieron mejor su viabilidad en un medio con 8 o 10 g/l de agar, que en un medio con 6 g/l. Varias plantas leosas australianas sobrevivieron mejor en un medio gelificado con Gelrite, en lugar de agar, particularmente cuando los cultivos fueron mantenidos a 22oC, el pH del medio fue decreciendo progresivamente conforme fueron mantenidos los cultivos por ms tiempo (George, 1993). Uso de reguladores del crecimiento. Normalmente son agregados reguladores del crecimiento al medio de cultivo para promover y regular el crecimiento de las plantas in vitro. El retiro de stos qumicos puede ayudar en el almacenamiento de ciertas plantas. Dos cultivares de fresa continuaron proliferando cuando se mantuvieron a temperaturas normales, a pesar de que los cultivos fueron transferidos a un medio sin reguladores del crecimiento, cuando se produjeron brotes delgados con pecolos largos y los cultivos permanecieron viables por ms de 5 meses. Algunos tratamientos qumicos pueden ayudar a reducir el crecimiento de los cultivos in vitro, por ejemplo:

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 actuando directamente para inducir la dormancia de rganos, reducir el metabolismo celular o prevenir la divisin celular o nuclear. haciendo que las clulas sean menos susceptibles al fro. Esto puede permitir que los cultivos sean almacenados por perodos largos a bajas temperaturas (posiblemente permitiendo reducir la temperatura del almacenaje). El regulador del crecimiento cido abscsico (ABA) (y algunos otros compuestos con estructura relacionada), es capaz de inducir dormancia en los meristemos de las plantas. En Carum, se encontr que 0.1 mM de ABA detuvieron el crecimiento de embriones somticos en etapas tardas. Embriones formados en cultivos en suspensin permanecieron dormidos cuando el ABA estuvo presente, pero continuaron creciendo y desarrollando una vez fue removido. El almacenamiento de cultivos embriognicos en un estado de dormancia inducida, por lo tanto, provee otro mtodo por medio del cual pueden preservarse genotipos de plantas in vitro. Embriones somticos pueden ser almacenados durante muchas semanas en un medio que contenga ABA sin germinar o deteriorarse. Agregando bajas concentraciones de ABA al medio se incrementa la viabilidad de esquejes de un solo nudo de papa almacenado a 8-10C. Sin embargo, este regulador tuvo un efecto detrimental sobre la viabilidad cuando fue combinado con altas concentraciones de sacarosa y baja temperatura. A una concentracin de 10mM, el retardante del crecimiento clormequat (CCC) puede prolongar la vida de algunos cultivos de brotes. La tolerancia al qumico es muy especfica. Cultivos de brotes de Prunus avium, los cuales fueron mantenidos en obscuridad a 0.5 C, se recuperaron ms efectivamente cuando se le agreg al medio 0.2 mg/l de paclobutrazol durante el almacenamiento. Agregando 50 mg/l de daminozide a cultivos de brotes de papa, stos fueron exitosamente almacenados durante dos aos a 10C en sales de similar concentracin a los del medio MS (George, 1993). Combinacin de tratamientos. El crecimiento mnimo puede ser efectivamente inducido mediante la combinacin de tratamientos. Por ejemplo, cultivos de brotes de plantas madre de

Pelargonium fueron mantenidos a 12C en un medio sin reguladores del crecimiento. La sobrevivencia de cultivos de brotes de papa a temperaturas fras es mejorada agregando ABA (5-10 mg/l), alta sacarosa (hasta 8%) y/o manitol (3-6%) al medio y el perodo de almacenamiento puede ser extendido al menos 57 meses. Se ha podido almacenar satisfactoriamente pices de brotes de papa en un medio MS con 0.5% de sacarosa y 220 mM de manitol. EL incremento del volumen del medio puede resultar en un incremento en la sobrevivencia del material vegetal despus de largos perodos de almacenamiento (George, 1993). C. Conservacin a largo plazo. A pesar de que el almacenamiento con mnimo crecimiento puede ser usado para mantener colecciones de material vegetal clonal, es claro que no es una tcnica ideal para almacenamiento a largo plazo de plantas de alto valor gentico, debido a que las colecciones necesitan atencin frecuente. Las semillas secas permanecen dormantes debido a que las clulas vivas son metablicamente inertes cuando se les priva de agua en la fase lquida. Las reacciones bioqumicas que cuales dependen de la presencia de agua son entonces suspendidas, especialmente si las semillas son tambin almacenadas a baja temperatura. Los embriones de semillas almacenados a baja humedad (cerca del 5%) retienen su viabilidad por largos perodos, el perodo de almacenamiento efectivo puede ser extendido si tambin se mantienen a baja temperatura (por ejemplo, -20C). El almacenamiento de semillas desecadas es ahora ampliamente usada en bancos de germoplasma como un medio efectivo de almacenamiento de un gran nmero de genotipos de plantas. Sin embargo, para plantas que tienen semillas que no toleran la desecacin y para plantas que normalmente son de propagacin vegetativa, puede ser claramente deseable tener un mtodo alternativo confiable para almacenar genotipos importantes (George, 1993). a. Crioconservacin. Congeladores convencionales son insuficientemente fros para ser utilizados en el almacenamiento a largo plazo. En criogenia experimental, especmenes biolgicos son usualmente almacenados en nitrgeno lquido a menos 196C o, menos frecuentemente, en

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el vapor arriba del nitrgeno lquido (cerca de -150oC). Intentos de almacenar tejidos de plantas a muy bajas temperaturas se han encontrado con dificultades. Algunas semillas pueden ser criopreservadas exitosamente, pero es ms difcil congelar y despus recuperar sin causar daos. El xito solamente resulta de congelar y descongelar rpidamente los especmenes, el almacenamiento debe ser limitado a unas pocas clulas, pequeos pedazos de tejido o pequeos rganos. Tcnicas de asepsia y contenedores estriles deben ser usados en todos los procesos. Clulas compactas y con citoplasma denso (como las clulas meristemticas de crecimiento activo), tienen un mayor potencial de sobrevivencia que las clulas largas, de paredes delgadas y altamente vacuoladas, las cuales son ms susceptibles al dao por hielo. Esto ha sido demostrado en varias especies, por ejemplo: zanahoria, sicmoro, clavel y papa andina. El principal objetivo de los protocolos de crioconservacin es cambiar el estado fsico del agua dentro de las clulas a condiciones congeladas (como vidrio) pero sin cristalizacin. La transformacin del agua de lquido a una fase slida (como vidrio) es llamada vitrificacin. Varias precauciones deben ser tomadas durante el congelamiento y descongelamiento para prevenir la aparicin de cristales de hielo intracelular. Entre los crioprotectores ms comnmente utilizados podemos mencionar los siguientes: dimetilsulfxido (DMSO), glicerol, manitol, sorbitol y polietilenglicol (PEG), ya sea solos o en combinacin. El DMSO es el ms popular, pero puede ser txico a altas concentraciones. Concentraciones de entre 5-15% son comnmente usadas para congelamiento lento de meristemos de brotes apicales. Un crioprotector eficiente debe tener las siguientes propiedades: no txico. peso molecular bajo. debe fcilmente mezclarse con agua. habilidad de permear las clulas rpidamente. habilidad de ser lavado fcilmente de las clulas.

Congelamiento lento Un mtodo efectivo de crioconservacin es enfriar el material a ser congelado a ultra-baja temperatura (30C y 60C) de forma controlada, antes de introducirlo en nitrgeno lquido. El enfriamiento lento da un incremento en la deshidratacin celular, la cual progresivamente concentra los constituyentes celulares y disminuye su punto de congelamiento (George, 1993). Enfriamiento por pasos. Como una alternativa al preenfriamiento gradual lento, los especmenes tienen que ser tratados con crioprotectores qumicos y sujetos a una serie de temperaturas a bajo de cero (cada una progresivamente ms baja que la anterior), antes de ser introducidos en nitrgeno lquido. Por ejemplo, clulas de cultivos en suspensin de Acer pseudoplatanus en glucosa al 5% y 12% de DMSO fueron mantenidos durante 3 minutos en cada una de las siguientes temperaturas: -10, -15, -20, -30 y 40C, antes de ser colocadas en nitrgeno lquido. Un protocolo para crioconservacin de meristemos apicales de Trifolium repens involucran el congelamiento a 7C a 0.5C por minuto, despus a 40C a 0.3C por minuto, antes de que los especmenes sean puestos en nitrgeno lquido (George, 1993). Congelamiento rpido. El alto costo de los aparatos necesarios para controlar las tasas de enfriamiento lento ha limitado la aplicacin de la crioconservacin a pocos laboratorios especializados. Sin embargo, clulas que tienen un citoplasma denso y un contenido relativamente bajo de agua, pueden ser preservados si son enfriados lo suficientemente rpido para que el contenido de agua interno sea directamente vitrificado sin previo enfriamiento lento. As, pequeos meristemos de plantas han sido algunas veces almacenados en una condicin viable cuando han sido enfriados en el vapor sobre el nitrgeno lquido (tasa de enfriamiento de 10C por minuto) y sumergidos en nitrgeno lquido (tasa de enfriamiento de 300 a 1000C por minuto). La tasa de enfriamiento que puede ser alcanzada por stos mtodos, cuando grandes muestras son puestas en contenedores de pared delgada, es insuficiente para prevenir el dao celular. Tejidos con alto contenido de agua son daados

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Los tejidos ms frecuentemente utilizados en la crioconservacin son los siguientes: suspensiones celulares, callos, pices, meristemos, semillas completas, embriones de semilla, embriones somticos, anteras y polen (George, 1993). Entre las tcnicas de crioconservacin ms utilizadas tenemos las siguientes:

por ste tratamiento. Experimentos recientes han mostrado que muestras de pequeas plantas pueden ser transferidas inmediatamente a menos 196oC sin dao, proveyendo a sus tejidos de crioprotectores qumicos, y puestos en un contenedor, como por ejemplo: pajilla plstica, la cual presenta una mnima interferencia a la transferencia de calor (George, 1993). 4.7. MARCADORES BIOQUMICOS Y MOLECULARES. En estudios de biodiversidad de microorganismos, plantas y animales en colecciones vivas, la caracterizacin se hace para caracteres morfolgicos, que son de inters para los usuarios de las colecciones. Sin embargo, esta metodologa tiene algunas limitantes por ejemplo, los caracteres altamente heredables generalmente muestran poca variacin, an y cuando se evale una gran cantidad de materiales, y por otra parte, la expresin del carcter est sujeta a la variacin ambiental y puede ser difcil de medir. Estas limitaciones han motivado el desarrollo de tcnicas bioqumicas y moleculares. En el primer caso se puede mencionar, por ejemplo, el uso de isoenzimas y electroforesis, y en el segundo, anlisis de polimorfismo direc-tamente al nivel de ADN. Los marcadores bioqumicos y moleculares estn siendo usados en muchos aspectos de la conservacin y caracterizacin de la biodiversidad. Entre otros usos, pueden sealarse estudios bsicos de taxonoma, variabilidad gentica en poblaciones y la caracterizacin y mejoramiento de colecciones y germoplasma. Actualmente se han establecido esquemas de mejoramiento que permiten aprovechar los marcadores moleculares como genes indicadores a travs de ligamiento, facilitando la transferencia de genes de especies silvestres a variedades comerciales. El mismo esquema es utilizado tambin en la aceleracin de los programas de mejoramiento, haciendo selecciones tempranas de los materiales favorables. Los marcadores bioqumicos como las isoenzimas y los marcadores moleculares, como las secuencias de ADN, tienen la ventaja de que ocurren de manera natural, no tienen ningn efecto sobre el fenotipo, son en general codominantes y no estn sujetos a efectos del ambiente.

4.7.1. MARCADORES BIOQUMICOS. Los marcadores bioqumicos se basan en las tcnicas de electroforesis, en combinacin con mtodos citohistolgicos de coloracin, lo que permite el estudio de isoenzimas, las cuales pueden ser utilizadas como marcadores para revelar la informacin contenida en un gen. La aplicacin de mtodos cuantitativos a esta informacin permite a su vez, el clculo de diversos parmetros utilizados en la determinacin de la estructura gentica y reproductiva de una poblacin natural. Las enzimas son protenas que ejercen una funcin cataltica especfica, es decir, aceleran las reacciones bioqumicas que ocurren dentro de la clula. Las isoenzimas son diferentes formas moleculares de una misma enzima que tienen afinidad por el mismo sustrato. La tcnica de la electroforesis consiste en situar un extracto protico obtenido del tejido de una planta en un medio de soporte, generalmente geles de almidn o poliacrilamida, y someterlo a un campo elctrico durante varias horas, el cual hace que las diferentes isoenzimas migren en el medio segn sus cargas elctricas. Despus de esta operacin, el gel se incuba en una solucin que contenga tanto el sustrato sobre el que acta la enzima que se desea separar, como los cofactores necesarios, adems de un tinte que se acople al producto de la reaccin. Las isoenzimas se visualizan como bandas de color que aparecen en el gel. Los anlisis de isoenzimas, an y cuando son relativamente fciles de manejar y menos costosos econmicamente, tienen algunas limitantes: son regulados a travs del desarrollo, es decir, solo seran expresados fenotpicamente en estados especficos del desarrollo y en rganos o tejidos especficos. Adems, los caracteres morfolgicos pueden tener efectos pleiotrpicos en caractersticas de inters. Por otra parte, los marcadores bio-qumicos no son tan tiles como los marcadores de ADN, debido al bajo nivel de polimorfismo y el limitado nmero de loci. 4.7.2. MARCADORES MOLECULARES. Un marcador molecular es un fragmento o secuencia de ADN correspondiente a una caracterstica, y la cual

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podemos utilizar para diferentes propsitos, tales como: caracterizacin y mejoramiento de especies; determinar estudios de biodiversidad y entender la estructura, evolucin e interaccin de poblaciones, ya sea en microorganismos, plantas o animales. Los marcadores basados en el uso de fragmentos de ADN, permite superar las limitantes de los marcadores bioqumicos, ya que pueden detectarse en cualquier tejido y en cualquier fase de desarrollo, presentan un alto nivel de variacin y una cantidad ilimitada de loci. Los marcadores moleculares ms usados incluyen el Polimorfismo en el Largo de los Fragmentos de Restriccin (RFLP, iniciales de Restriction Fragments Length Polymorphism), Polimorfismo del ADN amplificado aleatoriamente (RAPD, derivado de Randomly Amplified Polymorfic DNA), Polimorfismo en la Longitud de los Fragmentos Amplificados (AFLP iniciales de Amplified Fragment Length Polymorphism) y Mirosatlites (SSR, derivado de Single Sequence Repeat) y Regiones Amplificadas de Secuencias Caracterizadas (SCAR, derivado de Sequence Characterized Amplified Region). A. POLIMORFISMO EN EL LARGO DE LOS FRAGMENTOS DE RESTRICCIN (RFLP). Los marcadores RFLP se basan en el uso de enzimas de restriccin. Las enzimas de restriccin reconocen secuencias especficas del ADN y lo cortan en los sitios en que stas se hallan adyacentes. Cuanto ms frecuente sea ese sitio de reconocimiento para la enzima, el ADN ser cortado con ms frecuencia. Los fragmentos de ADN producidos de esta manera pueden separarse por medio de la elec-troforesis, y los fragmentos ms pequeos se movern mas rpidamente en el gel. Cuando el ADN de un organismo superior es digerido por una enzima de restriccin, se producen muchos fragmentos de diferentes longitudes que, al separarse a lo largo del gel, formarn una mancha continua, visible cuando el gel se sumerge en una solucin de bromuro de etidio y es observado en un transiluminador de luz ultravioleta (Devos et. al., 1993). Un fragmento especfico slo puede detectarse con una sonda apropiada, es decir, con un fragmento de ADN que ya ha sido clonado y que sea homlogo de

aqul que se desea visualizar. Los diferentes fragmentos presentes en el gel se deben transferir a un soporte slido, donde sern expuestos a una sonda marcada radioactivamente en condiciones que favorezcan la hibridacin ADN-ADN. El soporte se usa entonces para exponer una pelcula fotogrfica la cual, despus de ser revelada, har visible el fragmento de ADN que se hibrid con la sonda. Utilizando este tipo de sonda de ADN nico, puede detectarse un fragmento de rara ocurrencia (uno en un milln o menos frecuente). Las sondas de ADN utilizadas para los RFLPs no necesitan ser homlogas de genes conocidos. Cualquier secuencia de ADN puede servir para los RFLPs, siempre y cuando pueda hibridarse con algunos de los fragmentos producidos despus del proceso de restriccin (Devos y Gale, 2000). Cualquier cambio ocasionado por mutaciones puntuales en el ADN puede alterar la secuencia de reconocimiento tpica de una enzima de restriccin, en particular eliminando o creando nuevos sitios de reconocimiento. De manera similar, supresiones o trans-posiciones de grandes fragmentos de ADN pueden originar cambios simultneos en los patrones de restriccin de diferentes enzimas. En consecuencia, una enzima de restriccin determinada no cortar el ADN de dos individuos por el mismo lugar. Por tanto, se formarn fragmentos de diferente longitud cuando el ADN de los dos individuos sea cortado por la misma enzima. A causa de su diferencia en longitud, esos fragmentos se localizarn en posiciones diferentes una vez concluidas la electroforesis, la hibridacin y la autoradiografa (Hartl y Jones, 1999). Los marcadores de ADN basados en el polimorfismo del largo de los fragmentos de restriccin tienen un nmero ilimitado de loci y muestran un alto nivel de variacin. Esta clase de marcadores genticos, son entonces una valiosa herramienta para establecer las relaciones taxonmicas en plantas y acelerar los procesos de mejoramiento en la transferencia de genes de especies silvestres. Los mismos principios pueden aplicarse en estudios de microorganismos y animales. Sin embargo, tienen algunas limitantes, especialmente su alto costo y el uso de radioactividad. Para superar estas limitantes, se han estado desa-rrollando mtodos no radioactivos (Ishii et. al., 1990)

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B. RAPD. Con el surgimiento de la Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR, por sus siglas en ingls), se generaron nuevas tcnicas que permitieron superar las limitaciones de RFLP, especialmente los procedimientos de hibridacin y uso de sondas. La tecnologa de PCR permite la amplificacin de fragmentos especficos del total de ADN genmico, basndose en la ADN polimerasa, la cual es capaz de sintetizar una molcula doble de ADN a partir de una cadena simple. El producto de duplicacin de la hebra original pasa a ser una segunda hebra para generar otra nueva duplicacin. Actualmente se usa la Taq ADN polimerasa, que permite que el ciclo de PCR pueda ser automatizado, ya que es necesario una sola adicin de la enzima. La duplicacin repetitiva conduce a un incremento exponencial de la acumulacin de productos de ADN. La reaccin de PCR es conducida por primers o iniciadores que se unen a sus secuencias homlogas, para iniciar la amplificacin de la polimerasa. Los primers son secuencias cortas de ADN que son homlogas a los extremos de una secuencia de ADN especfica. En algunos casos, estos iniciadores no necesariamente son complementarios a determinadas secuencias, por lo que pueden amplificar cualquier regin del genoma donde el iniciador encuentra su secuencia homloga. En este caso, dado que el producto amplificado no es conocido, los iniciadores se conocen como aleatorios y su uso ha generado nuevos procedimientos basados en PCR (Devos y Gale, 1992). Una de estas tcnicas es la conocida como RAPDs (Ramdom Amplified Polymorphic DNA), en la cual primers aleatorios son utilizados para la amplificacin de productos de ADN, los cuales son separados en geles de agarosa en la presencia de bromuro de etidio y visualizados en luz ultravioleta. El polimorfismo es detectado por la presencia o ausencia de bandas, las cuales resultan de los distintos puntos en donde el iniciador se une a su regin homloga en el ADN genmico. Algunas de las principales ventajas de este mtodo es que no requiere el uso de sondas ni hibridaciones de ADN. Por otra parte la tcnica es rpida, simple y eficiente, demanda pequeas cantidades de ADN (10 ng por reaccin) y requiere nicamente la compra de un termociclador y un aparato de preparacin de geles y electroforesis. Su principal

desventaja es la baja consistencia en los resultados, especialmente por la susceptibilidad de la reaccin de PCR a la contaminacin, sin em-bargo esta limitante puede ser superada, tomando en cuenta todos los cuidados necesarios para uniformizar las condiciones, laboratorio, equipo y personal para la ejecucin del trabajo (William et al., 1990). C. AFLP. Los marcadores moleculares AFLPs se basan en la combinacin de las tcnicas RFLP y RAPD. En el procedimiento, se usa ADN crudo, el cual se corta con dos enzimas de restriccin al mismo tiempo, lo que se conoce como doble digestin, para producir fragmentos de ADN que se amplifican usando dos iniciadores especiales, uno de los cuales va marcado con fsforo radioactivo para poder visualizar las bandas en una radiografa. La gran ventaja que presenta esta metodologa radica en que se obtiene un nmero muy alto de bandas y polimorfismos en muy corto tiempo, y a la vez, los polimorfismos son altamente repetitivos. Su limitante estriba en el requerimiento de radioactividad. Su aplicacin, al igual que los otros marcadores moleculares es tambin en la caracterizacin de germoplasma, estudios de relaciones filogenticas y mapeo de genes (FAO-OIEA, 2002). D. MICROSATLITES (SSR). Se define como microsatlite (SSR) cualquiera de una serie de muy cortas a medianas secuencias repetidas de ADN, distribuidas en grupos, y altamente variables; las cuales se encuentran dispersas en ADN de hongos, plantas, animales y genomas humanos (Kahl, 2001). Secuencias Simples Repetidas (SSR) o microsatlites son una clase de nucletidos en el ADN repetidos. El nmero de nucletidos que se pueden repetir, ya sea dos, tres o cuatro, se arreglan en grupos, que consisten de cinco a diez copias, por ejemplo (AT)29, (CAC)16 o (GACA)32. Los SSRs son abun-dantes en plantas y ocurren en promedio cada 6-7 kilobases (kb). Estas secuencias repetidas estn en sus puntos terminales flanqueadas por secuencias de nucletidos altamente conservadas, de las cuales pueden disearse iniciadores (primers) en sentidos opuestos de la direccin de las cadenas de ADN, y consecuentemente estas secuencias repetidas pueden ser amplificadas por PCR. Sus

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aplicaciones son amplias, entre las cuales se pueden mencionar: identificacin de huellas genticas, identificacin de geno-tipos, mapas genticos, estudios de biodiversidad, clonacin de genes basados en mapas genticos, etc (FAO-OIEA, 2002). E. SCAR. Las Regiones Amplificadas de Secuencias Caracterizadas -SCAR-(derivado de Sequence Characterized Amplified Region) , como su nombre lo indica, se refiere a la secuenciacin de fragmentos de ADN, que pueden ser derivados de cualquier tcnica de amplificacin de ADN, basada generalmente en PCR, y seguida del diseo de iniciadores (primers) especficos para una determinada banda secuenciada Finalmente, mediante la tcnica de PCR, utilizando los iniciadores previamente diseados, se amplifica la banda de inters, que generalmente est asociada con una caracterstica fenotpica. Entre otras, sus aplicaciones pueden ser, etiquetado de genes, anlisis de poblaciones segregantes, diseo de sondas para alelos especficos, estudios de poblaciones y diversidad y seleccin de caractersticas favorables en organismos, asistidas por este tipo de m a r c a d o r m o l e c u l a r ( FA O - O I E A , 2 0 0 2 ) . 4.8. LA INGENIERA GENTICA. La Ingeniera Gentica es una tcnica de la Biotecnologa que plantea nuevos elementos de anlisis a nivel de las molculas, las clulas y los tejidos para comprender mejor las caractersticas de los organismos, de tal manera que puedan manipularse. Tambin es conocida como Biotecnologa Moderna o Tecnologa del ADN Recombinante. Se considera como ADN Recombinante el que involucra el reordenamiento in vitro de material gentico, mediante la Manipulacin Gentica Enzimtica. La Ingeniera Gentica permite la introduccin y perpetuacin de fragmentos de ADN extrao o ajeno, con un contenido de genes del ms diverso origen, en bacterias o ms recientemente, en clulas de organismos superiores mantenidas en cultivo, logrndose en muchos casos el funcionamiento o expresin de este material gentico. Tanto la Ingeniera Gentica como la biologa molecular se estn desarrollando actualmente en los distintos mbitos biolgicos, a nivel de microorganismos, vegetales y animales; cuyos objetivos en principio pretenden ser de aplicacin benfica en la salud y la alimentacin

humana y animal, como tambin en el mejoramiento de la agricultura en general. Para el desarrollo de la Ingeniera Gentica, se han necesitado previamente avanzar en otras tcnicas biotecnolgicas, tales como el cultivo de tejidos y el uso de marcadores moleculares, que son herramientas tiles para la aplicacin de la tecnologa del ADN recombinante. La Ingeniera Gentica puede definirse, de una manera general, como la tcnica con que se forman artificialmente combinaciones nuevas de material hereditario (ADN, ARN) mediante la insercin de molculas de cidos nucleicos (producidas fuera de la clula) dentro de virus, plsmidos bacterianos u otro vector de cidos nucleicos. Estos vectores incorporan las nuevas molculas de cido nuclico dentro de un organismo hospedante, en el cual stas no se hallan presente en condiciones naturales, pero pueden ser replicadas. En el contexto vegetal, que es donde mas aplicacin tiene la tecnologa del ADN recombinante, posee un gran potencial para la introduccin de caractersticas deseables en las plantas. As por ejemplo, se busca incorporar genes de resistencia a virus e insectos, generar plantas tolerantes o resistentes a los herbicidas y cultivos con un mayor contenido nutricional. Esta tcnica biolgica ha permitido entonces la formacin de nuevas variedades agrcolas, a travs de la obtencin de plantas con nuevos genes, los cuales pueden provenir de la misma planta, de plantas diferentes, de bacterias, virus, hongos o mamferos. Estas nuevas plantas son conocidas como Plantas Transgnicas, las cuales poseen nuevas caractersticas y pueden no tener contraparte en la naturaleza, ya que fueron diseadas y obtenidas por el hombre sin recurrir a los mecanismos naturales de transferencia de material gentico, razn por la cual las barreras naturales para el intercambio de material gentico desaparecen. No obstante, esta tecnologa no debe considerarse como un fin sino como un instrumento adicional para alcanzar el objetivo final de modificar y mejorar las plantas y animales. Actualmente, se aplica el trmino Organismos Vivos Modificados, (OVMs) a todos aquellos organismos generados por las tcnicas del ADN recombinante. En ese contexto, en un OVM, el material gentico ajeno se perpetua en la otra especie (organismo o clula husped) sin variaciones en la progenie de la clula receptora, pero dando origen a nuevas caractersticas. Actualmente, han surgido diferentes mtodos para la generacin de OVMs, pero los dos sistemas ms utilizados son la transferencia directa y la transferencia

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mediada por bacterias del gnero Agrobacterium. El primero consiste en la introduccin directa de genes empleando tcnicas como el bombardeo de partculas de oro o tungsteno con un acelerador de partculas. El segundo utiliza las propiedades biolgicas de la bacteria del suelo Agrobacterium sp. para introducir el ADN forneo. La Ingeniera Gentica puede coadyuvar a los programas de mejoramiento de los cultivos tanto

nativos como introducidos. Genes importantes de plantas nativas, como resistencia a enfermedades, pueden ser introdu-cidos en los cultivos alimenticios, como tambin genes favorables, especialmente los relacionados con calidad nutricional,pueden ser incorporados en los cultivos alimenticios nativos (Magnien y De Nettancourt, 1985).

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5. metodologa
El procedimiento metodolgico incluy las siguientes etapas: 5.1. Se prepar un anteproyecto del estudio, que incluy los lineamientos de trabajo y se elabor una boleta de encuesta, que fue utilizada como insumo y base de datos para el anlisis de la informacin y ejecucin del estudio. La boleta preparada, fue sometida a consideracin del equipo de trabajo de la institucin que coordinaba los distintos estudios que se estaban ejecutando simultneamente, y luego de las sugerencias recibidas, se elabor la boleta final, la cual se adjunta (total 24), provenientes de 27 laboratorios, que representan el inventario realizado para ser ingresado a la base de datos de OTECBIO. En algunos casos, por ejemplo INCAP, ICTA, y el Laboratorio Nacional de Salud, incluyeron en una sola boleta todos los laboratorios que poseen, ya fuesen de cultivo de tejidos, o marcadores moleculares. La encuesta cubri todos los temas que se requeran en la ejecucin de la consultora. 5.2. Adems de la boleta de encuesta a los laboratorios, se elabor un sondeo entre una muestra representativa de la poblacin guatemalteca, especficamente la que habita en la capital y reas aledaas. Este sondeo se hizo para determinar el conocimiento pblico sobre los organismos vivos modificado y su utilizacin. La muestra fue de sesenta y tres personas. Las caractersticas de las personas entrevistadas, deban cumplir con el nico requisito de ser mayor de edad. El sondeo fue realizado totalmente al azar. 5.3. Se realizaron las encuestas, visitando instituciones, y centros de investigacin gubernamentales, no gubernamentales y privados, as como entrevistas personales. En algunos casos, los responsables de los laboratorios se encontraban fuera del pas, cuando se les visit, por lo que se procedi a dejar la boleta para que fuese llenada a su retorno. En este ltimo caso, nos comunicamos nuevamente con los responsables, para aclarar dudas de la boleta y seguidamente fueron enviadas va fax a mi oficina profesional. En el caso de entrevistas personales, estas se hicieron tambin con profesionales de instituciones privadas, que no tienen laboratorios especficos de biotecnologa, pero que en algn momento realizaron ensayos de campo con organismos vivos modificados con fines exclusivos de investigacin. 5.4. Durante el desarrollo del estudio, se trabaj en estrecha coordinacin con la Directora Nacional del Proyecto, y con los consultores que estaban realizando los otros estudios paralelos con el de situacin actual de la biotecnologa en Guatemala. Se tuvieron varias reuniones de trabajo con la Coordinacin de la Oficina Nacional de Ejecucin (NEA) para un mejor control de los avances y dificultades que se identificaron durante el desarrollo de la consultora. As tambin se present un avance del trabajo realizado en un seminario especial para el efecto. 5.5. Se procedi al anlisis de la informacin, tomando en cuenta todos los detalles de la boleta de datos, y revisando nuevamente que cubrieran los aspectos considerados como requisitos fundamentales para la elaboracin del diagnstico de la situacin actual de la biotecnologa en el pas. Dentro del anlisis se elabor una matriz de datos para la tabulacin de la informacin recabada. 5.6. Se procedi entonces a la preparacin del diagnstico de la situacin actual de la Biotecnologa en Guatemala, incluyendo todas las categoras y temas requeridos como producto del estudio. 5.7. Seguidamente se prepar el informe final para su respectiva aprobacin por el CNCB, incluyendo tres ejemplares del informe final en versin impresa y electrnica en formato de Word, Excel y Power Point.

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5.8. Se entregaron las boletas de datos productos de los inventarios realizados como insumo previo, con carcter de anexo, para ser ingresadas bases de datos en Access de acuerdo a los formatos del Mecanismo de Intercambio de Informacin de Bioseguridad. (BCH).

5.9 Finalmente se procedi a la presentacin de los resultados finales de la consultora al CNCB, utilizando Power Point, e incluyendo los insumos obtenidos anexos al documento final con su respectiva opinin.

6. resultados y discusin
6.1. LABORATORIOS, INSTITUCIONES Y/O CENTROS DE ESTUDIOS SUPERIORES VINCULADOS/RELACIONADOS AL USO DE LA BIOTECNOLOGA Y/O LA SEGURIDAD DE LA BIOTECNOLOGA. Para la realizacin del estudio del cual deriva la presente publicacin, se visitaron 27 laboratorios de Biotecnologa, pertenecientes a 17 instituciones, con un promedio de 1.6 laboratorios por institucin. Los laboratorios visitados incluyeron el rea vegetal, humana y animal. La figura 1 muestra dos de los ambientes de los laboratorios visitados. Es importante mencionar que algunas instituciones, como por ejemplo, la Universidad del Valle de Guatemala, posee varios laboratorios dedicados a diferentes tipos de investigacin, tanto vegetal como humana. Sin embargo, estn comunicados por una red interna de Internet. Por otra parte, hay instituciones que tienen tanto laboratorios de Marcadores Moleculares como de Cultivo de Tejidos, tal es el caso de ICTA y la Facultad de Agronoma de la Universidad de San Carlos de Guatemala. Es importante mencionar tambin el caso del laboratorio de Fitopatologa de la Universidad del Valle de Guatemala, que trabaja, en forma paralela Marcadores Moleculares, Cultivo de Tejidos e Ingeniera Gentica. A pesar de que el nfasis de sta investigacin estaba orientada hacia Organismos Vivos Modificados, se consider fundamental, adems, la visita a laboratorios de Marcadores Moleculares y Cultivo de Tejidos, pues son herramientas indispensables para poder llevar a cabo la Ingeniera Gentica.

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Figura 1. Dos tipos de ambientes de dos laboratorios visitados. A. ambiente con medidas de bioseguridad en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003), B. ambiente de laboratorio de marcadores moleculares en el ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

A B

Las instituciones visitadas y/o encuestadas fueron las siguientes: 1. 2. Instituto de Ciencia y Tecnologa Agrcolas (ICTA). Gubernamental. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia (FMVZ) de la Universidad de San Carlos de Guatemala (USAC). Acadmica. Universidad Rafael Landvar (URL). Acadmica. Facultad de Agronoma de la Universidad de San Carlos de Guatemala (FAUSAC). Acadmica. Centro Guatemalteco de Investigacin de la Caa (CENGICAA). Privada. Universidad del Valle de Guatemala (UVG). Acadmica. Ingenio Magdalena. Privada. Ingenio La Unin. Privada. Ingenio Pantalen. Privada. Ingenio Santa Ana. Privada. Asociacin Nacional del Caf (ANACAF). Privada. Jardines Mil Flores. Privada. Escuela de Biologa de la USAC. Acadmica. Instituto de Nutricin de Centroamrica y Panam (INCAP). Privada. Laboratorio Nacional de Salud. Gubernamental. Hospital General San Juan de Dios (HGSJDD). Gubernamental. Hospital Nacional de Amatitln (HNA) (Unidad de Quemados). Gubernamental.

Figura 2. Nmero de instituciones, por sector, dedicadas a la Biotecnologa en Guatemala. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

23.5 47.7 Privada Acadmica Gubernamental 29.4

3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17.

Figura 3. Nmero de instituciones, por sector, dedicadas a la Biotecnologa (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
8 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Privada Acadmica Gubernamental 5 4

6.3. LABORATORIOS POR TIPO DE INSTITUCIN. La figura 4 refleja los laboratorios de acuerdo al tipo de institucin. Se nota nuevamente, aunque no significativamente, que el sector privado tiene el mayor nmero (10) de laboratorios; pero como se indicaba anteriormente, casi todos trabajan en forma estrecha, independientemente del sector.
Figura 4. Nmero de laboratorios por tipo de institucin. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
10
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0

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6.2. TIPOS DE INSTITUCIONES. Como puede observarse en la figura 2, de las 17 instituciones visitadas, 8 son de carcter privado, 5 acadmicas y 4 gubernamentales. Aparentemente, se esperaba que la mayor parte de los laboratorios estuviera en el sector acadmico o gubernamental; sin embargo, se observ que existe una tendencia del sector privado a invertir en la Biotecnologa, pues es el mayor nmero. Pero tambin es importante mencionar que el sector privado se apoya, en cierta medida, en colaboraciones con instituciones acadmicas y gubernamentales. La figura 3 muestra la misma tendencia expresada en porcentajes.

9 8

Privada

Acadmica

Gubernamental

La figura 5 refleja, en porcentaje, la misma tendencia, en donde el sector privado supera de manera mnima a los otros sectores en cuanto al nmero de laboratorios.
Figura 5. Nmero de laboratorios por tipo de institucin (expresado en porcentajes). Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

29.6

La figura 7 refleja, en nmeros, sta situacin. Es importante indicar que, relativamente, el nmero de profesionales con maestra y doctorado ha crecido ostensiblemente comparativamente con el nmero de profesionales que trabajaban en sta rama pocos aos atrs. Por ejemplo, actualmente se encuentran trabajando 15 Ph.D. y 18 MSc. Por otra parte, se considera que en la actualidad se encuentran profesionales formndose en ste campo, por lo que futuro mediato estas cantidades pueden variar.

37.1

Figura 7. Nmero de profesionales, segn grado acadmico, trabajando actualmente en Biotecnologa. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
33.3 Privada Acadmica Gubernamental 70 60 50 40 30 20 10 0 70

18

15

Licenciatura

Maestra

Doctorado

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6.4. CAPITAL HUMANO PROFESIONAL. Puede observarse en la figura 6 el capital humano profesional que trabaja en Biotecnologa. Resalta el hecho de que la mayora tiene nivel de licenciatura, siendo los porcentajes a nivel de maestra y doctorado muy similares.
Figura 6. Capital humano profesional (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

6.5. CAPITAL HUMANO TCNICO Y DE APOYO. El personal tcnico y de apoyo es relativamente alto en Biotecnologa, se puede observar 87 tcnicos (con cierta formacin o experiencia en el trabajo que realizan, vg. Marcadores Moleculares o cultivo de tejidos) y 66 elementos de apoyo (por ejemplo: apoyo secretarial, limpieza, etc.), como se puede observar en la figura 8.
Figura 8. Personal tcnico y de apoyo que laboran en el campo de la Biotecnologa. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

14.5 17.5

68

100 80 60

87 66

Licenciatura Maestra Doctorado

40 20 0

Tcnico

Apoyo

La presencia de un mayor nmero de personal laborando en este sector puede deberse a que es una mano de obra de menor inversin respecto al capital humano profesional (ver figura 9, expresado en porcentaje).
Figura 9. Personal tcnico y de apoyo que laboran en el campo de la Biotecnologa (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
43.1

total de 908 m2 y un promedio de 32.4 m2 por cuarto (ver figura 11). Al igual que en el caso anterior, el tamao de los cuartos de crecimiento en la mayor parte de laboratorios es apropiado.
Figura 11. Ambiente de cuarto de crecimiento en el laboratorio de cultivo de tejidos del ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

56.9 Tcnico Apoyo

6.6. INFRAESTRUCTURA. De acuerdo al nmero de instituciones visitadas, el nmero de ambientes totales es de 199, con un rea total de 12,597 m2, con un promedio de 7.4 ambientes por laboratorio y 63.3 m2 por ambiente. La figura 10 muestra un ambiente de sala de preparacin de medios en uno de los laboratorios visitados. Es importante acotar que, en promedio, la mayora de laboratorios tienen un rea adecuada en sus ambientes de trabajo.
Figura 10. Ambiente de sala de preparacin de medios en el laboratorio de Biotecnologa del ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

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En cuanto a invernaderos, en las instituciones visitadas se encontr un total de 12, con un rea total de 2,718 m2 y un promedio de 227 m2 por invernadero. Es importante mencionar que no todos los laboratorios tienen facilidades de invernadero y ms que todo corresponden a aquellos laboratorios que trabajan especialmente con cultivo de tejidos vegetales (figura 12).
Figura 12. Vista general de un invernadero en la URL (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

En el caso de laboratorios de Cultivos de Tejidos, Clulas o Bacterias, se determin que el nmero de cuartos de crecimiento, en total era de 28, con un rea

En cuanto a equipo bsico, entre todos los laboratorios poseen 39 autoclaves, 52 cmaras de flujo laminar y 14 termocicladores. Aqu es importante acotar que, en la mayora de instituciones, los laboratorios comparten el uso de algunos de estos equipos bsicos, por ejemplo: termocicladores, cmaras de flujo laminar y autoclaves (figura 13). Por otro lado, llama la atencin el hecho de que los laboratorios se han equipado con aparatos modernos provenientes, en un buen nmero de casos, de proyectos y convenios de cooperacin con instituciones internacionales, por ejemplo la UVG, INCAP e ICTA.

6.7. RAMA DE LA BIOTECNOLOGA QUE TRABAJAN LOS LABORATORIOS. En cuanto a la rama de la Biotecnologa que trabajan los laboratorios puede observarse, en la figura 14, que el mayor nmero se encuentra en la rama vegetal (14) y muy de cerca la rama humana (10). La rama animal est inicindose y la rama ambiental es mnima. Posiblemente esto se deba a que los programas de cooperacin internacional han apoyado ms ramas de la Biotecnologa relacionada con la salud humana y seguridad alimentaria. Otro argumento podra ser que la mayora de profesionales que ms trabajan en la Biotecnologa se relacionan con las ramas mencionadas y, consecuentemente, tienen la oportunidad de elaborar ms proyectos que son aprobados en las instituciones internacionales que proporcionan apoyo a estos programas.
Figura 14. Nmero de laboratorios por rama de la Biotecnologa que trabajan.(Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
14 12 14

Figura 13. Equipo bsico en un laboratorio de Biotecnologa. A. Termociclador en el laboratorio de Marcadores Moleculares del ICTA (Fuente: el autor, 2003), B. Cmara de Flujo Laminar en el laboratorio de Cultivo de Tejidos del ICTA (Fuente: el autor, 2003), C. Autoclave en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la URL (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre).

54

10 8 6 4 2 0 Vegetal

10

4 1 Humana Animal Ambiente

La situacin indicada anteriormente puede reflejarse tambin en porcentajes, notndose que la rama vegetal es la ms significativa con un 48.3 por ciento y la rama humana con un 34.5 por ciento (figura 15).

Figura 15. Nmero de laboratorios por rama de la Biotecnologa que trabajan (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
13.8 3.4

C
34.5

48.3

Vegetal Humana Animal Ambiente

6.8. REA DE LA BIOTECNOLOGA QUE TRABAJAN LOS LABORATORIOS. En cuanto al rea de la Biotecnologa que trabajan los laboratorios, la mayora realiza Cultivo de Tejidos (18) y Marcadores Moleculares (13). nicamente dos laboratorios trabajan lo que es Ingeniera Gentica, perteneciendo ellos a la Universidad del Valle de Guatemala (ver figuras 16 y 17). Se considera que la Ingeniera Gentica en Guatemala es incipiente debido a que, para lograr su completo desarrollo, es indispensable primero desarrollar las otras reas de la Biotecnologa; es decir, el Cultivo de Tejidos y los Marcadores Moleculares. Estos an se encuentran en una fase de desarrollo, por lo que se apoyan frecuentemente en programas de cooperacin con instituciones internacionales (Organismo Internacional de Energa Atmica, OMS, JICA Japan International Cooperation Agency-, etc.) y universidades de pases desarrollados; como por ejemplo, los Estados Unidos, Alemania y Canad, tanto en obtencin de equipo, como en la formacin de capital humano especializado.
Figura 16. Nmero de laboratorios por rea de la Biotecnologa que trabajan. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
18 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 Cultivo de Tejidos Marcadores Moleculares Ingeniera Gentica 2 13

6.9. TCNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS. Entre las principales tcnicas de Cultivo de Tejidos que emplean los laboratorios podemos mencionar las siguientes: cultivo de clulas o callos (10 laboratorios); cultivo de meristemos (9 laboratorios); diversas tcnicas de conservacin, especialmente de germoplasma vegetal y un caso de semen de animales (8 laboratorios) (figuras 18 y 19). Otras tcnicas menos utilizadas son: cultivo de nudos (3 laboratorios); cultivo de brotes (3 laboratorios); uso de anticuerpos monoclonales (3 laboratorios), cuyo objetivo no es cultivo de tejidos, sino su uso en anlisis clnicos, especialmente en salud como en el caso del Hospital San Juan De Dios, INCAP y el laboratorio Nacional de Salud, que lo usa como diagnstico de de las enfermedades de dengue y tuberculosis. Otras tcnicas utilizadas son: mutagnesis inducida (3 laboratorios), cultivo de anteras (2 laboratorios), cultivo de embriones (2 laboratorios), embriognesis somtica (2 laboratorios) y produccin de parasitoides (2 laboratorios) para control de insectos en campos de cultivo (caa de azcar). Es importante resaltar que un laboratorio emplea dos o ms tcnicas al mismo tiempo. En el caso de las ltimas tcnicas mencionadas, como por ejemplo, mutagnesis inducida, cultivo de anteras y embriognesis somtica los usan, bsicamente, para el mejoramiento gentico de plantas. En el caso de parasitoides su uso es para el control biolgico de insectos.

55

Figura 17. Nmero de laboratorios por rea de la Biotecnologa que trabajan (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 18. Nmero de laboratorios por tcnica de Cultivo de Tejidos empleada. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

6.1

10 10 8 6

9 8 6 4 3 3 3 3 2 2 2 2

39.4

54.5

4 2 0

os

is

as

os

ne

ce

lo

te

le

es

er

si

ud

ci

na

is

as

ag

er

br

se

oc

Em

er

ns

ul

ut

io

on

on

br

rio

c.

Ingeniera Gentica

Pr

od

Marcadores Moleculares

co

Em

.P

ar

as

Cultivo de Tejidos

ac

io

ne

al

pi

ro

rv

lo

ito

te

va

/c

nt

id

es

Figura 19. Nmero de laboratorios por tcnica de Cultivo de Tejidos empleada (expresada en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
17.5

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

15.8

14 10.5 7 5.3 5.3 5.3 5.3 3.5 3.5 3.5 3.5

lu la s / M e c a ll ris os Co te ns mo er va s c i Cr n io c o Ap ns ice er s va c i n Nu do Ac .M B s on rot oc es l Mu ona ta les g ne s An i s Em tera Em bri s Pr bri one od og s .P n ar es a s is ito id es

recombinantes, pero el laboratorio nicamente utiliza los antgenos, que los importa de otros pases. Otra tcnica molecular utilizada es PCR de transcriptasa reversa o RT-PCR, especficamente por el Laboratorio Nacional de Salud para convertir ARN en ADN copia (ADN de doble cadena a partir de ARN). El laboratorio de Leishmaniasis de la Universidad del Valle, utiliza la tcnica de secuenciacin de ADN para la identificacin de genes. La tcnica de secuenciacin es una tcnica molecular moderna que refleja, en este caso, el avance del uso de stas tcnicas por instituciones guatemaltecas, tal el caso de la UVG (ver figuras 20 y 21).

56

6.10. TCNICAS DE MARCADORES MOLECULARES QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS. Entre las principales tcnicas de Marcadores Moleculares que emplean los laboratorios, podemos mencionar las siguientes: kits de deteccin de presencia de virus por medio de pruebas ELISA (8 laboratorios). Las pruebas ELISA se utilizan tanto en el sector vegetal como humano; por ejemplo, en el sector vegetal, para identificar plantas o genotipos con presencia de virus y en el caso humano para diagnstico de enfermedades. La tcnica de anlisis de protenas y/o isoenzimas (7 laboratorios), RAPD (6 laboratorios) y RFLP (4 laboratorios), SSR o microsatlites (3 laboratorios), SCAR (3 laboratorios) y AFLP (2 laboratorios); son otras tcnicas reportadas, cuyos usos se reflejan tanto en el campo vegetal como en el campo de la salud humana. En el caso de vegetales, su uso o aplicacin principal es para estudios de diversidad, identificacin de genotipos, anlisis de poblaciones, entre otros, para mejoramiento gentico. De estas tcnicas las ms precisas son: SSR, SCAR y AFLP; mientras que protenas y/o isoenzimas y RAPD son menos reproducibles y menos utilizadas actualmente. En el caso de anticuerpos monoclonales (1 laboratorio), el Centro de Estudios e Investigacin en Salud, especficamente el laboratorio de Leishmaniasis lo clasifica dentro del rea de marcadores moleculares. Dicho laboratorio usa los anticuerpos monoclonales como antgenos para diagnstico de enfermedades. Es importante mencionar que en este ltimo caso, los antgenos que utilizan para el diagnstico de Leishmaniasis son derivados de bacterias

Figura 20. Nmero de laboratorios que utilizan las tcnicas de Marcadores Moleculares. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

8 8 7 6 5 4 3 2 1 0
IS A A ZI M EL EN IS O

7 6 4 3 3 2 1
TP P S R P PD R FL FL SS LE A

1
S

1
R TPC C U EN C

1
IO N

SC

SS

LO

Figura 21. Nmero de laboratorios por tcnica de Marcadores Moleculares empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
25 20 15 10 5 0
AS APD RFLP ISA R EL NZIM OE IS SS R AR SC LP STP LES CR CION AF S A -P ON RT NCIA CL E NO CU SE .M O Ac

21.6 18.9 16.2 10.8 8.1 8.1 5.4 2.7 2.7 2.7 2.7

A c. M

SE

IA

6.11. TCNICAS DE INGENIERA GENTICA QUE EMPLEAN LOS LABORATORIOS. En Guatemala nicamente se emplean tres tcnicas de Ingeniera Gentica que son: a) transformacin (insertacin de un gen en un vector, generalmente E. coli) y clonacin de ADN, es decir, multiplicacin de fragmentos de ADN que ya han sido transformados (dos laboratorios), b) transferencia de genes a otros organismos (dos laboratorios); por ejemplo, el caso de papaya, en donde se ha transferido un gen de resistencia a virus a genotipos comerciales, y c) ensayos de campo de Organismos Vivos Modificados (un laboratorio), que es el mismo que trabaja con papaya, y que tiene sus ensayos confinados en laboratorio y campo. Es relevante mencionar que estos laboratorios pertenecen a la Universidad del Valle en cooperacin con instituciones internacionales. Es importante sealar tambin que aparecen 5 laboratorios, pero lo que ocurre es que un laboratorio utiliza las tres tcnicas al mismo tiempo (laboratorio de Fitopatologa) y otro, que usa dos tcnicas simultneamente (CDC), por lo que en trminos de laboratorios son nicamente dos, pero en funcin del uso de las tcnicas se refleja como cinco laboratorios por la polifuncionalidad de los mismos (vanse figuras 22 y 23).
Figura 22. Nmero de laboratorios por tcnica de Ingeniera Gentica empleada. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 23. Nmero de laboratorios por tcnica de Ingeniera Gentica empleada (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

20 40

40

Transformacion y Clonacin ADN Transferencia Genes Ensayos Campo

6.12. OBJETIVOS DE LOS LABORATORIOS. El principal objetivo de la mayora de laboratorios es investigacin (21 laboratorios). En menor cantidad (9 laboratorios) se dedican a la docencia y una cantidad menor hacen una produccin comercial (6 laboratorios). Es importante hacer la observacin de que algunos laboratorios persiguen dos, e inclusive tres objetivos al mismo tiempo; es decir investigacin, docencia y produccin comercial simultneamente (ver figuras 24 y 25). Por esa razn, aparentemente, se muestran ms laboratorios que los encuestados. Por otra parte, esto refleja la claridad de los propsitos que persiguen los laboratorios en cuanto a que, en nuestro pas es necesario fomentar la investigacin en el campo de la Biotecnologa, formar recurso humano especializado y, finalmente, aplicarlo en actividades de beneficio social, ya sea de carcter salud, seguridad alimentaria y uso sostenible de los recursos naturales.

57

2 2

1 1

enes cin y ncia G N forma Trans cin de AD Transfere Clona

mp o os C a Ensay

Figura 24. Nmero de laboratorios segn sus objetivos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

22 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

21

gentico y produccin y la tercera con fines de prevencin de enfermedades y mejoramiento de la salud (ver figuras 26 y 27). Es importante hacer la observacin de que algunos laboratorios estn relacionados con dos o ms ciencias, al mismo tiempo; por esa razn, aparentemente, se muestran ms laboratorios que los encuestados.
Figura 26. Nmero de laboratorios y su relacin con algunas de las ciencias ms importantes. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
12

9 6

12 11

Investigacin

Docencia

Produccin Comercial

10

8 6 6 5 4 3 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1

Figura 25. Nmero de laboratorios segn objetivos que persiguen (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
16.7

25

58.3

58

Investigacin

Docencia

Produccin Comercial

Figura 27. Nmero de laboratorios y su relacin con algunas de las ciencias ms importantes (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
18 17.6 16 16.2

6.13. CIENCIAS CON LAS QUE SE RELACIONAN LOS LABORATORIOS. Entre las principales ciencias con las que se relacionan los laboratorios tenemos las siguientes: Microbiologa (12 laboratorios), Agronoma (11 laboratorios), Entomologa (8 laboratorios), Botnica y Nematologa (6 laboratorios), Gentica Vegetal (5 laboratorios), Taxonoma Vegetal (4 laboratorios) y Fitopatologa (3 laboratorios). En menor cantidad se encontraron en relacin con las siguientes ciencias: Gentica Animal y Humana (2 laboratorios) y Zoologa (2 laboratorios). nicamente se encontr un laboratorio relacionado con cada una de las siguientes ciencias: Virologa, Hematologa, Bioqumica, Inmunologa, Urologa, Endocrinologa y Medicina Humana. Como se puede apreciar, existe una gran gama de ciencias relacionadas con los laboratorios de Biotecnologa, tanto de la rama vegetal, animal como humana, fundamentalmente la primera y la segunda con propsitos de mejoramiento

14 12 10 8 6 4 2 0 11.8 8.8 8.8 7.4 5.9 4.4 2.9 2.9 2.9 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5

6.14. COLECCIONES DE ESPECIES O VARIEDADES DE ANIMALES Y/O VEGETALES, TANTO VIVOS COMO PRESERVADOS. En cuanto a colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados, 14 (52%) laboratorios s las poseen, mientras que 13 (48%) laboratorios no las poseen (ver figuras 28 y 29). Es importante indicar que las colecciones son fundamentales, como fuente potencial para su utilizacin

bio Ag log ro a En nom tom a olo Bo ga Ne tni Ge ma ca to n Ta tic log xo a V a no eg m et al a Fit Veg o e Ge pat tal o n Ge tic log n a A a tic ni a H ma um l Zo ana olo g Vi a He rolo ma ga to Bi log oq a Inm um un ica olo g En Uro a l Me doc oga rin dic ina olog Hu a ma na

Mi

cro

log a o En nom tom a olo g B a Ne otn i Ge mato ca n lo Ta tica ga xo no Veg m et a a Fit Veg l o Ge pat etal n olo Ge tica ga n A tic nim aH a um l an Zo a olo Vi ga ro l He oga ma tol Bi og oq a Inm umi un ca olo U g En rol a og d Me ocri a dic nol og ina Hu a ma na Ag r

Mi cro

bio

posterior en programas de mejoramiento gentico o de salud humana y animal. Sera deseable entonces que un mayor nmero de laboratorios tuvieran colecciones.
Figura 28. Nmero de laboratorios que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
14

Figura 31. Nmero de laboratorios que poseen bases de datos de sus colecciones expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
7.1

14 12 10 8 6 4 2 0

13

92.9

NO

SI

6.15. CONEXIONES A REDES GLOBALES.

NO SI

Figura 29. Nmero de laboratorios que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
NO SI

48

52

BASES DE DATOS Como puede observarse en las figuras 30 y 31, de las instituciones que poseen colecciones de especies o variedades de animales y/o vegetales, tanto vivos como preservados (14), la mayora de instituciones poseen bases de datos (13 en nmero y 92.9 en porcentaje). Esto refleja el inters de las instituciones que tienen colecciones de mantener la informacin computarizada, lo cual facilita el trabajo de la institucin y, an ms importante, la disponibilidad de informacin para las instituciones que estn interesadas en las actividades que realiza cada una de ellas.
Figura 30. Nmero de laboratorios que poseen bases de datos de sus colecciones. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
14 12 10 8 6 4 2 0 NO SI 1 13

En cuanto a conexiones a redes globales, 14 (52%) laboratorios s pertenecen a ellas, mientras que 13 laboratorios (48%) no pertenecen a ninguna (figuras 32 y 33). Las conexiones a redes reportadas fueron las siguientes: Proyecto de Mejoramiento del Caf (PROMECAF), Red Latinoamericana de Biotecnologa (REDBIO), International Consortium of Sugarcane Biotechnology (ICSB), REDMESO, Red Latinoamericana de Laboratorios de Polio (OPS/CDC), Red Metrpica para ETEC y Federacin Latinoamericana de Quemaduras (FELAQ). Sera deseable que todos los laboratorios estuviesen conectados a redes globales ya que, de manera general, nicamente la mitad tiene esta conexin. Algunas instituciones indicaron que estaban conectadas a Internet, sin embargo, en este trabajo, no se tom esta circunstancia como una conexin a redes globales, nicamente se consider las redes globales de trabajo temtico conjunto, propiamente dicho.

59

Figura 32. Nmero de laboratorios que poseen conexiones a redes globales. Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
14 12 10 8 6 4 2 0 NO SI 13 14

Figura 33. Nmero de laboratorios que poseen conexiones a redes globales (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

laboratorios no se relacionan con OVMs (24 laboratorios), que son la mayora. Esto ratifica, nuevamente, que la Ingeniera Gentica est incipiente en Guatemala, a nivel de laboratorio; pero sus fines son tambin claramente de carcter benfico, desde el punto de vista social.
Figura 34. Nmero de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados.(Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
24
24 22 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 NO SI

48 52

NO

SI

6.16. LABORATORIOS QUE TRABAJAN CON ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS. De los laboratorios visitados, nicamente tres estn trabajando con organismos vivos modificados (OVMs), perteneciendo dos de ellos a la Universidad del Valle de Guatemala y el otro a la Escuela de Biologa de la USAC (figuras 34 y 35). Estos laboratorios lo hacen fundamentalmente con propsitos de investigacin. En el caso de la Universidad del Valle, un laboratorio est trabajando con transformacin, clonacin y transferencia de genes resistentes al virus de papaya (Carica papaya), que es el laboratorio de Proteccin Vegetal; habindose hecho el aislamiento de genes, transformacin, clonacin y transferencia en Guatemala. Otro Laboratorio de la Universidad del Valle, especficamente el laboratorio del Centro de Estudios en Salud del Instituto de Investigacin est trabajando en el aislamiento de genes de Plasmodium, parsito causante de la malaria, y tripanosomas, flagelado relacionado con la enfermedad de Chagas. Seguidamente los transforman, usando E. coli y finalmente los clonan. En el caso de Plasmodium el objetivo es identificar genotipos asociados con P. vivax y P. falciparum, asociados con susceptibilidad/resistencia a antibiticos, como un criterio para definir un tratamiento nacional contra la malaria. En el caso de Trypanosoma, el laboratorio est desarrollando una estrategia para determinar como se dispersan los genes vectores de la enfermedad de Chagas. En cuanto a la Escuela de Biologa de la USAC, el laboratorio de Entomologa Aplicada y Parasitologa (LENAP), est produciendo Taq ADN polimerasa, utilizando para ello una bacteria recombinante de E. coli introducida al pas. Los dems

Figura 35. Nmero de laboratorios que trabajan con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
11.1

60

88.9

NO

SI

6.17. OBJETIVOS DE TRABAJAR CON ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS. Los objetivos de trabajar con OVM son bsicamente de investigacin, como se ha indicado anteriormente en detalle. As tambin, en una menor medida, los objetivos son uso confinado, es decir utilizacin del organismo nicamente en el laboratorio y totalmente aislado, con las medidas de Bioseguridad correspondientes y, en un caso especfico, el objetivo es evaluacin de riesgo, que consiste en hacer un anlisis de los riesgos potenciales del uso del organismo transformado. Este ltimo propsito, lo seala el laboratorio de Proteccin Vegetal de la Universidad del Valle (Figuras 36 y 37).

Figura 36. Nmero de laboratorios por objetivos de trabajar con Organismos Vivos Modificados. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
4

Figura 39. Nmero de laboratorios que han introducido OVMs al pas (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

3.7
3 2

1
NO

96.3
Investigacin Uso Confinado Evaluacin de Riesgo
E. coli Recombinante

Figura 37. Nmero de laboratorios por objetivos de trabajar con Organismos Vivos Modificados (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

6.19. POSIBILIDAD DE INTRODUCIR ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS AL PAS. En este caso, todos los coordinadores de los laboratorios respondieron enfticamente que no piensan, por el momento, introducir OVMs al pas (ver figuras 40 y 41). Esto demuestra que, a nivel de laboratorios, los especialistas estn concientes de que para trabajar con Ingeniera Gentica necesitan ms equipo y mayores medidas de Bioseguridad.

17

50 33

Investigacin

Uso Confinado

Evaluacin de Riesgo

6.18. INTRODUCCIN DE ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS AL PAS. De acuerdo con el nmero de laboratorios visitados, nicamente el laboratorio de Entomologa y Parasitologa (LENAP), de la Escuela de Biologa de la USAC, reporta haber introducido un OVM, en este caso una cepa transformada de E. coli. (figuras 38 y 39). El objetivo de la introduccin de la cepa transformada es la produccin de Taq ADN polimerasa para uso en PCR. Los dems laboratorios no reportan ninguna introduccin de OVMs al pas.
Figura 38. Nmero de laboratorios que han introducido OVMs al pas. Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
28 24 20 26

61
Figura 40. Nmero de laboratorios que tienen planificado introducir OVMs al pas. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
27 28 24 20 16 12 8 4 0 NO SI 0

Figura 41. Nmero de laboratorios que tienen planificado introducir OVMs al pas (expresado en porcentajes). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
0

16 12 8 4 0 NO E. coli Recombinante
100 NO

SI

6.20. PROGRAMAS Y/O EXPERIENCIA SOBRE EVALUACIN DEL IMPACTO SOCIAL QUE PUEDAN UTILIZARSE ANTE LA POSIBILIDAD DE INTRODUCCIN DE OVMs EN PROYECTOS DE INVESTIGACIN O PRODUCCIN. Los laboratorios de Microbiologa y Virologa del INCAP, son los nicos laboratorios a nivel nacional que cuentan con un programa o experiencia sobre evaluacin de impacto social que se puede utilizar ante la posibilidad de introduccin de un OVM en un determinado proyecto de investigacin o produccin (figuras 42 y 43). Las evaluaciones de impacto social que hacen son de tipo cuantitativo y cualitativo y se encuentra sistematizado.
Figura 42. Nmero de laboratorios con programas y/o experiencia sobre evaluacin del impacto social que puedan utilizarse ante la posibilidad de introduccin de OVMs en proyectos de investigacin o produccin. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
28 24 20 16 25

6.21. MEDIDAS DE SEGURIDAD DE LA BIOTECNOLOGA PARA LA REALIZACIN DE PROYECTOS DE INVESTIGACIN Y/O PRODUCCIN. La mayora de los laboratorios (22 de 27) poseen medidas de seguridad de la Biotecnologa para la realizacin de sus proyectos de investigacin y/o produccin. Entre las principales medidas de Bioseguridad encontradas se pueden mencionar las siguientes: uso de cmara de flujo laminar, bunkers de reactivos y desechos, tratamiento de residuos qumicos, destruccin de bacterias y desinfeccin de cristalera mediante autoclave. En algunos casos se encuentran niveles de seguridad 2 (Centro de Estudios en Salud y laboratorio de Leishmaniasis de la UVG) y el nico laboratorio con nivel de seguridad 3 es el Laboratorio Nacional de Salud, los cuales estn diseados para trabajar con protocolos que utilizan ADN recombinante y microorganismos potencialmente peligrosos para el ambiente, salud humana o animal (figuras 44 y 45). Es importante sealar que, de acuerdo a la informacin proporcionada, es necesario mejorar las medidas de Bioseguridad en la mayora de laboratorios de Biotecnologa en Guatemala, y de esto estn consientes los coordinadores de los laboratorios y estn haciendo sus mejores esfuerzos por mejorar las medidas de Bioseguridad, siendo uno de los factores limitantes el aspecto financiero.
Figura 44. Nmero de laboratorios que aplican alguna medida de Bioseguridad. Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

62

12 8 4 0 NO SI 2

Figura 43. Nmero de laboratorios con programas y/o experiencia sobre evaluacin del impacto social que puedan utilizarse ante la posibilidad de introduccin de OVMs en proyectos de investigacin o produccin (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
3.7

24 20 16 12 8 4 0 5

22

NO

NO

SI

SI 96.3

Figura 45. Nmero de laboratorios que aplican alguna medida de Bioseguridad (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
18.5

NO

SI
81.5

6.22. POBLACIN O GRUPO SOCIAL META BENEFICIARIO DE PROYECTOS DE BIOTECNOLOGA. nicamente cinco laboratorios de 27, no tienen un grupo social meta beneficiario de sus proyectos biotecnolgicos (figuras 46, 47 y 48). Entre los grupos sociales meta de los 22 laboratorios que s los poseen se pueden mencionar los siguientes: caficultores, pequeos y medianos productores, estudiantes, granjeros y finqueros, productores y exportadores de berries, poblacin centroamericana, poblacin guatemalteca susceptible de contraer la enfermedad de Chagas, productores y consumidores de caa de azcar. Las poblaciones meta beneficiarias abarcan tanto el rea vegetal, animal y de salud humana. Lo anterior demuestra nuevamente que la Biotecnologa en Guatemala persigue, en los diferentes proyectos, beneficiar a la poblacin, tanto a nivel de mejoramiento de la salud, como producir ms alimentos, conservacin y multiplicacin de especies vegetales comerciales y en peligro de extincin y un uso racional de los recursos naturales.

Figura 48. Ejemplos de grupos sociales meta de algunos de los laboratorios encuestados. A. Finca Esquipulas, Guanagazapa, Escuintla (Fuente: el autor, 2003), B. Finca Pretoria, Guanagazapa, Escuintla

6.23. PLAZO DE LOS PROYECTOS PARA QUE LOS RESULTADOS LLEGUEN A LOS GRUPOS META. La mayora de laboratorios trabaja para que los resultados de sus proyectos lleguen a sus grupos meta, a mediano (11 laboratorios) y corto (10 laboratorios) plazo. Un menor grupo de laboratorios trabaja con proyectos a largo plazo (7 laboratorios) (figuras 49 y 50). Es importante sealar que el plazo de los proyectos en los laboratorios depende de los objetivos de los mismos, como tambin de las instituciones financiantes. Cabe indicar tambin que, por la naturaleza de algunos de los proyectos, necesitan un tiempo prudencial para mostrar sus resultados, que por supuesto pretenden ser positivos.
Figura 49. Nmero de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados lleguen a los grupos meta. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
12 10 8 6
o

63

Figura 46. Nmero de laboratorios que tienen una poblacin o grupo social meta de sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
22 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

22

5
NO SI

Figura 47. Nmero de laboratorios que tienen una poblacin o grupo social meta de sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

NO

18.5

11

10

SI

81.5

2 0 Mediano Corto Largo

Figura 50. Nmero de laboratorios y plazo de proyectos para que los resultados lleguen a los grupos meta (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
25 39.3

Figura 52. Nmero de laboratorios cuyos proyectos tienen o no relacin con comunidades o pueblos indgenas (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
25.9

74.1

35.7

NO

SI

Mediano

Corto

Largo

6.24. RELACIN DE LOS PROYECTOS CON COMUNIDADES O PUEBLOS INDGENAS. La mayora de los laboratorios (20) no tienen proyectos relacionados con comunidades o pueblos indgenas, sin embargo, siete laboratorios mencionaron que s tienen relacin sus proyectos con comunidades o pueblos indgenas (figuras 51, 52 y 53). Puesto que la mayora de la poblacin guatemalteca es indgena (70% aproximadamente), debiera probablemente ponerse mayor nfasis en relacionar los proyectos de Biotecnologa con estas poblaciones. La biotecnologa podra ayudar a las comunidades o pueblos indgenas en el campo de la salud, la agricultura, la zootecnia y la forestera, incluyendo todas las tcnicas biotecnolgicas.

Figura 53. Comunidades indgenas que reflejan la importancia de orientar los beneficios de la biotecnologa hacia estas poblaciones. A. Finca Pretoria, Guanagazapa, Escuintla , B. Finca Pretoria, Guanagazapa, Escuintla. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

64

B Figura 51. Nmero de laboratorios cuyos proyectos tienen o no relacin con comunidades o pueblos indgenas. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
20
20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

7
o

6.25. EVALUACIN DE IMPACTO AMBIENTAL DE LOS PROYECTOS. nicamente el laboratorio de Proteccin Vegetal, de la Universidad del Valle de Guatemala, incluye dentro de sus proyectos de Biotecnologa una evaluacin de impacto ambiental, y lo hace mediante la evaluacin de daos producidos por enfermedades vegetales en cultivos y dispersin de sus vectores, a nivel de campo. El resto de laboratorios no hacen ningn tipo de evaluacin de impacto ambiental (figuras 54 y 55).

NO

SI

Figura 54. Nmero de laboratorios que incluyen en sus proyectos una evaluacin de impacto ambiental. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
26 28 24 20 16 12 8 4 0 NO SI 1

Figura 57. Nmero de laboratorios que hacen evaluacin de impacto social en sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
7.4

92.6

Figura 55. Nmero de laboratorios que incluyen en sus proyectos una evaluacin de impacto ambiental. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
3.7
NO

NO

SI

SI

6.27. RELACIN DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIN O PRODUCCIN DE LOS LABORATORIOS CON LAS CIENCIAS HUMANSTICAS. Los trabajos de investigacin de los laboratorios encuestados estn bastante relacionados con algunas de las ciencias humansticas tales como: Sociologa (11 laboratorios), Economa (9 laboratorios), Pedagoga (8 laboratorios), Antropologa (5 laboratorios) y Psicologa (5 laboratorios); tal y como se puede apreciar en las figuras 58 y 59. Esta situacin refleja que los coordinadores o directores de los laboratorios han compenetrado la importancia de la biotecnologa en el rea humanstica y social, y de ah que la orientacin de sus proyectos es generar un impacto positivo en la sociedad. Es importante mencionar que la Biotecnologa no debe tratarse como una ciencia aislada y pura, sino que se debe interrelacionar con las dems ciencias, en este caso las humansticas, para que su efecto sea mucho ms aplicado, su conocimiento ms popular y de mayor beneficio para la poblacin guatemalteca en general.
Figura 58. Nmero de laboratorios por ciencia humanstica que se relacionan sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
11 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
ol ci

96.3

6.26. EVALUACIN DE IMPACTO SOCIAL DE LOS PROYECTOS. De los 27 laboratorios, nicamente tres indican que hacen evaluacin de impacto social en sus proyectos, consistiendo stos en: evaluaciones cuantitativas, cualitativas y sistematizacin. Es obvio que los dems laboratorios necesitan incluir, de alguna manera, algn mecanismo que les permita evaluar el impacto social de sus proyectos (figuras 56 y 57).
Figura 56. Nmero de laboratorios que hacen evaluacin de impacto social en sus proyectos. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
25
26 24 22 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

65

9 8 5 5

og

om

go

lo

on

da

po

NO

SI

So

Ec

ro

Pe

nt

Ps

ic

ol

og

Figura 59. Nmero de laboratorios por ciencia humanstica que se relacionan sus proyectos (expresado en porcentaje). (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
13.2 13.2 28.9

21.1

23.7

Sociologa

Economa

Pedagoga

Antropologa

Psicologa

6.28. PROGRAMAS, PROYECTOS Y FUENTE DE FINANCIAMIENTO. Los programas de trabajo, con sus proyectos, as como tambin su fuente de financiamiento se resumen en el cuadro 5.
Cuadro 5. Programas, proyectos y fuente de financiamiento. PROGRAMA Marcadores PROYECTOS MolecularesUso de marcadores moleculares para el mejoramiento de plantas resistentes a los geminivirus en Guatemala. Resistencia gentica a enfermedades de importancia econmica en el cultivo de tomate en Guatemala. Banano, pltano, izote pony, loroco, pinabete, Prunus, ave del paraso, papa, persimn, zarzaparrilla, mora silvestre, fresa, orqudeas. Yuca, camote, zarzaparrilla, caa de azcar, crisantemo, violeta africana, naranja de Rabinal, limn persa. Ajo. Papa. Micropropagacin de pinabete Aclimatacin de plntulas de papa en invernadero. Estudio entre poblaciones del vector de la enfermedad de Chagas, estudios de morfometra, abejas sin aguijn (PCR). Micropropagacin de caa de azcar. Caracterizacin de variedades de caa de azcar mediante microsatlites. Deteccin de genes asociados a defectos del tubo neural en familias con ms de un miembro afectado (PCR Diagnstico). Evaluacin de una vacuna oral para la prevencin de diarrea causada por Escherichia coli enterotoxignica (PCR Diagnstico). Vigilancia de poliovirus en Centroamrica (PCR, cultivo viral). Marcadores de virulencia de Escherichia coli enterotoxignica en nios guatemaltecos (PCR Diagnstico). Genes de virulencia de Salmonella typhi (PCR Diagnstico). Deteccin de Cyclospora cayetanensis, Microsporidium y Cryptosporidium parveanum por PCR FUENTE DE FINANCIAMIENTO FAUSAC-USAID

FAUSAC-AGROCYT FAUSAC

Micropropagacin

66

Conservacin de Germoplasma Limpieza de virus Micropropagacin Combate de la Enfermedad de Chagas

FAUSAC ICTA-AGROCYT ICTA-AGROCYT ICTA-FODECYT ICTA ESCUELA DE BIOLOGIA DE LA USAC-OMS-METROPICADIGICENGICAA CENGICAA-ICTA INCAP-DUKE UNIVERSITY (EEUU) INCAP-UNIVERSIDAD JOHNS HOPKINS (EEUU) INCAP-OPS

Biotecnologa

Combate de Enfermedades

INCAP-OMS INCAP-Hospital Roosevelt

INCAP-AGEXPRONT-USFDA

PROGRAMA Enfermedades Infecciosas Humanas de Importancia en Guatemala

PROYECTOS Malaria: estudios de gentica de poblaciones en Anopheles (SSR, RFLP; clonacin, transformacin y transferencia de genes en Plasmodium) Dengue: gentica de poblaciones de Aedes (SSR, RFLP, RAPD, marcadores mitocondriales,)

FUENTE DE FINANCIAMIENTO UVG-TDR (Special Program for Research and Training ) in Tropical Diseases UVG (Centro de Estudios en Salud, Estudios de Gentica de Poblaciones de Anopheles y Aedes) -UVG OMS

Leishmaniasis: estudio de eficacia y seguridad para el uso de antgenos de bacterias recombinantes administradas en pacientes; Leishmaniasis cutnea, respuesta a antgenos Th1 y Th2 (ELISA, SCAR, proteinas/isoenzimas, Anticuerpos Monoclonales, PCR diagnstico, Secuenciacin) Chagas: estrategia para dispersin de genes en los vectores causantes de la enfermedad; anlisis de gentica molecular de los patrones de dispersin de Triatoma dimidiata; variabilidad gentica de Trypanosoma cruzi (SSR, AFLP, RFLP, transformacin, clonacin con E. coli y transferencia de genes, clonacin, transformacin y transferencia de genes en Trypanosoma). Enfermedades transmitidas por alimentos y agua (Anlisis de Riesgo); Anlisis de agua para coliformes totales E. coli y otras bacterias (PCR diagnstico). HIV/SIDA (PCR diagnstico, Dips Ticks, Western Blot, VDRL -anticuerpos monoclonales-, RPR). Proteccin Vegetal Resistencia a virus en papaya (RFLP, transformacin, clonacin de ADN, transferencia de genes, ensayos de campo).

UVG-TDR-OMS

UVG-NIH-TDR-OMS

UVG-NCID (International Food Safety Infectious Diseases)

UVG-USAID UVG-Universidad de Carolina del Norte y otras tres Universidades de EEUU

67

Evaluacin de especies ctricas cultivadas en Guatemala para determinar la ausencia/presencia de virus y viroides importantes, su saneamiento y caracterizacin previo a su propagacin (ELISA, PCR diagnstico). Determinacin del agente causal del llamado mal de chocolate en tomates en diferentes regiones de Guatemala (ELISA, PCR diagnstico). Vigilancia epidemiolgica del Amarillamiento letal del cocotero en los departamentos de Izabal y Petn: bsqueda de medidas locales para su control (Monitoreo). Estudio de la enfermedad conocida como Amarillamiento letal del Cocotero y bsqueda de semillas nativas en la costa sur del pas. Confirmacin de insectos plaga y enfermedades, estudios de manejo integrado de plagas y desarrollo de plantas resistentes a PRSA en papayas hawaianas tipo solo. Inmunoimpresin como tcnica rpida, especfica y confiable para la deteccin del complejo de virus psorosis en las reas citrcolas ms importantes de Guatemala (ELISA).

UVG-AGROCYT

UVG-AGROCYT

UVG-AGROCYT

UVG-FACYT

UVG-IPM/CRSP

UVG-FODECYT

PROGRAMA

PROYECTOS Gentica de poblaciones de Aedes aegypti en Chiapas, Mxico, y C.A. (SSR, RAPD, marcadores mitocondriales)

FUENTE DE FINANCIAMIENTO UVG (Centro de Estudios en Salud, Estudios de Gentica de Poblaciones de Anopheles y Aedes) -UVG OMS UVG (Centro de Estudios en Salud, Estudios de Gentica de Poblaciones de Anopheles y Aedes)-CDC.

Monitoreo del virus del oeste del Nilo (West Nile Virus) en aves y caballos (PCR diagnstico)

Estudios de poblaciones de Anopheles albimanus de Guatemala (sondas de DNA6 y fragmentos de IGS)

UVG (Centro de Estudios en Salud, Estudios de Gentica de Poblaciones de Anopheles y Aedes)-OMS. (Finalizados).

Estudios de poblaciones de Anopheles albimanus de Amrica Latina (sondas de DNA6 y fragmentos de IGS)

Estudios de poblaciones de Anopheles albimanus de Centroamrica, Sur Amrica y El Caribe (RAPD)

Estudios de poblaciones de Anopheles albimanus de Amrica y El Caribe (marcadores mitocondriales)

68
Estudios de poblaciones de Anopheles albimanus de Amrica y El Caribe (microsatlites) Papiloma Virus Humano y su relacin con cncer de crvix, en mujeres guatemaltecas (ELISA) Mejoramiento del Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiolgica para VIH-SIDA (pruebas rpidas para diagnstico: Dips Ticks, Western Blot; VDRL y RPR para Sfilis).

UVG-OMS UVG-Centro de Estudios en Salud (CES), MERTU-G (Medical Entomolgical Research Taxonomy Unit Guatemala) UVG-Centro de Estudios en Salud (CES), MERTU-G (Medical Entomolgical Research Taxonomy Unit Guatemala)- CDCP (Center for Desease Control and Preventium). Hospital Nacional de Amatitln (HNA)-CONCYTFundacin Rafael Castillo HNA-CONCYT -Fundacin Rafael Castillo

Anlisis de parsitos con heces de grupos sociales poblacin San Marcos.

Tratamiento de Quemaduras

Tratamiento aleatorizado de quemaduras de espesor total entre membrana Ixclul I y membrana porcina/EZ deim. Tratamiento de quemaduras de espesor parcial superficial y profundo aleatorizado con membrana Ixclul II y/o hidrocoloide (duo-derm).

PROGRAMA

PROYECTOS Capacitacin en rea de investigacin y quirrgica; transferencia tecnolgica entre Guatemala y Hospital del Quemado de Buenos Aires, Argentina. A mediano plazo: cultivo celular humano (piel). Desbridamiento con larvas de Phenicia sericatta en escaras y pie diabtico.

FUENTE DE FINANCIAMIENTO HNA-CONCYT -Hospital del Quemado BsAs.

HNA

Medicina Nuclear

Proyecto Nacional para deteccin de hipotiroidismo congnito (anticuerpos monoclonales). Cuantificacin de hormonas, marcadores tumorales y drogas teraputicas.

HGSJDD Laboratorio de Medicina Nuclear-OIEA

HGSJDD Laboratorio de Medicina Nuclear HGSJDD Laboratorio Clnico

Anlisis Clnico

Resistencia a antimicrobianos (cultivo de clulas y bacterias). Clasificacin de enterobacterias (cultivo de clulas y bacterias).

Validacin de pruebas diagnsticas para VIH y Hepatitis por pruebas ELISA

Electroforesis de protenas como prueba diagnstica (hemoglobina A, S y F). Micropro-pagacin Micropropagacin de ornamentales de reproduccin vegetativa. Micropropagacin de caa de azcar. Control Biolgico Control Biolgico Control Biolgico de Insectos Produccin de Metarrizium y parasitoides para control de insectos. Produccin de Metarrizium y parasitoides para control de insectos. Producin de virus entomopatgenos. Produccin de nemtodos entomopatgenos. Conservacin de Germoplasma Micropropagacin Micropro-pagacin Micropropagacin de caa de azcar. Conservacin de germoplasma y evaluacin de hbridos de caf. Arndano, pia, Hoffmania, Drosera, chipe, cactceas, papa, pitaya, Dioneae, camote, anturios, vainilla, orqudeas, Spathiphyllum, alcachofa, ajo, hoja de cuero. (Cultivo de pices, meristemos, nudos, brotes, geminacin de semillas in vitro) Caracterizacin de germoplasma de maz (SSR) Seleccin de lneas de maz con alta calidad de protena (SCAR) Caracterizacin de germoplasma de ajo (AFLP) CENGICAA ANACAF-PROMECAF, BIOFONTAGRO Jardines Mil Flores Ingenio Magdalena Ingenio Pantalen Ingenio La Unin Ingenio Santa Ana

69

ICTA

Marcadores Moleculares

ICTA-AGROCYT

PROGRAMA

PROYECTOS Caracterizacin de variedades de frijol liberadas por el ICTA (AFLP) Caracterizacin de variedades y mutantes de frijol (SSR)

FUENTE DE FINANCIAMIENTO ICTA-FODECYT ICTA URL

Micropropagacin Inseminacin artificial

Mora (cultivo de brotes) Evaluacin de semen de diferentes especies y de pajillas de inseminacin artificial en bovinos (crioconservacin de semen, espermiogramas) Elaboracin de dosis seminales en porcinos (crioconservacin, espermiograma)

FMVZ

FMVZ-Sector Privado

70

Como puede observarse, existen 106 proyectos que involucran el uso de la Biotecnologa, tanto en la rama humana, vegetal, animal y microbiolgica; sin embargo, aparentemente, segn el cuadro, es menor, pero lo que ocurre es que en algunos de los programas se ubicaron varios proyectos en la misma casilla, por ejemplo, el caso de los proyectos de ICTA y FAUSAC en donde se consider que cada cultivo es un proyecto. Se nota claramente que sus objetivos son de carcter benfico para la sociedad guatemalteca, cubriendo aspectos como: salud humana, seguridad alimentaria, produccin comercial, especialmente en ornamentales y mejoramiento de la produccin animal as como proteccin animal en el caso de aves y caballos Monitoreo del virus del oeste del Nilo (West Nile Virus) . Llama la atencin el nfasis de algunos laboratorios como los del INCAP, UVG, Laboratorio Nacional de Salud y Hospital San Juan de Dios, que estn dedicados de una manera directa al uso de las tcnicas biotecnolgicas en el combate y prevencin de enfermedades como el Dengue, Malaria, Chagas, Leishmaniasis, Tuberculosis, HIV/SIDA, que afectan severamente a la poblacin guatemalteca y centroamericana, especialmente la de escasos recursos. As tambin sus programas estn siendo respaldados, tcnica y financieramente, por instituciones internacionales de reconocido prestigio, que refleja, an ms, la seriedad y avance de estos proyectos, que a juicio particular estn teniendo un impacto positivo en nuestra sociedad. Adicionalmente, es necesario resaltar el trabajo del Laboratorio Clnico de Quemados del Hospital Nacional de Amatitln, que con recursos locales, tanto del hospital, como de los programas

nacionales que financian investigaciones de este tipo, como el caso de FODECYT, han realizado y pretenden seguir realizando investigaciones aplicadas que ayuden al tratamiento y recuperacin ms inmediata de ste tipo de pacientes. Es notable, tambin, la aplicacin de las tcnicas biotecnolgicas de los laboratorios nacionales en el campo vegetal, pues coadyuvan al mejoramiento gentico de cultivos y produccin nacional. Por ejemplo, la micropropagacin de papa y especies nativas alimenticias, y uso de marcadores moleculares en frijol, maz, ajo, caf, etc. En ese sentido estn contribuyendo a la seguridad alimentaria del pas, una de las necesidades ms sentidas de la poblacin guatemalteca. Por otra parte, hay laboratorios que se dedican a la produccin comercial de plantas, especialmente ornamentales y caa de azcar, contribuyendo a la economa del pas y al ingreso de divisas. En el caso de la Biotecnologa en animales, se encuentra en una fase de desarrollo incipiente, al menos en los laboratorios a los cuales se tuvo acceso. Pudo observarse, por ejemplo, en inseminacin artificial y espermiogramas en cerdos y bovinos, y an con sus limitaciones econmicas estn contribuyendo al desarrollo de la Biotecnologa en sta rama, con propsitos de beneficio social y econmico (FMVZ). As tambin se observ la realizacin de un programa en aves y caballos (control de enfermedades virales), que est siendo ejecutado por la UVG. As tambin, las reas Biotecnolgicas que se usan; abarcan el Cultivo de Tejidos, Marcadores Moleculares

e Ingeniera Gentica. Las tcnicas en cada una de las ramas son usadas en su mayora, en al menos uno de los proyectos; lo cual depende de muchos factores, entre otros, los factores econmicos y eficiencia de las tcnicas. Por ejemplo, an y cuando RAPD es una tcnica que casi ya no se usa actualmente a nivel mundial por su baja reproducibilidad, en Guatemala se sigue utilizando debido a que es una tcnica de bajo costo. Pero, por otra parte, se puede observar tambin que muchos laboratorios estn usando tcnicas avanzadas (en las tres ramas). Por ejemplo, Embriognesis Somtica en Cultivo de Tejidos de Plantas; en Marcadores Moleculares se estn utilizando microsatlites, AFLP y RFLP, an y cuando su costo es ms alto, pero su reproducibilidad es mayor. Se nota tambin que, en el caso del uso de Organismos Vivos Modificados (rea de la Ingeniera Gentica), algunos laboratorios (tres) estn usando todas las tcnicas necesarias, tanto las convencionales (transformacin, clonacin y transferencia de genes), como tambin tcnicas avanzadas que apoyan el proceso, tal es el caso de la secuenciacin de ADN. Se pudo notar que el propsito es de carcter benfico, pero necesitan mejorar los sistemas de Bioseguridad y los programas de evaluacin de impacto social y ambiental. 6.29. SONDEO A EMPRESAS PRIVADAS AGRCOLAS QUE NO TIENEN LABORATORIO, PERO QUE TRABAJARON O PIENSAN TRABAJAR CON OVMs A NIVEL DE ENSAYOS DE CAMPO. Despus de las visitas y encuestas a los laboratorios que estn trabajando en Biotecnologa, se consider importante tambin visitar empresas que no tienen laboratorio, pero que, sin embargo, realizaron hace relativamente poco tiempo ensayos de campo con Organismos Vivos Modificados. Especficamente estas empresas son Cristiani Burkard y Algodones Mayas S.A. En este caso fueron entrevistas personales, sin llenar boleta. Es importante acotar que estas empresas realizaron dichos ensayos de campo cumpliendo con todos los requisitos exigidos por la regulacin que en el momento de solicitar los ensayos exista relacionada con OVMs. Por ejemplo, al momento en que Cristiani Burkard plante la realizacin de su primer ensayo de este tipo, no exista una regulacin como tal, por lo

que la autorizacin se dio, de acuerdo a las fuentes entrevistadas, en funcin de un comit integrado por personal de diferentes instituciones que podran tener relacin con el tipo de ensayo propuesto. A raz de este ensayo, se plante la necesidad de hacer algo al respecto, por las autoridades correspondientes, por lo que se redact y aprob el Acuerdo Ministerial 393-98 (que posteriormente pas a ser el Acuerdo Ministerial 47698) en donde se le atribua la responsabilidad de la aprobacin de la importacin de transgnicos a la Unidad de Normas y Regulaciones del Ministerio de Agricultura, Ganadera y Alimentacin y la aprobacin del ensayo tcnico de campo al Instituto de Ciencia y Tecnologa Agrcolas. En el caso de la empresa Cristiani Burkard, trabaj en cooperacin con Monsanto, en un ensayo de campo en maz (figura 60) con el evento biotecnolgico Yielgard, que contiene el gen yieldgard. Este gen codifica una protena (endotoxina) que acta especficamente sobre las larvas de insectos de lepidpetros al destruir su sistema digestivo. El organismo donador del gen es la bacteria Bacillus thuringiensis, subespecie Kurstaki, y dicho gen confiere a la planta resistencia a ciertos lepidpteros, en este caso especfico al gusano cogollero (Spodoptera frujiperda). De acuerdo con las fuentes entrevistadas, este ensayo se realiz durante los aos 1998 y 1999 en Finca Las Vegas, Tiquisate, Escuintla y finca San Nicolas, San Jernimo, Baja Verapaz, realizando 3 ciclos anuales, por lo que el evento se realiz durante dos aos. De este ensayo, existe la informacin correspondiente en las fuentes que participaron activamente en dicho trabajo. El ensayo de yieldgard fue supervisado tcnicamente por profesionales del ICTA y visitado, para su evaluacin en campo, por el comit que aprob el proyecto. Los detalles de los resultados del trabajo son de tipo privado, y segn el personal de la empresa Cristiani Burkard la semilla de la cosecha y los rastrojos del cultivo, fueron incinerados al finalizar el ensayo. Por razones que competen nicamente a las empresas involucradas en los ensayos, la continuacin de los mismos fueron suspendidos. As tambin, la misma empresa plante en el ao el evento biotecnolgico Roundup Ready que contiene el gen (RR) que confiere resistencia al glifosato,

71

ingrediente activo del herbicida Roundup Ready de la Empresa Monsanto. El ensayo se present, para su aprobacin, en el ao 2000 a la Unidad de Normas y Regulaciones del MAGA y al ICTA, lo cual fue efectivo. Sin embargo el evento biotecnolgico en mencin ya no se estableci en el campo por razones que competen directamente a la empresa solicitante y que son de carcter interno. El proceso de obtencin del gen RR, en trminos generales, se gener de la siguiente manera: la lnea de maz transformada, designada como NK603 contiene un gen que codifica la sintasa EPSPS tolerante a glifosato, la cual fue aislada de la cepa CP4 de Agrobacterium sp. La cepa CP4 de Agrobacterium fue identificada, en principio, por su capacidad para crecer en un medio conteniendo glifosato. La enzima EPSPS (5-enolpiruvil siskimato-3-fosfato sintetasa) que est presente en la bacteria comn del suelo Agrobacterium sp. cepa CP4 mostr una alta tolerancia a la inhibicin del herbicida Roundup. El gen de tolerancia a glifosato (CP4) fue introducido en el plsmido vector PV-ZMGT32, usando tcnicas moleculares estandarizadas. Posteriormente, se aisl del Vector PV-ZMGT32 el fragmento de restriccin Mlul conteniendo el gen CP4. Este fragmento se impregn en micropartculas de tungsteno, las cuales fueron utilizadas, a travs del mtodo de biobalstica (aceleracin de partculas), para transformar tejidos del material parental de maz denominado lneas AW y CW, de donde se gener la lnea NK603, conteniendo el gen de tolerancia a glifosato (denominado comercialmente, Gen Roundup Ready RR-). El gen RR codifica entonces la enzima EPSPS, tolerante a glifosato. Posteriormente la lnea NK603, se utiliz para transferir el gen RR a las lneas comerciales de maz MO17 y B73, por medio de mtodos convencionales de mejoramiento (retrocruzamiento y seleccin) Despus de seis a ocho retrocruzas, fue posible seleccionar plantas con alto rendimiento con el nuevo gen en su genoma, ofreciendo la posibilidad de controlar malezas a menor costo. La semilla de la lnea comercial transformada MO17 fue utilizada en los ensayos de campo de Cristiani Burkard, importndose la semilla directamente de los Estados Unidos. Actualmente la Empresa Cristiani Burkard est

considerando la posibilidad de trabajar otros eventos biotecnolgicos, siempre en la bsqueda de genes de resistencia a lepidpteros y a herbicidas; pero en este nuevo caso en convenio con la empresa Syngenta. La decisin final de las empresas involucradas sobre este posible evento est pendiente, considerando especialmente la actual regulacin sobre OVMs en el pas.
Figura 60. Ensayo de campo de maz del evento biotecnolgico Yieldgard. Resistencia a Lepidpteros. A. Empresa Cristiani Burkard, finca Las Vegas, Tiquisate, Escuintla (Fuente: Cristiani Burkard, 1998-1999), B. Empresa Cristiani Burkard, finca Las Vegas, Tiquisate, Escuintla (Fuente: Cristiani Burkard, 1998-1999).

72

En cuanto a la empresa Algodones Mayas S.A., present en agosto del 2000 a la UNR y al ICTA la solicitud para importar semilla y establecer un ensayo de campo en cooperacin tambin con Monsanto, pero en este caso en Algodn, con el evento biotecnolgico Roundup Ready, que como se indic anteriormente, contiene el gen RR, resistente al glifosato, ingrediente activo del herbicida Roundup Ready. El sistema de obtencin del gen RR, fue similar en trminos generales al utilizado en maz, con la diferencia que se usaron distintos vectores (PV-GHGO7) y el mtodo de transferencia fue el de Agrobacterium tumefaciens. As tambin la lnea parental de algodn original transformada fue la variedad Cooker 312, de donde se deriv la lnea de algodn 1445, lnea de la cual se deriv la semilla utilizada en el ensayo de algodn en

Guatemala. El ensayo se llev a cabo en Finca El Naranjo, Masagua, Escuintla y fue observado por UNR. Segn personeros de la empresa, el ensayo fue incinerado. Posteriormente, Algodones Mayas S.A., en el ao 2001, present una solicitud a UNR para importar y establecer un ensayo de campo en Finca El Naranjo, Masagua, Escuintla, con un transgnico. Este trabajo se plante en cooperacin con la empresa Aventis, en el evento biotecnolgico Lyberty que contiene el gen LL que confiere resistencia a la planta de algodn a glufosinato de amonio, agente activo del herbicida Liberty. En este primer ensayo se trabaj con variedades que contenan el gen de resistencia a glufosinato de amonio (figura 61). En el siguiente ao, se present una segunda solicitud a las mismas instancias para importar semilla y establecer un ensayo, con poblaciones segregantes de las semillas del primer evento (figura 62). En ambos casos, segn personeros de la empresa, la semilla y los rastrojos de los cultivos fueron incinerados. Las semillas, para la realizacin de los ensayos, fueron enviadas directamente desde la sede de Aventis, en Estados Unidos. En este caso, los ensayos tambin contaron con la supervisin de UNR. En cuanto a la evaluacin y/o gestin de riesgo o evaluacin de impacto ambiental, las dos empresas indicaron que lo nico que hicieron fue seguir los procedimientos y medidas de bioseguridad que, segn sus contrapartes generadoras de los genes, se utilizaban para prevenir el escape y diseminacin de los OVMs.

Figura 62. Ensayo de campo de algodn del evento biotecnolgico Liberty. Seleccin de progenies resistentes al herbicida Lyberty (glufosinato de amonio). Empresa Algodones Maya S.A., finca El Naranjo, Masagua, Escuintla (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2002).

6.30. CONOCIMIENTO DEL PBLICO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO VIVO MODIFICADO. En el conocimiento del pblico sobre lo que es un OVM, el estudio, tomando como base una muestra de 63 personas entrevistadas, reflej que la mayora no tiene conocimiento sobre este tema (73 %), mientras que un 27% considera que s conoce el tema (figura 63). Este resultado se muestra lgico, puesto que la mayora de la poblacin no tiene acceso a este tipo de informacin.
Figura 63. Porcentaje del pblico que considera saber o no que es un OVM.(Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
73

73

Figura 61. Ensayo de campo de algodn del evento biotecnolgico Liberty. Resistencia a glufosinato de amonio. Empresa Algodones Mayas S.A., finca El Naranjo, Masagua, Escuintla (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2001).

80 70 60 50 40 30 20 10 0

27

NO

SI

Del 27% que consideran que s saben que es un OVM, tienen los siguientes conceptos al respecto: Son aquellos organismos que se les ha hecho un cambio y por lo tanto tenemos una nueva funcin. Organismo que ha sufrido modificaciones genticas.

El que tiene cambio en sus genes originales. Es un transgnico. Producto transgnico. Organismo vivo que ha sido modificado por medio de cruzamientos (o hbridos). Cambio gentico en plantas para su mejoramiento. Es aquel que ha sido modificado para ampliar algunas de sus caractersticas. Un organismo cambiado genticamente. Organismo al que se le ha introducido o modificado un gen. Un organismo clonado o mutado artificialmente. Cambio de material gentico en algn producto vegetal. Una funcin nueva.

Todos los conceptos o ideas de lo que es un OVM se consideran aceptables, por lo que se puede decir que al menos una parte relativamente mediana de la poblacin entrevistada tiene un conocimiento de lo que es un OVM. 6.31. CONOCIMIENTO SOBRE LO QUE ES UN ORGANISMO TRANSGNICO.

Incorporacin de material en bases moleculares. Un organismo que se altera alguna secuencia gentica. Clulas que han sido alteradas genticamente. Un organismo que tiene variaciones en su ADN. Es aquel que ha sido modificado. Son aquellos que tienen una nueva funcin modificada. Incorporacin de material gentico a molculas. Es un organismo vivo que ha sido alterado su cdigo gentico. Producto con genes de otro. Es un ser vivo modificado. El que tiene genes que son de otro organismo. Organismo genticos cambiados o modificados. Organismo que ha sido alterado genticamente. ADN modificado. Organismo modificado y mejorado. Que le agregan un gen que beneficia a la planta (organismo) a la resistencia o rendimiento.

74

Tratando de ahondar un poco ms sobre el tema de la Biotecnologa moderna, se cuestion a la misma poblacin, sobre si conoca que era un organismo transgnico. Los porcentajes de las personas que no conocen el concepto, y los que lo conocen de manera aceptable, son parecidos a la pregunta sobre lo que es un OVM, que son un 70 y un 30 %, respectivamente (figura 64).
Figura 64. Porcentaje del pblico que considera saber que es un Organismo Transgnico. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
70
70 60 50 40 30 20 10 0

Se hicieron las dos preguntas debido a que algunos podan conocer el trmino OVM y otros talvez estaban ms familiarizados con el trmino Organismo Transgnico. Sin embargo, las respuestas en ste caso fueron similares a las del conocimiento sobre OVM, indicndonos esto que en la poblacin muestreada, se conocen en igual proporcin ambos trminos y que, por sus respuestas, los consideran como sinnimos, lo cual puede considerarse apropiado, dadas las limitaciones de conocimientos sobre este tema, en la poblacin muestreada. 6.32. CONOCIMIENTO DEL PBLICO SOBRE EL CONSUMO DE ALIMENTOS PROVENIENTES DE OVMs. Al respecto, un 83% de la poblacin muestreada, en general, considera que no sabe si est consumiendo alimentos provenientes de OVMs, mientras que un 17% considera que s (figura 65). Esto reafirma, nuevamente, que hay un escaso conocimiento popular sobre la Biotecnologa y sus productos alimenticios derivados.

30

NO

SI

Del 30% que consideran que s saben que es un Organismo Transgnico, tienen los siguientes conceptos al respecto:

Figura 65. Porcentaje del pblico que considera saber o no si est consumiendo alimentos provenientes de OVMs. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003). 83 90
80 70 60 50 40 30 20 10 0 17

Figura 66. Porcentaje del pblico que considera saber o no sobre la utilizacin de los OVMs. (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).
84 100 80 60 40 20 0 1

NO

SI

Del 16% que respondieron que s saben, se les pregunt Cul es su utilidad? y su respuesta fue la siguiente: Alimentar a las masas. Mejoramiento del rendimiento y la produccin. Introduccin de genes para enfermedades de tomate. Alteracin en el rendimiento de maz. Fertilizantes. Defensas a ataques de plagas. Medicamentos. Comestibles. En plantas como por ejemplo maz. Mejoramiento de alimentos. Variedades de organismos para prolongar su vida contra enemigos naturales. Un pequeo porcentaje de la poblacin muestreada parece tener un relativo conocimiento de la utilidad de los OVMs, sin embargo, cuando se les pregunt si saban de alguna utilizacin en el pas su respuesta fue la siguiente: En cultivos, variedades o hbridos resistentes, en cultivos de importancia econmica. Se han hecho experimentos en el ICTA. La primera respuesta puede ser aceptable, considerando que se han hecho experimentos con OVMs en maz, algodn, y algunas hortalizas en el pas, sin embargo, la segunda respuesta es dudosa, ya que ICTA no ha hecho experimentos con OVMs como institucin per se, sino nicamente ha participado aprobando protocolos de investigacin y dando sugerencias sobre el desarrollo de los mismos en las visitas de campo que hacan a los ensayos experimentales.

NO

SI

De las personas que respondieron que s saben, se les pregunt Cul? y su respuesta fue la siguiente: tomate, cereales, harinas, verduras, vegetales, carnes, frutas, hongos, maz, maz dulce, arroz y soya. En el caso de frutas y hongos no se tiene conocimiento de que se haya liberado algn OVM. En el caso de algunos que respondieron vegetales, probablemente se referan a verduras. Aqu se evidencia un poco ms el desconocimiento del pblico sobre si est consumiendo productos provenientes de OVMs o no, mencionando los productos que mayor publicidad reciben por prensa y televisin. Evidentemente la mayor posibilidad de consumir productos elaborados con OVMs es al consumir productos alimenticios importados, especialmente de los Estados Unidos de Norteamrica, pas que es uno de los mayores productores de OVMs en el mundo. 6.33. CONOCIMIENTO SOBRE LA UTILIZACIN DE LOS ORGANISMOS VIVOS MODIFICADOS. En cuanto a la utilizacin de los OVMs, se repite la misma tendencia del desconocimiento popular de este tema, ya que un 84% de la poblacin encuestada, en general, no conoce ninguna utilizacin de los OVMs, y solamente un 16% considera que s (figura 66). Lo anterior consolida la necesidad de popularizar los conocimientos sobre la Biotecnologa y sus medidas de Bioseguridad.

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7. conclusiones
7.01. De acuerdo al trabajo realizado, se encontraron 27 laboratorios vinculados o relacionados al uso de la Biotecnologa y/o la seguridad de la Biotecnologa, pertenecientes a 17 instituciones, de las cuales 4 son gubernamentales (8 laboratorios), 8 privadas (10 laboratorios) y 5 acadmicas (9 laboratorios). 7.02. En cuanto al nmero de expertos los resultados indican 70 profesionales con nivel de licenciatura, 18 con grado de maestra y 15 con grado de doctorado. Adems, laboran en ste campo 87 tcnicos y 66 personas de apoyo. 7.03. El estudio indica que, hasta el momento, hay 106 proyectos y/o programas, tanto en ejecucin como finalizados. 7.04. De 27 laboratorios encuestados, nicamente uno hace evaluacin y/o gestin de riesgo, pero a nivel de laboratorio. A nivel de campo nicamente dos empresas indicaron que hicieron una evaluacin de riesgo, de acuerdo con los requerimientos que les solicit la UNR del MAGA. 7.05. De los 27 laboratorios encuestados 18 trabajan en el rea de Cultivo de Tejidos, 13 con Marcadores Moleculares y 2 con Ingeniera Gentica. Algunos laboratorios trabajan varias reas simultneamente por lo que el nmero total es de 33 laboratorios. 7.06. Existe una gran gama de ciencias relacionadas con los laboratorios de Biotecnologa, tanto de la rama vegetal, animal, como humana, fundamentalmente la primera y la segunda con propsitos de mejoramiento gentico y produccin, y la tercera con fines de prevencin de enfermedades y mejoramiento de la salud. 7.07. Los laboratorios estn en buena medida relacionados con algunas de las ciencias humansticas; por ejemplo: Sociologa (11 laboratorios), Economa (9 laboratorios), Pedagoga (8 laboratorios), Antropologa (5 laboratorios) y Psicologa (5 laboratorios). Esto demuestra que en los laboratorios estn concientes de la importancia de la Biotecnologa en el rea humanstica y social. 7.08. Las capacidades existentes en materia de Biotecnologa son: 199 ambientes (reas de trabajo dentro de los laboratorios), con un rea total de 12,597 m2, 28 cuartos de crecimiento con un rea de 908 m2, 12 invernaderos, con un total de 2,718 m2, 39 autoclaves, 52 cmaras de flujo laminar y 14 termocicladores. 7.09. En cuanto a inventarios/colecciones de especies/variedades/animales y vegetales, tanto vivos como preservados, 14 laboratorios indicaron que s tienen colecciones, y de estos 13 poseen bases de datos y 14 tienen conexiones a redes globales. 7.10. La mayora de proyectos trabajan con fondos propios y fondos provenientes de donantes nacionales e internacionales y ONGs. 7.11. La mayora de laboratorios trabajan en el mbito de la diversidad biolgica, tanto en la rama animal, humana, como la vegetal; en donde se observa especialmente el uso de las reas de Cultivo de Tejidos y Marcadores Moleculares para estudios de diversidad biolgica; por ejemplo: Gentica de Poblaciones, variabilidad gentica, caracterizaciones, identificacin de genotipos, etc. 7.12. De los 27 laboratorios, 22 indican que tienen un grupo social meta beneficiario. Los laboratorios que respondieron positivamente mencionan a los siguientes grupos: caficultores, pequeos y medianos productores, estudiantes, granjeros y finqueros, productores y exportadores de berries, poblacin centroamericana, poblacin guatemalteca susceptible de contraer la enfermedad de Chagas, productores de caa de azcar y consumidores. 7.13. De acuerdo con los programas de Biotecnologa encontrados, la participacin del pblico, de manera directa es nula. El pblico participa pero

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de forma indirecta, por ejemplo, en el caso de la salud humana, hay grupos o poblaciones que son utilizados elementos para la prueba de tratamientos mdicos, o en otros casos, como en el rea de Cultivo de Tejidos, los agricultores llevan muestras de plantas para ser cultivados y probados en sus campos de produccin. 7.14. De los 27 laboratorios, nicamente siete indican que s tienen relacin sus proyectos con comunidades o pueblos indgenas. Esto refleja que, en general, la Biotecnologa no est dirigida, en especial, a los pueblos indgenas. 7.15. nicamente un laboratorio indica que hace estudio de impacto ambiental, especficamente en el campo de la Proteccin Vegetal en la UVG, y lo hace mediante la evaluacin de daos producidos por enfermedades vegetales en cultivos y dispersin de sus vectores, a nivel de campo. En el caso de impacto social solamente dos laboratorios lo hacen, siendo stos los del INCAP, siendo la evaluacin de tipo cualitativo, cuantitativo y sistematizacin. 7.16. La situacin actual del pas indica que el uso de OVMs es el siguiente: investigacin (3 laboratorios), uso confinado (2 laboratorios) y evaluacin de riesgo (1 laboratorio). A nivel de campo existen dos empresas que no tienen laboratorio pero que realizaron ensayos de campo y cuya cosecha y rastrojos fueron incinerados. 7.17. Siempre en trminos de realidad de la situacin de OVMs, a nivel de laboratorios, nicamente un laboratorio import una bacteria recombinante, para uso confinado. Dos laboratorios han hecho sus propias transformaciones, clonaciones y transferencia de genes a nivel de laboratorio. A nivel de campo dos empresas introdujeron en el pasado de manera oficial, OVMs, con fines de investigacin, cumpliendo con los requisitos que en su momento existan para cada solicitud. 7.18. El mbito actual de los OVMs refleja que slo tres laboratorios estn trabajando con ellos, perteneciendo dos a la UVG, y el otro al LENAP, y lo hacen bsicamente con fines de investigacin. En la UVG, un laboratorio hace

transformacin, clonacin y transferencia de genes resistentes al virus de papaya (Carica papaya) que es el laboratorio de Proteccin Vegetal. Otro Laboratorio de la UVG, que es un laboratorio del CES hace el aislamiento de genes de Plasmodium y tripanosomas, transformndolos, usando E. coli, para finalmente clonarlos. En cuanto al LENAP, est produciendo Taq ADN polimerasa, usando una bacteria recombinante de E. coli introducida al pas. Esto ratifica, que la Ingeniera Gentica est incipiente en Guatemala, a nivel de laboratorio; pero sus fines son tambin claramente de carcter benfico, desde el punto de vista social. 7.19. Todos los laboratorios sealan que no tienen intencin de importar o exportar OVMs, sin embargo, dos laboratorios estn, y piensan seguir produciendo OVMs. 7.20. De acuerdo al diagnstico realizado, las prioridades nacionales, con relacin a OVMs son salud y proteccin vegetal. 7.21. Los laboratorios de Microbiologa y Virologa del INCAP, son los nicos laboratorios, a nivel nacional, que cuentan con un programa o experiencia sobre evaluacin de impacto social que se puede utilizar ante la posibilidad de introduccin de un OVM. 7.22. En cuanto a OVMs, actualmente no existe ningn programa o experiencia sobre evaluacin de impacto ambiental. 7.23. nicamente 22 laboratorios poseen medidas de seguridad de la Biotecnologa para la realizacin de sus proyectos de investigacin y/o produccin. La mayora de estos laboratorios tienen niveles de seguridad 1 y 2. Solamente un laboratorio (LNS) tiene nivel de seguridad 3. 7.24. El grado de conocimiento pblico sobre lo que es un OVM, en el presente estudio, reflej, de acuerdo a la poblacin muestreada, que la mayora de las personas no conoce este tema.

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8. recomendaciones
8.1. Establecer una poltica nacional para la utilizacin de la Biotecnologa, de una manera racional, de tal manera que se oriente a beneficios concretos para la poblacin guatemalteca, considerando los riesgos de la misma para que no ponga en peligro el patrimonio gentico, tanto en flora, como en fauna y la salud humana y animal. 8.2. Fortalecer el desarrollo de programas de investigacin bsica y aplicada en la Biotecnologa. En ese sentido, debe trabajarse coordinadamente con instituciones gubernamentales, no gubernamentales y acadmicas, para la ejecucin de estos programas. 8.3. Propiciar la creacin de un fondo econmico y una cartera de proyectos, de apoyo a los programas de la Biotecnologa. 8.4. Promover el uso de la Biotecnologa en la conservacin y utilizacin de especies nativas, tanto alimenticias, medicinales, ornamentales e industriales, considerando los riesgos potenciales. 8.5. Establecer programas de cooperacin recproca con otros pases e instituciones internacionales, tanto en aspectos generales de desarrollo, como tcnicos y cientficos en el uso de la Biotecnologa. 8.6. Propiciar la cooperacin interinstitucional a nivel nacional para el uso de la Biotecnologa en todas sus ramas, reas y tcnicas. 8.7. Fomentar la formacin y capacitacin de recurso humano en el uso de la Biotecnologa en todos sus campos de accin de carcter benfico. 8.8. Popularizar el conocimiento del uso de la Biotecnologa, sus riesgos y beneficios. 8.9. Promover los efectos positivos del uso de la Biotecnologa en la utilizacin sostenible de los recursos naturales del pas. 8.10. Fortalecer, apoyar y facilitar la implementacin de ms infraestructura para el uso de la Biotecnologa. 8.11. Promover la transferencia de tecnologa, de pases ms avanzados en este campo, hacia Guatemala, en donde se est iniciando el desarrollo de estas tcnicas. 8.12. Implementar una base de datos de las instituciones y programas que estn utilizando Biotecnologa en Guatemala.

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9. bibliografa
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10. apndice
Figura 67A. Identificacin de muestras en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003). Figura 68A. Cabinas de seguridad en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003).

Figura 69A. Medidas de Bioseguridad en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003).

Figura 70A. Laboratorio con nivel 3 de seguridad en el Laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003).

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Figura 71A. Condiciones mnimas de Bioseguridad en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la URL (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003).

Figura 72A. Aspecto general de un ambiente de trabajo en el laboratorio Nacional de Salud (Fuente: Licda. Eyda de Campollo, 2003).

Figura 73A. Cuarto de crecimiento del laboratorio de Cultivo de Tejidos del ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 74A. Espectrofotmetro de luz ultravioleta en el laboratorio de Marcadores Moleculares del ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 75A. Detalle de cmara de flujo laminar en laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003).

Figura 76A. Carga de gel de electroforesis en el laboratorio de Marcadores Moleculares de FAUSAC (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

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Figura 77A. Estufa con agitacin magntica y potencimetro en laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003).

Figura 78A. Transiluminador en el laboratorio de Marcadores Moleculares de ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 79A. Enraizamiento de pia en laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 80A. Planta de chipe en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003)

Figura 81A. Planta cactcea in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de ICTA(Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 82A. Planta de mora in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de URL (Fuente: Ing.Agr. Luis Aguirre, 2003).

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Figura 83A. Planta de camote in vitro en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la FAUSAC (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 2003).

Figura 84A. Plantas de caf in vitro en laboratorio de Cultivo de Tejidos de ANACAFE (Fuente: Ing.Agr. Amauri Molina, 2002).

Figura 85A. RAPD en gel de agarosa en cultivo de caf en laboratorio de FAUSAC (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1997).

Figura 86A. SSR en gel de poliacrilamida (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1999)

Figura 87A. AFLP en gel de poliacrilamida (Fuente: manual del kit de AFLP, 2003).

Figura 88A. Deteccin de colonias recombinantes en laboratorio de Marcadores Moleculares de FAUSAC (Fuente: Orozco Castillo, Carlos, Ph.D., 1999).

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