Antgeno VDRL Brs

Finalidade Antgeno para a triagem sorolgica da sfilis. Amostra a-Preparo do paciente Como a lipemia pode interferir na reao, recomenda-se a coleta da amostra aps um jejum de 8 12h. b-Tipos de amostra Soro: usar soro recm-coletado separado o mais rapidamente possvel aps a coleta, sem hemlise e no lipmico, inativado a 56oC por 30 min antes do uso (devendo ser reinativado nesta temperatura por 10 minutos caso se demore mais que 4h para executar a prova); LCR: usar LCR isento de contaminaes e centrifugado antes da anlise (no devendo ser aquecido ou inativado). c-Armazenamento e estabilidade As amostras de soro podem ser mantidas em geladeira (2-8oC) por um perodo de at 5 dias, do contrrio, manter a amostra em freezer (-20oC). As amostras de LCR devem ser analisadas o mais rapidamente possvel aps a coleta. d- Critrios de rejeio As amostras de soro que apresentarem hemlise, lipemia ou sinais de contaminao microbiana devem ser rejeitadas. A amostra de LCR caso apresente sinais de contaminao microbiana ou alta quantidade de sangue deve ser rejeitada. e- Precaues e cuidados especiais Evitar congelamento e descongelamento freqentes em uma mesma amostra; Todas as amostras devem ser manipuladas com extrema cautela, pois podem veicular diversas doenas infecto-contagiosas (hepatite, SIDA etc.). Seu descarte deve ser feito preferencialmente aps sua autoclavao devendo-se evitar sua eliminao diretamente no meio ambiente. Igual cuidado se recomenda no descarte de outros materiais como ponteiras plsticas, agulhas e seringas. Princpio de tcnica A amostra em anlise colocada em contato com a suspenso antignica de VDRL-BRS em uma lmina apropriada, e submetida a um processo de rotao mecnica por 4 minutos. Durante este tempo, as partculas de colesterol revestidas com cardiolipina e lecitina iro flocular caso a amostra contenha reaginas, sendo a floculao visvel ao microscpio, ou permanecero livres em suspenso no caso da amostra no conter reaginas. Procedimento Tcnico Teste de exatido da agulha -Adaptar a agulha 18G ou 21G sem bizel seringa e preencher esta com 1 ou 2 mL suspenso antignica; -Dispensar com a seringa na posio vertical exatamente 1 mL contando o nmero de gotas que dever ser de 60 (entre 58-62 gotas) para garantir 0,017 mL/gota para agulha 18G, ou 100 (98-102)

gotas para agulha 21G, o que garante 0,01 mL por gota. Preparo da suspenso antignica -A temperatura no local de anlise deve estar entre 23-29oC e os reagentes igualmente a esta temperatura; -Pipetar 0,4 mL de salina tamponada para o frasco com fundo chato; - O antgeno (0,5 mL) adicionado gota-a-gota numa velocidade de 6 segundos para cada 0,5 mL. A velocidade de rotao apropriada obtida quando o centro do frasco circunscreve um crculo de 5 cm de dimetro, aproximadamente 3 vezes por segundo; -Manter a agitao por mais 10 segundos, e adicionar 4,1 mL de salina tamponada; -Fechar o frasco e agitar aproximadamente 30 vezes em 10 segundos, estando ento a suspenso pronta para o uso; Observaes -A suspenso aps preparada estvel por apenas 2h na temperatura ambiente ou 8 horas em geladeira (2-8oC); -A suspenso no pode ser congelada nem entrar em contato com borracha (esta danifica as partculas e prejudica a reatividade); -Avaliar a suspenso aps preparada frente a soros no reagente, fracamente reagente e reagente. Procedimento para soro Teste Qualitativo -Verificar a temperatura ambiente. Esta deve estar entre 23-29oC, abaixo do que a reatividade decresce e acima do que a reatividade aumenta; - Usando uma micropipeta ou dispositivo apropriado, transferir uma gota (0,05 mL) de amostra para o centro de um crculo da lmina de vidro; proceder igual para os controles; - Homogeneizar a suspenso antignica cuidadosamente e com suavidade, adicionando uma gota de 0,017 mL (usar seringa com agulha 18G sem bizel) a cada crculo contendo amostra e controles, homogeneizando a seguir; - Colocar a lmina em um agitador mecnico (Kline ou similar) e agitar durante 4 minutos a 180 2 rpm (em clima seco manter em cmara mida durante o processo para prevenir contra o ressecamento do material); -Ler os resultados dentro de 1 minuto ao microscpio em aumento de 100x (ocular e objetivas de 10x): - As amostras reagentes apresentam aglomerados de antgeno visveis ao microscpio; - As amostras no reagentes apresentam uma mistura homognea de amostra e antgeno; O fenmeno de prozona ocasionalmente observado. Este tipo de reao, demonstrado quando uma completa ou parcial inibio da reatividade ocorre com o soro no diludo e uma reatividade mxima obtida somente com o soro diludo. Este fenmeno pode ser relatado como resultado fracamente reagente ou aspereza no reagente em um teste qualitativo que poder ser fortemente reagente quando diludo. Portanto, recomenda-se que, todos os soros que fornecerem resultados

fracamente reagentes ou aspereza no reagente no teste qualitativo, sejam automaticamente retestados utilizando-se o processo quantitativo. Teste Quantitativo -Verificar a temperatura ambiente, esta deve estar entre 23-29oC, abaixo da qual a reatividade decresce e acima da qual a reatividade aumenta; - Colocar 0,05 mL de soluo fisiolgica (NaCl 0,85%) estril nos crculos de 2 a 6 da lmina de vidro; - Usando dispensador adequado, colocar 0,05 mL de amostra no crculo 1 e no crculo 2; - Misturar o soro e a soluo fisiolgica no crculo 2 por aspirao 8 vezes; - Transferir 0,05mL do crculo 2 para o crculo 3 e misturar, em seguida transferir igual quantidade do crculo 3 para o crculo 4 e assim por diante at o crculo 6, desprezando os ltimos 0,05 mL; obtm-se as diluies 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 e 1:32 respectivamente para os crculos 2, 3, 4, 5 e 6; -A partir deste ponto, proceder como o indicado no teste qualitativo; -O ttulo considerado a mais alta diluio que apresenta reatividade (exemplo: se a amostra reativa at 1/16 este ser o ttulo); caso a ltima diluio ainda se apresente reagente, continuar a diluio seriada (1:64, 1:128 etc.). Procedimento para LCR -Preparar a suspenso antignica adicionando uma parte de salina a 10% a uma parte da suspenso antignica de VDRL BRS (esta mistura estvel ,por apenas 2h) e homogeneizar suavemente por inverso ou rotao durante 5 minutos (no mais de 2 horas); proceder ao teste como indicado para o soro usando uma gota de suspenso de 0,01 mL (agulha 21 ou 22G), e, caso a amostra seja reagente, determinar seu ttulo . Precaues e cuidados especiais (para soro e LCR) -Homogeneizar a suspenso antignica antes do uso; -Uma causa de erro freqente o uso da suspenso aps 8h de seu preparo , seu congelamento ou sua conservao na temperatura ambiente alm do recomendado; -No h nenhuma correlao entre a qualidade da floculao e o ttulo da amostra; -Leituras tardias podem apresentar resultados falsos (aps um minuto da agitao, as lminas devem ser novamente colocadas no agitador pelo menos por um minuto); -Ressecamento da suspenso antignica em climas quentes pode causar resultados falso positivos; -Velocidade e tempo de agitao diferentes ao preconizado alteram a reatividade; -Relao amostra/suspenso antignica diferente da preconizada altera a reatividade; -Suspenso antignica danificada pela passagem forada pela agulha ou que tenha tido contato com borracha ocasiona decrscimo da reatividade; - O tempo de homogeneizao da mistura amostra-antgeno de 4 minutos tem de ser observado

rigorosamente, sob risco do resultado no corresponder realidade. Resultados Evitar liberar resultados usando a terminologia positivo , negativo ou ainda expressar o mesmo em cruzes. Positivos Reportar como Amostra analisada reagente at o ttulo (Indicar o ttulo); Negativos Reportar como Amostra analisada no reagente. Espera-se que a amostra apresente-se no reagente. Interpretaes -A prova do VDRL BRS reagente indica infeco passada ou presente por um treponema, erro laboratorial ou interferncia por outras patologias; - Amostras VDRL BRS no reagentes e no reagentes ao FTA-ABS indicam inexistncia de infeco sifiltica presente ou passada; - Amostras VDRL BRS reagentes e FTA-ABS no reagentes indicam cicatriz sorolgica (infeco passada tratada) ou reao inespecfica (como ocorre com o soro de algumas gestantes); - Amostras VDRL BRS no reagentes no descartam a hiptese de doena em incubao; - Aumentos de 4 vezes no ttulo de VDRL BRS indicam progresso da doena, e diminuies de 4 vezes no ttulo, indicam regresso (xito na terapia).

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