Escola Secundria de Santa Maria da Feira Curso cientfico-humanstico de cincias e tecnologias Ano lectivo 2010/2011 Biologia

Relatrio n 2 Actividade laboratorial Aula de campo DNA e suas aplicaes

Autores: Jessica Silva e Liliana Jesus Santa Maria da Feira, 3 de Maro de 2011 Professor(a): Alda Lima

No dia 24 de Fevereiro de 2011, pelas 9 horas, deslocamo-nos ao Visionarium de Santa Maria da Feira, onde tivemos uma aula de campo, actividade laboratorial, com o objectivo de analisar procedimentos experimentais de extraco e purificao de ADN, tomar conhecimento das tcnicas de PCR e electroforese e reflectir sobre as implicaes biolgicas e socioticas inerentes utilizao da Engenharia Gentica. Inicialmente, ouvimos uma breve apresentao em multimdia sobre o que iramos efectuar. medida que a apresentao decorria, ns amos realizando o procedimento experimental proposto. No incio da apresentao, caracterizou-se a molcula de ADN, tendo sido referido que ela est presente em todas as clulas do nosso corpo, excepto nas anucleadas, e que se encontra no ncleo de cada uma delas. Referimos ainda que esta molcula tem a forma de dupla hlice e possui cadeias anti-paralelas (5-3/3-5). formada por nucletidos, cada um com uma das seguintes quatro bases azotadas adenina, guanina, citosina e timina -, uma pentose (desoxirribose) e um grupo fosfato. Mencionamos tambm que a sequncia assumida pelas bases azotadas que confere individualidade a cada um dos seres humanos. Para alm disto, informaram-nos de que a colheita de ADN pode ser feita atravs de uma amostra de sangue, cabelo (com raiz), osso, dente, urina, clulas sexuais, saliva, tecido muscular e/ou outros tecidos. Depois desta breve reviso e apresentao de conceitos, iniciamos a realizao da experincia. Uma das nossas colegas de trabalho comeou por retirar algumas clulas do epitlio bucal com uma zaragatoa. Estas clulas foram colocadas numa matriz FTA que permite a sua conservao e a manuteno da sua qualidade por longos perodos de tempo. De seguida, utilizamos um furador para recolher uma amostra das referidas clulas, que foi, posteriormente, colocada num microtubo. Acabamos de realizar, assim, a extraco do ADN. O prximo passo a purificao do mesmo. Para isso, colocam-se dentro do microtubo 100 l de reagente de purificao com uma micropipeta, agita-se a mistura, remove-se o lquido e repete-se o procedimento duas vezes. Seguidamente, realiza-se o mesmo processo, substituindo-se os 100 l de reagente de purificao por 100 l de tampo TE-1. De seguida, procede-se realizao da tcnica de PCR, ou seja,
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reaco de polimerizao em cadeia, sobre a qual nos foi dada uma breve explicao. A tcnica de PCR permite a criao de vrias cpias a partir de um nico fragmento da molcula de ADN. A amplificao de uma poro de ADN torna-se muito importante quando a amostra disponvel para a anlise muito reduzida. Inicialmente, procede-se ao aquecimento da amostra de modo a separar as duas cadeias. De seguida, so fornecidos nucletidos e ADN polimerase, para que se produza uma dupla cadeia a partir da cadeia simples. Estes passos so repetidos o nmero de vezes necessrio at se obter o nmero de cpias necessrio. A ADN polimerase utilizada provm de um organismo termfilo, permitindo assim conciliar as elevadas temperaturas a que decorre a tcnica com a estabilidade da polimerase. Para a realizao da referida tcnica, colocam-se, num microtubo com um grnulo de PCR, constitudo por Taq polimerase, tampo, dNTPs e cloreto de magnsio, 5 l de gua, 10 l de primer 1 e 10 l de primer 2. Depois, com a ajuda de uma pina, retira-se o disco com a amostra de ADN do microtubo em que est contido para o microtubo do referido grnulo. Como o processo de replicao de ADN implicado na tcnica de PCR algo moroso cada 20 a 35 ciclos necessrios decorrem num espao de cerca de 2 horas , no prosseguimos o procedimento experimental com a nossa amostra mas com amostras j preparadas por outros alunos. Nestas amostras, colocaram-se 2 l de loading dye, um corante que vai permitir uma fcil visualizao das pores de ADN aquando da finalizao da electroforese. A electroforese uma tcnica de separao de partculas de acordo com a sua carga elctrica e peso molecular. Permite a separao de fraces de molculas orgnicas, como ADN, atravs da migrao das mesmas num gel durante a aplicao de um potencial elctrico. Assim, fragmentos de ADN obtidos atravs da utilizao da tcnica de PCR, podem ser separados pela aplicao de uma voltagem. No final do processo, as cadeias de ADN estaro prximas ao plo positivo. Molculas de menor peso molecular tero mais facilidade em migrar pelo gel e percorrero uma distncia superior, ficando mais prximas do referido plo.

Este processo, devido sua complexidade e ao tempo necessrio sua realizao, no foi por ns executado. No entanto, conseguimos realizar parte dele, colocando o preparado corado que continha amostras de ADN nos poos formados pelo pente no gel de agarose. Este procedimento exige grande prtica e extrema preciso, pelo que cometemos alguns erros. Para alm disto, pudemos examinar os resultados de anlises de ADN j realizadas, interpretando, numa hipottica situao de crime, qual dos suspeitos seria o autor do mesmo. No final da aula de campo, todos receberam as batas com que realizaram a actividade experimental e um pequeno presente do Visionarium. Em suma, esta actividade experimental foi-nos muito til, na medida em que permitiu que, para alm de conhecimentos tericos, adquirssemos tambm conhecimentos prticos que podero facilitar-nos a aquisio de novas competncias e a aprendizagem da matria que tem vindo a ser leccionada sobre a Engenharia Gentica e que adquirssemos uma nova conscincia crtica que nos alerta para a necessidade de atentar permanentemente nos avanos da tecnocincia, tomando conhecimento das suas vantagens e dos seus riscos.

Anexo A Fotografias