Ecofisiologia y Bioquimica Del Estres de Las Plantas

1
ECOFISIOLOGIA Y BIOQUMICA DEL ESTRS EN

PLANTAS

DR. ADALBERTO BENAVIDES MENDOZA
(EDITOR)

DEPARTAMENTO DE HORTICULTURA
UNIVERSIDAD AUTONOMA AGRARIA ANTONIO NARRO
BUENAVISTA, SALTILLO, COAH. MXICO 25315

MARZO DEL 2002

2

LISTA DE AUTORES Y ADSCRIPCION

DR. ADALBERTO BENAVIDES MENDOZA
1

DR. HOMERO RAMREZ RODRGUEZ
1

DR. VALENTIN ROBLEDO TORRES
1

DR. RATIKANTA MAITI
2

DR. ELADIO CORNEJO OVIEDO
3

M.C. JOSE HERNANDEZ DAVILA
1

M.C. ALBERTO SANDOVAL RANGEL
1

M.C. ROSALINDA MENDOZA VILLAREAL
4

M.C. ELENO SAMANIEGO CRUZ
1

M.C. JOSE G. RAMREZ MEZQUITIC
1

ING. ELYN BACOPULOS TELLEZ
1

Q.F.B. ANTONIO AGUILERA CARBO
5

LIC. LAURA OLIVIA FUENTES LARA
5

1
DEPARTAMENTO DE HORTICULTURA

2
DEPARTAMENTO DE QUMICA Y BIOLOGA
UNIVERSIDAD DE LAS AMERICAS PUEBLA

3
DEPARTAMENTO FORESTAL

4
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS

5
DEPARTAMENTO DE NUTRICION Y ALIMENTOS

3

INDICE DE CONTENIDO
Pgina
1. NTRODUCCON. ................................................................................... 6
2. EL CONCEPTO DE ESTRES. ................................................................ 6
Dr. Adalberto Benavides Mendoza

3. FACTORES AMBENTALES QUE ORGNAN ESTRES EN LAS PLANTAS.
................................................................................................ 7
3.1. Dficit hdrico. ............................................................................ 7
Dr. Eladio Cornejo Oviedo

3.2. Alta y baja temperatura. ............................................................. 10
M.C. Jos Hernndez Dvila

3.3. Alta o baja irradiancia y radiacin UV. ....................................... 17

3.3.2. Fitocromos y Respuestas de las Plantas a la Luz ....... 196
Eleno Samaniego Cruz, Adalberto Benavides Mendoza
Ratikanta Maiti, Jos G. Ramrez Mezquitic

3.3.3. Fotoregulacin del Crecimiento y la Forma de las Plantas en Ambientes
Terrestres ............................................................. 210
Adalberto Benavides Mendoza, Ratikanta Maiti
Elyn Bacpulos Tellez

3.4. Salinidad. ................................................................................... 17
Dr. Ratikanta Maiti
Dr. Adalberto Benavides

3.5. Dficit de nutrientes minerales y toxicidad por metales pesados. 21

3.5.1. Factores nvolucrados en la Absorcin y Asimilacin de Hierro
en Plantas .................................................................... 30

4. EL ESTRES DESDE EL PUNTO DE VSTA FSOLOGCO. ................. 41

4.1. ABA, etileno y otros reguladores. .............................................. 41
Dr. Homero Ramrez Rodrguez

4.2. Cambios en el aparato fotoqumico de los cloroplastos. ........... 45

4.3. Respuestas estomticas. .......................................................... 46

4

4.4. Asimilacin de CO
2
y fotorespiracin. ....................................... 50
Dr. Ratikanta Maiti

5. EL ESTRES DESDE EL PUNTO DE VSTA BOQUMCO ................... 51

5.1. Estrs por factores abiticos. ..................................................... 52

5.1.1. Acumulacin de metabolitos nitrogenados. ................. 52
5.1.2. Sntesis inducida de polioles. ....................................... 55
5.1.3. Absorcin de iones y compartimentalizacin de los mismos.
...................................................................................... 59
5.1.4. Cambios en la permeabilidad del agua. ....................... 59
5.1.5. Sealizacin del estrs. ................................................ 61

5.2. Estrs por factores biticos. ....................................................... 73

5.2.1. Genes de resistencia. ................................................... 73

5.2.2. Resistencia sistmica adquirida (SAR) y resistencia sistmica inducida
(RS). ........................................................................ 73

5.2.3. El choque oxidativo. ...................................................... 77

6. ESTRES OXDATVO. .............................................................................. 87

6.1. Qumica del estrs oxidativo. ...................................................... 89

6.1.1. Reacciones de las especies reactivas de oxgeno en sistemas biolgicos.
............................................................................... 91
6.1.2. Sitios de produccin de oxgeno activado en las clulas. 94
6.1.3. Mecanismos celulares de defensa contra el oxgeno activado.
...................................................................................... 99

6.2. Plantas transgnicas con mayor resistencia al estrs oxidativo. ....... 110

6.3. Bases genticas de la resistencia al estrs oxidativo. ....................... 111
Dr. Valentn Robledo Torres

6.4. Aumento fenotpico en la resistencia al estrs oxidativo. .................. 116

6.4.1. Algunos resultados acerca de la aplicacin exogena de oxidantes,
antioxidantes e inductores de resistencia en especies hortcolas .. 116

5

6.4.2. Un enfoque prctico comercial para lograr el aumento fenotpico en la
resistencia al estrs oxidativo y otros tipos de estrs ................ 124
M.C. Alberto Sandoval Rangel
Dr. Adam Kamara Keita

6.5. Uso de sealizadores del estrs oxidativo. ........................................ 137

6.5.1. Literatura referente al uso de sealizadores del estrs oxidativo.
..............................................................................................137

6.5.2. El cido saliclico es un agente sealizador y promotor de
resistencia bitica y abitica en las plantas. .......................138

6.5.3. Estrs oxidativo en plantas. ................................................ 149
Traduccin de un artculo de D. nz y M. Van Montagu

7. Efectos del estrs sobre la morfologa, anatoma y composicin de las plantas.
....................................................................................................... 157

7.1. Adaptaciones morfolgicas y anatmicas que aumentan la tolerancia al estrs.
....................................................................................................... 157

7.2. Cambios en la composicin qumica y en el valor nutritivo de las plantas bajo
estrs. ............................................................................................ 159
M.C. Rosalinda Mendoza Villareal
M.C. Antonio Francisco Aguilera Carbo
Lic. Laura Olivia Fuentes Lara

8. Literatura citada. ............................................................................................. 176

9. Prcticas de laboratorio. ............................................................................... 193
M.C. Rosalinda Mendoza Villareal

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1. INTRODUCCIN
El estrs ambiental es una fuerte restriccin para el aumento de la productividad y de la
extensin de los cultivos. Se estima que nicamente un 10% de la superficie de tierra arable se
encuentra libre de estrs. Cerca del 20% de la tierra presenta algn tipo de deficiencia o
toxicidad mineral, 26% es afectada por estrs de sequa y 15% por congelacin (Blum, 1988).
ncluso bajo condiciones de produccin protegida como invernaderos y tneles se presentan
eventos de estrs bitico o abitico que disminuyen la productividad y calidad de los cultivos.
Los intentos para disminuir un estrs, o para mejorar la resistencia o la adaptacin de las
plantas a dicho estrs, tendrn mayor alcance si se entiende el trasfondo fisiolgico y
bioqumico sobre el cual transcurren las respuestas de las plantas. Con ello es posible
desarrollar estrategias de manejo razonables para disminuir las prdidas debidas a las distintas
clases de estrs.
En los ltimos aos se ha presentado un crecimiento enorme en la cantidad de
publicaciones cientficas y tecnolgicas referentes al rea de estrs ambiental en las plantas.
Responsable en parte de ello es el enorme abanico de tcnicas, enfoques experimentales y
nuevos conocimientos con que se cuenta de 1980 a la fecha. Las nuevas tecnologas de la
biologa como la clonacin, el mapeo de genes, el uso de mutantes, gentica reversa y
sobreexpresin gnica as como la aplicacin cada vez mayor de la informtica y de equipos
sofisticados altamente automatizados como los de generacin de imgenes, resonancia
magntica y HPLC entre otros han permitido aumentar grandemente la comprensin de los
fenmenos relacionados con el estrs en las plantas.
El presente escrito pretende ser un resumen actualizado de los avances ocurridos en los
ltimos aos en relacin con las respuestas, adaptacin y resistencia de las plantas frente al
estrs. La obra est diseada para ofrecer un panorama amplio, sirviendo como fuente de
consulta bsica y de referencias sobre el tema. Los lectores se espera sean los estudiantes que
realizan estudios de maestra o doctorado en el rea agrcola en la Universidad, los productores
interesados en aumentar su conocimiento sobre el estrs en las plantas as como los colegas
profesores e investigadores de esta u otras instituciones.

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2. EL CONCEPTO DE ESTRS

Dr. AdaIberto Benavides Mendoza
Profesor Investigador deI Departamento de HorticuItura, UAAAN

Se ha definido el estrs como una desviacin significativa de las condiciones ptimas
para la vida. Como respuesta a dicha desviacin se inducen cambios en todos los niveles
funcionales del organismo, pudiendo ser dichos cambios reversibles o permanentes. An si la
condicin de estrs es temporal, es normal que la vitalidad de la planta se vea disminuida
entretanto se realizan los ajustes requeridos para la nueva situacin. Si el estrs es demasiado
intenso o si el perodo de accin es demasiado largo entonces los daos latentes se
transforman en dao irreversible que puede afectar a la planta entera o partes de la misma.
El significado literal de la palabra "estrs es restriccin (lt. stringere) o fuerza que
empuja deformando un cuerpo. Para los fsicos el estrs es la tensin interna de un material o
estructura frente a una fuerza externa que potencialmente puede causar extensin o
compresin. En el rea biolgica el trmino estrs ha adquirido una connotacin ms amplia,

7

refirindose tanto a los estmulos ambientales que se apartan de los rangos ptimos como al
estado fisiolgico que se observa en el organismo como consecuencia de los estmulos
ambientales negativos (Larcher, 1995). Sin embargo, el uso correcto del trmino debe
circunscribirse a la descripcin del estado del organismo. Partiendo de lo anterior, la definicin
de estrs que se utilizar en este escrito es: "conjunto de respuestas bioqumicas o fisiolgicas
que definen un estado particular del organismo diferente al observado bajo un rango de
condiciones ptimas. Asimismo, se aplicar el trmino resistencia aI estrs para definir "la
capacidad de un organismo para evitar los estmulos ambientales negativos o para permanecer
bajo un estado particular de estrs sin que su fenotipo se vea modificado de manera
significativa. En la definicin anterior se considera que existe un estado fenotpico ideal,
observado bajo condicin ptima, al cual se le llama "norma.
De la definicin anterior surge de manera lgica el criterio para reconocer el estrs. La
norma para una caracterstica especfica, como el contenido de hierro en los tejidos foliares,
debe marcar un rango de valores fuera de los cuales el funcionamiento de ciertos procesos
vitales se ver disminuido. Con base en la experiencia somos capaces de distinguir
rpidamente diversos estados de estrs considerando manifestaciones fenotpicas visuales
como deformaciones, amarillamientos, manchados, necrosis, etc. Otras manifestaciones
fenotpicas son menos obvias y requieren de equipo especializado para detectarlas, ejemplo de
ello es la disminucin en la actividad de asimilacin de CO
2
, la induccin de la transcripcin de
ciertos genes, cambios en la composicin qumica de ciertas estructuras, etc.

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3. FACTORES AMBIENTALES QUE ORIGINAN ESTRS
EN LAS PLANTAS

Son mltiples los factores ambientales que inducen estados de estrs en las plantas. El
estrs ambiental es el principal factor que evita ampliar los rangos de cultivo de ciertas especies
as como aumentar los rendimientos y calidad de las cosechas. El control del estrs ambiental
es asimismo, en conjunto con las plagas y enfermedades, el principal objetivo de los modernos
sistemas de produccin tecnificada. En este captulo sern revisados los diferentes tipos de
estrs, su manifestacin fisicoqumica en el ambiente externo a la planta y las consecuencias
del mismo sobre la productividad y calidad de los cultivos.

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3.1. DFICIT HDRICO

Dr. EIadio Cornejo Oviedo
Profesor Investigador deI Departamento ForestaI, UAAAN

Es probable que el estrs asociado con el dficit hdrico sea uno de los ms comunes entre las
plantas cultivadas y de comunidades naturales. Posiblemente solo se vea rebasado,
considerando solo a las plantas cultivadas, por el estrs inducido por salinidad y por el estrs
que se presenta por la combinacin de alta irradiancia y baja concentracin de CO
2
.

8

3.1.3. Dficit Hdrico como Factor Inductor de Estrs
La prdida de agua por un dosel vegetal es un proceso inevitable considerando que las
plantas utilizan la transpiracin como mecanismo de enfriamiento. Por otra parte, la asimilacin
de CO
2
a travs de los estomas da lugar a la prdida de vapor de agua, por lo tanto, para
mantener un adecuado ritmo de crecimiento las plantas normalmente pierden gran cantidad de
agua con respecto al peso ganado de CO
2
. Como ejemplo, una planta C3 pierde un kilogramo
de agua por cada 1-3 g de CO
2
fijados, una planta C4 gana de 2 a 5 g de CO
2
por kg de agua
transpirada, mientras que una planta CAM es capaz de fijar de 10 a 40 g de CO
2
por kg de agua
transpirada. Para un comparativo ms extenso de las diferencias entre plantas C3, C4 y CAM,
desde el punto de vista de la eficiencia del uso del agua vease el texto en la web de Benavides
(http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Runway/8787/c3c4doc.htm).
El dficit hdrico y la sequa limitan la productividad vegetal de nuestro planeta ms que
cualquier otro factor ambiental y generalmente la tasa de crecimiento de una comunidad vegetal
o un cultivo son proporcionales a la disponibilidad de agua (Boyer, 1982). A causa de su papel
esencial en el metabolismo vegetal, el dficit de agua afecta rpidamente procesos que van
desde la fotosntesis hasta la respiracin. El agua es un agente qumico que imparte estructura
y orden a las molculas biolgicas as como a las interacciones entre ellas (importancia
biofsica), adems de utilizarse como fuente de los pares electrn-protn indispensables para el
mantenimiento del proceso fotosinttico (importancia bioqumica). El bajo aporte de agua causa
deshidratacin que se asocia con degradacin de las membranas celulares y de los organelos,
desnaturalizacin de las protenas, una disminucin crtica en la sntesis de protenas e incluso
modificaciones en el DNA que originan mutaciones (Pugnaire et al., 1994; Hsaio et al., 1976).
Dentro de los procesos biofsicos ms efectados por la carencia de agua se encuentran la
expansin celular y el crecimiento. A su vez estos desrdenes biofsicos afectan a otros
procesos fisiolgicos (Figura 3.1).

Las plantas han desarrollado muchas estrategias para tolerar el dficit hdrico. Pugnaire et al.
(1994) hacen un resumen de las mismas como sigue:
(1). Respuestas fisiolgicas o de modulacin, que se caracterizan por manifestarse
como una modificacin rpidamente reversible y con accin en el corto plazo (ejemplo:
cierre estomtico).
(2). Respuestas de aclimatacin, que involucran cambios no rpidamente reversibles o
incluso irreversibles y con accin en el mediano plazo (ejemplo: ajustes osmticos
derivados de la acumulacin de solutos, cambios es la elasticidad de la pared celular y
algunos cambios morfolgicos.
(3). Adaptaciones, esto es, estrategias a largo plazo que incluyen patrones fijos
(genticamente dependientes) de reparto de biomasa, modificaciones anatmicas que
se heredan entre generaciones, mecanismos fisiolgicos complejos como el
metabolismo CAM, crecimiento reducido para optimizar el uso del agua y la captura de
energa, etc.

Las plantas presentan dos principales mecanismos de respuesta frente al dficit hdrico: la
evitacin o escape y la tolerancia (Kramer, 1988). La evitacin del estrs incluye el uso de ciclos
de crecimiento muy rpidos o madurez temprana, permitiendo el aprovechar los rpidos
perodos de disponibilidad de agua y evitando los perodos de sequa, ya que normalmente
estas plantas carecen de verdaderos mecanismos para tolerar la deficiencia de agua. Por su
parte la tolerancia al dficit hdrico incluye todas las estrategias que permiten el crecimiento y/o
la supervivencia durante un evento de sequa ms o menos largo. Entre las plantas tolerantes
se encuentran aquellas que evitan la deshidratacin utilizando mecanismos morfofisiolgicos
complejos como: hojas pequeas y cerosas, estructuras que facilitan la colecta del roco,
distribucin radical muy superficial para la captura del agua del roco o bien races muy

9

profundas (plantas freatofticas), modificaciones en la arquitectura del dosel, cambios
anatmicos en la epidermis como el tamao y nmero de estomas, ubicacin de los estomas en
cavidades, cutculas gruesas y cerosas en combinacin con tejidos suculentos, metabolismo
CAM, etc. (Witowski y Lamont, 1991; Tilman, 1988). Las plantas cultivadas con mayor tolerancia
y la mayora de las plantas nativas de zonas desrticas caen en esta categora de tolerantes
evitadoras de la deshidratacin. Estas plantas no logran tolerar potenciales de agua menores a
4.0 Mpa.

Figura 3.1. Sensibilidad relativa de diferentes procesos en la planta frente al dficit hdrico
(modificado de Hsaio et al., 1976).

Las plantas que verdaderamente soportan la deshidratacin son raras, esats especies
son capaces de soportar potenciales de agua desde 1.2 hasta 10 Mpa o incluso menos. Un
ejemplo de planta tolerante a la deshidratacin es el helecho epiftico Polipodium spp. llamado
helecho de la resurreccin, estas plantas toleran potenciales hdricos de varios cientos de Mpa,
siendo capaces de continuar normalmente su crecimiento al encontrarse en un ambiente
hmedo. Esta habilidad extrema hace a estas plantas sujetos interesantes para el estudio de
los mecanismos de tolerancia al estrs. Bewley y Krochko (1982) revisaron la literatura acerca
de este poco entendido fenmeno.

10

3.1.3. Literatura Referente a Dficit Hdrico
Este material se tiene a disposicin de los estudiantes para su lectura e imparticin de
seminarios.

1. Frensch, J. 1997. Primary responses of root and leaf elongation to water deficits in the
atmosphere and soil solution. J. Exp. Bot. 48:985-999.
2. Kjellbom, P., C. Larsson, . Johansson, M. Karlsson, U. Johanson. 1999. Aquaporins and
water homeostasis in plants. Trends Plant Sci. 4:308-314.
3. Serraj, R., T.R. Sinclair, L.C. Purcell. 1999. Symbiotic N
2
fixation response to drought. J. Exp.
Bot. 50:143-155.

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3.2. AIta y Baja Temperatura

M.C. Jos Hernndez DviIa

3.2.1. Introduccin
Hay diversos factores ambientales que afectan la fisiologa de los vegetales y la
temperatura es uno de los mas importantes. Por ello, desde tiempos remotos los investigadores
han dedicado gran parte de su esfuerzo en estudiar y comprender los efectos de la temperatura
en los procesos vitales de las plantas. Las plantas son organismos poiquilotmicos, es decir
cuya temperatura depende de la del ambiente, que responden en forma completamente
diferente cuando se encuentran expuestos a cambios en la temperatura. En procesos como la
divisin celular, actividad fisiolgica que se desarrolla entre los 5 y 30 C, la temperatura tienen
una influencia directa; adems, es determinante en procesos como fotosntesis, respiracin, y
acumulacin de azcares y almidones. Tambin, esta relacionada con la germinacin de las
semillas, la absorcin y utilizacin de los nutrientes, la transpiracin, la floracin y en general
con todo el metabolismo de la planta.
En base a la temperatura, se han propuesto algunas metodologas como el Sistema de
Unidades de Calor que postula, que el crecimiento y el desarrollo de un cultivo depende de la
cantidad de unidades calor que la planta recibe y que esta cantidad es determinante para
alcanzar la madurez, independientemente del tiempo requerido para ello. Este sistema se ha
aplicado con xito en la produccin hortcola ya que constituye la base para la programacin de
prcticas agronmicas especficas en funcin de la etapa fenolgico, en el manejo integrado de
plagas y para predecir la poca de cosecha (Galvn, 1994).
Por otra parte, las temperaturas extremas son importantes en la produccin comercial de
cultivos. As, temperaturas bajas pueden daar a la planta por fro o por congelamiento y las
temperaturas altas pueden ocasionar un choque de calor. Los resultados pueden ser tan
dainos que la planta muere. En el dao por fro, se incrementa el rompimiento de protenas y
enzimas y la permeabilidad de la membrana (se pierde la semipermeabilidad de la membrana y
frecuentemente aparece un verde ms intenso y anegamiento ligero en agua). En el dao por
congelacin se presenta un dao celular directo. Cuando el congelamiento es rpido se forma
hielo en el citoplasma y hay ruptura celular. Cuando el congelamiento es lento se forma hielo en
la pared celular y el citoplasma se deshidrata. Tambin, se presenta desecacin, daos a la
corteza, rompimiento fsico y quemaduras de sol. Cuando se presentan altas temperaturas la
planta es daada rpidamente por desnaturalizacin de las protenas o lentamente por

11

desecacin, quemadura por el sol (por abrasin) y la tasa respiratoria es mayor que la tasa
fotosinttica con lo cual se agotan las subsistencias de reserva (Reed, 1990).

3.2.2. Concepto de Temperatura
La temperatura es una expresin que indica el promedio de energa cintica de las
molculas de un cuerpo, siempre en referencia a un estndar. La escala Celsius e temperatura,
por ejemplo, marca como estndares el punto de congelacin y el punto de ebullicin del agua
pura al nivel del mar. En cambio, el calor es una medida cuantitativa de la cantidad de energa
trmica que se mueve de un cuerpo a otro y se puede expresa en unidades de caloras,
kilocaloras o unidades trmicas britnicos (BTU) (Gordon y Barden, 1979).

3.2.3. Efectos de Ia Temperatura en Ias PIantas

3.2.3.1. Germinacin. Temperaturas de enfriamiento (2.5C) reducen significativamente la
imbibicin de semillas de pepino despus de 20 horas de exposicin al fro. As, el peso fresco
de las semillas de pepino despus de 76 horas de exposicin a 2.5 y 25C fue 35 y 85 mg,
respectivamente. La imbibicin de las semillas de pepino parece ser completa a las 12-16 horas
a 25C y a las 24 26 horas a 2.5C. estas semillas pueden estar en imbibicin por 6 das y
conservar su poder germinativo normal. En cambio, las semillas de algodn mueren al ser
hidratados a 5C. Al germinar las semillas de pepino en el rango de temperaturas de 15 a 30C,
el tiempo para alcanzar el 80% de germinacin disminuye con el incremento de temperatura.
Algo similar ocurre con la tasa promedio de germinacin.
Las semillas de pepino (Poinsett 76) germinadas a 25C y puestos a condiciones de
enfriamiento a 2.5 C por diferente tiempo, pierden la capacidad de crecimiento de las races a
medida que se incrementa el tiempo de exposicin al fro. Tambin, hay reportes de que la
mayora de las especies no sensibles durante la imbibicin de las semillas se vuelven sensibles
al fro durante la emisin de la radcula. El dao es irreversible al exponer la radcula a 2.5C
por 96 a 120 horas. Respuestas similares se han encontrado en semillas de meln germinando
bajo condiciones de enfriamiento y describen un punto hundido cerca del pice de la radcula y
tejido colapsado en esta rea. En cuanto a la sensibilidad al fro, se encontr que semillas con
mayor tiempo de germinacin (radcula ms grande) fueron ms sensibles al dao por fro.
Esto, tanto en pepino como en chile y el efecto se traduce en menor emergencia de las plantas.
Tambin se ha encontrado que en la misma especie los cultivares tienen diferente sensibilidad
de enfriamiento. Por otra parte, semillas de cilantro germinando a diferentes temperaturas
mostraron inhibicin de la germinacin a temperaruras de enfriamiento (5C) y ha temperaturas
altas (30C) se reduce la germinacin significativamente lo cual se ha interpretado como un
dao por choque de trmico.

3.2.3.2. Fotosntesis. En un estudio con rambutan (Nephelium lappaceum), frutal tropical de la
misma familia que el litchi, se determin que la asimilacin de CO
2
disminuye por efecto de la
temperatura baja, igual que lo hace el crecimiento. Las temperaturas altas (32 C) incrementan
el crecimiento vegetatitvo. En trminos absolutos de la temperatura nocturna (28C) tiene un
efecto mayor en el crecimiento que la temperatura diurna (32C); en cambio, la duracin del
crecimiento fue ms sensible a las temperaturas diurnas. En trminos de elongacin del tallo,
produccin de nudos y hojas y rea foliar, la temperatura nocturna tubo mayor efecto,
incrementando estas caractersticas. En general, esto se transmite a una mayor produccin de
materia seca. La tasa promedio de asimilacin neta de CO
2
fue de 5.3 mol.m
-2
.s
-1
a 32/22 C
(da/noche), 50% ms baja a 32/14 C y 80% ms baja a 22/14 C probablemente, esta
respuesta esta relacionada con un tamao menor de rea foliar y por tanto menor capacidad
fotosinttica. Estas respuestas deben ser consideradas al pensar en explotar comercialmente el

12

rambutan en habitats donde se presentan periodos prolongados de temperaturas nocturnas
bajas.
En litchi, Menzel y Paxton (1985) estudiaron los efectos de la temperatura en el
crecimiento y produccin de materia seca. Despus de seis semanas de tratamiento el mejor
crecimiento del tallo ocurri a 30/25C (da/noche) y fue reducido en un 60 y 70% a
temperaturas de 20/15 C y 15/10 C, respectivamente.
Freyer et al. (1998) despus de realizar un trabajo con maz sometido a periodos de
bajas temperaturas, concluyeron que la relacin entre el transporte fotosinttico de electrones
en el fotosistema y la asimilacin de CO
2
fue considerablemente elevada, lo cual indica la
operacin de una demanda alternativa de CO
2
por equivalentes reductores fotosintticos. El
incremento en los niveles de O
2
activo y la depuracin de enzimas escenciales, as como el
incremento en los niveles de los antioxidantes ascorbato y - tocoferol en hojas enfriadas de
maz sugiere que el O
2
va la reaccin de Meheler es un candidato para ser el aceptor
alternativo de electrones. Adems, tambin observaron que la actividad de la lipoxigenasa y la
peroxidacin de lpidos se incremento durante el tratamiento con temperaturas bajas, sugiriendo
que la lipoxgenosa interviene en la peroxidacin de los lpidos de membra constribuyendo a los
daos oxidativos que ocurren en hojas estresadas por fro.
En un estudio con algodn y trigo, Feller et al, (1998) se basaron en que temperaturas
moderadamente altas inhiben la fijacin fotosinttica del CO
2
hecho que esta bien documentado
en la literatura. Pero, no creian que la explicacin estubiera solo en l ainhibicin a la luz de la
actividad de la Rubisco y probaron que esta inhibicin esta mediada por cambios estructurales
que ocurren en la enzima Rubisco-activasa, mecanismo bioqumico para la actividad de la
Rubisco. As, en tejidos foliares expuestos a la luz la actividad del Rubisco fue inhibida por las
temperaturas de 35 y 30 C en algodn y trigo, respectivamente. Esta inhibicin, fue totalmente,
reversible a temperaturas inferiores a 40C. En cambio, a temperaturas de 45C la actividad de
la Rubisco no fue afectada. Tambin reportaron que el transporte de electrones, medido como
fluorescencia de la clorofila, parece ser ms estable a temperaturas moderadamente elevadas
que la actividad de la Rubisco. Las diferencias en la sensibilidad trmica del trigo comparado
con el algodn pueden deberse a diferencias genticas en la estructura primaria de la activasa
o en la expresin de las diferentes forams polipptidas de la activasa. En general, idnican que la
inhibicin de la enzima Rubisco-activasa puede ser un proceso regulatorio clave en plantas
estresadas por altas temperaturas.

3.2.3.3. Brotacin y Enraizamiento. La brotacin es el mayor factor limitante en la vida de
almacenamiento de bulbos de cebolla. El enraizamiento de los bulbos plantados en sustrato
hmedo tambin es inhibido durante la latencia del bulbo. Por ello, bulbos latentes de cebolla
fueron sometidos a diferentes temperaturas para inducir brotacin y enraizamiento. La
temperatura ptima de brotacin en bulbos almacenados en seco vari de 10 a 25 C y fue
dependiente del cultivar; para enraizamiento en vermiculita hmeda la temperatura ptima fue
de 10 a 15 C; en cambio, en bulbos no latentes la temperatura ptima para inducir formacin
de raices y elongacin de los brotes fue de 25 C, el tratamiento a 35C por tres semanas
despus de la cosecha acorto el tiempo a enraizamiento y brotacin cuando los bulbos fueron
sometidos a 15 C pero una exposicin continua a temperaturas arriba de 25 C inhibe
fuertemente ambos procesos, probablemente, porque el almacenamiento a altas temperaturas
resulta en periodos debido a la respiracin, desecacin y pudricin de los bulbos. La
temperatura ptima de almacenamiento de los bulbos es de 0 C

pero esto requiere
refrigeracin; sin embargo, los bulbos, normalmente, son almacenados en cuartos de ambiente
fro. Este tipo de almacenamiento se combina con el tratamiento de hidracida maleica como
inhibidor de la brotacin y supresor de la elongacin de los brotes. La inhibicin de la brotacin
a altas temperaturas parece ser causada por los bajos niveles de citocimina endgena ya que
en bulbos de cebolla expuestos a temperaturas de 5 y 15C se observ un incremento

13

repentino en los niveles de citocinina despus de seis semanas de tratamiento con el
incremento subsecuente de la brotacin. En cambio los bulbos a 30C los niveles de citocinina
se incrementaron muy poco durante el mismo periodo de almacenamiento y los bulbos no
brotaron. Adems, bulbos de cebolla con peso promedio de 135 g fueron inyectados con
benciladenina, ethephon y cido giberlico y se colocaron a 25C para su brotacin. Los
resultados muestran un incremento general en la brotacin pero sobre todo, en los tratamientos
con la citocinina benciladenina. Lo cual sugiere un control hormonal en la brotacin en bulbos
latentes de cebolla.

3.2.3.4. Produccin de Compuestos VoItiIes. Los tejidos vegetales producen hidrocarburos
voltiles cuya emisin, frecuentemente , se incrementa despus de su exposicin a estrs
ambiental. Por ello, la produccn de gases de estrs ha sido estudiada en discos foliares de
chile y maz estresados por temperaturas altas (Anderson , 1994). Entre los resultados, se
observ que el patrn de produccin de metanol es muy similar al patrn de prdida de
electrolitos en chile, pero en maz el metanol se incremento a ms bajas temperaturas que la
prdida de electrolitos. Los gases de estrs diferentes al metanol tienen un pico de produccin
a cierta temperatura por arriba de la cual, disminuye la cantidad producida. Esto, puede reflejar
inestabilidad trmica de las enzimas involucradas en su produccin. Tambin, observ que la
produccin de etileno y etano fue menor en maz que en chile aunque no parece tener relacin
con los tratamientos de tempertura ( de 24 C a 70 C); en cambio, la mayor produccin de
etanol y acetaldehido fue obtenida a 50 y 55 C en chile donde, los discos foliares de maz
producen ms etanol y acetaldehido que el chile, pero menos metanol.

3.2.3.5. FIoracin. Esta bien documentado que la temperatura tiene un efecto considerable en
la floracin del chile. Bajo temperaturas nocturnas altas las flores son pequeas, mientras que a
bajas temperaturas de 28/23 a 18/15 C. Sin embargo, poco se sabe acerca del efecto de las
bajas temperaturas en el funcionamiento del estilo y el estigma. Por ello, Pressman et al. (1998)
realizaron un trabajo en donde examinaron los efectos de las temperaturas nocturnas en los
rganos femenino y masculino de la flor. Sus resultados coinciden en que a temperaturas bajas
el ovario es grande y la longitud del estilo es reducida al pasar las temperaturas nocturnas de
20 a 12 o 10C. Adems, el nmero de granos de polen viable y su poder germinativo in vitro
fue reducido significativamente al reducir las temperaturas nocturnas. Pasaron de 3.5 x 10
5

granos de polen con 40 % de germinacin a 20 C, a menos de 5000 granos de polen con solo
5% de germinacin a 10C. La receptividad del estigma y la habilidad del estilo para facilitar el
crecimiento del tubo polnico tambin fue afectada al disminuir cuando las temperaturas
nocturnas pasaron de 20 a 12 o 10C. La afectacin del rgano femenino y masculino,
probablemente se debe a la alteracin de la composicin qumica de los fludos o a la
disminucin en la cantidad de los mismos, tanto los exudados por el estigma como por la matriz
secretora del estilo.
En este mismo sentido, Lozano et al. (1998) estudiaron las anormalidades de la flor de
tomate inducidas por las bajas temperaturas y su asociacin con los cambios en la expresin
de los genes de la caja MADS. Las anormalidades de la flor promovidas por las bajas
temperaturas se pueden agrupar en tres categoras: cambios en el nmero de organos
(cambios mersticos), cambios en el patrn de fusin de los rganos y cambios en la identidad
del rgano (cambios hometicos). Los cambios mersticos afectan los verticilos reproductivos de
la flor, donde, la flor creciendo en temperaturas bajas muestra estambres adicionales (2 o ms
en promedio) comparada con el nmero de estambres (seis) en la flor creciendo a temperatura
estandar o normal. Mientras que, el nmero de carpelos se incremento al menos al doble. El
incremento en el nmero de rganos se debe a un incremento en el tamao del meristemo floral
o a la division del primordio del rgano floral despus de su iniciacin. As mismo, el incremento

14

en el tamao del meristemo floral producido por las temperaturas bajas esta relacionado al
mayor nmero de clulas ms que a un incremento en el tamao de la clula.
Las temperaturas bajas tambien generan alteraciones en el patron de fusion de los
organos reproductivos y son diferentes a las flores normales donde los estambres aparecen
antogenicamente fusionados a travs de la fusin de los tricomas. Por ejemplo, los estambres
de las flores creciendo en temperaturas bajas no presentaron fusin en ms del 60% y el estilo
present divisin en un 31.8%. Los cambios en el patron de fusin pueden ser consecuencia de
los cambios mersticos. Tambin, se observaron estambres fusionados a los carpelos y
carpelos no fusionados. Cambios hometicos o de indentidad tambien fueron observados
donde, el mayor efecto se tuvo en la formacin de estambres carpeloides con un 17.9%.
Adems, se observaron ptalos estaminoides, spalos petaloides, estambres petaloides,
carpelos estaminoides y estambres reemplazando ptalos.
Los tres tipos de cambio parece ser, estan ligados a la expresin de los genes de la
MADS box. En este trabajo, se analizaron con hibridacin blot los mRNAs de los genes TM4,
TM5, TM6 y TAG1. Todos los genes mostraron un incremento en sus niveles en plantas de
tomate creciendo en temperaturas bajas. Se sugiere relacionar esta expresin con los cambios
en la biosntesis o sensibilidad hormonal en plantas de tomate creciendo bajo las condiciones
citadas.
La induccin floral en rboles tropicales generalmente detiene el crecimiento vegetativo.
Sin embargo, no es fcil identificar los factores ambientales involucrados en la floracin, la cual
ocurre durante la estacin seca cuando las temperaturas son ms bajas. Por ello, Chaikiattiyos
et al. (1994) realizaron un estudio para determinar la induccin floral en frutales tropicales
(aguacate, limn, litchi y mango) por efecto de la temperatura y el suministro de agua. Sus
resultados indican que el crecimeinto vegetativo fue reducido o impedido en los frutales
tropicales por las bajas temperaturas y el estrs hdrico. En cambio, las cuatro especies se
comportan diferencialmente en su respuesta a la floracin. Las bajas temperaturas, pero no el
estrs hdrico, promueven la floracin en aguacate, litchi y mango. En limn, los cambios en
temperatura no influencian la floracin y el estrs hdrico si la afecta. Esto ltimo sugiere que
hay un mecanismo diferente para el control de la floracion en limn. En aguacate, litchi y mango
la floracin ocurri a temperaturas de 15/10 y 20/15 C, 15/10 y 20/15 C y 15/10 C,
respectivamente. En aguacate, el intervalo entre emergencia floral y 50% de antesis fue ms
corto a 20/15 C pero, la cantidad de flores y el peso de la pancula fue ms afectado por las
temperaturas ms altas. En litchi las panculas emergieron ms temprano a 15/10 C pero, con
mayor tiempo para alcanzar la antesis. En mango, la floracin nicamente ocurri a 15/10 C y
en la mayora de las panculas no hubo hojas.

3.2.3.6. TermotoIerancia. Segn Gong (1998), la exposicin de la planta a temperaturas
elevadas resulto en un juego complejo de cambios en la exposicin de los genes que inducen
termotolerancia y mejor la sobrevivencia de la clula al estrs subsecuente. El pretratamiento
de plntulos de tabaco Ca
+2
o

etilenglicol, mejor o disminuy la termotolerancia subsecuente,
respectivamente, comparado con plntulas sin tratamiento. Esto, sugiere un posible papel del
Ca
+2
citoslico en la transduccin de la seal en choque de color. Al usar plntulas transgnicas
de tabaco (transformados con aeguorn, protena luminicente sensible al Ca
+2
) se obrserv que
temperaturas de choque de calor inducen un incremento prolongado pero pasajero en el Ca
+2

citoplsmatico pero no en el Ca
+2
cloroplstico. Un choque de calor nico indica un periodo
refractario en el cual seales de choque de calor adicionales, fallaron en incrementar el Ca
+2

citoslico. Sin embargo, a lo largo de este periodo, las plantulas respondieron a la estimulacin
mecnica o choque de fro con incrementos de Ca
+2
citoslico similares al control sin tratar.
Estas observaciones sugieren que puede haber un pool especfico de Ca
+2
citoslico,
movilizado por el tratamiento con calor o que el periodo refrectario resulta de un bloqueo

15

temporal en la persepcin o transduccin del choque de calor. El uso de inhibradores sugiere
que el choque de calor moviliza el Ca
+2
citoslico tanto de las fuentes intra como extracelulares.
Date et al. (1968) trabajaron con plntulas de mostaza asperjadas con soluciones de
cido saliclico entre 10 y 500 M los cuales mejoraron significativamente su tolerancia al
choque de calor subsecuente a 55 C por 1.5 horas. Los efectos de cido saliclico fueron
dependientes de la concentracin y las concentracines ms altas fallaron en inducir
termotolerancia. El tiempo de termotolerancia inducido por 100 M de cido saliclico, fue
similar al obtenido con plantulas aclimatados a 45 C por 1 hora. Se examin la hiptesis que la
termotolerancia inducida involucra el H
2
O
2
. El choque de calor a 55 C, causo un incremento
significativo en el H
2
O
2
endgeno y redujo la actividad de la catalaza. Se observo un pico en el
contenido de H
2
O
2
dentro de los 5 minutos despues del tratanmiento de cido saliclico asi
como las plantas aclimatadas a 45 C. Entre dos y tres horas despues de ambos tratamientos
tanto el H
2
O
2
como la actividad de la catalaza disminuyeron significativamente por debajo de
los niveles del control. El ms bajo contenido de H
2
O
2
y la ms baja actividad de la catalaza
ocurri en el priodo de mxima termoproteccin. Esto sugiere, que la termproteccin obtenida
tanto por la aspersin con cido saliclico como por la aclimatacin al calor puede ser alcanzada
por una seal comn de transduccin por la va de involucrar un incremento temprano de H
2
O
2
.
En el olivo, en los ltimos aos se han desarrollado nuevas tcnicas para identificar y
clasificar el dao por helados (Roselli et al., 1992). Estas tcnicas se basan en la densidad
estomtica, en el engrosamiento del tejido foliar, en el escape de fenoles y en el escape inico.
De estas tcnicas, se ha encontrado que el escape inico es ms verstil y tiene mayor
sensibilidad para estudios de aclimatacin. Por ello, La Porta et al. (1994) usaron el escape
inico para evaluar el endurecimiento al fro de algunos clones de olivo. El rbol de olivo, una
especie subtropical, cuando crece en los lmites de su rango climtico puede, algunas veces,
sufrir dao cuando las temperaturas llegan a -6 o 7 C, as sea por unas horas. Por tanto, es
importante identificar clones de olivo resistentes a las bajas temperaturas. As, La Porta et al.
(1994) reportaron que algunos clones de olivo del cv. Leccino, uno de los cultivares ms
tolerantes al fro, fueron comparados con un clon de olivo cv. Moraiolo, que se sabe es
altamente tolerante al fro, por su capacidad para adquirir endurecimiento al fro en funcin del
escape de los iones. Encontraron que el clon 3 del cv. Leccino fue significativamente diferente
en su tolerancia al fro a 15 y 20C. El escape inico fue capaz de detectar daos en los
tejidos. Por otra parte, Gatschet et al. (1994) estudiaron la aclimatacin al fro del pasto
bermuda y encontraron alteraciones en la sntesis de protenas por las coronas de la planta.
La fotosntesis neta es uno de los procesos fisiolgicos ms sensibles al calor que
gobierna el crecimiento de las plantas (Fitter and Hay, 1987). Consecuentemente, la adaptacin
fisiolgica de los procesos fotosintticos a altas temperaturas y el mantenimiento de fotosntesis
neta alta en temperaturas supraptimas son, frecuentemente, factores clave en la adaptabilidad
de las plantas a las temperaturas altas. Con estas consideraciones, Ranney (1995) estudio la
tolerancia al calor de las especies y poblaciones seleccionadas de redodendro por su
capacidad para mantener tasas altas de fotosntesis neta. Asi en cuatro taxas de rododendro:
Rhododendron hyperythrum Hayata, R. russatum Balf & Forr. y R. catawbiense (dos
poblaciones una proveniente del Noroeste y otra del Sureste en Carolina del Norte, USA) la
temperatura para mxima fotosntesis neta fue de 25.2, 20.0, 23.5 y 22.5 respectivamente, para
cada taxa. Del mismo modo la mxima fotosntesis neta fue de 15.7, 3.9, 14.1 y 12.6 mol.m
-2
.s
-
1
, respectivamente. La capacidad de mantenimiento de la fotosntesis neta vari
sustancialmente a 40 C, cuyos valores fueron: 7.8, 0.2, 5.7 y 3.5 mol.m
-2
.s
-1
,
respectivamente. Es decir que cada taxa mantuvo una fotosntesis neta relativa de 51, 7, 41 y
27% con respecto al valor obtenido a temperatura ptima. Estas diferencias en fotosntesis
neta en respuesta a la temperatura indican diferencias en temperatura ptima y
termoestabilidad de los procesos fisiolgicos directamente relacionados con la termotolerancia.
Entre las taxas estudiadas, R. hyperythrum mostr la ms grande termotolerancia por mantener

16

su fotosntesis neta ms alta a temperatura de 40 C. En cambio, R. russatum es la menos
tolerante al calor. Las diferencias en la tolerancia al calor de las diferentes taxas, parecen ser el
resultado de limitaciones estomticas y no estomticas en la fotosntesis neta a altas
temperaturas.
Ranney (1994) realiz un estudio similar con abedul, al que llevo acabo con rododendro
y encontr que la taxa River (Betula nigra L. cv. Heritage) fue la que mantuvo la mayor tasa
fotosinttica neta bajo estrs de calor, mientras que la taxa paper (Betula papyrifera Marsh) fue
la que ms redujo su valor de fotosntesis neta. La capacidad de River para mantener la ms
grande fotosntesis neta a altos temperaturas parece ser el resultado de un bajo Q
10
en la
respiracin oscura, y posiblemente a la ms alta termotolerancia de las enzimas del ciclo de
Calvin. Algunos estudios entre ellos el de Maier y Lang (1994) han sido realizados en diferentes
tipos de pastos ornamentales para evaluar su tolerancia al calor. As, el estudio de los
carbohidratos y el contenido de agua en el estoln se han relacionado con la termotolerancia de
los pastos. En su investigacin Maier y Lang (1994) trabajaron con tres estolones de pasto San
Agustn (Raleigh, Floratam y FX-332), sus resultados mostraron que, en funcin del nmero de
nudos sobrevivientes a bajas temperaturas, el estoln Raleigh fue ms termotolerante que los
estolones Floratam y FX332 lo cual, indica variabilidad intraespecfica en el pasto San Agustn.
Sin embargo, tanto el almidn como la sacarosa no estn correlacionadas con la tolerancia al
congelamiento, en cambio, se observ una correlacin negativa en la sobrevivencia del Raleigh
y el contenido hdrico del estoln por lo cual, una reduccin en el contenido hdrico de los
estolones de Raleigh durante los meses de invierno (temperaturas bajas) puede contribuir a la
aclimatacin.

3.2.3.7. Protenas de Choque Trmico. El efecto del estrs ambiental en las plantas de inters
agronmico ha sido motivo importante para la investigacin. La productividad de las plantas
esta relacionada a la habilidad de las mismas para adaptarse y responder al estrs ambiental.
Las protenas producidas por las plantas superiores en respuesta al estrs han sido bien
caracterizadas (Sachs y Ho, 1986). La mayora de las protenas de estrs son chaperoninas,
una clase de protenas involucradas en la estabilizacin y correcto plegamiento de protenas
sintetizadas de novo. Las protenas de choque de calor (HSP, por sus sigles en ingls) como la
HSP70, o sus homolgos ha sido encontrada en la mitocondria, el citoplasma, el retculo
endoplasmtico y los cloroplastos de plantas superiores ( Denecke et al., 1991; Masrshall et al.,
1990; watts et al., 1992). La HSP70 mitocondrial se ha encontrado al sufrir autofosforilacin
estimulada por calcio, sugiriendo su posible regulacin in vivo (Miernyk et al., 1992). Los genes
para la HSP70 mitocondrial son codificados en el ncleo y han sido aislados de Pisum sativum,
Solanum tuberosum y Lycopersicon esculentum (Watts et al., 1992; Neumann et al., 1993).
En este sentido, Lund et al. (1998) identificaron en mitocondrias de maz, los homlogos
moleculares de chaperoninas DnacK (HSP70) y GroEL (cpn60) de la Escherichia coli. Sin
embargo, durante el estrs de calor (42 C por 4 horas) los niveles de estas protenas no
cambiaron significativamente. En cambio, los niveles de dos protenas de 22-KD (HSP22) se
incrementa fuertemente. La mxima expresin de la HSP22 se present en la mitocondria de
plntulas etioladas de maz estresadas con calor por 5 horas. Al ser liberadas las plntulas del
estrs del calor, la protena de HSP22 desaparece despus de 4 horas. Pero, en condiciones
continuas de estrs de calor esta protena permanece con niveles altos. La secuencia de la
protena HSP22 fue comparada con las secuencias de un banco de datos e indic que
pertenece a la superfamilia de pequeas protenas de choque de calor (sHSPs, por sus siglas
en ingls). Por su parte, Chizue et al. (1998) en chcharo, examinaron la estructura nativa
(original) y la fosforilacin de la HSP21 del cloroplasto para entender las propiedades bsicas
de la protena. De acuerdo a sus resultados, proponen que la protena HSP21, nativa y
funcional del cloroplasto, es un complejo oligomrico grande (> 200 kD) que contiene nueve o

17

ms subunidades de la HSP21 y que las sHSPs de la planta no esta regulada por la disociacin
inducida por la fosforilacin, durante el estrs de calor.

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3.3. ALTA O BAJA IRRADIANCIA Y RADIACIN UV


3.3.1. Introduccin
Hace relativamente poco tiempo que fue descubierto el hecho de que las plantas
cuentan con mecanismos de disipacin trmica que les permiten manipular los altos niveles de
irradiancia. Este tipo de estrs originado por exposicin a la alta irradiancia, parece ser el ms
comn entre los que las plantas sufren. En esta seccin se describirn los mecanismos
conocidos por medio de los cuales las plantas se adaptan y toleran la radiacin PAR y UV. En
la parte final se incluyen interesantes monografas de Samaniego et al. (pgina 255)y
Benavides et al. (pgina 268) que describen los puntos relativos a la percepcin de la luz por
los fitocromos y las respuestas fisiolgicas y gnicas desencadenadas, as como la forma en
que las plantas se adaptan desde el punto de vista morfolgico y fisiolgico a los diferentes
ambientes de radiacin.

3.3.4. Literatura Referente a Irradiancia PAR y UV
seminarios.

1. Huner, N.P.A., G. quist, F. Sarhan. 1998. Energy balance and acclimation to light and cold.
Trends Plant Sci. 3:224-230.
2. Jansen, M.A.K., V. Gaba, B.M. Greenberg. 1998. Higher plants and UV-B radiation: balancing
damage, repair and acclimation. Trends Plant Sci. 3:131-135.
3. Reynolds, M.P., M. van Ginkel, J.-M. Ribaut. 2000. Avenues for genetic modification of
radiation use efficiency in wheat. J. Exp. Bot. 51 GMP: 459-473.

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3.4. SALINIDAD

Dr. Ratikanta Maiti
Profesor Investigador deI Departamento de BioIoga y Qumica, UDLAP

3.4.1. INTRODUCCION
Los habitats salinos se definen por la presencia de un contenido anormalmente alto de
sales solubles. Los lagos y estanques salinos as como los ocanos son ambientes acuticos
salinos; en tierra se presentan suelos salinos en regiones ridas y hmedas. En las regiones
hmedas el suelo puede volverse salino al exponerse a los aerosoles marinos (que pueden

18

llegar hasta 100 km tierra adentro), al encontrarse en reas de inundacin por aguas marinas, o
al estar en contacto directo o indirecto con depsitos salinos.
Solamente en el ocano abierto la concentracin de sal permanece constante (en
promedio 480 mM Na
+
y 560 mM Cl
-
). En la zona intermareas la salinidad muestra un rango
amplio ubicado entre 290 y 810 mM Na
+
y en los pantanos salados la concentracin de Na
+

puede incrementarse tanto como 600-1000 mM (Flowers, 1985).
Durante la temporada de crecimiento las sales se acumulan en el dosel de las plantas;
despus de que las hojas mueren y caen al suelo para descomponerse las sales que contenan
son lavadas por la lluvia o los riegos y retornadas al suelo. La salinidad del suelo se ve
incrementada fuertemente en regiones ridas en donde la tasa anual de evaporacin del suelo
supera la cantidad de agua proveniente de las precipitaciones. Otro caso en donde se
acumulan las sales en el suelo ocurre cuando se utiliza riego intensivo en suelos con drenaje
deficiente.
Los suelos de regiones hmedas contienen predominantemente NaCl. En suelos de
regiones ridas tambin llega a presentarse esta problemtica, aunque lo ms comn en zonas
ridas es la presencia de sales bsicas como los cloruros, sulfatos y bicarbonatos de sodio,
magnesio y calcio. Dichos suelos tienen pH alto, alto contenido de yeso, cuando hmedos son
pegajosos y una vez secos se endurecen formando costras.
Desde el punto de vista agronmico la salinidad se expresa en trminos de la
conductividad elctrica (EC) en unidades de dS m
-1
(deciSiemens por metro, equivalente a 1000
S cm
-1
) o mmhos cm
-1
(equivalente a 1 dS m
-1
1 mS cm
-1
). Normalmente se determina en un
extracto de pasta saturada suelo:agua (EC
e
) realizado en suelo tomado de la regin radical de
la planta y promediado sobre profundidad y tiempo. Las EC
e
son medidas en el extracto de
saturacin extrado de la pasta saturada utilizando vaco y posteriormente filtrando. La EC
e
de
un extracto de saturacin para un suelo pesado o de textura mediana multiplicada por 2 marca
la EC aproximada para la solucin del suelo en capacidad de campo. En cambio, para suelos
arenosos la EC
e
se multiplica por 3 (Shannon y Grieve, 1999). Para determinacin directa en el
campo o invernadero se utilizan extractos filtrados de suelo:agua en relacin 1:1, 1:2 1:5
volumen/volumen. gualmente la solucin obtenida de un extractor de agua del suelo (o
"chupatubos) pemite medir directamente la EC a la profundidad en que se ubica el bulbo de
cermica. En ambos casos, sobre todo para propsitos de investigacin, conviene referenciar
estas medidas respecto a la determinacin de EC
e
en la profundidad marcada por el estudio.
La EC y el potencial osmtico se relacionan de forma lineal (1 mS cm
-1
= -0.036 Mpa).
Lo que se conoce como "agua dulce tiene una conductividad elctrica de 0 a 1500 S cm
-1
. La
produccin de las plantas sensibles a la salinidad disminuye si la EC del suelo rebasa los 4 mS
cm
-1
(4000 S cm
-1
) y por esta razn se recomienda que el agua de riego no rebase 2 mS cm
-1
.
Como referencia, la EC del agua de mar es de 44 a 50 mS cm
-1
(44000 a 5000 S cm
-1
)
(Epstein, 1983).
Desde el punto de vista fisiolgico la salinidad se expresa como concentracin de sales
en unidades milimolares (mM) y se utiliza entonces como referencia el efecto de una
concentracin particular sobre un proceso fisiolgico. Como ejemplo una solucin 200 mM de
NaCl inhibe totalmente la germinacin de semillas de Arabidopsis thaliana.

3.4.2. Efectos de Ias AItas Concentraciones de SaI Sobre Ias PIantas
El problema central enfrentado por las plantas sometidas a alta concentracin de sal es
la retencin osmtica de agua y efectos inicos de toxicidad especficos sobre las protenas del
citoplasma y las membranas. El agua es "retenida osmticamente en las soluciones salinas de
tal forma que conforme aumenta la concentracin de sal el agua se encuentra cada vez menos
disponible para la planta. La explicacin en trminos fsicos es la siguiente: la energa libre del
agua se conoce como potencial qumico (); el agua fluye espontneamente desde un sitio de
alta energa libre hacia uno de baja energa libre hasta que se llega al equilibrio termodinmico.

19

Considerando que el valor mximo de energa libre es el del agua pura (
0
) y que cualquier
adicin de solutos disminuye la energa libre hasta un valor
1
(en donde
1
<
0
), entonces el flujo
espontneo de agua se dar desde los sitios con menor cantidad de sales hacia los que
presentan mayor concentracin. La nica forma en que el agua sea movilizada desde un sitio
con
2
hacia uno con
1
, en donde
2
<
1
, es a travs de transporte activo invirtiendo energa. Esto
quiere decir que un suelo salino el valor de la solucin del suelo es muy bajo y la planta
debera entonces invertir gran cantidad de recursos para extraer el agua del suelo. Es por ello
que rebasado cierto umbral de concentracin de sal la planta es entonces incapaz de extraer
agua del suelo. La base de la respuesta celular conocida como ajuste osmtico es
precisamente la concentracin de solutos no txicos en la clula, de tal forma que el valor de
la clula disminuya y sea competitivo contra el presentado por la solucin salina.
Adems de los efectos osmticos la salinidad impone toxicidad sobre las clulas. El
efecto txico de los medios salinos se refiere a competencia de un in en particular por el sitio
del cofactor protico (Bernstein et al., 1974) o bien a la ocurrencia de cambios
conformacionales en las protenas. En efecto, la disposicin espacial de una cadena
polipeptdica depende de la interaccin entre el juego de fuerzas generada por las cargas y los
volmenes moleculares de sus componentes (aminocidos y elementos como el Fe, S, etc.) y la
fuerza generada por la pelcula de molculas de agua que forman una estructura cristalina
alrededor de la protena llamada "agua de hidratacin. En otras palabras, el agua en s es un
agente activo que genera estructura en los seres vivos. Normalmente la estructura protica
adecuada para ciertos fines se mantiene dentro de ciertos rangos de contenido de solutos en el
agua. Cuando el contenido de sales rebasa cierto umbral entonces la estructura del poliptido
se ve modificada disminuyendo o inhabilitando su funcin. Los sistemas enzimticos de la
gliclisis, el ciclo de Krebs y la fotofosforilacin son especialmente sensibles a estos cambios
conformacionales inducidos por el agua salina, resultando en una menor disponibilidad de
energa, menor adquisicin de nutrientes minerales y en general en un retardo en el crecimiento
de la plntula o la germinacin de las semillas (Larcher, 1995).
Como fue mencionado, el efecto general de la salinidad es el reducir la tasa de
crecimiento resultando ello en hojas ms pequeas, altura y en ocasiones en menor cantidad
de hojas. Las races tambin disminuyen su longitud y biomasa aunque pueden ser ms
delgadas o ms gruesas. gualmente la tasa de maduracin puede ser mayor o menor
dependiendo de la especie. El grado en el cual el crecimiento es disminuido difiere
grandemente entre especies y, en menor extensin, entre cultivares o variedades dentro de
especie. La severidad de la respuesta a la salinidad depende de la interaccin con otras
variables ambientales como la humedad, temperatura y radiacin. El efecto osmtico de la
salinidad contribuye principalmente a obtener una baja tasa de crecimiento, mientras que los
efectos de toxicidad inica modifican el color las hojas, la tasa de madurez y el cociente entre la
biomasa area y la biomasa de la raz. Estos ltimos efectos inicos se manifiestan ms
generalmente como dao en hojas y meristemos o bien por sntomas tpicos de desrdenes
nutricionales. De ese modo las altas concentraciones de Na Cl en hojas y tallos resultan en
necrosis foliares y quemado de los bordes, mientras que los sntomas de deficiencia nutricional
son similares a los presentados en ausencia de salinidad. Un ejemplo de esto ltimo es la
deficiencia de calcio que se presenta cuando es muy alto el cociente de Na/Ca en el agua o en
la matriz de intercambio inico del suelo.
A pesar de que en la mayora de los casos de especies cultivadas la salinidad ejerce
efectos negativos, existen algunos reportes que indican efectos positivos. En la espinaca los
rendimientos se incrementan con niveles bajos o moderados de salinidad (Osawa, 1963). En la
zanahoria los contenidos de azucar pueden asimismo aumentar, aunque el contenido de
almidn disminuye en la papa (Bernstein, 1959). En niveles bajos de salinidad las cabezas de
col son ms compactas, disminuyendo sin embargo esta caracterstica al aumentar la salinidad
(Osawa, 1961).

20

Como fue mencionado, los procesos de crecimiento son especialmente sensibles a los
efectos de la salinidad y constituyen entonces un criterio sencillo para determinar el grado de
estrs por salinidad as como de la habilidad de una planta para adaptarse a dicha situacin.

3.4.3. Definicin de ToIerancia a Ia SaIinidad
La tolerancia o ressistencia a la salinidad es generalmente expresada en trminos de la
habilidad inherente de la planta para resistir los efectos de altas cantidades de sales en la zona
radical o en los tejidos foliares sin que se presenten efectos adversos. Lunin et al. (1963)
propusieron un par de reglas bsicas para los estudios de salinidad: (1) la tolerancia de un
cultivo dado a las sales vara de acuerdo a la fase de crecimiento en la cual la salininidad es
iniciada as como al nivel final de contenido de sales conseguido; (2) la definicin de tolerancia
a la salinidad debe tomar en consideracin la porcin de la planta que es comercializada. Estos
autores demostraron que la salinidad causa mayor reduccin en el crecimiento de las races de
la acelga que en las hojas, mientras que en la cebolla la reduccin en el crecimiento de los
bulbos fue menor que el observado en las hojas. Adicionalmente, los genes de tolerancia a la
salinidad funcionan en concierto con otros genes que tienen influencia sobre caracteres
cuantitativos as como sobre la interaccin ambiental de los mismos. Se considera por ello que
la tolerancia a la salinidad es un carcter cuantitativo complejo controlado por muchos genes
(Shannon y Noble, 1990; Shannon, 1996). En trminos de su medicin la tolerancia a la
salinidad es descrita como una funcin compleja que marca la disminucin en el rendimiento o
la productividad a travs de un rango de concentraciones salinas (Maas y Hoffman, 1977; van
Genuchten y Hoffman, 1984). La tolerancia a la salinidad puede medirse adecuadamente
basndose en dos parmetros: el umbral (EC
t
), la conductividad elctrica que se espera origine
la primera reduccin significativa en el rendimiento mximo esperado (Y
max
) y la pendiente. Esta
ltima es el porcentaje de reduccin en el rendimiento esperado por cada unidad de salinidad
aadida por encima del valor umbral.

3.4.4. Literatura Referente a SaIinidad
seminarios.

1. Bohnert, H.J. and B. Shen. 1999. Transformation and compatible solutes. Sci. Hort. 78:237-
260.
2. Grattan, C.R. and S. M. Grieve. 1999. Salinity-mineral nutrient relations in horticultural crops.
Sci. Hort. 78:127-157.
3. Yeo, A. 1998. Molecular biology of salt tolerance in the context of whole-plant physiology. J.
Exp. Bot. 49:915-929.
4. Zhu, J.K., P.M. Hasegawa, R.A. Bressan. 1997. Molecular aspects of osmotic stress in plants.
Crit. Rev. Plant Sci. 16:253-277.
5. Zhu, J.K. 2000. Genetic analysis of plant salt tolerance using Arabidopsis. Plant Physiol.
124:941-948.

21

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3.5. Dficit de Nutrientes MineraIes y Toxicidad por MetaIes
Pesados.


Este importante y amplio tema ser cubierto por medio de una exposicin general acerca
de los factores que modifican la disponibilidad de los elementos minerales, posteriormente se
incluye como caso de estudio particular el elemento hierro en las plantas. Este mineral es muy
relevante desde el punto de vista nutricional, por otro lado los factores que impactan su
disponibilidad en el suelo y la consecuente absorcin y transporte en las plantas son complejos
y sometidos a intenso estudio e ilustran perfectamente las estrategias que pueden aplicarse a
otros elementos catinicos agrupados en los metales de transicin. En cuanto a los aniones el
boro es definitivamente el ms importante desde el punto de vista de la extensin de su
deficiencia a nivel mundial (Gupta, 1979), por ello se incluye informacin sobre ese elemento
para su revisin. El tema de los metales pesados ser cubierto con la revisin de diferentes
artculos en donde se muestra, tanto el efecto fisiolgico sobre las plantas como los mtodos
para obtener plantas con tolerancia a los metales pesados.

3.5.1. Deficiencia de MineraIes como Factor Inductor de Estrs

3.5.1.1. Introduccin. Un elemento mineral se considera esencial cuando las plantas no logran
completar su ciclo vital en ausencia de aquel as como cuando el elemento se encuentra
directamente involucrado en el metabolismo de la planta. La deficiencia se corrige nicamente
cuando se aporta el elemento en cuestin (Arnon, 1954). Basndose en este criterio se han
encontrado 16 elementos esenciales: carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (H), nitrgeno (N),
fsforo (P), potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), azufre (S), hierro (Fe), manganeso (Mn),
zinc (Zn), cobre (Cu), boro (B), molibdeno (Mo) y cloro (Cl). Algunos elementos como el silicio
(Si), selenio (Se), vanadio (V), bromo (Br), cromo (Cr), cobalto (Co) y nquel (Ni) fueron
descritos como benficos o necesarios en ciertas condiciones, siempre en concentraciones
bajas, pero no se consideran esenciales.
La mayora del carbono proviene del CO
2
que es tomado del aire, una pequea cantidad
de carbono es capturado por las races en forma de CO
2
o carbohidratos del suelo; el hidrgeno
y oxgeno provienen del agua. El resto de los elementos es adquirido principalmente de la
solucin del suelo en forma inica. Varios elementos como el cloro, azufre, sodio, nitrgeno y
los metales pueden incorporarse por va foliar de manera natural o artificial.
Los elementos minerales clasificados como macronutrientes son aquellos que se
encuentran en rangos de concentracin de 1 a 150 g por kg de materia seca. Estos son el N, P,
K, Ca, Mg y S. En cambio los micronutrientes son aquellos cuyo rango de concentracin se
encuentra entre 0.1 a 100 mg por kg de materia seca. Estos son el Fe, Zn, Mn, Cu, B, Mo y Cl
(Marschner, 1997a). El cloro, aunque esencial en pequea cantidad, puede acumularse
alcanzando alta concentracin cuando la solucin del suelo presenta un nivel alto de dicho
elemento (Xu et al., 2000).
Todos los nutrientes esenciales son requeridos por las plantas en proporciones
balanceadas. Las desviaciones de esta situacin resultan en desrdenes nutricionales que se
manifiestan como carencias o excesos inducidos. La deteccin temprana de las deficiencias de
nutrientes es importante. El estado de estrs resultante puede extenderse hasta originar
prdida del rendimiento o muerte de la planta. Cuando dos o ms elementos se encuentran

22

deficientes de manera simultnea es posible que la mezcla de sntomas no se parezca a
ninguna deficiencia individual descrita. Los sntomas de deficiencia mineral se confunden en
ocasiones con otros eventos ambientales complejos como daos causados por plagas,
salinidad, dficit de agua, contaminantes atmosfricos, alta o baja temperatura o irradiancia
(Bennett, 1993) y dao por herbicidas. La toxicidad por Se o Mo es sintomticamente similar a
la deficiencia de P (Bennett, 1993), la deficiencia de Fe en mango es similar a la toxicidad por
Cl (Xu et al., 2000). Es por lo tanto necesario el observar y definir de forma crtica los sntomas
observados. Los sntomas de deficiencia se distinguen de acuerdo a la parte de la planta en
donde se observan, por la presencia o ausencia de manchas necrticas y la forma de clorosis
que se presenta: completa, intervenla, marginal, etc. La descripcin de la apariencia inicial de
los sntomas de deficiencia en las hojas se presenta en la Figura 3.3. Para una descripcin
completa de los sntomas asociados a un cierto elemento vese Kant y Kafkafi (2001) o un texto
sobre nutricin mineral. En el internet se encuentran asimismo buena cantidad de excelentes
colecciones de fotografas sobre deficiencias de nutrientes minerales.

Figura 3.3. Diagrama de flujo para la identificacin visual de sntomas de deficiencia de
minerales (Modificado de Kant y Kafkafi, 2001).

Buena cantidad de deficiencia de elementos se relacionan con la induccin temprana de
estrs oxidativo, de all la prevalencia de sntomas como las necrosis y clorosis. Lo que ocurre
en este caso es un desbalance entre la capacidad del sistema fotoqumico de captura de
radiacin (que funciona a plena capacidad mientras existan pigmentos en los sistemas antena)

23

y los posteriores pasos de transferencia de electrones, generacin y uso de ATP/NADPH
2
en
las recciones bioqumicas de reduccin del CO
2
, NO
3
y SO
4
. Al parecer este desbalance da
lugar primeramente a la generacin de radicales libres e incremento en la fotorespiracin como
medios de "enfriado o disipacin energtica. En segundo lugar, si el dficit del elemento se
mantiene entonces ocurre la destruccin de los pigmentos de los sistema antena, de all la
clorosis causada por la cada en la concentracin de clorofila.
A este respecto es necesario llevar a cabo estudios para verificar si la aplicacin
exgena de compuestos inductores de la resistencia al estrs o de compuestos oxidantes son
capaces de inducir las respuestas caractersticas relacionadas con la mayor eficiencia en el uso
de los nutrientes.
Generalmente la deficiencia de nutrientes en las plantas ocurre cuando un nutriente
mineral es insuficiente en el medio de crecimiento y/o no puede ser absorbido o asimilado por la
planta debido a condiciones ambientales o manejo desfavorables. Los desrdenes nutricionales
limitan la productividad de las plantas en prcticamente todos los tipos de suelo en el planeta.
El Cuadro 3.1 muestra las condiciones del suelo asociadas con deficiencias de micronutrientes.

Cuadro 3.1. Factores con efecto sobre la disponibilidad de micronutrientes.
Deficiencia observada Causa de la deficiencia
Mn Fe B Cu Zn Mo
Desequilibrio de nutrientes del suelo
X X N alto
X X X P alto
X K bajo
X Ca bajo
X Ca alto
X Mg alto
X X X Mn alto
X Fe alto
X X X Cu alto
X Zn bajo
X X X Zn alto
X pH bajo
X X X X X pH alto
X S alto
X Na alto
X Bicarbonatos altos
X Desequilibrio Fe:Cu:Mn
Otras condiciones del suelo
X X X Bajo contenido de materia orgnica
X X X Alto contenido de materia orgnica
X Drenaje pobre
X X Sequa
X X Fro. Suelos hmedos
X Ventilacin pobre
X Fuerte aplicacin de estircol
X Lluvias intensas
X X X X Suelos arenosos

24

Por su parte el Cuadro 3.2 (2.A a 2.E) muestra la sensibilidad relativa de diferentes
especies cultivadas a la deficiencia de micronutrientes. En estos cuadros una especie vegetal
"poco sensible es capaz de extraer el mineral del cual se habla con gran eficiencia, incluso en
presencia de condiciones limitantes o bajas concentraciones del mismo en el suelo. En cambio,
cuando la categora para una planta en particular indica "sensible entonces esta especie cae
muy fcilmente en estado de deficiencia de dicho elemento.

Cuadro 3.2. Respuestas relativas de distintos cultivos a la deficiencia de diferentes elementos.
Cuadro 3.2.A. Sensibilidad relativa de los cultivos a la deficiencia de boro
Sensibles Medianamente sensibles Poco sensibles
Cacahuate Alfalfa Banano Melocotonero Agrios Judas
Remolacha
azucarera
Colza Cacao Rbano Pia Cebada
Brcoli Algodn Col Tabaco Esprrago Guisante
Caf Nabo Col de
Bruselas
T Avena Papa
Zanahoria Clavel Cocotero Tomate Trigo Arroz
Apio Palma de
aceite
Espinaca Trbol Caa de
azcar
Centeno
Coliflor Olivo Lechuga Lino Pepino Soya
Manzano Rosal Maz Peral Fresa Sorgo
Colinabo Girasol Gramneas
forrajeras

Vid Okra

Cuadro 3.2.B. Sensibilidad relativa de los cultivos a la deficiencia de zinc
Maz Algodn Cebada Remolacha
azucarera
Trigo Gramneas
forrajeras
Sorgo Citrus Arroz Papa Centeno Esprrago
Lino Manzano Soya Tomate Avena Zanahoria
Frijol Melocotonero Trbol Peral Alfalfa
Ricino Cebolla Cerezo Guisante
Caf

Cuadro 3.2.C. Sensibilidad relativa de los cultivos a la deficiencia de cobre
Trigo Zanahoria Maz Apio Arroz Soya
Cebada Espinaca Sorgo Algodn Centeno Judas
Avena Lechuga Trbol Nabo Papa Alfalfa
Citrus Remolacha Pepino Rbano
Col Tomate
Coliflor Manzano
Guisante Melocotonero
Peral Gramneas
forrajeras

25

Cuadro 3.2.D. Sensibilidad relativa de los cultivos a la deficiencia de manganeso
Avena Rbano Cebada Tomate Centeno
Trigo Soya Arroz Nabo Maz
Sorgo Espinaca Papa Alfalfa Esprrago
Remolacha Rosal Brcoli Trbol Pastos
Judas Agrios Col
Pepinos Manzano Coliflor
Lechuga Melocotonero Zanahoria
Guisante Vid Apio

Cuadro 3.2.E. Sensibilidad relativa de los cultivos a la deficiencia de molibdeno
Coliflor Leguminosas Alfalfa Nabo Trigo Peral
Trbol Tabaco Brcoli Avena Maz Melocotonero
Lechuga Col Guisante Cebada Vid
Espinaca Colza Rbano Centeno Fresal
Soya Sorgo Rosal
Ctrico Arroz
Remolacha Papa
Tomate Manzano

26

3.5.1.2. Manejo de Ias Deficiencias de MineraIes. Cuando el suelo es deficiente en un
nutriente particular y el crecimiento de las plantas muestra sntomas asociados con deficiencia
se requiere corregir la deficiencia. Los mtodos para ello son delineados en el Cuadro 3.3.

Cuadro 3.3. Generalidades sobre el manejo correctivo de deficiencias de minerales
1
.
Elemento mineral Medidas correctivas
Nitrgeno Adicin de materia orgnica al suelo (no recomendado si la parte
cosechada entra en contacto con el suelo), aplicacin de
fertilizantes nitrogenados, aplicacin foliar de urea desbiuretizada
al 0.25-0.5%.
Fsforo Aplicacin de enmiendas para mantener el pH de la solucin del
suelo en un rango cercano a la neutralidad. En suelos cidos se
recomienda la roca fosfrica. En los suelos calcreos es
recomendable la aplicacin de cidos como el cido fosfrico.
Potasio Aplicacin de fertilizantes con fsforo, residuos vegetales y
compostas.
Calcio Aplicacin de encalados (carbonato u xido de calcio) en suelos
cidos. De otra forma aplicar yeso agrcola o bien fuentes
solubles de calcio.
Magnesio Aplicacin de roca dolomtica. Aplicaciones al suelo de nitrato de
magnesio o sulfato de magnesio (tambin por aplicacin foliar).
Azufre Puede utilizarse el azufre agrcola aplicado al suelo o bien azufre
micronizado va foliar. Aplicacin de fertilizantes con azufre como
el sulfato de amonio, superfosfato simple. No se recomienda la
aplicacin de azufre agrcola y yeso en suelos ricos en caliza, a
no ser que se mezcle con estircoles.
Zinc Adicin de sulfato de zinc al suelo (5-30 kg ha
-1
) o bien aspersin
foliar del mismo compuesto al 0.1-0.5%.
Hierro Adicin de sulfato de hierro al suelo (15-50 kg ha
-1
) o bien
aspersin foliar del mismo compuesto al 0.5-2%. Otra opcin es
quelato de hierro al 0.02-0.05%.
Cobre Aplicacin al suelo de un mximo de 5 kg ha
-1
de sulfato de cobre
por aplicacin de dos a cuatro aplicaciones. Por va foliar no se
recomienda el sulfato de cobre pero se puede utilizar cualquier
funguicida que contenga cobre como el oxicloruro u xido de
cobre. Si no se tiene otra opcin adicional al sulfato de cobre
aplicar entonces por va foliar una solucin entre el 0.1 y el 0.2 %
como mximo.
Boro De 2 a 7 kg ha
-1
de borax al suelo o bien aplicacin foliar de
borax en solucin al 0.1-0.25%. Por va riego no debe exceder de
0.5 ppm de B.
Manganeso Pueden aplicarse hasta 7 kg de sulfato de manganeso por
hectrea al suelo. La aplicacin foliar es con solucin de sulfato
de manganeso al 0.06-0.1%.
Molibdeno Encalado de suelos cidos. Aplicacin foliar de 0.05-0.1% de
molibdato de amonio. Uso de molibdato de sodio o molibdato de
amonio aplicados al suelo en cantidad de 2 a 5 kg ha
-1
.
1
. Las respuestas obtenidas pueden variar dependiendo de la especie, tiempo de aplicacin y
las condiciones del ambiente en general.

27

La tolerancia de un cultivo, variedad o cultivar particular al estrs inducido por deficiencia de
minerales depende de la eficiencia de adquisicin de los nutrientes y de la eficiencia en el uso
de los nutrientes (Figuras 3.4 y 3.5). Esta ltima caracterstica se expresa como los gramos de
biomasa total (o bien biomasa cosechada) producidos por la concentracin del elemento
particular expresada en base seca. Como referencia se utilizan los cultivares bajo prueba pero
en condicin de nutricin normal u ptima, lo cual permite obtener la eficiencia relativa para el
genotipo comparado contra si mismo e ilustra las diferencias de las cuales pueden hacer uso
los mejoradores de plantas durante la seleccin o los fisilogos para tratar de entender los
procesos involucrados.
Obviamente la eficiencia en el uso de los nutrientes engloba la eficiencia en la
adquisicin de los nutrientes. La eficiencia en el uso de los nutrientes depende de caracteres
morfolgicos, bioqumicos y fisiolgicos cuya induccin depende de la presencia del dficit de
un elemento particular o, en general del crecimiento en suelos infrtiles. En el Cuadro 3.4 se
anotan algunos de los caracteres de las plantas de los que depende la mencionada eficiencia
en el uso de los nutrientes.

Ejemplo: Clculo de la eficiencia en el uso del Zn en varios genotipos de trigo en un suelo
deficiente en este elemento (datos de Kant y Kafkafi, 2001).

Genotipo Biomasa seca area
(g planta
-1
) con Zn
*

Biomasa seca area
(g planta
-1
) sin Zn
Eficiencia en el uso del Zn
(%)
1R 0.98 0.52 (0.52/0.98)*100 = 53
2R 0.79 0.63 (0.63/0.79)*100 = 80
3R 0.72 0.54 (0.54/0.72)*100 = 75
*
Se aadieron 10 mg de Zn por kg de suelo.

28

Figura 3.4. Respuestas inducidas en las plantas que incrementan la eficiencia en la adquisicin
de los nutrientes.

29

Figura 3.5. Factores endgenos relacionados con la eficiencia en el uso de los nutrientes.

30

Cuadro 3.4. Caractersticas fisiolgicas y morfolgicas asociadas con la tolerancia o adaptacin
al estrs inducido por dficit de minerales.
Adquisicin de nutrientes 1. Factores morfolgicos.
-Mayor cantidad de tejido radical, incremento en
el cociente raz/parte area.
- Extensin lateral y vertical del sistema radical.
- Densidad del sistema radical expresada como
frecuencia, sumatoria de la longitud de las
estructuras o sumatoria de los dimetros
radicales por unidad de volumen o peso del
suelo.
2. Modificacin del microambiente de la raz.
3. nteracciones simbiticas con microorganismos.
4. Mecanismos bioqumicos de absorcin de iones.
Carga deI nutriente en eI
xiIema de Ia raz
1. Transferencia a travs de la endodermis.
2. Descarga al xilema.
3. Control de la tasa de absorcin y descarga.
Distribucin y moviIizacin
deI nutriente en Ia pIanta
1. Sistemas eficientes de quelatacin y transporte
en el xilema.
2. Redistribucin entre tejidos.
3. Acumulacin del elemento en vacuolas y otros
organelos para su posterior utilizacin.
UtiIizacin deI nutriente en eI
crecimiento y eI metaboIismo
1. Capacidad de crecimiento con reducida
concentracin del elemento en los tejidos.
2. Necesidades diferenciales en distintos rganos.
Ejemplo: menor utilizacin en tallos.
3. Sustitucin del elemento. Ejemplo: sustitucin
parcial del K por Na.
Modificado de Kant y Kafkafi, 2001.

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3.5.1. Absorcin y AsimiIacin de Hierro en PIantas


3.5.1.1. Introduccin. Ms de un tercio de la poblacin mundial padece de deficiencia de
hierro
1
. Los estudios recientes que conectan la deficiencia de Fe con un desarrollo cognoscitivo
deficiente tan solo enfatizan el impacto de este problema. Las plantas son la principal fuente de
hierro en la mayora de las dietas, por lo que asegurar el consumo de alimentos de origen
vegetal con un adecuado nivel de hierro constituye una parte medular en las estrategias de
mejoramiento del nivel nutricional de los humanos
2
.
Un problema caracterstico asociado a la produccin de cultivos en suelos calcreos es
la condicin llamada clorosis frrica, consecuencia de la carencia de hierro disponible en el
suelo y cuyo sntoma ms caracterstico es el amarillamiento o clorosis intervenal la cual se
corrige con la aplicacin de Fe en formas disponibles para la planta
3
. Los suelos calcreos son
comunes en la regin norte de Mxico, cubren aproximadamente un tercio de la superficie

31

terrestre y se presentan predominantemente en regiones que reciben menos de 500 mm de
precipitacin anual. Las caractersticas importantes de un suelo calcreo son un pH alto (de 7 a
9) y un contenido significativo de carbonatos libres
4
.
El objetivo del presente escrito es revisar informacin actual y relevante sobre los
mecanismos de absorcin y asimilacin de hierro por las plantas, asi como las estrategias
utilizadas en la prevencin y correccin de las deficiencias de este elemento.

3.5.1.2. Importancia FisioIgica deI Hierro. En plantas y otros organismos una gran parte del
Fe presente se encuentra asociado con porfirinas. Las porfirinas con Fe de animales y hongos
son principalmente molculas hem, como las encontradas en la hemoglobina, mientras que en
las plantas los citocromos son los ms comunes. Los citocromos se encuentran como partes
funcionales de los sistemas respiratorio y fotosinttico y su propiedad ms importante, la funcin
redox, se deriva de la capacidad del Fe de ser oxidado de manera reversible de Fe() a Fe().
Esta capacidad se utiliza en donde se requiere realizar reacciones redox rpidas por
transferencia de electrones, es decir, reacciones que no requieren tranferencia de H
+
o
formacin/rompimiento de enlaces covalentes. La mayor parte del Fe activo en la planta se ve
implicado en las reacciones redox de cloroplastos, mitocondrias y peroxisomas.
Aunque el Fe es el cuarto elemento ms abundante de la corteza terrestre, la deficiencia
de hierro es un problema comn a prcticamente todas las especies de seres vivos. El Fe se
presenta en dos estados de oxidacin: el Fe
+3
(Ar3d
5
) o frrico y el Fe
+2
(Ar3d
6
) o ferroso. En
presencia de O
2
el Fe
+2
es oxidado rpidamente a Fe
+3
, el cual es poco soluble en agua ya que
forma xidos e hidrxidos de Fe que precipitan rpidamente. Por lo tanto la forma
termodinmicamente ms estable del hierro es tambin la de ms difcil acceso para los
organismos (Cuadro 3.5).
Los iones de metales como el Fe, Zn o Cu no atraviesan libremente la membrana celular. Las
formas de paso son quelatos (molculas atrapadoras de iones metlicos). Los quelatos
sintetizados biolgicamente son llamados ionforos, y los ionforos especficos para el hierro
son conocidos como siderforos
3,5
. Un mecanismo general de accin entre las bacterias,
cianobacterias y hongos, en respuesta a la carencia de hierro, es la excrecin de siderforos
hacia el medio de crecimiento y la posterior recuperacin de los mismos a travs de una
protena transportadora asociada a membrana
3
. En muchos habitats y bajo muchas condiciones
llega a presentarse competencia por el Fe entre diferentes organismos; lo que resuelve la
cuestin a favor de uno u otro es la habilidad relativa que presentan los siderforos de cada uno
de ellos para complejar el hierro
3,5,6,7
.

Cuadro 3.5. Efecto del pH sobre la solubilidad del Fe().

La siguiente reaccin marca la ionizacin del hidrxido de hierro.
Fe(OH)
3
Fe
+3
+ 3OH
-

Para esta reaccin la constante de solubilidad es: k
sp
= 2 x 10
-39
= [Fe
+3
][OH
-
]
3

Por lo tanto: [Fe
+3
] = (2 x 10
-39
) [OH
-
]
-3

Si el pH = 7 entonces [OH
-
] = 10
-7
y [Fe
+3
] = 2 x 10
-18
M
si el pH = 9 entonces [OH
-
] = 10
-5
y [Fe
+3
] = 2 x 10
-24
M
-
] = 10
-8
y [Fe
+3
] = 2 x 10
-15
M
-
] = 10
-10
y [Fe
+3
] = 2 x 10
-9
M

32

3.5.1.3. Absorcin de Hierro por Ustilago sphaerogena. Un primer acercamiento a los
mecanismos que utilizan las plantas para absorber el Fe del suelo lo constituyen los estudios
realizados en hongos. El hongo Ustilago sphaerogena fue utilizado como modelo por J.
Neilands a partir de 1950. Bajo condiciones normales de disponibilidad de Fe en el medio de
crecimiento este organismo es capaz de producir hasta un 1% de su peso seco en forma de
citocromo c, una protena que contiene hierro. En un estudio reportado en 1952 (J. Am. Chem.
Soc. 74:4846-4847) Neilands observ que bajo estrs de carencia de hierro el hongo excretaba
una sustancia que fue cristalizada, caracterizada y llamada por el mismo Neilands como
ferricromo. Se demostr posteriormente que el siderforo ferricromo tiene 3 grupos
hidroxinmicos --CO--NOH-- los cuales se sabe son agentes quelantes del Fe()
3
.
El sistema de transporte de Fe de U. sphaerogena es parecido al de muchos
microorganismos (Figura 3.6). Cuando se detecta carencia de hierro se inducen cambios
metablicos que resultan en mayor eficiencia de absorcin de dicho elemento. La actividad de
sntesis protica se canaliza hacia la produccin de deferriferricromo (la parte orgnica del
ferricromo) sin el hierro. El deferriferricromo tiene una constante de afinidad hacia el Fe de
aproximadamente 10
29
(un valor de 10
15
10
20
se considera muy alto) por lo que es capaz de
solubilizar los xidos de hierro. Al igual que U. sphaerogena el hongo Ustilago maydis produce
un siderforo llamado ferricromo el cual compleja el Fe(). Este complejo Fe-ferricromo es
absorbido y en el interior de la clula el Fe() es reducido a Fe() de manera anloga a como
ocurre en U. sphaerogena
8
. En algunos organismos como Escherichia coli y Fusarium roseum
3

el siderforo libre de hierro no es reciclado, en vez de ello el compuesto es hidrolizado y debe
sintetizarse una nueva molcula por cada tomo de Fe que es incorporado.

Figura 3.6. El sistema transportador de Fe de U. sphaerogena es tpico de muchos
microorganismos. El ferricromo es un hexapptido cclico que consiste de tres residuos de
glicina y tres residuos de ornitina. Los N terminales de la ornitina son oxidados a hidroxilamina, -
NOH-, y combinados con tres grupos acetilo, CH
3
CO-, para dar lugar a los grupos hidroxamato
que complejan el Fe. El deferri-ferricromo presenta gran afinidad por el Fe() por lo que
rpidamente forma complejos ferricromo+Fe(). Dicho complejo es acarreado a la clula por un
sistema transportador y una vez en el interior el complejo es reducido por la siderforo
reductasa lo que causa la liberacin del Fe() formndose de nuevo el ferricromo que al ser
excretado al medio de crecimiento inicia de nuevo el ciclo.

33

3.5.1.4. Absorcin de Hierro por PIantas. El contenido normal de Fe en base seca en el tejido
vegetativo de hortalizas es de 50-300 ppm
9
. Olsen et al.
5
mencionan que, en general, la
cantidad de hierro requerida por un cultivo tpico por temporada de crecimiento es de 5 a 10 kg
ha
-1
. El contenido de Fe() de muchos suelos es mucho mayor que esta cantidad
5
pero como
fue mencionado esta forma inica presenta poca solubilidad. En la solucin de agua del suelo
que rodea las races la concentracin mnima reportada para obtener un crecimiento razonable
en diferentes cultivos es de 10
-9
molar (5.6 x 10
-5
ppm de Fe
+3
). En condiciones estndar con
pH=7 la concentracin de Fe derivado del Fe(OH)
3
es de 2 x 10
-18
molar, y se requiere un pH de
4 para lograr espontneamente una concentracin de 2 x 10
-9
molar. Como la mayora de los
vegetales se desarrollan en suelos con pH>5, necesariamente deben contar con medios para
solubilizar el Fe() de los xidos e hidrxidos de hierro.
Las plantas tienen dos diferentes vas o estrategias por medio de las cuales son capaces
de aumentar la disponibilidad de Fe() en la solucin de agua del suelo:
(i) Estrategia . Las monocotiledneas no gramneas y las dicotiledneas pueden
disminuir el pH en la rizosfera o volumen de suelo modificado por la raz. La acidificacin
solubiliza el Fe() y promueve la reduccin del mismo a Fe().
(ii) Estrategia . Las gramneas excretan fitosiderforos, aminocidos no protenicos, que
solubilizan los iones Fe
+3
formando un complejo Fe()-fitosiderforo. La liberacin de
fitosiderforos se correlaciona positivamente con la resistencia a la clorosis frrica. Los
fitosiderforos tambin acarrean otros cationes como el Zn
+2
, Mn
+2
y Cu
+2
.
Las plantas con la estrategia disponen tambin de aminocidos no protenicos como la
nicotinamina pero exclusivamente para el transporte intra e intercelular del Fe ya absorbido. La
carencia de nicotinamina da lugar a dficit de hierro en los tejidos, tal como ocurre en el
mutante cloronerva del tomate (Lycopersicon esculentum) que tiene una falla en el gene que
controla la sntesis del mencionado compuesto
10
. Los fitosiderforos de las gramneas
presentan estructuras qumicas muy parecidas a la nicotinamina (Figura 3.7), siendo de hecho
la metionina el precursor y la nicotinamina un intermediario en la sntesis
11
, por ello se ha dicho
que la estrategia es una extensin extratisular de los mecanismos internos de transporte de
Fe.
En la estrategia la acidificacin es realizada a travs de la excrecin de iones H
+
y
cidos orgnicos, actividades realizadas por las clulas de transferencia. Estas clulas
especializadas son inducidas diferencialmente por la carencia de Fe y se localizan en la
epidermis de las races
4
. Los H
+
provienen de una ATPasa asociada a la membrana plasmtica
y los cidos orgnicos, principalmente citrato y malato, provienen de la actividad de la
PEPcarboxilasa de la raz cuya actividad se ve aumentada en ausencia de Fe. En el caso de las
gramneas con estrategia estas producen cidos orgnicos pero aparentemente no excretan
protones
12
.
Adems de promover el afecto acidificante las clulas de transferencia son la interfase
en donde se lleva a cabo la reduccin del Fe() una vez que este ha sido solubilizado. Dicha
reduccin Fe()Fe() es paso obligado para la absorcin del hierro en las plantas que utilizan
la estrategia . En caso de aumentar la disponibilidad de Fe en el sustrato las mencionadas
clulas de transferencia degeneran y desaparecen
4
. Todas estas respuestas inducidas por la
carencia de hierro parecen regularse por separado ya que, (a) la induccin de las clulas de
transferencia puede ocurrir de manera independiente respecto a un incremento en la actividad
reductiva del Fe()
13
, (b) algunas plantas como el meln (Cucumis melo) no liberan reductores
a la rizosfera, pero compensan la ausencia de los mismos con una sobreproduccin y excrecin
de protones
4
y (c) en Arabidopsis thaliana la actividad reductiva Fe()Fe() ocurre de manera
independiente de la excrecin de protones
14
.
Asociada al proceso de acidificacin y solubilizacin del Fe(), las plantas llevan a cabo
la reduccin Fe()Fe(). Se pensaba que esta reduccin se realizaba en buena parte por una

34

serie de compuestos fenlicos reductores de Fe() como el cido cafico y sus derivados
5
que
son excretados a la rizosfera, sin embargo la cantidad de compuestos reductores producidos no
es suficiente para cubrir las necesidades de Fe() de la planta por lo que, al parecer, dicha
actividad es llevada a cabo en su mayor parte por reductasas de los complejos Fe-quelato que
son protenas asociadas a las membranas. Se supone que la funcin de los fenlicos se refiere
ms bien a mantener estable la concentracin de Fe() para que este sea tomado por los
complejos transportadores que se encargan de acarrearlo al interior de la clula. En la soya
(Glycine max) el sitio de reduccin Fe()Fe() se encuentra principalmente en las regiones
de alargamiento y en proceso de maduracin de la raz asi como en las races laterales
jvenes
15
.

Figura 3.7. Estructura qumica de la nicotinamina (arriba) y el cido muginico (abajo).

Para realizar la mencionada reduccin Fe()Fe() se requiere la transferencia de
electrones desde el citosol a travs de la membrana plasmtica. Las clulas vegetales de
plantas con estrategia poseen dos sistemas de transferencia de e
-
, un sistema "estndar"
presente en todas las clulas y un sistema "turbo" de alta eficiencia (Figura 3.8 y 3.9). El
sistema turbo es el reductor de los complejos Fe()-quelato que es inducido en las clulas de
transferencia en ausencia de Fe. Al parecer el potencial reductor del sistema turbo proviene del
NADPH producido por la NADP
+
-isocitrato deshidrogenasa citoslica
12
. En este sistema turbo
se encuentra la enzima Fe-quelato reductasa (FCR), que es utilizada por la mayora de las
plantas (excepto gramneas que carecen del sistema turbo) para adquirir Fe soluble, no
mostrando relacin aparente con la absorcin de otros cationes como el Zn y Mn
14
. Segn
Moog et al.
13
la enzima FCR es inducida por la deficiencia de hierro y sigue una cintica
Michaelis-Menten con un K
m
de 45 Mol Fe()-EDTA y V
max
de 42 nMol Fe
+2
g
-1
min
-1
. Dada su
importancia potencial en la ingeniera gentica de plantas se busca localizar los genes
responsables de la codificacin de la reductasa de Fe-quelato. A este respecto, Robinson et al.
1

aislaron un gene llamado FRO2 que se expresa en races de Arabidopsis thaliana en
condiciones de deficiencia de Fe. Dicho gene FRO2 parece corresponder a una FCR y
pertenece a una superfamilia gnica de flavocitocromos que transportan electrones a travs de
membranas. De acuerdo a los autores el aislamiento de FRO2 tiene implicaciones para la
generacin de cultivos con mayor calidad nutricional y mejor crecimiento en suelos con bajo
nivel de Fe disponible.

35

Figura 3.8. El sistema turbo de transferencia de electrones asociado a la membrana plasmtica
de las plantas con estrategia .

Una vez reducido el Fe() a Fe() la absorcin del mismo por las plantas con estrategia
puede ser en forma quelatada o bien en la forma inica libre Fe
+2
, siendo al parecer esta
ltima forma la ms comn. En Arabidopsis thaliana la protena de membrana llamada RT1
(iron-regulated transporter) es al parecer un acarreador de Fe(). Se sabe que RT1 se expresa
en las races, que la sntesis es inducida por la deficiencia de Fe y que su actividad es inhibida
por cadmio
16
. En las plantas que utilizan la estrategia no es el Fe
+2
sino los complejos Fe()-
fitosiderforo los que son acarreados desde el exterior hacia el interior de la clula por una
protena transportadora de alta afinidad, una vez en el interior ocurre la reduccin Fe()Fe().
El aporte constante de Fe se asegura manteniendo una alta concentracin de complejos Fe()-
fitosiderforos (de 1 a 2 mMol) en la rizosfera. Como ya fue mencionado los fitosiderforos
pueden actuar como acarreadores de otros cationes (Zn, Mn y Cu) pero el mencionado sistema
de transporte de alta afinidad es inducido exclusivamente por hierro
11
.
Una vez que es absorbido por las races el Fe
+2
puede ser oxidado formando el complejo
Fe()-citrato o bien es incorporado en ferritinas (protenas de almacenamiento de hierro) de la
raz. Que ocurra una cosa u otra depende de los niveles y potencial de reduccin del
ascorbato
17
y fenlicos reductores
18
como el cido cafico, el cido clorognico, el cido
dihidrocafico y el cido 3,4-dihidroxibenzico. En otras palabras, las ferritinas constituyen un
almacn dinmico cuya magnitud parece depender en parte del nivel redox de los tejidos. Al
respecto Boyer et al.
18
observaron que las enzimas y compuestos atrapadores de radicales
como la catalasa, la superxido dismutasa y el manitol no mostraron efecto sobre la tasa de
remocin de Fe. Por el contrario el EDTA y el oxalato inhibieron la liberacin de Fe.
En las plantas las ferritinas son protenas encontradas en los plstidos, con estructura
altamente conservada y con regulacin transcripcional en respuesta a la disponibilidad de Fe.
Las plantas parecen mostrar un solo tipo de ferritina cuya funcin se pensaba no se asociaba
con la destoxificacin del exceso de Fe al menos en Arabidopsis thaliana
19
. Una conclusin
diferente fue, sin embargo, la de Becker et al.
20
quienes utilizando mutantes de chcharo (Pisum
sativum) mostraron que las plantas utilizaron la acumulacin de ferritinas como mecanismo de

36

defensa contra la acumulacin excesiva de Fe soluble el cual se sabe da lugar a estrs
oxidativo. La misma conclusin fue obtenida por Deak et al.
21
quienes trabajaron con plantas de
tabaco transgnicas que sintetizaban ferritina de alfalfa en los tejidos vegetativos. El tabaco
transgnico fue capaz de retener la funcin fotosinttica normal en presencia de toxicidad
causada por radicales libres generados por exceso de Fe o tratamiento con paraquat.
Adicionalmente la progenie de las plantas trangnicas que acumulaba ferritina foliar exhibi
tolerancia al dao necrtico causado por patgenos virales o fngicos. Por otra parte, Lobraux
et al.
22
encontraron que las ferritinas, adems de ser inducidas por el Fe, responden a la
aplicacin de cido abcsico (ABA) exgeno, generndose un incremento transitorio de los
mRNA de ferritina. Estos resultados parecen un indicar un papel ms general tanto del hierro
como de las ferritinas en las respuestas al estrs
23
.

Figura 3.9. Procesos fisiolgicos asociados con la absorcin de hierro en las races de plantas
con estrategia . La protonacin disminuye el pH aumentando la disponibilidad de hierro en
forma inica. La reduccin permite el paso del Fe() quelatado (con quelatos naturales o
sintticos) a Fe() el cual atraviesa la membrana plasmtica (MP) desde el apoplasto hacia el
citoplasma.

El reporte de Van Wuytswinkel et al.
24
ilustra la importancia de la regulacin de la
concentracin de ferritinas. En dicho trabajo se obtuvieron plantas transgnicas de tabaco
(Nicotiana tabacum) con sobreacumulacin de ferritinas foliares lo que origin una deficiencia
inducida de Fe en los tejidos. A su vez esta deficiencia dio lugar a la induccin de actividad de
Fe-reductasa en la raz. Siguiendo lo dicho en los prrafos anteriores tal parece que la
sobreexpresin de ferritina disminuye el estrs oxidativo originado por el Fe, pero la
sobreexpresin arriba de cierto nivel da lugar a deficiencia de Fe.
Las ferritinas son sujeto de inters en los estudios de mejoramiento e ingeniera gentica
orientados a mejorar el aporte de Fe a la poblacin humana. Segn Theil et al.
2
la seleccin de

37

genotipos con mayor contenido de ferritina en las semillas puede ser una estrategia viable para
aumentar la concentracin de Fe biodisponible en la dieta.
Como se mencion, al ser liberado de las ferritinas del tejido de la raz el Fe() se moviliza a las
restantes partes de la planta va el xilema en forma de Fe()-citrato. El pH promedio del
exudado de xilema es 5.5, lo cual tiende a convertir el Fe() en Fe(). Existe evidencia que
indica que antes de la incorporacin del hierro a las ferritinas en hojas o semillas el Fe()-
citrato debe reducirse de nuevo a Fe()
17
. Al parecer esta reduccin Fe()Fe() es una
reaccin fotoqumica inducida por la luz en el rango azul-ultravioleta
3
.

3.5.1.5. Consecuencias FisioIgicas de Ia Carencia de Hierro. Se mencion que el sntoma
ms obvio de una fuerte carencia de hierro es la clorosis frrica foliar. La clorosis frrica es un
desorden fisiolgico complejo, se conocen al menos 10 causas diferentes que inducen la
clorosis frrica y, al observarla, lo comn es que estn actuando al menos dos de ellas
conjuntamente
25
. La fase final de una clorosis frrica, con carencia extrema de Fe, genera
necrosis y muerte de los tejidos. Sin embargo, antes de llegar a este extremo pueden
observarse disfunciones fisiolgicas sin necesariamente coartarse la supervivencia o la
obtencin de cosecha de las plantas
26,27
. Al igual que en humanos los niveles subptimos de
hierro generan en las plantas deficiencia oculta de hierro. Los esfuerzos de la tecnologa
agrcola y biolgica deben dirigirse tanto a corregir los problemas de clorosis frrica, como a
eliminar el problema ms insidioso de los bajos niveles de hierro en los vegetales para el
consumo humano.

3.5.1.6. Correccin de Ia Carencia de Hierro. Cuando el resultado de una muestra de suelo
marca un valor menor a 11 ppm de Fe este se considera bajo. Los valores adecuados se ubican
entre 12 y 24 ppm y el manejo del suelo y fertilizacin se dirige hacia lograr y mantener dichos
valores, ya que normalmente existe correlacin entre la concentracin de Fe disponible en el
suelo y el observado en los tejidos vegetales.
La materia orgnica en el suelo ejerce un efecto positivo sobre la solubilidad del hierro a
travs de un efecto reductivo ms que por el propio aporte de Fe contenido en la biomasa. La
degradacin biolgica de la materia orgnica aporta electrones y otros agentes reductores
creando microambientes redox en donde la concentracin de Fe() disponible para las plantas
se incrementa
28
. Del mismo modo un aporte adecuado de potasio se relaciona con una mejor
respuesta a la carencia de Fe, tanto en plantas que muestran la estrategia como en aquellas
que presentan la estrategia
29
.
A corto plazo las formas de corregir la carencia de hierro son, bsicamente
9
: (i)
aplicacin de quelatos de hierro (EDTA, DTPA, HEDTA EDDHA) al suelo o por va foliar, (ii)
aplicacin de sales de hierro (como el sulfato de hierro) al suelo o por va foliar, (iii) aplicacin
de cido fosfrico, sulfrico o ntrico (o KOH si el suelo es cido) en el agua de riego para
modificar la solucin del suelo. Las dosis recomendadas varan de acuerdo a la situacin, pero
las aplicaciones de 10 a 20 litros por hectrea por semana son comunes en sistemas de
produccin con riego por goteo.
La solucin nutritiva aplicada por va foliar debe contener entre 0.6 y 1.5 mg/l (ppm) de
Fe, es decir, de 0.06 a 0.15 g de Fe elemental por cada 0.1 m
3
bien de 1.07 x 10
-5
a 2.69 x 10
-
5
molar de Fe. Esta dosis puede duplicarse en caso de presentarse de nuevo los sntomas de
clorosis. Si el aporte es al suelo la dosis media es de 20 a 25 kg de producto comercial por
hectrea (desde 300 hasta 3000 g de Fe por hectrea)
4,9
. La aplicacin de Fe a las semillas
como tratamiento presiembra resulta poco til
30
.
De acuerdo a la experiencia del autor de este escrito tambin puede realizarse lo
siguiente: (i) aplicacin al suelo de 60-200 kg de azufre agrcola ms 10-25 kg de sulfato de
hierro heptahidratado (20% de Fe) por hectrea e incorporarlo con la rastra. Esta aplicacin
puede llevarse a cabo concentrada en la cama de siembra, en cuyo caso se utilizan 40-80 kg de

38

azufre y 3-5 kg de sulfato de hierro por hectrea y se incorpora con rotocultivadora. El efecto
acidificante del azufre y el sulfato facilita la absorcin del Fe por parte de la planta. (ii)
Aplicacin de sulfato de amonio (300-500 kg por hectrea 30-50 g por m
2
) disuelto en agua
por va fertirriego o aplicado superficialmente y despus incorporado con la rastra.

3.5.1.7. BiodisponibiIidad deI hierro. Una alta concentracin de Fe en el tejido vegetal no
implica necesariamente que se encuentre disponible al ser consumido. La deficiencia de hierro
en humanos puede ser producida por el consumo de alimentos que contengan niveles bajos de
Fe biodisponible, sea por la accin de inhibidores, por el bajo nivel de promotores o bien por
bajo contenido per se de hierro. Segn Gibson
31
la estrategia tecnolgica ms efectiva a corto
plazo para combatir la deficiencia de hierro en los pases menos industrializados incluye varias
tcticas como son: (i) suplementacin de Fe a los grupos de alto riesgo y (ii) promocin del uso
de alimentos fortificados asi como dietas diseadas para maximizar la biodisponibilidad de Fe
en los mismos. A largo plazo la maximizacin de la biodisponibilidad del Fe intrnseco en los
alimentos de origen animal y vegetal es parte importante de la solucin. El Fe intrnseco es
aquel que se acumula en los tejidos a partir del suelo o de la fertilizacin foliar y tanto la
concentracin como la biodisponibilidad del mismo son susceptibles de incrementarse a traves
del manejo agronmico
32
.

3.5.1.8. ConcIusiones. La regulacin y control de la captura, asimilacin y acumulacin de Fe
por parte de las plantas es muy compleja, involucrando diferentes mecanismos que aumentan
tanto la solubilizacin como la absorcin de dicho elemento. La aplicacin de tecnologas y
prcticas orientadas a maximizar el contenido y biodisponibilidad de Fe dependen de la
comprensin y mayor estudio de los mencionados procesos fisiolgicos. La carencia de Fe es
un problema muy extendido que puede aliviarse en parte mejorando el aporte de este elemento
en los vegetales, semillas, frutas y granos que consume la poblacin. Sobre todo para las
regiones en donde la disponibilidad de Fe en el suelo es baja son necesarios mayores estudios
orientados no solo a evitar y corregir la clorosis frrica, tambin debe considerarse la
biodisponibilidad de dicho Fe como parte integral de los programas de manejo y optimizacin de
tecnologa.

3.5.1.9. Literatura Citada
1. Robinson, N.J., C.M. Procter, E.L. Connolly and M.L. Guerinot. 1999. A ferric-chelate
reductase for iron uptake from soils. Nature 397:694-697.
2. Theil, E.C., J.W. Burton and J.L. Beard. 1997. A sustainable solution for dietary iron
deficiency through plant biotechnology and breeding to increase seed ferritin control. Eur.
J. Clin. Nutr. 51 Suppl. 4:S28-S31.
3. Emery, T. 1982. ron metabolism in human and plants. Am. Sci. 70:626-632.
4. Brown, J.C. and V.D. Jolley. 1989. Plant metabolic responses to iron-deficiency stress.
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5. Olsen, R.A., R.B, Clark and J.H. Bennett. 1981. The enhancement of soil fertility by plant
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6. Kloepper, J.W., J. Leong, M. Teintze and M.N. Schroth. 1980. Enhanced plant growth by
siderophores produced by plant growth-promoting rhizobacteria. Nature 286:885-886.
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selective chelators enables them to dominate other algae. Science 192:900-902.
8. Ardon, O., R. Nudelman, C. Caris, J. Libman, A. Shanzer, Y. Chen and Y. Hadar. 1998. ron
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9. Zuang, H. 1982. La fertilisation des cultures lgumieres. Centre Technique nterprofessional
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mutants affected in the regulation of iron metabolism. Mol. Gen. Genet. 252:87-92.
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micronutrients in graminaceous species: An ecological approach. Plant Soil 130:127-134.
12. Bienfait, H.F. 1988. Mechanisms in Fe-Efficiency Reactions of Higher Plants. J. Plant Nutr.
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Agron. J. 63:95-97.
16. Eide, D., M. Broderius, J. Fett and M.L. Guerinot. 1996. A novel iron-regulated metal
transporter from plants identified by functional expression in yeast. Proc Natl Acad Sci
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17. Laulhere, J.P. and J.F. Briat. 1993. ron release and uptake by plant ferritin: effects of pH,
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the pea mutants dgl and brz: subcellular localization of iron and ferritin. Planta 207:217-
223.
21. Deak, M., G.V. Horvath, S. Davletova, K. Torok, L.Sass, . Vass, B. Barna, Z. Kiraly and D.
Dudits. 1999. Plants ectopically expressing the iron-binding protein, ferritin, are tolerant to
oxidative damage and pathogens. Nat. Biotechnol. 17:192-196.
22. Lobraux, S., T. Hardy and J.F. Briat. 1993. Abscisic acid is involved in the iron-induced
synthesis of maize ferritin. EMBO J. 12:651-657.
23. Aust, S.D. 1989. Metal ions, oxygen radicals and tissue damage. Bibl. Nutr. Diet. 43:266-
277.
24. Van Wuytswinkel, O., G. Vansuyt, N. Grignon, P. Fourcroy and J.F. Briat. 1999. ron
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25. Peterson, G.C. and A.B. Onken. 1992. Relationship between chlorophyll concentration and
iron chlorosis in grain sorghum. Crop Sci. 32:964-967.
26. Winder, T.L. and J.N. Nishio. 1995. Early iron deficiency stress response in leaves of sugar
beet. Plant Physiol. 108:1487-1494.
27. Trick, C.G., S.W. Wilhem and C.M. Brown. 1995.Alterations in cell pigmentation, protein
expression, and photosynthetic capacity of the cyanobacterium Oscillatoria tenuis grown
under low iron conditions. Can. J. Microbiol. 41:1117-1123.
28. Lindsay, W.L. 1991. ron oxide solubilization by organic matter and its effect on iron
availability. Plant Soil 130:27-34.
29. Hughes, D.F., V.D. Jolley and J.C. Brown. 1992. Roles for potassium in the iron-stress
response mechanisms of strategy and strategy plants. J. Plant Nutr. 15: 1821-1839.
30. Karkosh, A.E., A.K. Walker and J.J. Simmons. 1988. Seed treatment for control of iron-
deficiency chlorosis of soybean. Crop Sci. 28:369-370.
31. Gibson, R.S. 1997. Technological approaches to combatting iron deficiency. Eur. J. Clin.
Nutr. 51 Suppl. 4:S25-S27.

40

32. Reddy, N.S., C.V. Sondge and T.N. Khan. 1993. In vitro bioavailability of iron from spinach
(Spinacea oleracea) cultivated in soil fortified with graded levels of iron and zinc. Plant
Foods Hum. Nutr. 44:241-247.
APENDCE
El Cuadro 3.6 (Zuang, 1982) presenta informacin acerca de las condiciones de aplicacin de
los quelatos de hierro usados en la prctica agrcola:

Cuadro 3.6. nformacin bsica acerca de los quelatos de hierro.
QUELATO CONTENDO DE Fe RANGO DE CONDCONES DE USO
EDDHA 5.9 a 7 % pH del suelo 3 a 9; no exponer a radiacin ultravioleta
HEDTA 2 % PH del suelo de 3 a 7.8
DTPA 2.0 a 2.2 % PH del suelo de 3 a 7
EDTA 1.8 a 2.3 % PH del suelo de 3 a 6.5
Modificado de: Zuang, H. 1982. La fertilisation des cultures lgumieres. Centre Technique
nterprofessional des Fruits et Lgumes. Paris.

3.5.2. Literatura Referente aI Dficit o Toxicidad de Nutrientes MineraIes y MetaIes
Pesados.

seminarios.

1. Blevins, D.G. and K.M. Lukaszewski. 1998. Boron in plant structure and function. Annu. Rev.
Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 49:481-500.
2. Hart, J.J., M.R. Welch, W.A. Norvell, L.A. Sullivan, L.V. Kochian. 1998. Characterization of
cadmium binding, uptake, and translocation in intact seedlings of bread and durum wheat
cultivars. Plant Physiol. 116:1413-1420.
3. Meagher, R. B. 2000. Phytoremediation of toxic elemental and organic pollutants. Curr. Op.
Plant Biol. 3:153-162.
4. Santandrea, G., T. Pandolfini, A. Bennici. 2000. A physiological characterization of Mn-
tolerant tobacco plants selected by in vitro culture. Plant Sci. 150:163-170.
5. Welch, R.M. 1995. Micronutrient nutrition of plants. Crit. Rev. Plant Sci. 14:49-82.
6. Zhang, W.-H. and S.D. Tyerman. 1999. nhibition of water channels by HgCl
2
in intact wheat
root cells. Plant Physiol. 120:849-857.

41

Regresar

4. EL ESTRS DESDE EL PUNTO DE VISTA FISIOLGICO

Las manifestaciones fisiolgicas del estrs engloban el conjunto de respuestas
moleculares que son inducidas o modificadas por un factor o factores ambientales. Una
respuesta fisiolgica, como el cambio en la tasa de absorcin de CO
2
, o en el nivel de ciertos
reguladores, es el resumen observable en el nivel macro de gran cantidad de cambios en la
expresin de genes as como en la actividad bioqumica de cierto nmero de enzimas en un
contexto ambiental especfico. Dada su complejidad inherente estos temas estn lejos de ser
entendidos a fondo, sin embargo, la informacin disponible es una herramienta til para la
generacin de acciones prcticas que permitan disminuir los daos inducidos por los factores
ambientales negativos.

Regresar

4.1. ABA, EtiIeno y Otros ReguIadores

Dr. Homero Ramrez Rodrguez

4.1.1 Antecedentes
La ecofisiologa de una especie vegetal involucra la interaccin del medio ambiente con
su fisiologa genticamente establecida, la cual se manifiesta en armona como resultado de
condiciones favorables a su cintica metablica. En este complejo fisiolgico, los
bioreguladores (hormonas) juegan un papel importante, virtualmente en cada proceso desde la
germinacin de semilla hasta la senescencia de cualquier rgano de la planta. Su presencia
ocurre de acuerdo al proceso dictado por el cdigo gentico del vegetal. Cuando las
condiciones ambientales cambian sbitamente en forma adversa, la planta sufrir un estrs que
se manifestar negativamente en la mayora de los casos en su fenotipo en el corto, mediano o
largo plazo como consecuencia entre otros factores endgenos en la modificacin de la
presencia o actividad hormonal en un rgano de la planta en un mecanismo fisiolgico
especfico. En base a lo anterior, una identificacin y comprensin oportuna de un estrs ligado
a la fisiologa hormonal, permitir analizar y aplicar alternativas que reduzcan al mnimo el
efecto adverso en la produccin agrcola.

4.1.2. Estrs Hdrico
El elemento agua es el factor ambiental ms directamente relacionado con la produccin
agrcola (Kamalov, 1999) y por lo tanto con un engrane hormonal durante la vida de cualquier
vegetal (Bukovac, 1998).
La aparicin de una sequa corta o prolongada durante el ciclo de vida en un cultivo
agrcola cualquiera, origina casi en forma inmediata un cierre de estomas como mecanismo de
proteccin y/o de resistencia a esa adversidad. Este fenmeno ha sido ligado a incrementos en
los niveles endgenos del cido abscisico (AAB) en la gran mayora de especies vegetales
investigadas (Rojas Garcidueas y Ramrez, 1996). El incremento se observa marcadamente
en la savia del floema en lupina blanca (Hoad, 1990) y cocotero (Pfening et. al. 1998). Similares
estudios han sido reportados en frutos y races de durazno (Kaynas y Kaynas, 1998) y fresa
(Vizzotto, et. al. 1998) En ocasiones, la respuesta de un vegetal bajo un estrs hdrico no
manifiesta un efecto directo con el cido abscisico, en particular cuando la planta recupera su

42

potencial hdrico. Lo anterior parece tener una explicacin con la sntesis previa de los cidos
faseico y dehidroxifaseico en cloroplastos y vacuolas (Faust y Wang 1993).
La importancia del cido abscisico durante un estrs hdrico ha permitido relacionar a
este bioregulador como un factor integrante de resistencia fisiolgica a la sequa. Lo anterior
queda de manifiesto cuando la planta al marchitarse aumenta la concentracin de AAB,
ocasionando una reduccin en la transpiracin al cerrar parcial o totalmente la cavidad
estomtica. Lo anterior puede ser inducido al aplicar AAB exgeno en plantas jvenes de soya,
tomatero, trigo y papa (Rojas Garcidueas y Ramrez, 1996).
El efecto de un estrs hdrico tambin se manifiesta con una notable reduccin en el
contenido de giberelinas, los cuales estn directamente ligadas a una serie de procesos
fisiolgicos en la planta. Lo anterior ha sido establecido en diversos cultivos hortcolas y
agronmicos (Looney, 1996) en los cuales se observa la disminucin de estas hormonas en las
siguientes horas posteriores al inicio de un perodo corto de sequa. Este efecto es muy claro en
giberelinas biolgicamente activas como GA4 y GA7 en bioensayos de Rumex e hipocotilo de
lechuga (Rojas Garcidueas y Ramrez, 1996). Recientemente se ha reportado que la
existencia de un estrs hdrico inhibe el proceso bioqumico de sntesis giberelina al bloquear la
accin de ent-kaurene y cido ent kaurenoico, evitando de esta manera la produccin de
giberelinas A
4
, A
7,
A
9
, A
12
y

A
53
y por consiguiente los procesos fisiolgicos que dependen de
ellos (Aach. et. al; 1995) Garca Martnez, 1998; Gaskin, et. al. 1995; y Hedden y Kamiya,
1997)
Las condiciones adversas de hmedad se reflejan en el tejido vegetal con una rpida
reduccin en la divisin y elongacin celular (Graabe, 1987) resultando en una reduccin en el
crecimiento de tallos (Kobayashi, et. al. 1993), hojas (Glimour, et. al. 1986) y frutos (Garca
Martnez y Hodden, 1997). Este efecto tambin ha sido relacionado con el proceso de sntesis
de giberelinas en semillas inmaduras de manzano en dnde se ha reportado la ausencia de
giberelina con mayor hidroxilacin (Ramrez, 1998 ; Rademacher, 2000).
El etileno es un gas hormonal que regula una serie de etapas fisiolgicas durante el ciclo
biolgico de la gran mayora de cultivos agrcolas (Beyer, et. al., 1985). En el proceso de
maduracin en frutales climtricos tiene una crucial influencia ya que su presencia en el fruto
va ligada a que esa fase bioqumica concluya en forma adecuada o sea modificada (Vendrell,
M. y X. Palomer, 1998).
Por lo tanto su impacto en la planta cuando esta sufre una sequa es de consideracin
debido a los posibles cambios bioqumicos que ocasione. El estrs hdrico estimula la
produccin de etileno en la planta (Riov y Yang, 1982., Beyer y Blomstrom, 1980). Esta
condicin consecuentemente influye en la aceleracin de una serie de procesos fisiolgicos en
diversos cultivos. Por ejemplo reduce el crecimiento vegetativo de un buen nmero de especies
frutales caducifolias (Rom, 1997., Guak, et. al. 2001), origina la senescencia temprana de hojas
(Hyodo, 1995), estimula la cada prematura de flores y hojas (Beyer, et. al., 1985; Reyes, et.,al.,
Motsenbocker y Arancibia, 2000). La coloracin y maduracin de frutas como tomate, manzana,
durazno y meln tambin se ve acelerada (Greene, 1997., Pretel, et. al. 1998., Kim, et.,
al.,2001), lo que trae como consecuencia un decaimiento rpido en la calidad de esa fruta
(Basiouny y Basiouny, 2000., Kang, et., al.,2001., Kim. et., al., 2001).
En base a los diversos reportes mencionados en esta seccin sobre el concepto sequa-
etileno, y considerando su metabolismo de sntesis en el cual destaca su precursor
aparentemente inicial metionina y el inmediato a su sntesis identificado como cido
carboxilico 1 amino ciclopropeno (AAC), es importante conocer lo anterior particularmente
cuando se trata de evitar o contrarrestar su presencia en el tejido vegetal y evitar efectos
adversos como los ya mencionados.
Recientemente, se ha considerado al aminoetoxi-vinilglicina (AVG) como una alternativa
por evitar los efectos adversos del etileno como resultado de un estrs en diversos cultivos
(Rath, et. al; 2001; Kim, et. al; 2001 Kang, et. al; 2001). Existe evidencia que demuestra que el

43

AVG inhibe la formacin de la enzima ACC-sintetasa evitando con esto la produccin de ACC y
por lo tanto de etileno en frutales como manzano (Kang, et. al., 2001)
La presencia de un estrs hdrico en plantas no parece tener un efecto directo o
consistente en bioreguladores como auxinos y citocininas . Los reportes indican que estas
hormonas parecen reaccionar posteriormente a la influencia de cido abscisico, etileno y
giberelinas (Rojas Garcidueas y Ramrez., 1996); Sin embargo existe informacin que indica
aunque en una forma no muy contundente que el estrs ambiental "pudiera aumentar en la
planta los niveles de cido jasmonico y metil jasmonato (Saniewski, 1995). Estos bioreguladores
de origen natural se distribuyen ampliamente en plantas vegetales y estn tambin ligadas a la
produccin de etileno en tomate (Czapski y Saniewski, 1992), manzano (Prez, et. al; 1993) y
arroz (Chen, et., al; 1994).

4.1.3 Estrs por Temperatura
En el reino vegetal, cualquier planta superior posee desde su germinacin hasta
senescencia sus tres temperaturas cardinales (mnima, optima y mxima).
En base a esta caracterstica, es de consideracin saber que los efectos de un estrs de
temperatura en plantas estn ligados a interacciones causadas por otros factores ambientales
como la luz, y sequa. Por lo tanto, una condicin adversa de temperatura, impactar
directamente en la bioqumica vegetal, la cual se manifestar en diversos fenotipos del mismo.
Existe evidencia que la reduccin en fotosntesis y respiracin como resultado de un estrs de
temperatura elevada es la manifestacin de un agotamiento de reservas al ocasionarse el cierre
estomtico y aumentarse considerablemente los niveles endgenos de cido abscisico y etileno
(Rojas Garcidueas y Ramrez, 1996; Rom, 1997; Du y Tachibana, 1995).
Este incremento a su vez se integra a una disminucin de giberelinas, auxinas y
citocininas (Looney, 1997; Greene, 1997; Rademacher, 2000; Ramrez and Benavides, 2001).
Cuando el efecto de una alta temperatura esta presente, sta se refleja en diversos
parmetros de cultivos de los cuales una reduccin en el crecimiento de los rganos es
evidente (Bertling, et. al; 2001).
La maduracin de la fruta tambin se ve acelerada con esta incidencia (Retamals, et. al.,
1995; Tominaga, et, al; 1995; Utsunomiya, et., al; 1995; Shim, et., al; 2001).
Una planta puede morir por fro cuando se paraliza el sistema enzimtico crtico o
cuando cesa el flujo de nutrientes al aumentar la viscosidad de el agua.
Temperaturas justo menores a 0
o
C originan que el agua extracelular se congele;
mientras que se requieren temperaturas muy negativas para que el agua protoplsmica o
vacuolar se congele. Esta condicin adversa provoca disturbios hormonales tales como
reduccin en el contenido de giberelinas y auxinas (Rojas Gardicueas y Ramrez, 1996) e
incrementos en cido abscisico (Looney, 1997).
El concepto de estrs por fro, tiene una gran importancia en la fisiotecnia hortcola y en
particular en los frutales caducifolios que han sido establecidos en regiones con inviernos
benignos (insuficiente fro) y heladas tardas (Erez, et., al.; 2000). Es comn encontrar en la
actualidad variedades de frutales como manzano y durazno con requerimientos de bajo fro en
zonas de invierno medio en donde la floracin de los mismos es peligrosamente expuesta ao
con ao a temperaturas bajo cero durante la primavera (Erez, 1987 ; Erez, 1995; Khanizadeh,
et., al., 2000). En base a esas experiencias, investigaciones han sido dirigidas a retrazar la
brotacion de yemas florales y/o a proporcionar algun "protector quimico a las mismas cuando
estan en plena floracion. Los retardantes de crecimiento tales como Alar, PP333, paclobutrazol,
Apogee y Regalis son generalmente aplicados en el otoo con el fin de que la apertura floral
sea retrazada (Rojas-Garcidueas y Ramirez, 1996 ; Greene, 1997; Rademacher, 2000;
Rademacher, 2001). En terminos generales se ha hipotetizado que estos retardantes de alguna
manera bloquean temporalmente la actividad de ritmos circandianos que ocurren en la yema

44

floral durante su etapa de letargo, provocando un retrazo en la aparicion del factor o factores
que dirigen la sintesis de giberelinas y citocininas (Ramirez, 2001).
Cuando la floracion esta presente y existe el riesgo de heladas, el uso de Frost Block
(Warner, 2000), Frostgard, Teric 12A23B y Brij 35 (Holubowicz, 1993) han sido evaluados,
reportandose una proteccion hasta por 15 dias a temperaturas de 5C. Se ha sugerido que
estos productos de alguna manera modifican la estructura quimica de las membranas mas
exteriores de la flor, lo que permite acrecentar el grozor de ellas, originando una barrera
adicional que evita la penetracion de la baja temperatura al interior de la flor (Faust y Wang,
1993).
La falta de acumulacion de frio invernal traeria como consecuencia en frutales
caducifolios una brotacion retrazada, debil y desuniforme. Esto se evita con la aplicacin de
compendadores de frio tales como citocininas, giberelinas, Compensor (Rojas-Garcidueas y
Ramirez, 1996) y Cianamida Hidrogenada (Erez, 2000). Estos quimicos activan el metabolismo
de la yema, previo a su brotacion (citocininas y giberelinas) o causan un secamiento de las
escamas de la yema y una toxicidad (Cianamida Hidrogenada).
Cuando el estrs de frio, daa parcialmente la flor de frutales templados y con el
conocimiento que el saco embrionario permanece viable, es posible "cuajar el fruto con la
aplicacin de mezclas hormonales a base de auxinas+ citocininas+ giberelinas.Esto ha
quedado demostrado en cerezo , durazno (Johnson, 1997) y manzano (Fellman, 1997), cuando
los organos masculinos fueron destruidos por heladas tardas de 3C.

4.1.4. Otros Estreses Inducidos por eI Ambiente
Las especies frutales establecidas en diferentes condiciones ecolgicas, con frecuencia
sufren los efectos de cambios extremos en el medio ambiente que se reflejan en algun estrs
de la especie vegetal.
El "pao del fruto del manzano es un desorden fisiolgico aparentemente causado por
la interaccion de un exceso de luz solar y una humedad relativa baja, originandose con esto una
plasmolisis y rotura de celulas de la epidermis de la fruta en donde los niveles de giberelinas y
auxinas son extremadamente bajas (Fellman, 1997 ; Rath, et., al., 2001).
En drupas como cerezo, chabacano y durazno, es muy frecuente que durante el verano
cuando se presentan lluvias fuertes y temperaturas elevadas, se origina partiduras en los
bordes laterales del fruto.Esta deficiencia refleja una ausencia de giberelinas y citocininas en
ese tejido afectado(Johnson, 1997 ; Johnson, et., al.; Rojas- Garcidueas y Ramirez, 1996).
Los arboles con excesivo desarrollo vegetativo, originan que la fruta mas sombreada no madure
en su ciclo normal y por lo tanto no se genere en el mismo, la produccion de pigmentos como
antocianinas y carotenoides (Ban et., al., 2000). Esta condicion origina que la presencia y
efectos de giberelinas se mantengan y hormonas como el etileno no sean sintetizadas para el
estimulo de maduracion en frutales climatricos como manzana (Looney, 1997).
La descoloracion y manchas en la superficie de frutos ocurre cuando el medio ambiente
de los mismos ha sido contaminado con excesos de plaguicidas o diferentes iones de fierro,
cobre, aluminio, azufre y CO
2
. Esta condicin provoca en el tejido producciones excesivas de
acido abscisico y etileno en el tejido, estimulando con ello una rapida degradacion del mismo
(Fellman, 1997; Johnson, 1997).
La calidad de luz solar cuando es modificada, tambien origina estrs en plantas.Esto es
evidente en cebolla asiatica al no formar bulbos cuando la planta es expuesta a periodos
prolongados de luz rojo lejano (Yamasaki, et.al., 2000).En tomate y algunas cucurbitaceas
como meln y calabacita, la altura de la planta y su fenotipo foliar son modificados cuando el
engrane fitocromo rojo/rojo lejano es alterado. Esta condicion parece modificar el proceso de
fotomorfogenesis al mantener por un tiempo prolongado el sistema del opern en la posicion
"abierta( Takaichi, et.,al., 2000).

45

4.1.5. Literatura Referente a ReguIadores deI Crecimiento
seminarios.

1. Grill, E. and A. Himmelbach. 1998. ABA signal transduction. Curr. Op. Plant Biol. 1:412-418.
2. Himmelbach, A., M. ten, E. Grill. 1998. Signalling of abscisic acid to regulate plant growth.
Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 353:1439-1444.
3. Solano, R. And J. Ecker. 1998. Ethylene gas: perception, signaling and response. Curr. Op.
Plant Biol.. 1:393-398.

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4.2. Cambios en eI Aparato Fotoqumico de Ios CIoropIastos


La relacin molar entre los fotosistemas y , el aporte de flujo de pares electrn-protn
hacia los diferentes fotosistemas, el perfil de especies qumicas y el contenido relativo de
carotenoides son caracteres altamente variables en las membranas de los tilacoides
cloroplsticos. Estos cambios se orientan hacia la obtencin de un balance adecuado entre la
captura de energa, la trasduccin energtica de la misma y la disipacin trmica. Cualquier
factor ambiental que origine un desbalance entre la captura de energa y su transduccin dar
lugar necesariamente a mayor actividad de disipacin, estos arreglos dinmicos tienen un
profundo efecto sobre la expresin de genes, la actividad fotosinttica y sobre la morfognesis
de la planta.

4.2.1. Literatura Referente aI Aparato Fotoqumico de Ios CIoropIastos

seminarios.

1. Demmig-Adams, B. and W.W. Adams . 1996. The role of xanthophylls cycle carotenoids in
the protection of photosynthesis. Trends Plant Sci. 1:21-26.
2. Demmig-Adams, B., A.M. Gilmore, W.W. Adams . 1996. n vivo functions of carotenoids in
higher plants. FASEB J. 10:403-412.
3. Mller, P., X.-P. Li, K.K. Niyogi. 2001. Non-photochemical quenching. A response to excess
light energy. Plant Physiol. 125:1558-1566.
4. Ort, D. 2001. When there is too much light. Plant Physiol. 125:29-32.

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4.3. Respuestas Estomticas


Aunque ya fue considerada una parte de discusin acerca del comportamiento
estomtico en relacin al estrs inducido por el dficit hdrico, en esta parte se ampliar dicha
presentacin para incluir el efecto de mayor cantidad de factores ambientales, no solo sobre la
actividad de apertura/cierre estomtico, tambin ser considerada la cuestin de la
morfognesis y el arreglo espacial de los estomas, eventos que muestran gran sensibilidad a
los estmulos ambientales.

3.1.2. Estomas: Anatoma y FisioIoga.
La fisiologa estomtica es clave para la determinacin de la eficiencia en el uso del
agua. Por ellos se incluye esta seccin en donde se describen las estructuras y mecanismos
utilizados por estas complejas estructuras que controlan la interfase entre los tejidos internos y
la atmsfera del dosel.

3.1.2.1. MorfoIoga Bsica deI Estoma. Los estomas son aberturas en la epidermis rodeadas
por dos clulas. Como en griego estoma significa boca, se utiliza a menudo esta palabra para
designar nicamente la abertura del estoma; aqu el trmino estoma incluye las clulas
oclusivas y la abertura situada entre ellas (Figura 3.2). Mediante cambios de forma, las clulas
oclusivas controlan el tamao de la abertura. Esta abertura conduce al interior de un amplio
espacio intercelular llamado cmara substomtica, que se contina con los espacios
intercelulares del mesofilo. En muchas plantas dos o ms clulas adyacentes a las oclusivas
parecen estar asociadas funcionalmente a ellas y se distinguen por su morfologa de las otras
clulas epidrmicas. Se las llama clulas anexas o adjuntas (Esau, 1976).
Los estomas son muy frecuentes en las partes verdes areas de las plantas,
particularmente en las hojas. Se encuentran en algunas plantas acuticas sumergidas, pero no
en otras. Los ptalos de las flores tienen a menudo estomas, a veces no funcionales. Tambin
se encuentran en los estambres y gineceos. En las hojas verdes se presentan en ambas caras
(hoja anfistomtica) o en una sola, ya sea la superior (hoja epistomtica) o, de modo ms
general, en la inferior (hoja hipostomtica) (Esau, 1976).
En las hojas paralelinervias, tales como las de las monocotiledneas y algunas
dicotiledneas, y tambin en las agujas de las conferas, los estomas se disponen segn filas
paralelas. Las cmaras subestomticas de cada fila se unen y las clulas del mesfilo que
limitan estas cmaras forman un arco sobre canal intercelular o debajo de l. En las hojas con
venacin reticular los estomas se hallan dispersos (Esau, 1976).
Las clulas oclusivas pueden encontrarse al mismo nivel que las clulas epidrmicas
adyacentes, o bien pueden sobresalir o quedar por debajo de la superficie de la epidermis. En
algunas plantas los estomas estn reducidos a la epidermis que recubre ciertas depresiones de
las hojas, las criptas estomticas. Los pelos epidrmicos pueden estar tambin muy
desarrollados en tales criptas (Esau, 1976).
Las clulas oclusivas son generalmente de forma arrionada vistas de frente y con
engrosamientos de la membrana en los bordes superior e inferior. Vistos en seccin, tales
engrosamientos semejan cuernos. A veces se presentan nicamente en el borde superior. Y a
veces faltan. Si ambos engrosamientos estn presentes, el superior delimita la cavidad frontal

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situada por encima del poro del estoma, y el inferior cierra la cavidad posterior que queda entre
el poro y la cmara subestomtica. Una notable caracterstica de los estomas es el desigual
espesor de las membranas de las clulas oclusivas. Esta particularidad parece relacionarse con
los cambios de forma y volumen (y los concomitantes cambios tamao en la abertura
estomtica) que experimentan las clulas oclusivas debido a fluctuaciones en la turgencia de
las mismas (Esau, 1976).

Figura 3.2. En la parte de arriba aparece un diagrama esquemtico de la estructura de un
estoma mostrando sus partes. En la parte de abajo se ilustra una fotografia de una impresin
foliar de una planta de chile en donde se aprecian claramente los estomas, las clulas
subsidiarias o adyacentes y las clulas epidrmicas, no asociadas directamente con las clulas
guarda, llamadas clulas tabloides. La barra de escala en la parte inferior derecha corresponde
a una longitud de 14 m.

La causa primaria de los cambios de turgencia en las clulas oclusivas no est
definitivamente establecida. La causa inmediata parece ser la condensacin e hidrlisis del

48

almidn contenido en los cloroplastos. La fotosntesis de por s no es suficiente para explicar los
rpidos cambios de presin osmtica en relacin con el mecanismo de abertura y cierre del
estoma. Entre los factores ambientales que influyen en el cambio de tamao del poro
estomtico, la concentracin del dixido de carbono parece desempear un importante papel
(Ketellapper, 1963).
A juzgar por el polimorfismo de las clulas oclusivas, los mecanismos responsables de la
apertura y cierre de los estomas deben ser variados. En un tipo muy comn, el cambio en la
forma de las clulas oclusivas se debe a la mayor delgadez y consiguiente extensibilidad de la
membrana ms apartada de la abertura estomtica, la llamada membrana posterior. Cuando
aumenta la turgencia, la membrana delgada se abomba apartndose de la abertura, mientras
que la membrana frontal (la que est frente al poro) queda recta o cncava. La clula,
considerada en conjunto, se aparta de la abertura, por lo que sta aumenta de tamao. Cuando
disminuye la turgencia ocurre todo lo contrario (Esau, 1976).
Otro tipo de mecanismo estomtico es el de las gramneas y ciperceas. Sus clulas
oclusivas son bulbosas en sus extremos y rectas en la parte media. Esta porcin media tiene la
membrana muy engrosada, pero desigualmente; los extremos bulbosos son de membranas
delgadas y pueden ser incompletas entre los extremos de dos clulas adyacentes, de modo que
los protoplastos de las dos clulas oclusivas son parcialmente confluentes (Esau, 1976).
El aumento de la turgencia determina la hinchazn de las porciones bulbosas y la
consiguiente separacin de las porciones medias de ambas clulas. El ncleo de las clulas
oclusivas de las gramneas es filiforme y toma la forma del lumen celular. Tiene los extremos
engrosados unidos por la parte media delgada como un hilo. Los estomas de las conferas son
hondos y parece como si estuviesen suspendidos de las clulas anexas que se disponen
curvadas sobre ellos. En su parte media las clulas oclusivas son de secci6n elptica y
estrechas. En los extremos, tienen un lumen ms amplio y seccin triangular. La caracterstica
ms notable de estas clulas oclusivas es que sus membranas y las de las clulas anexas
estn parcialmente lignificadas (Esau, 1976).
Las cavidades frontales de los estomas de las conferas y de algunas angiospermas
estn a menudo ocluidas por material finamente granular o alveolar, probablemente de
naturaleza cuticular (Turrell, 1947). La estructura de las membranas de las clulas oclusivas es
comparable a la de las restantes clulas epidrmicas de las mismas hojas. Estn usualmente
cutinizadas en las capas externas y cubiertas por una cutcula. Como ya se indic
anteriormente, la cutcula se extiende a travs de la abertura estomtica hasta la cmara
subestomtica, donde se une a la cutcula interna. Las clulas oclusivas muestran lignificacin,
al menos en parte de sus membranas, en las criptgamas vasculares, gimnospermas,
gramneas, ciperceas y ciertas dicotiledneas (Esau, 1976). Ultraestructuralmente se ha
reconocido una orientacin longitudinal de las microfibrillas en las clulas oclusivas del
coleptilo de la Avena (Setterfield, 1957).

3.1.2.2. DesarroIIo de Ios Estomas. Los estomas se forman mediante divisiones diferenciales
en la protodermis. Despus de varias divisiones, una determinada clula protodrmica
resultante de las mismas se transforma en el precursor inmediato de las clulas oclusivas. Esta
clula es la llamada clula madre de las clulas oclusivas, la cual se divide para dar lugar a dos
clulas que aumentan de tamao y adquieren la forma arrionada caracterstica de las clulas
oclusivas. El rea que corresponde al futuro poro del estoma presenta una masa lenticular de
material pctico antes de separarse las membranas. Probablemente se trata del material
intercelular hinchado antes de su disolucin. Las clulas madres de las clulas oclusivas ,
encuentran al mismo nivel que las clulas epidrmicas adyacentes. El estoma maduro puede
quedar por encima o por debajo de la superficie de la epidermis; el cambio de posicin tiene
lugar durante la maduracin del estoma, mediante reajustes mutuos entre las clulas
epidrmicas y entre stas y las del mesfilo. ncluso en las hojas de las conferas, en las cuales

49

las clulas oclusivas estn muy hundidas, las clulas madres de los estomas se hallan al mismo
nivel que las restantes clulas epidrmicas (Cross, 1942). Al iniciarse el estoma se encuentran
en el mesofilo espacios intercelulares ms o menos visibles; ms tarde se desarrolla un ancho
espacio intercelular, la cmara substomtica (Esau, 1976).
La secuencia de divisiones que preceden a la formacin del estoma vara 1 las distintas
especies, de modo que las clulas oclusivas y las anexas pueden no tener ninguna relacin o
estn ms o menos relacionadas. En las gramneas, por ejemplo, el precursor inmediato de la
clula oclusiva se origina en una hilera de clulas, y las clulas anexas en dos hileras
adyacentes (Stebbins y Shah, 1960). Los estomas de las gramneas son ejemplo de clulas
anexas del tipo pergeno (del griego, alrededor de y descendencia), esto es, clulas que no
provienen de la clula madre primaria (Florin, 1958). Las clulas anexas de Drimys proceden de
la clula madre primaria y se denominan mesgenas (del griego, en el centro y descendencia).
La distincin entre mesgeno y pergeno requiere un estudio del desarrollo, porque en el
ejemplar maduro no se manifiesta necesariamente la relacin ontogentica de las clulas; y la
distincin entre estas dos clases puede no tener significado fisiolgico.
El examen del parentesco entre las clulas trae la cuestin de en qu momento en la
ontogenia de un estoma la diferenciacin citolgica de la clula protodrmica indica el comienzo
de dicha ontogenia. Se ha descrito repetidas veces que el precursor de la clula oclusiva se
distingue por la densidad de su citoplasma; estudios del desarrollo indican que este carcter
resulta de una polarizacin citoplasmtica -acmulo de citoplasma en un extremo de la clula-
antes de que la clula madre primaria del estoma se divida (Stebbins y Shah, 1960). Por el
gradiente resultante de la polarizacin tiene lugar una divisin asimtrica que da origen a un
pequeo precursor de la clula oclusiva y a una clula epidrmica grande, menos
especializada. Es posible que una secuencia de polarizaciones asimtricas se efecte mucho
ms pronto, durante la formacin de la clula madre primaria del estoma (Stebbins y Shah,
1960).
En una hoja dada, los estomas no se forman todos al mismo tiempo, sino unos despus
de otros a travs de un considerable perodo del crecimiento de la hoja. Pueden distinguirse, en
conjunto, dos tipos principales de desarrollo de los estomas en la hoja (Esau, 1976). En las
hojas paralelinervias, cuyos estomas se disponen segn filas longitudinales, las diferentes
etapas de desarrollo de los estomas pueden observarse en orden de sucesi6n en las porciones
cada vez ms diferenciadas de las hojas (esta secuencia es baspeta, esto es, a partir del
extremo de la hoja). En las hojas con venaci6n reticular, las diferentes etapas de desarrollo de
las hojas aparecen mezcladas en mosaico, de forma que los estomas maduros se presentan al
ado de los inmaduros. El primer tipo es caracterstico de la mayora de las monocotiledneas y
de unas pocas dicotiledneas (Tragopogon. Thesium, etctera); el segundo, de la mayora de
las dicotiledneas y de unas pocas monocotiledneas (arceas, esmilacoideas, tacceas,
dioscoreceas, etc.). Ambos tipos de desarrollo se encuentran entre las criptgamas vasculares
(Esau, 1976).

3.1.2.3. CIasificacin de Ios Estomas. El modo de desarrollo de los estomas y su relacin
espacial con las clulas vecinas son caractersticas tiles para los problemas de clasificacin y
filogenia en las angiospermas y conferas. Las clasificaciones S referan a los distintos tipos de
estomas, pero en la actualidad se basan el la relacin existente entre los estomas y las clulas
anexas.
En las gimnospermas, Florin (1958) distingue dos tipos principales de complejos
estomticos, el haploqulico (labios simples), de clula anexas pergenas, y el sindetoqulico
(labios compuestos), de clulas anexas mesgenas. El tipo haploqulico es muy variable en
detalles y se considera como el ms primitivo. Aunque estas categoras se han establecido por
medio de estudios ontogenticos, la clasificaci6n se usa tambin para los fsiles basndose. en
los ejemplares maduros que caracterizan ambos tipos.

50

En las dicotiledneas, el uso de los ejemplares maduros, formados por los estomas y
sus clulas pr6ximas, es adecuado para establecer una clasificacin (Metcalfe y Chak, 1950).
Para los tipos principales se ha propuesto la siguiente: anomoctico (clulas irregulares,
antiguamente llamado tipo ranunculceas), sin clulas anexas; anisoctico (clulas desiguales,
antiguamente tipo crucferas), con tres clulas anexas alrededor del estoma, una mucho ms
pequea que las otras dos (variante de anisoctico); paractico (clulas paralelas, antiguamente
tipo rubiceas), con una o ms clulas anexas a cada lado del estoma en posicin paralela al
eje longitudinal; diactico (clulas en cruz, antiguamente tipo cariofilceas), con dos clulas
anexas que envuelven al estoma, su membrana comn forma ngulos rectos con el eje
longitudinal del estoma. Entre estos tipos hay variaciones y algunas, probablemente, merecen
denominacin especial; por ejemplo, el actinoctico, con las clulas anexas dispuestas segn
los radios de un crculo (Esau, 1976).
En las monocotiledneas se han descrito cuatro clases de complejos estomticos
(Stebbins y Kush, 1961); dos de ellas con cuatro o ms clulas anexas que envuelven a las
oclusivas (Rhoeo, Commelina), una con dos clulas anexas (gramneas) y otra con ninguna
(Allium). Los tipos con varias clulas anexas se consideran ms primitivos, los otros dos
derivados, segn caminos independientes, por reduccin en el nmero de clulas anexas
(Esau, 1976).

4.3.2. Literatura Referente a Respuestas Estomticas

seminarios.

1. MacRobbie, E.A.C. 1998. Signal transduction and ion channels in guard cells. Phil. Trans. R.
Soc. Lond. B 353:1475-1488.

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4.4. AsimiIacin de CO
2
y Fotorespiracin

Dr. Ratikanta Maiti
Profesor Investigador deI Departamento de BioIoga y Qumica, UDLAP

La cuestin de cmo lograr un aumento no solo en la asimilacin de CO
2
, sino tambin
en sus procesos asociados como la carga/descarga del floema y la relacin fuente-demanda
como mecanismo regulador de la sntesis y reparto de fotosintatos, es crtica si consideramos la
importancia que comenzarn a tomar las tierras marginales en la produccin de alimentos. Eso
sin mencionar la posibilidad de incremento en los eventos climticos extremos en nuestro
planeta, hecho que de ocurrir en el corto plazo nos obligar a producir alimentos en condiciones
menos favorables a las actuales. Es urgente una mayor comprensin de los procesos
involucrados y mayor cantidad de enfoques originales en el tratamiento de esta problemtica.
El proceso de fotorespiracin es clave para la planta ya que de este metabolismo C2 se
deriva el metabolismo C1. Tal parece que de esta funcin original los organismos fotosintticos
terrestres comenzaron a aplicar el proceso para otra funcin enteramente diferente: la
disipacin trmica en los ciclos acoplados carbono-nitrgeno.

51

4.4.1. Literatura Referente a Fotosntesis y Respiracin
seminarios.

1. Horton, P. 2000. Prospects for crop improvement through the genetic manipulation of
photosynthesis: morphological and biochemical aspects of light capture. J. Exp. Bot. 51
GMP:475-485.
2. Richards, R.A. 2000. Selectable traits to increase crop photosynthesis and yield of grain
crops. J. Exp. Bot. 51 GMP:447-458.

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5. EL ESTRS DESDE EL PUNTO DE VISTA BIOQUMICO

Los estados de estrs inducidos por varios factores ambientales como la temperatura,
sequa y salinidad tienen como factor comn su efecto en el estado hdrico de la planta. El
estudio y entendimiento de los mecanismos bioqumicos y moleculares por medio de los cuales
las plantas soportan el estrs bitico y abitico son necesarios para lograr un incremento en la
tolerancia de los cultivos. nvestigando las plantas bajo estrs podemos aprender acerca de la
plasticidad y de los lmites de las vas metablicas. Se tienen asimismo preguntas de naturaleza
ecolgica y evolutiva que requieren respuesta: Los genes que confieren tolerancia en halofitas
y xerfitas son comunes a todas las especies, pero no se expresan en las plantas sensibles a la
salinidad o en las glicofitas (no resistentes a la sequa) en aras de la alta productividad? o por
otro lado, estas especies resistentes obtuvieron nuevos genes durante su historia evolutiva de
tal forma que fueron capaces de ocupar ambientes estresantes? De que forma la introduccin
de genes que confieren tolerancia al estrs en especies de importancia econmica afectarn la
productividad en el campo? Existe relacin entre la tolerancia al estrs inducido por
condiciones abiticas y la resistencia al estrs bitico?
Las especies extremadamente tolerantes son una rica fuente de genes para la
introduccin de los mismos en otras especies. El orden Caryophyllales (Dicotiledneas) provee
un buen ejemplo. Las familias de este orden como la Cactaceae, Chenopodiaceae y Aizoaceae,
incluyen muchas especies que ocupan habitats extremos y producen compuestos exticos que
les confieren tolerancia a esas condiciones. Se tienen asimismo las plantas CAM y C4, y otras
especies como la planta de la resurreccin (Craterostigma plantagineum) y la llamada "ice plant
(Mesembryanthemum crystallinum, Aizoaceae) del desierto de Namibia, son un ejemplo de las
ms de 100 especies conocidas de plantas extremadamente tolerantes a la desecacin que
cuentan con compuestos inusuales que les confieren la habilidad de rebasar los eventos
ambientales extremos. Todas estas especies pueden aportar genes individuales, o incluso vas
metablicas, para ser introducidos en plantas que carecen de ellos o no los expresan bajo
condiciones de estrs.
Las vas metablicas ms familiares pueden tambin ser explotadas para producir
plantas tolerantes al estrs. Algunas de ellas no requieren obtener genes de especies
tolerantes: la sobreexpresin o la alteracin de la regulacin de un gene endgeno puede ser
suficiente. Ejemplos relevantes son la sobreexpresin de genes que codifican compuestos
como la glicinbetana, prolina, polioles y fructanos.

52

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5.1. Estrs por Factores Abiticos.


En esta parte ser discutida la alteracin en el metabolismo que ocurre como respuesta
a la accin negativa de factores ambientales abiticos. Los diferentes subcaptulos incluyen las
principales respuestas reportadas en la literatura.

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5.1.1. AcumuIacin de MetaboIitos Nitrogenados

5.1.1.1. ProIina. Es un aminocido incluido en la familia de pequeas molculas, conocidas
como osmolitos o "solutos compatibles, dentro de la cual se encuentran otros aminocidos,
compuestos amonio cuaternarios (glicinbetana, prolinbetana, B-alaninbetana y colina-O-
sulfato) y sulfonio terciarios como el 3-dimetilsulfoniopropionato (DMSP). Tanto los amonio
cuaternarios como el DMSP se derivan de diversos aminocidos precursores.
Estos osmoIitos tienen la propiedad de no tener carga neta a pH neutral, y son
altamente solubles en agua. En alta concentracin tienen la propiedad de no ejercer efecto
perturbador en las interacciones entre el agua y las macromolculas. Al contrario que los
solutos no compatibles (como los iones inorgnicos), los cuales invaden la esfera de hidratacin
de las protenas, favoreciendo el desdoblamiento o apertura, los solutos compatibles tienden a
ser excluidos de la esfera de hidratacin de las macromolculas manteniendo su estructura
espacial (Low, 1985). Los osmolitos juegan un papel pivotal en el ajuste osmtico necesario en
respuesta al dficit hdrico, salinidad o cualquier otro factor que aumente la fuerza osmtica del
medio.
La acumulacin de prolina es una respuesta metablica comn al dficit de agua y a la
salinidad. Este aminocido altamente soluble se acumula en hojas de muchas especies
halofitas creciendo en ambientes salinos (Briens y Larher, 1982), en los tejidos foliares y
meristemos apicales areos de plantas que experimentan estrs de agua (Jones et al., 1980),
en polen bajo desecacin (Lansac et al., 1996), en tejidos radicales expuestos a bajo potencial
de agua (Voetberg y Sharp, 1991) y en cultivos celulares adaptados al dficit de agua (Rhodes
et al., 1986) y a la exposicin al NaCl (Thomas et al., 1992).
La prolina protege las membranas y las protenas contra los efectos adversos de la alta
concentracin de iones inorgnicos y de los extremos de temperatura (Santoro et al., 1992). La
prolina funciona tambin como un atrapador de radicales libres (Smirnoff y Cumbes, 1989). La
prolina acumulada en respuesta al dficit de agua o a la salinidad se localiza primariamente en
el citosol (Pahlich et al., 1983).
En cultivos celulares de tabaco adaptado a 428 mM de NaCl, la prolina constituye
alrededor del 80% del total de aminocidos libres (Rhodes y Handa, 1989). La concentracin de
prolina en el citoplasma de esas clulas puede rebasar los 200 mM y contribuir sustancialmente
al ajuste osmtico citoplsmico. La concentracin citoslica de prolina en clulas de Distichlis
spicata, tratadas con 200 mM NaCl) fue estimada en 230 mM (Ketchum et al., 1991). En el
pice de la raz de maz la prolina alcanza concentraciones de 120 mM cuando las races son

53

expuestas a un potencial de agua de -1.6 Mpa. La prolina acumulada representa hasta el 50%
del total de solutos dedicados al ajuste osmtico en esta regin de la raz (Voetberg y Sharp,
1991). Esta acumulacin de prolina en respuesta al dficit hdrico involucra deposicin de este
compuesto en la zona de crecimiento y parece requerir ABA (Ober y Sharp, 1994). Aunque se
sabe que las races producen prolina, no se sabe si la mencionada deposicin en el pice
radical es consecuencia de transporte va floema o sntesis de novo en el pice (Voetberg y
Sharp, 1991).
Los estudios con
14
C y
15
N indican que el principal precursor de la prolina inducida por
estrs es el glutamato (Figura 5.1). El estmulo osmtico causado por la salinidad o dficit
hdrico induce un incremento en la tasa de biosntesis de prolina. La acumulacin de prolina
involucra induccin y activacin de las enzimas biosintticas (Delauney y Verma, 1993; Peng et
al., 1996), relajacin del control inhibitorio de la va biosinttica (Delauney y Verma, 1993),
disminucin en la oxidacin de prolina a glutamato por inhibicin de la prolina deshidrogenasa
(Peng et al., 1996), menor utilizacin de la prolina en la sntesis de protena (Boggess y Stewart,
1980) y un aumento en el reciclaje de protenas (Fukutoku y Yamada, 1984).
El dficit de agua incrementa la concentracin de prolina en el fluido del floema de la
alfalfa (Girousse et al., 1996), sugiriendo que el aumento en la deposicin de prolina en el pice
de la raz ocurra en parte por prolina transportada va floema. El gene ProT2, que codifica una
protena transportadora de prolina, es inducido por la salinidad o la sequa en A. thaliana
(Rentsch et al., 1996). En el tomate se han identificado genes homlogos como LeProT1 que
codifica un transportador de baja afinidad para prolina y GABA pero de alta afinidad para
glicinbetana (Schwacke et al., 1999).

Figura 5.1. Sntesis de prolina inducida por estrs utilizando como precursor al glutamato.

La prolina exgena es osmoprotectora en bacterias, facilitando el crecimiento en
ambientes hipersalinos (Yancey, 1994). La acumulacin de prolina en el citoplasma es
acompaada por una reduccin en la concentracin de solutos menos compatibles y un
incremento en el volumen de agua citoslica (Cayley et al., 1992). Se han obtenido bacterias
osmotolerantes, por sobreacumulacin de prolina, al modificar el sistema de regulacin de la va
biosinttica de la prolina (Smith, 1985).
En las plantas tambin se ha observado que la prolina aplicada de forma exgena es
osmoprotectora (Lone et al., 1987) y crioprotectora (Santarius, 1992). Por otro lado, la sntesis
de prolina se considera como un mecanismo para disminuir la acidificacin del citoplasma,
manteniendo el cociente NADP
+
/NADPH en valores compatibles con el metabolismo. El
catabolismo de la prolina, una vez terminada la condicin de estrs, puede proveer con
equivalentes de reduccin que mantienen la fosforilacin oxidativa mitocondrial y la generacin
de ATP necesaria para la recuperacin y reparacin de daos (Hare y Cress, 1997).

54

5.1.1.2. GIicinbetana. Es un derivado metil substituido de la glicina que se encuentra en un
gran nmero de microorganismos, plantas verdes y animales (Rhodes y Hanson, 1993). En alta
concentracin la glicinbetana (GB) no interfiere con las funciones citoplasmticas y estabiliza la
estructura y funcin de muchas macromolculas.
La GB parece ser un determinante crtico de la tolerancia al estrs en plantas. Es un
soluto compatible extremadamente eficiente (Le Rudulier et al., 1984) y su presencia se asocia
con el crecimiento de plantas en ambientes salinos o con dficit de agua (Rhodes y Hanson,
1993). La acumulacin de GB es inducida por el estrs y su concentracin se correlaciona con
el grado de tolerancia de las plantas (Saneoka et al., 1995). La aplicacin exgena de GB
aumenta la capacidad de supervivencia de diferentes especies en ambientes extremos (Allard
et al., 1998; Hayashi et al., 1998). La GB es mucho ms efectiva que otros solutos compatibles
para estabilizar in vitro la estructura cuaternaria de enzimas y protenas complejas as como la
estructura altamente organizada de las membranas en condiciones de alta temperatura y
salinidad (Papageorgiou y Murata, 1995).
Respecto al mecanismo de accin de la GB, los estudios fisiolgicos sugieren que este
compuesto acta disminuyendo o evitando el desbalance osmtico entre el entorno extracelular
y el intracelular causado por diferentes tipos de estrs. Dicha accin ocurre solamente cuando
la GB se acumula en alta concentracin (aprox. 400 Mol g
-1
de peso seco) tal como se ha
observado en ciertas especies bajo condiciones de estrs (Rhodes y Hanson, 1993). Sin
embargo, es interesante considerar los resultados obtenidos con plantas transgnicas, en
donde an con niveles bajos de GB (0.2 a 5 Mol g
-1
de peso fresco), que son insignificantes en
el contexto de osmoregulacin, las plantas muestran aumento significativo en la tolerancia al
estrs. Este fenmeno, tambin observado para el manitol, apunta hacia un efecto
osmoprotector, ms que osmoregulador exclusivamente, para la GB. Parece ser que los
componentes celulares protegidos por este compuesto son membranas, complejos enzimticos,
los complejos de transcripcin y traduccin. Si se considera que bajo un estado de estrs se
inhibe la sntesis de novo o el funcionamiento de membranas y protenas involucradas en el
metabolismo bsico, es posible entonces que la GB sea capaz de mantener hasta cierto punto,
al estilo de una chaperonina (Bourot et al., 2000), el funcionamiento metablico promoviendo la
expresin eficiente de los genes y el funcionamiento de sus productos. Al respecto, Alia et al.
(1999) encontraron que la lincomicina, un inhibidor de la sntesis de protena en los
cloroplastos, disminuye el efecto protector de la GB en Arabidopsis.
En un estudio realizado en diferentes especies de la familia Plumbaginaceae se
encontr que estas, adems de la GB, producen tambin colina-O-sulfato, -alanina-betana,
prolina-betana e hidroxiprolina-betana (Hanson et al., 1994). Estos compuestos muestran una
eficacia similar a la GB como osmoprotectores y, de manera interesante, son acumulados de
forma selectiva de acuerdo al habitat en que la planta se desarrolla. Las especies de suelos
altos en sulfato sintetizan colina-O-sulfato, las de suelos salinos sintetizan -alanina-betana y
las encontradas en ambientes ridos sintetizan prolina-betana. No se entiende an de que
forma los distintos estmulos dan lugar a un perfil distinto de acumulacin de osmolitos en
miembros de la misma familia.

5.1.1.3. Literatura Referente a GIicinbetana. Este material se tiene a disposicin de los
estudiantes para su lectura e imparticin de seminarios.

Sakamoto, A. And N. Murata. 2001. The use of bacterial choline oxidase, a
glycinbetaine-synthesizing enzyme, to create stress-resistant transgenic plants. Plant Physiol.
125:180-188.

55

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5.1.2. Sntesis Inducida de PoIioIes.

La acumulacin de polioles, ya sea metabolitos de cadena lineal como el manitol y el
sorbitol (Bieleski, 1982) o polioles cclicos como el mio-inositol y sus derivados metilados
(Loewus y Dickinson, 1982), se correlaciona con la tolerancia a la la sequa y a la salinidad. Los
polioles son compuestos que se encuentran en muchos tipos de organismos, incluyendo
bacterias, levaduras, algas marinas, plantas verdes y animales.
Los polioles parecen funcionar en dos formas que son difciles de separar
mecansticamente: ajuste osmtico y osmoproteccin.
Ajuste osmtico: los polioles actan como osmolitos o solutos compatibles, facilitando
la retencin de agua en el citoplasma y permitiendo la segregacin del sodio en la vacuola o el
apoplasto. Alternativamente, la proteccin de estructuras celulares (probablemente por
atrapamiento de radicales libres) se consigue por interaccin de dichos osmolitos con
membranas, protenas y complejos enzimticos.
Osmoproteccin: la funcin osmoprotectora de los polioles tiene que ver con sus
caractersticas qumicas nicas que les permiten mantener la estabilidad de macromolculas
bajo condiciones de dficit de agua. Aquellos polioles que son azcares no reductores pueden
servir tambin como almacn de carbono durante el estrs (Vernon et al., 1993).

5.1.2.1. InositoI e InositoIes MetiIados. La Figura 5.2 esquematiza un ejemplo de la alteracin
del metabolismo (en este caso la canalizacin alternativa de carbono) que ocurre en condicin
de estrs. El almacn de glucosa 6-fosfato es el origen de la va biosinttica del inositoI,
catalizada por la inositol 1-fosfato sintasa (NO1) y la inositol monofosfatasa. A su vez tanto del
inositol como del inositol-1-fosfato surgen otras vas biosintticas.
La va del inositoI es esencial para la biosntesis de membranas y para la sealizacin
en todos los organismos. NO1 es la nica enzima que cataliza el inicio de la va biosinttica.
Existe una derivacin de esta que da lugar a la acumulacin de inositoles metilados, catalizada
por la inositol O-metiltransferasa (MT1). El inositol y el inositol-1-fosfato tambin dan lugar a la
produccin de otros compuestos que correlacionan con tolerancia al estrs como las gomas,
carbohidratos de la pared celular, carbohidratos de glicoprotenas y muclagos. Las plantas
usan el inositol para sintetizar carbohidratos de reserva como la estaquiosa y la verbascosa, los
cuales son inducidos por el estrs en varias especies. Otro producto de la va de inositol es el
fitato, inositol-hexakisfosfato, el cual sirve como almacn de fosfato en la semilla. Las
reacciones ilustradas en la Figura 5.2 pueden considerarse como un paradigma de lo que
constituye la tolerancia al estrs abitico: la extensin, posiblemente a travs de la evolucin de
nuevos genes, de un paso esencial en la biosntesis de fosfolpidos a otras vas biosintticas,
en las cuales el producto de la nueva va funciona como compuesto osmoprotector.
En M. crystallinum el gene imt1 se encuentra bajo esctricto control ambiental en
cualquier estadio del desarrollo. La induccin de la transcripcin se consigue con los estmulos
de salinidad o baja temperatura (Bohnert et al., 1994). El gene ino1 muestra un patrn de
regulacin similar. La actividad de la enzima MT1 genera D-ononitol, el cual es epimerizado a
D-pinitoI. En las plantas estresadas el pinitol aumenta su concentracin hasta rebasar los 700
mM en el citosol y los cloroplastos, convirtindose en el compuesto de carbono de bajo peso
molecular ms abundante en los tejidos (Adams et al., 1992).

56

Figura 5.2. Mio-inositol, polioles y su metabolismo. El mio-inositol es sintetizado a partir de la
glucosa-6-fosfato por la inositol 1-P sintetasa (NO1) y la inositol 1-P fosfatasa (ns-Pasa). El
manitol y el sorbitol se originan del almacn glucosa 6-P/fructosa 6-P por medio de la manitol 1-
P deshidrogenasa (MtlDH) o la aldosa 6-P reductasa (StlDH) para formar manitol 1-P o sorbitol
6-P. El mio-inositol 1-P puede ser fosforilado posteriormente a fitato (ns-P
6
) que funciona como
almacn de P en las semillas. El carbono del fitato se utiliza por medio de la va de las pentosas
fosfato. El inositol 1-P puede utilizarse para la sntesis de los fosfoinostidos de la membrana
fosfatidilinositol (P), fosfatidilinositol monofosfato (PP) y fosfatidilinositol bifosfato (PP
2
), los
cuales estn involucrados en procesos de transduccin de seales y sirven como fuente de los
segundos mensajeros inositol 1,4,5-P
3
e inositol 4,5-P
2
. El inositol 1-P participa en la formacin
de fosfolpidos y en la biognesis de membranas. El inositol se combina tambin con la
galactosa para formar galactinol, el cual sirve como fuente de galactosil que se incorpora en
varios carbohidratos de almacenamiento vegetativo de la serie de las rafinosas. El inositol es
tambin metilado por la inositol O-metiltransferasa (MT1) formando D-ononitol que se convierte
en D-pinitol por accin de la ononitol epimerasa (OEP1). Estos inositoles metilados funcionan
como osmolitos protectores y son degradados lentamente. El inositol puede asimismo ser
oxidado a D-glucoronato y posteriormente a UDP-D-glucoronato para formar componentes de la
pared celular no celulsicos tales como gomas, muclagos y glicoprotenas. (Figura modificada
de Bohnert et al., 1995.)

57

Utilizando metiltransferasas los grupos metiIo de los inositoles metilados son usados en
otras vas biosintticas que dan lugar a la acumulacin de amino cuaternarios como la
glicinbetana, compuestos sulfonio terciarios (dimetilsulfoniopropionato), poliaminas
(espermina), precursores de lignina (cido sinpico) y etileno. Al igual que los inositoles
metilados, los amino cuaternarios y sulfonio terciarios se encuentran implicados en funciones de
ajuste osmtico y osmoproteccin (McCue y Hanson, 1990). Las metiltransferasas utilizan S-
adenosiltransferasa (SAM) como cosubstrato produciendo, despus de transferir un grupo
metilo, S-adenosilhomocistena (SAH), un potente inhibidor competitivo de la reaccin de
metilacin. El apoyo correlativo para un rol de la transmetilacin en la tolerancia al estrs, tal
como se desprende de los resultados de Espartero et al. (1994), quienes observaron la
acumulacin de transcriptos de SAM sintetasa en tomate sometido a estrs osmtico, vindose
modificado el cociente SAM/SAH.

5.1.2.2. ManitoI. El manitol es un alcohol de seis carbonos que puede ser un fotosintato
importante (hasta el 50% del total de fotosintatos traslocados) en el apio, el olivo y otras
especies. Asimismo es un soluto compatible que puede mediar la proteccin contra el estrs por
salinidad o en general el inducido por la fuerza osmtica. Ya que el manitol puede aliviar la
condicin de estrs, en al actualidad se lleva a cabo un considerable esfuerzo para modificar
las plantas que no lo producen, de tal forma que se exploten los efectos benficos de este
compuesto (Pharr et al., 1999).
Para obtener pIantas transgnicas productoras de manitoI se utiliza el gene mt1D,
que codifica la manitol-1-P deshidrogenasa bacteriana, fusionado al promotor 35S del virus del
mosaico de la coliflor. Al incorporar este gene que se expresa de manera constitutiva en
Arabidopsis o tabaco, especies en donde no se encuentra el manitol ni resistencia a la
salinidad, las plantas acumulan manitol y muestran mayor tolerancia al estrs por sales.
Karakas et al. (1997) encontraron que las plantas transformadas mostraron crecimiento lento, y
los autores postularon que esta respuesta per se genera tolerancia debido a la poca absorcin
de iones. Por otro lado, Shen et al. (1997) obtuvieron mayor tolerancia a la salinidad, sin
observar respuesta negativa sobre el crecimiento en tabaco transgnico, al incorporar al gene
mt1D una secuencia de trnsito cloroplstica, para hacer llegar de manera especfica la
secuencia exgena a los cloroplastos. En este caso las plantas transgnicas acumularon hasta
100 mM de manitol (la mayor parte del cual se encontr en los cloroplastos) y exhibieron
crecimiento y tasa fotosinttica normales en condiciones de salinidad. Adicionalmente las
clulas aisladas y discos foliares del tabaco transformado mostraron mayor resistencia al
paraquat, herbicida que se sabe induce dao severo por estrs oxidativo en los cloroplastos.
Considerando esto es posible que una de las formas en que el manitol funciona como
osmoprotector es atrapando radicales libres generados en los cloroplastos durante la condicin
de estrs. Aunque se desconoce el mecanismo qumico preciso por medio del cual el manitol
funciona como atrapador de radicales libres, su funcin antioxidante ha sido demostrada tanto
in vitro como in vivo (Pharr et al., 1999).
El papeI antioxidante deI manitoI supone mayor importancia en vista de los resultados
del estudio de Moore et al. (1997) quienes encontraron que del 20 al 38% del manitol celular se
encuentra en los cloroplastos del cilantro (Petroselinum crispum) y de Antirrhinum majus,
especies que de manera natural sintetizan y acumulan manitol. La concentracin de este
compuesto en los cloroplastos fue estimada en 100 mM. La sacarosa, el otro fotosintato
importante en las especies mencionadas fue encontrado en baja cantidad en los cloroplastos.
Por otro lado, la ocurrencia de manitol en los cloroplastos implica la accin de un sistema de
translocacin, ya que estos organelos no son el sitio normal de sntesis del manitol.
El efecto protector del manitoI se ha observado tambin en clulas no fotosintticas que
crecen en cultivo celular utilizando manitol o sacarosa como fuente de carbono. Las clulas de
apio que crecen en manitol fueron el doble de resistentes en comparacin con las desarrolladas

58

en sacarosa, creciendo incluso aunque lentamente en 300 mM de NaCl. Ambos tratamientos
dieron lugar a la acumulacin de manitol o sacarosa que funcionaron como osmolitos,
obteniendo la misma osmolaridad celular. En ausencia de NaCl la tasa de crecimiento de las
clulas fue prcticamente igual en manitol y sacarosa (Stoop y Pharr, 1993). Estos resultados
indican que el papel osmoprotector del manitol, an no bien entendido mecansticamente
hablando, no se ve circunscrito a los cloroplastos y que su accin rebasa la de simple osmolito
utilizado en el ajuste del balance de agua. En plantas de arroz la aplicacin exgena de manitol,
que modific los niveles de transcriptos de aquaporinas celulares, fue un determinante de la
resistencia y la recuperacin del dao por congelacin (Li et al., 2000b).
El manitol es sintetizado utilizando la enzima citoslica manosa-6-P reductasa (M6PR).
Por otra parte, la va catablica se inicia con la enzima manitol deshidrogenasa (MTD) y
continua hasta obtenerse fructosa-6-fosfato:

1. manitol + NAD
+
> manosa + NADH + H
+

manitoI deshidrogenasa (MTD)
2. manosa + ATP > manosa-6-P + ADP
hexoquinasa (HK)
3. manosa-6-P > fructosa-6-P
fosfomanosa isomerasa (PMI)

La enzima MTD es capaz de oxidar otros hexitoles (polioles de 6 C) como el sorbitol y el
galactitol, generando L-gulosa y L-galactosa, azcares que no son metabolizadas
posteriormente en las plantas. Si se busca transformar una planta con MTD debe existir
seguridad de que esta no utiliza el sorbitol o el galactitol como fotosintato u osmolito, ya la
accin de la MTD llevara probablemente parte del carbono a un callejn sin salida. En la
naturaleza esto no ocurre ya que las plantas que contienen manitol y MTD no sintetizan sorbitol
o galactitol (Moore et al., 1997). En ausencia de estrs las protenas MTD, HK y PM se
encuentran activas en todos los tejidos de la planta, incluyendo el tejido conductor, en donde al
parecer apoyan en la energizacin de los sistemas de carga y descarga del floema.
La enzima MTD fue fue aislada y clonada encontrndose gran homologa con las
protenas PR inducidas por patgenos de Arabidopsis y cilantro (Williamson et al., 1995).
Adicionalmente MTD fur inducida en cultivos celulares por cido saliclico, un conocido
mediador de respuestas de defensa. Un posible mecanismo de accin de MTD en la resistencia
a patgenos fue propuesto por Stoop et al. (1996). Durante la nvasin por patgenos la planta
produce un choque o descarga oxidativa (un incremento sustancial en corto tiempo de especies
reactivas de oxgeno llamado "oxidative burst) dirigido aparentemente a limitar el crecimiento
del patgeno. Los patgenos, particularmente los hongos, producen manitol que puede inactivar
la respuesta defensiva de la planta atrapando las especies qumicas reactivas. A su vez las
plantas producen MTD (supuestamente inducida como parte de las reacciones de defensa del
vegetal) que transforma el manitol en el azcar manosa, anulando as la accin del patgeno.
En cuanto a los factores abiticos se sabe que la salinidad induce menor abundancia y
actividad de MTD, dando lugar a la acumulacin de manitol pero no de azcares en los tejidos
de las plantas (Williamson et al., 1995; Stoop et al., 1996).

5.1.2.3. Literatura Referente a PoIioIes y MetiIacin. Este material se tiene a disposicin de
los estudiantes para su lectura e imparticin de seminarios.

1. Pharr, D.M., R.T.N. Prata, D.B. Jennings, J.D. Williamson, E. Zamski, Y.T. Yamamoto,
M.A. Conkling. 1999. Regulation of mannitol dehydrogenase: relationship to plant growth and
stress tolerance. Hort Sci. 34:1027-1032.

59

2. Jennings, D.B., M. Ehrenshaft, D.M. Pharr, J.D. Williamson. 1998. Role of mannitol
and mannitol dehydrogenase in active oxigen-mediated plant defense. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 95:15129-15133.

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5.1.3. Absorcin de Iones y CompartimentaIizacin de Ios Mismos

En M. crystallinum se ha observado que bajo dficit de agua y exposicin a alta salinidad
la absorcin de iones es regulada y los mismos son ubicados en compartimientos celulares
especficos. En particular la exposicin al sodio da lugar a que este se deposite formando un
gradiente a lo largo del eje principal de la planta, con la mayor concentracin en los tejidos ms
jvenes. El mismo gradiente se observa en cuanto a la concentracin de D-pinitol. En M.
crystallinum se tienen clulas especialistas, llamadas clulas vesiculares epidrmicas, que se
encuentran preformadas pero que aumentan considerablemente su tamao cuando la planta
est bajo estrs salino. Se ha medido concentracin de sodio de hasta 1 M en estas clulas
(Adams et al., 1992), estando confinado este in a las vacuolas mientras que como
compensacin en el citoplasma aumenta la concentracin de D-pinitol. Este mecanismo
muestra un gran contraste con lo observado en las plantas glicofticas, las cuales tratan de
limitar la absorcin de sodio o bien lo acumulan en los tejidos de mayor edad que, bajo esta
condicin, funcionan como compartimientos de almacenamiento y son eventualmente
sacrificados (Cheeseman, 1988).
Un componente clave para la homeostasis de absorcin de iones, sobre todo en la
condicin de salinidad son los genes que codifican antiporters Na
+
/H
+
que transportan de
manera especfica sodio y litio y lo concentran en la vacuola. La sobrexpresin del antiporter
Na
+
/H
+
de la vacuola permite el crecimiento sostenido de Arabidopsis utilizando 200 mM de
NaCl como agua de riego (Apse et al., 1999). Los estudios fisiolgicos indican que ocurre
excrecin de Na por parte de la raz as como la mencionada deposicin en las hojas, lo cual
indica que la actividad antiporter Na
+
/H
+
remueve el Na de los tejidos o lo concentra en las
vacuolas. El gene SOS1 (Salt Overly Sensitive 1) de Arabidopsis thaliana es inducido por la
salinidad y muestra gran homologa con los antiporters Na
+
/H
+
de bacterias y hongos. Los
mutantes sos1 de Arabidopsis son muy sensibles a niveles altos de Na
+
y niveles bajos de K
+

(Shi et al., 2000).

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5.1.4. Cambios en Ia PermeabiIidad deI Agua

El descubrimiento de protenas acarreadoras especficas para el agua (aquaporinas),
pertenecientes a la superfamilia de canales proticos asociados a membranas llamados MP
(Major ntrinsic Proteins), fue un avance importante para la comprensin de los mecanismos por
medio de los cuales las plantas se adaptan al estrs inducido por el dficit de agua. La
existencia de las aquaporinas fue supuesta a partir de estudios fisiolgicos realizados en el
sistema renal de animales y humanos. Sin embargo no se dispona de resultados anlogos en
plantas que permitieran suponer la existencia de aquaporinas, por lo cual su descubrimiento, a
partir de la clonacin y secuenciacin de genes fue una autentica sorpresa para los fisilogos
vegetales.
La estructura propuesta para una aquaporina vegetal, que consta de seis segmentos
transmembrana u homeodominios, se aprecia en la Figura 5.3. Las aquaporinas, tambin
llamadas canales de agua facilitan el flujo de agua a travs de un gradiente de osmomolaridad.
Es decir, facilitan el transporte de agua en contra de gradientes osmticos requiriendo baja

60

energa de activacin. Lo que se consigue es la regulacin fina del transporte de agua, tanto del
espacio apoplstico al citoplasma como de este a la vacuola y viceversa.

Figura 5.3. Estructura propuesta para una aquaporina vegetal mostrando los seis dominios
transmembrana (H) y los circuitos (L=loops) funcionales. La actividad de la protena puede
modificarse por fosforilacin o glicosilacin. (Modificado de Heymann y Engel, 1999).

Existen muchas isoformas de aquaporinas en las plantas, algunas se expresan de
manera constitutiva, otras en respuesta a algn estmulo como salinidad o sequa. La
permeabilidad del agua a travs de la membrana es aumentada hasta 20 veces por la
presencia de los canales de agua. Se sabe asimismo que las aquaporinas no permiten el paso
de iones, incluso de protones. Se desconoce el mecanismo que permite esta selectividad
(Heymann y Engel, 1999).
La expresin de transcriptos de aquaporinas del tonoplasto (llamadas TPs) y de la
membrana plasmtica (llamadas PPs), algunos de los cuales son inducidos por la condicin de
estrs, se correlaciona con el alargamiento celular (Daniels et al., 1994). En Arabidopsis la luz
azul induce transcriptos homlogos a aquaporinas en las clulas en expansin (Kaldenhoff et
al., 1995). Al respecto se considera que los procesos reguladores del alargamiento celular son
el metabolismo de la pared celular y la relajacin de la misma (Cosgrove, 1993), y no est claro
si el flujo facilitado de agua, ya sea en condiciones adecuadas o bajo estrs, cumpla tambin
una funcin durante la expansin de las clulas.
Los canales de agua pueden bloquearse o cerrarse por fosforilacin (Chrispeels y Agre,
1994). Este tipo de regulacin pudiera relacionarse tanto con el control celular del flujo de
entrada y salida del agua como con la sealizacin de la raz a la parte area bajo una
condicin de estrs. Se supone que la desviacin del valor esperado de flujo de agua bajo un
potencial de agua especfico pudiera constituir la seal.
Un mecanismo de respuesta al estrs en plantas halofticas es la regulacin del
transporte facilitado de agua. En M. crystallinum la abundancia de transcriptos de los genes Mip
cambia al exponer las plantas a la salinidad. Asimismo los mencionados transcriptos se

61

encuentran predominantemente en las clulas de la epidermis de la raz, en al pice de la raz
antes de que se forme un cilindro central funcional, en la endodermis y en las regiones que
rodean a las clulas del xilema secundario. Los productos codificados por estos genes Mip son
homlogos a las aquaporinas de animales y plantas y los facilitadores del transporte de glicerol
en bacterias (Chrispeels y Agre, 1994).
Existe al menos una diferencia entre Arabidopsis y M. crystallinum en la regulacin de la
expresin de los genes que codifican las aquaporinas. Mientras que la exposicin a la salinidad
eleva los niveles de transcriptos de la aquaporina RD28 en Arabidopsis (Daniels et al., 1994),
en M. crystallinum los transcriptos de Mip declinan de manera transitoria y se recuperan
conforme las hojas ganan turgencia de manera paralela a la acumulacin de pinitol. Aunque los
cambios en los niveles de transcriptos en Arabidopsis no se reflejan en aumento en
aquaporinas (Daniels et al., 1994), las diferencias indican un modo diferente de percibir el
estado de estrs (probablemente la sealizacin por ABA) y en procesar las seales del mismo.
En C. plantagineum sometida a deshidratacin existen al menos dos vas de sealizacin que
inducen acumulacin de transcriptos de aquaporinas: una dependiente de ABA y otra
independiente de ABA (Mariaux et al., 1998). Es probable que ambas vas de sealizacin
operen en todas las plantas, pero que en cierto estado del desarrollo, condicin ambiental o
incluso para ciertas especies, una de las vas muestre preponderancia sobre la otra.
En Nicotiana glauca expuesta a dficit hdrico el nivel de transcriptos de los genes
NgMP2, NgMP3 y NgMP4, que codifican aquaporinas, disminuye drsticamente. Se supone
que esta inhibicin de la expresin gnica puede resultar en una reduccin de la permeabilidad
de la membrana celular, promoviendo la conservacin del agua en perodos de deshidratacin
(Smart et al., 2001). En otras especies como el arroz (Oryza sativa) la aquaporina RWC1
disminuye su nivel de transcriptos, hasta casi desaparecer seis horas despus de iniciarse un
estrs osmtico, permaneciendo bajo durante 24 horas para despus recuperarse (Li et al.,
2000b). El nivel de transcriptos de RWC1 correlacion con la turgencia de las clulas, respuesta
parecida a la reportada por Daniels et al. (1994) para M. crystallinum.

5.1.4.1. Literatura Referente a Aquaporinas. Este material se tiene a disposicin de los

1. Maurel, C. and M.J. Chrispeels. 2001.Aquaporins: A molecular entry intro plant water
relations. Plant Physiol. 125:135-138.
2. Eckert, M., A. Biela, F. Siefritz, R. Kaldenhoff. 1999. New aspects of plant aquaporin
regulation and specificity. J. Exp. Bot. 50:1541-1545.
3. Kjellbom, P., C. Larsson, . Johansson, M. Karlsson, U. Johanson. 1999. Aquaporins
and water homeostasis in plants. Trends Plant Sci. 4:308-314.

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5.1.5. SeaIizacin deI Estrs

El proceso por medio del cual las plantas perciben las seales de factores ambientales
estresantes y las trasmiten a la maquinaria celular para activar respuestas adaptativas y de
defensa se le llama transduccin de seaIes. Para que ocurra la transduccin de seales se
requiere de la accin de una "va o cascada de seaIizacin", es decir, de la transferencia de
estmulos desde la molcula perceptora primaria (la que percibe el estmulo y que se le llama
receptor), a travs de un conjunto de molculas (llamadas sealizadores) cuya funcin es
transmitir la seal por medio de un evento qumico como la fosforilacin hasta las molculas o
genes que se encargan de la respuesta al estmulo (llamados efectores). Al proceso se le llama

62

cascada ya que ocurre en cadena, requirindose en cada paso de la accin del agente anterior,
y no es estrictamente lineal, es decir, o bien un sealizador puede activar uno o ms efectores o
por otro lado un efector puede activarse por dos o ms sealizadores. El resultado final es una
especie de intercomunicacin entre diversos sealizadores y efectores que forman una "red de
transduccin de seales. En la Figura 5.4 aparece esquematizado el modelo de cascada de
sealizacin propuesto para los fitocromos.

Figura 5.4. Modelo muy esquematizado de la red de distintas vas de sealizacin que
controlan la expresin gnica fotoregulada en las plantas. La expresin de los genes
fotoregulados CAB, AS, FNR y CHS es regulada positiva o negativamente por una red de
transduccin de seales en donde intervienen los fitocromos A y B (PHY-A, PHY-B), la
sacarosa y la radiacin UV. La lnea discontnua indica la regulacin negativa presente entre las
vas dependientes de GMPc y Ca
2+
. La sacarosa se supone que acta a travs de la va
dependiente de GMPc. Las seales redox (marcadas como e
-
) dependientes de la
plastoquinona parecen modificar las dos vas dependientes de calcio (Modificado de Mustilli y
Bowler, 1997).

Como se dijo, las seales ambientales son percibidas por receptores especficos los
cuales, despus de activarse, inician (o suprimen) una cascada para transmitir la seal
intracelularmente y, en muchos casos, activar factores de transcripcin nucleares induciendo la
expresin de conjuntos especficos de genes. La fosforilacin de protenas acopladas a un

63

receptor es una forma comn de iniciar la sealizacin. Aunque ninguno de los receptores para
fro, sequa, salinidad o para el ABA ha sido determinado con certeza, los datos indican que los
receptores anlogos a quinasas proticas, las quinasas histidnicas bi-componentes as como
receptores asociados a protenas G pueden ser sensores potenciales para esas seales
ambientales. En los siguientes subcaptulos sern descritos estos receptores y otras molculas
sealizadoras, siguiendo el esquema de organizacin que utilizan Xiong y Zhu (2001) en su
revisin de literatura.

5.1.5.1. Receptores. Los receptores anIogos a quinasas proticas (RLKs) se encuentran
tanto en animales como en plantas. Estructuralmente consisten de un dominio extracelular que
puede unirse a un ligando o bien interactuar con otras protenas, un dominio transmembrana y
un dominio intracelular con actividad quinasa. Las RLKs de plantas poseen secuencias
especficas serina-treonina, al contrario de las de animales cuyas secuencias especficas
consisten de tirosina. Existe gran cantidad de RLKs en los genomas vegetales las cuales se
clasifican considerando funciones y estructura (Hardie, 1999). Las RLKs de plantas se han
encontrado involucradas en respuestas a la patognesis y en la regulacin del desarrollo,
creyndose que existe en ambos casos ligandos extracelulares para la unin con el receptor. La
identificacin de BR como una potencial RLK receptora de brasinoesteroides (Li y Chory, 1997)
hace posible que se encuentren RLKs similares funcionando como receptores de ABA. En
Arabidopsis el gene RPK1, que codifica una RLK con dominio extracelular rico en leucina, es
inducido una hora despus de tratar las plantas con ABA, deshidratacin, salinidad o baja
temperatura (Hong et al., 1997), indicando que esta RLK est al parecer involucrada en la
transduccin de seales de factores ambientales mltiples.
Las quinasas histidnicas bi-componentes (QHB) son receptores que inicialmente
fueron involucrados en la percepcin de varias seales ambientales en procariotas.
Posteriormente se encontraron en eucariotas incluyendo las plantas. En esta clase de receptor,
cuando el dominio extracelular sensor percibe una seal, el residuo histidnico citoplasmtico se
autofosforila, y el grupo fosforil es transferido entonces a un receptor aspartato perteneciente a
un regulador de respuesta, el cual puede ser constituyente de la misma protena sensora o bien
de otra protena. Los sensores QHB pueden acoplarse con una cascada posterior de MAPK
(mitogen-activated protein kinase) o fosforilar directamente blancos especficos para iniciar
respuestas celulares. Sistemas homlogos a estos QHB se han encontrado en las vas de
transduccin del etileno (Chang y Shockey, 1999), de las citoquininas (Brandstatter y Kieber,
1998) y en la percepcin de estmulos ambientales que causan estrs como la baja temperatura
y bajo potencial osmtico.
En las cianobacterias se ha sugerido que la fIuidez de Ia membrana pudiera actuar
como un sensor primario de baja temperatura (Murata y Los, 1997). De esa forma el estado
fisicoqumico de la membrana puede ser a su vez ser percibido por otras molculas asociadas a
la membrana.
Para investigar de que forma las QHB estn involucradas en la percepcin de
temperatura en la cianobacteria Synechocystis sp. PCC 6803, todas las supuestas QHB en el
genoma fueron sistemticamente interferidas, y se verific el impacto de la temperatura sobre la
expresin gnica de desaturasas monitoreando con un reportero de luciferasa bacteriana. El
experimento result en la identificacin de dos QHB y un regulador de respuesta que modulan
la induccin de algunos, pero no todos, los genes de desaturasa inducidos por baja
temperatura. Por lo tanto, estas QHB problablemente juegan un papel en parte de la
transduccin de seales de baja temperatura (Suzuki et al., 2000). La incapacidad de bloquear
totalmente todos los genes inducidos por baja temperatura implica que se tienen varios
sensores de temperatura en el genoma.
La QHB mejor caracterizada es el osmosensor SNL1 de Saccharomyces cerevisae.
Junto con el regulador de respuesta YPD1-SSK1, esta unidad sealizadora regula la cascada

64

de glicerol para alta osmo-molaridad (HOG) dependiente de MAPK , la cual resulta en la
produccin de glicerol para sobrevivir el estrs osmtico. En Arabidopsis una QHB llamada
AtHK1 muestra relacin estructural con SNL1. De hecho AtHK1 rescata la sensibilidad a la
salinidad de mutantes de la levadura con delecciones en los genes SLN1 y SHO1 (que
codifican para osmosensores transmembrana) implicando que AtHK1 puede tener una funcin
similar en plantas. Asimismo la expresin de AtHK1 fue inducida por alteraciones en la
osmolaridad de soluciones externas (Urao et al., 1999). Del mismo modo, se encontr que la
expresin de dos genes que codifican dos protenas anlogas a reguladores de QHB en
Arabidopsis fueron inducidos por baja temperatura, salinidad y sequa (Urao et al., 1998).
En los animales existe un gran nmero de receptores hormonales y de
neurotransmisores que se encuentran estructuralmente relacionados con la rodopsina, el
receptor acoplado a protenas G con dominio 7-transmembrana (7TM). Estos receptores son
clasificados colectivamente como receptores acopIados a protenas G (GPCRs). Receptores
similares probablemente estn involucrados en la percepcin de la luz en algas verdes
flageladas (Calenberg et al., 1998). En el genoma de Arabidopsis se tienen ms de 30
supuestos genes 7TM y las protenas codificadas son homlogas a la protena Mlo que participa
en la resistencia a enfermedades (Devoto et al., 1999). Sin embargo, ninguna de ellas muestra
homologa significativa en la secuencia de aminocidos con los GPCRs de animales y no se
sabe si este grupo de protenas son la versin vegetal de los GPCRs. Considerando que las
protenas G se encuentran implicadas en la sealizacin del estrs ambiental, es posible
suponer que existen receptores asociados a protenas G que participan en la percepcin de las
seales que inducen estrs.

5.1.5.2. EI CaIcio como Mensajero Secundario. Se le llama mensajero secundario a una
molcula que funciona como intermediario en la transmisin de seales. Bien puede ocurrir que
el mensajero secundario lleve la informacin desde un receptor primario hacia otro sealizador,
o bien puede ocurrir que lo haga entre dos sealizadores. Sea como sea, el cambio en la
concentracin del in calcio citoslico [Ca
2+
]
c
constituye un punto de convergencia para muchas
vas de sealizacin tanto en animales como en plantas (Figura 5.5). La concentracin de
calcio intracelular es cuidadosamente regulada; despus de un estmulo el nivel basal aumenta
gracias a la liberacin de calcio de almacenes intracelulares o bien por la entrada desde el
medio extracelular a travs de diferentes canales de calcio. La distribucin citoslica del Ca
2+

posterior al mencionado aumento no es resultado de simple difusin, ms bien forma corrientes
u ondas con configuraciones especficas. Cada seal ambiental crea su propia configuracin de
Ca
2+
: una estructura espacialmente nica que involucra combinaciones particulares de varios
cientos de protenas actuando en concierto. Las combinaciones especficas de cambio en flujo
inico y expresin gnica definen la eventual respuesta fisiolgica. Los cambios transitorios en
[Ca
2+
]
c
se sabe que son inducidos por diferentes seales, desde factores Nod (Felle et al.,
1998), procesos degenerartivos como la senescencia (Huang et al., 1997), hasta factores
ambientales que inducen estrs o choque oxidativo (Chandra et al., 1997).
Al incubar en condicin constante de aIta temperatura plntulas de tabaco que
contienen aquorina transgnica, una protena reportera luminiscente sensible al Ca
2+
, se
observ que se indujeron oscilaciones de [Ca
2+
]
c
pasados 20-25 minutos. Oscilaciones
posteriores por el choque trmico pudieron ser inducidas solo despus de un perodo de
recuperacin de ocho horas a temperatura ambiente. En el transcurso de este perodo de
recuperacin, sin embargo, las oscilaciones pueden ser inducidas tambin por seales de baja
temperatura o viento (Gong et al., 1998). Por lo tanto, el calor, el fro y el viento activan
diferentes cascadas de transduccin o bien movilizan almacenes espacialmente distintos de
calcio para producir una configuracin especfica de Ca
2+
. La amplitud de las oscilaciones es
modulada probablemente por la organizacin del citoesqueleto, tal como fue mostrado para el
caso de exposicin a baja temperatura (Mazars et al., 1997).

65

Figura 5.5. Resumen del modelo de red de sealizacin por calcio. Las reas marcadas con
signo de interrogacin sealan ausencia significativa de informacin (Modificado de Trewavas y
Malh, 1998).

Los estudios con clulas animales muestran que existen varias formas para lograr el
incremento transitorio de Ca
+2
en el citosol. El in calcio puede llegar al citosol desde el
exterior a travs de canales activados bien por cambios en el voltaje de la membrana, por
receptores especficos o por un fenmeno de autoestimulacin por el mismo calcio (store-
operated Ca
2+
channels). Por otro lado, el calcio en los almacenes intracelulares puede llegar al
citosol a traves de canales sensibles a ligandos mensajeros. Estos ltimos incluyen a los inositol
polifosfatos, ADP-ribosa cclico (cADPR) y cido nicotnico adenina dinucletido fosfato
(NAADP). Los receptores del inositol 1,4,5- trifosfato (P3) han sido aislados de clulas de
animales y plantas. Los receptores para cADPR fueron identificados en animales. Es
interesante que la actividad de estos dos tipos de receptores se ve estimulada por calcio, lo cual
pudiera explicar la autoestimulacin del calcio. En contraste la identidad molecular de los
receptores de NAADP no ha sido definida y no parecen ser estimulados por calcio (Xiong y Zhu,
2001).
En plantas superiores y algas los inositoI poIifosfatos parecen funcionar en la
transduccin de estmulos ambientales como luz, gravedad, inductores fngicos, acidez y fuerza
osmtica. El P3 es generado por la enzima fosfolipasa C (PLC) a partir de la hidrlisis de un
precursor llamado fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PP2). Este ltimo es sintetizado por la
fosfatidilinositol 4-fosfato 5-quinasa. En Arabidopsis el gene PP 5K, que codifica esta enzima,

66

es inducido por dficit hdrico y por ABA. Asimismo, despus de un tratamiento con ABA, se
presenta un incremento transitorio de P3 en protoplastos de clulas guarda de Vicia faba (Lee
et al., 1996). Estos efectos del cido abscsico requieren PLC, ya que la inhibicin de esta
enzima bloquea tanto el cierre estomtico como la oscilacin de Ca
2+
dependientes de ABA
(Staxen et al., 1999).
En animales existen al menos 3 subfamilias de PLC y en Arabidopsis se tienen cuando
menos 10 genes que codifican PLCs. Uno de estos, el AtPLC1, es inducido fuertemente por
salinidad y dficit hdrico y, en menor extensin, por baja temperatura (Hirayama et al., 1995).
Todas las PLCs requieren calcio como cofactor y parecen ser activadas por protenas G. La
sealizacin por inositol polifosfatos est sujeta a niveles mltiples de regulacin, un ejemplo lo
constituye el hecho de que AtPLC1 es regulado negativamente por SOS2, una quinasa protica
involucrada en la tolerancia a la salinidad (Zhu et al., 1998). Esto parece indicar que existe
cierta separacin, no tan solo temporal sino tambin funcional, entre las cascadas de
sealizacin y las respuestas de tolerancia o adaptacin.
Los fosfolpidos son hidrolizados por la fosfoIipasa D (PLD) para producir cido
fosfatdico (PtdOH), dicho compuesto funciona como segundo mensajero en clulas animales
activando la fosfatidilinositol 5-quinasa, PLC y la quinasa protica C(PKC). En las clulas
guarda la actividad de PLD aumenta poco despus de un tratamiento con ABA y la aplicacin
de PtdOH tiene el mismo efecto que el ABA induciendo cierre estomtico (Jacob et al., 1999).
Adicionalmente la actividad de PLD fue aumentada pocos minutos despus de una exposicin a
deshidratacin o salinidad (Frank et al., 2000; Munnik et al., 2000).
InositoI. La sntesis de inositol requiere de la inositol 1-fosfato sintasa (NPS) para convertir
glucosa 6-fosfato en NP. La transcripcin de NPS es aumentada en las partes areas pero
disminuida en la raz por el choque osmtico (Nelson et al., 1998), mientras que en Arabidopsis
la expresin no fue aumentada por la salinidad (shitani et al., 1996). Se supone que el aumento
en la sntesis de inositol es requerido para la sntesis del osmolito D-ononitol.
CaImoduIinas (CaM). La modulacin de los procesos celulares dependiente de Ca
2+
ocurre por
medio de protenas intracelulares receptoras de Ca
2+
, de las cuales las calmodulinas se
encuentran entre las mejor caracterizadas. Las calmodulinas no poseen actividad cataltica,
pero el complejo Ca
2+
-calmodulina activa numerosas protenas con diversos papeles en los
procesos celulares (Figura 5.6). Para mayor informacin sobre calmodulinas verifique la
revisin de Snedden y From (1998) anotada en el siguiente subcaptulo.

5.1.5.3. Literatura Referente aI CaIcio. Este material se tiene a disposicin de los estudiantes
para su lectura e imparticin de seminarios.

Trewavas, A.J. and R. Malh. 1998. Ca
2+
signaling in plant cells: the big network! Curr.
Op. Plant Biol. 1:428-433.
Snedden, W.A. and H. Fromm. 1998. Calmodulin, calmodulin-related proteins and plant
responses to the environment. Trends Plant Sci. 3:299-304.

5.1.5.4. Fosfoprotenas IntraceIuIares. Despus de percibir una seal ambiental con
receptores asociados a membranas, las celulas utilizan cascadas con mltiples fosfoprotenas
para transducir y amplificar la informacin. La fosforilacin y desfosforilacin de protenas es tal
vez la forma ms comn de sealizacin intracelular. Estos procesos regulan gran cantidad de
actividades celulares como activacin de enzimas, ensamble de macromolculas, localizacin
de protenas y degradacin de las mismas. En las plantas existen muchas quinasas y
fosfatasas proticas que parecen estar involucradas en las respuestas al estrs (Hardie, 1999).

67

Figura 5.6. Transduccin de seales mediada por la unin de Ca
2+
-calmodulina en plantas. Las
seales biticas y abiticas son percibidas por receptores, resultando en algunos casos en
cambios transitorios en la concentracin de Ca
2+
en el citosol, ncleo y organelos. El incremento
en la concentracin de Ca
2+
libre, originada ya sea de los almacenes intracelulares o
extracelulares, da lugar a la unin de Ca
2+
con las protenas moduladas por calcio, incluyendo a
las calmodulinas y protenas relacionadas. La modulacin estructural de estas protenas las
capacita para interactuar con numerosos blancos celulares que controlan una multitud de
funciones celulares, tales como el metabolismo, balance inico, modificaciones del
citoesqueleto o de protenas. Adicionalmente el Ca 2+ y las calmodulinas tambin regulan la
expresin de genes por medio de complejas cascadas de sealizacin o por unin directa a
factores de transcripcin. Los cambios rpidos en las funciones celulares resultan de
interacciones directas de las calmodulinas y protenas relacionadas con sus blancos (en
tiempos que van de segundos a minutos). Las respuestas ms lentas requieren de la
transcripcin de genes, procesado del RNA y sntesis de protena (en tiempos que van de
minutos a das). Estos procesos mediados por calmodulinas, junto con los cambios celulares
disparados por otras vas de sealizacin, constituyen la respuesta de las plantas a las seales
externas (modificado de Snedden y Fromm, 1998).

68

La mayora de las quinasas de plantas son quinasas serina:treonina que juegan
papeles importantes en la transferencia de grupos fosfato entre protenas. La PKABA1, una
quinasa serina:treonina del trigo, fue de las primeras que se encontr eran inducidas por
sequa, baja temperatura, NaCl y ABA (Holappa y Walker-Simmons, 1995). La acumulacin de
PKABA1 en el embrin muestra correlacin con con los niveles de ABA en la semilla en proceso
de maduracin, indicando un rol probable de PKABA1 en el control de la tolerancia a la
deshidratacin o la dormancia de la semilla. Usando un ensayo de coexpresin transitoria,
Gomez-Cadenas et al. (1999) encontraron que PKABA1 inhibi la expresin del gene de la d-
amilasa en capas de aleurona de cebada (el cual es suprimido por ABA y estimulado por GA)
pero no regul directamente la expresin del gene LEA (late embryogenesis abundant) el cual
es inducido por ABA. Adicionalmente, el hecho de que PKABA1 sea inducida por ABA y el
estrs en plntulas indica posibles funciones de este gene en los tejidos vegetativos. Li et al.
(2000a) encontraron en Vicia faba una quinasa protica activada por ABA (AAPK), homloga a
PKABA1, que se expresa de manera especfica en las clulas guarda. Al introducir una versin
mutada de AAPK se bloque el cierre estomtico inducido por ABA al eliminar la activacin de
los canales aninicos de la membrana plasmtica por parte del mismo ABA. Ya que el AAPK
mutado mostr actividad reducida, el efecto inhibitorio parece resultar de una interferencia
sobre la sealizacin del ABA. Hasta el momento se desconoce si AAPK es regulado tambin
por el dficit hdrico.
Las races son los rganos que perciben primero la falta de agua en el suelo, por ello no
es sorprendente que posean mecanismos especficos de sealizacin. La expresin de una
protena quinasa especfica para Ia raz (ARSK1) de Arabidopsis fue fuertemente inducida por
el dficit hdrico, la salinidad y el tratamiento con ABA (Hwang y Goodman, 1995).
En las plantas exclusivamente, se encuentra una familia de quinasas proticas
(CDPKs) envueltas en las respuestas a los factores ambientales extremos. Las CDPKs
consisten de un dominio quinasa serina:treonina y un dominio anlogo a calmodulina. En
Arabidopsis los genes ATCDPK1 y ATCDPK2 fueron rpidamente inducidos por tratamiento de
carencia de agua y salinidad, pero no por ABA o baja y alta temperatura, sugiriendo esto que
estos productos gnicos participan en una va de sealizacin del estrs independiente de ABA
(Urao et al., 1994).
En una cascada de sealizacin del estrs la inactivacin de fosfoprotenas se consigue
generalmente por desfosforilacin. Se tienen 4 subgrupos principales de fosfatasas (PP): PP1,
PP2A, PP2B (calcineurina) y PP2C. Las PP2B y PP2C son dependientes de Ca
2+
mientras que
que PP1 y PP2A no lo requieren para funcionar. Normalmente la inactivacin de fosfatasas es
fisiolgicamente equivalente a la activacin de quinasas. En la alfalfa la inhibicin de la PP2A
con cido okadico resulta en la activacin a 25 C del gene cas15 que es inducido por fro. Al
respecto se encontr que la PP2A es inhibida durante la aclimatacin a la baja temperatura y
que este proceso es mediado por Ca
2+
(Monroy et al., 1998). Ya que PP2A no requiere Ca
2+

para activarse es posible que PP2A forme un complejo con una quinasa dependiente de Ca
2+
-
CaM. Esta asociacin fsica de fosfatasas y quinasas pudiera ser un fenmeno comn.
Una conexin adicional entre PP2A y la sealizacin del estrs es que PP2A puede
regular la cascada de MAPK por desfosforilacin de las quinasas ncleo; se sabe asimismo que
otras fosfatasas serina:treonina regulan la cascada MAPK. En Arabidopsis se encontr que la
fosfatasa PTP1, especfica para tirosina, fue inducida por NaCl pero reprimida por un
tratamiento corto (6 horas o menos) de fro (Xu et al., 1998). La significancia de esta regulacin
diferencial por dos estmulos ambientales distintos no est clara.
En un estudio acerca de la interaccin entre el estrs por baja temperatura y el inducido
por salinidad y su efecto sobre la regulacin del gene inducido por estrs RD29A, Xiong et al.
(1999) observaron que cuando las plntulas de Arabidopsis fueron mantenidas 4.5 horas en
baja temperatura, la induccin de RD29A por NaCl o ABA fue completamente bloqueada,
mientras que una exposicin ms extensa (2 das) no dio lugar al bloqueo de induccin de ABA.

69

Si se toma en cuenta la similar regulacin por fro y salinidad (Xu et al., 1998), es posible que
esta interaccin entre baja temperatura y salinidad ocurra al nivel de la fosfatasa PTP1. Por
analoga con otros sistemas se ha sugerido que el papel de la PTP1 en la sealizacin del
estrs puede ser la desfosforilacin de una MAP quinasa en un residuo de tirosina.
Las fosfatasas se encuentran implicadas en la sealizacin por ABA. En Arabidopsis los
mutantes dominantes abi1 y abi2 muestran insensibilidad a la aplicacin exgena de ABA
durante la germinacin. Exhiben tambin desregulacin de los estomas, al parecer como
resultado una reduccin en la [Ca
2+
]
c
en las clulas guarda inducida por ABA (Allen et al., 1999),
resultando en un fenotipo marchito en condiciones de baja humedad. Los genes ABI1 y ABI2
codifican protenas homlogas a la fosfatasa serina:treonina PP2C (Leung et al., 1994) y
pueden tener funciones traslapadas. Al menos para AB1 se sabe que es un regulador negativo
de la accin de ABA, inhibiendo la expresin del gene HVA que codifica un promotor sensible a
ABA (Sheen, 1996).

5.1.5.5. MAP Quinasas (MAPK). Las vas de sealizacin dependientes de MAPK realizan
transduccin de seales de la superficie celular al ncleo. Las cascadas MAPK (mitogen-
activated protein kinase) se encuentran altamente conservadas en todos los eucariotas y se
utilizan ampliamente para la sealizacin de la fuerza osmtica del medio externo. La llamada
cascada "ncleo o principal consiste de 3 quinasas que se activa en secuencia. La MAPKKK,
despus de activarse, fosforila los residuos serina y treonina de la MAPKK. Esta a su vez
fosforila residuos de tirosina y treonina de la MAPK. Esta entonces migra al ncleo bien sea
para directamente activar factores de transcripcin o bien para activar componentes
sealizadores adicionales que regularn la expresin gnica, protenas asociadas al
citoesqueleto, etc.
La activacin cooperativa de las tres quinasas resulta en un sistema ultrasensible que
permite la operacin en forma de un circuito de encendido-apagado y previene la activacin
aleatoria de la cascada (Huang y Ferrell, 1996). Se ha encontrado que diferentes vas MAPK
muestran componentes comunes, sin que la activacin de una de ellas afecte necesariamente a
la otra. Esta especificidad se consigue con protenas de confinamiento o bien por componentes
especficos a la cascada de sealizacin (ORourke y Herskowitz, 1998). En las plantas las
cascadas MAPK participan en la transduccin de seales de auxinas, citoquininas, estmulos
mecnicos, respuesta a los patgenos, transduccin a estmulos por factores abiticos y
regulacin del ciclo celular.
En plantas de alfalfa una MAPK fue activada en el transcurso de 10 minutos de
tratamiento con baja temperatura. Fue tambin activada por el dficit hdrico as como por
accin mecnica, pero no por alta temperatura, salinidad o ABA exgeno (Jonak et al., 1996),
sugiriendo que esta MAPK es mediadora en la sealizacin de la sequa y fro a travs de una
va independiente de ABA. Una quinasa inducida por cido saliclico (SPK), perteneciente a la
familia de MAPKs activadas por el cido saliclico, ataque de patgenos y dao mecnico fue
tambin activada 5-10 minutos despus de aplicar un choque osmtico (Mikolajczyk et al.,
2000). En clulas de tabaco, de manera similar, el estado de estrs osmtico activ la SPK y
otra quinasa llamada HOSAK, independientemente de Ca
2+
y ABA (Hoyos y Zhang, 2000). Por
otra parte, en protoplastos de aleurona de cebada se encontr una MAPK activada por
concentraciones fisiolgicas de ABA 1 minuto despus de su aplicacin. La activacin de esta
fue dependiente de una tirosina fosfatasa (Knetsch, 1996). Esta cascada de MAPK regula la
expresin del gene RAB 16 sensible a ABA. En Arabidopsis la transcripcin de de un gene
MAPK, ATMPK3, es inducida por el dficit hdrico, baja temperatura, salinidad y estmulos
mecnicos (Mizoguchi et al., 1996).
La ATMPK3 es activada por H
2
O
2
y su actividad es aumentada por ANP1, una MAPKKK
que se expresa de forma ectpica (Kovtun et al., 2000). Por su parte ATMEKK1 (una MAPKKK),
cuya expresin es inducida en los cinco minutos posteriores a un tratamiento con NaCl (Covic et

70

al., 1999), puede complementar funcionalmente al mutante ste 11 (una MAPKKK) de S.
cerevisae (Mizoguchi et al., 1996). Esto sugiere similitud funcional entre algunos de los
componentes de las cascadas MAPK de plantas y levaduras. Las clulas de levadura que
expresan ATMEKK1 son ms tolerantes a la fuerza osmtica y producen ms glicerol en
ausencia de estrs (Covic et al., 1999).
Kovtun et al. (2000) sobreexpresaron NPK1, un ortlogo de ANP de tabaco que activa la
expresin gnica regulada por H
2
O
2
, encontrando que las plantas de Arabidopsis que
sobreexpresaron NPK1 mostraron tolerancia aumentada al congelamiento, alta temperatura y
salinidad. An as, la expresin del gene regulado por estrs RD29A no fue alterada. Es posible
que esta MAPKKK pudiera activar diferentes vas de sealizacin del estrs inducido por
factores abiticos, aumentando entonces la tolerancia de las plantas. En este contexto es
importante recordar que las especies activas de oxgeno (ver seccin sobre estrs oxidativo)
se relacionan con el estrs abitico, adems de su major conocido papel en el estrs bitico.
Las especies activas de oxgeno pudieran indirectamente potenciar la sealizacin del estrs
por medio de algunas vas no identificadas, como por ejemplo la generacin de cADPR (Xiong y
Zhu, 2001).

5.1.5.6. ReguIadores TranscripcionaIes. De acuerdo a las caractersticas del dominio de
unin al DNA, los factores de transcripcin de eucariotas pueden clasificarse en varios grupos
como las protenas zipper de leucina con regin bsica (bZP), protenas anlogas a MYB (con
motivos o diseos recurrentes hlice-vuelta-hlice), protenas con dominio MADS, protenas
hlice-circuito-hlice (helix-loop-helix), protenas zinc-fingers y protenas homeobox. Las plantas
tienen adems algunos factores de transcripcin nicos con dominios de unin al DNA tales
como AP2:EREBP. En la activacin de genes sensibles al estrs causado por factores abiticos
no parece existir una regla general en cuanto a cual clase de factor transcripcional activa a que
tipo de gene sensible al estrs. En vez de ello aparentemente se tienen varias clases de
factores transcripcionales que regulan a un grupo de genes, o varios factores de transcripcin
que de manera cooperativa activan a un gene en particular.
Muchos genes sensibles al ABA tienen el elemento de respuesta a ABA (ABRE) con un
ncleo ACGT y elementos adicionales de acoplamiento (Shen y Ho, 1995) los cuales imparten
induccin por ABA. Las protenas que se unen a este complejo sensible a ABA tienen motivos
bZP. Estas protenas bZP incluyen por ejemplo la EmBP1 del trigo, la TAF-1 del tabaco y las
OSBZ8 y osZP-1 del arroz. Algunos de estos activadores transcripcionales son asimismo
inducidos al nivel transcripcional por ABA o factores estresantes. Por ejemplo OSBZ8, que
codifica una protena bZP que se une a la G-box en el elemento ABRE, fue rpidamente
inducido por tratamiento con ABA. Es probable que OSBZ8 se encuentre involucrado en la
transcripcin de genes sensibles al ABA en el arroz (Nakagawa et al., 1996). Similarmente el
gene mLP15 que codifica una protena bZP en el maz, es inducido por baja temperatura,
salinidad y ABA, pero no por sequa (Kusano et al., 1995). Se desconoce sin embargo si
mLP15 puede regular genes sensibles a ABA.
El papel directo de las protenas bZP en la regulacin de los genes sensibles a ABA, al
menos durante el desarrollo del embrin, fue soportado por la identificacin del producto del
gene AB5 como un factor de transcripcin bZP. AB5 regula la expresin de algunos genes
LEA y se expresa principalmente en las semillas. Su expresin es regulada por ABA y parece
depender tambin de AB1:2 (Finkelstein y Lynch, 2000). La protena VP1 del maz (homloga a
AB3 de Arabidopsis) es un factor de transcripcin que regula la maduracin de la semilla y la
dormancia activando genes sensibles a ABA (McCarty et al., 1991). Sin embargo, VP1 no
interacta directamente con ABRE en el promotor de estos genes. Ms bien un factor bZP,
TRAB1, se encontr que se asocia con VP1 y se une directamente con ABRE para mediar la
transcripcin inducida por ABA (Hobo et al., 1999). Adems de expresarse en embriones, los
transcriptos TRAB1 fueron detectados en races y hojas. La expresin de TRAB1 no es

71

afectada por ABA, sin embargo este ltimo puede regular la interaccin entre VP1 y TRAB1
durante la activacin de los genes que llevan ABRE. AB5, TRAB1 y DPBF-1, otro factor de
unin al promotor Dc3 sensible al ABA encontrado en el girasol muestran ms del 50% de
homologa al nivel de aminocidos, implicando un probable mecanismo comn para la
regulacin gnica.
Adems de ABRE los promotores de muchos genes sensibles a baja temperatura o
dficit hdrico contienen otro elemento regulador cis con la secuencia ncleo CCGAC, que
responde especficamente a los mencionados factores ambientales. Este elemento fue
denominado DRE (drought-responsive element) o elemento con reiteracin C (CBF). Un
activador transcripcional con dominio AP2 que se une al elemento CBF1 de Arabidopsis es
activado por fro y precede a la activacin de otros genes inducidos por fro (Gilmour et al.,
1998). Asimismo se conocen dos genes similares que codifican protenas que se unen a DRE.
La expresin de uno de ellos, DREB2, fue rpidamente inducida por deshidratacin y salinidad.
La sobreexpresin de CBF:DREB induce la expresin de genes sensibles al estrs e
incrementa la tolerancia de la planta al fro y la sequa (Liu et al., 1998). Estos resultados nos
indican el potencial de desarrollar plantas transgnicas con mayor resistencia a diferentes
factores ambientales adversos. Se requiere sin embargo ampliar la cobertura de trabajos
experimentales a otras especies como frutales, hortalizas, maz, trigo y sorgo, de tal forma que
se verifique no solo la capacidad de resistir el estrs, sino los resultados de la induccin de
genes relacionados con el estrs sobre la fenologa, productividad y calidad de la cosecha.

5.1.5.7. MoIcuIas Asociadas: Modificadores, Confinadores y Adaptadores. Adems de las
molculas que directamente transducen las seales ambientales que dan lugar al estrs,
existen otras molculas que regulan la actividad de los componentes de sealizacin sin ser
directamente sensores de los estmulos externos. Estas molculas asociadas son modificadores
(distintos a las quinasas y fosfatasas), confinadores y adaptadores que proveen distintos
soportes fsicos para muchos eventos de sealizacin.
Las modificaciones postraduccionaIes de las protenas juegan un importante papel en
la regulacin de las funciones de las mismas. Con este tipo de modificacin los organismos
cuentan con una amplia gama de posibilidades de control, modulacin y adaptacin adicionales
a la regulacin de la expresin gnica. La expresin fenotpica es entonces el resultado tanto de
la expresin de genes como del control respecto a como se comporta una protena dada. Al
respecto se tiene el concepto de moonIighting o protenas muItifuncin, que hace referencia
al hecho de que una misma protena, codificada por un gene en particular, es capaz de
desarrollar actividades diferentes dependiendo de su ubicacin celular as como de las
modificaciones postraduccionales a que se ve sometida. Esta calidad de redundancia ha
introducido un nuevo factor de complejidad en los estudios genmicos (xxxxx).
Las modificaciones comunes de Ias protenas incluyen la fosforilacin, acetilacin,
metilacin, ADP-ribosilacin, glicosilacin, miristolacin e isoprenilacin. Por estar muy
extendido el proceso de fosforilacin ya fue discutido. Tanto en procariotas como en eucariotas
la metilacin (unin de un grupo ~CH3) de protenas y DNA regula la transcripcin de genes
(Chen et al, 1999) y la actividad de receptores (Falke et al., 1997).
La Iipidacin de protenas es una forma comn de modificacin de protenas. La
lipidacin facilita la asociacin con las membranas, proceso importante para lograr la
transmisin de seales extracelulares al citosol. Las modificaciones lipdicas ms comunes
hacen uso de los cidos grasos miristato y palmitato y de los isoprenoides farnesol y
geranilgeranol. La isoprenilacin se consigue con la farnesil transferasa (Ftasa) o la
geranilgeranil transferasa las cuales unen un fragmento 15-C del farnesil o 20-C del
geranilgeranil a un residuo cistena del C-terminus de la protena. En las clulas humanas
aproximadamente el 0.5% de las protenas celulares se encuentran isopreniladas, la mayora de
ellas con geranilgeranil. En las plantas la chaperonina ANJ1, asociada con estrs de alta

72

temperatura, requiere de isoprenilacin para funcionar bajo la condicin ambiental mencionada
(Zhu et al., 1993). El papel de la isoprenilacin en la transduccin de seales durante el estrs
es apoyado por la identificacin del gene ERA1 de Arabidopsis que codifica la subunidad
cataltica de la FTasa. La germinacin de las semillas mutantes era1 es muy sensible a la
inhibicin por ABA (Cutler et al., 1996). Adems, los canales aninicos de las clulas guarda y
el cierre estomtico en los mutantes era1 son hipersensibles al tratamiento con ABA (Pei et al,
1998). Esto parece indicar que al menos uno de los sustratos de ERA1 es un regulador
negativo de la transduccin de seales de ABA. En las clulas de mamferos un grupo de
protenas isopreniladas son las GTPasas de la familia protica Ras. Estas activan varias
cascadas MAPK que regulan un amplio rango de actividades celulares, tales como la
progresin del ciclo celular, apoptosis y respuestas al estrs
La ubiquitinacin es una importante modificacin protica que evita que las protenas
sean degradadas en el proteasoma. La regulacin de la transduccin de seales por medio de
la degradacin de protenas se ha detectado durante la sealizacin de auxinas, sealizacin
de la luz y sealizacin de patgenos. Aunque se ha sugerido que la ubiquitina se relaciona con
la tolerancia a la desecacin en algunas plantas tolerantes a la falta de agua, y el nivel de
transcriptos de la misma se incrementa durante la deshidratacin-hidratacin, en las mesofitas
parece innecesario el aumento en la sntesis de ubiquitina durante el estrs por fro o sequa.
Adicionalmente en muchas plantas los genes de ubiquitina no son regulados por el fro,
salinidad o ABA. Asi pues, el papel potencial de la ubiquitinacin en la transduccin de seales
ambientales adversas parece ser la regulacin del tiempo de vida de las molculas
sealizadoras (Xiong y Zhu, 2001).
La separacin espaciaI de componentes de seaIizacin en una cascada por medio
de la formacin de complejos, conseguidos con la asistencia de protenas adaptadoras y de
confinamiento, es una forma comn de controlar la especificidad de la sealizacin.
Adicionalmente, el "acarreo de los componentes de sealizacin tempranos a los receptores de
membrana por los adaptadores y confinadores ayuda a concentrar las protenas de sealizacin
consiguiendo un incremento en los niveles del sealizador (Kholodenko et al., 2000). Otra
funciones de las protenas adaptadoras y de confinamiento se refieren a mantener protenas
especficas en localidades subcelulares especficas as como funciones bioqumicas
adicionales. Una opcin adicional se consigue con la accin de los elementos del citoesqueleto,
que pueden funcionar como estructura de soporte para facilitar la agregacin de complejos de
sealizacin y el movimiento de vesculas afectando as procesos especficos de sealizacin.
El papel de las protenas confinadoras en la transduccin de seales ha sido establecida en
muchos sistemas.
Las protenas 14-3-3 son adaptadores que se unen a molculas sealizadoras para
formar complejos transcripcionales. La protena GF14 interactua con VP1 y Em1a para formar
un complejo transcripcional (Schultz et al., 1998) y este complejo, incluyendo a TRAB1, puede
regular la expresin gnica de LEA en embriones. Se encontr en Arabidopsis que dos genes
inducidos por fro codifican protenas 14-3-3 y que su expresin es especficamente regulada
por baja temperatura, pero no por ABA o dficit hdrico (Jarillo et al., 1994) implicando que
pueden funcionar durante las respuestas a la baja temperatura. En la levadura el factor
transcripcional CBF1, especfico para baja temperatura, requiere para su activacin de
protenas adaptadoras ADA2, AD3 y GCN5. Esta ltima es una histona acetilasa que forma con
los adaptadores y CBF1 un complejo de transcripcin para genes inducidos por baja
temperatura (Stockinger et al., 1997).
La acetiIacin de histonas y Ia modificacin de cromatina constituye otro punto
importante en la regulacin gnica. Bsicamente todas las secuancias de DNA en genomas
eucariotas se asocian con histonas. Sin embargo, no todos los genes son afectados en su
transcripcin por la acetilacin-desacetilacin de histonas. Se ha especulado que el resultado
de la modificacin de las histonas pudiera ser especfico para cada gene (Struhl, 1998). Se cree

73

que en las plantas la exposicin a factores adversos no solamente inicia cascadas especficas
de sealizacin, sino que tambin afectan los procesos bsicos de transcripcin. Por ejemplo,
al aplicar dficit de agua o tratamiento con ABA en Arabidopsis y tomate se induce la expresin
de genes modificadores de histonas (Wei y OConnell, 1996). Sin embargo, el significado de
esta induccin no se conoce.

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5.2. Estrs por Factores Biticos

Al igual que ocurre con el estrs inducido por factores abiticos, las interacciones de las
plantas con microorganismos simbiticos (patgenos, mutualistas o saprofitos) o con
organismos herbvoros como los insectos, dan lugar a cascadas de sealizacin que bajo las
condiciones adecuadas permite que los vegetales desarrollen una adecuada asociacin con los
organismos benficos como Rhizobium spp. o bien que inicien reacciones de defensa en contra
de patgenos o herbvoros.

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5.2.1. Genes de Resistencia

5.2.1.1. Literatura Referente a Genes de Resistencia. Este material se tiene a disposicin de
los estudiantes para su lectura e imparticin de seminarios.

1. Melcher, L.S. and M.H. Stuiver. 2000. Novel genes for disease-resistance breeding. Curr. Op.
2. Stotz, H.U., J. Kroymann, T. Mitchell-Olds. 1999. Plant-insect interactions. Curr. Op. Plant
Biol.. 2:268-272.
3. Salmeron, J.M. and B. Vernooij. 1998. Transgenic approaches to microbial disease resistance
in crop plants. Curr. Op. Plant Biol. 1:347-352.
4. Rushton, P.J. and .E. Somssich. 1998. Transcriptional control of plant genes responsive to
pathogens. Curr. Op. Plant Biol. 1:311-315.

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5.2.2. Resistencia Sistmica Adquirida (RSA) y Resistencia Sistmica Inducida
(RSI)


Para el desarrollo de este captulo se utiliz como base la revisin de literatura realizada
por Ryals et al. (1994).
Al presentarse una infeccin por patgenos las plantas inducen un tipo de resistencia a
largo plazo, de amplio espectro y de tipo sistmico que permite resistir posteriores infecciones.
Esta respuesta de resistencia sistmica (RS) ha sido conocida por muchos aos bajo
diferentes nombres como inmunidad fisiolgica inducida o resistencia sistmica adquirida
(SAR). Para propsitos de este trabajo el acrnimo RS indica el tipo de Resistencia Sistmica
nducida por un microorganismo no patgeno (como los encontrados en la rizosfera), mientras

74

que la SAR indica el tipo de Resistencia Sistmica Adquirida originada en todos los tejidos de la
planta como resultado de la infeccin por un patgeno. La SAR es parte del repertorio de
defensa de las plantas contra los patgenos y es un mecanismo diferente a los descritos como
barreras fsicas, entrelazamiento de las protenas de la pared celular, biosntesis de fitoalexinas,
respuesta hipersensible y cambios fisiolgicos inducidos por el etileno. La SAR no parece
relacionarse con las respuestas inducidas por el herbivorismo o por un estmulo osmtico.

5.2.2.1. Historia de Ia Resistencia Sistmica Inducida. Por cerca de 100 aos los cientficos y
naturalistas observaron que, cuando las plantas sobrevivan a la infeccin de un patgeno,
desarrollaban una mayor resistencia a infecciones subsecuentes. En 1933 Chester anot 200
publicaciones que describan un fenmeno que l denomin inmunidad fisiolgica adquirida
(Chester, 1933). En ese tiempo los cientficos crean que investigaban un fenmeno anlogo al
de la respuesta inmune de los mamferos. En retrospectiva, al menos tres diferentes procesos
fueron llamados inmunidad fisiolgica adquirida: proteccin cruzada viral, antagonismo (o
biocontrol) y lo que ahora se denomina SAR. Durante los 30 aos siguientes al reporte de
Chester se publicaron muchos trabajos sobre el tema, pero la mayora fueron estudios
descriptivos que extendan las observaciones reportadas. El primer estudio sistemtico acerca
de la SAR fue publicada por Ross en 1961. Utilizando el virus del mosaico del tabaco (TMV)
aplicado en lesiones locales del hospedero, Ross demostr que las infecciones de TMV fueron
restringidas por una infeccin previa. Esta resistencia fue efectiva no solo contra el TMV sino
tambin contra el virus de la necrosis del tabaco y ciertos patgenos bacterianos. Ross acuo el
trmino "resistencia sistmica adquirida para referirse al sistema de resistencia inducible (Ross,
1961b) y "resistencia adquirida localizada para describir la resistencia inducida en hojas
inoculadas (Ross, 1961a). No est todava claro si la SAR y la resistencia adquirida localizada
son aspectos de la misma respuesta o procesos distintos.
En los ltimos 40 aos la SAR fue demostrada en muchas especies de plantas y el
espectro de resistencia se ampli para incluir no solo virus y bacterias, tambin hongos
fitopatgenos (Kuc, 1982). Se demostr tambin que la acumulacin de un grupo de protenas
extracelulares llamadas protenas PR (Pathogenesis Related) correlacionaba con el inicio de los
eventos de SAR (Van Loon y Antoniw, 1982). Por su parte White (1979) demostr que el cido
saliclico (AS) y ciertos derivados del cido benzico (AB) pueden inducir tanto la resistencia
como la acumulacin de protenas PR. En la dcada de los 80s el progreso fue lento, pero
actualmente la aplicacin de tcnicas de biologa y gentica molecular, as como la
disponibilidad de sofisticadas tcnicas bioqumicas ha aumentando de manera significativa la
comprensin de este fenmeno. En la Figura 5.7 se presenta un modelo muy esquematizado
de accin de la SAR. En dicha figura se aprecia que el proceso parece dividirse en dos eventos:
iniciacin y mantenimiento. Iniciacin se refiere a la induccin en s que sigue al estmulo, en
este caso la presencia de un agente infeccioso. Mantenimiento indica los pasos posteriores en
donde las seales bioqumicas desencadenadas durante la iniciacin son capaces de mantener
el estado de resistencia durante un perodo determinado incluso en ausencia del patgeno tanto
en los tejidos inicialmente infectados como en los no infectados.

5.2.2.2. Induccin de Genes CorreIativa con Ia Resistencia Sistmica Inducida. Un enfoque
muy til para el estudio de una respuesta bioqumica tan compleja como la SAR consiste en
identificar marcadores sencillos de medir y que correlacionan de forma precisa con el proceso
biolgico. En ese sentido se han aislado muchos cDNAs que se expresan en tejidos no
infectados durante el mantenimiento de la SAR. En el sistema modelo tabaco/TMV se encontr
que fueron inducidos coordinadamente en tejidos no infectados de plantas inoculadas al menos
nueve familias de genes, los cuales mantuvieron un nivel estable de mRNA. Estas familias de
genes fueron llamadas colectivamente "genes SAR (Ward et al., 1991). El tiempo en el cual la
expresin de los genes SAR es detectada (aproximadamente 6 das despus de la inoculacin)

75

correlaciona bien con el tiempo en el cual la resistencia puede apreciarse con un bioensayo.
Adicionalmente, los agentes abiticos que inducen resistencia, como el AS y el cido 2,6-
dicloroisonicotnico (Ward et al., 1991), inducen el mismo espectro de expresin de los genes
SAR en niveles comparables a los desencadenados por la SAR frente a un patgeno. En
conclusin, la expresin de los genes SAR se asocia con el inicio del estado de resistencia.

Figura 5.7. Modelo conceptual del inicio de la resistencia sistmica adquirida (SAR) (a la
izquierda) y del mantenimiento de dicho proceso (a la derecha). AS es cido saliclico. La seal
sistmica mencionada, que se transporta a larga distancia es hasta el momento de identidad
desconocida.

Adems de ser marcadores confiables para la SAR, algunos de los genes parecen jugar
un papel activo en la resistencia. Una vez que los cDNAs fueron aislados y las protenas
codificadas fueron purificadas, se encontr que varias tenan o bien actividad antimicrobiana
directa o bien actividad enzimtica que sugera una protena antimicrobiana. Como un ejemplo,
varias clases de genes SAR codifican -1,3-glucanasas y quitinasas. Dichas
glucanoendohidrolasas fue demostrado que poseen actividad antifngica in vitro (Linthorst,
1991). Otra clase de genes SAR codifican un grupo de protenas ricas en cistena (Cys)
relacionadas con una protena de intenso sabor dulce llamada thaumatina. Se sabe que las
protenas anlogas a la thaumatina poseen actividad antifngica in vitro (Vigers et al., 1991;
Woloshuk et al., 1991). Su actividad parece residir en la habilidad para destruir la integridad de
las membranas, por lo cual estas protenas son llamadas "permatinas. Otro grupo de genes
SAR que se sabe inhiben el crecimiento de hongos son las relacionadas con la protena PR
llamada PR-1. Las protenas PR-1 se encuentran ampliamente distribuidas en las angiospermas

76

y, en el caso del tomate y el tabaco, muestran actividad contra Phytophthora infestans (Cohen
et al., 1992).
Un mayor soporte para el papel de los genes SAR en la resistencia proviene de los
experimentos en donde los cDNAs fueron expresados en plantas transgnicas. Las plntulas
transgnicas de tabaco y Brassica que expresan una quitinasa del frijol se encuentran
significativamente protegidas contra la secadera causada por Rhizoctonia spp. (Broglie et al.,
1991). Asimismo, un alto grado de expresin de PR-1 en plantas transgnicas de tabaco result
en infeccin reducida por parte de dos patgenos Oomycetes, Peronospora tabaci (que causa
el "moho azul) y Phytophthora parasitica (que causa la "pierna negra) (Alexander et al., 1993).
Aunque la SAR se encuentra bien caracterizada en el tabaco, otras especies
examinadas muestran tambin la induccin sistmica de genes en respuesta a un ataque por
patgenos. En algunos casos, como en Arabidopsis, esos genes muestran relacin con algn
subconjunto de las familias gnicas descritas para el tabaco (Uknes et al., 1992). En otros
casos, como en el pepino, los genes SAR parecen ser diferentes a los principales descritos en
el tabaco (Mtraux et al., 1989). Es posible que cada grupo taxonmico de plantas haya
desarrollado su propio conjunto de genes SAR en respuesta a la presin evolutiva proveniente
de un espectro especfico de patgenos.

5.2.2.3. Transduccin de SeaIes en Ia Resistencia Sistmica Adquirida. El primer paso en
el desarrollo del la SAR es el reconocimiento de la infeccin de patgenos por una planta. Una
vez que la planta reacciona al patgeno, se liberan seales que disparan la resistencia en los
tejidos adyacentes y en los ms lejanos. Es importante sealar, sin embargo, que no todas las
interacciones planta-patgeno dan lugar a la induccin de SAR. Las interacciones compatibles
(que no inducen una respuesta hipersensible y por lo tanto permiten el establecimiento del
patgeno) pueden inducir la SAR, sin implicar necesariamente una reaccin de resistencia gene
a gene (Kuc, 1982). No se conoce al momento un denominador comn que sea til para
agrupar a los "patgenos inductores de SAR y esta rea requiere mayor estudio.
Se ha propuesto que el AS es una seal que dispara la SAR ya que su concentracin
aumenta de forma dramtica despus de la infeccin por un patgeno (Malamy et al., 1990;
Mtraux et al., 1990). La evidencia ms fuerte que involucra al AS como sealizador en la SAR
proviene de experimentos que utilizaron tabacos trasngnicos que expresaban la enzima
salicilato hidroxilasa, codificada por el gene nahG de Pseudomonas putida (Gaffney et al.,
1993). Esta enzima cataliza la conversin de AS a catecol, el cual no es un inductor de SAR.
Las plantas que expresan la salicilato hidroxilasa no acumulan AS en respuesta a la infeccin
por el patgeno y son incapaces de inducir una respuesta de SAR a patgenos virales,
bacterianos o fngicos.
Estos experimentos indican un papel directo del AS en la sealizacin de la SAR, pero
no dan luz acerca de si el AS es la seal sistmica, movilizada a larga distancia supuestamente
va floema. Mayor informacin acerca del AS se encuentra en el Captulo 6.5.

5.2.2.4. Interaccin entre SeaIizadores en Ia Resistencia Sistmica. Otros compuestos
involucrados en la sealizacin de la resstencia sistmica son el cido jasmnico (AJ) y el
etileno (Et). Se supone que el AS es un inductor de la SAR, mientras que el AJ y el Et son
sealizadores de la RS. La evidencia reciente indica que cada uno de estos compuestos
modifica el efecto de los otros. Como ejemplo, la concentracin de AS tiene algn efecto sobre
la magnitud de la respuesta inducida por el AJ. Se sabe que en Arabidopsis las cascadas de
sealizacin de AS y AJ son independientes, aunque ambas confluyen hacia una protena
reguladora llamada NPR1, la cual parece ser la encargada de iniciar la activacin de los genes
de defensa por medio de diferentes elementos reguladores y activadores transcripcionales. No
se sabe an de que forma NPR1 permite la bifurcacin posterior hacia SAR RS. Por otro

77

lado, van Wees et al. (2000) demostraron que las dos vas de sealizacin, la de AJ y la AS,
interactuan positivamente permitiendo contar con ambos tipos de proteccin en las plantas.

5.2.2.5. Literatura Referente a Acido Jasmnico. Este material se tiene a disposicin de los

1. Kutchan, T.M. 2001. Ecological arsenal and developmental dispatcher. The paradigm of
secondary metabolism. 125:58-60.
2. McConn, M., R.A. Creelman, E. Bell, J.E. Mullet, J. Browse. 1997. Jasmonate is essential for
insect defense in Arabidopsis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:5473-5477.
3. Vijayan, P., J. Shockey, C.A. Lvesque, R.J. Cook, J. Browse. 1998. A role for jasmonate in
pathogen defense of Arabidopsis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:7209-7214.

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5.2.3. EI Choque Oxidativo


Para el desarrollo de este captulo se utiliz como base la revisin de literatura realizada
por Wojtaszec (1997).
Las clulas vegetales son capaces de producir de manera constitutiva cantidades
significativas de especies reactivas de oxgeno (ROS), principalmente H
2
O
2
. Esta produccin se
asocia predominantemente con la matriz exocelular (o pared celular) y es regulada por factores
como las hormonas, luz, dao mecnico y diferentes estados de estrs. El H
2
O
2
es encontrado
sobre todo en clulas que se encuentran bajo lignificacin como los elementos traqueales,
fibras de floema y en algunas clulas epidrmicas. El H
2
O
2
es menos abundante en las paredes
celulares de las clulas en rpido alargamiento, pero es producido en forma intensiva en clulas
sujetas a dao o estrs mecnico. El choque o descarga oxidativa se define como la rpida
produccin de altos niveles de ROS en respuesta a un estmulo externo (Wojtaszec, 1997). El
primer reporte de rpida produccin de ROS se refiere a la generacin de
O
-2
en discos de
tubrculos de papa en respuesta a la inoculacin con una raza no compatible de Phytophthora
infestans o con fragmentos de la pared celular de hifas de la misma raza (Doke, N. 1983.
Physiol. Plant. Pathol. 23:345-357). Actualmente el choque oxidativo se considera uno de los
primeros eventos que siguen a la induccin de una respuesta causada por patgenos (hongos,
bacterias o virus), preparaciones con fragmentos de las paredes de los patgenos, fragmentos
de pared celular de plantas (oligogalacturnidos y oligosacarinas) o estrs mecnico. Parece
ser que la principal forma qumica de ROS involucrada es el H
2
O
2
, con alguna participacin del
O
2
-
. Sin embargo, la estrecha interrelacin entre la generacin de estas dos especies qumicas
hace muy difcil identificar claramente cual es la forma de ROS iniciadora del choque oxidativo.
La ocurrencia del incremento transitorio en la produccin de ROS es generalmente muy
rpida, presentando variaciones de acuerdo al sistema y al inductor utilizado. En cultivo celular
la respuesta inicia usualmente 1-2 minutos despus de aadir un inductor fngico o bien oligo-
1,4-d-D-galacturnidos (OGA) derivados de la paredes celulares de plantas, alcanza un mximo
varios minutos despus y es completado de 30 a 60 minutos despus de la induccin (Apostol,
., P.F. Heinstein, P.S. Low. 1989. Plant Physiol. 90:109-116). Debe remarcarse sin embargo
que el choque oxidativo observado es independiente hasta cierto punto de la acumulacin de
radicales libres, los cuales son detectados generalmente varias horas despus de la induccin,
probablemente como resultado de la peroxidacin de lpidos (Anderson, A.J., K. Rogers, C.S.

78

Tepper, K. Blee, J. Cardon. 1991.Physiol. Mol. Plant Pathol. 38:1-13). Cuando se utilizaron
segmentos de plantas como modelo para el estudio del choque oxidativo, esta respuesta fue
observada de 8 a 12 horas despus de la induccin (Doke, 1983), acompaada en cambio de
signos visibles de generacin de ROS de 2 a 4 horas despus (Schwacke, R. And A. Hager.
1992. Planta 187:136-141). Recientemente la deteccin in vivo de la produccin de H
2
O
2
en la
lechuga solo 5 horas despus de la inoculacin con una raza incompatible de Pseudomonas
syringae pv. phaseolicola parece confirmar la aparente independencia mencionada. Esta
condicin puede modificarse con el preacondicionamiento con estmulos mecnicos (abrasin
de la cutcula) o aplicacin de inductores de resistencia sistmica como el cido saliclico o el
cido 2,6-dicloroisonicotnico. Efectivamente, en hipocotilos preacondicionados de pepino la
aplicacin de un inductor fngico dio lugar a un mximo en la produccin de H
2
O
2
en 30
minutos, completando la respuesta en 90 minutos, situacin parecida a la observada en cultivos
celulares (Figura 5.8). Este efecto del preacondicionamiento fue completamente inhibido por la
adicin de cicloheximida o puromicina, sugiriendo un requerimiento de traduccin y sntesis de
protenas (Fauth, M., A. Merten, M.G. Hahn, W. Jeblick and H. Kauss. 1996. Plant Physiol.
110:347-354). Este mismo requerimiento fue observado para la generacin de H
2
O
2
en
hipocotilos preacondicionados de pepino tratados con un inductor a base de OGA (Svalheim, O.
and B. Robertsen. 1993. Physiol. Plant. 88:675-681).
Otras observaciones sugieren asimismo la existencia de "factores de competencia para
la induccin que seran requeridos para la induccin de respuestas de defensa en la soya
(Glycine max) (Graham, M.Y. and T.L. Graham. 1994. Plant Physiol. 105:571-578). Es probable,
debido a la constante estimulacin mecnica por la agitacin de los cultivos celulares, que el
efecto de preacondicionamiento sea inherente en estos sistemas de estudio. En los cultivos
celulares el pretratramiento con cido saliclico no cambia el curso temporal del choque
oxidativo, pero si intensifica la intensidad de generacin de ROS (Kauss, H. and W. Jeblick.
1995. Plant Physiol. 108:1171-1178).
En los cultivos celulares tratados con bacterias o inductores bacterianos, la produccin
de ROS fue observada como un proceso bifsico (Figura 5.8.b). La Fase es muy similar en
tiempo y forma a la reaccin frente a los inductores fngicos, y se considera por lo tanto una
respuesta no especfica. En las interacciones incompatibles, sin embargo, la Fase es
acompaada de la Fase , una generacin de relativa larga duracin que ocurre de 1.5 a 6
horas despus de la induccin (Baker, C.J., E.W. Orlandi, N.M. Mock. 1993. Plant Physiol.
102:1341-1344).
La comparacin de la habilidad de diferentes inductores para evocar un choque oxidativo
demuestra diferencias significativas en el tiempo y la intensidad de produccin de ROS. En un
cultivo celular de soya la aplicacin de OGA de plantas caus un choque oxidativo muy similar
al causado por el tratamiento de clulas con un inductor no purificado de Verticillium dahliae
(Apostol et al., 1989). En el ltimo caso se demostr que fue un carbohidrato, y no una protena,
el responsable de la induccin de produccin de H
2
O
2
(Davis, D., J. Merida, L. Legendre, P.S.
Low and P.S. Heinstein. 1993. Phytochemistry 32:607-611). Se encontr una situacin diferente
en las clulas de tabaco cuando, al aadir un inductor no purificado de Phytophthora parasitica
var. nicotianae, este fue inefectivo en inducir un choque oxidativo, mientras que la criptogena
(una protena de P. cryptogea un hongo no patgeno del tabaco) fue un inductor efectivo de la
generacin de ROS (Botn, A., C. Vronsi, D. Pontier, M.T. Esquerr-Tugay, J.P. Blein, P.
Ricci. 1994. Plant Physiol. Biochem. 32:373-378). En clulas de soya un inductor de OGA indujo
un choque oxidativo rpido y transitorio en comparacin con el evocado por una preparacin de
oligoglucanos obtenida a partir de paredes celulares de P. megasperma f.sp. glycinea (Levine,
A., R. Tenhaken, R. Dixon, C. Lamb. 1994. Cell 79:583-593). Se encontr sin embargo lo
contrario al aplicar ambos inductores en segmentos de hipocotilo de pepino (Svalheim, O. and
B. Robertsen. 1993). En este ltimo caso la respuesta ms rpida (mximo en 4-6 horas
despus de la induccin) evocada por lo oligoglucanos alcanz solo un 10-15% de la intensidad

79

de la respuesta mxima (10-12 horas despus de la induccin) generada por el inductor de
OGA.

Figura 5.8. Una representacin esquemtica de la cintica del choque oxidativo en cultivos
celulares de plantas posterior a la adicin de diversos inductores. Los valores de 0 a 100 en el
eje de las ordenadas representan % de produccin de ROS. (a) Respuesta a un inductor
fngico (
______
), fragmentos oligogalacturnidos de plantas (
. . . . .
) y planta preacondicionada
frente a un inductor fngico (- - - - -). (b) Reaccin bifsica de las clulas vegetales por
induccin con bacterias (
______
) y generacin de ROS por plantas en respuesta al tratamiento
con fragmentos oligogalacturnidos (- - - - -).

En otro estudio se verificaron cuatro diferentes preparaciones de inductor en un cultivo
celular de frijol (Wojtaszek, P., J. Trethowan, G.P. Bolwell. 1995. Plant Mol. Biol.. 28:1075-
1087). Aunque el tiempo de la respuesta fue aproximadamente el mismo, las reacciones de las
clulas vegetales mostraron gran variacin en su intensidad. Una preparacin no purificada de

80

Colletotrichum lindemuthianum fue el inductor ms potente de ROS. Este mismo inductor fue
tratado con aglutinina de germen de trigo sobre gel de agarosa y mostr cuatro veces menos
actividad, indicando la importancia de los residuos de N-acetilglucosamina como inductores del
choque oxidativo. A pesar de ello, cuando se utilizaron oligmeros de quitina o quitosn para la
induccin, la intensidad del choque oxidativo fue solo el 10% de lo alcanzado con la preparacin
no purificada, sugiriendo la existencia de grupos adicionales necesarios para la induccin de la
respuesta.

5.2.3.1. Respuestas Bioqumicas Asociadas aI Choque Oxidativo. Al nivel bioqumico
parecen existir ciertos puntos comunes entre los mecanismos de generacin de ROS de plantas
y mamferos. En ambos casos se tiene dependencia del aporte de equivalentes de reduccin
NADPH
2
a un complejo enzimtico llamado oxidasa de NADPH
2
que produce
O
-2
(superxido)
que posteriormente dismuta a H
2
O
2
. Sin embargo, fuera del plano bioqumico existen
diferencias patentes. Se supone que en los mamferos este H
2
O
2
es utilizado por clulas
mviles especializadas, neutrfilos, eosinfilos y macrfagos, para matar las bacterias
fagocitadas. Las bacterias son eliminadas mientras las clulas de defensa permanecen vivas,
ya que los ROS son liberados en la vacuola de fagocitocis. En las plantas en cambio el
crecimiento y propagacin de los patgenos se consigue por medio de una reaccin
hipersensible (HR), en la cual las clulas vegetales en el sitio de infeccin resultan muertas
(respuesta de muerte celular hipersensible), probablemente por efecto de los ROS producidos.
Se ha demostrado que el H
2
O
2
es directamente txico para los microorganismos (Peng, M. and
J. Kuc. 1992. Phytopathology 82:696-699), que induce la resistencia sistmica adquirida (SAR)
(Chen, Z., H. Silva, D.F. Klessig. 1993. Science 262:1883-1886) adems de reducir la
sensibilidad de la pared celular a la degragacin enzimtica induciendo el entrelazamiento
oxidativo de las glicoprotenas (Wojtaszek, P., J. Trethowan, G.P. Bolwell. 1995. Plant Mol. Biol.
28:1075-1087).
En experimentos de largo plazo en donde se determin el consumo de O
2
en clulas
inducidas de tomate, cuatro horas despus de la exposicin al inductor (Vera-Estrella, R., E.
Blumwald, V.J. Higgins. 1992. Plant Physiol. 99:1208-1215), no se observaron cambios en las
clulas tratadas con inductores provenientes de patgenos compatibles. Por otro lado, los
inductores originados de patgenos incompatibles (es decir, que inducen una HR) evocaron la
disminucin gradual en la tasa de consumo de oxgeno, comenzando en 1 hora y alcanzando
una tasa constante despus de 3 horas. Se observ una cintica similar en callos de clavel
derivados de un cultivar resistente a Fusarium oxysporum tratados con un extracto no purificado
del hongo (Trillas, M. . and J. Azcn-Bieto. 1995. Plant Physiol. Biochem. 33:47-53). Como
observacin interesante se tiene que la disminucin en el consumo de O
2
fue contrarestado por
la adicin de catalasa, pero no por la adicin de SOD o ascorbato (Vera-Estrella, R., E.
Blumwald, V.J. Higgins. 1992. Plant Physiol. 99:1208-1215). En experimentos de corto plazo
con clulas de frijol tratadas con un inductor se observ un incremento rpido y transitorio en el
consumo de O
2
, aumentando esta casi al doble 8 minutos despus de la induccin, lo cual
precedi el pico del choque oxidativo que se present 12 minutos despus de la induccin. En
clulas animales el incremento abrupto en la tasa de consumo de O
2
se conocido como "choque
respiratorio y es sensible al cianuro y a los compuestos azo con el grupo N3 (Segal, A. W. and
A. Abo. 1993. Trends Biochem. Sci. 18:43-47). En las plantas por otro lado el mencionado
proceso es sensible al cianuro pero es inhibido totalmente por los compuestos azo (Bolwell, G.
P., V.S. Butt, D.R. Davies, A. Zimmerlin. 1995. Free Radical Res. 23:517-532). Dado que se
supone que la fuente generadora de ROS depende del consumo de O
2
entonces parecen existir
diferencias fundamentales entre animales y plantas en al menos algunos componentes de los
sistemas generadores de ROS durante el choque oxidativo.
El anlisis adicional de los niveles de ATP y del cociente NADH/NAD
+
indic que el
incremento en el consumo de O
2
va dirigido casi totalmente a la produccin de ROS, dando

81

lugar a sntomas de estrs oxidativo en las clulas. Esta conclusin es apoyada por la
demostracin de la induccin de la alcohol deshidrogenasa, una enzima cuya expresin es
estimulada por el dficit de O
2
(Robertson, D., D.R. Davies, C. Gerrish, S.C. Jupe, G.P. Bolwell.
1995. Plant Mol. Biol. 27:59-67). Es asimismo de particular inters la evidencia de que la manitol
deshidrogenasa es una protena inducida por la patognesis. Dado que se supone que el
manitol funciona como antioxidante una disminucin en la concentracin del mismo afectara la
tasa interna de produccin de ROS en respuesta a los patgenos (Williamson, J. D., J.M.H.
Stoop, M.O. Massel, M.A. Conkling, D.M. Pharr. 1995. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:7148-
7152).
Hasta el momento se ha mencionado el efecto de induccin sobre el metabolismo
primario, sin embargo tambin se presentan modificaciones en el metabolismo secundario,
como es el caso de la produccin de fitoalexinas (compuestos de bajo peso molecular con
actividad antimicrobiana (Dixon, R. A. and N.L. Paiva. 1995. Plant Cell 7:1085-1097). Se ha
sugerido que existe conexin entre la generacin de ROS y la induccin de produccin de
fitoalexinas (Doke, N. 1983. Physiol. Plant Pathol. 23:345-357) y se utilizaron aplicaciones
directas de H
2
O
2
en plantas para verificar esta posibilidad. En hipocotilos y radculas de soya el
tratamiento con H
2
O
2
e hidroperxidos de cidos grasos inducen la acumulacin de gliceolina
(Montillet, J.-L. and N. Degouse. 1991. Plant Physiol. Biochem. 29:689-694). Se encontr una
situacin idntica en un cultivo celular de soya cuando la induccin de fitoalexinas fue inhibida
por la adicin de catalasa activa, mientras que la catalasa desnaturalizada no caus cambio
alguno (Apostol, ., P.F. Heinstein, P. S. Low. 1989. Plant Physiol. 90:109-116). Estos
resultados parecen indicar una liga causal entre los dos fenmenos. Sin embargo, resultados
posteriores mostraron que dos diferentes elementos presentes en la preparacin no purificada
fueron responsables de la induccin paralela, aunque independiente, de las dos respuestas
(Davis, D., J. Merida, L. Legendre, P.S. Low, P. F. Heinstein. 1993. Phytochemistry 32:607-611).
Estudios posteriores en hipocotilos y radculas de soya identificaron la peroxidacin de lpidos, y
no la generacin de ROS, como seal suficiente para inducir la sntesis de gliceolina
(Degouse, N., Triantaphylids, J.L. Montillet. 1994. Plant Physiol. 104:945-952). De forma
similar, los experimentos de induccin de reacciones de defensa en clulas de trbol o tabaco
frente a bacterias patgenas indicaron que, aunque las clulas produjeron ROS en respuesta a
dicho estmulo, la produccin de estos compuestos no fue un requerimiento esencial para la
induccin de la sntesis de fitoalexinas o la respuesta hipersensible. Usando este mismo
sistema, la induccin abitica de las clulas con HgCl
2
dio lugar a la produccin de fitoalexinas,
pero no al choque oxidativo (Devlin, W. S. and D. Gustine. 1992. Plant Physiol. 100:1189-1195).
Del mismo modo, los protoplastos de zanahoria acumularon cido 4-hidroxibenzico, pero no
produjeron cantidades detectables de H
2
O
2
(Bach, M., J.P. Schnitzler, H.U. Seitz. 1993. Plant
Physiol. 103:407-412). En clulas de frijol inducidas con diferentes compuestos, el potencial de
una sustancia dada para evocar el choque oxidativo no se relacion con la capacidad de inducir
la enzima PAL (fenilalanina amonio liasa, primera enzima de la va de los fenilpropanoides)
(Wojtaszek, P., J. Trethowan, G.P. Bolwell. 1995. Plant Mol. Biol. 28:1075-1087). En clulas de
tabaco tratadas con inductores proticos purificados, la sntesis de fitoalexinas no fue afectada
ni por la inhibicin de la generacin de ROS ni por la supresin de la acumulacin de ROS en el
medio (Rustrucci, C., V. Stallaert, M.L. Milat, A. Pugin, P. Ricci, J.P. Blein. 1996. Plant Physiol.
111:885-891). En conjunto estos resultados y los otros experimentos recientes parecen sugerir
que ambas respuestas son inducidas en paralelo, probablemente por diferentes sistemas de
reconocimiento y sealizacin (Jakobek, J. L. and P.B. Lindgren. 1993. Plant Cell 5:49-56). En
las leguminosas, en donde los flavonoides e isoflavonoides actan como fitoalexinas (Dixon, R.
A. and N.L. Paiva. 1995. Plant Cell 7:1085-1097) y como antioxidantes (Rice-Evans, C. A., N.J.
Miller, G.P. Bolwell, P.M. Bramley, J. Pridham. 1995. Free Radical Res. 22:375-383), los
tiempos de produccin de ROS y de secrecin de compuestos fenlicos hacia el sitio de
infeccin es de crucial importancia para la eventual magnitud del choque oxidativo.

82

5.2.3.2. Choque Oxidativo y Resistencia Sistmica. La resistencia sistmica adquirida (RSA)
es una de las consecuencias de las respuestas de defensa de las plantas. Ya que las
infecciones son generalmente eventos locales, se ha propuesto la existencia de seales
sistmicas para explicar la presencia de la RSA. Se propuso durante un tiempo que el cido
saliclico era uno de estos factores sistmicos pero fue demostrado que no es un compuesto
que sea traslocado (Vernooij, B., L. Friedrich, A. Morse, R. Reist, R. Kolditz-Jawhar, E. Ward, S.
Uknes, H. Kessmann, J. Ryals. 1994. Plant Cell 6:959-965). Ya que el choque oxidativo precede
a la acumulacin de cido saliclico en tejidos infectados (Hammond-Kosack, K. E., P.
Silverman, . Raskin, J.D.G. Jones. 1996. Plant Physiol. 110:1381-1394), la relacin entre estos
dos eventos ha sido estudiada con cierto detalle. La infiltracin de hojas de tabaco con H
2
O
2

activ la enzima 2-hidroxilasa de cido benzico la cual forma cido saliclico a partir del
benzico, resultando en la subsecuente acumulacin de este ltimo compuesto (Len, J., M.A.
Lawton, . Raskin. 1995. Plant Physiol. 108:1673-1678). Por otra parte, se observ que el cido
saliclico y su anlogo sinttico, el NA, inhibieron la catalasa y la ascorbato peroxidasa, dos
enzimas que regulan el nivel de ROS en las clulas, pero no inhiben las guayacol peroxidasas
que participan en la sntesis de lignina (Durner, J. and D.F. Klessig. 1995. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 92:11312-11316). Estos hallazgos corroboraron los efectos observados sobre la intensidad
del choque oxidativo en tejidos pretratados con cido saliclico o NA (Schwacke, R. and A.
Hager. 1992. Planta 187:136-141), en el sentido de que ambos compuestos afectan el sistema
de remocin de ROS y no precisamente la generacin de ROS.
Sin embargo, los resultados obtenidos por Rffer et al. (Rffer, M., B. Steipe, M.H. Zenk.
1995. FEBS Lett. 377:175-180) cuestionaron la actividad inhibitoria del cido saliclico sobre la
catalasa, indicando la posibilidad de que dicha unin sea de hecho en general con las
ferroenzimas de plantas, animales y hongos, pero no con enzimas carentes de hierro.
Asimismo, otra consecuencia de la eventual actividad inhibitoria del saliclico la catalasa en
plantas pudiera ser la elevacin de los niveles de H
2
O
2
en la vecindad inmediata de los sitios de
infeccin, siendo que se ha postulado que dicho nivel acta como segundo mensajero del cido
saliclico en la va de transduccin que lleva a la obtencin de SAR as como a la activacin de
los genes que codifican las protenas PR (Klessig, D. F. and J. Malamy. 1994. Plant Mol. Biol.
26:14391458). Aunque algunos experimentos indicaron que los niveles elevados de H
2
O
2

obtenidos como consecuencia de la inhibicin de la catalasa por el saliclico no son requeridos
para la induccin de SAR (Neuenschwander, U., B. Vernooij, L. Friedrich, S. Uknes, H.
Kessmann, J. Ryals. 1995. Plant J. 8:227-233), y aunque el papel del H
2
O
2
en la induccin de
las protenas PR ha sido cuestionado (Bi, Y.-M., P. Kenton, L. Mur, R. Darby, J. Draper. 1995.
Plant J. 8:235-245), no debe excluirse la posibilidad de que el H
2
O
2
pudiera ser uno de los
estmulos que activan estas respuestas.
Los datos obtenidos en dos laboratorios en cultivos celulares de soya y frijol tratados con
inductores proveen una liga causal entre los fenmenos de choque oxidativo y la
insolubilizacin (inmovilizacin) de las protenas de la pared celular. Las protenas estructurales
se insolubilizan despus de su arribo a la pared celular, en un proceso que se cree depende de
la formacin de un enlace eter isoditirosina catalizado por una enzima peroxidasa de la pared
celular (iyama, K., T.B.T. Lam, B.A. Stone. 1994. Plant Physiol. 104:315-320). Los resultados
obtenidos por Bradley et al. (Bradley, D. J., P. Kjellbom, C.J. Lamb. 1992. Cell 70:21-30)
mostraron la rpida desaparicin de las glicoprotenas p35 y p100 de extractos SDS a partir de
fracciones no purificadas de paredes celulares provenientes de clulas soya tratadas con un
inductor. El marcado inmunofluorescente de estas clulas utilizando anticuerpos de p35 indic
que estas protenas son inmovilizadas en las paredes probablemente a travs de enlaces
covalentes lo cual las hace no extrables con SDS. Esta prdida de extractabilidad de la
protena sigui la dinmica del choque oxidativo, comenzando dos minutos despus de la
induccin y terminando de 20 a 30 minutos despus. El efecto mencionado puede obtenerse

83

asimismo con la aplicacin exgena de H
2
O
2
, mientras que la insolubilizacin de las protenas
de la pared celular es prevenida por la catalasa o el ascorbato.
En los cultivos celulares de frijol fue demostrada la inmovilizacin de cinco glicoprotenas
despus de aplicar un inductor. La cintica de este proceso sigui a la del choque oxidativo,
siendo completado en 15 minutos. Esta inmovilizacin fue dependiente de la presencia de H
2
O
2

y del pH. Fue demostrada sin embargo la existencia de otro mecanismo de inmovilizacin
dependiente de productos de peroxidacin de los lpidos e independiente del pH que acta de
manera tarda posterior a la induccin (Wojtaszek, P., J. Trethowan, G.P. Bolwell. 1995. Plant
Mol. Biol. 28:1075-1087). Este proceso de entralazamiento de las glicoprotenas de la pared
celular inducido por la oxidacin es parecido a la insolubilizacin de las protenas del
exoesqueleto del erizo de mar, proceso regulado por un programa de desarrollo y tambin
dependiente del H
2
O
2
(Shapiro, B. M. 1991. Science 252:533-536), as como a la inmovilizacin
de las glicoprotenas de tipo HRGP en Chlamydomonas (Waffenschmidt, S., J.P. Woessner, K.
Beer, U.W. Goodenough. 1993. Plant Cell 5:809-820). En las plantas la rpida inmovilizacin de
las protenas puede darle mayor resistencia a las paredes celulares, haciendo ms lento el
ingreso del patgeno invasor (Brisson, L. F., R. Tenhaken, C. Lamb. 1994. Plant Cell 6:1703-
1712). Adicionalmente las protenas inmovilizadas funcionan como sitio de deposicin de
compuestos fenlicos y la subsecuente formacin de papilas (Wojtaszek, P., J. Trethowan, G.P.
Bolwell. 1995. Plant Mol. Biol. 28:1075-1087).
Los cambios en la permeabilidad de la membrana y los resultantes flujos, principalmente
entrada de Ca
2+
y H
+
y salida de K
+
y Cl
-
, se encuentran entre las ms rpidas respuestas de las
clulas vegetales a la presencia de inductores (Kombrink, E. and .E. Somssich. 1995. Adv. Bot.
Res. 21:1-34). En las clulas del perejil (Petroselinum crispum) estos flujos son iniciados de 2 a
5 minutos despus del estmulo inicial, observndose una alcalinizacin extracelular transitoria
(Hahlbrock, K., D. Scheel, E. Logemann, T. Nrnberger, M. Parniske, S. Reinold, W.R. Sacks,
E. Schmelzer. 1995. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:4150-4157). Una situacin similar se
observ en clulas de tomate (Felix, G., M. Regenass, T. Boller. 1993. Plant J. 4:307-316) y
frijol (Bolwell, G. P., V.S. Butt, D.R. Davies, A. Zimmerlin. 1995. Free Radical Res. 23:517-532).
En protoplastos de zanahoria tratados con un inductor fue posible observar flujos de Ca
2+
y K
+

incluso en ausencia de un choque oxidativo (Bach, M., J.P. Schnitzler, H.U. Seitz. 1993. Plant
Physiol. 103:407-412). La conexin entre la activacin de los canales de Ca
2+
y la induccin de
las restantes respuestas de defensa ya fue indicada (Hahlbrock, K., D. Scheel, E. Logemann, T.
Nrnberger, M. Parniske, S. Reinold, W.R. Sacks, E. Schmelzer. 1995. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 92:4150-4157), mientras que la importancia del carcter transitorio de los flujos de Ca
2+

fue demostrada en fracciones de tejido de tubrculo de papa ricas en membranas plasmticas.
En este sistema la activacin de la reaccin de generacin de
O
-2
dependiente de NADPH
estuvo estrictamente subordinada a la presencia de iones Ca
2+
, si bien la actividad de
generacin de
O
-2
acrecentada por el inductor fue independiente de Ca
2+
(Doke, N. and Y.
Miura. 1995. Physiol. Mol. Plant Pathol. 46:17-28).
Los cambios en el pH de los diferentes compartimientos celulares, resultado de los flujos
inicos, parecen jugar cierto papel importante en la regulacin de las respuestas de defensa de
la planta, entre ellas la produccin de ROS. Aunque se ha observado que ocurre poco o ningun
cambio en el pH citoplasmtico o vacuolar de las clulas de soya en respuesta a un inductor
(Horn, M. A., R.P. Meadows, . Apostol, C.R. Jones, D.G. Gorenstein, P.F. Heinstein, P.S. Low.
1992. Plant Physiol. 98:680-686), se encontr que los cambios en el pH externo (apoplstico +
extracelular) estuvieron cercanamente relacionados con la intensidad del choque oxidativo en
clulas de frijol tratadas con un inductor. Adicionalmente, tanto el choque oxidativo como la
inmovilizacin de las protenas de la pared celular son evocadas simplemente al transferir las
clulas de frijol a un medio amortiguado a pH alto (Bolwell, G. P., V.S. Butt, D.R. Davies, A.
Zimmerlin. 1995. Free Radical Res. 23:517-532). Al respecto se sabe que la unin de
inductores fngicos oligopeptdicos a las membranas de clulas de perejil es dependiente del

84

pH, con escasa afinidad en pH neutro o menor a 7, y alta afinidad en pH mayor a 7.0
(Nrnberger, T., D. Nennstiel, T. Jabs, W.R. Sacks, K. Hahlbrock, D. Scheel. 1994. Cell. 78:449-
460. En el caso de las clulas fagocticas de mamferos tambin se ha propuesto que los
cambios de pH modulan el choque oxidativo (Segal, A. W., M. Geisow, R. Garcia, A. Harper, R.
Miller. 1981. Nature 290:406-409).
Se ha propuesto un papel adicional para el H
2
O
2
como un componente clave en la
orquestacin de la muerte celular hipersensible (Levine, A., R. Tenhaken, R. Dixon, C. Lamb.
1994. Cell 79:583-593). En cultivos celulares de soya tratados con lneas isognicas de
Pseudomonas syringae pv. glycinea, la muerte celular ocurre nicamente al inocular con una
cepa avirulenta, pero no con una virulenta. Esta reaccin es inhibida por la adicin de DP (un
inhibidor de la NADPH oxidasa de mamferos), estimulada por el 3-amino-1,2,4-triazol (un
inhibidor de la catalasa) e imitada por la adicin extracelular de H
2
O
2
. Adicionalmente, el factor
que desencadena la muerte celular fue mvil y fue destruido por la catalasa. Esta seal mvil,
supuestamente H
2
O
2
, fue tambin capaz de inducir la expresin de genes que codifican
enzimas antioxidantes como la glutatin S-transferasa o la glutatin peroxidasa. La activacin
gnica fue conseguida con H
2
O
2
2mM, mientras que la muerte celular mostr un umbral de
respuesta con una transicin abrupta entre 4 y 6 mM de H
2
O
2
. Sin embargo, la produccin
estimada de H
2
O
2
por 1 ml de cultivo celular de soya con aplicacin de inductores es de 0.12
mol (Legendre, L., S. Reuter, P.F. Heinstein, P.S. Low. 1993. Plant Physiol. 102:233-240), muy
debajo de los mencionados valores umbral. Adicionalmente, los resultados de Levine et al.
(Levine, A., R. Tenhaken, R. Dixon, C. Lamb. 1994. Cell 79:583-593), mostraron una produccin
bifsica tpica de ROS, y la diferencia entre la cepa virulenta y la avirulenta de la bacteria usada
para inocular consisti en la falta de la Fase para la cepa virulenta. Esto quiere decir que en
ambos casos los ROS fueron generados durante la Fase pero solo en el caso de la cepa
avirulenta esto caus la muerte de las clulas de soya. Aunque estos datos pueden ser
interpretados como una indicacin del estrs oxidativo acumulativo que da lugar a la muerte
celular en interacciones incompatibles, los resultados de experimentos con mutatntes de P.
syringae pv. syringae contradicen dicha conclusin. Estos mutantes hrmA, a pesar de inducir la
produccin bifsica normal de ROS, no causa reaccin hipersensible ni muerte celular
hipersensible en un cultivo celular de tabaco (Glazener, J. A., E.W. Orlandi, C.J. Baker. 1996.
Plant Physiol. 110:759-763). Tomndolos juntos todos estos datos no parecen apoyar el papel
propuesto del H
2
O
2
como molcula orquestadora de la muerte celular hipersensible. Sin
embargo, es posible y justificado el considerar a esta especie qumica como un mensajero mvil
involucrado en la activacin de la expresin gnica en las clulas adyacentes al sitio de
infeccin, posiblemente va la induccin de factores de transcripcin anlogos a los NF-kB y
AP1 encontrados en clulas animales (Meyer, M., R. Schreck, P.A. Baeuerle. 1993. EMBO J.
12:2005-2015). En este sentido la identificacin de plantas mutantes deficientes en el control de
la formacin de lesiones por la presencia de patgenos abri nuevas posibilidades en la
determinacin del papel de las ROS en el desarrollo de la respuesta hipersensible. El estudio
de uno de dichos mutantes, lsd1 de Arabidopsis, demostr el papel del
O
-2
en la iniciacin de la
muerte celular y el desarrollo de lesiones (Jabs, T., R.A. Dietrich, J.L. Dangl. 1996. Science
273:1853-1856). Por otro lado, considerando las fuertes similitudes encontradas entre la muerte
celular programada (apoptosis) de las clulas animales y la muerte celular asociada a la
respuesta hipersensible de las clulas vegetales, es necesario mencionar que en algunos casos
se ha encontrado que las ROS no son requeridas para la muerte celular programada
(Jacobson, M. D. 1996. Trends Biochem. Sci. 21:83-86).

5.2.3.3. Fuentes de Especies Reactivas de Oxgeno para eI Choque Oxidativo. El mayor
reto en los estudios acerca del choque oxidativo se refiere a la cuestin del origen de las ROS
que determinan el fenmeno. Al respecto existen varias posibilidades:

85

1. Accin de un sistema NADPH oxidasa anlogo al de los fagocitos de animales.
2. Generacin de H
2
O
2
por peroxidasas de la pared celular en una reaccin dependiente
del pH.
3. Generacin de H
2
O
2
por la germin/oxalato oxidasa la cual, aunque no relacionada con
el choque oxidativo, es activada en respuesta a patgenos.
4. Accin de un sistema lipoxigenasa. Se ha propuesto como una posible fuente de ROS
aunque parece ser que la produccin de ROS precede a la actividad de
lipoxigenasa.
De estas cuatro posibilidades la primera y la segunda son las que han recibido mayor atencin.
En la elaboracin de un modelo de la generacin de ROS durante el choque oxidativo se
han trazado analogas con el sistema NADPH oxidasa de las clulas de mamferos (Kombrink,
E. and .E. Somssich. 1995. Adv. Bot. Res. 21:1-34). De acuerdo a este modelo (Figura 5.9) la
molcula inductora es reconocida por un receptor apropiado localizado en la membrana
plasmtica. En cuanto a ello diversos supuestos receptores se han identificado y al menos
parcialmente caracterizado. De acuerdo a los datos disponibles las interacciones posteriores
que activan a la NADPH oxidasa involucran protenas receptoras de GTP (Legendre, L., S.
Reuter, P.F. Heinstein, P. S. Low. 1993. Plant Physiol. 102:233-240), canales inicos
especialmente de Ca
2+
(Nrnberger, T., D. Nennstiel, T. Jabs, W.R. Sacks, K. Hahlbrock, D.
Scheel. 1994. 78:449-460), fosfolipasas A y C (Chandra, S., P.F. Heinstein, P. S. Low. 1996.
Plant Physiol. 110:979-986) y posiblemente AMP cclico. En el perejil el choque oxidativo fue
estrictamente dependiente de la presencia de Ca
2+
en el medio de cultivo, fue inhibido por
inhibidores de los canales inicos e iniciado por compuestos que estimulan los flujos inicos
(Hahlbrock, K., D. Scheel, E. Logemann, T. Nrnberger, M. Parniske, S. Reinold, W.R. Sacks,
E. Schmelzer. 1995. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:4150-4157). Por otra parte los inhibidores
de las quinasas proticas (K-252 y staurosporina) inhibieron la generacin de ROS, mientras
que los inhibidores de las fosfatasas (cido okadico, cantaridina, caliculina A) actuaron como
estimuladores del choque oxidativo en clulas de soya (Levine, A., R. Tenhaken, R. Dixon, C.
Lamb. 1994. Cell 79:583-593). El complejo NADPH oxidasa no ha sido aislado en las plantas,
pero su presencia fue demostrada indirectamente en varios experimentos inmunolgicos,
farmacolgicos y de reconstitucin (Auh, C.-K. and T.M. Murphy. 1995. Plant Physiol. 107:1241-
1247). Asimismo, aunque la fosforilacin/desfosforilacin se ha sugerido como un mecanismo
que regula la actividad del mencionado complejo enzimtico tampoco existe evidencia directa
de tal hecho.
En el modelo alternativo de generacin de H
2
O
2
por una peroxidasa cuya actividad
depende del pH (Figura 5.9) se enfatiza la trascendencia de los componentes preexistentes, sin
excluir la importancia de los eventos de sealizacin. De acuerdo a este modelo, cuando un
inductor arriba a la superficie celular es reconocido por un receptor apropiado dando esto lugar
a la activacin de los canales inicos. El movimiento de iones (Ca
2+
, K
+
, H
+
y Cl
-
) resulta en la
alcalinizacin transitoria de la pared extracelular, que a su vez activa la peroxidasa asociada a
dicha estructura generando
O
-2
que dismuta en H
2
O
2
. Esta generacin de H
2
O
2
por peroxidasas
ha sido demostrado y caracterizado durante la lignificacin (Gross, G. G., C. Janse, E.F.
Elstner. 1977. Planta 136:271-276). El control de la actividad de las peroxidasas de la pared
celular por el pH ha sido demostrado tanto para la produccin de H
2
O
2
como para la oxidacin
del alcohol coniferil, observndose mayor actividad en condicin alcalina (127). La fuente de
poder reductor para la generacin de ROS no ha sido identificada, pero los datos preliminares
indican que no es NADPH, NADH, ascorbato, glutatin o cistena. Se ha demostrado que el
reductor est presente en alta concentracin en los fluidos apoplsticos del frijol justo antes del
inicio del choque oxidativo, sugiriendo que el estmulo del inductor causa o bien su secrecin
hacia la pared celular, la sntesis del mismo en la pared o su liberacin de algn almacn
ubicado en la misma estructura (Bolwell, G. P. 1996. Biochem. Soc. Trans. 24:438-442).

86

Figura 5.9. Representacin esquemtica de las hiptesis ms aceptadas que describen el
posible origen de las ROS que forman el choque oxidativo. Despus del arribo del patgeno,
tanto las hidrolasas de la planta como del patgeno liberan fragmentos de pared celular
(inductores). Estas molculas se unen con receptores localizados en la membrana celular e
inician las cascadas de sealizacin que dan lugar a la activacin ya sea de la NADPH oxidasa
o de las peroxidasas asociadas a la pared celular (CWP). La accin de estos sistemas
enzimticos genera las ROS que activan los diferentes sistemas de defensa de la planta. Las
abreviaturas son: AC= adenilato ciclasa; E= inductor; Er= receptor; G= protena receptora de
GTP; R= reductor. (Modificado de Wojtaszec, 1997)

Aunque diferentes experimentos, utilizando distintas especies de planta como modelo,
favorecen uno u otro modelo de la generacin de ROS durante el choque oxidativo, tambin se
ha observado cierta heterogeneidad que no es posible explicar por la accin de un solo proceso
(Apostol, ., P.F. Heinstein, P. S. Low. 1989. Plant Physiol. 90:109-116). Esto ha llevado a
proponer la unificacin de los dos modelos ya que parece ser que ambos procesos cooperan
generando ROS durante el choque oxidativo.
La accin del sistema germin/oxalato oxidasa parece estar limitada a las interacciones
de cereales con patgenos, si bien alguna evidencia preliminar parece sugerir que esta protena

87

est presente tambin en dicotiledneas. La oxalato oxidasa, que libera H
2
O
2
y CO
2
a partir del
cido oxlico, es conocida tambin como germin (marcador extracelular glicoprotico de
desarrollo temprano de la planta) (Lane, B. G. 1994. FASEB J. 8:294-301). Aunque el sistema
oxalato oxidasa no se encuentra totalmente caracterizado, especialmente con respecto a la
localizacin del sustrato y la protena, varias observaciones indican que es activada en
respuesta a la infeccin por un patgeno. En las plantas de cebada la oxalato oxidasa se
expresa en bajo nivel de forma constitutiva, regulndose su expresin durante los eventos del
desarrollo. Sin embargo, su actividad se incrementa de forma dramtica en respuesta a la
inoculacin con el patgeno Erysiphe graminis sp. hordei, pero no en respuesta al dao
mecnico, con un tiempo de respuesta paralelo al de la quitinasa (Dumas, B., G. Freyssinet,
K.E. Pallett. 1995. Plant Physiol. 107:1091-1096) y precediendo incluso a la acumulacin de la
protena PR-1 (Zhang, Z., D.B. Collinge, H. Thordal-Christensen. 1995. Plant J. 8:139-145). En
las plantas de trigo tanto el nivel de mRNA de germin como la actividad de oxalato oxidasa
fueron inducidas por la infeccin con Erysiphe graminis f. sp. tritici. Se observ la expresin
gnica de la germin en cultivares de trigo resistentes y susceptibles, sugirindose que la oxalato
oxidasa es un marcador de respuesta general de defensa, ms que de resistencia de un cultivar
en particular (Hurkman, W. J. and C.K. Tanaka. 1996. Plant Physiol. 111:735-739).

5.2.3.4. Literatura Referente a Choque Oxidativo y Muerte CeIuIar Programada. Este
material se tiene a disposicin de los estudiantes para su lectura e imparticin de seminarios.

1. Bolwell, G.P. 1999. Role of active oxygen species and NO in plant defence responses. Curr.
Op. Plant Biol. 2:287-294.
2. Lamb, C. and R.A. Dixon. 1997. The oxidative burst in plant disease resistance. Annu. Rev
3. Mehdy, M.C. 1994. Active oxygen species in plant defense against pathogens. Plant Physiol.
105:467-472.

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6. ESTRS OXIDATIVO

Por definicin el estado termodinmico de un organismo viviente es qumicamente
reducido en comparacin con su entorno oxidado. Esta diferencia qumica es la que permite
establecer la diferencia de potencial que da lugar a los fenmenos bioqumicos de produccin
de ATP y potencial reductor. En ausencia de este diferencial la vida como la conocemos no
transcurre. Cuando el organismo muere pasa a estar en equilibrio termodinmico con su
entorno, en este caso la atmsfera oxidante rica en O
2
de nuestro planeta. Esta presencia de O
2

en gran cantidad en nuestra atmsfera permite la actividad de especies vivientes con alto nivel
de organizacin y por ende con alto consumo energtico.
Para recordar brevemente: sabemos que durante el proceso fotosinttico las
molculas oxidadas CO
2
, SO
4
=
y NO
3
-
pasan a ser reducidas formando compuestos como los
carbohidratos, aminocidos y lpidos. Para ello se requiere energa (ATP) y potencial reductor
(NADPH
2
, NADH
2
, etc.). La energa se captura de la luz solar y el potencial reductor se obtiene
de la oxidacin del H
2
O, obtenindose pares libres protn-electrn y O
2
como subproducto.
Para utilizar la energa almacenada en molculas reducidas como los carbohidratos, se requiere
la transferencia de los pares protn-electrn a travs de un diferencial qumico. En este caso el
diferencial se establece contra el O
2
. En el caso de los organismos anaerobios (para quienes el

88

O
2
es altamente txico) el diferencial qumico se establece contra otras molculas como el
nitrato o el sulfato.
Desde el punto de vista de la produccin de ATP los organismos anaerobios son menos
eficientes que los aerobios. La utiIizacin deI O
2
como aceptor finaI de eIectrones permite
obtener gran cantidad de ATP a partir de la oxidacin de diferentes biomolculas. Sin embargo,
la molcula de O
2
puede ser activada de distintas formas formando una especie qumica
llamada "radical, es decir una molcula con desbalance en su carga electrnica, que es capaz
de robarle electrones a otras molculas llevndolas a la oxidacin. A su vez una molcula activa
de O
2
puede formar otras especies qumicas oxidantes como el H
2
O
2
. En el entorno celular las
especies activas de O
2
pueden oxidar a especies qumicas tan importantes como las protenas,
lpidos de membranas o DNA, causando daos importantes en la maquinaria bioqumica. Este
dao por oxidacin es entonces el precio que los organismos aerobios debemos pagar para
realizar las diferentes actividades metablicas en un entorno rico en O
2
.
Durante el curso de su evolucin los organismos aerobios desarrollaron una batera de
defensas contra la oxidacin por el O
2
activado. Estos mecanismos de defensa, en forma de
fitoqumicos (antioxidantes y otros compuestos estabiIizadores), estabilizan, previenen o
reparan a las diferentes biomolculas manteniendo al mximo el estatus celular reducido.
Se define estrs oxidativo como aquel tipo especial de estado bioqumico de una clula
o tejido, que puede ocurrir en plazos cortos o largos, en donde la generacin de especies
qumicas oxidantes rebasa la capacidad de produccin o la actividad de especies antioxidantes.
Dependiendo del nivel de estrs oxidativo alcanzado las plantas ven modificadas sus
actividades metablicas en mayor o menor medida. Esto ocurre porque el balance oxidacin-
reduccin, adems de cambiar la eficiencia de funcionamiento de muchas enzimas, tambin es
capaz de modificar el perfil de genes expresados por la planta, generando entonces fenotipos
que pudiramos llamar orientados a la condicin de estrs. Normalmente un alto ndice de
oxidacin resulta en poca produccin o en poca calidad de la cosecha, si es que esta se
obtiene. Se busca entonces lograr que las plantas mantengan una mayor capacidad
antioxidante incluso en presencia de factores ambientales negativos, o bien que la planta sea
capaz de mantener cierto estado metablico o de funcionamiento aunque presente un ndice
alto de oxidacin.
En la parte final de este captulo aparece una traduccin del artculo intitulado "Oxidative
stress in plants de nz y Van Montagu (1995). En dicho trabajo se presenta una panormica
de los avances y perspectivas sobre estrs oxidativo en las plantas hasta 1995 y se encuentra
escrito en estilo didctico. Es interesante remarcar las posibles aplicaciones que en ese ao se
vislumbraban para las plantas transgnicas (transformadas para expresar enzimas
antioxidantes) tanto en investigacin como en potenciales aplicaciones tecnolgicas.
Por otra parte, existe tambin la posibilidad de controlar la capacidad de resistencia de
Ias pIantas frente al estrs oxidativo utilizando las herramientas convencionales de
mejoramiento gentico o modificando las soluciones o mezclas fertilizantes, cambiando el
entorno (luz, CO
2
, composicin del sustrato, temperatura, etc.). A este ltimo grupo de tcnicas
se le llamar "aumento fenotpico" o no heredabIe en la resistencia al estrs oxidativo,
mientras que los conseguido por mejoramiento gentico se le nombrar "aumento genotpico"
o heredabIe. El aumento fenotpico en la resistencia al estrs oxidativo puede lograrse
asimismo utilizando sealizadores del estrs aplicados de manera exgena, por lo cual se
incluye en el presente escrito un subcaptulo dedicado a ello.
Un punto interesante es que si se logra modificar la resistencia al estrs abitico
potencialmente puede lograrse que aumente la resistencia al estrs bitico. Esta afirmacin se
basa en el conocido fenmeno de resistencia cruzada, que se define como "la tolerancia
inducida a un estrs bitico o abitico adicional despus de la exposicin a un estrs oxidativo
especfico, y es descrito por varios autores como Sharma et al. (1996), quienes mostraron que
la preexposicin al ozono aument la resistencia de Arabidopsis a Pseudomonas syringae,

89

rvar et al. (1997) quienes describieron el aumento en la resistencia al ozono en el tabaco
pretratado con cido jasmnico o sometido a dao mecnico, Yalpani et al., (1994) quienes
observaron que la preexposicin del tabaco a la radiacin UV o al ozono aumentaron su
resistencia al virus del mosaico del tabaco, as como otros autores. Asimismo, y considerando
que existen muchos puntos comunes en los sistemas bioqumicos de estabilizacin y
antioxidacin de plantas y animales (Xiong y Zhu, 2001), se tiene otra avenida de oportunidades
para que, con las mismas herramientas desarrolladas para la mayor resistencia al estrs, se
incremente la calidad nutricional o teraputica de los alimentos o productos de origen vegetal,
logrando que estos contengan una mayor cantidad o ciertos perfiles de molculas especficas
con poder antioxidante o protector.

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6.1. Qumica deI Estrs Oxidativo

Esta seccin 6.1 y las subsecciones de la misma se basan en el trabajo publicado por
McKersie (1996).
El oxgeno atmosfrico en estado estacionario (Figura 6.1) es un biradical, es decir,
tiene dos electrones no apareados con espn paralelo. Esta caracterstica hace poco probable
que el oxgeno participe en reacciones con molculas orgnicas (que tienen dos electrones
apareados con espn opuesto) a menos que sea activado. Este requerimiento de activacin es
predicho por el Principio de Exclusin de Pauli, que dice que el oxgeno en estado estacionario
reaccionar con un reductor divalente solo si este ltimo tiene dos electrones no apareados con
espn paralelo opuesto al del oxgeno, lo cual es poco comn. Esta restriccin de espn implica
que la forma ms comn de reduccin del oxgeno en reacciones bioqumicas es la
transferencia de un electrn individual (reduccin monovalente).
La activacin de oxgeno puede ocurrir por dos diferentes mecanismos: absorcin de
suficiente energa para revertir el espn de uno de los electrones desapareados o la reduccin
monovalente. Si el oxgeno triplete (en estado estacionario) absorbe suficiente energa para
revertir el espn de uno de sus electrones desapareados, formar un singlete, estado en que los
dos electrones tendrn espn opuesto y estarn apareados (Figura 6.1). Esta activacin rebasa
la restriccin de espn y el oxgeno singlete puede participar en reacciones de transferencia
divalente con molculas orgnicas con mucho mayor probabilidad que el estado triplete.
El segundo mecanismo de activacin del oxgeno es por medio de la reduccin
monovalente paso a paso del oxgeno para formar superxido (
O
-2
), perxido de hidrgeno
(H
2
O
2
), radical hidroxil (OH) y finalmente agua. El primer paso en la reduccin del oxgeno para
formar superxido es endotrmica, pero las reducciones subsecuentes son exotrmicas.
El superxido puede actuar como oxidante o como reductor. Puede oxidar el azufre, el
cido ascrbico o el NADPH; puede reducir el citocromo C e iones metlicos. Una reaccin de
dismutacin que da lugar a la formacin de perxido de hidrgeno y oxgeno se presenta
espontneamente o bien es catalizada por la enzima superxido dismutasa. En su forma
protonada el superxido forma el radical perhidroxil (OOH) el cual es un oxidante potente
(Gebicki y Bielski, 1981), sin embargo se considera de poca relevancia biolgica a causa de su
baja concentracin a pH fisiolgico.

90

Figura 6.1. Nomenclatura de las diferentes formas de oxgeno (modificado de McKersie, 1996).

La reduccin univalente de superxido produce perxido de hidrgeno el cual no
es un radical libre (ms bien pertenece a una categora ms general de molculas llamadas
especies reactivas de oxgeno o ROS) ya que todos sus electrones estn apareados. El
perxido de hidrgeno es notable por su capacidad de atravesar las membranas, lo cual
incapacita su localizacin en un solo compartimiento celular. Numerosas enzimas (peroxidasas)
utilizan el perxido de hidrgeno como sustrato en reacciones de oxidacin involucradas en la
sntesis de molculas orgnicas complejas. La bien conocida capacidad de reaccin del
perxido de hidrgeno no es debida a su reactividad per se, ya que requiere la presencia de un
reductor metlico para formar el radical hidroxil (
OH), que es un potente agente oxidante de

molculas orgnicas. La llamada reaccin Fenton describe esta reaccin:

Fe
+2
+ H
2
O
2
Fe
+3
+
OH + OH
-
(6.1)

En sistemas biolgicos la disponibilidad del in ferroso limita la tasa de reaccin, pero el
reciclado de hierro de la forma frrica a la ferrosa por un agente reductor puede mantener la
reaccin Fenton, generndose as radicales hidroxil. Se supone que el superxido puede actuar
como reductor (reaccin 6.2) tal como se iliustra en las medias reacciones 6.3 y 6.4.

O
-2
+ H
2
O
2
O
2
+
OH + OH
-
(6.2)

Fe
+2
+ H
2
O
2
Fe
+3
+
OH + OH
-
(6.3)

91

O
-2
+ Fe
+3
O
2
+ Fe
+2
(6.4)

Por lo tanto, en presencia de cantidades traza de hierro, la reaccin del superxido y del
perxido de hidrgeno formar el radical hidroxil que oxidar sustratos orgnicos. Adicional al
hierro, otros metales tambin participan en estas reacciones.
La oxidacin de sustancias orgnicas puede proceder de dos formas: adicin de OH a la
molcula orgnica o sustraccin de un tomo de hidrgeno de la misma. En la reaccin de
adicin (reaccin 6.5), el radical hidroxil se aade al sustrato orgnico formando un producto
hidroxilado que es posteriormente oxidado por iones ferrosos, oxgeno o cualquier otro agente
oxidante (reacciones 6.6 y 6.7). Los productos hidroxilados tambin pueden dismutar formando
productos interenlazados (reaccin 6.8).

OH + R
ROH (6.5)

ROH + Fe
+3
ROH + Fe
+2
+ H
+
(6.6)

ROH + O
2
ROH +
O
-2
+ H
+
(6.7)

ROH +
ROH R-R + 2H
2
O (6.8)

En la reaccin de sustraccin el radical hidroxil oxida el sustrato orgnico formando
agua y un radical orgnico (reaccin 6.9). Este ltimo producto tiene un nico electrn
desapareado por lo cual es capaz de reaccionar con el oxgeno triplete en estado estacionario
(reaccin 6.10). La adicin del oxgeno triplete al radical orgnico da lugar a la formacin de un
radical peroxil que puede sustraer hidrgeno de otra molcula orgnica generando un segundo
radical orgnico (reaccin 6.11). Esta reaccin en cadena explica el porqu las especies
reactivas de oxgeno causan un nivel de dao que no se encuentra en proporcin con su
concentracin inicial.

OH + RH R
+ H
2
O (6.9)

R + O
2
ROO
(6.10)

ROO
+ RH R
+ ROOH (6.11)

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6.1.1. Reacciones de Ias Especies Reactivas de Oxgeno en Sistemas BioIgicos

Las especies reactivas de oxgeno y radicales libres de oxgeno son capaces de causar
dao a lpidos de las membranas celular, mitocondrial y cloroplstica, asimismo el DNA y
protenas pueden sufrir dao oxidativo que los degrada.

6.1.1.1. Dao Oxidativo a Ios Lpidos. La reaccin de radicales libres con lpidos
polinsaturados ha sido extensamente estudiada ya que se relaciona con la rancidez y el
desarrollo de malos olores y sabores en los alimentos. En el campo del estrs el dao oxidativo
a los lpidos se relaciona directamente con las reacciones de radicales libres en membranas
biolgicas. Considerando las diferentes reacciones de peroxidacin que ocurren con los
distintos cidos grasos, que forman los fosfolpidos y glicolpidos de la membrana, es difcil

92

cubrir en este escrito toda la complejidad de estos procesos. Lo que anota a continuacin es un
resumen que se refiere a un lpido general "R y un cido graso especfico, el linolico, que es
comn en membranas celulares de plantas.
La peroxidacin de lpidos (Figura 6.2) consta de tres distintos pasos: iniciacin,
propagacin y terminacin. La reaccin de iniciacin entre un cido graso insaturado
(linolico) y el radical hidroxil implica la sustraccin de un H del grupo metilvinil del cido graso
(reaccin 6.9); en el caso del linolico esto ocurre en el carbono 11. El resultado es la formacin
de un radical orgnico, una estructura de resonancia con un electrn desapareado
deslocalizado entre los carbonos 9 y 13. En la reaccin de propagacin esta estructura de
resonancia reacciona con el oxgeno triplete formando un radical peroxi (reaccin 6.10). En el
caso del linolico la adicin ocurre en cuaquiera de los carbonos 9 a 13. Este radical peroxi
sutrae un H de un segundo cido graso formando un lpido hidroperxido y un nuevo radical
orgnico (reaccin 6.11) que puede a su vez participar en una nueva reaccin de sustraccin de
H (reaccin 6.10). Por lo tanto, una vez que el radical hidroxil inicia la reaccin de peroxidacin
sustrayendo el H, crea un radical orgnico capaz de reaccionar con O
2
triplete (sin necesidad de
activacin previa) formando una reaccin en cadena. El papel del radical hidroxil es anlogo al
de una chispa que inicia un fuego. La base de la extrema reactividad del radical hidroxil con los
lpidos es que an con baja concentracin inicial da lugar a una reaccin en cadena que enrola
al oxgeno triplete, la forma qumica ms abundante de oxgeno en la clula.
El lpido hidroperxido (ROOH) es inestable en presencia de Fe o cualquier otro
catalizador metlico ya que el ROOH participa en una reaccin Fenton que genera radicales
libres:

ROOH + Fe
+2
OH
-
+ RO
+ Fe
+3
(6.12)

Por lo tanto, en presencia de Fe la reaccin en cadena no solo se propaga sino que se
amplifica ya que la suma de las reacciones 6.9 a 6.12 da lugar a dos radicales libres. Entre los
productos de degradacin de ROOH se encuentran los aldehdos y los hidrocarburos como el
etano y el etileno.
La reaccin de terminacin ocurre cuando los radicales se entrelazan formando
productos conjugados que no son radicales (reacciones 6.13 a 6.15), tpicamente productos de
alto peso molecular resultado del entrelazamiento de cidos grasos o fosfolpidos de las
membranas. Obviamente estos cambios eliminan la funcionalidad de la membrana.

R
+ R
R-R (6.13)

R
+ ROO
ROOR (6.14)

ROO
+ ROO
ROOR + O
2
(6.15)

Adems de reaccionar con el radical hidroxil los cidos grasos insaturados reaccionan
con el oxgeno singlete formando una compleja mezcla de hidroperxidos que son diferentes a
los producidos por la reaccin con el radical hidroxil.

6.1.1.2. Dao Oxidativo a Ias Protenas.
El ataque oxidativo sobre las protenas resulta en modificaciones de aminocidos en
sitios especficos, fragmentacin de la cadena peptdica, agregacin de productos de
entrelazamiento, carga elctrica alterada y mayor susceptibilidad a la protelisis. Los
aminocidos en un pptido difieren en su susceptibilidad al ataque, y las diferentes formas de
oxgeno activado difieren en su capacidad de reaccin. Adicionalmente las estructuras primaria,

93

secundaria y terciaria alteran la susceptibilidad relativa de ciertos aminocidos. En vista de esta
complejidad deben realizarse algunas generalizaciones. Los aminocidos que contienen azufre,
y los grupos tiol especficamente, son sitios muy susceptibles. El oxgeno activado puede
sustraer un H de los residuos de cistena para formar un radical tioil que se enlaza a un
segundo radical tioil formando puentes disulfuro. Alternativamente el oxgeno puede adicionarse
a un residuo de metionina formando derivados metionina sulfxido. En sistemas microbianos la
reduccin de ambos se consigue con la tioredoxina y la tioredoxina reductasa (Farr y Kogoma,
1991). En los cloroplastos de las plantas de chcharo se ha encontrado una metionina-S-xido
reductasa (Ferguson y Burke, 1992). Esta enzima reduce el metionil sulfxido de nuevo a
metionina en presencia de tioredoxina (Brot y Weissbach, 1982). En algunos casos (pero no
demostrado en plantas) esta enzima puede restaurar la actividad biolgica de una protena.

Figura 6.2. Peroxidacin de cido linolico. El radical hidroxil sustrae un H del carbono 11 del
cido graso entre los dos dobles enlaces formando agua. La deficiencia de electrones es
repartida entre los carbonos 9 a 13 formando una estructura de resonancia. El oxgeno triplete
que tiene dos electrones desapareados puede unirse a esta estructura formando un radical
peroxi. Este radical puede sustraer otro H de una segunda molcula de linolico en una
reaccin de propagacin formando un lpido hidroperxido. El rompimiento de cadenas y las
subsecuentes reacciones de entrelazamiento producen aldehdos, hidrocarbros, alcoholes y
dmeros entrecruzados (modificado de McKersie, 1996).

Otras formas de dao por radicales no son reversibles. Por ejemplo, la oxidacin de
centros hierro-azufre por el superxido destruye la funcin enzimtica (Gardner y Fridovich,
1991). Muchos aminocidos sufren modificaciones especficas irreversibles cuando una

94

protena es oxidada. Por ejemplo, el triptofano es entrecruzado formando productos bitirosina
(Davies, 1987). La histidina, lisina, prolina, arginina y serina forman grupos carbonilo al ser
oxidados (Stadtman, 1986). La degradacin oxidativa de protenas es aumentada en presencia
de cofactores metlicos que son capaces de realizar ciclos redox, tales como el Fe. En estos
casos el metal se une a un sitio de unin catinica divalente de la protena. El metal reacciona
entonces con el perxido de hidrgeno en una reaccin Fenton, formando un radical hidroxil
que rpidamente oxida un residuo de aminocido en o cerca del sitio de unin divalente
(Stadtman, 1986). Esta oxidacin especfica generalmente destruye el sitio de unin divalente
inactivando la protena.

6.1.1.3. Dao Oxidativo aI DNA. El oxgeno activado y los agentes que generan radicales
libres de oxgeno, tales como la radiacin ionizante, inducen numerosas lesiones en el DNA que
causan deleciones, mutaciones y otros efectos genticos letales. La caracterizacin del dao
sufrido por el DNA indic que tanto los azcares como las bases son susceptibles de oxidacin,
causando degradacin de las bases, rompimiento de los enlaces y entralazamiento con
protenas (mlay y Linn, 1986). La degradacin de las bases da lugar a numerosos productos,
incluyendo la 8-hidroxiguanina, hidroximetilurea, urea, timina glicol, productos saturados y
anillos abiertos de timina y adenina.
La principal causa del rompimiento de enlaces simples es la oxidacin del azucar por el
radical hidroxil. En pruebas in vitro el perxido de hidrgeno y el superxido no causan
rompimiento de enlaces bajo condiciones fisiolgicas. Por ello se supone que la toxicidad in vivo
es el resultado de reacciones Fenton con un catalizador metlico. Al menos en E. coli estas
reacciones Fenton pueden ser alimentadas por NADH. El mutante ndh de E. coli acumula
NADH como resultado de la inhabilidad del mutante para donar electrones del NADH a la
cadena respiratoria; como resultado, el mutante es hipersensible al perxido de hidrgeno. Los
estudios de otros mutantes de E. coli indicaron que el metal Fenton activo est unido al DNA,
probablemente quelatado por un enlace fosfodiester. Si el metal es reducido por una pequea
molcula difundible, como el NAD(P)H o el superxido, reaccionar con perxido de hidrgeno
para formar el radical hidroxil (mlay y Linn, 1986). El radical hidroxil de corta vida entonces
oxida un azcar o base adyacente causando el rompimiento de la cadena de DNA.
El entrelazamiento del DNA con protenas es otra consecuencia del ataque de radicales
hidroxilo sobre el DNA o sus protenas asociadas (Oleinick et al., 1986). El tratamiento con
radiacin ionizante, u otros agentes que generan radicales hidroxilo, causa uniones covalentes
timina-cistena entre el DNA y la protena. Aunque estos entrelazamientos DNA-protena son
mucho menos abundantes que los rompimientos de enlaces simples, su reparacin es menos
sencilla y pueden ser letales si la replicacin o transcripcin precede a la reparacin.
El DNA es el eslabn dbil celular frente al dao oxidativo ya que esta molcula es muy
efectiva en unir metales involucrados en reacciones Fenton y, por otro lado, el dao oxidativo es
menos tolerado en el DNA en comparacin con otras macromolculas.

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6.1.2. Sitios de Produccin de Oxgeno Activado en Ias CIuIas

Como se indic anteriormente, existen dos maneras de activar el oxgeno. La reduccin
de oxgeno para formar superxido, perxido de hidrgeno y radicales hidroxil es el principal
mecanismo de activacin de oxgeno en muchos sistemas biolgicos. Sin embargo, en plantas
fotosintticas la formacin de oxgeno singlete en los fotosistemas es importante. El oxgeno
activado se forma como un componente normal del metabolismo que capacita la consecucin
de reacciones qumicas complejas como la disipacin energtica en las cadenas de transporte

95

de electrones de cloroplastos y mitocondrias, la oxidacin de xenobiticos y la polimerizacin de
lignina. Asimismo el oxgeno activado es formado como consecuencia de la disfuncin de los
sistemas de transporte de electrones o bien por perturbaciones metablicas inducidas por
estados de estrs.

6.1.2.1. Produccin de Oxgeno Activado en Ios CIoropIastos. Se sabe que existen al
menos cuatro sitios en donde el cloroplasto puede activar oxgeno (Figura 6.3):

Figura 6.3. Esquema del sistema de transporte de electrones en la membrana de los tilacoides
mostrando tres sitios posibles de produccin de oxgeno activado. O
2
es oxgeno triplete en
estado basal, O
2
*
es oxgeno singlete y O
2
-
es el anin superxido. En el esquema se muestra la
produccin de oxgeno singlete al interaccionar el O
2
con la clorofila activada en los complejos
de captura de radiacin, se indica tambin la produccin de superxido en el lado oxidante (el
que particiona el agua) del fotosistema , se anota por ltimo la produccin de superxido a
partir de oxgeno en estado triplete por la ferredoxina en el lado reductor del fotosistema
(modificado de McKersie, 1996).

(a). El fotosistema (PS) puede llevar a cabo la reduccin monovalente de oxgeno (la
reaccin de Mehler) en aquellas condiciones en donde el NADP sea limitante. Esto puede
ocurrir, por ejemplo, si el ciclo de Calvin no oxida el NADPH tan rpidamente como el PS
aporta electrones.
(b). La clorofila fotoactivada normalmente transfiere la energa de excitacin a los
centros de reaccin de los fotosistemas. Sin embargo, bajo las condiciones que previenen que
la energa capturada sea utilizada en el sistema de transporte de electrones, la mencionada
energa puede excitar el oxgeno de estado triplete a singlete. Estas condiciones incluyen el

96

cierre estomtico causado por dficit de agua, dao a las membranas del sistema de transporte
de electrones, carencia de nutrientes especficos o la presencia de xenobiticos como
herbicidas o contaminantes.
(c). El lado oxidante del fotosistema (PS) facilita la transferencia de cuatro electrones
del agua hacia el centro de reaccin del PS liberando oxgeno triplete en estado basal. La fuga
de electrones de este sitio puede activar el oxgeno molecular.
(d). Durante la fotorespiracin la Rubisco cataliza la adicin de oxgeno al carbono 2 de
la RuBP formando fosfoglicolato y fosfoglicerato. El subsecuente metabolismo del glicolato en
los peroxisomas genera oxgeno activado.

6.1.2.2. Produccin de Oxgeno Activado en Ias Mitocondrias. La mayora del oxgeno es
consumido por la citocromo oxidasa en el sistema de transporte de electrones mitocondrial, e
involucra la transferencia secuencial de cuatro electrones al oxgeno, liberando agua. Las
mitocondrias vegetales tienen un sitio adicional de reduccin de oxgeno en la oxidasa
alternativa (AOx), que se distingue de la citocromo oxidasa por su resistencia al cianuro. Sin
embargo, ninguno de estos sitios produce cantidades significativas de superxido (Rich y
Bonner, 1978). Las mitocondrias aisladas producen H
2
O
2
y O
-2
en presencia de NADH (Loschen
et al., 1974). La antimicina A, la cual bloquea el flujo de electrones despus de la transferencia
a la ubiquinona (reducindola a ubiquinol), incrementa la produccin de oxgeno activado
(Figura 6.4), haciendo suponer que en esta regin entre la ubiquinona y el citocromo b es en
donde se produce el superxido (Rich y Bonner, 1978). Las varias protenas Fe-S y la NADH
deshidrogenasa son tambin candidatos a la formacin de superxido y perxido de hidrgeno
(Turrens et al., 1982).

6.1.2.3. Produccin de Oxgeno Activado en eI RetcuIo EndopIsmico. En el retculo
endoplsmico liso ocurren varios procesos oxidativos, incluyendo la oxidacin, hidroxilacin,
deshalogenacin y desaturacin. Un conjunto de oxigenasas con funciones mltiples,
conteniendo un grupo hemo, aaden un tomo de oxgeno en un sustrato orgnico utilizando
NADPH como donador de electrones. La reaccin general catalizada por el citocromo P
450
es:

RH + NADPH + H
+
+ O
2
ROH + NADP
+
+ H
3
O (6.16)

El citocromo P
450
mejor caracterizado en plantas es el cinamato-4-hidroxilasa
involucrado en la biosntesis de flavonoides y lignina, pero existen otras oxigenasas que
trabajan en otras vas bioqumicas incluyendo la biosntesis de giberelinas y esterol. La
activacin de oxgeno en estos sistemas es un prerrequisito esencial para las reacciones de
adicin de oxgeno en la sntesis de de estos metabolitos complejos. El superxido es
producido por medio del transporte de electrones en los microcuerpos dependiente de NADPH
participando el citocromo P
450
(Winston y Cederbaum, 1983). Un sitio probable en el cual esto
puede ocurrir se muestra en la Figura 6.5. Despus de la reduccin univalente del sustrato
(RH) y la adicin de un oxgeno triplete para formar el complejo P
450
-RHOO el mencionado
complejo puede descomponerse a P
450
-RH y liberar superxido.

97

Figura 6.4. Representacin esquemtica del sistema de transporte de electrones en la
membrana mitocondrial mostrando un sitio probable de produccin de aniones superxido por
ubiquinol (modificado de McKersie, 1996).

6.1.2.4. Produccin de Oxgeno Activado en Ios Microcuerpos, Pared y Membrana y
CeIuIar. Los peroxisomas y glioxisomas (microcuerpos) son organelos con una membrana
individual que compartimentaliza a las enzimas de la -oxidacin de los cidos grasos y del
ciclo del glioxilato que incluye a la glicolato oxidasa, la catalasa y varias peroxidasas. La
glicolato oxidasa produce H
2
O
2
al transferir dos electrones del glicolato al oxgeno (Lindqvist et
al., 1991). La xantina oxidasa, urato oxidasa y la NADH oxidasa generan superxido como
consecuencia de la oxidacin de sus sustratos.

98

Figura 6.5. Representacin esquemtica del sistema de transporte de electrones del citocromo
P
450
en el retculo endoplsmico mostrando un probable sitio de produccin de superxido. El
citocromo P
450
reacciona primero con su sustrato orgnico, RH. El complejo es reducido por una
flavoprotena para formar un radical intermediario que puede reaccionar con el oxgeno triplete
ya que cada uno tiene electrones desapareados. El complejo oxigenado puede ser reducido por
el citocromo b o bien se descompone liberando superxido (modificado de McKersie, 1996).

Las paredes celulares son estructuras metablicamente dinmicas en donde ocurre la
activacin de oxgeno. Algunas de estas respuestas pueden involucrarse en en reacciones de
defensa contra patgenos o en la degradacin o aislamiento de qumicos xenobiticos. Sin
embargo las reacciones ms comunes son biosintticas. Por ejemplo, los precursores
fenilpropanoides de la lignina son entrelazados por medio de reacciones dependientes de H
2
O
2
,
las cuales ligan aleatoriamente las subunidades para formar lignina (Gross, 1980). El NADH es
generado por la malato deshidrogenasa de la pared celular y es utilizado para formar H
2
O
2

(Gross et al., 1977), posilemente por medio de la NADH osxidasa de la membrana celular
(Vianello y Macri, 1991). Las diamina oxidasas tambin participan en la produccin de oxgeno
activado en la pared celular utilizando las diaminas o poliaminas (putrescina, cadaverina,
espermidina, etc.) para reducir una quinona que se autooxida formando perxidos (Vianello y
Macri, 1991).

99

En la membrana plasmtica se ha identificado la actividad de una NADPH oxidasa que
genera superxido (Vianello y Macri, 1991). Estas flavoprotenas pueden producir superxido
en el ciclo redox de ciertas quinonas o compuestos nitrogenados. En la raz se tiene una
NADPH oxidasa que reduce el Fe
+3
a Fe
+2
y que, en caso de disfuncin, produce superxido
(Cakmak y Marschner, 1988). Una NADH oxidasa activada por auxina se asocia con la
acidificacin de la pared celular y con el alargamiento celular resultado de la aplicacin de
auxina (Morr et al., 1988).
La NADPH oxidasa de la membrana plasmtica parece tener una funcin anloga a la
observada en animales. Los leucocitos contienen una NADH oxidasa en la superficie externa de
la membrana que se activa en respuesta a un agente extrao, generando superxido que inicia
reacciones oxidativas que destruyen a los patgenos potenciales. En las plantas los inductores
fngicos causan una similar formacin de superxido que se liga a la respuesta hipersensible
frente a hongos patgenos. Los estmulos mecnicos, el herviborismo, el choque trmico y los
xenobiticos activan de manera transitoria esta reaccin de generacin de superxido por lo
cual se ha propuesto que funciona como seal para inducir las respuestas a diversas
condiciones ambientales adversas. Para mayor informacin sobre este punto puede revisarse la
seccin sobre sealizacin del estrs y sobre el choque oxidativo incluidas en este escrito.

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6.1.3. Mecanismos CeIuIares de Defensa Contra eI Oxgeno Activado

6.1.3.1. Superxido Dismutasa. La superxido dismutasa (SOD) es una enzima que fue
aislada primeramente en 1938 por Mann y Keilis, quienes pensaron era una protena de
almacenamiento de cobre. La enzima fue nombrada de diferentes maneras: eritrocuprena,
indofenol oxidasa y tetrazolio oxidasa, hasta que su funcin cataltica fue descubierta por
McCord y Fridovitch en 1969. Se sabe ahora que la SOD cataliza la dismutacin del superxido
en perxido de hidrgeno y oxgeno:

O
-2
+
O
-2
+ 2H
+
H
2
O
2
+ O
2
(6.17)

por lo cual la actividad de esta enzima determina la proporcin relativa de los dos
constituyentes de la reaccin que genera radicales hidroxilo (reaccin 6.2). Ya que la SOD se
encuentra en todos los organismos aerbios as como en todos los compartimientos celulares
que generan oxgeno activado, se supone que la SOD tiene un papel central en la defensa
contra el estrs oxidativo (Bowler et al., 1992). Se conocen tres diferentes tipos de SOD que se
clasifican en base al cofactor metlico. Se tienen las isozimas de SOD con cobre/zinc (Cu/Zn-
SOD), con manganeso (Mn-SOD) y con hierro (Fe-SOD) (Bannister et al., 1987). Estas isozimas
pueden separarse por electroforesis en gel de poliacrilamida, su actividad detectada por tincin
negativa e identificadas en base a la sensibilidad relativa al KCN y H
2
O
2
. La Mn-SOD es
resistente a ambos inhibidores; la Cu/Zn-SOD es sensible a ambos inhibidores; la Fe-SOD es
resistente al KCN pero sensible al H
2
O
2
. La distribucin subcelular de estas isozimas es
asimismo distintiva. La Mn-SOD se encuentra en las mitocondrias, algunas Cu/Zn-SOD se
localizan en el citosol o en los cloroplastos. En cuanto a las Fe-SOD estas no siempre se
detectan en plantas, pero cuando esto ocurre siempre se asocian con los cloroplastos (Bowler
et al., 1992). Las Mn-SOD y Fe-SOD procariticas, y las Cu/Zn-SOD eucariticas son dmeros,
mientras que la Mn-SOD de las mitocondrias son tetrmeros (Scandalios, 1993). Todas las
SOD son codificadas en el ncleo y son marcadas para su respectivo destino subcelular por
medio de una secuencia terminal especfica.
Las clulas procariotas y muchas algas eucariotas contienen tan solo isozimas Mn-SOD
y Fe-SOD, las cuales se cree son las formas ms antiguas de la enzima. En la bacteria E. coli la

100

actividad de SOD es regulada transcripcionalmente por el opern SOX RS (Farr y Kogoma,
1991). En las plantas la actividad de SOD aumenta en respuesta a estmulos ambientales
negativos diversos as como xenobiticos incluyendo el paraquat, alta irradiancia, inundacin y
sequa. Aparentemente cada una de las isozimas de SOD es regulada independientemente, de
acuerdo al grado de estrs oxidativo experimentado en los respectivos compartimientos
subcelulares. Se ha sugerido que la regulacin de esta actividad depende de seales
bioqumicas consistentes en productos especficos de la peroxidacin de lpidos de cada
organelo que difunden desde el sitio en donde ocurre el dao oxidativo hacia el ncleo en
donde estimulan la transcripcin de los genes de SOD (Bowler et al., 1992).

6.1.3.2. CataIasa. La catalasa es una enzima con un grupo prosttico hemo que cataliza la
dismutacin del perxido de hidrgeno en agua y oxgeno. La enzima es encontrada en todos
los eucariotas aerobios y es importante en la remocin del perxido de hidrgeno generado
durante el ciclo del glioxilato en la fotorespiracin, la -oxidacin de lpidos en los peroxisomas
y el catabolismo de la purina. Las catalasas son tetrmeros de peso molecular mayor a
220,000. Se han descrito varias formas de catalasa en las plantas. En el maz se conocen tres
isoformas denominadas cat-1, cat-2 y cat-3 con expresin y regulacin independientes
(Scandalios, 1990). Las isoformas cat-1 y cat-2 se localizan en los peroxisomas y el citosol,
mientras que cat-3 es mitocondrial. El exmen de la estructura de la catalasa del higado de
vacunos mostr cuatro sitios de unin para el NADPH en cada tetrmero (Fita y Rossmann,
1985), sitios no cercanamente asociados con el centro de reaccin del perxido de hidrgeno.
Tal parece que el NADPH funciona en las catalasas animales como protector contra la
inactivacin por perxido de hidrgeno (Kirkman et al., 1987). La catalasa de papa, en cambio,
no contiene sitios de unin con NADPH (Beaumont et al., 1990). Considerando esto es
interesante notar que la catalasa es muy sensible a la luz y presenta una alta tasa de recambio
en tasa similar en magnitud a la protena D1 del PS (Hertwig et al., 1992). Al parecer esto es
resultado de la absorcin de radiacin por el grupo hemo o bien por inactivacin por perxido
de hidrgeno. A pesar de que algunas condiciones ambientales que inducen estrs, como la
salinidad, alta o baja temperatura, dan lugar a disminucin en la tasa de recambio de protenas,
la actividad de catalasa disminuye fuertemente bajo las condiciones mencionadas (Hertwig et
al., 1992). Es probable que este hecho tenga significado considerando la habilidad de la planta
para tolerar los componentes oxidativos del estrs.

6.1.3.3. Acido Ascrbico. El cido L-ascrbico (vitamina C) es un compuesto casi tan
abundante como la clorofila en los tejidos vegetales verdes. Se sabe que el ascorbato es
esencial en diversos procesos metablicos, en el crecimiento y la diferenciacin (Foyer, 1993).
Entre otras cosas el ascorbato funciona como reductor de radicales libres, minimizando el dao
causado por oxidacin.
Se ha encontrado un transportador especfico para el ascorbato en la membrana de los
cloroplastos, por lo cual se supone que la sntesis de este compuesto ocurre en el citosol. El
cido L-ascrbico parece ser sintetizado a partir de las hexosas (Figura 6.6) convirtindose la
D-glucosa en ascorbato (Foyer, 1993).
El ascorbato atrapa directamente los radicales libres con o sin catalizadores enzimticos,
estando en el ltimo caso limitada la velocidad de reaccin nicamente por la tasa de difusin
de los radicales. Asimismo es capaz de eliminar indirectamente a los mencionados radicales
libres reciclando el tocoferol a su forma reducida. El ascorbato reacciona ms rpida y
eficientemente con el oxgeno activado que cualquier otro antioxidante acuoso, por lo que
cumple un papel crtico en la proteccin de macromolculas contra el dao oxidativo.

101

Figura 6.6. Estructura del cido ascrbico y de sus metabolitos (modificado de McKersie, 1996).

La reaccin del ascorbato con el superxido tiene un papel fisilogico similar a la SOD:

2
O
-2
+ 2H
+
+ ascorbato 2H
2
O
2
+ dehidroascorbato (6.18)

La reaccin posterior con el perxido de hidrgeno es catalizada por la ascorbato peroxidasa
(Asada, 1992):

H
2
O
2
+ 2 ascorbato 2H
2
O + monodehidroascorbato (6.19)

Como se mencion el ascorbato funciona como antioxidante indirecto regenerando los
antioxidantes unidos a membrana, como el tocoferol, el cual es un atrapador de radicales
peroxilo y oxgeno singlete:

radical tocoferoxil + ascorbato tocoferol + monodehidroascorbato (6.20)

Estas reacciones indican que existen dos productos de la oxidacin del ascorbato,
monodehidroascorbato y dehidroascorbato, que representan la transferencia de uno y dos
electrones, respectivamente (Figura 6.7). El monodehidroascorbato puede dismutarse
espontneamente (reaccin 6.21) o ser reducido en ascorbato por la NADPH
monodehidroascorbato reductasa (reaccin 6.22):

2 monodehidroascorbato dehidroascorbato (6.21)

monodehidroascorbato + NADPH ascorbato + NADP (6.22)

102

El dehidroascorbato es inestable a pH mayor de 6 descomponindose en tartrato y
oxalato. Para prevenir esto el dehidroascorbato es reducido rpidamente en ascorbato por la
dehidroascorbato reductasa utilizando equivalentes de reduccin del glutatin (GSH):

2 GSH + dehidroascorbato + GSSG + ascorbato (6.23)

Figura 6.7. Sntesis y degradacin del cido ascrbico en tejidos vegetales (modificado de
McKersie, 1996).

El ascorbato se ha encontrado en los cloroplastos, citosol y vacuolas. Alrededor del 20-
40% del ascorbato en las clulas del mesfilo se encuentra en los cloroplastos. Estos organelos
contienen todas las enzimas para regenerar el ascorbato reducido a partir de sus productos
oxidados. Foyer y Halliwell (1976) propusieron que el H
2
O
2
era disipado en los cloroplastos
acoplando el ciclo redox del ascorbato y el glutatin (Figura 6.8) en la llamada va de HaIIiweII-
Asada. Los cloroplastos iluminados producen superxido y H
2
O
2
comnmente en los tilacoides
del PS. El superxido es convertido en H
2
O
2
bien sea por dismutacin espontnea o accin de
la SOD. El H
2
O
2
es atrapado por el ascorbato y la enzima ascorbato peroxidasa (Asada, 1992).
El monodehidroascorbato tiene dos rutas de regeneracin, la primera por la

103

monodehidroascorbato reductasa, la otra por la dehidroascorbato reductasa y el glutatin. El
donante terminal de electrones es el NADPH. Esta va Halliwell-Asada parece tener dos
funciones. Una es la eliminacin del H
2
O
2
que de otra manera participara en reacciones
Fenton, y la otra es la oxidacin de NADPH. Esta ltima funcin aparenta ser un proceso de
disipacin energtica anlogo en este sentido a la fotorespiracin. Lo que se consigue en este
caso es disminuir el cociente NADPH/NADP, disminuyendo as la oportunidad de activacin de
oxgeno.

Figura 6.8. El ciclo redox del ascorbato en los cloroplastos conocido como la va de Halliwell-
Asada (Modificado de nz y Van Montagu, 1995).

Aunque el metabolismo del ascorbato se ha estudiado principalmente en los
cloroplastos, es probable que las enzimas para regenerarlo existan tambin en el citosol de
clulas fotosintticas y no fotosintticas. Se ha demostrado por ejemplo que existen diferentes
isoenzimas de la ascorbato peroxidasa en el citosol y los cloroplastos (Chen y Asada, 1989). La
pared celular es tambin un sitio importante de metabolismo del ascorbato que contiene
concentraciones mM de este compuesto. Se supone que el ascorbato juega un papel
importante en la biosntesis de la pared celular (Polle et al., 1990). La pared celular no contiene
ascorbato peroxidasa, sino que contiene ascorbato oxidasa (Chichiricco et al., 1989). Esta
enzima contiene de 8 a 12 molculas de cobre por unidad y cataliza la siguiente reaccin:

2 ascorbato + O
2
+ 2H
+
2 dehidroascorbato + 2H
2
O (6.24)

Ya que las enzimas para reciclar formas oxidadas de ascorbato no se encuentran presentes en
la pared celular, se ha propuesto la existencia de un transportador de ascorbato que transfiere
las formas oxidadas y reducidas entre el citosol y la pared celular (Foyer, 1993).

104

6.1.3.4. GIutatin. El glutatin (GSH) es un tripptido (y-glutamilcisteinlglicina Glu-Cis-Gli)
que constituye la fuente ms importante de grupos til no proticos en las plantas. La funcin
antioxidante del GSH es facilitada por el grupo sulfidrilo de la cistena (Rennenberg, 1982). Al
ser oxidado el azufre forma un radical que reacciona con otro glutatin oxidado formando un
enlace disulfuro dando lugar al compuesto conocido como glutatin disulfuro (GSSG). Algunas
leguminosas contienen homoglutatin (hGSH), un tripptido homlogo de Glu-Cis- Ala
(Klapheck, 1988). El GSH tiene un potencial redox de 340 mV que lo capacita para reducir el
dehidroascorbato en ascorbato o bien para reducir los enlaces disulfuro de las protenas.
El GSH es encontrado en muchos tejidos, clulas y compartimientos celulares de las
plantas verdes. La concentracin promedio del mismo declina con la edad y es variable de
acuerdo a las condiciones ambientales: por ejemplo el nivel de glutatin es mayor en la luz que
en la oscuridad. Al nivel subcelular la concentracin de GSH es mayor en los cloroplastos,
ubicndose en el rango promedio de 1 a 4 mM, aunque tambin se encuentran cantidades
significativas de este compuesto en el citoplasma. El GSH se encuentra en las clulas
principalmente en forma reducida. Se estima que en los cloroplastos de cebada
aproximadamente el 70% del total de GSH se halla en forma reducida (Smith et al., 1985),
mientras que en los cloroplastos del chcharo se report un 90% (Bielawski y Joy, 1986).
El GSH funciona como antioxidante de varias maneras. Puede reaccionar qumicamente
con el oxgeno singlete, con el superxido o con los radicales hidroxilo, funcionando entonces
como atrapador de radicales libres. Por otro lado el GSH estabiliza la estructura de las
membranas removiendo los acil perxidos formados en las reacciones de peroxidacin de
lpidos (Price et al., 1990). Como ya fue mencionado el GSH es el agente reductor que recicla
enzimticamente el ascorbato en las reacciones de la va de Halliwell-Asada. Asimismo, por
medio de un mecanismo no enzimtico que se presenta en condiciones de pH mayor a 7, el
GSH en concentracin mayor a 1 mM reduce el dehidroascorbato generando ascorbato. Esta
ltima reaccin puede ser significativa en los cloroplastos ya que en condiciones de alta
irradiancia se observa un pH cercano a 8 en el estroma y concentraciones de GSH hasta de 5
mM (Foyer y Halliwell, 1976).
En el metabolismo celular se han encontrado otras funciones para el GSH adems de
las mencionadas como agente antioxidante. Se ha propuesto que puede tener un papel
significativo para el transporte de azufre reducido desde las hojas hacia tejidos como la raz
(Rennenberg, 1982). Se supone que participa en la desintoxicacin de xenobiticos
funcionando como sustrato para la enzima glutatin-S-transferasa. La bien documentada
tolerancia del maz a los herbicidas de triazina es el resultado de la conjugacin del GSH al
herbicida (Timmerman, 1989). Asimismo las plantas se encuentran protegidas de los metales
pesados que causan toxicidad, siendo el cobre y cadmio los ms estudiados, por un grupo de
pptidos y-glutamil-cistena llamados fitoquelatinas (Regsegger et al., 1990). Estas molculas
tienen la estructura general (y-Glu-Cis)
2-11
Gli. Las fitoquelatinas se forman por la
polimerizacin del GSH catalizada por la enzima fitoquelatina sintasa (Chen et al., 1997). Las
fitoquelatinas se unen a los metales en el citosol y el complejo es concentrado en la vacuola
(Rauser, 1990).
La sntesis y degradacin del GSH ocurre de forma constante a travs del ciclo del
glutamilo (Hell y Bergman, 1990). El primer paso en la sntesis del GSH (reaccin 6.25) es la
combinacin del glutamato con la cistena para formar y-glutamilcistena (y-EC) participando la
enzima glutamilcistena sintetasa. En Arabidopsis esta enzima est codificada por el gene gsh-1
(May y Leaver, 1995). El paso subsecuente involucra la adicin de glicina por medio de la
enzima glutatin sintetasa (reaccin 6.26). En Arabidopsis esta enzima es codificada por el
gene ghs-2 (Wang y Oliver, 1996). Eo proceso completo requiere dos ATP por cada GSH
formado. En las leguminosas que acumulan hGSH este segundo paso se consigue adicionando
la alanina por medio de la enzima homoglutatin sintetasa (reaccin 6.27).

105

Glu + Cis Glu-Cis (6.25)
Glu-Cis + Gli Glu-Cis-Gli (6.26)
Glu-Cis + Ala Glu-Cis-Ala (6.27)

La degradacin del GSH requiere el rompimiento del enlace entre el glutamato y la
cistena por la glutamil transpeptidasa y la transferencia de los residuos de glutamato a un
aminocido aceptor. Subsecuentemente el dipptido Cis-Gli es degradado por dipeptidasas
mientras que el Glu-aa es degradado por la glutamilciclotransferasa.
Las enzimas que catalizan la sntesis y degradacin del GSH se encuentran tanto en
compartimientos cloroplsticos como citoslicos (Hausladen y Alscher, 1993). Se sabe que en
dichos sitios diversos estmulos ambientales adversos originan la acumulacin de GSH
(Alscher, 1989).
La reduccin del GSSG a GSH es catalizada por la enzima glutatin reductasa (GR) la
cual parece estar representada por hasta ocho isoenzimas en el caso del chcharo (Edwards et
al., 1990). Es probable que las diferentes isoenzimas se encuentren en distintos
compartimientos subcelulares y, al menos en Arabidopsis, se han encontrado dos genes que
codifican la glutatin reductasa, gr1 y gr2, correspondiendo el primero a una enzima citoslica y
el segundo a una enzima de plstidos (Kubo et al., 1993). Se ha encontrado asimismo en
animales y plantas una enzima que contiene selenio, llamada glutatin peroxidasa, que reduce
el H
2
O
2
formando GSSG.
En Arabidopsis la induccin de los genes para la sntesis y reduccin del GSH son
inducidos por la exposicin al cadmio o el cobre. Xiang y Oliver (1998) encontraron que el cido
jasmnico parece estar involucrado en la va de sealizacin de la respuesta a estos metales,
mientras que ni el estrs oxidativo, la exposicin al H
2
O
2
, o los niveles relativos de GSH/GSSG
fueron capaces de inducir alguna respuesta. Los mismos Xang y Oliver (1998) propusieron un
modelo de la multiregulacin de la sntesis y concentracin del GSH (Figura 6.9).

6.1.3.5. TocoferoI. Los tocoferoles, especficamente el d-tocoferol (vitamina E), se han
estudiado extensamente en mamferos como estabilizadores de membranas y antioxidantes
multifacticos, capaces de neutralizar diferentes formas de oxgeno activado y radicales peroxi
lipdicos (Diplock et al., 1989). Este papel se relaciona estructuralmente con la presencia de un
anillo de benzoquinona totalmente substituido y una cadena de fitilo enteramente reducida
(Figura 6.10). La naturaleza hidrofbica del tocoferol hace que se encuentre exclusivamente en
las membranas celulares con el anillo de benzoquinona en cercana asociacin con el carbonilo
del componente glicerol de los fosfolpidos y con la cadena de fitilo asociada con los cidos
grasos en la regin hidrofbica interna de la membrana.
Por su importancia diettica los niveles de tocoferoles se han documentado
extensivamente en los tejidos vegetales (Hess, 1993). El tocoferol se encuentra en todas las
plantas tanto en tejidos fotosintticos como no fotosintticos. La concentracin de tocoferol
muestra un rango de variacin desde 200 ng g
-1
de peso fresco en tubrculos de papa, hasta 5
mg g
-1
en los foliolos de palma de aceite.

106

Figura 6.9. Sntesis de GSH acoplada a su demanda y multiregulacin del nivel de GSH. Este
ltimo se controla de forma dinmica haciendo variar la tasa de sntesis respecto a la de
consumo. Del lado izquierdo aparecen esquematizados los diferentes pasos de la sntesis del
GSH descritos en el texto. Del lado derecho aparecen los sitios en que se utiliza el GSH:
desintoxicacin de xenobitticos (x) formando conjugados (GS-X), sntesis de fitoquelatinas
(PCs), reduccin del dehidroascorbato (DHAs) en ascorbato (As) y reduccin del tocoferol
oxidado. Se supone que el propio GSH regula negativamente la actividad de sntesis de y-EC y
que la presencia de metales pesados o jasmonato inducen el incremento en la transcripcin de
los genes que codifican las enzimas biosintticas, aunque este hecho no se traduce
necesariamente en mayor concentracin de GSH (modificado de Xiang y Oliver, 1998).

107

Figura 6.10. Estructura de los tocoferoles y tocotrienoles comunmente encontrados en las
plantas (modificado de McKersie, 1996).

El tocoferol es realmente una familia de antioxidantes (Hess, 1993) que incluye cuatro
tocoles con cadena de fitilo as como tocotrienoles anlogos con cadena geranilgeranil. Se
considera que el d-tocoferol es la forma ms activa de los tocoles mientras que las restantes
formas pudieran ser precursores biosintticos. La cantidad relativa de tocoles y tocotrienoles
parece depender de la disponibilidad relativa de precursores fitilo y geranilgeranil. La sntesis de
d-tocoferol ocurre en los plstidos por la va del cido shikimico que forma el anillo aromtico y
por la va de los terpenoides en donde el geranilgeranil pirofosfato es el precursor de la cadena
de fitilo (Fryer, 1992). Esta ltima reaccin liga la sntesis de clorofila, tocoferol y carotenoides.
El d-tocoferol tiene la habilidad de complejar cidos grasos libres, y esta caracterstica
explica en parte su funcin de estabilizacin de las membranas (Fryer, 1992). Los cidos grasos
libres actuan como detergentes en las membranas destruyendo la estructura bicapa, la
agregacin y fusin de membranas.
Las propiedades antioxidantes del tocoferol son el resultado de su habilidad para atrapar
tanto oxgeno singlete como perxidos (Fryer, 1992). En comparacin con el -caroteno el
tocoferol es un atrapador menos eficiente de oxgeno singlete, por ello se piensa que el
tocoferol tiene como funcin eliminar las reacciones en cadena de generacin de radicales
peroxi en la membrana tilacoide:

ROO
+ tocoferol ROOH + tocoferoxil (6.28)

El radical tocoferoxil se estabiliza gracias al anillo de benzoquinona con lo cual se detiene la
propagacin de la reaccin. Posteriormente el tocoferoxil es regerenado en tocoferol por el
ascorbato.

6.1.3.6. Carotenoides. Los carotenoides son isoprenoides C
40
y tetraterpenos localizados en
los plstidos de tejidos fotosintticos y no fotosintticos. En los cloroplastos los carotenoides
funcionan como pigmentos accesorios para la colecta de radiacin, sin embargo su papel ms

108

importante parece ser la eliminacin de diversas formas de oxgeno activado y clorofila triplete
que se producen como resultado de la excitacin lumnica de complejos fotosintticos.
Existen dos clases de carotenoides (Figura 6.11). Los carotenos son hidrocarburos; las
xantofilas son derivados de los carotenos que contienen uno o ms tomos de oxgeno. Los
carotenoides son sintetizados a partir del geranilpirofosfato, compuesto que forma parte de la
va de los isoprenoides en los plstidos. El -caroteno es formado por modificacin cclica del
licopeno, mientras que las xantofilas como la zeaxantina son sintetizadas por oxidasas no
especficas que introducen grupos hidroxilo en la molcula de caroteno.

Fig. 6.11. Estructura de dos carotenoides encontrados comunmente en plantas (modificado de
McKersie, 1996).

Los carotenoides existen en estado basal o en cualquiera de dos estados excitados
despus de absorber radiacin electromagntica. En trminos de actividad antioxidante los
carotenoides protegen los fotosistemas de cuatro diferentes maneras: reaccionando con los
productos de la peroxidacin de lpidos terminando la reaccin en cadena (Burton e ngold,
1984); atrapando oxgeno singlete y disipando la energa como radiacin trmica (Mathis y
Kleo, 1973); reaccionando con clorofila triplete o molculas excitadas de clorofila previniendo la
formacin de oxgeno singlete; o por la disipacin de energa en exceso a travs del ciclo de las
xantofilas.
Los carotenoides cooperan con el d-tocoferol en el atrapamiento de radicales peroxi
(Burton e ngold, 1984):

ROO
+ -caroteno ROOH + -carotenoxil (6.29)

ROO
+ -caroteno productos inactivos (6.30)

Estas reacciones actan entonces como terminacin de las reacciones en cadena.
El principal papel protector del -caroteno en los tejidos fotosintticos se obtiene por el
"enfriado de la clorofila triplete, lo que previene la generacin de oxgeno singlete eliminando la
posibilidad de estrs oxidativo.

3
Chl
+
1
-caroteno
1
Chl +
3
-caroteno
(6.31)

109

3
-caroteno

1
-caroteno + calor (6.32)

En estas reacciones 6.31 y 6.32 la energa es transferida de la clorofila al carotenoide el cual
subsecuentemente disipa la energa en forma de radiacin trmica de baja energa. Los
carotenoides actan entonces como un inhibidor competitivo para la formacin de oxgeno
singlete, lo cual es ayudado por la gran cercana de los carotenoides a la clorofila en en
complejo de colecta de luz. Este mtodo de proteccin es especialmente crtico conforme la
irradiancia se incrementa encima de los niveles de saturacin (Demming-Adams y Adams,
1993). Otro carotenoide, la zeaxantina se encuentra implicado en la disipacin de energa
trmica, pero el mecanismo preciso no ha sido resuelto. La zeaxantina aparentemente facilita la
conversin de clorofila triplete a singlete en forma ms eficiente que el -caroteno. En el cicIo
de Ias xantofiIas ocurre la conversin reversible de las xantofilas entre dos formas: violaxantina
y zeaxantina. Una enzima depoxidasa cataliza la de-epoxidacin de violaxantina a zeaxantina
en presencia de alta irradiancia, mientras que una epoxidasa cataliza la reaccin inversa en la
oscuridad o baja irradiancia. La zeaxantina se acumula bajo niveles de irradiancia que exceden
la capacidad fotosinttica. La depoxidasa tiene un pH ptimo de 5.1, mientras que para la
epoxidasa este es de 7.5. El ascorbato reducido sirve como donante de electrones para la
depoxidasa, mientras que el NADPH aporta equivalentes de reduccin para la epoxidasa
(Figura 6.12).

Figura 6.12. El ciclo de las xantofilas para la formacin de violaxantina y zeaxantina. La
reaccin de de-epoxidacin que convierte la violaxantina en zeaxantina es favorecida por alta
irradiancia y pH de 5.1, mientras que la reaccin de epoxidacin es favorecida por baja
irradiancia y pH de 7.5. Las enzimas para ambas reacciones se encuentran en el lumen de los
tilacoides por lo cual en perodos de iliminacin, al acidificarse el lmen, la zeaxantina se
acumula. Las reacciones reversas ocurren en la oscuridad lo que hace que la violaxantina se
acumule (modificado de McKersie, 1996).

110

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6.2. PIantas Transgnicas con Mayor Resistencia aI Estrs
Oxidativo

Profesor Investigador deI Departamento de HorticuItura

Diversos autores reportaron la transformacin de plantas con el objetivo de aumentar la
capacidad de resistir el estrs oxidativo. McKersie et al. (2000) realizaron un estudio en donde,
utilizando un cDNA de la Fe-superxido dismutasa (SOD) de Arabidopsis lograron la
sobreexpresin de esta enzima en los cloroplastos de alfalfa transgnica (Medicago sativa L.).
El objetivo del trabajo fue determinar si la sobreexpresin de la SOD mejoraba la capacidad de
atrapamiento del anion superxido para de esa manera aumentar la supervivencia invernal de
las plantas. Utilizando electroforesis en gel de poliacrilamida se encontr la nueva Fe-SOD tanto
en plantas de campo abierto como de invernadero. Se observ asimismo que la actividad de
Fe-SOD fue variable entre plantas individuales, y que dicha actividad se asoci con mayor
supervivencia invernal pero no con mayor crecimiento o produccin de materia seca de acuerdo
con los datos de dos aos. No se encontr, sin embargo, mayor tolerancia al estrs oxidativo
medido como resistencia de las hojas al metil violgeno, un generador de superxido. No se
detect diferencia en el patrn de dao por congelacin (utilizando tincin vital con tetrazolium),
ni se encontr acumulacin adicional de carbohidratos en las races de las plantas transgnicas
aclimatadas en el campo. Dado que se encontr que el aumento en la supervivencia invernal no
pareci ser consecuencia de mayor tolerancia al estrs oxidativo asociado con la fotosntesis, ni
se modific el patrn de dao por congelacin, los autores sugirieron que la sobreexpresin de
la Fe-SOD redujo los daos secundarios aumentando la recuperacin del estrs experimentado
durante el invierno.
En un trabajo anlogo Arisi et al. (1998) transformaron Populus con cDNA de la Fe-SOD
de Arabidopsis. La sobreexpresin de la enzima especficamente en los cloroplastos aument
de manera substancial la actividad foliar de Fe-SOD y de dehidroascorbato reductasa. La
actividad de ascorbato peroxidasa, glutatin reductasa, monodehidroascorbato reductasa, as
como la concentracin foliar de H
2
O
2
, ascorbato y glutatin no fue muy diferente entre plantas
transformadas y no transformadas. Las respuestas de asimilacin de CO
2
y los parmetros de
fluorescencia de clorofila a fueron similares en todas las plantas sin importar el nivel de O
2
(21%
y 1%). En contraste, los valores de eficiencia fotoqumica declinaron en las plantas no
transformadas cuando la concentracin de CO
2
en el mesfilo (Ci) fue menor a 200 ppm, no
observndose este cambio negativo en las plantas transformadas. Este efecto fue abolido al
colocar las plantas en 1% de O
2
, lo cual indica que al parecer la respuesta se deriva de la
canalizacin de equivalentes de reduccin hacia la activacin de O
2
. Con alta irradiancia (1000
mol m
-2
s
-1
) se observ una disminucin progresiva en el cociente de fIuorescencia variabIe
y mxima (Fv/Fm) (indicador de la eficiencia de la antena del PS) al disminuir la temperatura.
A 6 C el cociente Fv/Fm fue muy parecido en todas las plantas y su disminucin fue solo
parcialmente prevenida con 1% de O
2
. Este hecho pudiera indicar que la capacidad de
proteccin de la Fe-SOD sobreexpresada sea efectiva solo en temperaturas arriba de 6 C en
Populus. Lo mismo fue demostrado por Thomas et al. (1999) con la cepa mutante PCC7942 de
Synechococcus la cual carece de Fe-SOD funcional y muestra por ello baja actividad de SOD.
Con irradiancia moderada y 27 C la cepa mutante y el control no mostraron diferencias en
crecimiento, contenido de clorofila y carotenoides as como actividad de transporte de
electrones. Sin embargo a 17 C el control se mostr superior, mientras que a 10 y 0 C

111

prcticamente no hubo diferencias mostrando tanto el mutante como el control la misma
magnitud de dao por fro.

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6.3. Bases Genticas de Ia Resistencia aI Estrs Oxidativo

Dr. VaIentn RobIedo Torres
Profesor Investigador deI Departamento de HorticuItura

6.3.1. Introduccin
Todas las plantas cultivadas en campo abierto en alguna etapa de su ciclo de vida llegan
a sufrir por algn tipo de estrs, ya sea fsico, biolgico o edfico, sin embargo cualquiera que
sea el estrs, este contribuye a la reduccin de los rendimientos. Considerando esta situacin el
hombre siempre ha buscado incrementar rendimientos, proporcionando al cultivo las mejores
condiciones para su desarrollo o seleccionando genotipos con mayor tolerancia considerando
solo la expresin final de un gen o grupo de genes.
Si se considera que un cambio en un factor ambiental puede inducir un estimulo hacia
la expresin de un gen, resulta importante desde el punto de vista fisiolgico, conocer la ruta de
expresin de dicho gen, hasta la manifestacin en el fenotipo. Lo anterior con el objetivo de
hacer un manejo mas eficiente de la planta an bajo condiciones de estrs, de tal manera que
el rendimiento se afectado lo menos posible.
Bray (1993) indica que el dficit de agua induce una serie de complejas respuestas se
inician con la percepcin del estrs, el cual estimula una serie de genes cuya expresin se
manifiesta a nivel enzimtico, dando como consecuencia cambios a nivel celular, fisiolgico y
a nivel de desarrollo. El grupo de respuestas depende de la severidad y duracin del estrs, del
genotipo, etapa de desarrollo y factores inductores del estrs, agrega adems que; en aos
recientes se han realizado esfuerzos tendientes hacia el aislamiento de genes que se expresan
durante el dficit de agua para estudiar la funcin de los productos resultantes de la expresin
del gen bajo sequa, y los senderos que conducen a la expresin del mismo.
Foyer et al. (1994) en cambio dicen que a nivel de planta el efecto del estrs es
generalmente percibido como una disminucin en la fotosntesis y crecimiento, y este es
asociado con alteraciones en el metabolismo del C y N. A nivel molecular, los efectos negativos
del estrs sobre hojas pueden ser en parte una consecuencia del dao oxidativo a importantes
molculas, como resultado de un desbalanse entre la produccin de O
2
activado y defensas
antioxidantes.
Cuando las plantas son expuestas aun estrs ambiental como alta intensidad luminosa,
temperatura extrema, sequa, tratamientos con herbicidas, o deficiencias minerales, el balance
entre la produccin de tipos de oxigeno reactivo y la supresin de la actividad de los
antioxidantes es reducida, resultando frecuentemente un dao oxidativo (Cakmak y Marschner,
1992; Spychalla y Desborough, 1990).
Aunque los factores causantes de estrs en las plantas pueden ser muy diversos los
ms frecuentes se pueden agrupar en tres grupos principales que son; estreses edficos,
fsicos o climticos y biolgicos. Dentro del estrs edfico es posible considerar la falta o exceso
de agua, deficiencias o excesos minerales y pH del suelo. Los principales factores del clima
causantes de estrs, son; las bajas o altas temperaturas, altas o bajas concentracin de gases
en el aire y altas o bajas intensidades de luz, por su parte Bowler et al., (1992) indican que en
las plantas las condiciones ambientales tales como temperaturas extremas y/o estrs por agua,
especialmente en combinacin con altas intensidades luminosas, ozono ambiental o dixido de
azufre, adems algunos patgenos pueden causar daos por estrs oxidativo por

112

sobreproduccin de algunos tipos de oxigeno txico. Este ultimo factor o los patgenos, que
llega a causar estrs tambin llegan a ocasionar alteraciones importantes en las plantas.
En este escrito se trataran algunos tipos de estrs de los ya comentados anteriormente y
su influencia sobre la expresin de genes, tomando en cuenta que la expresin de un gen
durante el estrs, no garantiza que un producto gnico proporcione la habilidad de la planta
para sobrevivir a dicho estrs. Ya que la expresin de algunos genes puede resultar de una
lesin o dao que ocurri durante el estrs.

6.3.2. Estrs por Sequa
La expresin de genes asociados a dficit de agua depende del tipo de tejido, rgano y
etapa de desarrollo y se pueden expresar independientemente de la condicin de estrs. Por
ejemplo algunos genes que se expresan durante el estrs de agua tambin se expresan
durante la maduracin y fases de secado del desarrollo de la semilla. Las numerosas
respuestas al dficit de agua son controladas por un arreglo de genes con muchas diferentes
funciones (Bray,1993).
Si la expresin de un gen depende de la etapa de desarrollo del cultivo, del genotipo,
entre otros factores, esto permite concluir que durante el ciclo del cultivo puede haber toda una
serie de genes que pueden afectar diferentes rganos o tejidos de la planta, y lo anterior
puede llevar a manifestarse, ya sea en hojas, flores, frutos o bien. Como en trigo un dficit de
agua durante las etapas tempranas de desarrollo ocasiona una reduccin en el numero de
tallos que conduce a un menor numero de espigas y semillas por planta, reduciendo el
rendimiento (King et al., 1992).
Los cambios en la expresin de genes debido al estrs ambiental tal como golpe de
calor y sequa los han documentado (Lindquist, 1986; Guerrero et al., 1990 ). Aunque la
mayora de los estudios sobre la modificacin en la expresin de genes, en respuesta al estrs
de agua se han concentrado sobre el tallo, mientras que poca atencin se ha puesto en el
sistema radical. Sin embargo estudios recientes, han demostrado que las caractersticas del
sistema radical son determinantes para la capacidad de tolerancia a la sequa del frijol (White y
Castillo 1992).
Los genes expresados durante el estrs se anticipan para promover la tolerancia celular
a la deshidratacin, a partir de funciones protectoras en el citoplasma, alteracin de los
potenciales del agua celular para promover la absorcin de agua, control de la acumulacin de
iones y una mejor regulacin de la expresin del gen o genes. Evidencias moleculares recientes
sugieren que miembros de la familia del gen rab (sensible al ABA) son activados en respuesta
al estrs de sequa y parecen estar presentes en todas las plantas (Skriver and Mundy,1990).
Por lo tanto la expresin del gen rab puede ser un indicador til del estrs de sequa. La
expresin del gen rab puede ser usada como un indicador del estrs de agua en plantas, y
mediante un mejor entendimiento de la regulacin de los genes sensibles a sequa nosotros
podemos ser capaces de clarificar, los mecanismos moleculares involucrados en la tolerancia a
la sequa, usando tcnicas moleculares para desarrollar cultivares de trigo tolerantes. (King et
al.,1992. )
Saab et. al. (1990) agregan que, en condiciones de sequa los cambios en la expresin
de genes estn relacionados a la acumulacin de ABA en tejidos con estrs de sequa o
condiciones de deshidratacin. Adems hay evidencias del doble papel del ABA endgeno en
plantas de maz, donde se indican que la acumulacin de ABA endgeno en bajos potenciales
de agua, actan diferencialmente para mantener el crecimiento primario de la raz e inhibir el
crecimiento del tallo. Lo que si queda claro es que, una consecuencia de un estrs de agua
aplicado a ciertos tejidos de plantas, conduce a un incremento en los niveles endgenos de
ABA (Bray,1990 ; Skriver y Mundy,1990).
Hay genes que pueden ser estimulados por la aplicacin de ABA, pero mutantes
deficientes en la sntesis de ABA, tambin pueden ser estimulados por dficit hdrico. Esto

113

indica que puede haber dos senderos para estimular estos genes, pero se desconoce si estos
senderos convergen en algn punto o si son senderos completamente separados (Bray ,
1993). En cambio Cohen y Bray (1990) encontraron que usando mutantes bloqueados en la
biosntesis del ABA se demostr que algunos genes especficos requieren niveles elevados de
ABA para su expresin durante el estrs por dficit de agua o bajas temperaturas .
Un ABRE(abscisic acid-response element), 5-C7TACGTGGC-3, esta involucrado en
el control de la transcripcin en respuesta al ABA y se ha demostrado que liga un factor de
transcripcin clonado, el EmBP-1.(Guiltinan et al., 1990), adems se ha demostrado que este
ABRE controla la expresin regulada del ABA en varios genes, Em, rab16,rab17 y rab28 que se
manifiestan preferentemente en semillas (Pla et al., 1993).
Heikkila J.J. et al. (1984) sugieren que el gene hsp 70 es activado en maz por una
variedad de diversos estreses como el golpe de calor, estrs de agua y cido absicico.
ndicando adems que, poco se conoce sobre los efectos de diferentes estreses ambientales y
expresin de las plantas. As mismo indican que el golpe de calor o otros estreses ambientales,
han mostrado un aumento en la sntesis de un pequeo grupo de protenas para el golpe de
calor (hsps) en eucariotes ( Tanguay , 1983).
Los estreses de agua y heridas resultan en cambios en el patrn de la sntesis de
protenas, aunque no se han caracterizado se han caracterizado protenas para un estrs
particular. (7, Shuster A.M., and E. Davis. 1983).
aki et al. (1998) indican que la aplicacin de un moderado dficit de agua (un potencial
de agua de -1.3Mpa) a hojas de chcharo ( Pisum sativum L. Cv. Lincoln) condujo a una
inhibicin del 75 % de la fotosntesis y a un incremento en la actividad de la zeaxantina,
malondialdehdo, protenas oxidantes y mitocondriales, citosol, y superoxido dismutasa del
cloroplasto y concluyen que en el Cv. Lincoln, el incremento en Fe cataltico y la disminucin
de la proteccin antioxidante pueden estar involucrados con el dao oxidativo causado por
dficits severos de agua, pero no necesariamente en el estrs inicial inducido por dficits
moderados de agua. Los resultados tambin indican que la tolerancia al dficit de agua en
trminos de dao oxidativo depende en gran medida del cultivar, indicando la importancia que
tiene el genotipo en la respuesta de las plantas a un estrs.
La respuesta de los antioxidantes al dficit de agua depende de la severidad del estrs,
de la especie y la edad de la planta (Tanaka et. al., 1990). Aunque hay una sensibilidad
diferencial de los cultivares al dficit de agua con respecto a la induccin del estrs oxidativo.
Un aspecto frecuentemente considerado en estudios sobre radicales libres y
antioxidantes es la propiedad pro-oxidante del Fe. El cual es llamado "Fe catalitico" que cataliza
la descomposicin del H
2
O
2
e hidroperoxidos lipidicos a radicales hidroxil y alkoxil,
respectivamente. Ambos radicales son extremadamente citotxicos y promueven la
peroxidacin lipidica. La peroxidacin lipidica es comnmente tomada como un indicador del
estrs oxidativo.
La expresin de genes es modificada durante el estrs por sequa y puede ser
responsable de algunas de las respuestas adaptativas (Bray, 1993). La evitacin de la sequa
es principalmente alcanzada a travs de la extraccin de la humedad por un sistema radicular
profundo, y que la raz del genotipo de frijol es determinante del crecimiento y rendimiento del
mismo bajo dficit de agua (White y Castillo 1992). Sin embargo, las diferencias observadas
en el sistema radicular son morfolgicas ( sistemas radicales profundos para genotipos
tolerantes bajo estrs de agua) y posiblemente pueden ser expresadas solamente en el campo
donde esta caracterstica es fcilmente detectable.
Otro tipo de genes que juegan un papel importante en la tolerancia al estrs hdrico, son
los genes lea (late embryogenesis abundant gene), que primero fueron identificados como
genes que se expresan durante las fases de maduracin y desecacin del desarrollo de la
semilla.(Baker et al., 1988). Aunque se ha encontrado que estos genes tambin se expresan en
tejidos vegetativos durante periodos de perdida de agua, resultantes de estrs hdrico, estrs

114

osmtico y bajas temperaturas y al menos se han identificado seis grupos de genes Lea,
basado en la secuencia de aminocidos y similaridades entre varios tipos.
La mayora de los productos de los genes lea son predominantemente hidrofilicos,
deformados en la composicin de aminocidos, y carente en Cys y Trp y se ha propuesto que
se localizan en el citoplasma. Adems se han identificado genes involucrados potencialmente
en la regulacin y sealizacin durante periodos de dficit de agua, tales como la protena
kinasa, protenas nucleares y protena ARN-ligasa (Bray,1993).

6.3.3. Estrs por SaIes MineraIes
Las plantas para su desarrollo requieren de sales minerales sin embargo,
concentraciones elevadas pueden resultar txicas y causantes de estrs, que desencadena en
multiples respuestas fisiolgicas. Como es el caso de una salinidad inducida en cultivares de
algodn, donde se incrementa la actividad de la catalasa y como consecuencia se aumenta
la peroxidasa en los cultivares AC-88 y ACSR2, indicando que los cultivares relativamente
tolerantes a sales tuvieron una mayor capacidad para la descomposicin de H2O2 generado
por la superoxido dismutasa. Los cultivares mas tolerantes a sales tuvieron un aumento en la
capacidad de desechar radicales libres ( Gossett et al., 1994).
Los cultivares mas tolerantes a sales AC-88 y AC-SR2 tuvieron los niveles mas altos de
caltalasa, en comparacin con los cultivares de algodn ms sensibles. Tambin se ha
encontrado, que aumentos en la actividad de la Superoxido dismutasa (SOD) as como en la
actividad de la catalasa se presentaron en tuberculos de papa durante el curso de un periodo
de 40 semanas de almacenamiento a 3C (Spychalla y Desborough, 1990). No se sabe si el
aumento en la actividad de la peroxidasa fue debido a un incremento de la actividad de genes
que codifican para peroxidasa o a un aumento de las pre-enzimas ya existentes. Se ha sugerido
que la activacin de la peroxidasa puede, en parte, ser debido a dao de la membrana y al
aumento resultante en los niveles de Ca2+ celular ( Peters et al., 1989)).
Posiblemente los tipos de oxigeno citotxico generados durante el dao a la membrana por el
estrs de salinidad y los cambios resultantes en los niveles de Ca2+ intracelular, inducen
cambios en la actividad gnica de la peroxidasa.
En otro estudio Gossett et al. (1998) encontraron que los cultivares mas tolerantes a
sales tuvieron los mayores niveles de catalasa (121 a 215%) y d-tocoferol (312-420%). Los
tratamientos con sales tuvieron un aumento de 38 a 72 % en la actividad de la peroxidasa y un
55 a 101% de incremento en la actividad de la glutathione rreductasa en los cultivares Acala,
mientras que la actividad de estas enzimas permanecieron constantes o disminuyeron en los
cultivares mas sensibles de algodn.
Keith et al. (1998) indican que los genes que codifican peroxidasa, glutathione-S-
transferasa, protena aglutinante del cobre azul y una protena homologa, es la reticulina:
enzima oxigeno oxidoreductasa. Tres de estos genes se sabe son estimulados por el estrs
oxidativo y el cuarto es estimulado por tratamientos con patgenos. Otro gene de estrs
oxidativo, es la superoxido dismutasa y otro gen para la inhibicin de la proteasa Bowman-Birk
tambin fue estimulado por el Al en A. thaliana. En cambio Davies (1997) indica gen par A es
tambin estimulado por Al, deficiencia de fosfatos (Ezaki et al., 1995), y alta auxina. Adems
uno de los mecanismos sugeridos de la toxicidad del aluminio es que causa una peroxidacin
lipidica (Gutteridge et al., 1985).
El aluminio puede estimular un complejo de genes de estrs en A. thaliana, y solo
algunos de los cuales combaten el estrs oxidativo. Es posible que el estrs oxidativo
estimulado por el Al sea una respuesta secundaria a el grupo en la elongacin radicular.
Una protena cida tipo PR( patognesis-related), la PR-2 se encontr que fue
estimulada por Al en trigo, as como por un amplio rango de estreses ( Cruz-Ortega y Ownby,
1993). Mas recientemente, una segunda protena PR, la -glucanasa se encontr que es
estimulada por el Al en trigo ( Cruz-Ortega et al., 1997). Tres genes adicionales que son

115

estimulados por el Al en cultivos de clulas en tabaco fueron identificados por Ezaki et al.
(1996), estos son la peroxidasa aninica y el gen estimulador de auxinas par A y par B que
codifican GST( glutathione S-transferasa).
Los genes fenil-alanina amonio-liasa (PAL), -glucanasa, y pEARL2 son estimulados
por el estrs por Al y ozono. El gen PR2 es un gen relacionado con defensa que puede ser
estimulado por el estrs oxidativo (Sharma y Davis, 1997).
La actividad de la dehidroascorbato reductasa se ha visto que puede ser tanto o mas del
100% mayor en una raza resistente a tizn manchado de la papa que en un clon sensible
(Monk y Davies, 1989). Cakmak y Marschner (1992) demostraron una actividad
significativamente mayor en esta enzima en hojas de frijol deficientes de Mg2+. El cation Ca2+
tiene varias funciones fisiolgicas asociadas con las membranas, y pueden ocurrir excesivas
reacciones oxidativas bajo condiciones de dficit de Ca2+ .

6.3.4. Estrs por AIta Irradiancia
La luz como elemento vital para las plantas juega un papel muy importante en el proceso
fotosinttico sin embargo altas intensidades pueden causar estrs oxidativo, en ese sentido
Gupta et al., (1993) menciona que se ha encontrado resistencia al estres oxidativo causado por
una exposicin a alta luz y separadamente de una baja temperatura y una sobreexpresin de
la SOD. La correlacin fuerte indica que la resistencia al estrs es causada por una
sobreexpresin de la SOD y no por una variacin somaclonal en plantas transgnicas o por
seleccin durante la regeneracin. Ademas aumentando los niveles de SOD y el gen APX se
puede aumentar la proteccin al estrs oxidativo en plantas. Suponen que la expresin del
gene APX puede ser regulada puede en plantas como una respuesta directa o indirecta a un
supuesto incremento en el H
2
O
2
asociado con la sobrexpresin de la SOD, aunque esta relacin
no se ha demostrado.

van Gysel et al., (1993) encontraron que el gene BCB es estimulado por largos periodos
de oscuridad.

6.3.5. Estrs por Patgenos
El papel biolgico de los genes pEARL5 y BCB no es claro, el gene pEARL5 es
homologo a un gene que es estimulado por la infeccin de patgenos vegetales (Dittrich y
Kutchan, 1991) y por tratamientos con methyl jasmonate y promotores fungicos (Facchini et al.,
1996).

6.3.6. Literatura Referente a Gentica y Transgentica de Ia Resistencia aI Estrs
seminarios.

1. Bohnert, H.J. and B. Shen. 1999. Transformation and compatible solutes. Sci. Hort. 78:237-
260.
2. Dunwell, J.M. 2000. Transgenic approaches to crop improvement. J. Exp. Bot. 51 GMP: 487-
496.
3. Zobel, R.W. 1995. Genetic and environmental aspects of roots and seedling stress.
HortScience 30:1189-1192.

116

Regresar

6.4. Aumento Fenotpico en Ia Resistencia aI Estrs Oxidativo y
Otros Tipos de Estrs

De la informacin vertida en los captulos anteriores surge con claridad la opcin de manipular
la resistencia al estrs oxidativo, y por ende a los principales ipos de estrs ambiental o bitico,
aplicando de manera exgena los sealizadores (revisados en el subcaptulo 6.5) o bien
antioxidantes u oxidantes. Tal parece que la aplicacin de un estrs de oxidacin controlado
puede ser tan til como un antioxidante en inducir resistencia al estrs en semillas y plnulas.
Lo anotado a continuacin son los resultados de diferentes experimentos realizados en el
Departamento de Horticultura de la UAAAN. Lo que surge como conclusin de estos trabajos es
la opcin potencial para implementar nuevas tecnologas para el manejo del estrs en
invernadero y campo abierto.

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6.4.1. AIgunos ResuItados acerca de Ia ApIicacin Exgena de Oxidantes,
Antioxidantes e Inductores de Resistencia en Especies HorticoIas


6.4.1.1. INTRODUCCION
Como parte de las actividades de investigacin de nuestro grupo se encuentra el estudio
y potencial aplicacin agrcola de compuestos oxidantes, antioxidantes e inductores de
resistencia. Estos compuestos se aplican de manera exgena a las semillas, plntulas, plantas
o frutos. Las vas de aplicacin son por medio de la semilla, rizoma, bulbo o tubrculo, en la
solucin nutritiva, en el sustrato de crecimiento o bien por va foliar o en la superficie de la fruta.
Hasta el momento los resultados indican que esta tecnologa es de potencial utilidad para
aplicarse en la produccin agrcola en campo abierto e invernadero.

6.4.1.2. APLICACIN DE UN COMPLEJO DE POLIACIDO ACRILICO Y QUITOSAN PARA
MODIFICAR LAS RESPUESTAS AL ESTRS DE PLANTAS

Eva Rayn
1
, Saret Alonso
1
, David Ramrez
1
, Hortensia Ortega
2
, Homero Ramrez
1
, Adalberto
Benavides
1
, Jorge Romero
2

1
Depto. de Horticultura, UAAAN, Buenavista, Saltillo C.P. 25315 Coahuila.
2
CQA, Gerencia de Biopolmeros, Blvd. Enrique Reyna Hermosillo #140 C.P. 25100 Saltillo
Coahuila.

El quitosn (poli-N-acetil-D-glucosamina) es un compuesto preparado comercialmente a travs
de la desacetilacin alcalina de la quitina obtenida del exoesqueleto de crustceos marinos.
Este compuesto es soluble en cidos dbiles y puede utilizarse como agente antifngico o bien
como inductor de respuestas de defensa en las plantas [1]. Raygoza [2] aplic foliarmente en
plantas de lechuga preparaciones de quitosn disuelto con cido actico. El autor encontr que
el quitosn indujo respuestas positivas sobre el crecimiento notables a corto (5-6 das) y largo
plazo (30-40 das) mientras que el cido actico indujo respuestas positivas diferenciables solo
a largo plazo (30-40 das). Al aplicarlo directamente a los tejidos de la planta el quitosn acta

117

como sealizador del estrs induciendo la peroxidacin de lpidos [3] y la produccin de
especies reactivas de oxgeno que entre otras cosas causan el cierre de los estomas [4],
promoviendo de esa forma la activacin de respuestas de defensa contra los patgenos y
probablemente contra el estrs abitico [5]. En cambio, al aplicarlo en el sustrato [6] es probable
que el quitosn acte ms como agente quelatante [7].
La capacidad del quitosn de activar los mecanismos de defensa de las plantas lo convierte en
una alternativa potencial atractiva para el manejo inocuo de los patgenos y posiblemente del
estrs abitico en cultivos, tanto en condiciones de manejo intensivo como en terrenos
marginales. Sin embargo se dispone de poca informacin acerca de las concentraciones,
formas y tiempos de aplicacin de este compuesto. La Gerencia de Biopolmeros del CQA y el
Departamento de Horticultura de la UAAAN llevan a cabo un proyecto conjunto con la meta de
obtener polmeros derivados de la quitina con aplicaciones agrcolas. En el presente trabajo se
reportan resultados preliminares sobre la prueba de complejos de policido acrlico y quitosn
de peso molecular 15,000 (PQ15) y 100,000 (PQ) en plntulas de lechuga y cebolla. El objetivo
fue verificar las respuestas de las dos especies al aplicrsele los complejos por va foliar. Para
ello se verific el crecimiento postrasplante as como la sensibilidad relativa de las plntulas al
dficit de agua.
Las semillas de las mencionadas especies fueron sembradas el 09/mayo/2001. Pasados 21
das despus de la siembra (dds), siguiendo el esquema de un diseo experimental
completamente al azar con tres repeticiones, las plntulas fueron asperjadas con soluciones
acuosas de NaCl (5 g l
-1
) que contenan los complejos PQ y PQ15 al 0.1% v/v. Esta aplicacin
foliar fue repetida a los 25 y a los 29 dds. Entre una aplicacin y otra se realizaron muestreos
destructivos de plantas para la determinacin de la biomasa fresca y seca. Despus de la ltima
aplicacin a los 29 dds una parte de las plantas fue separada para trasplantarse a macetas sin
someterlas a ningn estrs, mientras que otra fue utilizada para estudiar las respuestas al
estrs. El primer estrs de agua fue aplicado a los 30 dds. Despus fueron extradas algunas
plantas para determinar la biomasa. Un segundo estrs de agua fue aplicado a los 39 dds
siguiendo el mismo procedimiento descrito. Las plantas separadas para trasplantarse fueron
colocadas en macetas de 10 l a los 31 dds. El crecimiento fue determinado 20 das despus.
En las plntulas no se presentaron diferencias estadsticamente significativas entre los
tratamientos antes de la aplicacin del estrs. En cambio, despus de aplicar el estrs hdrico
fue notable mayor biomasa en las plantas tratadas con PQ15, mientras que las tratadas con PQ
fueron menores o no mostraron diferencia con el testigo (Figura 1 y Tabla 1).

TabIa 1.- Biomasa fresca de las plntulas de cebolla (g planta
-1
) despus del primer estrs.

Tratamiento PFA PFB PFT
Testigo 0.576
ab
0.057 1.01
ab

PQ 0.387 0.036 0.663
a

PQ15 0.762
b
0.113
b
1.256
b

Las diferencias observadas parecen partir de la habilidad reportada del quitosn para activar las
respuestas de defensa de la planta induciendo la formacin de especies reactivas de oxgeno
[3]. Aunque el efecto puede imitarse aplicando H
2
O
2
(Vera de Jess, datos no publicados) o
cido saliclico [8], estos son inductores no especficos de las respuestas de defensa. El punto
interesante para el quitosn es que se comporta como activador especfico, dependiendo la
especificidad del peso molecular del compuesto[9]. Tal vez ello explicara la menor sensibilidad
al estrs de las plantas tratadas con PQ15 en comparacin con las tratadas con PQ que no fue
estadsticamente diferente al testigo.

118

Figura 1. Dinmica de crecimiento de las plntulas de lechuga. Las fechas indican los tiempos
de aplicacin del estrs de agua.

En cuanto a las plantas llevadas a las macetas sin someterlas al estrs hdrico no se
observaron diferencias entre tratamientos para el caso de la cebolla, mientras que para la
lechuga se present menor biomasa en las plantas tratadas con los complejos PQ15 y PQ. En
el estudio reportado por Raygoza [2] se encontr mayor biomasa en las plantas no estresadas
tratadas con quitosn en solucin de cido actico. En cambio, en el presente trabajo se
encontr que en ausencia de estrs los complejos de quitosn y policido acrlico ejercieron un
efecto negativo. Es probable que este efecto surja de la sealizacin supuestamente ejercida
por los compuestos aplicados o bien por una posible accin negativa del policido acrlico.
Se concluye que el complejo PQ15 ejerci un efecto positivo sobre el crecimiento de las plantas
bajo condiciones de estrs. En ausencia de condiciones ambientales negativas no se observ
beneficio al aplicar los complejos PQ y PQ15.

REFERENCAS
1. No, H.K. and S.P. Meyers. J. Aquatic Food Product Tech. 4 (1995) 27.
2. Raygoza, J.M. Tesis de Licenciatura, UAAAN, 2001.
3. Lee, S., H. Choi, S. Suh, .S. Doo, K.Y. Oh, E.J. Choi, A.T. Schroeder, P.S. Low, Y. Lee.
Plant Physiol. 121 (1999) 147.
4. Orozco-Cardenas, M. and C.A. Ryan. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96 (1999) 6553.
5. Dubery, .A., L.G. Teodorczuk, A.E. Louw. Mol. Cell Biol.. Res. Commun. 3 (2000) 105.
6. Ohta, K., A. Taniguchi, N. Konishi, T. Hosoki. Hort Sci. 34 (1999) 233.
7. Rathke, T.D. and S.M. Hudson. J.M.S.-Rev. Macromol. Chem. Phys. C34(1994)375.
8. Salazar, A.M. Tesis de Licenciatura, UAAAN, 2001.
9. Cuero, R.G. EXS (1999) 315.

119

6.4.1.3. EL H
2
O
2
PERO NO EL ACIDO SALICILICO AUMENTA EL XITO DE GERMINACIN
DE SEMILLAS DE MELON EN MEDIO SALINO

Francisco Olvera, Rigiberto Vera, Adalberto Benavides
Departamento de Horticultura, UAAAN

Cada ao el estrs ambiental causa grandes prdidas en la agricultura. En particular la
salinidad afecta negativamente la produccin en al menos un tercio de las tierras agrcolas, que
equivale a un 6% de la superficie continental (1). En el Estado de Coahuila, en las regiones de
Paila y en La Laguna los agricultores pierden hasta un 15% de la produccin potencial por
problemas de germinacin de la semilla derivados de la salinidad de los suelos.
Nuestro grupo se encuentra investigando alternativas, adicionales al tradicional uso de
mejoradores de suelo y acidificantes, para el pretratamiento de semillas de meln del cultivar
TopMark, uno de los ms utilizados por los agricultores de la zona. Entre los pretratamientos
que se encuentran bajo prueba se tienen: cubiertas de la semilla con biopolmeros derivados
del almidn y la quitina, utilizacin de choques osmticos y la aplicacin de antioxidantes o
estrs oxidativo controlado. Este ltimo enfoque es una alternativa para el manejo del estrs en
plantas ya que permite aumentar o reforzar la tolerancia intrnseca de las mismas a ciertos tipos
de estrs como baja temperatura, salinidad y dficit hdrico (2).
Al nivel celular una respuesta comn a las mencionadas clases de estrs es la generacin de
especies reactivas de oxgeno como el O
2
.-
y el H
2
O
2
as como la sntesis de cido saliclico
(AS) (2). Este hecho se esquematiza en la Figura 1.
El H
2
O
2
parece actuar de forma dual. Por un lado causa dao por oxidacin al DNA, protenas y
lpidos dando lugar en casos extremos a la muerte celular. Por otra parte parece funcionar como
sealizador, es decir un compuesto encargado de marcar el inicio de ciertas respuestas, en
este caso de defensa, en aquellas condiciones ambientales adversas que involucran dao
oxidativo como la patognesis (3), el estrs por baja temperatura, por sequa y por salinidad (4).
Por su parte el cido saliclico funciona como inductor de protenas de defensa contra los
patgenos (3), adems de regular la actividad de diversas enzimas que modifican el ambiente
redox y el nivel de las especies reactivas de oxgeno en la clula (5). Diferentes grupos han
reportado resultados de la aplicacin de anioxidantes u oxidantes, en plntulas o plantas
adultas bajo distintas clases de estrs, pero existen pocos trabajos reportados acerca del
tratamiento de la semilla con compuestos de esta clase. Se sabe que la aplicacin exgena de
H
2
O
2
AS en plntulas induce resistencia al estrs de baja (6) o alta temperatura (7). En el
caso de las semillas se report que el pretratamiento con polietilenglicol, para inducir un choque
osmtico, mejora la capacidad de las semillas de tomate para germinar en altas temperaturas
(8). El objetivo del presente estudio fue determinar si el pretratamiento de las semillas de meln
con soluciones acuosas de H
2
O
2
y AS daba lugar a mayor xito en la germinacin en un medio
salino con NaCl y si dicha manipulacin generaba modificaciones en la adaptacin y
crecimiento de las plntulas.

Materiales y Mtodos
Se colocaron semillas de meln (Cucumis melo L. cultivar TopMark) en cajas petri con las
siguientes soluciones acuosas como pretratamiento: AS en concentracin 10
-4
y 10
-2
M, H
2
O
2
en
concentracin 1 y 2 mM y un testigo con agua destilada. Las semillas se mantuvieron en las
soluciones mencionadas durante 12 horas. A continuacin las semillas de cada pretratamiento
fueron lavadas con agua destilada y se colocaron en cajas petri de vidrio con papel filtro como
sustrato. Se aadieron a continuacin soluciones de NaCl de 0, 100 y 150 mM que funcionaron
como medio de germinacin, las semillas fueron mantenidas en este medio salino durante
nueve das. Se utilizaron 35 semillas por cada caja petri. El diseo experimental utilizado fue

120

completamente al azar con tres repeticiones. Las semillas fueron germinadas en una cmara de
crecimiento con temperatura constante de 26 C. A partir del da tres hasta el nueve se realiz
un conteo diario del nmero de semillas germinadas por caja. Posteriormente las semillas
germinadas fueron transferidas a charolas de poliestireno con peat moss como sustrato y
llevadas a un invernadero en donde se les determin la biomasa nueve das despus del
trasplante.

Figura 1. Durante el estrs por baja temperatura, sequa o salinidad son inducidas diversas y
complejas respuestas de defensa en las clulas vegetales. Se observa un aumento en la
produccin de especies reactivas de oxgeno como el H
2
O
2
, el cual es controlado por cambios
en la actividad y concentracin de antoxidantes y atrapadores de especies reactivas de oxgeno
como el glutatin y el cido saliclico. El estrs tambin resulta en mayor actividad de bombeo
de protones (H
+
) a travs de la membrana plasmtica (enzima ATPasa) y el tonoplasto (enzima
Ppiasa). Se genera tambin la acumulacin de metabolitos especializados como la prolina,
betana y los polioles. Asimismo se modifica la accin de los sistemas de regulacin del paso de
iones, acumulndose potasio en el citoplasma y sodio en el tonoplasto. Por ltimo, las
aquaporinas encargadas de movilizar el agua hacia la clula modifican su actividad cumpliendo
su papel durante la adaptacin a las condiciones adversas (Modificado de Bohnert y Sheveleva,
1998).

Resultados y Discusin
El NaCl determin un retraso en la germinacin as como una disminucin en el xito de la
germinacin (Cuadro 1). Para las semillas germinadas en agua destilada (0 mM NaCl) los
mejores resultados correspondieron al pretratamiento testigo. La situacin fue diferente sin
embargo en los medios salinos, en ellos se observ una ventaja clara del pretratamiento con
H
2
O
2
(Cuadro 1 y Fig. 2) en comparacin con el pretratamiento testigo o con AS.

121

Cuadro 1. Valores promedio del nmero de semillas germinadas por caja petri en los conteos
realizados entre los das tres y nueve despus del inicio del experimento.
Tratamiento
Pretratamiento 0 mM
NaCl
100 mM
NaCl
150 mM
NaCl
Testigo 23.24 d
*
14.05 b 8.71 b
AS 10
-4
M 22.62 cd 14.14 b 8.81 bc
AS 10
-2
M 0.24 a 0.0 a 0.0 a
H
2
O
2
1 mM 20.53 bc 18.05 c 12.86 d
H
2
O
2
2 mM 19.76 b 13.05 b 10.33 c
*
Valores con la misma letra dentro de columnas son iguales de acuerdo a la prueba de Duncan
a una P> 0.05.

Figura 2. Valores promedio y error estndar del nmero de semillas germinadas por caja petri
en el medio de 100 mM de NaCl. La flecha en el grfico indica la curva correspondiente al
nmero de semillas germinadas en el pretratamiento de 1 mM H
2
O
2
.

Entre las respuestas adaptativas frente al estrs de salinidad se encuentran la sntesis y
acumulacin de compuestos osmoactivos as como la induccin del sistema de defensas
antioxidantes y de captura de especies reactivas de oxgeno (9). En el presente estudio la
exposicin de las semillas al H
2
O
2
y al AS se realiz siguiendo la hiptesis de que la exposicin
controlada a los sealizadores mencionados dara lugar a una respuesta adaptativa ms
oportuna y, por lo tanto, a una ms alta tasa de germinacin en el medio salino. Los resultados
obtenidos parecen confirmar la hiptesis para el H
2
O
2
. Resultados anlogos fueron reportados
por Caaveral et al. (10) para las semillas de lechuga bajo estrs salino.

122

El AS mostr un fuerte efecto negativo sobre la germinacin al aplicarse en 10
-2
M, mientras
que en 10
-4
M no fue estadsticamente diferente al testigo. El AS es un compuesto que imparte
tolerancia a alta temperatura en plntulas (7), asimismo inhibe la actividad de catalasa (11)
promoviendo la sntesis de H
2
O
2
que induce las respuestas iniciales de defensa frente al estrs
en las plantas (4). Por ello se esperaba inicialmente que el pretratamiento con AS tuviese un
efecto parecido al del H
2
O
2
. Los resultados indican, sin embargo, que al menos para el estrs
salino y el modelo experimental de semillas de meln, la exposicin al AS no pareci
desencadenar las mismas respuestas que el H
2
O
2
.
En cuanto a la biomasa de las plntulas trasplantadas en invernadero se encontr que las
provenientes del medio sin NaCl no mostraron diferencia significativa frente al testigo, a
excepcin de aquellas cuya semilla fue pretratada con AS 10
-4
M las cuales presentaron una
biomasa significativamente menor. En cambio, en aquellas plntulas provenientes del medio
con NaCl 100 mM se encontr un efecto positivo y significativo del pretratamiento de la semilla
con H
2
O
2
1 mM (Fig. 3). Se observ asimismo un efecto positivo del H
2
O
2
2 mM en las plntulas
cuya semilla germin en NaCl 150 mM.

Figura 3. Promedio y error estndar de la biomasa de plntulas de meln en invernadero
despus de 9 das de crecimiento. Las semillas de los diferentes pretratamientos fueron
germinadas en el medio de 100 mM NaCl y transferidas a charolas con peat moss. Obsrvese
el efecto positivo del pretratamiento con 1 mM de H
2
O
2
.

Lpez-Delgado et al. (12) indujeron termotolerancia en microplantas de papa al aadir AS o
H
2
O
2
en el medio de cultivo in vitro. Estos autores reportaron que la termotolerancia se mantuvo
por ms de un mes despus de la aplicacin inicial. En el presente estudio el pretratamiento de
la semilla con H
2
O
2
dio lugar a un incremento en la biomasa de las plntulas, dicha diferencia
fue observada nueve das despus del trasplante. Por otra parte, no se observ diferencia
significativa entre la biomasa de las plntulas cuya semilla fue germinada en las diferentes
concentraciones de NaCl.

123

Conclusiones
El pretratamiento de semilla de meln con H
2
O
2
1 mM dio lugar a ms rpida y mejor
germinacin en medio salino. La biomasa de las plntulas despus del trasplante fue asimismo
mayor en las semillas pretratadas con H
2
O
2
. Por su parte el AS present efectos no
significativos o negativos sobre la germinacin y biomasa.

Resumen
El H
2
O
2
y el cido saliclico (AS) son compuestos sealizadores de potencial utilidad para el
manejo agronmico del estrs en las plantas. Con el objetivo de estudiar la respuesta de las
plantas bajo estrs a la aplicacin exgena de estos compuestos, se sumergieron semillas de
meln durante 12 horas en soluciones de H
2
O
2
y AS. Posteriormente las semillas fueron
transferidas a soluciones salinas con NaCl para su germinacin en el laboratorio. A
continuacin las semillas germinadas fueron llevadas al invernadero colocadas en charolas con
sustrato. Las semillas tratadas con H
2
O
2
1 mM mostraron mejor y ms rpida germinacin en
NaCl. gualmente las plntulas provenientes de semillas tratadas con H
2
O
2
mostraron mejor
crecimiento en el invernadero. Por su parte el pretratamiento con AS no mostr ningn efecto
positivo sobre la germinacin o el crecimiento.
Palabras clave: meln, salinidad, germinacin de semillas, perxido de hidrgeno, cido
saliclico.

Abstract
H
2
O
2
and salicylic acid (AS) are signaling compounds of potential utility for the agronomic
handling of plant stress. With the objective of studying the response of plants to exogenous
application of this substances in a stress condition, the seeds of muskmelon were 12 hours
submerged in water solutions of H
2
O
2
and AS. Next the seeds were transferred to saline NaCl
solutions in order to germinate in the laboratory. Then the seedlings were placed in containers in
the greenhouse. Seeds treated with H
2
O
2
1 mM showed better and fast germination in the NaCl
solutions. n the same way the seedlings coming from H
2
O
2
treated seeds showed better growth
in the greenhouse. On the other hand the treatment with AS did not give rise to any advantage
in seed germination or seedling growth.

Key words: muskmelon, salinity, seed germination,, hydrogen peroxide, salicylic acid.

Referencias
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potato microplants by acetylsalicylic acid and H
2
O
2
. J. Exp. Bot. 49:713-720.

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6.4.2. Un enfoque prctico comerciaI para Iograr eI aumento fenotpico en Ia
resistencia aI estrs oxidativo y otros tipos de estrs

M.C. AIberto SandovaI RangeI
Dr. Adam Kamara Keita
INTRAKAM, S.A. de C.V.

La actividad agrcola actual debe estar basada en una tecnologa de manejo de los
cultivos que les permita desempear tres funciones principales que constituyen la base para
obtener rendimientos ptimos.

* La recepcin de los estmulos ambientales y su conversin en energa metablica.
* La absorcin de los nutrimentos a partir del suelo as como su transformacin en metabolitos
primarios y secundarios.
* La formacin del producto final (Granos, hojas, tubrculos, bulbos ...) de acuerdo con la
eficacia de transformacin de los estmulos ambientales y de los minerales en productos
primarios a travs del metabolismo.

La cantidad y la calidad del producto final depende por lo tanto de que la planta realice
con eficacia, de manera constante y oportuna estas tres funciones de acuerdo con los
requerimientos de cada fase fenolgica. De ah que el Manejo Agronmico de los cultivos,
tiene por objeto a proporcionar las condiciones para que la planta realice dichas funciones
vitales; y el profesional en produccin agrcola debe fundamentar el manejo de manera bsica
en el conocimiento y determinacin de:

1- Las necesidades nutricionales por etapa fenolgica.
2- Las necesidades de agua por etapa fenolgica.
3- El conocimiento y determinacin de los efectos de su interaccin con el medio
ambiente, el suelo y el agua.

Por ello, el incremento en la produccin ser siempre la resultante de los efectos
concertados de un conjunto de factores que interactan entre s y con la planta. Esto deja
claramente demostrado que la forma ms eficiente para alcanzar altos rendimientos tanto en

125

cantidad como calidad, es la orientacin de la tecnologa de produccin agrcola hacia tres
conceptos bsicos:

* El mejoramiento gentico de los cultivos
* La proteccin de los cultivos
* El manejo de los cultivos fundamentado en el conocimiento y determinacin de las
necesidades nutricionales de los cultivos por etapa fenolgica; el conocimiento y determinacin
de las necesidades hormonales de los cultivos por etapa fenolgica; el conocimiento y
determinacin de las necesidades de agua de los cultivos por etapa fenolgica; el conocimiento
y determinacin de los efectos de la interaccin cultivo y medio ambiente; el conocimiento y
determinacin de los efectos de la interaccin cultivo, agua y suelo.

Tambin esta precisado que, cualquier condicin adversa, que impacte las funciones
vitales de la planta, provoca una alteracin en su actividad normal y esta alteracin es lo que
comnmente se conoce como estrs. En la actualidad, los productos que se aplican en la
agricultura estn integrados por una lista interminable, que van encaminados a evitar o
disminuir en impacto del estrs sobre las funciones vitales de la planta y por consecuencia en
su productividad. De tal manera que un producto diseado para la agricultura conocido
comnmente como agroqumico; si esta bien fundamentado debe responder claramente a
preguntas como: Que es?, Que contiene (ingrediente Activo A?, Cuanto contiene?, Que hace
lo que contiene y como lo hace?.
Por que la realidad es, que la gran mayora de los agroqumicos, carecen de
fundamentos cientficos y tcnicos para su uso; de esta manera, aunque el producto fuera de
utilidad para la planta, su aplicacin lejos de aportar un beneficio al cultivo, se convierte en una
carga extra en cuanto a costo.
Tambien es sabido, que las plantas antes de producir, requieren de un perodo de
tiempo durante el cual surgen acontecimientos precisos que inician en un momento
determinado para terminar en otro. El perodo de tiempo durante el cual se lleva al cabo estos
eventos es conocido agronmicamente como cicIo fenoIgico y va desde la germinacin
hasta la cosecha.
Durante el ciclo fenolgico, la planta interacta con el medio ambiente y todos sus
elementos (temperatura, humedad, insolacin); el suelo y sus elementos (nutrimentos, materia
orgnica, sales, carbonatos, arcillas, microorganismos) y con el agua y sus componentes (pH,
conductividad, sales, carbonatos).
Esta interaccin genera en la planta algunos cambios que hacen posible el
desencadenamiento de mecanismos fisiolgicos y metablicos para que la expresin del
potencial gentico del cultivo sea ptima traducindose en una abundante cosecha y de mayor
calidad.
La interaccin planta-medio ambiente tiene mayor impacto sobre su fisiologa y
metabolismo. Esto hace que el cultivo tenga una respuesta determinada a la luz y a la
temperatura tanto a nivel fisiolgico, metablico y nutricional as como a nivel de desarrollo y
crecimiento.
La magnitud de esta respuesta en cuanto a produccin en relacin a los factores antes
mencionados ha permitido separar a los cultivos en plantas eficientes: C4; y no eficientes: C3.
Un anlisis minucioso de estos dos grupos (C4 y C3) de plantas cultivadas en lo
referente a la accin de la luz, de la temperatura y el metabolismo, ha permitido establecer las
bases para aplicar en los cultivos algunos productos especficos que permiten contrarrestar los
efectos nocivos de la temperatura y luminosidad; incrementar la accin fisiolgica y metablica
as como la generacin de energticos en los cloroplastos bajo condiciones de temperatura y de
luminosidad por debajo de los niveles mnimos.

126

En la actualidad existen productos diseados, con el objeto de generar un sinergismo
ms dinmico entre las actividades fisiolgicas y metablicas de las plantas, de las
fitohormonas endgenas y el potencial gentico de los cultivos y se les a denominado productos
activados. Estos productos estn integrados por fitohormonas, nutrimentos claves para las
actividades fisiolgicas y metablicas como: cidos flvicos y hmicos , cido nicotnico, cido
pantotnico y tiamina. kamara 1997.
Estos productos son utilizados para resolver los problemas fisiolgicos, metablicos, de
crecimiento y desarrollo que tienen mayor impacto sobre la cantidad y calidad de los
rendimientos. La induccin de este sinergismo en un momento determinado del ciclo fenolgico
del cultivo es determinante para una mayor calidad y cantidad de la produccin.
La dinmica en la generacin de estos productos, es muy activa, en virtud que la
generacin de informacin sobre compuestos especficos que ayudan a disminuir el impacto
del estrs ambiental se generaran da a da y para muestra citamos algunos ejemplos de
productos comerciales donde se pueden apreciar los ingredientes, su concentracin y la
informacin practica para su uso.

R G R O TF
CompIejo de fitohormonas naturaIes y activadores metabIicos de Ia pIantas

COMPOSICIN
Porcentaje en peso
Extractos de algas marinas y de plantas como fuente de
fitohormonas naturales (Gibelinas, 300 ppm; citocininas,
2000 ppm auxina, 450 ppm) 69.65
Macronutrimentos N (14.5 g), K (14.8 g), P (0.75 g), Ca (0.62 g) 3.10
Micronutrimentos Mg (1.32 g), Fe (0.44 g/litro), Zn (0.50 g),
(0.072 g), Cu (0.147 g) 0.25
Activadores metablicos cido pantotnico (10 g), niacina (10 g)
tiamina (10 g), cido flvico (20 g), cido glutmico (50 g) 10.00
Acondicionadores orgnicos 17.00
TOTAL 100.00

INFORMACIN GENERAL

Qu es SINERGRO TF ?
SINERGRO TF SINERGRO TF es un complejo de fitohormonas naturales de extractos de algas
marinas y de plantas ms los principales activadores metablicos (cido pantotnico, niacina,
tiamina, cido flvico y cido glutmico) de las plantas para ser aplicado en forma foliar y en el
riego. Su alta concentracin de fitohormonas en forma orgnica crea una interaccin con los
activadores metablicos para producir un sinergismo a nivel fisiolgico y metablico en la
planta. Este efecto sinergista permite a los cultivos expresar al mximo posible su potencial
gentico tanto bajo condiciones adversas como ptimas aplicando una dosis inferior a la de los
reguladores de crecimiento convencionales.

Qu hace SINERGRO TF ?
1- Armonizar el equilibrio fisiolgico de la planta para promover un crecimiento y desarrollo
balanceados tanto bajo condiciones de estrs de fro como de calor con el fin de:
* Aumentar la capacidad de la planta para la floracin y fructificar .
* nducir una rpida y mayor restauracin de los tejidos daados por granizo o helada.

127

* ncrementar a nivel celular el contenido de auxinas que se degrada por la alta (25 grados
centgrados o ms) o la baja (10 grados centgrados o menos) temperatura en las plantas C3
(tomate, fresa, chile, frijol, frutales entre otros).
* ncrementar a nivel celular el contenido de auxinas que se degrada por la alta (45 grados
centgrados o ms) o la baja (5 grados centgrados o menos) en las plantas C4 (maz, caa de
azcar, arroz, pia entre otros)
* ncrementar en los cloroplastos el nivel de las fitohormonas naturales bajo
condiciones de temperaturas bajas y altas por debajo de los mnimos
requeridos.
* ncrementar el metabolismo bajo condiciones de temperaturas bajas y altas por debajo de los
mnimos requeridos.
* ncrementar la concentracin de clorofila bajo condiciones de temperaturas bajas y altas por
de bajo de los mnimos requeridos.
* ncrementar el desarrollo y el crecimiento de la planta, flores, tubrculos y frutos bajo
condiciones de temperaturas bajas y altas por de bajo de los mnimos requeridos.
* ncrementar la respiracin a nivel celular bajo condiciones de temperaturas bajas y altas por
debajo de los mnimos requeridos en las plantas C3 (tomate, fresa, chile, frijol, frutales entre
otros) as como en las plantas C4 (maz, caa de azcar, arroz entre otros)
* ncrementar en los cloroplastos el nivel de las reservas energticas (ATP, ADP) que son
producidos por la fotosntesis bajo condiciones de temperaturas bajas y altas por debajo de los
mnimos requeridos.
* ncrementar el metabolismo bajo condiciones de temperaturas bajas y altas por debajo de los
mnimos requeridos.
* ncrementar la concentracin de clorofila bajo condiciones de temperaturas bajas y altas por
de bajo de los mnimos requeridos.
* ncrementar el desarrollo y el crecimiento de la planta, flores, tubrculos y frutos bajo
condiciones de temperaturas bajas y altas por debajo de los mnimos requeridos.

2- Prevenir en los cultivos las deficiencias fisiolgicas y metablicas de macronutrimentos (N.
P. K), micronutrimentos (Fe, Zn,, Mg, Cu) y vitaminas.

3- ncrementar la expresin del potencial gentico de la planta mediante una mayor produccin
en cantidad y calidad.

Porqu SINERGRO TF induce estos dos efectos en los cultivos?
Porque aportan a la planta una cantidad de los principales fitorreguladores para su crecimiento
y el desarrollo tanto bajo estrs de calor as como de fro.
CARACTERSTICAS GENERALES

SINERGRO TF es 100% soluble en agua bajo condiciones de temperatura ambiente,
generando un pH de 7 a 8; su densidad en volumen es de 1.15 kg/litro.
Contiene un balance estable de fitohormonas en forma natural (Giberelina 300 mg/litro; AA 450
mg/litro; Zeatina 2000 mg/litro).Este balance de fitorreguladores confiere a SINERGRO TF un
amplio espectro de usos en los cultivos.

Cuando se expone SINERGRO TF directamente a los rayos solares la degradacin que sufre
por los mismos es realmente poca por lo cual no hay medidas especficas. Para la
APLCACN no se requiere un pH especfico; sin embargo, la aplicacin debe realizarse en
las tardes cuando hay bajo nivel de radiacin solar para una mayor absorcin.

128

MECANISMO DE ACCIN

Cmo SINERGRO TF es capaz de:
Armonizar el equilibrio fisiolgico de la planta para promover un crecimiento y desarrollo
balanceados tanto bajo condiciones de estrs de fro como de calor ?
Prevenir en los cultivos las deficiencias fisiolgicas y metablicas de macronutrimentos (N. P.
K), micronutrimentos (Fe, Zn,, Mg, Cu) y vitaminas ?
ncrementar la expresin del potencial gentico de la planta mediante una mayor produccin en
cantidad y calidad ?

RESPUESTA: SINERGRO TF incrementa en forma directa los niveles endgenos de giberelina,
auxina y citocinina lo cual genera cambios en los procesos fisiolgicos gobernados por estas
fitohormonas; mismos que repercuten en una mayor floracin, fructificacin, tuberizacin y
rebrote de hojas principalmente.
SINERGRO TF, aplicado en los cultivos aumenta el contenido de N, P, K y de Fe, Zn,, Mg y Cu
en forma de complejo orgnico como parte de los extractos de algas marinas. Estas fracciones
de algas marinas que contienen enzimas, incrementan el nivel de los transportadores
del plasmalema lo cual a su vez aumenta la afinidad entre los minerales, las fitohormonas y
estas enzimas transportadoras. Este mecanismo a nivel de los tejidos de conduccin permite:
* Una rpida translocacin de los minerales y de la fitohormonas tomados por la raz y la hoja.
* Una rpida difusin de los minerales y de las fitohormonas en las clulas.
* Compensar las deficiencias fisiolgicas y metablicas de los nutrimentos

Las plantas cultivadas se caracterizan por tener una respuesta determinada a la luz y a la
temperatura tanto a nivel fisiolgico, metablico, nutricional as como a nivel de crecimiento y
desarrollo.
La magnitud de esta respuesta en cuanto a produccin en relacin a los factores antes
mencionados ha permitido de separar a los cultivos en plantas eficientes: C4 y no eficientes C3.

Un anlisis de la interaccin entre estos dos grupos (C4 y C3) de plantas cultivadas, la accin
de la luz, temperatura y metabolismo ha permitido establecer algunas bases para manejar los
cultivos mediante la aplicacin de productos especficos que permitan contrarrestar los efectos
de la temperatura baja y alta, la luminosidad baja y alta en los cloroplastos. Esto permite lograr
una buena produccin bajo condiciones de luminosidad y temperatura por debajo o arriba de los
niveles mnimos requeridos.

En las plantas C4, la saturacin del flujo de fotosntesis es alta cuando la luminosidad esta entre
400 a 600 W y la fotosntesis es ptima a temperatura de 30 a 45 C. En las plantas C3, la
saturacin del flujo de fotosntesis es baja cuando la luminosidad es
> 200 W; y la fotosntesis es ptima a temperatura de 15 a 25 C. Estos fenmenos son
afectados en la medida que el rango de temperatura descienda ms abajo o suba de estos
rangos. En este momento, la respuesta de la planta empieza a reducirse considerablemente.

La aplicacin de SINERGRO TF a las plantas bajo estas condiciones produce dos efectos
fundamentales que favorecen el crecimiento y el desarrollo:

* Un incremento en el nivel de las reacciones de hidrlisis lo cual genera ms reservas
energticas para solventar el metabolismo que se encuentra inhibido por la baja o la alta
temperatura tanto en plantas C3 como C4.

129

* Un incremento en los sub productos de la respiracin (RBP) gracias a la accin de los
ingredientes activos los cuales son utilizados en los cloroplastos para generar la ribulosa
difosfato cuando las condiciones de temperatura no son favorables para su sntesis.

La citocinina de SINERGRO TF incrementa la tasa y la velocidad de acumulacin de los cidos
nucleicos en el primordio de la yema lo cual activa el DNA; influye en su divisin en fragmentos,
en el crecimiento de estos fragmentos as como en la divisin celular. Esto se traduce en la
velocidad, porcentaje de brotacin as como el vigor de los brotes lo cual favorece el flujo de las
reservas de los tejidos hacia los brotes.

La auxina de SINERGRO TF incrementa la tasa y velocidad de reposicin del RNA de
transferencia en los primordios generados por la baja o la alta temperatura as como la
hidratacin de los mismos lo que se traduce por una mayor plasticidad en las clulas
permitiendo as un crecimiento y desarrollo ms compacto y sostenido de los brotes, flores y el
prendimiento de frutos bajo condiciones de baja o alta temperatura.

La giberelina de SINERGRO TF bajo condiciones de baja y alta temperatura incrementa la
sntesis de los azcares, la sntesis de enzimas de hidrlisis (beta y alfa amilasa, proteasas,
lipasas entre otros) que incrementan la conversin de las reservas energticas en reservas
metablicas para producir mayor energa en corto tiempo lo que se traduce por una rpida
brotacin, floracin, crecimiento y desarrollo de la planta.

DOSIS Y FORMAS DE APLICACIN

APLICACIONES FOLIARES

HortaIizas y cucurbitceas. (Tomate, chile, berenjena, fresa, brcoli, coliflor, meln, sanda y
esprrago)
* nicio de la floracin, del turin, del meristemo apical: 100 cc/ha
* Cuajado de flores, crecimiento del turin, meristemo: 150 cc/ha
* Desarrollo de frutos, del turin, del meristemo: 250 cc/ha
Papa, ajo y ceboIIa
* nicio de la paricin, 9 a 11 hojas (cebolla, ajo): 250 cc/ha
* Desarrollo de tubrculos, bulbo (cebolla, ajo): 250 cc/ha
Maz, arroz, trigo, cebada y sorgo.
* nicio del embuche: 100 cc/ha; desarrollo de la espiga: 150 cc/ha.
Caa de azcar.
* Cada mes: 150 cc/ha
FrijoI, garbanzo, cacahuate, soya y aIgodn
* nicio de la floracin: 100 cc/ha
* Formacin de la vaina, cuadros (algodn): 150 cc/ha
* Crecimiento de la vaina, bellota (algodn): 250 cc/ha
FrutaIes tropicaIes (mango, papaya, guayaba, aguacate) y tempIados (Manzano, uva,
durazno, nogaI, pera...)
* nicio de la floracin: 250 cc/ha; cuajado de la fruta: 250 cc/ha
ApIicacin en invernadero
* 2 hojas verdaderas: 0.50 cc/litro; 4 hojas verdaderas: 0.50 cc/litro
* 6 hojas verdaderas: 1.00 cc/litro; 10 hojas verdaderas: 1.50 cc/litro
Recuperacin de Ias pIantas despus de un granizo y/o heIada
* Daos parciales (5-20 %) 100 a 150 cc/ha
* Daos considerables (>20<50 %) 150 a 250 cc/ha repetir a los 10 das despus.

130

* Daos severos (>50<100 %) 250 g o ms por ha y repetir a los 10 das despus.

APLICACIONES POR RIEGO (Cultivo normal e hydropnia)
HortaIizas, cucurbitcea, papa, granos y ceboIIa.
* nicio de la floracin: 500 cc/ 100 metros cbicos (5 ppm)
* Desarrollo del fruto: 1000 cc/ 100 metros cbicos (10 ppm)
FrutaIes tropicaIes y tempIados.
* nicio de la floracin: 1000 cc/ 100 metros cbicos (10 ppm)
Desarrollo del fruto: 1500 cc/ 100 metros cbicos (15 ppm)

Balance de cido hmico, cido flvico, potasio y de activadores fisiolgicos y metablicos.
COMPOSICIN
Porcentaje en peso
cido Hmico (477.8 g) 47.78
cido Flvico (413.1 g) 41.31
Potasio 08.90
cido glutmico (8000 ppm) 00.80
cido pantotnico (2000 ppm) 00.20
cido nicotnico (2000 ppm) 00.20
Mo (2000 ppm) 00.20
Acondicionadores 00.61
TOTAL 100.00

INFORMACIN GENERAL DE SINERBA PLUS

Que es SNERBA PLUS ?
Es un producto elaborado sobre la base del mayor equilibrio entre el cido hmico, cido
flvico, el potasio y los principales activadores metablicos y fisiolgicos de las plantas para
obtener una mxima respuesta. Por lo tanto, SNERBA PLUSS es el bioactivador orgnico ms
concentrado y de alta pureza a base de substancias hmicas y flvicas estimulados con
activadores. Est diseado para eficientar el metabolismo de la planta, mejorar el crecimiento y
desarrollo de la raz y de la planta en general; aumentar la concentracin de los ingredientes
activos principales de la materia orgnica en el suelo, la floculacin del suelo, la infiltracin del
agua y la retencin de humedad en el suelo. Aumenta el suministro y la liberacin del potasio
en el suelo, la liberacin y disponibilidad de los otros nutrimentos.

Que hace SNERBA PLUS ?
* Mejoramiento indirecto del suelo y las condiciones de nutricin.
* Mejorar la eficiencia de la fertilizacin del suelo. * Estimular las reacciones enzimticas para
incrementar la respuesta fisiolgica y metablica de los cultivos.
* ncrementar la eficiencia de los herbicidas.
* ncrementar en el suelo la formacin de coloides y la disponibilidad de los nutrimentos en la
rizsfera.
* ncrementar en el suelo poblacin de microorganismos benficos en la rizsfera.
* ncrementar el desarrollo de las races secundarias as como las adventicias y su exudacin.
* Contrarrestar los efectos del bloqueo de Fe por fsforo, y de otros micronutrimentos por los
carbonatos en el suelo.
* mpulsar la absorcin de los nutrimentos por las plantas.
Porqu SNERBA PLUS induce estos efectos ?

131

Porque aporta al suelo en forma equilibrada las substancias ms necesarias (activadores
fisiolgicos y metablicos; cidos flvicos, cidos hmicos, y K) para el desarrollo de la raz, la
formacin de coloide y la estimulacin de los procesos fisiolgicos en los cultivos.

CARACTERSTICAS GENERALES DE SINERBA PLUS

SNERBA PLUS es suspendible en agua desde 250 hasta 350 g aforado a un litro de agua bajo
condiciones de temperatura ambiente y genera un pH de alcalino; su densidad es de 0.5 a 0.6
kg/litro

Cuando se expone SNERBA PLUS directamente a los rayos solares no sufre degradaciones
por lo que no existen disposiciones especiales. Para la APLCACN se recomienda utilizar
agua con pH mayor de 4.5 y debe realizarse en el riego o bien foliar.

MECANISMO DE ACCIN DE SINERBA PLUS

Cmo SNERBA PLUS induce
* Mejoramiento indirecto del suelo y las condiciones de nutricin ?
* La eficiencia de la fertilizacin del
suelo ?
* La activacin de las reacciones metablicas y fisiolgicas de los cultivos ?
* Alta eficiencia de los herbicidas ?

* Un aumento en la formacin de coloides en el suelo y la disponibilidad de los nutrimentos en
la rizsfera ?
* Un incremento de la poblacin de microorganismos benficos en la rizsfera ?
* Un incremento en el desarrollo de las races secundarias as como las adventicias y su
exudacin ?
* La liberacin del Fe bloqueado por el fsforo en el suelo, y de otros micronutrimentos
bloqueados por los carbonatos en el suelo ?
* La absorcin de los nutrimentos por las
plantas ?

Respuestas: SNERBA PLUS tiene alto contenido de cidos hmico y flvico con estructura
molecular larga y cargada de grupos funcionales tales como hidroxilos, aminas y carboxilos.
Esto le permite reaccionar con los iones mediante atraccin electrosttica y formar complejos
orgnico - minerales as como agregados en el suelo lo cual mejora la circulacin del agua y del
aire . Este nuevo elemento; hmico mineral es un coloide de alta actividad. La fraccin flvica
estimula varias reacciones enzimticas en la planta lo que repercute en la mayora de los
procesos fisiolgicos que controlan la floracin, fructificacin, crecimiento y desarrollo en
general. La porcin hmica es la que tiene mayor interaccin con el suelo para mejorar sus
caractersticas fisicoqumicas.
La alta afinidad entre los ingredientes activos del SNERBA PLUS y las enzimas
transportadores del plasmalema permite al SNERBA PLUS incrementar la velocidad de
transporte y de difusin de los nutrimentos, los plaguicidas y herbicidas cuando se aplican en
mezcla.
La interaccin entre los hmicos y los nutrimentos para transformarlos en coloides por
un lado; y de los flvicos con las enzimas transportadores del plasmalema permite al
SNERBA PLUS incrementar la velocidad de transporte y de difusin de los nutrimentos, del
suelo hacia la planta.

132

Los cidos glutmico, nicotnico y pantotnico de SNERBA PLUS, son utilizados por la
planta para generar mayor cantidad de energticos por unidad de fsforo en menor tiempo y
con poco requisito de desgaste metablico. Esto asegura el sostenimiento de un desarrollo y
crecimiento ptimos de la planta, incluso en condiciones mximas, ms an en condiciones
crticas. Esto, constituye Ia gran diferencia entre SINERBA PLUS y Ios otros productos
que contienen cidos hmicos y fIvicos. Este sinergismo entre Ios activadores
metboIicos, Ios hmicos y fIvicos hace que SINERHUMUX MAXI tenga una mayor
suspendibiIidad y que se pueda usar una menor dosis para obtener resuItados ptimos, a
un costo por ha ms bajo que eI que se obtendra con esos otros productos.

SNERBA PLUS como un producto de alta concentracin en sustancias hmicas y flvicas
puede ser utilizado como base o aditivo para varias formulaciones de productos para uso
agrcola e industrial, entre los que estn:
* La formulacin adecuada de cidos hmicos de acuerdo con cultivo, suelo y forma de
aplicacin (5, 10, 15 y 25%).
* Formulacin de fertilizantes foliares.
* Formulacin o mezcla de fertilizantes de suelo.
* Formulacin de substratos para invernadero y semillero.
* Formulacin de herbicidas.
* Formulacin de secuestrantes para aguas duras.

DOSIS Y FORMAS DE APLICACIN DE SINERBA PLUS

Para lograr una buena aplicacin de SNERBA PLUS es importante suspenderlo
previamente y de manera uniforme en el agua. Para ello, existe una relacin entre la superficie
de contacto del agua y la cantidad de SNERBA PLUS a suspenderse. Por ejemplo para un
volumen de 13 litros se puede suspender hasta 7 kg de SNERBA PLUS al considerar la
suspendibilidad mxima (350 g aforado a un litro). Para un recipiente con capacidad de 13 litros
de agua y con un metro cuadrado de superficie de contacto se puede suspender 3 kg de
SNERBA PLUS por cada fraccin de 15 minutos hasta alcanzar los 7 kg (capacidad mxima) .
Para este mismo volumen de 13 litros en donde la supeficie de contacto es de 0.25 metros
cuadrados se puede suspender solo 1 kg por cada fraccin de 15 minutos hasta alcanzar los 7
kg de SNERBA PLUS. Esto significa que se tardar 1.75 horas para suspender los 7 kg de
SNERBA PLUS en un volumen de 13 litros y 35 minutos para suspender la misma cantidad en
recipiente de 13 litros con 1 metro cuadrado de superficie.
Debido a la alta concentracin de SNERBA PLUS en flvico y hmico, para
suspenderlo, no se recomienda usar grandes cantidades de producto para pequeas
superficies de contacto ni agitadores de cualquier tipo antes de que el producto se suspenda
totalmente para evitar la formacin de grumos.
Para lograr una aplicacin adecuada del SNERBA PLUS en el suelo con el fin de
compensar los efectos negativos del dficit de materia orgnica y obtener una buena absorcin
de los nutrimentos, es de suma importancia tomar en cuenta algunos parmetros para lograr
una buena dosificacin:
* Saber o analizar el contenido de materia orgnica en el lote
* Dividir el lote conforme a su contenido de materia orgnica
A- nferior a 2%
B- nferior a 3%
C- Superior a 3%

133

APLCACN DE SNERBA PLUS EN EL REGO PARA MEJORAR LA NUTRCN VEGETAL.

Hortalizas (tomate, chile, berenjena, fresa, brcoli); Cucurbitceas (meln, sanda, pepino,
calabaza, cabocha); leguminosas (frijol, garbanzo, soya), agave, banano, pia, esparrago y
papa.
1- SUELOS CON MENOS DE 2% DE MATERIA ORGANICA.
* Etapa de plntula, de rebrote: 0.75 kg/ha.
* Crecimiento vegetativo: 0.75 kg/ha.
* Floracin, inicio fructificacin, turin , paricin: 1.0 kg/ha.
* Crecimiento del fruto, bulbo, tubrculo:
1.5 kg/ha.
* Floracin, inicio fructificacin, turin , paricin: 1.0 kg/ha. * Crecimiento del fruto, bulbo,
tubrculo:
0.75 kg/ha.
3- SUELOS CON MAS DE 3% DE MATERIA ORGANICA.
* Floracin, inicio fructificacin, turin , paricin: 0.75 kg/ha. * Crecimiento del fruto, bulbo,
tubrculo: 0.50 kg/ha.

Frutales tropicales (Papaya, mango, aguacate, ctricos); frutales templados (manzano, durazno,
vid, nogal, ciruelo, cereza, guayaba).
* Etapa de rebrote: 0.50 kg/ha.
* Floracin y fructificacin: 1.0 kg/ha.
* Crecimiento del fruto: 1.50 kg/ha.
* Crecimiento vegetativo: 1.0 kg/ha. * Floracin y fructificacin: 0.75 kg/ha.
* Crecimiento del fruto: 1.0 kg/ha.
* Floracin y fructificacin: 0.75 kg/ha.
* Crecimiento del fruto:0.50 kg/ha.
Cereales.
* Etapa de plntula: 0.75 kg/ha.
* Amacollamiento y/o segundo nudo: 1.0 kg/ha.
* Embuche: 0.75 kg/ha.
* Grano lechoso: 2.5 kg/ha.
* Amacollamiento y/o segundo nudo: 0.50 kg/ha. * Embuche: 0.5 kg/ha.

134

* Amacollamiento y/o segundo nudo: 0.50 kg/ha. * Embuche: 1.0 kg/ha.

APLICACIONES FOLIARES DE SINERBA PLUS

Hortalizas (tomate, chile, berenjena, fresa, brcoli); Cucurbitceas (meln, sanda, pepino,
calabaza, cabocha); leguminosas (frijol, garbanzo, soya), agave, banano, pia, esprrago y
papa.
* Etapa de plntula, de rebrote: 25 g/ha.
* Crecimiento vegetativo: 50 g/ha.
* Floracin, inicio fructificacin, turin, paricin: 100 g/ha.
* Crecimiento del fruto, bulbo, tubrculo:
150 g/ha.

Frutales tropicales (Papaya, mango, aguacate, ctricos); frutales templados (manzano, durazno,
vid, nogal, ciruelo, cereza, guayaba).
* Etapa de rebrote: 50 g/ha.
* Crecimiento vegetativo: 100 g/ha.
* Floracin y fructificacin: 150 g/ha.
* Crecimiento del fruto: 200 g/ha.

Aplicacin en invernadero.
* 2 hojas verdaderas: 0.25 g/litro.

Banano, pia y agave.
* Despus del trasplante 100 g/ha.
* Floracin 150 g/ha.
* Formacin de la fruta: 150 g/ha.
* Desarrollo de la fruta: 200 g/ha.
* Cada 30 das: 50 g/ha.

* Macollos y/o segundo nudo 50 g/ha.
* Embuche 100 g/ha.
* Floracin: 100 g/ha.
* Grano lechoso: 150 g/ha.

Frijol, garbanzo, cacahuate, soya y algodn.
* 12 hojas verdaderas 100 g/ha.
* nicio floracin 150 g/ha.
* Formacin de vaina y/o cuadreos: 150 g/ha.
* Crecimiento de vainas y/o bellotas: 200 g/ha.

MEZCLAS DE SNERBA PLUS CON FERTLZANTES Y HERBCDAS
* ncrementar la eficiencia de fertilizantes en suelos arenosos/limosos 2 kg/ha.
* ncrementar la eficiencia de fertilizantes en suelos arcilloso 3 kg/ha
* ncrementar la eficiencia de fertilizantes en suelos con sodio o cloro 4 kg/ha.
* ncrementar la eficiencia de herbicidas pre-emergente: 100 g/ha.

135

* ncrementar la eficiencia de herbicidas pos-emergente : 50 g/ha.

* nicio de la formacin del segundo par de hojas verdaderas: 0.50 kg/100 litros; a la formacin
del cuarto par de hojas verdaderas: 1.00 kg/100 litros.

I N E R B A N-P-K
FertiIizante foIiar N-P-K activado con vitaminas, cidos hmicos y fIvicos

COMPOSICIN
Porcentaje en peso
Nitrgeno de asimilacin inmediata 20.32
Fsforo de asimilacin inmediata 25.22
Potasio de asimilacin inmediata 15.00
cido hmico (7200 ppm) 0.72
cido flvico (6200 ppm) 0.62
cido pantotnico (1000 ppm) 0.10
Acondicionadores orgnicos 38.02
TOTAL 100.00

INFORMACIN GENERAL DE SINERBA N-P-K

Qu es SINERBA N-P-K ?
SINERBA N-P-K, es un fertilizante foliar soluble que contiene N-P-K balanceados y activados
con el cido pantotnico, vitaminas, cidos hmicos y flvicos.

Qu hace SINERBA N-P-K ?
Compensar los dficits mnimos de N-P-K en la planta en forma eficiente e inmediata a travs
de la hoja con el objeto de:
* Evitar los efectos crticos del dficit del N-P-K a nivel fisiolgico y metablico en la planta
* ncrementar la tasa de acumulacin de las reservas energticas (ATP, ADP, AMP) en los
tejidos.
* Aumentar la formacin de los compuestos nitrogenados en la planta.
* ncrementar la tasa de acumulacin de los fotosintatos en los tejidos de reserva (frutos,
tubrculos, bulbos, granos y flores).

Porqu SINERBA N-P-K induce estos 4 efectos en las plantas ?
Porque aporta a la planta una cantidad de N-P-K activado con cidos pantotnico, flvico y
hmico.

CARACTERSTICAS GENERALES DE SINERBA N-P-K

SINERBA N-P-K, es una reaccin de N, P y K con cido pantotnico, cido flvico y cido
hmico para obtener 203.2 g de N, 252.2 g de P y 150 g de K 100 % activados y 100% soluble
en agua bajo condiciones de temperatura ambiente. Despus de disolverlo en agua el pH de la
solucin vara de neutro a alcalino y se recomienda aplicar el producto en un plazo no mayor de
una semana despus.
Cuando se expone SINERBA N-P-K directamente a los rayos solares la degradacin que sufre
por los mismos es realmente poca por lo cual no hay medidas especficas. Para la
APLCACN se recomienda utilizar agua con pH mayor de 6.5 y realizarla en las tardes
cuando hay bajo nivel de radiacin solar

136

MECANISMO DE ACCIN DE SINERBA N-P-K

Cmo SINERBA N-P-K permite:
* Evitar los efectos crticos del dficit del P a nivel fisiolgico y metablico en la planta ?
* ncrementar la tasa de acumulacin de las reservas energticas (ATP, ADP, AMP) en los
tejidos ?
* Aumentar la formacin de los compuestos nitrogenados en la planta ?
* ncrementar la tasa de acumulacin de los fotosintatos en los tejidos de reserva (frutos,
tubrculos, bulbos, granos y flores) ?

RESPUESTA: La reaccin del N-P-K con el cido pantotnico y los cidos flvico y hmico
permite obtener un balance de N-P-K activado y de esta manera, las funciones fisiolgicas y
metablicas de cada uno de estos nuevos elementos se duplica en cuanto a interaccin en
comparacin con cualquiera de ellos en forma aislada. El efecto de esta interaccin sobre la
fisiologa y el metabolismo es requerido cuando el cultivo necesita un balance de N-P-K durante
las etapas de desarrollo inicial, inicio de la floracin y de la fructificacin. Esto confiere a
SINERBA N-P-K una alta estabilidad y eficacia en APLCACN foliar durante las fases antes
mencionadas.
La interaccin entre los hmicos y flvicos con el N-P-K permite secuestrarlos con alta
eficacia lo cual aumenta su afinidad con los transportadores del plasmalema por la accin del
flvico y el nuevo N-P-K se distribuye rpida y uniformemente en la planta.
La interaccin del cido pantotnico con el N-P-K eleva su nivel de actividad en la
planta lo cual permite compensar en forma rpida los efectos crticos del dficit del N-P-K a
nivel fisiolgico y metablico en la planta.

DOSIS Y FORMAS DE APLICACIN DE SINERBA N-P-K

APLICACIONES FOLIARES
FrutaIes tropicaIes (mango, ctricos, aguacate, guayaba, papaya).
* nicio del crecimiento de los brotes: 2.0 kg/ha
* nicio del desarrollo de los frutos: 3.00 kg/ha

FrutaIes, fIores, hortaIizas, cucurbitceas, papa y esprrago.
* Fase juvenil, 15 das despus del transplante: 1.50 kg/ha
* nicio del botn, paricin en papa y esprrago: 2.00 kg/ha
* nicio del desarrollo de la fruta, tubrculo y turin 2.50 kg/ha
* Crecimiento del fruto, tubrculo y turin: 3.00 kg/ha

Banano, pia y agave.
* 15 das despus del transplante: 1.50 kg/ha
* nicio del racimo, meristemo de fruto en pia y agave: 2.50 kg/ha
* Formacin de la fruta: 3.00 kg/ha
* Desarrollo de la fruta: 4.00 kg/ha

* nicio del segundo nudo: 1.50 kg/ha
* Floracin: 2.00 kg/ha
* Grano lechoso: 2.50 kg/ha

137

FrijoI, garbanzo, cacahuate, soya y aIgodn.
* Fase juvenil: 1.00 kg/ha
* nicio del botn 1.50 kg/ha
* Formacin de vaina o cuadros: 2.00 kg/ha
* Crecimiento de vainas o bellotas: 2.50 kg/ha

Tabaco y hortaIizas de hojas.
* nicio de la formacin del tercer par de hojas verdaderas: 2.00 kg/ha.
* Dos semanas despus: 2.00 - 2.50 kg/ha.

CeboIIa y ajo.
* nicio de la formacin de las 3 primeras hojas verdaderas: 2.00 kg/ha
* Dos semanas despus: 3.00 - 3.50 kg/ha.

Invernadero (pIantas para traspIante).
* nicio de la formacin del segundo par de hojas verdaderas: 0.50 kg/100 litros.
* nicio de la formacin del cuarto par de hojas verdaderas: 0.75 kg/100 litros.

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6.5. Uso de SeaIizadores deI Estrs Oxidativo

En este subcaptulo se incluye la traduccin de la revisin de literatura de Dirk nz y
Marc Van Montagu (1995) sobre estrs oxidativo en plantas. Asimismo, dada su importancia
como sealizadores se incluye una parte especial dedicada al papel del cido saliclico y del
H
2
O
2
en las respuestas de estrs.
Aunque el calcio realiza un papel considerable como mensajero secundario no solo
durante los eventos de estrs sino durante los de desarrollo y crecimiento, solo se incluy un
pequeo subcaptulo especial para este elemento (como parte del Captulo 5). Esta eleccin es
meramente arbitraria y refleja ms bien la orientacin de intereses del editor y autores de este
escrito. A cambio de ello se incluy un listado de referencias a ciertos trabajos sobre el calcio
que se consideran importantes desde el punto de vista didctico y que pueden ser revisados
por los alumnos para su estudio y/o imparticin de seminarios. Un tratamiento anlogo fue
aplicado para lo relativo a la va de los feniIpropanoides, material que se incluye en este
Subcaptulo 6.5.

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6.5.1. Literatura Referente aI Uso de SeaIizadores deI Estrs Oxidativo

seminarios.
1. Klessig, D.F., J. Durner, R. Noad, D.A. Navarre, D. Wendehenne, D. Kumar, J.M.
Zhou, J. Shah, S. Zhang, P. Kachroo, Y. Trifa, D. Pontier, E. Lam, H. Silva. 2000. Nitric oxide
and salicylic acid signaling in plant defense. P.N.A.S. 97:8849-8855.
2. McDowell, J.M. and J.L. Dangl. 2000. Signal transduction in the plant immune
response. Trends in Biochem. Sci. 25:79-82.

138

3. Murphy, A.M., S. Chivasa, D.P. Singh, J.P. Carr. 1999. Salicylic acid-induced
resistance to viruses and other pathogens: a parting of the ways? Trends Plant Sci. 4:155-160.
4. Durner, J. and D.F. Klessig. 1999. Nitric oxide as a signal in plants. Curr. Op. Plant
Biol. 2:369-374.

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6.5.2. EL ACIDO SALICILICO ES UN AGENTE SEALIZADOR Y PROMOTOR DE
RESISTENCIA BIOTICA Y ABITICA EN LAS PLANTAS


RESUMEN
Este ensayo pretende ilustrar el estado actual de la investigacin bsica y aplicada respecto a
las funciones del cido saliclico (AS) en las plantas as como las posibles aplicaciones
prcticas del AS en la actividad agrcola. El AS es un compuesto encontrado en todos los
tejidos de las plantas. Su concentracin se eleva cuando las clulas, rganos o plantas
completas son sometidas a la accin de algun factor estresante sea este bitico o abitico. En
esas situaciones el cido saliclico participa en forma importante en la cascada de sealizacin
que da lugar a las respuestas de adaptacin en ambientes extremos, a la expresin de los
sistemas de control del dao oxidativo as como a la induccin de la resistencia sistmica
adquirida en el caso de patognesis. Actualmente se cuenta con anlogos funcionales del AS
que se utilizan con xito a nivel comercial en el control y prevencin de ciertos patgenos. Por
otra parte, aunque el AS imparte cierta resistencia al estrs causado por temperaturas
extremas, por presencia de metales pesados y por herbicidas sus aplicaciones en el alivio del
estrs ambiental han sido poco estudiadas. Los resultados experimentales indican la potencial
utilidad del mencionado compuesto, sus derivados y anlogos en el manejo agronmico de
cultivos. Se requiere, sin embargo, realizar gran cantidad de estudios para verificar la
factibilidad de su aplicacin en las condiciones ecolgicas y en los cultivos y variedades de
Mxico.
PALABRAS CLAVE: Estrs, nduccin de resistencia, Resistencia Sistmica Adquirida,
Saliclico.

ABSTRACT
This review looks to illustrate the current state of basic and applied research concerning the
functions of salycilic acid (SA) in plants, as well as the possible practical applications of SA in
the agricultural activity. SA is finding in all the organs of plants and its concentration rises when
the cells, organs or complete plants are subjected to biotic or abiotic stresses. n those situations
the SA participates in signaling cascade that gives rise to the adaptation responses in extreme
conditions, in the induction of biochemical antioxidant systems, as well as in the elicitation of the
systemic acquired resistance in the case of pathogenesis. SA and their functional analogues are
used with success at the to commercial level in the control and prevention of certain pathogenic
organisms. On the other hand, although SA imparts certain resistance to the damage caused by
extreme temperatures, heavy metals and some herbicides, their applications in the alleviation of
environmental stress have been little studied. The experimental results indicate the potential
utility of SA, derived compounds and analogues in the agronomic handling of agronomic and
horticultural crops. t is required, however, carry out great amount of studies in order to verify the
feasibility of application considering the ecological conditions and the vegetal apecies and
varieties from Mexico.
KEYWORDS. Stress, Resistance induction, Systemic acquired resistance, Salicylic.

139

INTRODUCCION
El cido saliclico (AS) es muy conocido gracias al extenso uso clnico de la aspirina o
cido acetilsaliclico. El nombre de cido saliclico proviene de Salix, el rbol cuyas hojas y
corteza tradicionalmente se utilizaban como cura para el dolor y fiebre, y de donde Johann
Buchner en 1828 aisl la salicina. En 1874 se inici la produccin comercial de AS en Alemania,
mientras que el nombre comercial de aspirina, aplicado al cido acetilsaliclico fue introducido
en 1898 por la Bayer Company (Raskin, 1992).
El AS pertenece a un grupo muy diverso de sustancias conocidas como fenlicos. En las
plantas los compuestos fenlicos, relacionados con el llamado metabolismo secundario, estn
involucrados en gran cantidad de actividades de regulacin en las plantas. En particular
diferentes estudios muestran la importancia de AS en los procesos fisiolgicos y de adaptacin
de las plantas.
El AS se ha encontrado en todos los tejidos de las especies que han sido analizadas.
Algunas especies de importancia econmica como la soya, arroz y cebada contienen hasta 1g
g
-1
de peso fresco.
Partiendo de la observacin inicial de que la aspirina aumenta la vida en florero de las
flores cortadas, probablemente por un efecto combinado de inhibicin en la biosntesis de
etileno y celulasa en los tejidos (Ferrarese et al., 1996) y de acidificacin del medio, se sabe
que el AS presenta propiedades de retraso de la senescencia (Bourbouloux et al., 1998),
inductor de floracin y tuberizacin as como de compuesto termognico y aleloptico, entre
otras (Raskin, 1992).
El AS aplicado de forma exgena en concentracin de 10
-2
a 10
-8
M aument la biomasa
de plantas de soya (Gutirrez-Coronado et al., 1998), el rendimiento de trigo (Lpez Tejeda et
al., 1998) al igual que el rendimiento y la calidad de diversas hortalizas segn se desprende de
los resultados de diferentes trabajos experimentales del grupo de Gutirrez Coronado adscrito
al nstituto Tecnolgico de Sonora.
Adems de los anteriores resultados acerca de cmo el AS interviene modificando
diferentes actividades fisiolgicas y del desarrollo, existe otra vertiente de trabajo experimental
acerca del papel del AS en las respuestas celulares relacionadas con el dao oxidativo,
respuesta bioqumica que parece ser un factor comn en las plantas sometidas a diversos tipos
de estrs.
El objetivo del presente trabajo es contar con una revisin actualizada acerca del papel
del AS como sealizador y regulador de las respuestas de las plantas a los patgenos y al
estrs abitico.

BIOSINTESIS Y DEGRADACION DEL ACIDO SALICILICO
En las plantas superiores el AS parece derivar de la va del shikimato-fenilpropanoides.
Se han propuesto dos caminos de sntesis del AS a partir de la fenilalanina, la diferencia entre
uno y otro se encuentra en el paso de hidroxilacin del anillo aromtico (Fig. 1). En una
reaccin mediada por la enzima fenilalanina-amonio-liasa (PAL) la fenilalanina es convertida en
cido cinmico, este ltimo es transformado en cido benzico (AB) o en cido orto-cumrico
los cuales se supone son los precursores del AS (Raskin, 1992).
El AS se encuentra en los tejidos de las plantas en forma libre o en forma conjugada. A
excepcin de unas pocas plantas como el arroz y la papa generalmente no se encuentra gran
cantidad de AS endgeno en forma libre. Las formas conjugadas son glicsidos, steres,
amidas y cidos dihidroxibenzicos. Se supone que cuando se requiere de AS una parte de ello
proviene de las reservas de formas conjugadas (Hennig et al., 1993) mientras que otra parte
proviene de la actividad de PAL (Raskin, 1992).
En cuanto a la distincin entre la aplicacin de AS o de cido acetilsaliclico en las
plantas no se ha detectado diferencia importante entre uno y otro. Se supone que al

140

acetilsaliclico es rpidamente convertido a AS en los tejidos tanto de plantas como de
animales.

Figura 1. Va propuesta de sntesis del cido saliclico en plantas (modificado de Raskin,
1992).

ACIDO SALICILICO Y DAO OXIDATIVO
El dao o estrs oxidativo se presenta cuando la produccin de especies activas de
oxgeno (EAO) rebasa la capacidad de los sistemas antioxidantes y de captura de radicales
libres de la clula. Normalmente el nivel de EAO es alto cuando la planta se encuentra en
condicin de estrs bitico o abitico. Aunque la presencia de EAO causa dao por oxidacin
de DNA, lpidos y protenas, las plantas tambin hacen uso de las EAO en la disipacin
energtica y como sealizadores desencadenantes de respuestas de adaptacin y defensa
(Draper, 1997). A su vez estas ltimas se asocian con cambios morfolgicos y fisiolgicos de la
planta (nz y Van Montagu, 1995). Es probable que el AS tenga algn papel regulador sobre el
balance de oxidacin/reduccin de las clulas vegetales, y ello tal vez explique la capacidad del
AS de inducir respuestas tan variadas: fisiolgicas, morfognicas y adaptativas en las plantas.
Lo anterior se sigue a partir del comprobado efecto del AS sobre la actividad de catalasa y otras
enzimas que controlan el nivel de las EAO (Raskin, 1992) as como sobre la oxidasa alternativa
mitocondrial (Murphy et al., 1999).
El AS comenz a sobresalir como molcula sealizadora en plantas cuando se
descubri su papel como inductor de la termognesis en plantas de la familia Araceae (Raskin,
1987). Poco despus se demostr su importancia en las reacciones de defensa contra los
patgenos (Malamy et al., 1990; Mtraux et al., 1990). Asimismo el AS parece relacionarse con

141

la adaptacin de las plantas a los ambientes extremos, y esto pudiera convertir a este
compuesto y sus derivados en herramientas para el manejo agronmico del estrs.
El modelo inicial propuesto sobre el mecanismo de accin del AS indicaba que era un
inhibidor de la catalasa. Esta afirmacin surgi del hecho de que esta enzima es inhibida in vitro
por el AS (Raskin, 1992). Asimismo fue demostrado en Arabidopsis, tabaco, tomate y pepino,
que la protena receptora de AS es una catalasa con alta afinidad por el AS y que muestra
inhibicin en presencia de este ltimo compuesto (Chen et al., 1993; Snchez-Casas y Klessig,
1994).
Las catalasas pertenecen a un grupo de enzimas involucradas en la regulacin de los
niveles celulares de las especies activas de oxgeno. Se encuentran en todos los organismos
aerobios convirtiendo el H
2
O
2
en H
2
O y O
2
, protegiendo as a las clulas de los efectos dainos
del H
2
O
2
. Si bien los niveles altos de este compuesto son txicos, el H
2
O
2
en baja concentracin
parece jugar un papel importante en la transduccin de seales ambientales en plantas y
animales (Prasad et al., 1994), esto es, el H
2
O
2
en niveles no txicos parece relacionarse con la
induccin de las respuestas de adaptacin el estrs.
Ya que la produccin de H
2
O
2
es un proceso continuo en las plantas, la inhibicin de la
actividad de catalasa, una de las principales rutas de degradacin del H
2
O
2
, pudiera resultar en
la acumulacin de este compuesto. En relacin a ello Chen et al. (1993) encontraron que el
tratamiento de hojas de tabaco con AS dio lugar a niveles elevados de H
2
O
2
in vivo. Por su
parte Dat et al (1998) observaron el mismo incremento endgeno de H
2
O
2
al aplicar el AS en las
hojas de Sinapsis alba.
Sin embargo, Ruffer et al. (1995) encontraron que ms que unirse de manera especfica
a las catalasas, el AS se une a las enzimas que contienen hierro como las catalasas,
aconitasas, lipoxidasas y peroxidasas. Asimismo otros resultados experimentales indican que el
AS no siempre inhibe la actividad catalasa aunque se observe incremento en el nivel de H
2
O
2

(Raskin, 1992). Probables explicaciones a esta discordancia son que el AS ejerce efectos ms
amplios que la mera inhibicin de esta enzima o bien que las respuestas sean dependientes de
la especie vegetal o de la edad de los tejidos u rganos utilizados en los estudios. Por otra parte
algunos investigadores han propuesto un papel directo para el AS en potenciar la produccin de
H
2
O
2
por medio de la activacin de una NAD(P)H oxidasa de la membrana plasmtica (Kauss y
Jeblick, 1995, 1996; Willekens et al., 1995; Mur et al., 1996; Shirasu et al., 1997). Esto pudiera
ser parte de la explicacin de los resultados dispares entre presencia de AS y actividad de
catalasa.
Como se mencion, otra posibilidad respecto al AS es que acte cambiando el balance
redox celular por medio de la induccin del H
2
O
2
o de otras EAO, as como por medio de la
modificacin en la sntesis y actividad de enzimas y compuestos antioxidantes.
Al respecto, Willekens et al. (1997) estudiaron el papel de la catalasa y el H
2
O
2
en las
plantas bajo estrs. Para ello utilizaron plantas transgnicas de tabaco con un 10% de actividad
de catalasa en relacin con las plantas silvestres. Las plantas deficientes en catalasa no
mostraron desrdenes visibles al crecer en condiciones de baja irradiancia, sin embargo, bajo
alta irradiancia las hojas desarrollaron lesiones necrticas. No se detect acumulacin de H
2
O
2

durante el desarrollo de la necrosis, tal vez como resultado de una compensacin que elev los
niveles de ascorbato peroxidasa y glutatin peroxidasa. La necrosis foliar mostr correlacin
positiva con el contenido de glutatin oxidado y correlacin negativa con el nivel de ascorbato
foliar, indicando que la catalasa es crtica para mantener el balance redox durante el estrs
oxidativo. Asimismo el dao no se present en un medio enriquecido con CO
2
lo que indica una
aparente dependencia de la actividad fotorespiratoria. Las plantas deficientes en catalasa
revelaron mayor susceptibilidad al paraquat, salinidad y ozono pero no a las bajas
temperaturas.
Otro resultado que indica el probable papel del AS en la modificacin del balance redox
celular fue el reportado por Chen et al. (1996). Ellos encontraron que el gene GST6 de

142

Arabidopsis, que expresa una glutatin-S-transferasa, es inducido por la aplicacin de auxinas,
AS H
2
O
2
. Las glutatin-S-transferasas son una familia de enzimas involucradas en la
destoxificacin de xenobiticos y en la proteccin contra el dao oxidativo.
En cultivos celulares de soya la aplicacin de AS y un inductor sinttico, el BTH
[benzo(1,2,3)thiadiazole-7-carbothioic acid S-methyl ester], dio lugar a un aumento de 2 a 8
veces en la cantidad de compuestos y enzimas antioxidantes. Asimismo la incubacin con AS y
BTH permiti que los cultivos celulares fueran ms resistentes al herbicida oxyfluorfen, el cual
se sabe acta como agente peroxidante de los lpidos de membranas (Knrzera et al., 1999).
La aplicacin foliar de AS en concentraciones de 10 a 100 M aument la tolerancia al
choque trmico (55 C por 1.5 h) en plntulas de Sinapsis alba. Esta respuesta fue anloga a la
obtenida con un tratamiento de aclimatacin a 45 C previa al choque trmico. Ambos
tratamientos indujeron un aumento transitorio en la concentracin endgena de H
2
O
2
, seguida
de una cada en la concentracin del mismo debajo del testigo, as como disminucin en la
actividad de catalasa (Dat et al., 1998). Lopez-Delgado et al. (1998) obtuvieron igualmente
termotolerancia en microplantas de papa desarrolladas en medio de cultivo con cido
acetilsaliclico en concentracin de 10
-6
a 10
-5
M. Al parecer parte del efecto protector del AS se
relaciona con su capacidad para inducir la expresin de las protenas de choque trmico en las
celulas vegetales, hecho demostrado en cultivos celulares de tomate por Cronj y Bornman
(1999). Por otro lado, se consigui un aumento significativo en la tolerancia a la carencia de
agua en plntulas de col y tomate al aplicarles una aspersin de cido benzico 10
-4
M.
Asimismo, la aplicacin de AS como pretratamiento de la semilla (10
-4
M por 6 horas) aument
el xito de germinacin de las semillas de meln en soluciones de NaCl (Benavides, datos no
publicados).
El AS se ha aplicado en diferentes cultivos para aumentar el rendimiento y la calidad. De
acuerdo con la informacin planteada el AS y sus derivados pueden tambin pueden aplicarse
como herramientas para la promocin y aumento de los mecanismos naturales de resistencia
de las plantas, cuando estos involucren la participacin de EAO. En este sentido se requiere
realizar gran cantidad de investigacin en diferentes especies, para estudiar en que forma las
aplicaciones exgenas de AS y compuestos anlogos como el metil-salicilato, el acido
benzico, el BTH, etc. modifican los mecanismos de adaptacin al estrs abitico. Si fuese
posible llegar a utilizar estos compuestos como potenciadores de los mecanismos naturales de
adaptacin, su bajo costo y el hecho de constituir productos naturales los convertira en
opciones atractivas para los productores agrcolas.

ACIDO SALICILICO Y RESISTENCIA A LOS PATOGENOS
La habilidad de una planta para responder a una infeccin es determinada por
caracteres genticos tanto del hospedero como del patgeno. Algunos mecanismos de
resistencia son especficos para ciertos cultivares y cepas de patgenos: los genes de
resistencia de la planta permiten el reconocimiento de molculas especficas del patgeno que
resultan de la expresin de los llamados genes de avirulencia. Estos desencadenan una
cascada de seales que termina en una respuesta hipersensible, es decir, en la muerte
estrictamente localizada de las clulas involucradas con el patgeno lo cual evita su crecimiento
y diseminacin. La muerte celular localizada genera los conocidos patrones de formacin de
lesiones o necrosis. Dichas interacciones gene-gene resultan en respuestas muy eficientes,
pero tambin muy especficas, de resistencia a la patognesis. Otro nivel de respuesta inducible
del hospedero, llamada resistencia sistmica adquirida (RSA), se expresa en los diferentes
rganos de la planta despus de presentarse una necrosis localizada originada por organismos
patgenos necrosantes como el virus del mosaico del tabaco (TMV) y Colletotrichum as como
algunos organismos no patgenos. La RSA depende de un sealizador o sealizadores an no
identificados que se mueven de forma sistmica entre los diferentes rganos de la planta. La
aplicacin exgena de AS da lugar una respuesta de RSA por lo cual se dice que el AS

143

funciona como activador o inductor de este proceso. De hecho en el tabaco la aplicacin de AS
de partculas de TMV da lugar a la induccin de prcticamente las mismas protenas de
defensa (PR) como PR-1, quitinasa y -1,3-gluconasa (Kang et al., 1998).
La RSA provee un tipo de respuesta de amplio espectro a largo plazo que recuerda a las
respuestas inmunes de los animales. Un nuevo enfoque en el control y prevencin de
enfermedades es el uso de compuestos activadores de la RSA, tales como el AS, sus derivados
y sus anlogos funcionales como el BTH, el 2,6-dicloroisonicotnico, el 3-allyloxy-1,2-
benzisotiazol-1,1-dioxido comercializado como probenazol, y el acibenzolar-S-metil
comercializado como Bion. Estos activadores o inductores no tienen un efecto directo sobre el
patgeno, protegen a la planta desencadenando las cascadas de seales que activan la RSA,
actuando as de forma diferente a los agroqumicos convencionales (Gorlach et al., 1996;
Stichter et al., 1997; Sakamoto et al., 1999; Gullino et al., 2000). Se sabe asimismo que dichos
compuestos activadores de la RSA pueden impartir cierta proteccin contra el estrs oxidativo
causado por herbicidas o metales como el cobre (Strobel y Kuc, 1995). En cuanto a los
mencionados anlogos funcionales del AS falta explorar el efecto de dichos compuestos sobre
las respuestas de las plantas sometidas a estrs abitico.
El AS es producido en las hojas de tabaco (Malamy et al., 1990) y pepino (Mtraux et al.,
1990) despus de verse infectadas y previamente a la expresin de la resistencia sistmica. La
produccin de AS es bifsica, es decir, ocurre en forma de un incremento inicial transitorio
seguido de un incremento sostenido. Se supone que tanto el pico inicial como la produccin
sostenida juegan papeles de sealizacin en los eventos de induccin de resistencia (Draper,
1997; Rao et al., 1997). En hojas infectadas de tabaco el AS producido de manera endgena
puede alcanzar una concentracin de 1x10
-4
M (Durner y Klessig, 1996).
En el relativamente bien caracterizado sistema tabaco-TMV, la evidencia indica que el
AS acta como seal para desencadenar las respuestas locales y sistmicas de defensa
(Gaffney et al., 1993). Sin embargo el AS no parece ser la seal primaria, transmisible entre
diferentes tejidos a largas distancias, que desencadena la respuesta de resistencia, ms bien
parece actuar como seal local a un nivel de mensajero secundario (Narusaka et al., 1999;
Martinez et al., 2000). Al respecto, en el pepino los experimentos de Smith-Becker et al. (1998)
indicaron que la inoculacin de los tejidos foliares con Pseudomonas syringae pv. syringae da
lugar a la transmisin de una seal endgena mvil, de identidad desconocida, entre 3 y 6
horas despus de la exposicin. Dicha seal resulta, entre 12 y 15 horas despus de la
inoculacin, en la induccin de actividad de PAL y poco despus en la acumulacin en el
floema de AS y cido 4-hidroxibenzico.
La importancia del AS en el fenmeno de la RSA se aprecia en los resultados de Lawton
et al. (1995), quienes obtuvieron plantas transgnicas que expresaban de forma constitutiva el
gene bacteriano nahG, que codifica la enzima salicilato hidroxilasa, la cual impide la
acumulacin de AS. Estas plantas nahG fueron incapaces de iniciar la respuesta de RSA al ser
sometidas a un estmulo bitico o al realizar una aplicacin exgena de AS. Del mismo modo
Chivasa y Carr (1998) observaron que al transformar con nahG a un cultivar de tabaco
resistente al TMV estas plantas eran incapaces de restringir la propagacin de las necrosis,
resultando en necrosis generalizada en vez de dao necrtico localizado en los sitios de
infeccin. Curiosamente, la capacidad de mantener localizado el dao por el TMV fue
restaurada al tratar las plantas con KCN y dicha restauracin fue abolida al aplicar cido
salicilhidroxmico (SHAM), un inhibidor de la oxidasa alternativa (AOX) mitocondrial. Estos
resultados apuntan hacia un papel de la AOX ms amplio que la termognesis y la adaptacin
al estrs de baja temperatura (Murphy et al., 1999). Datos anlogos fueron reportados por
Naylor et al. (1998) quienes encontraron que en la planta de tabaco el AS indujo resistencia a
los virus TMV, mosaico del pepino y virus X de la papa, inhibiendo la replicacin y el transporte
a larga distancia de los virus, siendo eliminado el efecto del AS por la aplicacin de SHAM. Es

144

probable que el AS regule la expresin y/o la actividad de la AOX y que dicha enzima acte, en
una forma an no entendida, sobre las actividades de los virus.
Al igual que con el estrs inducido por factores abiticos, una de las respuestas
primarias de las plantas a los patgenos microbianos es la produccin de EAO tales como el
anin superxido (O
2
.-
) y el perxido de hidrgeno (H
2
O
2
) (Levine et al., 1994). Este
acumulacin inicial de EAO genera un choque oxidativo (oxidative burst) que viene siendo el
preludio de las respuestas de defensa celular contra los patgenos. El choque oxidativo se
presenta a los pocos minutos de iniciada la infeccin, requiere del reconocimiento del patgeno
e involucra una serie de eventos de transduccin de seales que, tpicamente, incluyen a las
fosfolipasas, protenas de unin con GTP, flujos de Ca
+2
y otros iones, as como quinasas y
fosfatasas (Yang et al., 1997).
Los estudios de varias combinaciones planta-patgeno han revelado una fuerte
correlacin entre el perfil de formacin de EAO en cultivos celulares y el resultado final de la
interaccin (resistencia o susceptibilidad) en la planta completa. Las interacciones planta-
patgeno que inducen una respuesta hipersensible dan lugar a una produccin bifsica y
sostenida de EAO, mientras que las interacciones que dan lugar a enfermedad, es decir, a la
diseminacin del patgeno, provocan un choque oxidativo monofsico (Draper, 1997). Estas
observaciones apuntan hacia que la formacin sostenida de EAO es crtica para establecer la
resistencia a las enfermedades durante la respuesta hipersensible. Ello lleva a pensar en la
posibilidad de utilizar las EAO como herramienta de trabajo agronmico. Al respecto se ha
observado que la exposicin al ozono y radiacin UV, factores relacionados con el incremento
celular de EAO, dan lugar a un fenmeno conocido como resistencia cruzada, en donde la
planta muestra acumulacin de AS y resistencia a diferentes patgenos sin antes verse
expuesta a los mismos (Sharma et al., 1996; Bowler y Fluhr, 2000).
No queda an muy clara la relacin causal, si es que esta existe, entre el H
2
O
2
y el AS.
Es probable que, ms que ocurrir precedencia de un compuesto sobre otro, lo que se tiene
sean dos vas independientes de sealizacin con estrecho traslape. La aplicacin exgena o
produccin endgena de H
2
O
2
induce la sntesis de AS as como las posteriores respuestas de
resistencia; sin embargo la aplicacin de AS da lugar tambin la sntesis de H
2
O
2
, el posterior
choque oxidativo y a la induccin de la resistencia (Van Camp et al., 1998).
En el estudio de Martinez et al. (2000) sobre la respuesta hipersensible del algodonero
frente a Xanthomonas campestris se observ que la acumulacin de AS fue dependiente de la
presencia de H
2
O
2
, y que el AS fue el controlador local de la actividad de generacin de O
2
.-
.
Este anin superxido es una EAO que causa estrs oxidativo y puede por ello inducir la
respuesta hipersensible. Segn los resultados de Rao et al. (1997) la aplicacin prolongada de
AS en Arabidopsis es capaz de inducir mayor dao oxidativo que la aplicacin de H
2
O
2
, a pesar
de que en este ltimo caso los niveles endgenos de H
2
O
2
sean hasta dos veces mayores que
los observados con AS. Sin embargo, segn los autores, la accin del AS requiri de la
presencia de H
2
O
2
. La dependencia de la sntesis de AS sobre la presencia del H
2
O
2
fue
tambin observada por Chamnongpol et al. (1998) quienes utilizaron como modelo de estudio
plantas de tabaco transgnicas deficientes en catalasa. Al exponer estas plantas a radiacin de
alta fluencia se gener gran cantidad de H
2
O
2
endgeno el cual indujo dao en los tejidos,
sntesis de AS y etileno as como sntesis de protenas PR tal y como se observa en la
respuesta hipersensible. La sntesis de protenas PR fue observada tambin en las hojas no
sometidas a la radiacin y que no presentaron dao en los tejidos, lo cual indic la accin de un
mecanismo de induccin sistmico. Curiosamente la exposicin por corto tiempo al H
2
O
2
caus
una respuesta anloga a la observada en las hojas no sometidas a la radiacin de alta fluencia,
no observndose dao en los tejidos pero si activacin de los mecanismos de defensa. Estos
resultados indican la probable accin de una seal mvil que induce cambios en el ambiente
redox o en la concentracin de EAO en los tejidos alejados del sitio de induccin primaria, pero
de nuevo dejan sin clarificar la relacin entre el AS y el H
2
O
2
.

145

La resistencia a los patgenos, mediada por diferentes protenas PR, parece ser
activada a travs de distintas vas, unas dependientes de AS, otras de cido jasmnico (JA),
xido ntrico (NO) o etileno (Pieterse et al., 1998; Terras et al., 1998; Thomma et al., 1998). En
el caso de aplicacin exgena de compuestos activadores se sabe que cada compuesto
qumico induce la expresin de diferentes protenas PR. Esto fue confirmado en Vitis vinifera en
donde la aplicacin foliar exgena de AS y un activador preparado a partir de la pared celular
de levaduras indujeron la expresin de dos tipos de quitinasa, mientras que la aplicacin de
BTH y 2,6-dicloroisonicotnico indujeron la expresin de una sola clase de quitinasa (Busam et
al., 1997). Al respecto, se supone que ocurre una gran cantidad de intercomunicacin y cierto
grado de traslape entre las diferentes vas de sealizacin para conseguir que la planta
responda a los diferentes estmulos biticos o abiticos (Bowler y Fluhr, 2000; Paul et al., 2000).
Por otra parte, no todas las respuestas de expresin de genes relacionados con la
patognesis parecen depender de la accin de los compuestos inductores mencionados. Para
el caso del trigo Molina et al. (1999) encontraron que los genes PR1.1 y PR1.2, que se
expresan en presencia del hongo Erysiphe graminis, no fueron inducidos por el AS, el BTH o el
cido isonicotnico (NA). En Arabidopsis (Van Wees et al., 1997; Pieterse et al., 1998) y en
Raphanus sativus (Terras et al., 1998) tambin se encontr que la presencia de rizobacterias no
patgenas indujo resistencia sistmica por una va independiente de AS.
Adems de participar en las interacciones planta-patgeno el AS juega un papel en las
relaciones simbiticas entre plantas y microorganismos. Ello fue ilustrado en el trabajo de Blilou
et al. (1999). Estos autores demostraron que los mutantes P2 de Pisum sativum, incapaces de
formar simbiosis con rhizobia y hongos micorrzicos, muestran una produccin constante y en
alta cantidad de AS en los sitios de infeccin, en tanto que el tipo silvestre que forma simbiosis
normalmente no mostr esta caracterstica. gualmente fue demostrado que todas las cepas
(efectivas e inefectivas) de Rhizobium leguminosarum indujeron la sntesis de AS en los
mutantes P2, previniendo de esta forma el inicio de la infeccin, mientras que nicamente las
cepas inefectivas indujeron el AS en el tipo silvestre de P. sativum. Estos resultados parecen
indicar que la supresin de la sntesis del AS forma parte de la estrategia de la planta para
permitir el establecimiento de los simbiontes.

CONCLUSIONES
El panorama mostrado en esta revisin ilustra los grandes avances obtenidos en pocos
aos en relacin con el papel del AS en las actividades fisiolgicas y de adaptacin de las
plantas. Aunque visiblemente incompleto el cuerpo de conocimiento obtenido es valioso si se
piensa en la implementacin de nuevas tcnicas de manejo de cultivos. An sin mencionar el
importante adelanto en el estudio de los genes relacionados con la resistencia a los patgenos
o la resistencia al estrs, as como el parcial esclarecimiento del papel fisiolgico del AS, la
aplicacin prctica de los conocimientos sobre el papel de este compuesto y sus anlogos
funcionales en la induccin de respuestas adaptativas o respuestas de defensa promete ser
relevante. Falta sin embargo gran cantidad de investigacin utilizando mayor cantidad de
especies vegetales, ampliar el rango de patgenos estudiados e incrementar los estudios en
zonas tropicales y subtropicales ya que el grueso de la investigacin procede de zonas
templadas. Potencialmente puede desarrollarse una nueva tecnologa que tome en cuenta la
induccin o potenciacin de los mecanismos naturales de defensa de las plantas, utilizando
compuestos ambientalmente incuos, y ello requiere el esfuerzo combinado de investigadores,
industriales de los agroqumicos y productores agrcolas.

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149

Regresar

6.5.3. Oxidative Stress in PIants

Dirk Inz and Marc Van Montagu
Laboratorium voor Genetica, Universiteit Gent, K.L. Ledeganckstraat 35, B-9000 Gent,
BeIgium.
Current Opinion in BiotechnoIogy (1995) 6:153-158.

Traduccin de: AdaIberto Benavides, Departamento de HorticuItura, UAAAN
Introduccin
Cada ao el estrs ambiental causa prdidas considerables en la calidad y productividad
de los cultivos. Uno de los factores que causan dao durante las condiciones ambientales
adversas es la produccin en exceso de especies activas de oxgeno (EAO), tales como el
superxido (O
.2-
), perxido de hidrgeno (H
2
O
2
) y radicales hidroxilo (OH
.
). Se sabe que dicho
estrs de oxidacin ocurre en plantas expuestas a bajas y altas temperaturas, particularmente
en combinacin con alta irradiancia, sequa, radiacin UV, exposicin a contaminantes
atmosfricos (O
3
SO
2
) y herbicidas como el paraquat
1
.
El O
.2-
y el H
2
O
2
pueden inactivar varias molculas directamente, pero es la conversin a
OH
.
, catalizada por metales de transicin como el Fe y Cu (la reaccin Haber-Weiss) la que
conlleva la mayor toxicidad. Los radicales hidroxilo reaccionan instantneamente con protenas,
lpidos y DNA, causando rpidamente dao celular.
Varios procesos metablicos hacen uso de las EAO de forma beneficiosa. Un ejemplo es
durante la fotosntesis en donde funcionan como mecanismos de disipacin de energa. El O
.2-
y
el H
2
O
2
estn involucrados en la formacin de lignina en las paredes celulares y, por otra parte,
como respuesta a la infeccin por patgenos o por el tratamiento con un inductor (elicitor en
ingls) se observa un aumento significativo en EAO. Se cree que este choque oxidativo sea
responsable de la muerte celular hipersensible y del rpido entrecruzamiento de glicoprotenas
ricas en hidroxiprolina en la pared celular, respuestas asociadas a las respuestas de defensa
contra los patgenos. Las EAO tambin pueden servir como segundos mensajeros
responsables de la activacin de genes relacionados con la patognesis as como de los genes
involucrados en la biosntesis de fitoalexinas.
Las plantas han desarrollado mecanismos de proteccin enzimticos y no enzimticos
que atrapan e inactivan eficientemente las EAO. Los antioxidantes como el cido ascrbico
(vitamina C), el tripptido glutatin, los tocoferoles (vitamina E) y los carotenoides se encuentran
en las plantas en alta concentracin. Los radicales hidroxilo son demasiado reactivos como
para eliminarse enzimticamente pero su formacin se ve limitada por el atrapamiento y
eliminacin del O
.2-
y el H
2
O
2
. Las superxido dismutasas (SOD) son metaloenzimas que
eliminan los radicales O
.2-
de acuerdo a la siguiente reaccin:
2O
.2-
+ H
+
O
2
+ H
2
O
2

Es posible encontrar varias isoformas de esta metaloenzima SOD de acuerdo a su cofactor
metlico. En general las plantas contienen una MnSOD mitocondrial, asi como unas Cu/Zn SOD
citoslica y cloroplstica. Se sabe que en los cloroplastos de algunas especies se encuentra
adems una FeSOD
2
.
El H
2
O
2
es eliminado por catalasas y peroxidasas. Las catalasas son enzimas
peroxismicas que, en contraste con las peroxidasas, no requieren de un substrato reductor
para su actividad. Las ascorbato peroxidasas (APXs) se cree que son las m'as importantes
atrapadoras de H
2
O
2
que operan tanto en el citosol como en los cloroplastos. Estas enzimas
usan el cido ascrbico como substrato reductor y forman parte de un ciclo, conocido como el
ciclo del ascorbato-glutatin o Halliwell-Asada
1
(Figura 1). Otras enzimas involucradas en este
ciclo de oxidacin-reduccin son la monodehidroascorbato reductasa (MDAR),

150

dehidroascorbato reductasa (DHAR) y la glutatin reductasa (GR). Recientemente, varios
clones cDNA que codifican glutatin peroxidasas (GPXs) fueron aislados, sugiriendo que en las
plantas, como en los animales, estas protenas pueden jugar un papel muy importante en el
control del H
2
O
2
, o de los productos de la peroxidacin de lpidos.
En esta revisin se presenta un resumen del conocimiento actual sobre la regulacin de
los genes de protenas antioxidantes as como de las potenciales aplicaciones de estos
conocimientos para el manejo del estrs en plantas.

Superxido Dismutasas (SOD)
El anlisis detallado de la expresin en Nicotiana plumbaginifolia
3
, tomate
4
y maz
5
mostraron
que los genes Sod se regulan diferencialmente a travs del desarrollo y en respuesta a varias
condiciones de estrs. Por ejemplo, en N. plumbaginifolia la expresin del mRNA de la
Cu/ZnSOD citoslica (SodCc) es aumentada principalmente por el estrs de alta temperatura, la
congelacin o el tratamiento con paraquat en presencia de luz
3
. En el tomate la expresin de los
genes, tanto de la Cu/ZnSOD cloroplstica (SodCp) como de la Cu/ZnSOD citoslica (SodCc),
es inducida por paraquat en presencia de luz, mientras que la sequa solo induce la expresin
de la isoforma citoslica
4
. Utilizando sondas gene-especcificas se ha mostrado que los
miembros individuales de la familia gnica MnSOD del maz (SodA) se expresan
diferencialmente durante el desarrollo de la planta. En general, el patrn de acumulacin del
mRNA de la MnSOD parece reflejar la actividad mitocondrial durante el crecimiento de la
planta
6
. Los grandes incrementos en los niveles de transcriptos de SOD subsecuentes a los
tratamientos de estrs en general se asocian con incrementos muy moderados en la actividad
de SOD. Posiblemente el estrs da lugar a una mayor tasa de recambio de las protenas SOD,
necesitando por ello de la activacin de la expresin gnica para mantener los niveles de SOD.
Una de las hiptesis formuladas dice que las distintas condiciones de estrs generan
diferencias en la intensidad del estrs oxidativo en los varios compartimentos subcelulares,
requirindose la expresin de aquellos genes Sod que codifican las isoformas de SOD
necesarias para proteger un compartimento particular
3
. La naturaleza de las seales que dan
lugar a la expresin diferencial permanece en el rea especulativa. Los productos de la
peroxidacin de lpidos (organelo-especficos) son buenos candidatos, aunque no se dispone
de evidencia experimental para apoyar esta hiptesis. Por otro lado, parece ser que el Ca
+2
se
encuentra involucrado en la transduccin de las seales de estrs. El tratamiento de las
plntulas de tabaco con H
2
O
2
result en una reduccin de la actividad de las SOD, coincidiendo
con un incremento transitorio en la concentracin de Ca
+2
citoslico
4
. Desafortunadamente, es
poco claro cuales isoformas de SOD se encuentran bajo control del Ca
+2
asi como cuales otras
enzimas involucradas en el atrapamiento de las EAO se encuentran afectadas por otras
condiciones.
La expresin de la SODc de N. plumbaginifolia est bajo control redox
9,10
. Los
antioxidantes sulfhidrlicos, tales como el ditiotreitol (dithiothreitol), cistena o el glutatin
reducido, inducen la expresin de un promotor de la SodCc--glucoronidasa en protoplastos
aislados y en plantas completas, mientras que las formas oxidadas de glutatin y cistena no
tienen efectos. Los niveles de glutatin reducido aumentan aumentan frente a varias
condiciones de estrs oxidativo, tales como la exposicin al ozono, dixido de azufre, estrs
hdrico o alta temperatura
10
. De tal forma, el glutatin puede actuar directamente como un
antioxidante y simultneamente activar la transcripcin de un conjunto de genes relacionados
con el estrs, tales como los genes de la Cu/Zn SOD
8,9
as como los genes que codifican las
enzimas de la va de los feilpropanoides
11
(Wingate et al., 1988).

CataIasas y eI PapeI deI H
2
O
2
en Ia Transduccin de SeaIes
El extenso trabajo de Scandalios y colaboradores
1
revel la presencia de tres catalasas
reguladas diferencialmente en la planta de maz. Esta situacin parece presentarse tambin en

151

las dicotiledneas. La relacin funcional entre las catalasas de monocotiledneas y
dicotiledneas es hasta el momento no muy clara y, como consecuencia, la nomenclatura es
arbitraria. N. plumbaginifolia presenta tres genes de catalasa
12
. El producto del gene Cat1
parece jugar un papel en la eliminacin del H
2
O
2
fotorespiratorio, mientras que el patrn de
expresin de Cat3 sugiere que la protena codificada tiene cierto papel en la captura del H
2
O
2

generado por la -oxidacin de los cidos grasos en los glioxisomas. Por otro lado parece ser
que la protena de Cat2 tiene como papel especfico el proteger a la clula del H
2
O
2
producido
durante el estrs oxidativo. La exposicin de las plantas al ozono, dixido de azufre y radiacin
UV da lugar a una rpida disminucin en los niveles estacionarios de Cat1 as como a un
incremento concomitante en los niveles de transcriptos de Cat2
13
. Los niveles de transcriptos de
GPX son tambin rpidamente inducidos, mientras que los cambios en los niveles de
transcriptos de Sod y APX se presentan, bajo esta condicin, solo al inicio del dao visible.
Otras lneas de evidencia apoyan el papel central de la catalasa en la resistencia al
estrs. Las plntulas de maz expuestas a baja temperatura (4 C) no sobreviven a menos que
sean primero aclimatadas a temperaturas intermedias (14 C). Ocurre induccin de mRNA de
Cat3 durante la aclimatacin, sugiriendo que el fro genera estrs oxidativo en las plntulas. De
acuerdo con esto, los niveles de H
2
O
2
se elevaron durante la exposicin al fro en las plntulas
no aclimatadas as como durante la aclimatacin. Se demostr tambin que el tratamiento de
plntulas mantenidas a temperatura ambiente con H
2
O
2
o menadione , un compuesto generador
de O
.2-
, induce tolerancia al fro
14
. Estos resultados sugieren un papel dual para el H
2
O
2
.
Durante la aclimatacin, los niveles de H
2
O
2
pudieran funcionar como seal que induce enzimas
antioxidantes, tales como la catalasa, la cual subsecuentemente protege a la planta de la
produccin en exceso de H
2
O
2
durante la exposicin a bajas temperaturas.
El H
2
O
2
parece jugar un papel importante en la transduccin de seales durante las
interacciones planta-patgeno. La muerte celular hipersensible asociada con las interacciones
planta-patgeno se caracteriza por un rpido choque oxidativo. El H
2
O
2
producido durante el
choque oxidativo funciona como disparador local de la muerte celular programada de las clulas
afectadas, causando adems el rpido entrecruzamiento (cross-linking) de las protenas de la
pared celular, una conocida respuesta de defensa frente a los patgenos
15,16
. Por otro lado, el
H
2
O
2
parece actuar como molcula sealizadora induciendo la transcripcin de los genes de
defensa, tales como la glutatin S-transferasa y GPX en las clulas cercanas
16
.
La evidencia reciente sugiere que el H
2
O
2
puede funcionar como inductor de resistencia
sistmica adquirida (SAR). Por largo tiempo se ha sabido que el cido saliclico (AS) juega un
papel importante en el establecimiento local de la SAR. Es interesante considerar que la
protena receptora de AS (57 kDa) presente en las hojas del tabaco es una catalasa. El AS
inhibe la actividad catalasa in vitro y se piensa que esta propiedad pudiera dar lugar a un
incremento in vivo en los niveles de H
2
O
2
el cual, a su vez, pudiera actuar como segundo
mensajero en la induccin de las respuestas de defensa. Acorde con lo anterior, se demostr
que el H
2
O
2
y el inhibidor de la catalasa, el 3-amino-1,2,4-triazol, inducen la acumulacin de la
protena PR1 relacionada con la patognesis
17
.
Se desconoce el mecanismo de control de la expresin gnica por el H
2
O
2
. Este
compuesto se sabe es un segundo mensajero en las clulas de mamferos, funcionando como
activador de factores de transcripcin, tales como NFB y AP-1. Es posible que el H
2
O
2
acte
modulando un transductor redox-sensible. El factor AP-1 se une a su elemento cis del DNA
cuando los residuos de cistena en el dominio de unin del DNA se encuentran reducidos. Esta
reduccin es mediada por el factor redox nuclear Ref-1, cabe mencionar que un homlogo
vegetal de este factor fue recientemente descrito
18
.
El papel de las catalasas en la sealizacin del estrs, actuando como factor modulador
de H
2
O
2
, es un tanto sorprendente considerando su supuesta localizacin peroxismica.
Aunque las tres catalasas de N. plumbaginifolia presentan una secuencia de unin carboxi-
terminal peroxismica
19
, su localizacin real espera confirmacin. El patrn diferencial de la

152

expresin gnica de la catalasa sugiere funciones especficas, diferentes ubicaciones
subcelulares y, posiblemente, distintas esfecificidades de substrato. La caracterizacin
bioqumica y el anlisis de plantas transgnicas que expresan complejos antisentido o
sobreexpresin pueden proveer posteriores revelaciones en el papel de las isoformas
especficas de la catalasa.

CicIo Ascorbato-GIutatin
Se ha realizado un progreso extenso en la caracterizacin y clonacin de las enzimas
involucradas en el ciclo ascorbato-glutatin (Figura 1). Se han clonado DNAs complementarios
de APX citoslica de, entre otras especies, Arabidopsis thaliana
20
y el chcharo
21
. La expresin
gnica de APX es rpidamente inducida por varias condiciones de estrs, tales como la
aplicacin de paraquat, cido abscsico, etileno, sequa y alta temperatura, sugiriendo un papel
importante en la tolerancia al estrs
22
. En general, se ha encontrado una marcada discrepancia
entre el incremento en la abundancia de los transcriptos de APX, que cambia en forma
importante, contra el aumento en la cantidad y actividad de la protena APX, el cual es
relativamente pequeo. Parece ser que los altos niveles de transcriptos de APX observados en
respuesta a la sequa sufren alguna clase de restriccin que no permite su interaccin con los
polisomas
23
. Adems de la APX citoslica, las plantas tambin contienen una APX estromtica
(sAPX) y una APX asociada a la membrana de los tilacoides (tAPX)
24
, an en espera de ser
clonadas. La tAPX de la espinaca es una protena monomrica de 40 kDA, mientras que la
isoforma estromtica es de aproximadamente 30 kDA. La secuencia terminal de aminocidos
de la tAPX muestra poca similitud con la APX citoslica
25
.
Recientemente un clon de cDNA completo que codifica la protena MDAR fue aislado
del pepino
26
y el chcharo
27
.
La DHAR fue purificada de los cloroplastos de espinaca, encontrndose una
sorprendente similitud con los inhibidores de tripsina de tipo Kunitz
28
. Tanto la DHAR de
espinaca como el inhibidor de tripsina de la soya son capaces de reducir el dehidroascorbato
cuando se encuentran en forma reducida, pero adquieren actividad de inhibicin de tripsina en
estado oxidado.
La ltima enzima en el ciclo ascorbato-glutatin, la glutatin-reductasa (GR), ha sido
extensamente estudiada. El glutatin juega un papel importante en numerosos procesos
celulares, resultando siempre del glutatin a glutatin disulfato. Cada compartimento celular
recicla el glutatin gracias a la actividad de la glutatin reductasa. La GR del chcharo y el
tabaco ha sido clonada
1
y el cDNA que codifica el primer paso en la biosntesis del glutatin fue
recientemente descrito
29
.
En conclusin, se han identificado los genes para todas las enzimas del ciclo ascorbato-
glutatin. Esto aceler de manera considerable el estudio de la ocurrencia y funcin de esta va
de desintoxicacin del H
2
O
2
en las plantas.

PIantas Transgnicas con Sistemas Antioxidantes Mejorados
La tolerancia a una amplia variedad de factores ambientales restrictivos se correlaciona
con una mayor actividad de enzimas antioxidantes, as como con los niveles de metabolitos
antioxidantes
10
. Las plantas con dichas propiedades antioxidativas muestran tolerancia mltiple
a distintos tipos de estrs. La habilidad para producir plantas que expresan genes forneos
provee de la oportunidad de verificar el papel de las enzimas antioxidantes en la tolerancia al
estrs.
Tepperman y Dunsmuir
30
obtuvieron plantas transgnicas de tabaco con un incremento
de 30 a 50 veces en la actividad de la Cu/Zn SOD cloroplstica. Este aumento en la actividad
de la SOD no result, sin embargo, en mayor resistencia contra el paraquat
30
o el ozono
31
. En
contraste, la sobreproduccin de MnSOD en los cloroplastos del tabaco result en una
proteccin significativa, si bien no muy pronunciada, contra el paraquat
32
. Las mismas lneas

153

transgnicas mostraron aproximadamente cuatro veces menos dao por ozono que las plantas
control cuando fueron expuestas a niveles ambientales de ozono (0 ppb durante la noche hasta
120 ppb durante el da)
33
. Las lneas transgnicas de alfalfa con mayor actividad de MnSOD en
los cloroplastos presentaron una recuperacin ms rpida en el crecimiento despus de un
estrs de congelacin en comparacin con las plantas control
34
.
La sobreproduccin de las formas tanto citoslica como cloroplstica de la Cu/Zn SOD
en papa result en una mayor tolerancia al paraquat
35
. Adicionalmente, el tabaco transgnico
con sobreproduccin de Cu/Zn SOD cloroplstica present mayor resistencia al dao
fotooxidativo as como al estrs oxidativo mediado por paraquat en comparacin con las
plantas control
36
. Dichas plantas exhibieron un incremento de tres a cuatro veces en la actividad
de APX con un incremento correspondiente en los niveles de mRNA del gene Apx. Por otra
parte las actividades de la DHAR de la GR no cambiaron
37
.
No solamente los genes nativos de plantas, tambin los genes de origen bacteriano se
han utilizado para producir plantas con tolerancia al estrs oxidativo. La sobreexpresin del
gene de la MnSOD de E. coli en los cloroplastos de tabaco transgnico da lugar a un aumento
en la tolerancia al estrs oxidativo producido por la exposicin a bajas concentraciones de
metilviolgeno o estrs de baja temperatura
38
. Se ha logrado que el gene gor de E. coli, que
codifica la GR, se exprese en el citosol de clulas de tabaco
39,40
. Aunque las plantas
transgnicas mostraron una reduccin en el dao visible causado por paraquat
39
, no se observ
un efecto protector sobre el aparato fotosinttico
39,40
. Ms recientemente, en un estudio
independiente el producto gnico gor ha sido analizado a los cloroplastos de tabaco
transgnico
41
. Estas plantas transgnicas presentaron una actividad de GR foliar tres veces
mayor que el control. Asimismo las hojas de las mencionadas plantas mostraron aumento en la
tolerancia al paraquat y al dixido de azufre, pero no frente al ozono.

Perspectivas
La investigacin sobre estrs oxidativo ha progresado rpidamente en aos recientes.
Los genes que codifican enzimas de vas conocidas de antioxidantes han sido clonados y
caracterizados con cierto detalle. Se ha mostrado claro el papel de H
2
O
2
en la transduccin de
seales y en la muerte celular pudiendo potencialmente proveer pistas posteriores acerca de
cmo se perciben las condiciones ambientales adversas. Adicionalmente, evidencia
convincente sugiere que la manipulacin de las capacidades antioxidantes de las plantas es un
enfoque valioso para la obtencin de plantas tolerantes al estrs. A causa de que la SOD
dismuta el O
.2-
en H
2
O
2
, existe poca duda acerca de que la sobreproduccin de enzimas
atrapadoras de H
2
O
2
en conjunto con la SOD podr tener un efecto cooperativo protector contra
el dao por estrs oxidativo. La sobreproduccin simultnea de la Cu/Zn SOD y de la catalasa
en Drosophila extiende el tiempo de vida en 1/3 disminuyendo al mismo tiempo la cantidad de
dao oxidativo en las protenas
42
. Hasta el momento no est claro cual de las enzimas
atrapadoras de H
2
O
2
pudiera ser ms efectiva para ser utilizada conjuntamente con la SOD en
plantas. Su dependencia de la disponibilidad de sustratos reducidos para mantener la actividad
pudiera, sin embargo, demandar de mecanismos muy eficientes para la regeneracin de estos
sustratos. Las catalasas son una alternativa, pero la posible desventaja radica en la sensibilidad
a la luz y en el hecho de que la actividad de catalasa genera oxgeno, crendo entonces
condiciones ms favorables para la formacin de superxidos. Se requiere mayor cantidad de
trabajo para probar cual combinacin de SOD y enzimas atrapadoras de H
2
O
2
proveen la mejor
proteccin.
A largo plazo requerimos comprender como las plantas perciben el estrs oxidativo en
los varios compartimentos celulares y como esta seal de estrs se transduce para activar los
sistemas adecuados de defensa. Un enfoque promisorio es la caracterizacin de los mutantes
de Arabidopsis que exhiben sensibilidad aumentada o mayor tolerancia a las condiciones de
estrs, as como el anlisis molecular de los respectivos genes mutantes. Este enfoque es

154

particularmente atractivo ya que puede dar lugar a la caracterizacin de los puntos clave de
amificacin en la sealizacin del estrs que orquetan la regulacin global de las defensas
antioxidantes.
Ya que el estrs oxidativo se presenta en todos los organismos aerobios, pudiera
esperarse que los sistemas bsicos de defensa se hayan conservado durante la evolucin. Con
ello en consideracin la clonacin de cDNAs de plantas que modifiquen positivamente la
resistencia al estrs oxidativo de cepas silvestres o mutantes de levadura puede pemitir obtener
nuevos genes de defensa para ser utilizados en la ingeniera de cultivos tolerantes al estrs.

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2
O
2
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dismutase and catalase in Drosophila melanogaster. Science 263:1128-1130.

Figura 1. El ciclo ascorbato-glutatin. El perxido de hidrgeno es removido por la ascorbato
peroxidasa siendo regenerado el ascorbato por el ciclo ascorbato-glutatin. Dicho ciclo
involucra a diferentes enzimas que aparecen marcadas en los recuadros. El ascorbato es
oxidado a monodehidroascorbato. Si el monodehidroascorbato no se reduce rpidamente a
ascorbato por accin de la monodehidroascorbato reductasa, entonces se dismuta
espontneamente en ascorbato y dehidroascorbato. El dehisdroascorbato se recicla hacia
ascorbato utilizando el glutatin reducido que se regenera a travs de la accin de la glutatin
reductasa en una reaccin dependendiente de NADPH.

157

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7. EFECTOS DEL ESTRS SOBRE LA MORFOLOGA,
ANATOMA Y COMPOSICIN QUMICA DE LAS PLANTAS

La capacidad plstica de las plantas las capacita para responder frente a los retos de su
entorno modificando la forma de exploracin de los dos volmenes de espacio utilizados: el
suelo explorado por la raz y la atmsfera explorada por el dosel. Estas adaptaciones con son
sencillamente un redireccionamiento de los fotosintatos para favorecer el crecimiento en una u
otra direccin, involucran cambios complejos en los sistemas de captura de recursos como son
el aparato fotoqumico de los cloroplastos, el sistema de transporte xilema-floema, el volumen
de almacenamiento de las clulas parenquimticas as como modificaciones en los sistemas de
defensa y adaptacin bioqumica. Estos ltimos cambios se manifiestan como modificaciones
en los perfiles y concentraciones de compuestos del metabolismo secundario conocidos como
fitoqumicos, y son especialmente interesantes en el contexto del mejoramiento nutricional de
hortalizas as como en la manipulacin de la composicin y calidad de plantas medicinales.

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7.1. Adaptaciones MorfoIgicas y Anatmicas que Aumentan Ia
ToIerancia aI Estrs


Tal como fue explicado en el captulo referente al estrs inducido por dficit de
minerales, un sistema obvio de respuesta de las plantas frente al estrs consiste en modificar la
morfologa y anatoma, de tal forma que se incremente la habilidad para capturar o conservar
recursos o bien para aumentar la tolerancia frente a un factor particular como la prdida de
agua.

7.1.1. Cambios MorfoIgicos y FisioIgicos en Conferas como Respuesta aI Estrs por
Dficit Hdrico

Poco se conoce acerca de las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas necesarias para
las plntulas de pino que les permita sobrevivir y crecer en un sitio dado en Mxico. Mexal et al.
(1994) report que las plntulas usadas en reforestacin son, comnmente, propagadas en
bolsas de polietileno en los viveros. Este sistema produce plntulas de baja calidad porque el
riego es inadecuado y distribuido deficientemente, adems las plntulas a menudo tiene una
pobre proporcin entre la parte rea y las races. Otro factor que contribuye a un pobre
establecimiento del rodal es la inhabilidad para empatar las caractersticas de las plntulas con
el ambiente operacional en el sitio de plantacin. Pese a esto, la calidad de las plntulas se
puede mejorar al convertirse el sistema de polietileno por un sistema de contenedores de
poliestireno (Mexal et al. 1994). Adems, Mexal (1996) argumenta que los viveristas mexicanos
necesitan entender aspectos bsicos acerca de la biologa de las semillas as como de la
fisiologa de plntulas.
La morfologa y fisiologa de plntulas se puede alterar a travs del acondicionamiento

158

con estrs hdrico en un sistema de contenedores de poliestireno. En el estado de Washington,
por ejemplo, Tanaka and Timmis (1974) reportaron que plntulas de cino meses de edad de
Douglas-fir (Pseudotsuga menziesii (Mirb.) Franco) que fueron sujetas a un estrs hdrico de
potencial hdrico de antes del amanecer de -0.8 and -1.7 MPa incrementaron significantemente
su tolerancia al fro. En Oregon, Khan et al. (1996) reportaron que plntulas de cuatro a cinco
meses de edad de Pseudotsuga menziesii tratadas con un rgimen moderado de estrs hdrico
(de 17 a 53% de contenido volumtrico de agua) mostraron desarrollo ptimo de la yema
terminal, altura del tallo y dimetros a la base. En contraste, plntulas tratadas con demasiado
contenido de agua (65%) o con muy poca agua (7%) no presentaron sas caractersticas
ptimas.
Si se quiere ser exitoso en alterar la morfologa y la fisiologa de plntulas es necesario
evaluar la frecuencia con que se aplica el riego en un vivero. Pesando los contenedores de
poliestireno es la manera ms comn de monitorear el contenido de agua en un sistema de
contenedores (Landis et al. 1989). El agua es ms pesada que los otros elementos del
contenedor, por lo que el peso del contenedor disminuye rpidamente durante la
evapotranspiracin. De manera que a un peso predeterminado el sistema de riego se
reestablece (Landis et al. 1989). Esta tcnica se ha utilizado para determinar regmenes de
estrs hdrico en plntulas de Pseudotsuga menziesii (Tanaka and Timmis, 1974; Khan et al.
1996), pino rojo (Pinus resinosa Ait; Becker et al. 1987), y abeto del oeste (Tsuga heterophylla
(Raf.) Sag.; O'Reilly et al. 1989; Grossnickle et al. 1991).
Los viveristas pueden incorporar tambin este mtodo de pesadas para disear un
sistema de riego. Sin embargo, el comportamiento del estoma durante la dormancia no se
entiende bien en plntulas de P. arizonica, P. engelmannii, y P. durangensis. El estoma abre y
cierra para regular el ritmo de prdida de agua y el uso eficiente del agua (Woodward, 1998).
Este mecanismo tambin ayuda a incrementar la habilidad de sobrevivencia y competencia
durante el establecimiento de las plntulas. Pese a que las investigaciones fisiolgicas han
contribuido a mejorar la sobrevivencia y crecimiento de plntulas crecidas en contenedores en
los E. U. A. (Tinus and Owston,1984), el comportamiento diurno del estoma en plntulas de
pino de especies mexicanas sujetas a estrs hdrico no se conoce. El conocimiento de las
relaciones hdricas de stas especies durante la temporada de dormancia podra explicar la
distribucin ecolgica de las mismas, adems puede contribuir a mejorar las prcticas en el
vivero y el xito de las plantaciones.
El punto de regulacin estomatal difiere entre especies y con el grado de adaptacin a
un sitio en particular (Larcher, 1995). En un estudio de invernadero, la fijacin de dixido de
carbono fue mnimo en plntulas de P. engelmannii cuando el potencial hdrico de la planta
alcanz -2.0 MPa durante Febrero y Marzo (Barton and Teeri 1993). Durante los primeros 13
das de un tratamiento de sequa, las tasas de conductancia estomtica se redujeron de 0.033
to 0.011 mol m
-2
s
-1
en plntulas de Pinus greggii Engelm. cuando el potencial hdrico de la
planta antes del amanecer estaba entre -1.0 y -2.0 MPa (Vargas-Hernndez and Muoz-
Orozco, 1991). El cierre de estomas en plntulas de Pinus ponderosa var. ponderosa ha sido
medido a potenciales hdricos de -1.65 a -1.73 MPa de Diciembre a Febrero (Lopushinsky,
1969). La tasa fotosinttica en esta variedad tambin se reduce cuando el potencial hdrico
alcanza valores de -1.5 MPa durante la temporada de crecimiento (Cleary, 1971).

7.1.2. Literatura Referente a Adaptaciones MorfoIgicas y Anatmicas
seminarios.

1. Ballar, C.L., A.L. Scopel, R.A. Snchez. 1995. Plant photomorphogenesis in canopies, crop
growth, and yield. HortScience 30:1172-1181.

159

2. Cobb, B.G., M.C. Drew, D.L. Andrews, J. Johnson, D.M. MacAlpine, T.L. Danielson, M.A.
Turnbough. 1995. How maize seeds and seedlings cope with oxygen deficit. HortScience
30:1160-1164.
3. Leskovar, D.. and P.J. Stoffella. 1995. Vegetable seedling root systems: morphology,
development, and importance. HortScience 30:1153-1159.
4. Lynch, J.P. and S.E. Beebe. 1995. Adaptation of beans (Phaseolus vulgaris L.) to low
phosphorus availability. HortScience 30:1165-1171.

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7.2. Cambios en Ia Composicin Qumica y en eI VaIor Nutritivo
de Ia PIantas Bajo Estrs

M.C. RosaIinda Mendoza ViIIareaI
Profesor Investigador deI Departamento de Ciencias Bsicas, UAAAN
M.C. Antonio Francisco AguiIera Carbo
Profesor Investigador deI Departamento de Nutricin y AIimentos, UAAAN
Lic. Laura OIivia Fuentes Lara
Profesor Investigador deI Departamento de Nutricin y AIimentos, UAAAN

7.2.1. Introduccin
Los esfuerzos actuales de la investigacin y desarrollo agrcolas se dirigen
principalmente hacia el aumento de rendimientos, la obtencin de cosecha con apariencia y
textura adecuadas para exportacin, el aumento en la eficiencia en el uso de los insumos y la
adecuada combinacin entre proteccin de cultivos e inocuidad. Menor atencin sin embargo
ha recibido el mejoramiento de la calidad nutricional de las cosechas, es decir, el contenido y
balance relativo de minerales, elementos traza, antioxidantes y fitoqumicos.
Las vertientes de investigacin acerca del aumento en la calidad nutricional se dirigen
principalmente hacia la aplicacin de tcnicas de manipulacin de genomas vegetales y el
mapeo de genes. Sin embargo, debe tomarse en cuenta el gran valor potencial, para lograr la
meta de producir alimentos vegetales de valor nutricional superior, del mejoramiento
convencional, as como de la optimizacin de las tecnologas de nutricin vegetal y control
microambiental en campo abierto y en invernadero.
El campo de investigacin sobre la importancia de los fitoqumicos y antioxidantes en las
plantas se encuentra en expansin. Se sabe que estos compuestos funcionan como agentes
que incrementan la resistencia al estrs trabajando como sealizadores, segundos mensajeros,
atrapadores de radicales libres y por ende protectores del DNA, protenas y membranas contra
el estrs oxidativo. Asimismo, segn diferentes trabajos el nivel de antioxidantes y fitoqumicos
en los alimentos consumidos muestra correlacin con el ttulo de dichos compuestos en el
plasma y otros sistemas orgnicos de humanos. Por otra parte, aunque no existen pruebas
directas de que en humanos el nivel de antioxidantes y fitoqumicos se traduzca en un beneficio
directo sobre la salud, se cuenta con la evidencia experimental de tal hecho en roedores e
insectos, asimismo diferentes estudios epidemiolgicos marcan indirectamente la relacin entre
el consumo de ciertos productos vegetales y la ausencia o disminucin de accidentes
vasculares o ciertos desrdenes degenerativos que impactan negativamente sobre la
esperanza de vida y la calidad de vida de la poblacin.

160

Hasta el momento no sabemos con detalle cuales son las condiciones ambientales que
impactan positiva o negativamente sobre la presencia y la concentracin relativa de los
fitoqumicos y antioxidantes. Es decir, en que forma la manipulacin microambiental
conseguida con las tecnologas agrcolas modifica la induccin de los genes relacionados con
las vas biosintticas de estos compuestos?
Se tiene una gran laguna en el conocimiento en cuanto a las condiciones de irradiancia,
balance espectral, temperatura, humedad, composicin de la atmsfera, carcter del sustrato,
composicin de fertilizantes, aplicacin de reguladores del crecimiento, sealizadores del
estrs, etc. que optimicen tanto la concentracin como el balance molar relativo de fitoqumicos
y antioxidantes. Surge asimismo la pregunta cul es el papel de estos compuestos durante el
desarrollo y crecimiento de la planta? funcionan tan solo como agentes protectores frente al
estrs o cumplen otros papeles como sealizadores y reguladores, en otras palabras, cumplen
funciones morfogenticas adems de moduladoras y reguladoras?

7.2.2. Importancia de Ios Fitoqumicos y Antioxidantes
Durante el transcurso de su vida las plantas pueden experimentar estmulos negativos
del ambiente tan diversos como exceso o falta de radiacin, temperaturas altas o bajas, sequa,
inundacin, alta salinidad, desbalance de nutrientes, presencia de patgenos o herbvoros. Es
comn que el estrs ambiental se manifieste como estrs oxidativo al nivel celular (nz y Van
Montagu, 1995). Tal parece que el mencionado estrs oxidativo puede ser la liga entre las
respuestas ecofisiolgicas como la fotosntesis, transpiracin, acumulacin y reparto selectivo
de biomasa y las respuestas al nivel molecular como la transduccin y disipacin energtica as
como la regulacin de la expresin gnica.
En el correr de la evolucin las plantas desarrollaron mecanismos que permiten la
expresin inducida de respuestas frente a los estmulos diversos del ambiente. Entre los
mencionados sistemas de respuesta se encuentran la sntesis de fitoqumicos y antioxidantes.
Estos compuestos cumplen funciones importantes como atrapadores de radicales libres as
como estabilizadores y protectores del DNA y protenas frente al estrs de oxidacin (nz y
Van Montagu, 1995). Queda por definir si dichos fitoqumicos y antioxidantes cumplen funciones
adicionales a la resistencia al estrs (Roitsch, 1999). Al respecto se sabe que muchos de ellos
no muestran expresin constitutiva, sino que dependen del trasfondo ambiental especfico,
probablemente porque modifican la expresin gnica cambiando los programas de desarrollo
de la planta y generando patrones especiales de metabolismo y morfognesis (Allen et al.,
1995; Bohnert y Sheveleva, 1998).
El estrs oxidativo se encuentra presente en todos los organismos aerbios, y los
humanos no son excepcin. En nuestra especie los mismos compuestos fitoqumicos y
antioxidantes encontrados en las plantas cumplen importantes funciones de proteccin y
estabilizacin frente a las especies activas de oxgeno (Youdim y Joseph, 2001). Se sabe que la
ingesta de alimentos con altos niveles de compuestos antioxidantes y fitoqumicos se relaciona
con mayores niveles de los mismos compuestos en el cuerpo humano. Se tienen gran cantidad
de reportes acerca de los diferentes efectos que diversos fitoqumicos y antioxidantes vegetales
tienen sobre la capacidad antioxidante de los rganos y tejidos del cuerpo humano (Cao et al.,
1998), resistencia a las enfermedades (Gate et al., 1999), prevencin de accidentes vasculares
as como diversos males degenerativos (Youdim y Joseph, 2001).
Trabajos recientes han demostrado que es posible manipular los mecanismos de
defensa de las plantas y los niveles de antioxidantes y fitoqumicos especficos por medio de la
ingeniera de genes (nz y Van Montagu, 1995), con la manipulacin ambiental (Pastori et al.,
2000), la fertilizacin o con la aplicacin exgena de evocadores qumicos que funcionan como
sealizadores, antioxidantes y promotores de oxidacin controlada (Beligni y Lamattina, 1999;
Dietrich et al., 1999; Kocsy et al., 2001; Olvera-Arellano et al., 2001).

161

Para el caso del maz, se ha determinado que existe gran variacin entre genotipos
respecto a la concentracin de antioxidantes y fitoqumicos (Kurilich y Juvik, 1999) y que los
subproductos de la extraccin de almidn del grano de maz muestran gran actividad
antioxidante (Niwa et al., 2001). Dicha variacin ha sido reportada asimismo para otras especies
vegetales (Wang y Lin, 2000; Wang y Stretch, 2001).

7.2.3. Literatura Referente a VaIor NutricionaI de Ios VegetaIes
seminarios.

1. Grusak, M.A. 1999. Genomics-assisted plant improvement to benefit human nutrition and
health. Trends Plant Sci. 4:164-166.
2. Grusak, M.A. and D. DellPenna. 1999. mproving the nutrient composition of plants to
enhance human nutrition and health. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 50:133-
161.
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4. Park. S.C., E.S. Hwang, H.-S. Kim, W.-Y. Park. (Eds.) 2001. Healthy Aging for Functional
Longevity. Molecular and Cellular nteractions in Senescence. Ann. New York Acad. Sci.
Volume 928. 389 p.

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7.2.4. Un ejempIo de Ia Modificacin en eI VaIor NutricionaI de Ia Fruta de Tomate
La nutricin mineral es un medio de modificar el crecimiento, la morfognesis,
productividad y calidad de la cosecha. En el estudio a continuacin reportado se determin el
efecto del nitrato en diferentes concentraciones sobre el tomate. El nitrato es una molcula de
funcin mltiple: es fuente de N, agente sealizador que modifica la absorcin y asimilacin de
otros nutrientes minerales as como el metabolismo del carbono y, por ltimo, funciona como un
importante agente osmtico celular. Todo ello lo convierte en un potencial agente para la
manipulacin integral de la tolerancia al estrs en plantas.

A continuacin algunas referencias que se tienen disponibles para su estudio:

1. Zhang, H. and B.F. Forde. 2000. Regulation of Arabidopsis root development by nitrate
availability. J. Exp. Bot. 51:51-59.
2. Crdenas-Navarro, R., S. Adamowicz, P. Robin. 1999. Nitrate accumulation in plants: a role
for water.
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4. Crawford, N.M. and A.D.M. Glass 1998. Molecular and physiological aspects of nitrate uptake
in plants. Trends Plant Sci. 3:389-395.

162

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7.2.4.1. DETERMINACION DE LA CONCENTRACION OPTIMA DE NITRATO PARA
INCREMENTAR EL CRECIMIENTO, LA PRODUCCIN DE FRUTA Y EL CONTENIDO DE
MINERALES EN EL TOMATE

Edilberto Gonzlez-Raya
1
, Adalberto Benavides-Mendoza
1
, Gabriela Rodrguez-Rodrguez
1
,
Jorge Luis Jurez-Rivera
1
, Antonio Francisco Aguilera-Carbo
2
, Laura Olivia Fuentes-Lara
2

1
Departamento de Horticultura, Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro
2
Departamento de Nutricin y Alimentos, Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro

RESUMEN
El nitrato es la principal fuente de nitrgeno para la mayora de las especies cultivadas. En
cultivos sin suelo en invernadero es importante optimizar la concentracin de nitrato en la
solucin nutritiva ya que tanto el dficit como el exceso tienen impacto negativo sobre las
plantas. El estudio se desarroll con el objetivo de determinar el efecto de la concentracin de
nitrato sobre el crecimiento, la produccin de fruta y el contenido de minerales en los tejidos
vegetativos y en la fruta de dos cultivares de tomate, uno tipo bola y otro saladette. Se utiliz un
sistema de cultivo sin suelo con peat moss como sustrato aplicando soluciones nutritivas con
150, 350, 550 y 750 ppm de NO
-
3
. Se determin la produccin total de fruta por planta, la
produccin y reparto selectivo de biomasa fresca y seca de tallos, hojas, frutos y races.
Asimismo se determin la concentracin de N, P, K, Ca, Mg, Cu, Zn y Fe en las mismas partes
de la planta. Los resultados indicaron que la produccin de fruta por planta fue mayor al aplicar
la solucin nutritiva de 350 ppm de NO
-
3
con 7.36 y 7.8 kg de fruta por planta para el cultivar
tipo bola y saladette, respectivamente. En cuanto a la acumulacin de biomasa fresca y seca en
las diferentes estructuras de las plantas los resultados indicaron que el rango ptimo se
encuentra entre 350 y 550 ppm de NO
-
3
. Por otro lado, tomando conjuntamente los datos del
contenido de P, K, Ca, Mg, Cu, Zn y Fe en la fruta, la solucin nutritiva ms recomendable fue la
de 350 ppm de NO
-
3
.
Palabras clave: nitrgeno, fertilizacin, cultivo en invernadero, calidad nutricional.

SUMMARY
Nitrate is the main source of nitrogen for most of the cultivated species. t soilless production
system nitrate concentration optimization is very important since both the deficit and the excess
has negative impact on plant growth. This study was developed with the objective of determining
the effect of the nitrate concentration on the growth, fruit production and mineral content of
shoots, fruits, and roots of two tomato cultivars grown in peat moss. Four NO
-
3
concentrations
(150, 350, 550, 750 mg l
-1
) were evaluated in terms of plant response. Fruit production, fresh
weight and dry matter of leaves, stems, roots and fruits, were determined. n addition we
evaluated the tissue content of N, P, K, Ca, Mg, Cu, Zn in leaves, roots and fruits. The results
indicated that fruit production was maximized with NO
-
3
at 350 mg l
-1
, with 7.36 kg plant
-1
and 7.8
kg plant
-1
of fruit for "Winner and "Yaqui cultivars, respectively. Fresh weight and dry matter
shows the better accumulation in the range between 350 and 550 mg l
-1
of NO
-
3
. On the other
hand, taking together the data of P, K, Ca, Mg, Cu, Zn and Fe level in fruit tissues, the most
effective nitrate concentration in order to promote macro- and micro-nutrient concentration was
350 mg l
-1
. This data suggest that management of nitrate concentration is a useful tool to
manipulate fruit quality and production
Index Words: nitrogen, plant fertilization, greenhouse culture, nutritional quality.

163

INTRODUCCION
El nitrato (NO
-
3
) es la principal fuente de nitrgeno (N) para la mayora de las especies
cultivadas. El nitrato es, adems de una molcula nutriente que aporta N a la planta, un
compuesto sealizador (Trewavas, 1983) que regula el metabolismo del carbono (Scheible et
al., 1997a; Stitt, 1999), la homeostasis hdrica y la turgencia celular (Seginer et al., 1998;
Crdenas-Navarro et al., 1999), modifica la morfognesis de las plantas (Scheible et al., 1997b;
Zhang y Forde, 2000) y cambia la absorcin y acumulacin de otros elementos minerales (He et
al., 1999). Este papel dual de la molcula de NO
-
3
, como nutriente y compuesto sealizador, se
debe tomar en cuenta tanto al planificar la concentracin como la oportunidad de aplicacin de
un fertilizante que aporte nitrato.
Cuando se cultiva en suelo el N puede aportarse en forma de NO
-
3
o amonio (NH
+
4
). En
cambio, al utilizar sistemas hidropnicos o semihidropnicos es recomendable utilizar el NO
3

como nica fuente o fuente principal de N en la solucin nutritiva (Kafkafi, 1990; Duffy y Dfago,
1999). Tanto el dficit como el exceso de nitrato tienen un impacto negativo sobre las plantas
disminuyendo la produccin de fruta (He et al., 1999), aumentando la susceptibilidad a los
insectos plaga (Jauset et al., 2000) y a los patgenos (Duffy y Dfago, 1999) o bien afectando
negativamente la calidad nutricional de los productos cosechados (Maynard et al., 1976). Por
ello es importante definir la concentracin de nitrato que se utilizar en una solucin fertilizante,
de tal forma que el valor seleccionado optimize en conjunto el crecimiento y vigor de la planta,
la produccin total de fruta, la calidad sensorial y nutricional de la fruta as como la vida de
postcosecha o anaquel de la fruta.
El estudio aqu reportado tuvo como objetivo determinar el efecto de la concentracin de
NO
-
3
en la solucin nutritiva sobre el crecimiento, la produccin de fruta y el contenido de
minerales en los tejidos vegetativos y en la fruta de dos cultivares de tomate, uno tipo bola y otro
saladette, desarrollados en un sistema de cultivo semihidropnico con peat moss como sustrato.
Cabe mencionar que este trabajo forma parte de un proyecto multidisclipinario en donde se busca
modificar de forma controlada la acumulacin de carbohidratos, minerales y fitoqumicos en la
fruta de tomate para elevar su calidad nutricional y vida postcosecha.

MATERIALES Y METODOS
El trabajo experimental se realiz en el invernadero nmero 3 del Departamento de
Horticultura de la Universidad Autnoma Agraria Antonio Narro al sur de la ciudad de Saltillo,
Coahuila, Mxico durante el verano y otoo del 2000. El invernadero es de tipo colombiano, con
cubierta de polietileno, ventilacin zenital pasiva y cortinas movibles. Los cultivares de tomate
(Lycopersicon esculentum (L.) Mill.) utilizados fueron Winner (tipo bola) y Yaqui (tipo saladette),
ambos con hbito de crecimiento determinado. Se utiliz como fuente de nutrientes minerales
una solucin Douglas modificada de tal forma que aport diferentes concentraciones de NO
-
3
.
Las caractersticas de dichas soluciones son anotadas en el Cuadro 1.
Las semillas fueron sembradas en charolas germinadoras de poliestireno expandido con
200 cavidades utilizando Peat Moss (Sunshine 3) como sustrato. Las plntulas fueron
desarrolladas hasta contar con cuatro hojas verdaderas, fueron trasplantadas el 5 de junio del
2000 en macetas de 20 litros utilizando peat moss como sustrato. Las plantas fueron sometidas
al manejo habitual de poda de formacin a dos tallos as como tutoreo, este ltimo desde los 30
das despus del trasplante. El manejo fitosanitario fue el normalmente utilizado para el tomate
de invernadero siguiendo las indicaciones de los fabricantes de cada producto utilizado. La
fertilizacin postrasplante se realiz con las soluciones nutritivas Douglas ya descritas que
aportaron distintas concentraciones de NO
3
a las plantas. Dichas soluciones fueron aplicadas 2
veces por semana aadiendo 1.5 litros por maceta en la etapa vegetativa y de 2.5 litros por

164

maceta en floracin y produccin de fruta. En caso de requerirse se aplicaron de uno a dos
riegos complementarios nicamente con agua aadiendo 1.5 litros por maceta.
El diseo experimental utilizado fue uno completamente al azar con cuatro
concentraciones de nitrato como tratamientos, dos cultivares de tomate y 10 repeticiones,
totalizando 80 plantas. Adicionalmente fueron aadidas plantas orilleras en maceta con el
objetivo de amortiguar las diferencias en la humedad relativa entre las plantas. Las variables
evaluadas fueron las siguientes:
Produccin de fruta. Se determin la cantidad de fruta producida por planta del 9 de
septiembre al 2 de diciembre del 2000. Los frutos fueron cosechados al llegar al punto de
rayado, contados y pesados en una balanza granataria. VariabIes morfoIgicas. Fueron
determinadas la altura de las plantas de la base al pice del tallo, el dimetro del tallo a dos
centmetros de altura sobre la corona, el nmero de nudos desde la corona hasta la ultima
bifurcacin en el pice del tallo principal. La evaluacin y registro de estas variables comenz el
29 de junio del 2000, mediando 15 das entre cada evaluacin. Posterior al inicio de la floracin
se contaron asimismo el nmero de racimos florales, el nmero de frutos amarrados por planta
y el nmero total de frutos por planta realizando estas evaluaciones a los 41, 56 y 90 das
despus del trasplante. Biomasa y AnIisis de MineraIes. En las etapas vegetativa (37 das
despus del trasplante), posterior al inicio de floracin (78 das despus del trasplante) y al final
de la cosecha (180 das despus del trasplante) fueron seleccionadas por sorteo dos plantas de
cada cultivar por tratamiento. En ellas se determin la biomasa fresca y seca de las hojas,
tallos, frutos y raz. Esta ltima fue lavada y cribada cuidadosamente para separarla del sustrato
en la maceta. Las muestras fueron secadas en una estufa a 60 C hasta obtener peso
constante para ser pesadas en una balanza analtica. Los anlisis del contenido de nitrgeno
(N), fsforo (P), potasio (K), calcio (Ca), magnesio (Mg), hierro (Fe), zinc (Zn) y cobre (Cu) se
llevaron a cabo en los tejidos vegetativos areos (tallo + hojas), en la fruta y en la raz,
siguiendo los procedimientos de anlisis de tejidos descritos por Fick et al. (1976). Para
determinar el N los tejidos secos fueron molidos y pesados para posteriormente someterse a
digestin cida con cido sulfrico a 200 C. Para evaluar la concentracin de N se realiz un
anlisis microkjeldhal. Para los restantes minerales la digestin cida de los tejidos se llev a
cabo con cido ntrico y perclrico a la temperatura mencionada. La evaluacin del P fue por
medio de colorimetra con un fotocolormetro Spectronic 20 Genesys. Para los restantes
elementos la evaluacin se realiz con un espectrofotmetro de absorcin atmica 2380 de
Perkin Elmer. Los anlisis estadsticos univariados consistieron en transformacin de los datos
cuando as fue requerido, anlisis de varianza y separacin de medias con la prueba de Fisher.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Produccin de Fruta. Esta mostr una tendencia de tipo cuadrtica con la mxima
respuesta para ambas variedades en 350 ppm de nitrato (Cuadro 2). Esta misma clase de
respuesta cuadrtica fue observada en el tomate cultivado en suelo (Andersen et al., 1999), por
lo que parece ser una manifestacin general frente al nivel de nitrgeno e independiente del
sistema de produccin. El cultivar Winner de tipo bola mostr baja sensibilidad a la
concentracin de NO
-
3
dando una diferencia no estadsticamente significativa de 1.2 kg de fruta
por planta entre el ms bajo y alto de los tratamientos con 150 y 350 ppm de nitrato. Por su
parte, el cultivar Yaqui de tipo saladette present mayor sensibilidad al NO
-
3
en la solucin
nutritiva, mostrando una diferencia estadsticamente significativa de 3.3 kg de fruta por planta
entre los tratamientos de 150 y 350 ppm. Para ambas variedades el aumento en la
concentracin de NO
-
3
ms all de las 350 ppm en la solucin nutritiva no fue efectivo en inducir
mayor produccin. Una respuesta parecida fue reportada por He et al. (1999) quienes
encontraron que el mayor aporte de nitrato al tomate cultivado en otoo e invierno se traduce en
menor nmero de frutos amarrados y menor rendimiento comercial. Por otro lado, la

165

concentracin recomendada de NO
-
3
para produccin de tomate en sustrato inerte en
invernadero es de 630 hasta 850 ppm (Portree, 1996). Asimismo, Jauset et al. (2000) aunque
no determinaron la produccin de fruta, reportaron que incluso valores tan bajos como 84 ppm
de nitrato en la solucin nutritiva no indujeron sntomas de deficiencia de N en plantas de
tomate bola cultivados en sustrato inerte. Nuestros resultados indican que es posible disminuir
la concentracin de nitrato en la solucin nutritiva, hasta llegar a un valor ubicado entre 150 y
350 ppm, sin afectar sensiblemente la produccin de fruta de los cultivos de tomate
desarrollados en el perodo de verano y otoo. Esta disminucin en el nitrato implica menor
costo de fertilizacin as como menor aporte de nitrato residual a los mantos freticos.
VariabIes morfoIgicas. La altura de planta no fue modificada por la concentracin de nitrato
en el cultivar Yaqui (Cuadro 3), mientras que en el cultivar Winner se encontr tendencia a
incrementar la altura conforme aument el nitrato disponible. Para el dimetro del tallo se
encontraron diferencias significativas entre tratamientos para ambos cultivares mostrndose, en
ambos casos, tendencia a incrementar el dimetro en respuesta a la mayor concentracin de
nitrato. El nmero de nudos en el tallo principal prcticamente no mostr cambio frente al nitrato
en el cultivar de tipo bola, en cambio para el de tipo saladette se determin un aumento
promedio de un nudo en el tallo principal al comparar la concentracin ms baja de nitrato
frente a las ms alta.
El nmero promedio de frutos amarrados y el nmero promedio de frutos por planta
mostraron tambin respuestas diferenciales entre los dos cultivares (Cuadro 3). El nmero
promedio de frutos amarrados indica el xito de mantenimiento de la flor una vez polinizada, es
decir, es un indicador de la habilidad de la planta para retener la fruta en sus primeras etapas
de crecimiento. En el cultivar Winner esta variable mostr diferencias estadsticamente no
significativas entre los tratamientos de concentracin de nitrato pero, en concordancia con lo
reportado por He et al. (1999), mostr disminucin al elevarse el NO
-
3
. Por otra parte, en el
cultivar Yaqui se encontr una diferencia, estadsticamente significativa, de casi 10 frutos ms
amarrados por planta en la concentracin de 750 ppm al compararlo con la concentracin de
150 ppm. La siguiente variable, el nmero promedio de frutos por planta (Figura 1), es un
indicador de la habilidad de la planta para mantener en el largo plazo cierta cantidad de frutas.
En este caso fue ahora el cultivar Winner el que mostr una respuesta significativa y positiva
frente a la concentracin de nitrato, mientras que el cultivar Yaqui no present diferencia
significativa en esta variable. La diferencia entre cultivares pudiera indicar que tanto la dinmica
de emisin de estructuras reproductivas como el reparto de recursos hacia el mantenimiento de
la fruta son dependientes tanto del genotipo como de la disponibilidad de nitrato. Al respecto, es
probable que la diferencia entre el promedio del nmero de frutos amarrados y el del nmero de
frutos por planta en el cultivar Yaqui sea un reflejo de la competencia entre frutas dentro de la
misma planta (Stephenson, 1981).
Biomasa Fresca y Seca. En ambos cultivares se observ menor acumulacin de
biomasa fresca en tallos y hojas al aplicar la solucin con baja concentracin de nitrato (Cuadro
4). La biomasa fresca de tallos y hojas se elev al aumentar el NO
-
3
pero, ms all de 350 ppm
no fue posible obtener una respuesta estadsticamente significativa en cuanto a la acumulacin
de biomasa, a pesar de que ambas variables mostraron el valor mximo en 550 ppm de nitrato.
Por otra parte, a pesar de la gran diferencia entre cultivares para la biomasa de tallos y hojas,
mostrando por ejemplo casi 200 g ms de tejido foliar el cultivar Winner en comparacin con el
Yaqui, no se present gran disparidad entre el peso de los frutos o de las raz entre los dos
cultivares utilizados. En cuanto a la respuesta de estas ltimas variables frente al nitrato no se
obtuvieron diferencias estadsticamente significativas a excepcin del peso de la fruta en el
cultivar tipo bola, que mostr un mximo en 550 ppm. La biomasa radical present tendencia a
disminuir conforme se aument la concentracin de nitrato, respuesta ya descrita por Brouwer
(1962). Se sabe que la alta disponibilidad de nitrato a partir de una fuente difusa, como una
solucin nutritiva, inhibe el crecimiento de la raz, disminuyendo el cociente raz/tallo as como la

166

frecuencia de races laterales (Stitt, 1999). Se conocen dos vas de transduccin por medio de
las cuales el NO
-
3
modula la ramificacin y crecimiento de las races: la primera es estimulatoria
sobre la cantidad de pelos radicales y responde al contacto directo con NO
-
3
, la segunda es
inhibitoria sobre la emisin de races laterales secundarias (no afectando la raz o races
primarias) y depende al parecer de una seal sistmica cuya intensidad se relaciona con la
cantidad de nitrato absorbido por la planta (Zhang y Forde, 2000).
La acumulacin de materia seca en tallos y hojas fue dependiente de la concentracin
de nitrato (Cuadro 5). En el tomate la cantidad de biomasa seca area vegetativa depende la
radiacin interceptada (Andriolo et al., 1998) y a su vez esta eficiencia en la captura de
radiacin es funcin del rea foliar y la concentracin de N en las hojas (Verhoeven et al.,
1997). Nuestros resultados indican que para el cultivar tipo bola el ptimo de nitrato en la
solucin nutritiva se encuentra en los 550 ppm, mientras que en el tipo saladette la acumulacin
de biomasa seca en tallos y hojas responde linealmente al nitrato aunque parece mostrar una
asntota en las 750 ppm.
La respuesta del peso seco de los frutos frente al nitrato fue diferente a la exhibida por
tallos y hojas (Cuadro 5), mostrando ambos cultivares una tendencia de tipo cuadrtico con un
ptimo en 550 ppm de NO
-
3
. Andriolo et al. (1998) describieron una manifestacin cuadrtica
anloga en tomates tipo bola sin poda de tallos secundarios, pero en ese caso para el reparto
selectivo de biomasa entre la fruta y el tallo+hojas (es decir, el cociente del peso seco de la
fruta y el peso seco areo total). Los mismos autores indicaron un valor menor al 40 % de la
biomasa seca area total en los frutos, mientras que nuestros datos indican que la fruta
contabiliz ms del 46% y hasta un 62% de la biomasa seca area total, mostrando entonces
mayor eficiencia de reparto.
En cuanto al peso seco de la raz no se encontraron diferencias estadsticamente
significativas, si bien se observ una tendencia, contraria a la del peso fresco de la raz, hacia la
acumulacin de mayor cantidad de materia seca conforme aument el nitrato disponible. Es
probable que este resultado indique la presencia de una mayor cantidad de biomasa seca
dirigida hacia la formacin de pelos radicales (Zhang y Forde, 2000), estructuras con alto
contenido de materia seca pero con muy poco aporte al peso fresco de la raz. En cuanto al
porcentaje de reparto de biomasa seca hacia la raz (el cociente del peso seco de la raz y el
peso seco total) esta fue menor al 10% y disminuy al aumentar la concentracin de nitrato. De
nuevo aqu parece reflejarse el efecto inhibitorio del nitrato sobre el desarrollo de races
secundarias.
Contenido de MineraIes. La concentracin de N total en los tejidos aument en
conformidad con la disponibilidad de NO
-
3
en la solucin nutritiva, respuesta anloga a la
descrita por Darnell y Stutte (2001). En los tejidos foliares la respuesta fue lineal y significativa
para ambos cultivares (Cuadro 6). En cambio el contenido de N en la fruta (Cuadro 7) mostr
una tendencia cuadrtica sin diferencias significativas para el cultivar Winner, pero
estadsticamente significativas para el Yaqui, con una mxima concentracin de N en la fruta al
aplicar la solucin con 550 ppm de nitrato. En la raz las diferencias en el contenido de N fueron
no significativas (Cuadro 8), si bien mostraron tendencia a aumentar al aplicarse las soluciones
con mayor concentracin de NO
-
3
.
Los valores descritos de concentracin de N total en los tejidos foliares del tomate se
encontraron dentro de los rangos normales para esta especie. No disponemos de referencias
respecto al contenido de N total en races y frutas de tomate contra las cuales contrastar
nuestros resultados. Sin embargo, Darnell y Stutte (2001) reportaron resultados de N total en
distintos tejidos de plantas de fresa desarrolladas en hidropona con soluciones nutritivas de
muy parecida concentracin de nitrato. Los autores encontraron prcticamente las mismas
tendencias que las aqu descritas para el tomate, si bien los valores de acumulacin de N en los
tejidos, sobre todo en la fruta, fueron ms bajos en las plantas de fresa.

167

La concentracin de fsforo en todos los tejidos disminuy en ambos cultivares al
aumentar el nivel de nitrato en la solucin nutritiva. Para el cultivar Winner los resultados fueron
estadsticamente significativos a excepcin de los obtenidos para los tejidos de la fruta,
mientras que para el cultivar Yaqui todos los resultados fueron estadsticamente no
significativos. Es posible suponer que esta respuesta negativa del fsforo sea consecuencia de
la bien conocida incompatibilidad entre este elemento y el calcio. Ya que una de las fuentes de
nitrato aportaba tambin calcio entonces los cambios observados pudieran achacarse ms bien
a este ltimo elemento. Sin embargo, no se encontr correlacin entre las concentraciones de
calcio, tanto en la solucin nutritiva como en los diferentes tejidos, y las respectivos niveles de
fsforo en los tejidos. En cuanto a la cantidad de potasio en los diferentes tejidos no se
observaron diferencias significativas en alguno de los cultivares, tampoco se observ alguna
tendencia consistente de este elemento a excepcin de la fruta en donde la concentracin de
potasio disminuy al aumentar la concentracin de nitrato (Cuadro 7).
El calcio en la fruta mostr tendencia negativa frente al nivel de nitrato. Las diferencias
fueron significativas en el cultivar Yaqui y no significativas en el Winner. Los tejidos foliares y
de la raz mostraron la respuesta contraria, manifestando mayor acumulacin de calcio al
aumentar la concentracin de nitrato. Estas respuestas no se mostraron estadsticamente
significativas, a excepcin de los valores de calcio en la raz del cultivar Winner.
El magnesio mostr cambios mnimos entre los diferentes tratamientos y cultivares, la
nica tendencia con diferencias estadsticamente significantes se encontr en los tejidos
foliares del cultivar Yaqui en donde el mayor nivel de nitrato se asoci con menor concentracin
de Mg. Por su parte el cobre en los tejidos foliares mostr tendencias contrarias en los dos
cultivares utilizados, exponiendo el cultivar tipo bola cierta disminucin al aumentar el nitrato,
mientras que el cultivar tipo saladette exhibi un incremento estadsticamente significativo en el
cobre foliar al aumentar el nivel de NO
-
3
. No se obtuvieron respuestas consistentes relativas a la
concentracin de cobre en la fruta y la raz, exceptuando que en el cultivar Winner fue posible
ver diferencias estadsticamente significativas con tendencia de tipo cuadrtica con un mximo
entre 350 y 550 ppm de nitrato (Cuadro 8).
El Zn y el Fe no mostraron diferencias significativas entre tratamientos en cuanto a la
concentracin en diferentes tejidos. Sin embargo, el valor ms alto de Zn en la fruta se obtuvo
con la solucin nutritiva con 350 ppm de NO
-
3
, mientras que para el hierro el ptimo se encontr
entre 350 y 550 ppm de NO
-
3
. Los promedios para el contenido de hierro foliar se encuentran
dentro de los rangos normales reportados para hortalizas (Benavides, 2000). Respecto a los
resultados para la fruta estos son muy interesantes ya que muestran el potencial de aumentar la
cantidad de Fe en la fruta manipulando algunos factores como el contenido de nitrato en la
solucin nutritiva. Asimismo indica que el manejo del N pudiera asimismo apoyar en el
incremento de la calidad nutricional de otros vegetales utilizados para el consumo de hojas,
tallos o races.

CONCLUSIONES.
Considerando la produccin de fruta por planta para los cultivares tipo bola y saladette la
concentracin ptima de nitrato en la solucin nutritiva fue de 350 ppm.
En cuanto a la acumulacin de biomasa fresca y seca los resultados indicaron que el rango
ptimo de NO
-
3
se encuentra entre 350 y 550 ppm.
Tomando conjuntamente los datos del contenido de P, K, Ca, Mg, Cu, Zn y Fe en la
fruta, la solucin nutritiva ms recomendable fue la de 350 ppm de NO
-
3
para ambos cultivares.

LITERATURA CITADA
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168

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169

Cuadro 1. Concentracin de nitrato en unidades de ppm y mM en cada solucin nutritiva y
algunas propiedades qumicas de las mismas. Las fuentes de N son nitrato de calcio y nitrato
de potasio.
Solucin Concentracin
de NO
-
3
(ppm)
Concentracin
de NO
-
3
(mM)
pH C.E. (mS cm
-
1
)
Relacin Ca/K
A 150 2.42 7.4 13.64 1.02
B 350 5.65 7.31 13.66 1.01
C (Testigo) 550 8.88 7.22 12.78 1.00
D 750 12.10 7.43 16.1 1.01

Cuadro 2. Produccin de fruta (kg planta
-1
) en cada cultivar de tomate bajo diferentes
concentraciones de nitrato en la solucin nutritiva.
Cultivar Concentraci
nde NO
3

(ppm)
Produccin de fruta
(kg planta
-1
)
Winner 150 6.16 a
|

(bola) 350 7.36 a
550 7.19 a
750 6.54 a

Yaqui

150

4.50 a
(saladette
)
350 7.80 b
550 5.50 ab
750 6.90 b
|
Los promedios seguidos de la misma letra no difieren estadsticamente (DMS, 0.05)

170

Cuadro 3. Valores promedio de los diferentes muestreos para las variables morfolgicas de
las plantas en los dos cultivares de tomate desarrollados con diferente concentracin de
nitrato en la solucin nutritiva.

Cultivar Concentracin
de NO
3
(ppm)
Altura Dimetro
del tallo
No. de
nudos
Frutos
amarrados
Frutos
por
planta
Winner 150 59.93 a
|
1.44 a 12.73 a 17.55 a 18.05
a
(bola) 350 59.51 a 1.55 b 12.48 a 16.70 a 24.96
b
550 61.14 a 1.45 a 12.40 a 15.70 a 25.10
b
750 64.56 b 1.64 c 12.78 a 16.99 a 26.66
b

Yaqui 150 59.66 a 1.25 a 11.79 a 18.18 a 17.02
a
(saladette
)
350 60.52 a 1.36 b 12.44
bc
23.36 b 16.34
a
550 59.60 a 1.45 c 12.00
ab
24.34 b 15.70
a
750 59.69 a 1.49 c 12.75 c 27.68 b 17.42
a
|

171

Cuadro 4. Valores promedio de tres muestreos para el peso fresco (g planta
-1
) de plantas de
tomate fertilizadas con soluciones nutritivas conteniendo distinta concentracin de nitrato.

n de NO
3

(ppm)
Tallo Hojas Frutos Areo
total
Raz Total
Winner
150 171.65 a
|
364.37 a 862.85
a
1630.20 a 77.75 a 1656.11 a
350 261.55 b 599.08
ab
1017.06
a
2117.48 ab 47.45 a 2133.30 ab
550 284.22 b 784.35 b 1441.82
b
2825.86 b 60.60 a 2486.06 b
750 255.85 b 693.90 b 1141.20
a
2539.36 ab 67.10 a 2561.73 ab

Yaqui

150 94.65 a 249.23 a 880.66
a
1408.25 a 75.75 a 1433.50 a
350 141.67 b 427.90 b 1161.51
a
1984.56 a 77.60 a 2010.43 a
550 146.85 b 523.82 b 1264.53
a
2371.64 a 55.05 a 2389.99 a
750 154.97 b 496.63 b 1401.15
a
2410.55 a 44.90 a 2425.52 a

|

Cuadro 5. Valores promedio de tres muestreos para el peso seco (g planta
-1
) de plantas de
tomate fertilizadas con soluciones nutritivas conteniendo distinta concentracin de nitrato.
n de NO
3

(ppm)
Peso seco
de hojas y
tallos
Peso seco
de los
frutos
Peso seco
areo total
Peso seco
de la raz
Peso seco
total
Winner

150

104.15 a
|

69.67 a

150.60 a

13.30 a

159.46 a
350 153.26 b 130.47 ab 240.25 b 14.15 a 249.68 b
550 217.90 c 149.50 b 317.56 b 13.60 a 326.63 b
750 180.76 bc 120.80 ab 261.30 b 14.50 a 270.96 b

Yaqui

150 72.05 a 76.92 a 123.33 a 12.75 a 131.83 a
350 138.50 ab 100.27 ab 205.35 ab 14.27 a 214.86 ab
550 174.83 b 170.17 b 288.28 b 13.45 a 297.25 b
750 178.11 b 133.75 ab 267.28 b 15.02 a 277.30 b

|

172

Cuadro 6. Promedio de tres muestreos para la concentracin de minerales en los tejidos
foliares de dos cultivares de tomate desarrollados con diferente concentracin de nitrato en
la solucin nutritiva.

n de NO
3

(ppm)
N
%
P
%
K
%
Ca
%
Mg
%
Cu
ppm
Zn
ppm
Fe
ppm
Winner
(bola)

150

2.62 a
|

0.3128 b

14.9067
a

4.3310
a

0.3665 a

20.50 a

174.00
a

89.50
a
350 2.72 a 0.2558 ab 15.0383
a
4.3877
a
0.3648 a 18.66 a 162.83
a
126.83
a
550 3.03 ab 0.2700 ab 13.4650
a
5.2787
a
0.3657 a 15.00 a 167.66
a
127.66
a
750 3.48 b 0.1997 a 13.4383
a
5.4018
a
0.3792 a 18.16 a 157.66
a
65.00
a
Yaqui
(saladet
t

150

2.93 a

0.3272 a

13.8417
a

5.0525
a

0.3748 b

12.16 a

138.83
a

66.16
a
350 3.02 a 0.2548 a 11.3083
a
4.0513
a
0.3493 ab 19.50
ab
132.00
a
70.50
a
550 3.18 ab 0.2747 a 14.0216
a
4.5813
a
0.3397 a 29.16 c 173.33
a
89.33
a
750 3.58 b 0.2802 a 13.6150
a
4.9325
a
0.3525 ab 22.50
ab
152.83
a
129.16
a
|

173

Cuadro 7. Promedio de dos muestreos para la concentracin de minerales en los tejidos de
la fruta de dos cultivares de tomate desarrollados con distintos niveles de nitrato en la
solucin nutritiva.

n de NO
3

(ppm)
N
%
P
%
K
%
Ca
%
Mg
%
Cu
ppm
Zn
ppm
Fe
ppm
Winner
(bola)

150

2.81
a
|

0.4098 a

22.2300 a

0.8055 a

0.1475 a

6.00
a

72.25
a

36.25
a
350 3.21 a 0.4268 a 20.0025 a 0.8885 a 0.1280 a 3.00
a
134.75
a
73.25
a
550 3.21 a 0.4423 a 17.2798 a 0.7403 a 0.1550 a 6.25
a
63.25
a
44.75
a
750 3.03 a 0.3365 a 18.1650 a 0.7940 a 0.1255 a 5.50
a
86.00
a
59.00
a
Yaqui
(saladett
e

150

2.61 a

0.3718 a

21.6775 a

0.9823 b

0.1200 a

5.75
a

75.75
a

21.50
a
350 2.86
ab
0.2885 a 20.8025 a 0.6095 a 0.1138 a 3.25
a
102.00
a
64.00
a
550 3.41 b 0.3360 a 19.6750 a 0.7108
ab
0.1333 a 7.50
a
118.50
a
25.75
a
550 2.81 a 0.3137 a 16.6600 a 0.7045
ab
0.1438 a 4.75
a
106.00
a
27.75
a
|

174

Cuadro 8. Promedio de tres muestreos para la concentracin de minerales en los tejidos
radicales de dos cultivares de tomate desarrollados con diferente concentracin de nitrato en
la solucin nutritiva.

Cultivar Concentracin
de NO
3
(ppm)
N
%
P
%
K
%
Ca
%
Mg
%
Cu
ppm
Zn
ppm
Fe
ppm
Winner
(bola)

150

2.32 a
|

0.1558 b

10.9378
a

4.2505 a

0.3998 a

16.50 ab

194.30
a

124.25 a
350 2.32 a 0.1288
ab
5.5748
a
5.0725 ab 0.3350 a 21.25 ab 210.05
a
824.0 b
550 2.75 a 0.0965
ab
13.2478
a
4.5203 a 0.3380 a 26.50 b 251.30
a
830.25 b
750 2.59 a 0.0888 a 7.3700
a
5.7343 b 0.3570 a 15.0 a 201.05
a
655.25 ab
Yaqui
(saladett
e

150

2.11 a

0.1353 a

10.2895
a

3.9050 a

0.3995 a

16.50 a

141.55
a

281.25 a
350 1.91 a 0.1145 a 8.6788
a
4.3345 a 0.3513 a 13.75 a 146.55
a
676.50 ab
550 2.32 a 0.1350 a 7.8078
a
5.0198 a 0.3543 a 17.0 a 184.05
a
1097.25 b
750 2.70 a 0.1223 a 11.7988
a
5.1145 a 0.3695 a 16.0 a 146.55
a
426.5 a
|

175

Figura 1. Valores promedio y error estndar del nmero promedio de frutos por planta en los
diferentes muestreos.

176

Regresar

8. LITERATURA CITADA

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193

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9. PRACTICAS DE LABORATORIO

M.C. RosaIinda Mendoza ViIIareaI
Profesor Investigador, Laboratorio de Apoyo a Ia Investigacin,
Departamento de Ciencias Bsicas, UAAAN

10.1. Determinacin de Acido Benzico
Mtodo VoIumtrico

MateriaI
Matrz volumtrico de 500 ml
Embudo de separacin de 500 ml
Agitador de vidrio
Tubo de centrfuga
Crisol de porcelana
Matrz erlenmeyer de 400 ml
Bureta de vidrio de 50 ml
Embudo de filtracin
Papel filtro

Reactivos
Solucin saturada de cloruro de sodio
Hidrxido de sodio al 10 %
cido clorhdrico ( 1 + 3 )
Cloroformo
Crisol de porcelana
Matrz erlenmeyer
Alcohol neutralizado
Fenolftalena

Equipo
Agitador oscilatorio
Centrfuga
Estufa de secado
Desecador

Procedimiento
Medir 100 ml de filtrado colocndolo en un embudo de separacin. Neutralizar con HCl (
1+ 3 ) y aadir 5 ml en exceso. Si la muestra contiene protena, sta precipita con el cido pero
no interfiere con la determinacin. Extraer con cloroformo, usando cada vez 70,50,40,30 ml del
solvente. Para evitar la formacin de la emulsin agitar cuidadosamente cada vez. Drenar el
extracto lo ms claro posible.
Transferir los extractos combinados de cloroformo a un crisol de porcelana, lavar el
recipiente varias veces con unos ml de cloroformo y evaporar a sequedad a temperatura
ambiente o a travs de aire seco.
Secar el residuo toda la noche. Disolver el residuo de cido benzico en 30 a 50 ml de
alcohol neutralizado, aadir 2 gotas de fenolftalena, y titular con NaOH 0.05 N.
Cada ml de NaOH 0.05 N = 0.0072 g de benzoato de sodio anhidro.

194

10.2. Determinacin de Acido Benzico
Mtodo espectromtrico

MateriaI
Celdas de vidrio para espectrofotmetro
Matraces volumtricos de 50 ml
Matrz erlenmeyer

Reactivos
cido benzico puro
Solucin saturada de cloruro de sodio
cido clorhdrico
ter etlico
Hidrxido de amonio al 1 %

Equipo
Espectrofotmetro UV
Agitador oscilatorio
Centrfuga

Procedimiento
Mezclar la muestra y moler si es slida. Pesar 10 g y colocarla en un matrz de 500 ml,
aadir 200 ml de solucin de cloruro de sodio saturada, acidificar con HCl
y mezclar. Extraer con ter con porciones de 70, 50,40, 30 ml agitando para asegurar la
extraccin completa. S se forma una emulsin romperla con agitacin o centrifugacin. Drenar
y descartar la fase acuosa. Los extractos de ter combinados, lavarlos con volmenes de 50,
40, 30 ml de HCl ( 1 + 1000 ) y descartar cada fraccin de HCl. Extraer la solucin de ter con
porciones de 50, 40, 30, 20 ml de hidrxido de amonio al 0.1 % y descartar la fraccin de ter.
Neutralizar los extractos de NH4OH con HCl y aadir i ml de HCl en exceso. Extraer la
solucin acidificada con 70, 50, 40, 30 ml de ter.
Diluir los extractos de ter a 200 ml con ter y determinar la absorbancia en un
espectrofotmetro a 267.5, 276.5, y 272 nm. Diluir con ter si es necesario para obtener una
concentracin ptima de 20 120 mg/ L. Promediar la absorbancia entre B y D y restar este
valor de A y C. Determinar la concentracin a partir de la curva estndar de cido benzico,
corrigiendo el valor por las diluciones.
El cido benzico x 1.18 = benzoato de sodio.
Para comprobar si se trata de benzoato de sodio libre deteminar la absorbancia en la
regin de 265 280 a intervalos de 1 nm.S la curva es una lnea recta en sta regin, el
mtodo es aplicable a este producto.

Preparacin de Ia curva estndar
Preparar una solucin de cido benzico en ter que contenga 50 mg/ L. Determinar la
absorbancia de sta solucin recorriendo el rango de longitud de onda entre 265 y 280 nm en
intervalos de 1nm. Graficar la absorbancia contra la longitud de onda, registrando la longitud de
onda por minuto a 267.5nm como punto B, otro minuto a 276.5 nm como punto D, y la mxima a
272 nm como punto C.
Preparar las soluciones de cido benzico en ter de 20,40,60,80,100, 120 mg/L.
Determinar la absorbancia en celdas del espectrofotmetro en los puntos B, C, y D. Para cada
concentracin obtener el promedio de la absorbancia de B y D y restar ste valor del promedio
de A y C, graficar la diferencia de absorbancia contra la concentracin.

195

10.3. Determinacin de Acido SaIicIico
Mtodo VoIumtrico

MateriaI
Matrz volumtrico de 500 ml
Matrz bola fondo plano
Vasos de precipitado
Crisol de porcelana

Reactivos
Cloruro de calcio
Hidrxido de sodio al 10 %
ter etlico
Hidrxido de sodio 0.1 N
Cloruro frrico al 2 %
cido saliclico ( 1 mg/50 ml )
Naranja de metilo

Equipo
Homogenizador
Espectrofotmetro VS
Rotavapor

Preparacin de Ia muestra
Mezclar para homogenizar la muestra y moler. Pesar de 50 a 200 g y colocar dentro de
un matrz volumtrico de 500 ml, aadir agua hasta el volumen del matrz, agitando hasta
uniformidad completa. Aadir de 2 5 g de cloruro de calcio y agitar hasta disolver la sal.
Alcalinizar con hidrxido de sodio al 10 %, dejar reposar por 2 h, con agitacin frecuente y filtrar.

Procedimiento
Transferir a un embudo de separacin 100 ml de extracto, s dicho extracto es alcalino
neutralizar con HCl (1 + 3 ), aadir 2 ml de cido por cada 100 ml de solucin. Extraer 4 veces
con ter usando para cada extracto un equivalente a la mitad del volumen de la capa acuosa. S
la emulsin se forma con la agitacin , aadir un poco ms de ter o centrifugar si la emulsin
persiste. Combinar los extractos de ter , utilizando la dcima parte de agua de acuerdo al
volumen de ter. Lavar varias veces hasta que la capa acuosa produzca un color amarillo al
aadir naranja de metilo al aadir 2 gotas de NaOH 0.1 N. Evaporar gran parte del ter y
transferir a un crisol de porcelana.
Disolver el residuo en pequea cantidad de agua caliente y despus de enfriar agregar
el volumen suficiente en un matrz volumtrico de 50 o 100 ml.
S la solucin no est clara filtrar, tomar alcuotas de solucin al 2 % de cloruro frrico hasta
maximizar el color. Desarrollar color con un estndar de cido saliclico ( 1 mg / 50 ml de agua).
Leer a una longitud de onda de 510 nm en un
espectrofotmetro.

Referencia
Association of Oficial Analytical Chemists. 1980. Official methods of analysis of the associatio of
official analytical chemists. 13 th. Ed. Washington, D.C. 325-6; 336-7

196

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3.3.2. FITOCROMOS Y RESPUESTAS DE LAS PLANTAS A LA LUZ

M.C. Eleno Samaniego Cruz
1

1

Dr. Ratikanta Maiti
2

M.C. Jos G. Ramrez Mezquitic
1

1
2
Departamento de Biologa y Qumica, Universidad de las Amricas, Puebla

3.3.2.1. Introduccin. Se ha dicho que, despus del agua, la luz es el principal factor que
regula la vida de las plantas. A pesar de que es difcil afirmar que un factor sea ms importante
que otro, lo esencial es que, en mltiples formas, la energa radiante es la clave en la historia
vital de las plantas (Benavides et al., 1993).
La luz es esencial para el crecimiento normal de la planta, porque esta provee energa
para fotosntesis y muchas de las seales ambientales que regulan el desarrollo de las plantas
(Thompson y White, 1991). Las seales de luz son tambin empleadas a travs del ciclo de vida
para sincronizar el desarrollo, permitir reacciones apropiadas a la competencia e iniciar ventaja
oportuna a las perturbaciones ambientales. Los procesos ecolgicamente significativos, en los
que hay respuesta o control por sealizacin de luz se incluyen germinacin de semillas,
etiolacin, deetiolacin y establecimiento de plntulas, percepcin de proximidad y evitacin de
sombra, aclimatacin fotosinttica a sombra vegetativa y alta irradiancia, respuestas trpicas,
desarrollo de cloroplastos, crecimiento de tallos, pigmentacin, apertura estomtica, induccin a
floracin y tasa de floracin, senescencia, induccin de dormancia de yemas y tuberizacin
(Smith, 1995; Adrados et al., citados por Flores, 1996).
Dado que las plantas dependen de la luz como fuente primaria de energa, ellas han
desarrollado un sin fin de mecanismos para medir la intensidad luminosa (fluencia o densidad
de flujo), direccin, duracin (fotoperiodicidad) y calidad (balance espectral), los cuales son
componentes bsicos del entorno lumnico de la vegetacin. El echo de que las plantas
sobrevivan y prosperen aun en hbitats donde la radiacin ambiental parece ser distintivamente
favorable, indica que la evolucin ha provedo esos sofisticados mecanismos de sensibilidad.
Las plantas usan tal informacin, en un proceso comnmente referido como fotomorfognesis,
para capturar luz ms eficientemente y adaptar su ciclo de vida a fluctuaciones climticas
(Smith, 1982; Benavides et al., 1993; Vierstra, 1993). Fotomorfognesis significa el desarrollo
normal, la aparicin del color verde caracterstico por la presencia de la clorofila y pigmentos
accesorios en los cloroplastos, la aparicin de hojas, tallos, raz y, en cierto periodo, las
estructuras reproductivas (Benavides et al., 1993). La fotomorfognesis es el control de la
morfognesis por medio de la luz y ocurre a travs de los siguientes fotorreceptores: Fitocromo,
el que absorbe la luz del rojo y rojo lejano (600-800 nm); criptocromo, pigmentos que absorben
longitudes de onda del azul y ultravioleta de onda larga (UV-A, 320 a 480 nm); fotorreceptor UV-
B, absorben radiacin ultravioleta con longitudes de onda entre 280 y 320 nm; y la fotoclorofilina
d, pigmento que absorbe luz roja y azul y que una vez reducido da clorofila d (Salisbury y Ross,
1994; Smith, 1995; Terzaghi y Cashmore, 1995).
El fitocromo es un fotorreceptor que juega un papel central en acoplar seales de luz
externa a una amplia variedad de respuestas de desarrollo en las plantas (Akira et al., 1993).
Estos responden a la intensidad luminosa, calidad espectral y estado de polarizacin.
Colectivamente pueden absorber fotones sobre un amplio rango de longitudes de onda, desde

197

el rojo lejano al ultravioleta, pero la mayor absorcin por el fitocromo est en el rojo y rojo lejano
del espectro electromagntico (Thompson y White, 1991).
Las radiaciones visibles y las del infrarrojo corto son las responsables del crecimiento de
la planta y del calentamiento que ocurre a su alrededor, as como en el suelo. De aqu que sea
importante conocer que parte y que intensidad de la radiacin solar es la de mayor importancia
para el desarrollo de cada especie de cultivo, ya que las plantas realizan sus procesos
metablicos mediante la captacin de energa solar, la cual transforman en energa qumica, la
que a la vez influye en el desarrollo de plntulas, planta adulta, cantidad de hojas, floracin,
fructificacin y la senescencia. Al cambiar la composicin espectral luminosa se puede modificar
el desarrollo de la planta, en algunos casos para incrementar el rendimiento y la calidad de la
produccin agrcola, y en otros ocurre lo contrario.
En este contexto, la finalidad del presente trabajo es mostrar informacin sobre el papel
del fitocromo como un pigmento sealizador de luz que modifica la estrategia del crecimiento y
desarrollo de las plantas, sus actividades fisiolgicas a corto y largo plazo. Adems, como el
manejo de cultivos extensivos en el campo, invernadero o vivero permiten manipular el
ambiente lumnico para obtener plantas con ciertas caractersticas de forma, tamao, sabor,
composicin qumica etc..

3.3.2.2. Fitocromo. El crecimiento y desarrollo son regulados por la interaccin entre el
ambiente y programa endgeno de desarrollo. Desde la germinacin a floracin, la luz controla
ciertos procesos y, por ende, hay diversas respuestas segn diferentes ambientes lumnicos
(Chory et al., 1996). Dentro de las acciones fisiolgicas de las distintas longitudes de onda de la
porcin visible del espectro electromagntico sobre las plantas se encuentran dos mximos de
respuesta fotosinttica para las longitudes de onda de 440 y 680 nanmetros (nm), que
corresponden a la azul violeta y al rojo naranja. La radiacin azul es la que absorben ms
rpidamente los carotenos, y es fundamental en la fase de crecimiento vegetativo de hojas y
tallos; mientras que en la fase de crecimiento generativo, desarrollo de flores y frutos es la
radiacin roja (Adrados et al., citados por Flores, 1996).
La transicin de una planta etiolada a una planta completamente verde es tan dramtico
como ningn evento de desarrollo en el ciclo de vida de las plantas superiores. Durante este
proceso, la expresin de infinidad de genes es afectado de muchas maneras diferentes
(Thompson y White, 1991). Anlisis genticos demuestran que las respuestas a la luz no son
simplemente puntos finales de la seal lineal de las vas de transduccin, sino un resultado de
la integracin de informacin de diversos fotorreceptores y genes de regulacin negativa, a
travs de una compleja red de interaccin entre componentes de sealizacin (Chory et al.,
1996), donde la luz interacta con programas de desarrollo endgeno para modular esas
respuestas de los genes. En ese sentido, la percepcin de la luz es iniciada por al menos tres
fotoreceptores: el fitocromo, con dos formas fotocrmicas, Pr y Pfr, absorben luz roja y rojo-
lejano, respectivamente; el criptocromo un pigmento absorbente de luz azul/UV-A; y un
pigmento absorbente de UV-B (Vierstra, 1993; Terzaghi y Cashmore, 1995; Chory et al., 1996).
Aunque todos los fotorreceptores son importantes en la expresin final de las plantas y
cada uno con respuesta a cierta radiacin o longitud de onda; en este caso slo se har
mencin al fitocromo, el cual responde a la banda rojo/rojo lejano.
El fitocromo, es una holoprotena (cromoprotena) frecuentemente dibujada como una
estructura en forma de Y, formada por una dimerizacin de aproximadamente 120-kD idnticas
(1100 aminocidos) (Figura 1).

198

Figura 1. Estructura propuesta del fitocromo.

Como resultado de las interacciones entre el cromforo y el poliptido, el fitocromo
puede asumir dos formas espectralmente distintas: Pr, el cual tiene una absorbancia mxima en
666 nm, y el Pfr, en 730 nm. Las dos formas son repetidamente fotoinconvertibles, la luz roja
convirtiendo Pr a Pfr y la luz rojo lejano convirtiendo Pfr de regreso a Pr. Uno de los efectos ms
rpidos accionados por el Pfr es una alteracin de la expresin de los genes en la planta,
involucrando la activacin transcripcional o represin de genes especficos.
La imagen detallada de la estructura del fitocromo (Figura 1) muestra dos dominios
biolgicamente esenciales, expresados en plantas transgnicas. El anlisis secuencial de
fitocromos de plantas inferiores ha aumentado la posibilidad de que uno o ms de estos
dominios estn involucrados en un sistema de sealizacin protena kinasa, el cual puede estar
involucrado en la percepcin de la luz azul y en la respuesta de las plantas al etileno,
implicando que las cascadas kinasa puedan ser mecanismos comunes usados por las plantas
en la adquisicin de informacin ambiental necesaria para el desarrollo (Figura 2).
Cromforo
MAPA LINEAL
Dominio
terminal-
C
Dominio
terminal-
N
Aminocido
s
Actividad
biolgica
Actividad
biolgica
Degradacin
Pfr
Integridad
espectral
Dimerizacin Liasa
cromforo
N C
Sitio
cataltico ?
C
r
o
m
f
o
r
o

C
r
o
m
f
o
r
o

100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100

199

Las protenas A hasta la E del fitocromo son sintetizadas como Pr de los genes phyA
hasta phyE. El phyA es altamente expresado en tejidos crecidos bajo la oscuridad; en tanto que
del phyB hasta el phyE son constitutivamente expresados en bajos niveles sin tomar en cuenta
las condiciones de luz. Sobre la fotoconversin a Pfr, la transcripcin del phyA es rpidamente
reprimida, y la protena del fitocromo A es degradada a Pfr por la ubiquitina (UBQ) va
proteoltica, mientras los fitocromos restantes (B-E) permanecen estables. Despus el fitocromo
Pfr activa la protena Kinasa (PK) especfica para cada isoforma del fitocromo, la cual enseguida
altera la transcripcin (positivamente o negativamente) de una multitud de genes requeridos
para fotomorfogensis. Esas funciones de la kinasa pueden ser intrnsicas a la cromoprotena
(e.g. fitocromo en Ceratodon) o pueden estar presentes en protenas separadas. Una de las
principales acciones de la cascada de protena kinasa podra ser inactivar la familia del
represor DET/COP. Este proceso puede entonces iniciar el desarrollo de la plntula a una
planta fotosintticamente competente (Vierstra, 1993).

Figura 2. Mecanismo propuesto de la sntesis y accin de los fitocromos.

Las plantas desarrolladas en la obscuridad contienen al parecer nicamente la forma Pr,
la cual se cree es fisiolgicamente inactiva. Despus de irradiacin con luz roja la forma Pr se
convierte en Pfr, la forma activa, la cual entonces interviene en una serie de eventos
morfognicos (Nakazawa et al.,1991). La aplicacin posterior de radiacin en el rojo lejano
revierte la accin de la luz roja; esta clase de respuestas reversibles son llamadas de induccin-
reversin y son tpicamente estimuladas por radiacin de baja fluencia en tiempos que van de
segundos a horas (Galston et al., 1980).
La capacidad del fitocromo para inteconvertir repetidamente entre formas activas e
inactivas le permiten a este actuar nicamente como un switch regulador de la luz durante el
desarrollo de la planta. Los primeros datos fisiolgicos y bioqumicos sugieren que existen al
FOTOMORFOGNESIS
FIT
B-
FIT
A
/
-

COP/DET
?
?
?
PK
B-E

PK
B-E
`

Aminocid
os
Pr
A
Pfr
A
R
F
R
PK
A

PK
A
`

UBQ
ATP

UBQ
Pr
B-E
Pfr
B-E
F
R
R
Activacin/repres
in

200

menos dos pools de fitocromos, uno que predomina en plantas etioladas y otro en plantas
crecidas en la luz (Vierstra, 1993). En ese sentido Akira et al. (1993) sealan que, en recientes
estudios bioqumicos y de biologa molecular, se muestra la presencia de mltiples especies de
fitocromo, tales como el fitocromo A y B. Se sabe que existen mltiples respuestas mediadas
por el fitocromo, ciertos procesos fisiolgicos que son controlados por la radiacin en la banda
del rojo/rojo-lejano (R/FR).

El balance espectral R/FR (a travs del fitocromo) es determinante en una gran cantidad
de procesos fisiolgicos. A continuacin se anota una lista de ellos.

P R O C E S O S F S O L G C O S

Germinacin de la semilla
Germinacin de esporas
de helechos
Germinacin de esporas
de musgos
Etiolacin
Respiracin de la semilla
Formacin de clorofila
Orientacin de
cloroplastos

nduccin floral
Formacin de vellosidad
Desarrollo floral
Formacin de rizomas
Formacin de bulbos
Expresin del sexo
Cada de las hojas
Dormancia de yemas
Desarrollo de peroxizsmas
Sntesis de flavonoides
Control del crecimiento de
los entrenudos

Coloracin de la cutcula
Desarrollo de cloroplastos
Crecimiento de los cotiledones
nteraccin con fitohormonas y
ritmos endgenos
nfluencia en respuestas
geotrpicas
Control de enzimas como
RUBSCO, ribunucleasa, nitrato
reductasa, peroxidasa,
lipoxigenasa, etc.

FUENTE: Hendricks y Borthwick, 1965; Barcelo, 1979.

A continuacin se muestra informacin sobre el fitocromo en diferentes especies.
Cuando las plantas son expuestas a la luz, ocurren cambios profundos en la expresin
de los genes mientras el aparato fotosinttico es conformado. Un grupo especfico de
fotorreceptores, incluyendo fitocromos y criptocromos juegan un papel importante en esta
transicin, pero los componentes de sealizacin ro abajo involucrados estn empezando a ser
entendidos (Terzagui y Cashmore, 1995; citados por Lpez et al., 1998).
En el caso de los fitocromos estos son una familia de protenas fotorreceptoras que
controlan una serie de respuestas fisiolgicas y de desarrollo de las plantas a los cambios de
ambientes lumnicos (Halliday et al., 1994). Bajo una condicin ambiental natural, las plantas
pasan una muy pequea proporcin de su ciclo de vida en el estado etiolado. Despus de cierto
perodo, ellas estn expuestas a la luz del da y rpidamente deetioladas. El fitocromo es el
fotorreceptor primario para deetiolar y regular muchas otras respuestas en plantas etioladas y
crecidas en la luz (Carr-Smith et al., 1994). El fitocromo A es abundante en plntulas etioladas,
pero bajo luz es fuertemente reducido (Morand et al., 1993). Similarmente en Hipocotilos de
plntulas de Arabidopsis crecidas en la oscuridad muestran gravitropismo negativo, mientras
que en luz roja, este es fuertemente reducido (Lisum y Hangarter, 1993). La calidad de la luz, de

201

una u otra manera altera el nivel de al menos uno de los fitocromos predominantes, lo que
finalmente exhibe fotorregulacin (Stewart et al., 1992).
En plntulas de Thymus vulgaris L. crecidas en la obscuridad y luego expuestas a luz
roja (2.0 wm
-2
) por 30 min. se caus un incremento significativo en los niveles de -cariofileno,
-sitostenol y carotenoides en cotiledones. El fitocromo fotorregula la sntesis de terpenoides, lo
cual cataboliza carbohidratos en cotiledones etiolados (Yamaura et al., 1991). El fitocromo se
involucra en la luz como un mediador de la actividad de la Deacetylvindolina 4-0-
acetiltransferasa, la cual cataliza el paso final en la biosntesis del monoterpenoide indol
alcaloide vindolina, el cual es un agente antitumor usado en tratamientos qumicos de cnceres
humanos (Aerts y De Luca, 1992). En tomate, la fotorregulacin de la sntesis de antocianinas,
es dependiente de la presencia del fitocromo inactivo, ya que este media la induccin de Liasa
Amonia Fenilalanina (PAL) (Venkateshwar et al., 1991). En la modificacin de la produccin de
etileno positiva o negativamente est implicado el fitocromo (Scott et al., 1998).
El fitocromo A y B tienen funciones complementarias en el control de la germinacin,
desarrollo de plntulas y floracin (Reed et al., 1994). En este caso, los fitocromos actan como
sensores del inicio de luz, luego del crecimiento en la obscuridad o como monitores de la
calidad de la luz (relacin R:FR). El fitocromo A slo promueve la germinacin en la luz rojo -
rojo lejano, a travs de la respuesta a la alta irradiancia (Reed et al., 1994). Sin embargo,
Tomoko et al. (1994) sealan que la frecuencia de germinacin de semillas de A. thaliana
parcialmente o totalmente germinadas en la obscuridad fue controlada por el fitocromo B en el
Pfr.
Hay evidencia de que el fitocromo A acta como sensor a la longitud del da en plantas
de da largo, aunque hay interaccin potencial con el fitocromo C. La sensibilidad del proceso
reproductivo al control fotoperidico est directamente alterado por la accin del fotorreceptor
Phy B, quin influye en si ocurre floracin o tuberizacin bajo condiciones no inductivas, tanto
en plantas de da largo como corto (Jackson, 1997). El mismo autor indica que las seales que
mueven de las hojas a los sitios de desarrollo reproductivo no son conocidas; pero hay
evidencia de que las GAs pueden ser importantes y al menos una indicacin preliminar de que
los brasinoesteroides pueden tambin involucrarse en la sealizacin fotoperidica. El fitocromo
A participa en el control fotoperidico de la floracin en trigo y otras plantas de da largo (Carr-
Smith et al., 1994).

3.3.2.3. Estudios de Fitocromos en AIgunas HortaIizas. La germinacin de la semilla de
lechuga es regulada por el fitocromo B, ya que la luz roja promueve la sntesis de GA al inducir
la expresin de Ls3hl o actuar como un sistema de sealizacin que regula la expresin gnica
de enzimas la va biosinttica del GA (Toyomasu, 1998). En el mismo sentido, niveles
endgenos de ABA en semillas de lechuga fotoblstica fueron disminuidos por irradiacin de luz
roja y GA aplicada exgenamente. La luz roja incrementa los niveles endgenos de GA
1
y el
ABA aplicado exgenamente inhibe inductores de germinacin luz roja y GA; un decremento en
ABA puede ser importante para la germinacin (Toyomasu et al., 1994). Tambin, en la mayora
de cultivares de lechuga, la luz roja acta a travs del fitocromo reversible R/RF que promueve
la germinacin total en 20-30 C, pero conforme aumenta la temperatura la germinacin declina
bruscamente; es decir, la accin del fitocromo depende de la temperatura (Fielding et al., 1992).
Por otro lado, la exposicin de semillas de lechuga a ciertos azcares solubles (sucrosa,
glucosa) y/o nitrato durante 10 das extendieron la sensibilidad de las semillas al tratamiento de
luz roja o GA
3
, ya que en ausencia de ellos se presenta una germinacin pobre (Hsiao y Quick,
1997). Asimismo, la exposicin A sales de N inorgnico en el mismo nmero de das, tuvieron
efecto similar y la escotodormancia de la semilla fue relacionada con la disponibilidad de N e
involucr los niveles de Pfr GA
3
endgeno (Hsiao y Quick, 1996).
En papa (Solanum tuberosum ssp andigena), el fitocromo B se involucra en el control
fotoperidico de la tuberizacin, ya que este regula el proceso de desarrollo al prevenir la
formacin del tubrculo en perodos no inductivos (Jackson et al., 1996; Jackson et al., 1998).

202

En plntulas de pepino crecidas en la obscuridad, la ausencia de phyB inhibe la
elongacin del hipocotilo, ya que la forma de absorcin del rojo es un activo regulador positivo
del desarrollo en plntulas etioladas (Saefkow et al., 1995). En la misma especie, el fitocromo
controla la actividad respiratoria de la mitocondria al cambiar el tamao de pool de NAD
(Morohashi et al., 1993); adems, el phyB tiene un papel importante en la induccin de evitar el
sndrome al sombreo junto con otros receptores (Smith et al., 1992).
En sanda la exposicin a rojo lejano (FR) al final del da (EOD) result en un incremento
de materia seca de tallos, peciolos, races y hojas. En general, los brotes tienen ms respuestas
que las races a los efectos regulatorios de crecimiento del FR EOD (Graham y Decoteau,
1997). Los mismos sealan que la capacidad de crecimiento regulada por la luz
fotomorfognica es afectada por la direccin predominante de exposicin y parte de la planta
expuesta. Luz EOD a la planta entera, fue ms efectiva para elongar entrenudos y peciolos y en
la estimulacin de cambios en el ngulo foliar.
El fitocromo FR, no slo induce el movimiento de fotoorientacin de los cloroplastos, sino
que tambin los fija a sitios a los cuales ellos se han movido como resultado de la
fotoorientacin (Kagawa et al., 1994; Salisbury y Ross, 1994). En este caso, se han encontrado
tres vas de seales de transduccin dependientes de cGMP y/o calcio que utiliza el fitocromo
para controlar la expresin de los genes requeridos para el desarrollo de los cloroplastos (e.g.
CAB y CHS) y biosntesis de antocianinas (e.g., CHS (Sintasa naringenina chalcona). Para
mediar las respuestas del fitocromo, los resultados indican un papel del Ca y calmadulina como
reguladores positivos de la expresin de genes CHS en luz UV (Bowler et al., 1997).
Dos fotorreceptores transductores de seales, el fitocromo (absorbente en la banda de
600-800 nm) y el fotorreceptor de luz azul; ambos estn activos en plantas superiores y en
hongos. Las plantas y sus patgenos se han adaptado a travs de la evolucin a fluctuaciones
ambientales y a cambios en el espectro de luz natural. Esto les ha permitido sobrevivir y
florecer, an en hbitats donde la radiacin aparece indistintamente desfavorable. En hongos,
la luz acta en muchos casos como un agente inductor de estrs y resulta en cambios
morfognicos, produccin y germinacin de esporas (Raviv y Reuveni, 1998).

3.3.2.4. Caractersticas de Ios Diferentes Entornos de Radiacin. La intercepcin de
radiacin fotosintticamente activa por el dosel de plantas en el campo ha recibido considerable
atencin durante muchos aos; sin embargo, hasta hace poco tiempo la radiacin
fotomorfognica fue reconocida como un regulador del reparto de fotosintatos entre los
diferentes rganos de la planta y como un factor importante en la adaptacin, supervivencia y
productividad de los vegetales en el campo (Kasperbauer y Hunt, 1992). Al respecto, Bradburne
et al. (1989) sealan que se puede manipular la radiacin incidente de una manera "sencilla
para guiar las respuestas o expresin del programa gentico potencial de las plantas, hacia
donde se desea, de acuerdo a objetivos particulares; pero que es necesario proporcionar un
manejo adecuado al cultivo (control hdrico y de plagas y enfermedades, nutricin mineral y
carbnica, etc.; de lo contrario no habr respuesta al ambiente lumnico y se podr presentar un
estrs particular o varios de ellos.

DoseI de vegetacin naturaI. Tanto para un dosel heterogneo de vegetacin natural (bosque
, matorral, etc.) como para un dosel relativamente homogneo de zonas de cultivo o
plantaciones forestales, la redistribucin vertical y la calidad espectral de la radiacin en el
interior del dosel y bajo el mismo nivel del suelo, es resultante de las propiedades espectrales
de los tejidos vegetales, del arreglo espacial o arquitectura de las plantas (Welles y Norman,
1991).
Un dosel vegetal es una eficiente trampa de luz, ya que captura o absorbe el mayor
espectro de radiacin incidente; sin embargo este puede verse disminuido por las estructuras
epidrmicas (pubescencia, tricomas, cutcula, etc.), las cuales modifican la reflectancia foliar;
igualmente la orientacin de las lminas foliares y la tonalidad clara u oscura de las hojas
permite tener mayor o menor absorbancia de radiacin (Gates, 1980).

203

Una caracterstica distintiva del sombreo por vegetacin es la fuerte modificacin en el
valor del cociente rojo:rojo lejano (R:RL), el cual modifica el fotoequilibrio del fitocromo y
funciona como un detector molecular de la presencia de sombreo por otras plantas,
modificando los diferentes procesos de desarrollo de las mismas (Ballar et al., 1990). Una
funcin importante del fitocromo en plantas cultivadas bajo luz es actuar como un mecanismo
propio para evitar la sombra. Al parecer la luz del rojo lejano elimina el Pfr de las plantas que la
absorben y les permite modificar su patrn de crecimiento para anticipar la posibilidad de
quedar bajo la sombra (Salisbury y Ross, 1994). De aqu que las hojas alteren su morfologa y
composicin, respondiendo adaptativamente al ambiente lumnico, por ejemplo, la cantidad de
nitrgeno decrece exponencialmente acorde al gradiente de intensidad lumnica, la cual acta
como un factor importante para regular la redistribucin de N entre las hojas en diferentes
posiciones. El sombrado por las hojas superiores tambin altera la calidad de la luz, porque la
clorofila absorbe fuertemente la luz roja, pero no la luz rojo lejano. Un gradiente resultante de la
relacin rojo/rojo lejano de la luz en un dosel tendr un papel regulador en las reacciones
controladas por el fitocromo u operacin de dos fotosistemas de fotosntesis en las hojas
(Katsuhiko et al., 1992).
En general, el cociente R:RL tiende a ser ms bajo para los doseles herbceos densos
que para los de un bosque, ya que en este ltimo caso se tiene mayor contribucin de la
radiacin de penumbra. Adems, en el dosel natural la modificacin en la calidad y cantidad de
la radiacin bajo el dosel depende del ndice de rea foliar (LA), de la cantidad de estructuras
que funcionen como objetos opacos (troncos y ramas gruesas) y de las caractersticas
morfolgicas y anatmicas de las hojas (Holmes y Smith, 1977; Fitter y Hay, 1981).

DoseI de un cuItivo. Al contrario de un dosel de vegetacin natural, en donde la distribucin
espacial de los individuos depende principalmente de los factores ambientales, en el dosel de
un cultivo la distribucin espacial depende de la accin humana y es generalmente simtrica y
uniforme (Benavides et al., 1993). La variacin espectral depende de las caractersticas del sitio
de cultivo, como el color del suelo y de prcticas culturales como la variacin en la densidad
poblacional y el uso de cultivos asociados, la orientacin azimutal de los surcos o camas de
siembra, incorporacin de material vegetal al suelo como acolchado, uso de pelculas plsticas
como acolchado de suelo, en tneles e invernadero y el uso de sombras neutras (malla sombra
y cubiertas flotantes). En todos los casos es importante considerar que la modificacin del
balance espectral determina la eleccin entre diferentes estrategias de crecimiento y desarrollo
de las plantas, y que estas son especialmente sensibles en el estado de plntula a las seales
del entorno; igualmente se sabe que las hojas ms recientemente desarrolladas son las ms
sensibles en una planta ya bien establecida en el campo (Kasperbauer, 1988; Kaul y
Kasperbauer, 1988).
En el caso del suelo, este modifica el balance espectral, dando lugar a respuestas
morfognicas especficas que son independientes de los efectos de temperatura, promocin de
actividad microbiana, transmisin de radiacin visible por el perfil del suelo y de la transmisin
interna de radiacin por los tejidos.
En cuanto a densidad poblacional, las plantas sembradas con baja densidad desarrollan
amacollamiento o ramificacin profusa, muestran menos altura y tejidos ms densos, ocurriendo
lo contrario bajo poblaciones de alta densidad (Hamed y Mohamed, 1987). De las
caractersticas ms notables son el alargamiento del tallo y la relacin entre la biomasa
area/biomasa subterrnea. Las plantas de la misma edad y genticamente homogneas
desarrollan tallos ms largos, menor ramificacin o amacollamiento y un sistema radical ms
pequeo, cuando crecen en alta densidad poblacional en comparacin con la respuesta
contraria en densidades bajas de siembra (Kasperbauer y Hunt, 1992). Ballar (1990) y
Kasperbauer y Hunt (1992) demostraron que en ausencia de limitaciones hdricas y de otra
clase, la morfologa de la planta y las caractersticas de reparto interno de los fototosintatos se
encuentran mediadas, a travs del fitocromo, por una respuesta al balance espectral R:FR, el
cual vara de acuerdo a la cercana de otros individuos.

204

La orientacin con direccin norte-sur o este-oeste modifica la calidad espectral, lo cual
puede afectar el crecimiento y rendimiento de las plantas. Esto se ha visto en soya y frijol. El
balance espectral se modifica en N-S con un R:FR ms bajo que en los surcos E-O, lo cual se
expresa en mayor biomasa seca y semilla, ya que hay mayor reparto selectivo de fotosintatos
hacia la parte area (Anderson et al., 1985). En cambio, Hunt et al. (1990) encontraron que el
nmero de ndulos y biomasa fue mayor en soya con surcos orientacin E-O que para los de N-
S.
El balance espectral en la zona del dosel de la planta son posibles de realizar utilizando
acolchados vegetales o de polietileno pintados (Decoteau, 1990) o polietileno y PVC
pigmentados o materiales reflejantes especiales (Quero et al., 1993). Tambin, estos ltimos
autores sealan el concepto de "fertilizacin lumnica, que consiste en la aportacin adicional
de radiacin PAR y/o radiacin en bandas ms estrechas, buscando ciertos balances
espectrales, con la finalidad de incrementar el desempeo fisiolgico y productivo de los
cultivos.
Decoteau et al (1989) investigaron el efecto del acolchado plstico de diferentes colores
sobre el crecimiento y la productividad comercial del tomate, encontrando que el de color rojo
fue el que promovi mayor rendimiento comercial temprano y total y menor cantidad de tejido
foliar; le siguieron en desempeo el plstico negro, el plata y por ltimo el blanco. Tendencia
similar en el cultivo de chile encontraron los mismos autores (1990), en cuanto a crecimiento y
reparto de biomasa, excepto que la cantidad de follaje fue menor para las plantas del acolchado
blanco en comparacin con los acolchados plata, negro y rojo.

Invernaderos. El ambiente de radiacin encontrado en un invernadero difiere del ambiente de
radiacin externo. Los factores involucrados en dicha diferencia son, principalmente, el diseo y
orientacin espacial de la estructura, el tipo de material utilizado en la cubierta y el uso de
iluminacin suplementaria.
En cuanto a la cubierta, algunas pelculas fotoselectivas permiten mejorar el control de
ciertas enfermedades en cultivos de invernadero; por ejemplo, control de Botrytis cinerea al
bloquearse casi totalmente el paso de la radiacin UV en el rango 280-360 nm (entre UV-A y
UV-B), la cual es necesaria para la esporulacin. Otros efectos benficos se relacionan con el
incremento en la calidad de ciertos cultivos, como las rosas, cuyos ptalos se ennegrecen al
someterse a radiacin UV en el rango antes mencionado (Hensinger, 1992).
Tambin, las cubiertas plsticas fluorescentes mejoran la luz roja y la relacin del rojo-
rojo lejano, incrementando as la fotosntesis y afectando la fotomorfognesis. El uso de estos
materiales como cubierta para invernadero aument el rendimiento en peso de jitomate en 20%,
adems de un incremento de un 27% en el nmero de brotes en rosales (Teramura, 1987;
Weiss, 1995).
Decoteau y Graham (1997) indican que alteraciones en la relacin R/FR y luz azul,
debidas a la transmisin de la longitud de onda seleccionada en materiales de cubiertas
plsticas modifican el crecimiento inicial en sanda.
Brown et al. (1992) afirman que en el cultivo de plntulas de chile bajo sistemas intensivos de
produccin (ambientes controlados) los diodos emisores de luz (LEDs) roja pueden ser
apropiados, en combinacin propia con luz de otras longitudes de onda (radiacin azul o rojo
lejano).
Generalmente la iluminacin suplementaria se aplica en regiones o en pocas con baja
irradiancia solar. Al respecto, Black (1992) seala que las lmparas utilizadas en la iluminacin
suplementaria deben de emitir preferentemente radiacin en las bandas de 400-500 nm y 600-
700 nm; igualmente el uso de lmparas que emitan mayor cantidad de luz azul, ya que se
permite un crecimiento ms compacto, reduciendo la longitud y peso del tallo e incrementando
el nmero de ramificaciones y la resistencia de los tallos. La radiacin en la banda del rojo
origina mayor alargamiento de los tallos, pero dada su importancia en la fotosntesis y
fotomorfognesis, no debe de eliminarse de la luz suplementaria (dem).

205

3.3.2.5. Respuestas MorfoIgicas de Ias PIantas en Condiciones de Campo. La calidad
espectral de la radiacin afecta la macro y microestructura de las plantas. En principio,
independientemente de todos los factores responsables de las modificaciones en la morfologa
foliar, existen evidencias de dichos cambios ante estmulos como aplicacin de GAs, diferencias
microambientales de temperatura, irradiancia y fotoperodo o la densidad poblacional.
Por otra parte, se modifica la relacin biomasa area/subterrnea (S/R). Al respecto,
Kasperbauer (1987), Ballare et al. (1990) y Kasperbauer y Hunt (1992b) sealan que la
modificacin en el reparto interno de fotosintatos es una respuesta temprana a dirigida a evitar
el sombreo posterior por otros individuos. Aparentemente las plantas perciben la cercana de
otros individuos captando incluso muy ligeras modificaciones en el balance espectral global de
su microambiente; la modificacin ms importante, dadas las caractersticas espectrales de las
hoja, es el cambio en el balance R:FR. Dicho balance puede ser manipulado con prcticas
culturales o con la aplicacin de materiales especiales como los acolchados de colores
(Kasperbauer, 1992).
La irradiancia y la calidad espectral son determinantes en las caractersticas de la
epidermis foliar. Allard et al. (1991a) encontraron que la densidad estomtica total fue menor en
un 17-24% en plantas sometidas a baja irradiancia (600 mol m
-2
s
-1
de PPFD al medio da) en
comparacin con las plantas sometidas a alta irradiancia (2000 mol m
-2
s
-1
de PPFD),
encontrando adems una reduccin mayor en la superficie abaxial que en la adaxial. Los
mismos autores encontraron un incremento de 25% en la cantidad de espacios areos en el
mesfilo de las plantas (Festuca arundinacea Schreb.) desarrolladas en condiciones de baja
irradiancia en comparacin con plantas desarrolladas en alta irradiancia. Kapesbauer y
Hamilton (1984) encontraron que los cloroplastos de plantas sometidas a balance R:FR bajo
presentaron mayor cantidad de grana que los de plantas bajo la condicin inversa.

3.3.2.6. Respuestas en Productividad y CaIidad. Los determinantes genotpicos de la
productividad y de la calidad de los productos de un vegetal son numerosos. Los procesos
fisiolgicos como la asimilacin de CO
2
y el uso del agua y nutrimentos; el contenido de ciertas
sustancias, la actividad enzimtica, el sabor de un vegetal, entre otros, pueden verse
modificados al ser sometidas las plantas a distintos ambientes lumnicos. En espinaca con luz
roja se han obtenido mayores rendimientos de biomasa vegetativa. Aplicacin de radiacin en el
rojo lejano a plantas de Poa alpina var. Vivipara, al final del fotoperiodo determin una mayor
resistencia al fro.
Se reportan modificaciones significativas en los contenidos de azcares libres, cidos
orgnicos y aminocidos en plantas de tabaco sometidas a diferentes fotoperodos y/o
irradiacin con rojo o rojo lejano al final del da. En la misma especie, con radiacin similar
decrece la calidad comercial (color y contenido de alcaloides). En hortalizas tambin se afecta
el sabor; en papa la formacin de biomasa total, tuberizacin y llenado del tubrculo.

3.3.2.7. ConcIusin. El fitocromo acta como un sealizador lumnico y la informacin captada
por el, le permite a la planta responder, en conjunto con otros factores ambientales (fotoperiodo,
temperatura, agua, nutrientes), con cambios bioqumicos, fisiolgicos y morfolgicos
importantes para el desarrollo, crecimiento y productividad de la misma.
La planta responde a cambios en el balance espectral, de aqu que sea posible
manipular la calidad, cantidad e intensidad de luz, siempre y cuando se ponga atencin a las
prcticas culturales y otras tecnologas de produccin que modifican el ambiente de radiacin
en el dosel de las plantas.
El fitocromo A y B son los sealizadores (Fotorreceptores) de luz ms importantes en la banda
de radiacin del rojo: rojo lejano y sus efectos se encuentran en muchas respuestas y
expresiones de las plantas.

206

3.3.2.8. Literatura Citada

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210

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3.3.3. FOTOREGULACION DEL CRECIMIENTO Y LA FORMA DE LAS PLANTAS EN
AMBIENTES TERRESTRES

1

Dr. Ratikanta Maiti
2

ng. Elyn Bacopulos Tellez
1

1
2
Departamento de Biologa y Qumica, Universidad de las Amricas, Puebla

3.3.3.1. Introduccin. En ausencia de suficiente luz una planta desarrolla un estado conocido
como etiolacin, esto es presenta tallo ahilado con entrenudos muy largos y hojas muy peque
as. De manera relacionada, pero bajo condiciones de alta irradiancia, las plantas que crecen
aisladas son muy diferentes a la encontradas en comunidades vegetales: conforme crece la
competencia por luz la planta tiende a adoptar una forma que recuerda a la etiolacin.
Fotomorfognesis es el trmino que agrupa los factores de los que depende esta "plasticidad" o
capacidad de adoptar diferentes formas de desarrollo y nos habla de la importancia de la
disponibilidad de luz como factor ecolgico en la vida de las plantas.
El fenmeno de fotomorfognesis depende de la presencia de fotoreceptores especficos
que colectan y transducen informacin sobre el ambiente lumnico actual y potencial en un
dosel vegetal. La informacin es utilizada en un proceso elector de la expresin diferencial de
diferentes programas genticos. Lo subsecuente es la modificacin de aquellos caracteres que
dan lugar a la eficiente explotacin de la radiacin solar encontrada en cierto volumen de
espacio.
Los ajustes implicados en este proceso de adaptacin son contnuos y de ellos depende
que los recursos, fotosintatos o reservas de crecimiento, no sean asignados de manera errnea
hacia volmenes de espacio del dosel con alta competencia por la radiacin solar. Desde el
punto de vista darwiniano este uso de la informacin y la canalizacin selectiva de recursos que
se obtiene tienen gran importancia para las plantas.
El objetivo de esta revisin es presentar informacin actualizada acerca de como el
ambiente lumnico determina la accin de diferentes estrategias de desarrollo en las plantas,
haciendo nfasis en la accin de los fitocromos.

3.3.3.2. EI Ambiente Lumnico en Comunidades VegetaIes. En la Troposfera el espectro
energtico natural se encuentra localizado en el rango de longitudes de onda de 290 nm (UV)
hasta aproximadamente 5000 nm (radiacin trmica). El llamado espectro luminoso
corresponde al rango espectral de 400-750 nm, el cual incluye la radiacin fotosintticamente
activa (RFA, 400-700 nm). En la Figura 3.3.3.1 aparece la distribucin espectral de la radiacin
incidente al medioda en campo abierto en el rango de 330-1100 nm.

211

Figura 3.3.3.1. Distribucin espectral de la radiacin incidente en el rango 320-1100 nm al
medioda en campo abierto. Los datos fueron colectados en abril de 1993 en Saltillo, Mxico
utilizando un espectroradimetro L-1800 y un sensor con correccin coseno unido a una fibra
ptica.

En una comunidad vegetal, y dependiendo de la topografa, orientacin y de la
estructura del dosel vegetal la radiacin global que incide sobre las plantas puede
descomponerse en los siguientes componentes (Fitter y Hay, 1981; Holmes y Smith, 1977):

a). Radiacin solar directa.
b). Radiacin difusa del cielo.
c). Radiacin reflejada y transmitida por tejidos vegetales.
d). Radiacin reflejada por el sustrato.

Considerando entonces las posibles combinaciones de estas componentes la
variabilidad en caractersticas del ambiente de radiacin de un dosel es muy amplia y depende,
entre otras cosas, de la cantidad relativa de huecos en el dosel, del nmero de capas de
vegetacin y de la altura de las mismas, de la densidad y arreglo espacial de las plantas, de las
propiedades espectrales de los tejidos vegetales y de la cantidad de rea foliar activa presente
por unidad de rea (ndice de Area Foliar o AF) (Gates, 1980; Holmes y Smith, 1977; Saeki,
1975; Welles y Norman, 1991).
El volumen de espacio de un dosel presenta gradientes de intensidad y balance
espectral de la radiacin en el sentido vertical y horizontal. Los principales cambios se refieren a
la irradiancia de RFA, en el balance entre los rangos espectrales rojo/rojo lejano (R:RL ) y en
la irradiancia relativa del azul (400-490 nm) respecto al rojo (640-700 nm) (A:R).
Las estructuras foliares absorben la mayor parte de la radiacin UV y visible incidente
(excepto en la banda del verde, 490-560 nm) gracias a la presencia de pigmentos como
clorofilas, carotenos, lutena, antocianinas y otros. A causa de la dispersin mltiple y de la
reflexin interna de la radiacin por las paredes celulares y otras estructuras internas, el

212

trayecto de la radiacin es alargado consiguiendose una amplificacin e intensificacin de la
absorcin (Gates, 1980; Vogelmann y Bjrn, 1984). Un dosel vegetal es una trampa de luz muy
eficiente en el rango visible, tal como se aprecia en las Figuras 3.3.3.2 y 3.3.3.3. Estas son
complemento de la Figura 1 y presentan la distribucin espectral de la radiacin en un dosel
vegetal al nivel del suelo. Dado que las tres colectas de datos fueron realizadas con diferencia
de minutos a la hora de mxima irradiancia del da el diferencial en la escala de la irradiancia
espectral representa la capacidad del dosel vegetal para absorber la radiacin. Los datos para
cada uno de los regmenes de radiacin se anotan en el Cuadro 3.3.3.1.

Cuadro 3.3.3.1. Algunos datos descriptivos de los ambientes de radiacin de las Figuras
3.3.3.1, 3.3.3.2 y 3.3.3.3.

rradiancia rradiancia Balance
Ambiente Total RFA R:RL Pfr/P

ncidente 4268.0 1916.0 1.077 0.566
Malezas 278.2 15.4 0.152 0.227
Candelilla 48.86 6.341 0.373 0.387
Acer sp. 415.4 126.3 0.554 0.460

Figura 3.3.3.2. Distribucin espectral de la radiacin bajo un dosel de Acer sp. La altura entre el
nivel del suelo y la parte baja del dosel fue de 2 m. El pico de radiacin observado en el rango
visible, ausente en la grfica de la Figura 3.3.3.3, es la contribucin de la radiacin difusa del
cielo.

213

Figura 3.3.3.3. Rgimen de radiacin bajo dos clases de dosel herbceo. El de malezas
consisti en pastos y leguminosas con una altura promedio de 50 cm. El de candelilla fue un
dosel con altura promedio de 65 cm. Las dos lecturas fueron tomadas al nivel del suelo
utilizando el equipo descrito en la Figura 1.

Adems de las diferencias en irradiancia Total y RFA es notable la cada en el valor del
cociente R:RL en el dosel vegetal. Este hecho depende de una propiedad ptica de los tejidos
vegetales la cual determina que, al contrario de la fuerte absorbancia observada en el rango
visible sobre todo en el rojo y azul, en longitudes de onda superiores a 700 nm exista un
abrupto incremento en la reflexin y transmisin; esta ventana en la absorbancia foliar (en el
rango aproximado de 700 a 1400 nm) en el rojo lejano y el infrarrojo cercano determina la
caracterstica distintiva de la radiacin filtrada o reflejada por vegetacin, esto es:
empobrecimiento relativo del azul respecto al rojo y rojo lejano y modificacin del balance R:RL
respecto al de la radiacin incidente (Holmes y Smith, 1975; Gates, 1980; Fitter y Hay, 1981;
Smith, 1982). La sombra por vegetacin es una sombra selectiva, diferente a las sombras
neutras originadas por objetos opacos o filtros no selectivos.
Porqu la presencia de la ventana en la absorbancia foliar en el espectro de 700 a
1400 nm? Aparentemente es ventajoso desde el punto de vista del mantenimiento de la
temperatura foliar (Gates, 1980). Siendo las plantas organismos carentes de homeotermia
dependen de la absorcin de radiacin y de la transpiracin para mantener la temperatura de
los tejidos en niveles aceptables para la actividad metablica; tal parece que la presencia de
absorbancia en el rango 700-1400 nm determinara un desbalance entre la ganancia de energa
trmica y eliminacin de la misma por procesos como conveccin y transpiracin que involucran
la prdida de agua por la planta.
Por otro lado, pasando a las longitudes de onda mayores a 1400 nm, la absorbancia
foliar vuelve a aumentar rpidamente hasta llegar a absorbancias cercanas a 1 en longitudes de

214

onda de aproximadamente 2000 nm (Gates, 1980). En estos rangos de longitud de onda las
plantas emiten tambin radiacin trmica.
En resumen, las caractersticas pticas de los tejidos vegetales determinan el balance
espectral de la radiacin en los doseles de plantas. Es decir, dicho balance es resultado de
modificaciones en la absorbancia, transmitancia y reflectancia de los tejidos en longitudes de
onda especficas orientadas, al parecer, a eficientar la prdida de agua por transpiracin por
unidad de radiacin asimilada. Por otro lado, la modificacin en el balance espectral tiene
tambin un valor informativo que permite detectar la presencia de competencia activa por el
recurso luz. El como se le asigna valor electivo a esta informacin se describe a continuacin.

3.3.3.3. Percepcin deI Ambiente EspectraI

Percepcin y ReguIacin. La Figura 3.3.3.4 muestra un modelo en el cual los factores
ambientales, sobre todo la radiacin, regulan la actividad de expresin de los genes. En dicho
modelo se presentan las diferentes opciones de crecimiento como parte de una batera
(1,2,...,n) de programas de desarrollo. Cada programa de desarrollo no es ms que el sndrome
adaptativo de la planta a las condiciones ambientales, esto es, el programa de desarrollo es un
conjunto de respuestas y sus interacciones disparadas por la accin de estimulos del entorno.
El programa de desarrollo puede definirse como una secuencia de opciones cuya
eleccin depende, tanto de la informacin que la planta colecta en tiempo real como de la
informacin ya colectada y traducida a ciertos caracteres bioqumicos y estructurales, los cuales
generan un contexto que permite establecer los lmites para las futuras respuestas. Procesos
como la germinacin (Kendrick, 1976; Vzquez y Orozco, 1984), la induccin de floracin
(Fredericq, 1964) y el desarrollo de plstidos (Virgin y Egnus, 1983) son ejemplos de
programas de desarrollo regidos fuertemente por el ambiente lumnico. Por otro lado, para el
caso especfico de la deteccin de sombreo por competidores en comunidades de plantas, el
resultado final es un reparto selectivo de biomasa y modificaciones en el metabolismo (sobre
todo en lo concerniente a la captacin de luz y la fijacin de CO
2
) que aumentan el xito
reproductivo del individuo.
El modelo mostrado en la Figura 3.3.3.4 es extrapolable a otros factores ambientales
como son disponibilidad de agua, fertilidad del suelo, presencia de parsitos, patgenos o
simbiontes, etc. Para todos ellos se ha encontrado que las plantas responden a su presencia,
ausencia o diferentes niveles o calidades de los mismos a travs de la activacin diferencial de
un programa de desarrollo. El fenotipo finalmente observado, la planta viva en accin, ser
entonces el resultado de la accin conjunta e interactiva de esta serie de programas.
La cuestin de la expresin diferencial o selectiva de un programa de desarrollo,
controlada por la irradiancia o el balance espectral, ha sido estudiada en diferentes sistemas
experimentales, tanto in vitro como in vivo utilizando ncleos aislados o fusin gnica con genes
reporteros (Terzaghi y Cashmore, 1995), cultivos celulares o de tejidos (Ni et al., 1987), cultivos
de rganos o clulas aisladas (Assmann et al., 1985; van Volkenburgh et al., 1990), semillas en
germinacin (Scopel et al., 1991; Vzquez-Yanes y Orozco-Segovia, 1990), plntulas etioladas
(Quail, 1991) y plantas completas en cmaras de crecimiento, en invernadero y en campo
abierto (Kasperbauer, 1992; Ballar et al., 1995; Smith, 1995).
Bsicamente son cuatro los fotoreceptores descritos involucrados en las respuestas
fotomorfognicas: protocloroflas y clorofilas (percepcin de RFA), fitocromos (percepcin de
R:RL), criptocromos (percepcin de azul y UV-A) y receptores UV-B (Short y Briggs, 1994;
Terzaghi y Cashmore, 1995; Thompson y White, 1991). Todos estos receptores al parecer
muestran cierto grado de interaccin o traslape en sus acciones, y por ello las respuestas
fotomorfognicas pueden darse como resultado de la accin concertada o antagonista de ms
de un receptor en una misma familia de pigmentos (Furuya, 1993; Halliday et al., 1994; Reed et
al., 1994) o bien de la actividad conjunta de ms de una clase de fotoreceptores, como es el
caso para el fototropismo (Parker et al., 1989; Zimmerman y Briggs, 1963).

215

Figura 3.3.3.4. Modelo de fotoregulacin de la expresin de programas alternativos de
desarrollo. La informacin acerca del ambiente lumnico es transducida por un fotoreceptor.
Dicha transduccin puede verse modificada ms adelante por las caractersticas redox del
ambiente cloroplstico o citoslico. La se al bioqumica generada, que se relaciona al parecer
con fenmenos de membrana y es calcio-dependiente, acta sobre uno o ms genes
reguladores lo cual dispara una secuencia especfica de respuestas que se amplifican en
cascada formando en conjunto un programa de desarrollo. A su vez, dicho programa de
desarrollo genera el contexto dentro del cual ocurren las futuras respuestas de la planta a los
estimulos ambientales. Es decir, la secuencia lineal de eventos fenolgicos depende tanto de
los eventos ambientales actuales como de los pasados que se encuentran plasmados como
historia en forma de estructura espacial, morfologa, reservas proticas, de carbohidratos y de
lpidos en tallos y races, etc.

Adicional a la accin de los fotoreceptores se sabe que algunos procesos como la
fotosntesis se ven sometidos a autoregulacin postranscripcional a travs de la accin de
quinasas que son activadas por sensores redox ubicados en las membranas tilacoides de los
cloroplastos (Allen, 1992). Dicha regulacin redox se extiende al parecer a los procesos de
regulacin de la expresin gnica en los cloroplastos (Danon y Mayfield, 1994) y probablemente
se relacione en ciertos puntos con la accin de los fotoreceptores cloroplsticos. Es posible que
las plantas sometidas a radiacin de distinta calidad espectral o diferente irradiancia desarrollen

216

modificaciones en la morfologa o distintas capacidades productivas no solo por la accin de los
fotoreceptores fitocromos, criptocromos, etc. sino tambin por la accin indirecta de los
diferentes ambientes redox internos desarrollados por las plantas. Este punto ha sido
demostrado en plantas de espinaca desarrolladas en diferentes ambientes espectrales, en
donde los potenciales redox de extractos de peciolos mostraron fuerte correlacin con la
irradiancia y con la actividad de asimilacin de CO
2
(Benavides y Quero, 1997).

La Percepcin deI BaIance EspectraI en eI Rojo-Rojo Lejano. La respuesta de las plantas a
la radiacin en la banda espectral rojo/rojo-lejano (640-700 nm/710-780 nm) se encuentra
mediada por una familia de fotoreceptores citoslicos llamados fitocromos (Smith, 1995). Estos
son cromoprotenas dimricas con dos formas finales fotoconvertibles (Pr/Pfr) asi como una
serie de intermediarios muy inestables. La forma Pr, considerada fisiolgicamente inactiva, tiene
un pico de absorcin in vitro de 665 nm, mientras que la forma Pfr, fisiolgicamente activa, tiene
un pico de absorcin in vitro de 730 nm (Furuya, 1993; Galston et al., 1980). Debido al traslape
con la regin de absorcin de la clorofila, los picos de absorcin del fitocromo in vivo son
ligeramente diferentes, ubicandose aproximadamente en 645 y 735 nm (Kasperbauer et al.,
1964). De manera interesante, en los ltimos a os se ha obtenido evidencia de que la forma Pr
del fitocromo no es inactiva: tal parece que tanto la forma Pr como la Pfr presentan actividad
biolgica, y que esta pudiera ser antagonista (Smith, 1995).
Las plantas desarrolladas en la oscuridad contienen al parecer nicamente formas Pr.
Despus de irradiacin con luz roja aproximadamente un 80% de la forma Pr se convierte en Pfr
la cual interviene entonces en una serie de eventos morfognicos. La aplicacin posterior de
radiacin en el rojo lejano revierte la accin de la luz roja; de hecho a niveles de saturacin con
luz RL se presenta un estado estacionario en donde Pr 97% y Pfr 3%. Esta clase de respuestas
reversibles son llamadas de induccin-reversin y son tpicamente estimuladas por radiacin de
baja fluencia en tiempos que van de segundos a horas (Galston et al., 1980). Sobre la base de
la tasa de fluencia de la radiacin existen tres clases conocidas de respuesta de los fitocromos:
(a) las de muy baja fluencia o VLF, con un umbral de actividad de 10
-4
M m
-2
de R, con un nivel
de saturacin lumnica de 10
-1
M m
-2
de R convirtiendose menos del 0.1% de Pr a Pfr y con la
caracterstica de no reversibilidad Pr Pfr; (b) las de baja fluencia o LF, las clsicas respuestas
reversibles por RL y con niveles de saturacin de 1 mM m
-2
de R; (c) las de alta irradiancia o
HR que requieren iluminacin continua de al menos 1 M m
-2
s
-1
de R o RL pero que son
inducidas de manera ms eficiente por RL (Hartman, 1966; Terzaghi y Cashmore, 1995).
Adems de la diferenciacin espectrofotomtrica de los fitocromos en Pr y Pfr, es posible
distinguir operacionalmente dos tipos de fitocromo: el fitocromo de tejidos etiolados, o Tipo , y
el fitocromo de tejidos verdes al cual se le llama Tipo . Los criterios de diferenciacin entre uno
y otro fitocromo son inmunolgicos, de mapeo de pptidos, secuencia de aminocidos y
diferentes estabilidades para la forma Pfr: muy baja para el Tipo y mayor para el Tipo
(Furuya, 1989; Quail, 1991; Thompson y White, 1991).
Ya que las plantas etioladas han sido el modelo de estudio favorito en los estudios sobre
fotomorfognesis mediada por fitocromos mucho del trabajo realizado lo ha sido sobre el Tipo .
A este respecto Quail (1991) describi el siguiente modelo acerca del comportamiento del
fiticromo Tipo : el fotoreceptor es sintetizado en la forma Pr- y se acumula como una molcula
soluble que se distribuye de manera uniforme en el citoplasma de plantas etioladas,
concentrandose sobre todo en los meristemos (Briggs y Siegelman, 1965). La fotoconversin a
Pfr- por exposicin a la luz origina un declinamiento rpido en los niveles de Pr- ya que el
tiempo medio de recambio de Pfr- es unas 100 veces ms rpido que el de Pr-. Con base a
estos datos se ha caracterizado al fitocromo A (codificado por el gene phyA) de Arabidopsis
thaliana como un fitocromo Tipo (Quail, 1991).
El Tipo es el fitocromo del tejido verde, siendo poco abundante en tejido etiolado, de 1
a 2% de cantidad relativa respecto al Tipo . La forma Pfr- es estable y se conserva en niveles
bajos en los tejidos verdes fotoformados, en donde el Tipo casi no es detectable. El fitocromo
B (phyB) de A. thaliana se encuentra aproximadamente en la misma cantidad en plantas

217

etioladas y fotoformadas por lo que cumple con el criterio operacional de estabilidad para Pfr-.
Por ello el fitocromo B se considera un fitocromo Tipo (Quail, 1991).
Hasta el momento son cinco los miembros conocidos de la familia de los fitocromos
(PHYA, PHYB, PHYC, PHYD y PHYE) en Arabidopsis (Sharrock y Quail, 1989). Al parecer
todos ellos con funciones diferenciales en la regulacin del desarrollo de las plantas (Smith y
Whitelam, 1990). En el tomate se tienen al menos siete formas diferentes de fitocromo,
incluyendo un fitocromo B con dos formas funcionalmente distintas (Pratt et al., 1994). A pesar
de que la mayor parte de los resultados de investigacin se concentran en unas cuentas
especies de plantas, lo cual pudiera restar amplitud a las conclusiones, se pueden asignar con
cierta seguridad ciertas funciones a los diferentes fitocromos (Smith, 1995). En el Cuadro
3.3.3.2 se presenta un resumen de esta informacin.

EI FotoequiIibrio de Fitocromo. Sin consideracin del hecho de que se tienen varias formas
de fitocromo el modelo clsico P = Pr + Pfr es adecuado como punto de partida para el
concepto de fotoequilibrio del fitocromo (Mohr y Oelze-Karow, 1976; Smith, 1986). El modelo
indica lo siguiente: el contenido total de fitocromo de una planta se representa como P y es la
suma de las molculas en sus formas Pfr y Pr. Cuando una planta crece en la oscuridad
entonces P Pr y Pfr es casi cero; al exponer la planta a la luz se inicia la fototransformacin de
Pr y la cantidad de Pfr comienza a elevarse hasta alcanzarse un estado estacionario en donde
cierta cantidad de P es Pfr. Dicho estado estacionario, en donde el componente inestable Pfr se
encuentra en contnuo recambio, es conocido como fotoequilibrio del fitocromo ( =Pfr/P) y
depende tanto de la irradiancia como del balance espectral de la radiacin que recibe la planta
(Holmes y Smith, 1975; Holmes y McCartney, 1976; Jabben y Holmes, 1983). Muchas
actividades de la planta y muchos puntos del desarrollo dependen del fotoequilibrio del
fitocromo (Holmes y McCartney, 1976; Smith, 1986; Kasperbauer, 1992).
Se sabe que el estado dinmico Pfr/P es dependiente del balance R:RL. En
consideracin a ello Smith (1986) present el siguiente modelo para el clculo del valor terico
esperado de Pfr/P en la epidermis del tejido vegetal bajo cierto balance espectral:

Pfr/P = (0.75)(1+(0.35/R:RL))
-1

en donde, con el propsito de uniformizar la informacin, Smith (1986) propuso calcular R:RL
como el cociente de las integrales de densidad de flujo fotnico en los rangos 655-665 nm y
725-735 nm, esto es:

R:RL = (F 655-665 nm)(F 725-735 nm)
-1

en donde F es la integral de densidad de flujo fotnico, o irradiancia fotnica, en M m
-2
s
-1
,
para los rangos espectrales marcados. Los valores de R:RL anotados en el Cuadro 1 se
calcularon en base a esta convencin. Por otra parte, por cuestin de geometra de dispersin y
reflexin interna en los tejidos y espacios intercelulares los valores de Pfr/P pueden variar en los
diferentes rganos e incluso sectores de estos rganos en las plantas (Seyfried y Fukshansky,
1983; Vogelman y Bjrn, 1984; Kasperbauer, 1988), siendo por lo general menores los valores
internos de R:RL en comparacin con los de la epidermis. Este hecho, aunado a la conocida
capacidad de reflexin y transmisin interna de radiacin en los tejidos y el poco volumen de los
mismos explican la extrema sensibilidad de las plntulas a los cambios en los niveles de
radiacin en el rojo lejano (Kasperbauer y Karlen, 1986; Ballar et al, 1990).

218

Cuadro 3.3.3.2. Funciones propuestas de los fitocromos A y B en la fotomorfognesis
(modificado de Smith, 1995, p. 312).

Fitocromo y Funcin ecolgica
Proceso reaccin Respuesta probable

Germinacin PHY A (VLFR) Promocin Disturbios de suelo.
PHY A (FR-HR) nhibicin Dormancia bajo el
mantillo.
PHY B (R:RL) Cuantitativa Deteccin de claros
en el dosel.

Etiolacin PHY A (VLFR) nhibicin de Deteccin de
y extensin superficie.
De-etiolacin
PHY A (RL-HR) nhibicin de Regulacin temprana
extensin del crecimiento.

PHY B (LFR y R-HR) Pr inhibe y Transicin hacia la
Pfr promueve autotrofa.

Desarrollo PHY B (R:RL) Pr promueve Deteccin de
Vegetativo y Pfr inhibe: competencia:
Evitacin de sombreo
Extensin y deteccin de
Floracin proximidad.

PHY ? (R:RL) Control de Deteccin de
expansin radial, espacio sin
crecimiento del sombreo.
rea foliar y
floracin.

Fotoperiodi- PHY A (RL-HR) Percepcin de Sincronizacin con
cidad estacionalidad extensin del
fotoperodo en das
largos.

PHY B (LFR) Percepcin de
das cortos.

Modo de Accin. El modelo ms aceptado considera a los fitocromos como elementos
reguladores fotoreceptivos que funcionan como interruptores moleculares que controlan la
expresin gnica en respuesta a los estimulos luminosos del ambiente (Quail, 1991) (Figura
3.3.3.5). La regulacin de la expresin gnica es compleja y por ejemplo, para el fitocromo A
(phyA) en la planta de soya la va de transduccin para la regulacin gnica involucra, por un
lado, a una familia de protenas-G y una Ca+2/calmodulina durante la induccin de los
pigmentos de los fotosistemas y en el cloroplasto y, por otro lado, a una quinasa y cGMP
(guanosin-monofosfato) durante la induccin de la sntesis de antocianinas (Bowler y Chua,
1994).
Asi como en el proceso fotosinttico la energa contenida en los fotones es transformada
en energa qumica y en potencial reductor, que posteriormente se utilizan para fijar el CO
2
, en
el caso de los fitocromos la energa contenida en los fotones de bandas estrechas del espectro

219

es transformada en informacin acerca del ambiente circundante a la planta. En este contexto la
radiacin tiene un valor energtico y un valor electivo como vehculo de informacin para la
definicin de cierta estrategia de crecimiento.

Figura 3.3.3.5. Modelo simplificado de la accin de los fitocromos.

En la Figura 3.3.3.5 la percepcin de la seal lumnica (principalmente formacin de Pfr
o mantenimiento de Pr) y la transduccin de la misma da lugar a un proceso que culmina en la
expresin diferencial de genes especficos y, finalmente, en la respuesta apropiada en el patrn
de crecimiento y desarrollo de acuerdo al ambiente prevaleciente.
Ya en los primeros trabajos acerca del efecto de los fitocromos se sugiri que los
cambios en la expresin gnica pudieran estar involucrados. El primer reporte del efecto del
fitocromo sobre un producto gnico especfico fue realizado por Marcus (1960) quien demostr
el fotocontrol va fitocromo de la gliceraldehdo 3-fosfato deshidrogenasa en plntulas de frijol.
Posteriormente Mego y Jadendorf (1961) sugirieron que la sntesis de ciertas protenas de los
plstidos estaba mediada por la accin del fitocromo. Schopfer (1977) cit una lista de 52
enzimas con actividad regulada por fitocromo y Lamb y Lawton (1983) citaron una lista de 61
enzimas reguladas por la luz.
El concepto de la accin gnica del fitocromo fue discutido ampliamente en los trabajos
de Tobin y Silverthorne (1985), Kuhlmeier et al. (1987), Silverthorne y Tobin (1987), Thompson
(1988), Smith y Whitelam (1990), Thompson y White (1991), Quail (1991), Furuya (1993) y
Chamovitz y Deng (1996).

Respuestas Fotomorfognicas. Para la plantas establecidas bien sea en ambientes naturales
como en parcelas agrcolas, los papeles ms importantes de la radiacin como determinante
electivo de programas alternos de desarrollo se refiere a las respuestas al sombreo por
individuos competidores y a los cambios en las longitudes relativas del da y de la noche. La
germinacin de semillas, el paso de etiolacin hacia la autotrofa y el establecimiento de la
plntula son procesos en donde la presencia y la cantidad de sombreo son crticos.

220

Germinacin. Sobre todo en el caso de semillas peque as, la movilizacin extensiva de
reservas y el arranque del programa inicial de desarrollo deben de realizarse bajo una
seguridad razonable de que el ambiente ser propicio al crecimiento de la nueva planta. Los
factores con mayor significado en el control de la germinacin de semillas son la presencia de
agua en el suelo, las variaciones en temperatura del suelo, proximidad a la superficie del mismo
y disponibilidad inmediata y futura de radiacin solar: esto es presencia de claros en el dosel,
como los obtenidos a travs de la accin del fuego y otros desastres, plagas y enfermedades y
la accin misma del hombre. El requerimiento de claros en el dosel y alta irradiancia en RFA es
comn sobre todo en especies pioneras de bosques tropicales y templados.
De que manera una semilla ubicada en el suelo, por ejemplo en una selva tropical,
percibe la presencia de una perturbacin aprovechable en el dosel vegetal? Para las especies
pioneras el signo ms fiable parece ser el paso libre de la luz solar y el consiguiente cambio en
la calidad espectral de la radiacin. El incremento pronunciado en el nivel de RFA y Azul y el
giro drstico en el balance R:RL son se ales que, combinadas, determinan la presencia de un
claro en el dosel. De estos tres parmetros del ambiente lumnico parece ser que el balance
R:RL es el ms importante por su funcin electiva a travs de los fitocromos (Smith, 1995),
mientras que la irradiancia en RFA y Azul determinan la capacidad potencial de la planta en
etapas posteriores del desarrollo (Britz y Sager, 1990; Allard et al., 1991; Schmid, 1991).
Efectivamente, la presencia de peque os claros en el dosel, que determinan un aumento en la
irradiancia de RFA y azul, pero que no aumentan significativamente el valor del cociente R:RL
(Stoutjesdijk, 1974) permite la germinacin de las semillas de especies adaptadas al sombreo o
penumbra pero no promueve la germinacin de las semillas de buena parte de las especies
pioneras presentes en el almacen de semillas del suelo. En cambio la presencia de grandes
claros en el dosel, como los observados despus de la accin de incendios u otros agentes
meteorolgicos, de eventos poblacionales de ciertos parsitos, o hasta por la cada de grandes
rboles viejos, los cuales permiten un incremento sustancial en el valor del balance R:RL
durante perodos de tiempo significativos, si lo hace (Vzquez-Yanes y Smith, 1982; Vzquez y
Orozco, 1984).
Etiolacin y Fotoformacin. La reaccin de etiolacin, que es el alargamiento del tallo sin
induccin del aparato fotosinttico, es tpica como respuesta al sombreo en especies de
ambientes con alta competencia como pastizales, zonas de cultivo, claros de bosques y selvas
y zonas perturbadas. No se observa en especies adaptadas a la sombra o de habitats abiertos
como matorrales desrticos o dunas (Grime, 1966).
Diferentes estudios con A. thaliana demostraron que la etiolacin es un patrn de
desarrollo alternativo cuya expresin depende de la represin del patrn de desarrollo normal
(Chory et al., 1989; Deng y Quail, 1992; Wei et al., 1994a; Smith, 1995). Esta represin es
dependiente de una familia de elementos proticos reguladores conocidos como COP (de
Constitutive Photomorphogenesis) entre los cuales COP1, COP8-11 reprimen la fotoformacin
en la oscuridad. La presencia de radiacin y la percepcin de la misma por fitocromos y
receptores de luz azul dan lugar a la represin de los productos COP y disparan el programa de
desarrollo fotomorfognico (Ang y Deng, 1994; McNellis et al., 1994; Wei et al., 1994a). Por otro
lado, la transicin a la autotrofa o fotoformacin depende de la accin de criptocromos,
protoclorofilas y fitocromos (Smith, 1995).
La localizacin celular de las protenas COP es variable segn el ambiente de radiacin
y el tejido de que se trate. COP1 se encuentran de manera constitutiva en los ncleos de las
clulas radicales en donde reprimen de manera contnua la formacin de cloroplastos (Deng y
Quail, 1992), mientras que en los tejidos areos COP1 se localiza en el ncleo cuando la planta
se desarrolla en la oscuridad y en el citoplasma cuando ocurre exposicin a la luz (von Arnim y
Deng, 1994).
De manera interesante los mutantes COP son incapaces de reprimir el patrn de
fotoformacin en la oscuridad. En ausencia total de luz muestran la morfologa estructural y
celular tpica de una planta fotoformada asi como la expresin de genes normalmente inducidos
por la radiacin (Wei et al., 1994b).

221

A partir de trabajos con plantas transgnicas se ha dilucidado algo sobre las
interacciones de los diferentes fitocromos entre ellos mismos y con otros fotoreceptores en los
procesos de germinacin y fotoformacin (Halliday et al., 1994; Reed et al, 1994), y se sabe por
ejemplo que la cantidad de copias activas de los genes que codifican para los fitocromos y su
cromforo es importante en determinar la correcta fotoformacin de la planta (Wester et al.,
1994).
La fotoformacin, que involucra la inhibicin de la etiolacin, sntesis de clorofilas y otros
pigmentos, transicin de etioplastos a cloroplastos, expansin foliar, etc. es un proceso
complejo en donde, adems de la batera de fotoreceptores mencionados, se tienen otros
actores como son reguladores de crecimiento endgenos y exgenos y nutrientes del suelo y
atmsfera, entre otros. Entre estos ltimos el calcio y el fsforo son importantes en el
encadenamiento de las cascadas de se ales celulares. Por otro lado, existen algunos trabajos
en donde se ha verificado la accin, aparentemente independiente pero coincidente en tiempo,
de fitocromos y reguladores del crecimiento, auxinas y giberelinas pero no cido abscico
(Kopcewicz y Madela, 1992), y fitocromos y citoquininas (Flores y Tobin, 1988) en donde se
tienen evidencias que indican que la accin de los fitocromos incrementa la sensibilidad a los
niveles endgenos de los reguladores, como es el caso de la regulacin de extensin del tallo
en Pisum sativum (Weller et al., 1994) o bien se tiene un efecto regulatorio transcripcional del
fitocromo y postranscripcional del regulador del crecimiento (Flores y Tobin, 1988). En realidad
es an un misterio la manera en que se encadenan todas las actividades de regulacin que dan
lugar a las estructuras normales de una planta.
Percepcin de Vecinos y Evitacin del Sombreo. A travs de la percepcin del nivel
R:RL las plantas perciben la cercana o lejana de competidores potenciales. Este hecho ha sido
estudiado sobre todo en especies de cultivo, en pastizales y en viveros o plantaciones
forestales en donde las respuestas a la densidad de siembra o transplante son
economicamente crticas. La cuestin bsica es que en presencia de competidores cercanos el
patrn de desarrollo de las plantas es diferente al de las plantas sin competencia.
Morfolgicamente la respuesta puede caracterizarse como una etiolacin atenuada e involucra
buena cantidad de modificaciones anatmicas y fisiolgicas; dichas modificaciones pueden
observarse en comunidades naturales, en campos de cultivo e incluso bajo condiciones
controladas en laboratorio, invernadero o campo abierto en ausencia de competencia por
nutrientes minerales.
Bajo condiciones controladas las respuestas a la presencia de competidores pueden
imitarse modificando el balance R:RL de la radiacin incidente sobre la planta. De estos
estudios se sabe que la tasa de alargamiento del tallo se relaciona de manera lineal con la
proporcin calculada Pfr/P y que la pendiente de la curva es mayor para las especies de
habitats abiertos y menor para las especies adaptadas a la sombra (Smith, 1995). Sobre todo
para las plantas no adaptadas al sombreo la respuesta es inmediata, observandose cambios en
la tasa de extensin del tallo, despus de alterar el balance R:RL, en tiempos tan cortos como
15 minutos (Smith, 1982).
De las caractersticas modificadas por la densidad poblacional las mas notables son el
alargamiento de los entrenudos, la direccin del crecimiento y la distribucin vertical (como
resultado de una mayor o menor dominancia apical) y radial de las ramificaciones del tallo
primario, el amacollamiento, el reparto selectivo de biomasa area/subterrnea (A/S) y de
fotosintatos hacia las estructuras reproductivas.
En presencia de alta densidad poblacional, y controlando las variables que determinan la
disponibilidad de nutrientes, agua y CO
2
, las plantas de la misma edad y genticamente
homogneas desarrollan tallos ms largos, menor ramificacin o amacollamiento, un sistema
radical ms peque o (alto A/S) y menor cantidad de estructuras reproductivas no abortivas en
comparacin con la situacin de baja densidad poblacional (Smith, 1982; Kasperbauer y Hunt,
1992; Ballar et al., 1995). Tambin, en el caso de frutales como el manzano ha sido
demostrado que las capas inferiores del dosel (con bajo R:RL y menor irradiancia de RFA y
azul) muestran menor cantidad de ramificaciones, menor densidad de flores y entrenudos ms

222

largos en comparacin con las capas superiores del dosel no expuestas a radiacin filtrada
(Baraldi et al., 1994). Para todas estas respuestas se tiene evidencia de regulacin por
fitocromos (Ballar et al., 1995; Smith, 1995) si bien al parecer tambin es importante una
componente regulada por la irradiancia total o de RFA (Smith, 1982) y por la irradiancia de azul
(ino, 1990).
Cual es el significado ecolgico de estas respuestas? Aparentemente, de acuerdo al
nicho de radiacin solar que las plantas explotan, estas tienen un sistema sensorial que permite
evaluar la situacin presente y la futura potencial en cuanto a la competencia por luz. En el caso
de las plantas que normalmente crecen en sitios con alta competencia el sistema es
particularmente sensible y permite modificar, de manera rpida, el reparto de recursos hacia los
sitios de crecimiento en donde sea ms probable explotar un volumen de espacio sin
competencia. Actualmente no se dispone de datos acerca del desempeo de mutantes
fotomorfognicos en comunidades naturales, pero se tienen los datos de Ballar et al. (1994,
1995) y Casal y Snchez (1994) quienes utilizaron plantas transgnicas, con modificaciones en
la expresin de fitocromos que daban lugar a respuestas retardadas a la presencia de
competidores, en monocultivos a campo abierto. Los resultados de dichos estudios fueron
sorprendentes: al aumentar la densidad de siembra en los monocultivos transgnicos los
individuos ms peque os fueron suprimidos rpidamente por sus vecinos de mayor tama o. En
los monocultivos del genotipo silvestre, por el contrario, se encontr una relacin inversa entre
la magnitud de la respuesta morfolgica y el rango del individuo en la jerarqua de tama os de la
poblacin. Como resultado, las desigualdades en tama o de los individuos fueron atenuadas y el
aumento en densidad no origin la eliminacin de individuos peque os a favor de los ms
grandes.

3.3.3.4. ConcIusin. La habilidad de las plantas para percibir la cantidad y calidad de la
radiacin las capacita en la explotacin de volmenes de espacio altamente variables en el
tiempo. La accin concertada de los fotoreceptores conocidos: fitocromos, clorofilas y sus
precursores, criptocromos y receptores UV-B, imparte valor electivo a la radiacin y da lugar al
inicio de la accin de un patrn de desarrollo adecuado a la condicin ambiental imperante
permitiendo, hasta cierto punto, ir un paso adelante en la adecuada movilizacin de los
recursos, sean estos provenientes de reservas o sean fotosintatos de translocacin actual. Las
principales respuestas morfognicas en donde se ven involucrados los fitocromos son en el
control de la germinacin de ciertas especies, en la etiolacin y fotoformacin y en las
respuestas a la cercana y al sombreo por competidores.
Si bien la lgica selectiva de la habilidad fotoformativa parece obvia es grande la
carencia de datos experimentales fuera de las situaciones de laboratorio o ambientes
controlados. Hace tan solo 15 aos uno de los autores consultados escriba acerca del
fitocromo mencionando que prcticamente era un rea dominada del conocimiento biolgico,
sin embargo el descubrimiento de las varias clases de fitocromo y sus poco conocidas
interacciones con otros reguladores del crecimiento y desarrollo, y esto en corto tiempo y en un
nmero muy limitado de especies vegetales, nos habla de nuestra gran ignorancia.
Asimismo se sabe poco de la interaccin de la radiacin como agente formativo y la de
otros factores ambientales como temperatura, humedad, concentracin de CO
2
y otros gases,
etc. Si bien conocemos con profundidad muchos puntos en el nivel molecular, es sorprendente
nuestro desconocimiento de los detalles acerca de como interaccionan los programas de
desarrollo de una planta. Es seguro que del llenado de estas lagunas de conocimiento surgirn
grandes oportunidades tanto en el manejo agronmico como en el de poblaciones o
comunidades naturales.

223

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APENDICE

Resumen de Respuestas SeIeccionadas de Ias PIantas a Ia Radiacin.

En la columna de la izquierda se anotan los caracteres considerados los cuales cubren un
rango amplio de respuestas bioqumicas y morfolgicas. Las dos siguientes columnas de
izquierda a derecha agrupan las respuestas observadas bajo un mismo nivel de irradiancia pero
variando el balance espectral hacia el rojo (R) o hacia el azul (A). Por otro lado las dos
columnas de la derecha agrupan las respuestas observadas variando la irradiancia sin modificar
el balance espectral de la radiacin.

227

MSMA
RRADANCA
MSMA
RRADANCA
MSMO
BALANCE
ESPECTRAL
MSMO
BALANCE
ESPECTRAL
CARACTER SESGO AL
ROJO (R)
SESGO AL
AZUL (A)
BAJA
RRADANCA
ALTA
RRADANCA
#
cloroplastos
y
mitocondrias
(-) (+) (-) (+)
cantidad de
grana en
cloroplastos
y crestae en
mitocondrias
(=)
no diferencia
(=)
no diferencia
(-)
mismo efecto
que
fotoperodo
corto
(+)
mismo efecto
que
fotoperodo
largo
contenido de
almidn foliar
(-) (+) (-)
depende de
balance C/N
(+)
depende de
balance C/N
contenido de
N por unidad
de rea foliar
(-) (+) (-) (+)
Densidad de
RUBSCO
(mg por cm
2

)
(-) (+) (-) (+)
asimilacin
de CO
2
por
unidad de
rea
(+) (-) (-) (+)
asimilacion
de CO
2
por
unidad de
biomasa
seca foliar
(=) (-) (=) (+) (-) (+)
capacidad
(velocidad de
transporte de
electrones y
de
regeneracin
de RubP
(-) (+) (-) (+)

228

MSMA
RRADANCA
MSMA
RRADANCA
MSMO
BALANCE
ESPECTRAL
MSMO
BALANCE
ESPECTRAL
CARACTER SESGO AL
ROJO (R)
SESGO AL
AZUL (A)
BAJA
RRADANCA
ALTA
RRADANCA
potencial
redox
(+) (-) (+) (-)
nivel de
saturacin
por luz
(-) (+) (-) (+)
sensibilidad
a los UV
(-) (+) (-) (+)
respiracin
por unidad
de biomasa
(-) (+) (-) (+)
apertura
estomtica
en ausencia
de estrs
hdrico
(-) (+) (-) (+)
rea foliar
especfica
(m
2
por g de
biomasa
seca)
(+)

(-)

(+)

(-)

rea foliar
promedio por
lmina foliar
(+) (-) (+) (-)
longitud de
entrenudos y
peciolos
(+) (-) (+) (-)
biomasa
raz/
biomasa
area
(-) (+) (-) (+)
biomasa
fresca area
(+) (-) (-) (+)

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