[Tcnicas empleadas para la conservacin de microrganismos]

Carolina Campos Peralta B1-5-201103 Matricula 00591

I.B.Q. Claudia Paloma Ramos Mayo 6 Marzo 2012

Introduccin Existen diversos mtodos para conservar cepas microbianas, a lo largo de la historia cientfica se han ido mejorando los procesos de conservacin, algunos son sencillos y otros pueden presentar algunas dificultades, por eso es necesario conocer sus ventajas y desventajas, de modo que podamos darnos cuenta cual es el mejor o el ms adecuado para nuestro objetivo que es conservar microrganismos. El objeto fundamental de estos mtodos es minimizar cambios que se produzcan en las cepas y son de apoyo para los trabajos de microbiologa. Los tres objetivos para una correcta conservacin son: 1. Pureza 2. Viabilidad 3. Estabilidad Los mtodos de conservacin pueden clasificarse en tres grandes grupos: Mtodos de eleccin o de conservacin a largo plazo Mtodos alternativos Mtodos restringidos Se comentaran cada uno de estas tcnicas y se espera obtener un resultado ptimo para discernir el mejor mtodo, el ms apto y/o el ms accesible.

Mtodos de eleccin o de conservacin a largo plazo Estos mtodos de conservacin se clasifican en dos grupos: congelacin y liofilizacin. Son los ms aceptados porque paralizan el crecimiento de las clulas microbianas y por consecuencia garantizan la estabilidad gentica. Generalmente son los ms utilizados por su fcil realizacin viabilidad y confiabilidad pero sin embargo tienen algunas desventajas las cuales se mencionaran ms adelante Congelacin En este mtodo se congelan las clulas en suspensin en un liquido con un agente crioprotector, lo que provoca la paralizacin del metabolismo celular por la disminucin de agua disponible adems que conserva los microrganismos a temperaturas inferiores a cero grados centgrados entonces el agua se congela y no hay crecimiento de microrganismo, sin embargo se pueden recuperar aumentando la temperatura. La figura uno muestra un ejemplo de la tcnica por congelacin, en este caso congelan clulas madres para su posterior utilizacin, sin embargo este mtodo tiene sus ventajas y desventajas las cuales se muestran en la Tabla 1.

Figura 1. Congelacin de clulas.

Tabla 1. Ventajas y desventajas del mtodo de congelacin.

Ventaja

Desventaja

requieren En la tabla 1. Se puede observar algunas *Mxima estabilidad *Se gentica. aparatos especiales ventajas y desventajas de utilizar este (costosos). mtodo, y aunque tiene una ptima *Evita la aparicin * Probabilidad a que estabilidad gentica y un porcentaje de generaciones se produzcan fallos mnimo de errores, y por consecuencia sucesivas. durante el aumento evita la aparicin de generaciones de la temperatura. sucesivas, tambin tiene sus desventajas como el hecho de utilizar aparatos especiales costosos para que se lleve a cabo el proceso, sin embargo se pueden llegar a mltiples improvisaciones pero con el riesgo de que estos fallen, tambin existe la probabilidad que se produzcan errores durante el descongelamiento ya que podran perder sus caractersticas por eso se utiliza a temperaturas adecuadas para la descongelacin. Liofilizacin En este mtodo tampoco hay crecimiento debido a que se les quita el agua mediante la liofilizacin, esta se consigue por sublimacin del hielo de las clulas. En la liofilizacin se congela primero el agua libre de las clulas posteriormente se elimina, pero sin la necesidad de subir la temperatura, lo que en algunas ocasiones podra afectar a la viabilidad del microrganismo.

Tabla 2. Ventajas y desventajas del mtodo de liofilizacin.

Ventaja *Estabilidad gentica alta. *Comodidad para el almacenamiento. *Largo tiempo de conservacin.
Figura 2. Liofilizadores para realizar la liofilizacin.

*Alto equipo.

Desventaja coste inicial

del

* Subir la temperatura podra afectar la viabilidad del microrganismo.

Aunque no tiene tan alta estabilidad gentica como en el mtodo de congelacin es una tcnica aceptadamente confiable. En la figura dos muestran los distintos tipos de liofilizadores los cuales sirven para extraer la humedad, y al no haber agua disponible no podra seguirse reproduciendo. Cada modelo vara en la temperatura y en el tipo de microorganismo. Cabe mencionar que estos equipos son muy costosos lo que es una desventaja y an ms porque son modelos especficos en la utilizacin, lo que es una desventaja, como menciona la tabla dos, tambin el incrementar la temperatura podra afectar la viabilidad del microorganismo. Aunque dentro de las ventajas se considera que la estabilidad gentica es alta, tambin cabe mencionar que es un mtodo a largo plazo lo que nos indica que la clula se mantendr a menos que se manipule de alguna manera.

Mtodos alternativos Estos como su nombre lo dice son los mtodos que se utilizan cuando no se pueden emplear las tcnicas de eleccin a largo plazo debido a la escases de equipos necesarios o porque la cepa no resista la conservacin por estos mtodos. En estas tcnicas alternativas se es necesario conservar el microrganismo utilizando varios de estos mtodos. Conservacin por transferencia peridica Aqu los organismos permanecen activos durante el proceso. Consiste en la inoculacin de microrganismos en un medio de cultivo adecuado, la incubacin a una Temperatura adecuada para obtener crecimiento, se guardan en lugares adecuados. Este proceso se repite a intervalos que garanticen como resultado un cultivo fresco antes de la prdida del anterior.
Tabla 3. Ventajas y desventajas del mtodo de conservacin por transferencia peridica.

Ventaja

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Desventaja *Las clulas excretan productos txicos lo cual provoca envejecimiento y muerte celular. *Hay alternancia en las generaciones. *Caractersticas de las clulas vara.

Conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de mar estril Es una tcnica que da altos porcentajes de viabilidad por lo que es muy utilizado en diversos tipos de microrganismos tanto hongos filamentosos como en levaduras y algunas bacterias. Consiste en suspender en agua estril unas cuantas clulas del cultivo que se quiere conservar.
Tabla 4. Ventajas y desventajas del mtodo de conservacin por suspensin en agua destilada o de mar estril.

Ventaja *Estabilidad gentica alta. *Comodidad para almacenamiento. *Largo tiempo de conservacin.

Desventaja *Alto coste inicial del equipo. el * Subir la temperatura podra afectar la viabilidad del microrganismo.

Los mtodos alternativos son de gran ayuda ya que son diferentes opciones para la conservacin de cepas, se utilizan en lugar de los mtodos mencionados anteriormente sino son los ms adecuados. Existen ms desventajas las cuales se mencionan en las tablas 3 y 4. Sin embargo en el caso de las tcnicas de conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de mar estril tiene la ventaja de ser un mtodo con alta estabilidad gentica y largo tiempo de conservacin lo que lo hace una tcnica relativamente aceptada.

Mtodos restringidos Son tcnicas que no se emplearon habitualmente. Estos mtodos consisten en la eliminacin del agua disponible para las clulas, sin embargo son necesarios a la hora de conservar organismos especficos los cuales no resisten la liofilizacin o congelacin. Desecacin en papel filtro Consiste en utilizar un papel muy absorbente el cual se le adhiere una solucin densa de clulas y se deja secar en condiciones estriles. Se puede utilizar tambin un liofilizador realizando un procedimiento llamado desecacin lquida sin que previamente hubiera congelacin de las clulas.

Tabla 5. Ventajas y desventajas del mtodo de desecacin en papel filtro.

Ventaja *Conserva clulas por desecacin lo que provoca la conservacin de sus caractersticas.
Figura 3. Mtodo de conservacin por desecacin en papel filtro

Desventaja *Un vaco excesivo ocasiona una congelacin incontrolada de las clulas (en caso de utilizar el liofilizador).

Desecacin en suelo, arena, silicagel, etc. Los microrganismos productores de esporas se pueden conservar durante bastante tiempo gracias a los sustratos que la protegen al desecar.

Tabla 6. Ventajas y desventajas del mtodo de conservacin por desecacin en suelo.

Ventaja *Protege a las clulas *Es muy efectiva para microrganismos productoras de esporas.
Figura 4. Mtodo de conservacin por desecacin en suelo.

Desventaja *Ineficiente para los microrganismos no aptos al sustrato que utiliza.

Desecacin en bolitas de alginato Es un mtodo eficaz ya que las clulas se encuentran en un molde de alginato y la eliminacin del agua se hace por medio de soluciones hipertnicas. Estas bolitas de alginato se pueden conservar en tubos hermticamente cerrados a temperaturas de 4 y 18C.
Tabla 7. Ventajas y desventajas del mtodo de conservacin por desecacin en bolitas de alginato.

Ventaja *Implementado para la conservacin de algas y clulas vegetales. *La temperatura de conservacin es desde 4 y 18C hasta los -80C.
Figura 5. Mtodo de conservacin por desecacin en bolitas de alginato.

Desventaja

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Desecacin en sal gorda para halobacterias En este mtodo las clulas se mezclan con sal y se dejan desecar espontneamente. La desecacin no es total pero las clulas dejan de multiplicarse debido al insuficiente nivel de agua.
Tabla 8. Ventajas y desventajas del mtodo de conservacin por desecacin en sal gorda para halobacterias.

Ventaja *Desecamiento espontaneo * Las clulas detienen su multiplicacin.

Desventaja *La desecacin no es total (queda cierto porcentaje de agua).

Por ultimo estn los mtodos de restriccin que son especficos lo que quiere decir que utilizan microorganismos nicos no son muy utilizados pero cuando se utilizan son muy efectivos, estos cuatro mtodos consisten en la eliminacin por desecacin. Cada uno tiene sus ventajas y desventajas, como se mencionan en las tablas 5, 6, 7,8. La mayora son ventajas muy favorables como en el caso del mtodo de conservacin de bolitas de alginato que pueden tener una conservacin desde 4C y 18C, o en el mtodo desecacin en sal gorda para halobacterias. El problema o desventajas es que cada mtodo se utiliza para determinadas situaciones y que a veces la desecacin puede no ser total y afecte de alguna manera nuestro cultivo como es el caso del mtodo por desecacin en sal gorda, as mismo son ineficientes para microorganismos aptos para para los microorganismos no aptos al sustrato que utiliza, que significa que el sustrato no le da los nutrimentos necesarios para que el cultivo se desarrolle, este es el caso del mtodo por desecacin en suelo.

Conclusin Para finalizar, ya que hablamos de los distintos tipos de mtodos para conservacin de microorganismos y determinamos sus diferencias as como meditamos sus ventajas y desventajas, se podra decir que el mtodo ms certero es el de congelacin dentro de la clasificacin de las tcnicas de eleccin o de conservacin a largo plazo, ya que es uno de los procesos ms sencillos, y si se utiliza de manera correcta se podra emplear para diversas especies de microorganismos, sin embargo no hay que menospreciar a las otras tcnicas porque tambin son requeridas para otros tratamientos o trminos.

Referencias Dolores M.; Uruburu F.; La conservacin de cepas microbianas. Coleccin Espaola de cultivos tipo (CECT). Universidad de Valencia.