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UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA


FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE ARARAQUARA

RODRIGO CAVASSIM

AVALIAO

IN

VITRO

DE

DIFERENTES

CONCENTRAES, TEMPOS E MODOS DE APLICAO DO CIDO CTRICO NA BIOMODIFICAO RADICULAR. ANLISE POR MEIO DE MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA

ARARAQUARA 2008

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA


FACULDADE DE ODONTOLOGIA DE ARARAQUARA

RODRIGO CAVASSIM

AVALIAO

IN

VITRO

DE

DIFERENTES

CONCENTRAES, TEMPOS E MODOS DE APLICAO DO CIDO CTRICO NA BIOMODIFICAO RADICULAR. ANLISE POR MEIO DE MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA

Dissertao Graduao

apresentada em

ao

Programa da

de

Psde

Periodontia,

Faculdade

Odontologia de Araraquara, da Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, como parte dos requisitos para obteno do Ttulo de Mestre em Periodontia. Orientador: Prof. Dr. Jos Eduardo Cezar Sampaio

ARARAQUARA 2008

Cavassim, Rodrigo Avaliao in vitro de diferentes concentraes, tempos e modos de aplicao do cido ctrico na biomodificao radicular. Anlise por meio de microscopia eletrnica de varredura / Rodrigo Cavassim. Araraquara : [s.n.], 2008. 120 f. ; 30 cm. Dissertao (mestrado) Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Odontologia. Orientador: Prof. Dr. Jos Eduardo Cezar Sampaio 1. Camada de esfregao 2. Colgeno 3. cido ctrico 4. Microscopia eletrnica de varredura I. Ttulo.
Ficha catalogrfica elaborada pela Bibliotecria Marley Cristina Chiusoli Montagnoli CRB 8/5646 Servio Tcnico de Biblioteca e Documentao da Faculdade de Odontologia de Araraquara / UNESP

RODRIGO CAVASSIM

AVALIAO IN VITRO DE DIFERENTES CONCENTRAES, TEMPOS E MODOS DE APLICAO DO CIDO CTRICO NA BIOMODIFICAO RADICULAR. ANLISE POR MEIO DE MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA

COMISSO JULGADORA

DISSERTAO PARA OBTENO DO GRAU DE MESTRE

Presidente e Orientador .........................................Prof. Dr. Jos Eduardo Cezar Sampaio 2 Examinador........................................................Prof. Dr. Gibson Luiz Pilatti 3 Examinador .......................................................Prof. Dr. Joni Augusto Cirelli

Araraquara, 24 de maro de 2008.

DADOS CURRICULARES

RODRIGO CAVASSIM

Nascimento

22/05/1980

Prudentpolis PR

Filiao

Agostinho Cavassim Janete Maria Cavassim

1999/2003

Graduao em Odontologia Universidade Estadual de Ponta Grossa UEPG

2005/2007

Curso de Especializao em Periodontia Associao Brasileira de Odontologia ABO Regional de Ponta Grossa PR

2006/2008

Curso de Ps-Graduao em Odontologia rea de Periodontia, Nvel Mestrado, Faculdade de Odontologia de Araraquara - UNESP

DEDICATRIA

queles, que, mesmo distncia, estiveram ao meu lado todos os dias e que, somente por eles e com eles eu consegui chegar at aqui!
Meus pais: Janete e Agostinho Minha irm: Daiane

A quem, sempre presente ao meu lado, me deu conforto, carinho e compreenso em todos os momentos que necessitei, trazendo a alegria fundamental para concluso deste trabalho!
Minha namorada: Diulie Graziela

Esta a forma mais singela e sincera de agradec-los por todo o apoio e incentivo durante essa jornada. A vocs meu muito obrigado!!!!!!!

AGRADECIMENTOS
A Deus
Pela sabedoria com que conduziu meus passos durante essa jornada. Nos momentos mais difceis de minha trajetria, senti Sua presena guiando-me e orientando-me.

Ao professor, orientador e amigo Jos Eduardo Cezar Sampaio. Por ter, desde o princpio, acreditado e confiado a mim a difcil tarefa de conduzir esta linha de pesquisa. A toda a famlia Sampaio pelos agradveis momentos de descontrao que certamente tornaram mais prazerosa minha estada nesta cidade.

Ao Prof. Amauri Antiquera Leite e sua famlia por terem aberto as portas de sua casa, me recebendo quando cheguei em Araraquara. Com certeza, grandes amigos!

Aos professores da Disciplina de Periodontia da Faculdade de Odontologia de Araraquara: Adriana, Carlinhos, Egbert, lcio, Joni, Jos Eduardo, Silvana e Ricardo, sempre incentivando a pesquisa e desenvolvimento da rea. Faculdade de Odontologia de Araraquara UNESP, nas pessoas da Diretora Profa. Dra. Rosemary Adriana Chirici Marcantonio e do seu ViceDiretor Prof. Dr. Jos Cludio Martins Segalla, pela competncia com que conduziram esta faculdade nos ltimos anos.

Ao ex-coordenador do curso de Ps-Graduao em Periodontia, Prof. Dr. Carlos Rossa Jnior, e atual coordenadora, Prof. Dr. Silvana Regina Perez Orrico, pela competncia e dedicao como conduzem este curso de Ps-Graduao. Aos professores do Curso de Ps-Graduao da Faculdade de Odontologia de Araraquara - UNESP, pela ateno dedicada. Ao Carlinhos e ao colega de doutorado Eduardo Ishi de Paula, pela ajuda e orientao com a anlise estatstica. A todos os funcionrios do Departamento de Diagnstico e Cirurgia, em especial, Cludia, Maria do Rosrio, Regina Lcia, Terezinha, Zez e Estr, pelos momentos agradveis que me proporcionam durante nosso convvio. Aos funcionrios da Seo de Ps-Graduao, Alexandre, Mara, Sylvia e Rosngela, por serem sempre prestativos e atenciosos. Aos funcionrios da Biblioteca, em especial Maria Helena que prontamente tirou todas as dvidas em relao s normas de redao. Aos meus colegas de turma: Aline, Ana Lcia, Marina, Roberta, : Romeu, Rubens, Sabrina, Wagner e Yeon. nossa equipe de trabalho: Andra Abi Rached, que muitas vezes deixou seus afazeres e sua famlia para auxiliar no preparo dos espcimes e na microscopia. Dani Zandim, que deixou seus afazeres para auxiliar no preparo dos espcimes Fbio Renato Manzolli Leite, que desde minha chegada em Araraquara, orientou e auxiliou nos propsitos desta pesquisa.

A todos os amigos do curso de Ps-Graduao e da disciplina de Periodontia. Ao Sr. Sebastio Ansio Dametto, tcnico em microscopia eletrnica, do Instituto de Qumica do Campus de Araraquara UNESP, pela ajuda na obteno das fotomicrografias. Ao Lus, pela amizade e ajuda na revelao das fotomicrografias. Aos Amigos que mesmo distncia, me deram foras, algumas broncas e conselhos. Aos pacientes que cederam seus dentes ao Banco de Dentes da FOAr/UNESP, dando condies para realizao desta pesquisa. A toda a equipe envolvida na criao e manuteno do Banco de Dentes da FOAr/UNESP, na pessoa da coordenadora Prof. Dr. Maria Rita Brancini de Oliveira. CAPES, pelo apoio financeiro. A todos aqueles que direta ou indiretamente contriburam para a realizao deste trabalho.

Muito Obrigado!

Tua caminhada ainda no terminou... A realidade te acolhe dizendo que pela frente o horizonte da vida necessita de tuas palavras e do teu silncio. Se amanh sentires saudades, lembra-te da fantasia e sonha com tua prxima vitria. Vitria que todas as armas do mundo jamais conseguiro obter, porque uma vitria que surge da paz e no do ressentimento. certo que irs encontrar situaes tempestuosas novamente, mas haver de ver sempre o lado bom da chuva que cai e no a faceta do raio que destri. Se no consegues entender que o cu deve estar dentro de ti, intil busc-lo acima das nuvens e ao lado das estrelas. Por mais que tenhas errado e erres, para ti haver sempre esperana, enquanto te envergonhares de teus erros. Tu s jovem. Atender a quem te chama belo, lutar por quem te rejeita quase chegar a perfeio. A juventude precisa de sonhos e se nutrir de lembranas, assim como o leito dos rios precisa da gua que rola e o corao necessita de afeto. No faas do amanh o sinnimo de nunca, nem o ontem te seja o mesmo que nunca mais. Teus passos ficaram! Olhes para trs... mas v em frente pois h muitos que precisam que chegues para poderem seguir-te.

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SUMRIO

RESUMO ......................................................................................................... 10 ABSTRACT ..................................................................................................... 11 INTRODUO ................................................................................................. 12 REVISO DA LITERATURA ........................................................................... 17 PROPOSIO ................................................................................................. 40 MATERIAL E MTODO .................................................................................. 42 Obteno dos dentes ............................................................................ 43 Preparo dos espcimes ......................................................................... 43 Tratamento dos espcimes ................................................................... 45 Observao dos espcimes em microscopia eletrnica de varredura .. 49 Anlise das Fotomicrografias ................................................................ 53 Anlise Estatstica ................................................................................. 58 RESULTADO ................................................................................................... 59 DISCUSSO .................................................................................................... 71 CONCLUSO .................................................................................................. 84 REFERNCIAS ............................................................................................... 86 ANEXOS ........................................................................................................ 105

Cavassim R. Avaliao in vitro de diferentes concentraes, tempos e modos de aplicao do cido ctrico na biomodificao radicular. Anlise por meio de microscopia eletrnica de varredura [dissertao mestrado]. Araraquara: Faculdade de Odontologia da UNESP; 2008.

RESUMO
A raspagem cria smear layer que pode obliterar os tbulos dentinrios e recobrir a raiz dental, podendo acarretar atraso no reparo de feridas periodontais. Diversas substncias so utilizadas para biomodificao radicular com objetivo de remover tecido mineralizado e expor as fibras colgenas da matriz dentinria, favorecendo a quimiotaxia e migrao de clulas do ligamento periodontal. Este estudo avaliou diferentes concentraes, modos e tempos de aplicao de cido ctrico na biomodificao radicular. Dentes humanos tiveram duas reas de 3x2 mm delimitadas apicalmente a juno cemento-esmalte com a utilizao de fresa cilndrica, instrumentadas com 50 movimentos de raspagem utilizando curetas de Gracey 5/6 e em seguida, espcimes foram obtidos e divididos em 6 grupos (45 amostras/grupo): soro fisiolgico (controle), cido ctrico (0.5%, 1%, 2%, 15% e 25%), com tempos de 1, 2 ou 3 minutos para cada grupo, nos modos de aplicao: a) aplicao passiva (bolinha de algodo); b) frico suave (pincel); c) frico vigorosa (bolinha de algodo), com renovao da soluo a cada 30 segundos. As amostras foram submetidas desidratao em concentraes crescentes de lcool etlico e HMDS, sendo em seguidas metalizadas e levadas para observao em microscopia eletrnica de varredura. Um examinador treinado, calibrado e cego avaliou as fotomicrografias obtidas utilizando o ndice de Remoo de Smear Layer proposto por Sampaio em 1999, atribuindo escores de 1 a 8. A anlise estatstica foi realizada comparando-se as propores dos escores obtidos, e mostrou que a concentrao de 25 % aplicada por frico suave no tempo de 3 minutos recomendada para utilizao do cido ctrico na biomodificao radicular. Palavras-chave: Camada de esfregao; colgeno; cido ctrico; microscopia eletrnica de varredura.

Cavassim R. An in vitro evaluation of the root surface biomodification by the use of different concentrations, modes and application times of citric acid. A scanning electron microscopy evaluation [dissertao mestrado]. Araraquara: Faculdade de Odontologia da UNESP; 2008.

ABSTRACT
The root scaling produces a smear layer which contains microorganisms and toxins that obliterates the dentinal tubules and covers the root surface, affecting the periodontal healing process. Different substances have been used to promote root biomodification with the purpose of creating the demineralization of the root surface and the collagen fibrils exposure. The aim of this study was to evaluate different concentrations, modes and application times of citric acid in the root biomodification. Human teeth had an area of 3x2mm delimited from the apical to the cement-enamel junction. This area was scaled, with 50 strokes by hand instruments, to produce smear layer. The specimens were divided in 6 groups. (45 samples/group): physiologic solution (control) and citric acid (0.5%, 1%, 2%, 15% and 25%). The application time was 1, 2and 3 to each group. The application modes were: a) topic application, with cotton pellets; b) brushing, with a soft brush; c) burnishing, with cotton pellets. In all modes, the solution was renewed every 30. The samples were submitted to ethylic alcohol and HMDS dehydration and then they were evaluated using the scanning electron microscopy. A blind and trained examiner evaluated photomicrographs based on Sampaios index (1999). Data were statistically analyzed by means of a binomial test (p0.05). The statistical analysis showed that the best results were achieved with the 25% concentration applicated by brushing for 3 minutes. Thus, theses parameters are the recommended for root biomodification with the citric acid. Keywords: Smear layer; collagen; citric acid; scanning electron microscopy.

Introduo____________________________________________________________13

INTRODUO
A doena periodontal multifatorial, sendo os

microrganismos presentes na placa bacteriana os principais fatores etiolgicos locais da doena periodontal (Le et al.74, 1965). A placa d origem ao clculo dental, depsito duro mineralizado o qual se adere s superfcies duras da cavidade bucal, sejam elas dentrias ou no. Na superfcie do clculo h sempre uma camada de placa bacteriana no mineralizada, um reservatrio de bactrias responsveis pela inflamao dos tecidos periodontais6,73,85. A raspagem e alisamento radicular (RAR) o

procedimento clnico utilizado rotineiramente no tratamento da doena periodontal. Objetiva a descontaminao da superfcie radicular por meio da remoo dos depsitos mineralizados ou no, podendo ser realizada com instrumentos manuais, rotatrios, snicos e ultra-snicos71-73. A RAR um procedimento eficaz na remoo do clculo dentrio, no entanto, independente da maneira como realizado, este procedimento leva formao de uma camada com aproximadamente 2 a 15 m de espessura, formada por restos orgnicos e inorgnicos, entre eles, raspas de dentina e cemento, clculo dental, fragmentos de processos odontoblsticos e bactrias, recebendo a denominao smear

layer10,14,17,41,56,60,86,91,104. A smear layer depositada sobre a superfcie radicular no fornece condies aceitveis para a regenerao dos tecidos periodontais. Segundo alguns autores, podendo at atuar como

Introduo____________________________________________________________14

um reservatrio de bactrias e como nicho para recolonizao da bolsa periodontal, bem como dificultando a adeso de fibroblastos e retardando o processo de reparo, propiciando a formao de epitlio juncional longo e impedindo o restabelecimento de nova insero conjuntiva2,3,49,65,80,91. Estudos sugerem que a superfcie radicular exposta doena periodontal sofre alteraes que impedem a adeso celular88-91,93. Essas alteraes incluem alteraes na composio e densidade minerais;106,107 contaminao com bactrias e endotoxinas encontradas, tanto na superfcie radicular, quanto penetrando nos tbulos

dentinrios2,3,5,42,43,54,130. Apenas os procedimentos de raspagem e alisamento radicular no so suficientes para eliminao de todos os fatores negativos relacionados doena periodontal, os quais favorecem a formao de epitlio juncional longo, que atua como barreira fsica entre o tecido conjuntivo gengival e a superfcie radicular impedindo a formao de nova insero conjuntiva nessas superfcies radiculares61,93,94. Assim, diferentes tratamentos qumicos com agentes desmineralizadores vm sendo propostos na literatura como coadjuvantes ao tratamento periodontal na descontaminao radicular, promovendo uma biomodificao desta superfcie1,12,40,47,53,56,63,66,67,76,95,105,114,124,126. Os objetivos principais desta terapia consistem na remoo da smear layer e exposio de fibras colgenas de dentina, formadas principalmente por colgeno tipo I, que possui atividades quimiotticas para fibroblastos e propicia estabilizao do cogulo pela formao de uma rede de

Introduo____________________________________________________________15

fibrina13,77,90,100. Consegue-se, assim, um ambiente mais propcio para formao de nova insero conjuntiva, impedindo a migrao do epitlio juncional longo35,37,82. Na biomodificao radicular, o cido ctrico foi um dos primeiros agentes utilizados apresentando bons resultados em relao a nova insero conjuntiva, cementognese e neoformao ssea, sendo contra-indicado por alguns autores devido ao seu baixo pH, responsvel pela citotoxicidade4,26,27,29,36,37,66,68,69,82,83,95-98. O Cloridrato de tetraciclina tambm uma substncia de baixo pH proposta para biomodificao radicular1,123 e apresenta, alm da capacidade de remoo de smear layer, uma adsoro superfcie dental com liberao lenta por at 14 dias30. Alm disso, outra vantagem, como promover adeso e proliferao de fibroblastos pode ser observada com a utilizao desta substncia8,31,50,59,67,112,126. Como alternativa s substncias de baixo pH, foi proposta a utilizao do EDTA15, que possui capacidade de remoo da matriz inorgnica da dentina pela quelao de ons clcio e no por desmineralizao como ocorre com as substncias mencionadas anteriormente9,12-15,18,20,46,63,105,111. Outra substncia com propriedade quelante semelhante ao EDTA o citrato de sdio. Apesar de no serem encontrados estudos onde ele empregado na biomodificao radicular, o citrato de sdio apresenta caractersticas citotxicas para fibroblastos gengivais menos

Introduo____________________________________________________________16

acentuadas do que o cido ctrico justificando sua utilizao para este fim68. Ele o anticoagulante de escolha para bolsas de sangue, pois apresenta menor grau de toxicidade celular em comparao ao EDTA39. Outro fator importante, que o citrato de sdio apresenta uma ligao menos estvel ao on clcio do que o EDTA, sugerindo uma reao mais controlada, podendo tornar sua remoo da superfcie dental mais fcil84. No entanto, um estudo comparativo in vitro entre cloridrato de tetrraciclina, EDTA, citrato de sdio e cido ctrico mostrou que superfcies biomodificadas com este ltimo, apresentaram melhores resultados quanto adeso de elementos sangneos70. Este resultado promissor porque a firme adeso de um cogulo superfcie radicular bastante favorvel para a obteno de regenerao periodontal. Diante das evidncias cientficas apresentadas e na ausncia de estudos conclusivos sobre o assunto, propomos um estudo experimental com objetivo de verificar em altas e baixas concentraes, qual a melhor forma e tempo de aplicao do cido ctrico na biomodificao radicular.

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REVISO DA LITERATURA
Os primeiros trabalhos de biomodificao radicular datam do final do sculo XIX e utilizaram cidos para desmineralizao da superfcie radicular122. Estudos posteriores em ces, realizados por Register95 e Register, Burdick96,97 apontaram a utilizao do cido ctrico aplicado por 2 ou 3 minutos como substncia capaz de favorecer cementognese e formao de nova insero. Por outro lado, Stahl, Froum113 (1977) no conseguiram obter esses resultados com aplicao passiva em dentes humanos removidos em bloco 16 semanas aps o tratamento. Garret et al.47 (1978) constataram, em estudo in vitro, que a remoo dos depsitos mineralizados seguida da aplicao passiva de cido ctrico (pH 1) por 3 minutos permitiu observar, por meio de microscopia eletrnica de varredura (MEV), tbulos dentinrios

obliterados por smear layer. Estudos em ces Beagle, realizados por Crigger et al.37 (1978), Nilvus et al.83 (1980) e Nilvus, Egelberg82 (1980), avaliaram a utilizao de cido ctrico associado a uma espuma de gelatina reabsorvvel (Gelfoam Pharmacia & Upjohn Co., EUA) em

procedimentos regenerativos. Segundo os autores, a utilizao de Gelfoam no influenciou na formao de nova insero conjuntiva com resultados favorveis ao tratamento com cido ctrico, observados por meio de anlise histolgica e histomtrica.

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Os bons resultados observados em ces estimularam Cole et al.35 (1981) a testar a utilizao do cido ctrico como coadjuvante no tratamento cirrgico periodontal de 61 dentes distribudos em 2 grupos, sendo que no primeiro grupo os dentes foram tratados apenas por raspagem e alisamento radicular (RAR) (grupo controle) e os dentes do segundo grupo foram tratados por RAR seguida de aplicao passiva de cido ctrico com bolinhas de algodo por um tempo de 3-5 minutos e irrigao com soluo salina por 1 minuto. Mesmo o ganho de insero tendo sido maior para o grupo tratado com cido ctrico (mdia=2,1 mm) em comparao ao grupo controle (mdia=1,5 mm), este ganho no foi clinicamente relevante, bem como a metodologia utilizada no permitiu estabelecer se houve formao de nova insero ou formao de epitlio juncional longo. Outro estudo realizado por Renvert, Egelberg98 (1981) avaliou a influncia do cido ctrico no tratamento de 13 dentes com evidncias radiogrficas de defeitos infra-sseos e profundidade de sondagem residual aps raspagem. Os autores utilizaram um modelo de boca dividida com cirurgias retalho, sendo os dentes do grupo teste submetidos instrumentao manual e aplicao passiva de cido ctrico (pH 1) com bolinhas de algodo, tendo como controle apenas instrumentao. Os resultados mostraram que os dentes tratados com cido ctrico obtiveram maior ganho sseo e ganho clnico de insero

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que o grupo controle, no entanto sem diferenas estatisticamente significantes. No ano seguinte, Albair et al.4 selecionaram pacientes com periodontite moderada e avanada, cujos dentes estavam indicados para exodontia. Esses dentes foram raspados e alisados, e em seguida receberam aplicao passiva de cido ctrico (pH 1.0) com bolinhas de algodo por 5 minutos. Como controles, foram utilizados os dentes contralaterais, os quais receberam apenas raspagem e alisamento radicular. As exodontias foram realizadas entre 6 e 15 semanas e as razes divididas ao meio para observao em MEV e em microscopia ptica. Os resultados mostraram remoo incompleta do cemento em todas as superfcies radiculares avaliadas com formao de nova insero sobre este cemento no removido ou neoformado em seis dos nove espcimes avaliados. Por outro lado, todos os espcimes do grupo controle apresentaram formao de epitlio juncional longo. Com objetivo de melhor avaliar o potencial de induo de regenerao do cido ctrico, Polson, Proye89 (1982) utilizaram 12 prmolares extrados de macacos. Esses dentes tiveram o tero coronrio instrumentado e tratado com cido ctrico (pH 1.0) aplicado por frico suave por 3 minutos e reimplantados imediatamente. Os resultados histolgicos iniciais no mostraram fibras inseridas na superfcie radicular, apenas uma rede de fibrina recobrindo a raiz trs dias aps o reimplante. Somente aps vinte e um dias que se pode observar nova insero

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conjuntiva superfcie radicular, no entanto sem neoformao cementria e com lacunas de reabsoro ao longo da superfcie radicular. Em outro trabalho com humanos, Common, McFall Jr.36 (1982) avaliaram clnica e histologicamente o efeito do tratamento com cido ctrico (pH 1, aplicado por frico durante 2 minutos) na cicatrizao de retalhos posicionados lateralmente em incisivos inferiores indicados para exodontia por motivos protticos. A anlise histolgica, aps 5 meses, mostrou formao de novo cemento e fibras colgenas dispostas paralelamente superfcie radicular, com algumas regies de fibras orientadas perpendicularmente e inseridas no cemento depositado. Cogen et al.33 (1983) avaliaram os efeitos do tratamento da superfcie radicular na viabilidade e migrao de fibroblastos humanos marcados radioativamente em 50 dentes comprometidos

periodontalmente, sendo esses divididos em grupos tratados com cido ctrico (pH 1.0 por 3 minutos) sem raspagem radicular; apenas raspagem radicular; raspagem radicular seguida de aplicao de cido ctrico (pH 1.0, por 3 minutos) e espcimes que no receberam nenhum tratamento. Nenhum dos grupos, independente do tratamento, apresentou efeitos adversos na viabilidade das clulas. Entretanto, somente as superfcies instrumentadas, com ou sem aplicao de cido ctrico, proporcionaram condies para adeso e crescimento radicular enfatizando assim a importncia da descontaminao mecnica da superfcie radicular.

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Fernyhough, Page45 (1983) avaliaram a capacidade de crescimento e sntese de fibroblastos em meios de cultura contendo razes instrumentadas e tratadas com cido ctrico (pH 1, por 3 minutos) ou fibronectina. Ambos os tratamentos mostraram-se compatveis com o crescimento de fibroblastos. Kashani et al.62 (1984) observaram respostas histolgicas semelhantes, sem diferenas de cicatrizao, aps procedimento cirrgico em dentes humanos indicados para exodontia por doena periodontal que receberam apenas instrumentao manual, e dentes que receberam instrumentao manual e aplicao de cido ctrico (pH 1.0 por 5 minutos). Polson et al.91 (1984) caracterizaram a formao e remoo de smear layer, com uso de tratamento qumico da superfcie radicular, em um estudo com dentes instrumentados que receberam aplicao passiva de cido ctrico (pH 1, por 3 minutos) e dentes apenas instrumentados. A observao da superfcie dos espcimes, por meio de MEV, mostrou a presena de uma superfcie irregular sem indcios de abertura de tbulos dentinrios nos espcimes instrumentados e tbulos dentinrios expostos livres de smear layer, com dentina peritubular de aspecto fibrilar denso nos espcimes previamente instrumentados e tratados com cido ctrico. Na tentativa de melhorar os resultados obtidos com o cido ctrico na biomodificao radicular, Willey, Steinberg127 (1984)

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utilizaram aps a aplicao dessa substncia de pH 1 por 3 minutos, a incubao de espcimes de dentina desprovidos de cemento em solues contendo elastase, hialuronidase, pronase e colagenase. Ao examinar os espcimes por meio de MEV, os autores constataram que a colagenase favoreceu uma maior exposio de colgeno da superfcie radicular em relao desmineralizao isoladamente, devido remoo de componentes da matriz extracelular, inclusive hidrolisando algumas das fibrilas colgenas. Baseados em estudos anteriores89,90, os quais mostraram que a presena de uma camada de fibrina na superfcie radicular tratada precede a insero de fibras colgenas, Caffesse et al.26 (1985) avaliaram o efeito da biomodificao radicular com cido ctrico e aplicao de fibronectina em dentes de ces Beagle tratados cirurgicamente. Foram testadas a aplicao de cido ctrico (pH 1.0 de forma passiva por 3 minutos), fibronectina, cido ctrico e fibronectina, e apenas o

procedimento cirrgico, sendo que em todos os grupos os dentes receberam raspagem e alisamento radicular. Os resultados mostraram diferenas estatsticas significantes entre os tratamentos testados, sendo que as reas tratadas com cido ctrico e fibronectina apresentaram nova e maior insero em comparao aos outros grupos testados. Na tentativa de estabelecer parmetros para a aplicao do cido ctrico, Sterrett, Bain115 (1987) analisaram a topografia da superfcie radicular comparando a aplicao passiva com bolinhas de

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algodo durante 5 minutos e renovao 3 vezes por minuto, com aplicao por frico vigorosa das bolinhas de algodo. As

fotomicrografias obtidas dos espcimes que receberam frico mostraram tbulos dentinrios abertos com fibras colgenas densas expostas, da mesma forma que os espcimes tratados passivamente tambm apresentaram tbulos abertos, mas com poucas fibras expostas. Com objetivo de melhor avaliar a cicatrizao de cirurgias a retalho aps biomodificao radicular com cido ctrico, Moore et al.79 (1987) realizaram um estudo duplo-cego controlado em modelo de boca dividida em humanos. Os dentes testes receberam aplicao por frico vigorosa de cido ctrico (pH 0.6 durante 3 minutos, com renovao da soluo a cada minuto). Os resultados do ponto de vista clnico, bem como estatstico, sugerem que as diferenas na cicatrizao entre os stios tratados ou no com cido ctrico no foram significantes. Para melhor compreender os efeitos da biomodificao radicular aps cirurgias a retalho, Steinberg, Willey114 (1988) avaliaram os estgios inicias da formao do cogulo em dentes extrados, tratados e reimplantados. Foram utilizados dentes com e sem doena periodontal, avaliando-se superfcies de ligamento periodontal saudvel; superfcies acometidas por doena periodontal; superfcie radicular com doena periodontal instrumentada com instrumentos manuais; superfcie com doena periodontal instrumentada e tratada com frico suave (uso de pincel macio) de cido ctrico (pH 1, por 3 minutos). Os resultados

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mostraram que a formao inicial de cogulo deu-se mais rapidamente nas superfcies tratadas com cido ctrico, sugerindo que a presena de fibras colgenas possa ter influenciado a obteno deste resultado. Em contrapartida, superfcies acometidas por doena periodontal e

instrumentadas no apresentaram formao de cogulo. Ao investigar a migrao de clulas epiteliais sobre superfcies radiculares, Larjava et al.69 (1988) encontraram resultados que mostraram influncia da desmineralizao radicular com cido ctrico (pH 1, por 5 minutos) na direo de migrao do tecido epitelial, causando um atraso na migrao do epitlio entre o tecido conjuntivo e a superfcie radicular na maioria dos espcimes, fato que pode favorecer o processo de nova insero conjuntiva. Com objetivo de validar os resultados obtidos115 em 1987, Sterrett, Murphy116 (1989) utilizaram 20 espcimes, obtidos de 10 dentes comprometidos periodontalmente, para aplicao de cido ctrico (pH 1 por 5 minutos) por frico vigorosa e aplicao passiva, sendo a soluo renovada a cada 30 segundos em ambos os grupos. Ambas as formas de aplicao mostraram-se capazes de remover a smear layer, no entanto as fibras colgenas apresentaram aspecto mais denso no grupo tratado com frico. Fardal, Lowenberg44 (1990) utilizaram 120 fragmentos de superfcies radiculares afetadas e no afetadas por doena periodontal para avaliar in vitro a migrao, adeso e orientao de fibroblastos. Os

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fragmentos submetidos raspagem e alisamento, receberam tratamento com cido ctrico (pH 1, por 3 minutos) ou EDTA 18% (por 30 minutos). Segundo os autores, o cido ctrico associado instrumentao manual mostrou-se eficaz na criao de uma superfcie biologicamente

compatvel, comparvel a superfcies no afetadas pela doena periodontal. A comparao, por meio de microscopia eletrnica de varredura (MEV) da morfologia dentinria radicular de dentes submetidos raspagem e tratamento com cido ctrico (pH 1) ou cloridrato de tetraciclina 0,5% (pH 3.2) aplicados por 5 minutos, resultou em uma exposio maior de tbulos dentinrios e exposio de fibras colgenas com o cido ctrico, sendo a tetraciclina incapaz de remover smear layer e expor fibras colgenas em todos os espcimes avaliados no estudo de Hanes et al.53 (1991) Diante dos resultados favorveis obtidos com o cido ctrico at ento, Sterrett et al.120 (1991) aplicaram diferentes

concentraes de cido ctrico (0, 0.1, 1, 8, 24, 56 e 80%) na superfcie dentinria de molares bovinos. A quantidade de ons clcio removida foi avaliada por meio da absoro dessa substncia depositada na superfcie radicular com bolinhas de algodo e posterior diluio em tubos de ensaio com gua destilada. A soluo obtida foi ento avaliada por

espectrofotometria de absoro atmica. O cido ctrico 24% (pH 1.42) promoveu maior remoo de ons clcio, medidos em partes por milho

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(ppm), possivelmente associada com uma maior exposio de fibras colgenas. Assim, tempo e modo de aplicao foram avaliados por Codelli et al.32 (1991) em 10 dentes extrados por doena periodontal, os quais tiveram a superfcie instrumentada com curetas Gracey 11/12 e comparadas as aplicaes por frico vigorosa de soluo salina por 5 minutos (controle), aplicao passiva de cido ctrico por 3 ou 5 minutos e frico vigorosa de cido ctrico por 3 ou 5 minutos. A avaliao por meio de microscopia eletrnica de varredura mostrou diferentes caractersticas morfolgicas, sendo alcanados melhores resultados por meio da aplicao por frico no tempo de 3 minutos. Os autores observaram exposio de uma rede de fibras colgenas compatveis com completa desmineralizao. Por outro lado, a aplicao por 5 minutos promoveu uma hiperdesmineralizao com desnaturao das fibras colgenas. Procedimentos de regenerao tecidual guiada,

associando-se biomodificao radicular com cido ctrico, foram avaliados em ces por Caffesse et al.27 (1991) e em humanos por Handelsman et al.52 (1991). No estudo em ces foi utilizado um modelo de boca dividida, no qual foi avaliada a aplicao de cido ctrico (pH 1, por 3 minutos) e fibronectina autgena seguidos de colocao de uma membrana no reabsorvvel (Gore Tex, WL Gore and Associates), comparando utilizao de membrana sem tratamento da superfcie radicular (controle). Esse estudo demonstrou que os dentes tratados com cido ctrico e

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fibronectina antes da colocao da membrana mostraram resultados discretamente melhores que o grupo controle, porm sem diferenas estatsticas. O estudo em humanos52 avaliou o condicionamento radicular com soluo saturada de cido ctrico (pH 1 por 3 minutos) associado a colocao de uma membrana de PTFE comparando utilizao de membrana sem condicionamento radicular em stios com profundidade de sondagem persistente de 7 mm e defeito sseo de 4 mm aps terapia bsica. Observou-se melhora estatisticamente significante nos

parmetros de profundidade de sondagem e nvel de insero 6 meses aps a avaliao inicial, mas sem diferenas entre os grupos. A morfologia da superfcie radicular de terceiros molares submetidos raspagem e aplicao de uma soluo saturada de cido ctrico ou de cloridrato de tetraciclina (100 mg/mL) por 30, 60, 120 ou 240 segundos, aplicados por gotejamento ou frico foi avaliada por Labahn et al.66 (1992). Os resultados da anlise por meio de microscopia eletrnica de varredura mostraram maior abertura dos tbulos dentinrios com a utilizao do cido ctrico, sendo o grau de desmineralizao diretamente proporcional ao tempo de aplicao, porm sem diferenas quanto forma de aplicao. No mesmo ano, Wen et al.125 avaliaram descritivamente o nmero e a rea de superfcie dos tbulos expostos obtidos por diferentes tcnicas de aplicao de cido ctrico. Quarenta espcimes foram divididos em 5 grupos e tratados por imerso em cido ctrico, aplicao

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passiva, frico vigorosa ou frico suave, comparando estas formas de aplicao com um grupo controle que no recebeu tratamento qumico da superfcie radicular. A observao dos espcimes em microscopia eletrnica de varredura mostrou grande variabilidade entre os grupos. A aplicao passiva e por frico suave mostraram se capazes em expor fibras intertubulares e um grande nmero de tbulos dentinrios. Por outro lado, a frico vigorosa ocasionou uma hiperdesmineralizao da superfcie radicular com dissoluo qumica das fibras colgenas. O efeito da aplicao de cido ctrico em 40 dentes extrados por doena periodontal severa foi avaliado em estudo in vitro por meio de microscopia ptica e microscopia eletrnica de varredura (MEV) por Chaves et al.28,29 nos anos de 1992 e 1993 respectivamente. As superfcies testadas foram: superfcies no instrumentadas; superfcies que receberam aplicao de cido ctrico (pH 1 por 3 minutos) aps remoo de depsitos mineralizados; superfcies instrumentas e

superfcies instrumentadas que receberam aplicao de cido ctrico comparadas a dentes saudveis. Quando analisadas por microscopia ptica, no foram observadas alteraes nos grupos tratados com cido ctrico. Os resultados obtidos por meio de MEV mostraram que a aplicao de cido ctrico no promoveu desmineralizao da superfcie radicular em dentes no instrumentados. Entretanto, nos dentes instrumentados e tratados com cido ctrico, observou-se remoo da

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smear layer, com tbulos dentinrios abertos e fibras colgenas expostas pela desmineralizao da dentina peritubular e intertubular. As metodologias utilizadas at ento no apresentaram resultados conclusivos sobre qual a melhor concentrao e tempo de aplicao. Assim, Sterrett et al.117 (1993) propuseram avaliar a capacidade de desmineralizao de diferentes solues de cido ctrico (0, 10, 20, 25, 30, 35, 40 e 65%) de respectivos pH (5.81, 1.95, 1.77, 1.62, 1.55, 1.46, 1.36 e 1.01) em 15 molares bovinos. As solues foram aplicadas passivamente por 1, 2 ou 3 minutos e os resultados da anlise, por meio de espectrofotometria de absoro atmica, mostraram que as concentraes de 25 e 30% removeram mais ons clcio que as demais, e que concentraes mais elevadas promoveram menor grau de

desmineralizao, o qual se mostrou diretamente proporcional ao tempo de aplicao. No mesmo ano, Dyer et al.40 compararam a eficcia do tratamento da superfcie radicular com cido ctrico (pH 1.0, durante 3 minutos) ou cloridrato de tetraciclina 100 mg/mL (pH 1.7, por 5 minutos) e regies que no receberam tratamento qumico em procedimentos de regenerao tecidual guiada em 8 ces com doena periodontal natural. Os animais foram sacrificados 4 meses aps os procedimentos cirrgicos e as avaliaes histolgica e histomtrica mostraram formao

estatisticamente superior de cemento com fibras colgenas inseridas nos espcimes que no receberam tratamento qumico da superfcie radicular.

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Procedimentos de regenerao tecidual guiada tambm foram utilizados por Sammons et al.103 (1994) para avaliar a proliferao e migrao de clulas progenitoras marcadas em defeitos periodontais em ces. Os defeitos foram tratados com aplicao tpica de cido ctrico, tetraciclina ou gua estril (grupo controle), com e sem utilizao de membrana no reabsorvvel (Gore-Tex, WL Gore and Associates). Aps 1, 3, 7 e 21 dias os animais foram sacrificados, as peas removidas e avaliadas histologicamente, obtendo-se resultados que sugerem inibio de proliferao celular nos dentes que receberam tratamento qumico nos perodos de 1 e 3 dias. E mesmo aos 7 e 21, as diferenas entre os grupos tratados quimicamente foram mnimas, sem vantagens em relao ao grupo controle. A topografia da superfcie radicular, aps raspagem e alisamento radicular seguida de aplicao de cido ctrico a 30%, foi avaliada por Sterrett et al.118 (1995) em estudo que avaliou trs formas de aplicao: passiva, frico suave e frico vigorosa. Vinte dentes humanos foram utilizados nos trs tratamentos propostos. Os resultados mostraram maior exposio de fibras colgenas e uma caracterstica mais densa com a utilizao das formas de frico do que com a aplicao passiva. Devido falta de estudos comparativos das substncias utilizadas na biomodificao radicular e de avaliao sobre os efeitos daquelas nas clulas do ligamento periodontal, Blomlf, Lindskog13,14

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(1995) realizaram dois estudos. O primeiro, avaliando a textura superficial dentinria de 56 dentes extrados de macacos, tratados com cido ctrico (pH 1), cido fosfrico a 37% (pH 1), EDTA 24% (pH 7), aplicados por 20 segundos ou 3 minutos e como controle, a aplicao por frico vigorosa de soluo tampo fosfato (pH 7.2) e a no realizao de tratamento. O mesmo tratamento foi realizado em 16 incisivos laterais de macacos que foram extrados, tratados e reimplantados. O tratamento com EDTA a 24% mostrou-se superior aos outros tratamentos por remover

seletivamente a smear layer, expondo fibras colgenas e favorecendo a colonizao celular e formao de tecido conjuntivo, resultados estes no obtidos com cido ctrico e cido fosfrico que tambm no apresentaram colonizao celular, possivelmente causada pela necrose de clulas do ligamento periodontal adjacente. No segundo estudo, os autores avaliaram os efeitos da aplicao de cido ctrico e cido ortofosfrico 37% (ambos com pH 1) e do cido etilenodiamino tetra-actico (EDTA) 24% (pH 7.0), aplicados respectivamente por 20 segundos e 3 minutos sobre a vitalidade celular dos tecidos periodontais por meio de avaliao em retalhos gengivais da atividade da enzima lactato-desidrogenase (LDH) envolvida na gliclise anaerbia. Foi observada uma reduo de atividade da LDH nos espcimes que entraram em contato com o cido ctrico e cido fosfrico, sugerindo que o uso de substncias de baixo pH pode comprometer, mesmo que temporariamente, a vitalidade das clulas dos tecidos periodontais.

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Ainda preocupados com efeitos deletrios do baixo pH apresentado pelo cido ctrico, Blomlf et al.18 (1996) compararam este com o EDTA de pH neutro, quanto a capacidade em promover melhor reparo periodontal em animais. As superfcies dentinrias foram expostas pela remoo do osso alveolar e tratadas com aplicao passiva de cido ctrico (pH 1, por 3 minutos) ou EDTA 24% (por 8 minutos). Como controle foi utilizado um grupo de dentes que tiveram a superfcie dentinria exposta sem receber tratamento algum. Os resultados histolgicos e histomtricos mostraram superioridade do EDTA em relao ao cido ctrico, o qual apresentou efeito necrosante superficial no tecido conjuntivo. Babay7 (1997) observou que a irrigao ultra-snica de superfcies radiculares sem doena periodontal, antes e aps o condicionamento cido da superfcie radicular com soluo saturada de cido ctrico (pH 1) ou soluo de cloridrato de tetraciclina (pH 1.8) aplicados por imerso dos espcimes por 3 minutos, proporcionou remoo da smear layer e exposio das fibras colgenas em todos os espcimes avaliados. Para avaliar o efeito da concentrao da tetraciclina na biomodificao radicular, Sterrett et al.121 (1997) testaram as

concentraes de 0, 25, 50, 75, 100, 125 e 150 mg/mL, comparando com soluo de cido ctrico a 30% em 3 molares bovinos em uma avaliao por meio de espectrofotometria de absoro atmica da quantidade de

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ons clcio liberada por cada soluo. Os resultados mostraram no haver diferenas entre as concentraes de 75, 100, 125 e 150 mg/mL quanto a desmineralizao radicular. Por outro lado, a soluo de cido ctrico a 30% mostrou-se capaz em remover de 3 a 5,5 mais ons clcio que o cloridrato de tetraciclina, mostrando-se mais eficaz que esta na desmineralizao da superfcie radicular. Bergenholtz, Babay12 (1998) compararam in vitro a eficcia de soluo salina, cloridrato de tetraciclina (pH 1.8), soluo saturada de cido ctrico (pH 1) e EDTA a 8% em soluo fosfatada (pH 7.3) aplicados por frico vigorosa e passivamente. Obteve-se uma superfcie fibrilar com a aplicao passiva, enquanto que a frico causou rompimento no arranjo das fibras colgenas. Quanto ao tipo de agente, o cido ctrico proporcionou melhores resultados. Rompen et al.100 (1999) utilizaram dentes extrados por indicao ortodntica para comparar o tratamento da superfcie radicular com soluo aquosa de cido ctrico a 3% (pH 1.85) ou cloridrato de minociclina (pH 3.8) quanto a proliferao e sntese protica de fibroblastos do ligamento periodontal, sendo que essa, foi

significativamente maior nos espcimes condicionados em relao aos no tratados, independente da substncia empregada. Os autores concluem que o condicionamento da superfcie radicular com essas substncias favorece a adeso, proliferao e sntese protica das clulas do ligamento periodontal.

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Lan et al.68 (1999) tambm estudaram os efeitos do baixo pH do cido ctrico na viabilidade, adeso e sntese protica de fibroblastos gengivais humanos. Os resultados contrariam o trabalho de Rompen et al.100, mostrando que o cido ctrico causa acidose extracelular, suprimindo a adeso celular e retardando a colonizao da superfcie radicular por estas clulas. O contado direto com o tecido gengival causou necrose celular imediata. Num estudo mais completo que o anterior, Zaman et al.131 (2000) avaliaram o efeito da imerso de fragmentos radiculares de dentes expostos doena periodontal em substncias de baixo pH, como o cido ctrico (pH 1.29) e tetraciclina HCl a 100 mg/mL (pH 2.00) em comparao ao EDTA a 24% (pH 7.04) e tambm espcimes no tratados, na adeso e orientao de clulas do ligamento periodontal. A avaliao por microscopia de fase no mostrou diferena quanto adeso e orientao das clulas na dentina e cemento, havendo uma superioridade do tratamento com EDTA e cido ctrico em relao aos demais. Os autores concluem que a biomodificao radicular com essas substncias pode favorecer o processo regenerativo periodontal, no havendo necessidade de completa remoo do cemento radicular contaminado. O estudo de Blomlf et al.19 (2000) deu seqncia aos anteriores, comparando tratamentos com aplicao passiva de bolinhas de algodo de soluo fisiolgica por 20 segundos com aplicao passiva de soluo aquosa saturada de cido ctrico (pH 1 por 20 segundos) e

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aplicao de gel de EDTA a 24% (por 2 minutos) em procedimentos cirrgicos periodontais. A avaliao de profundidade de sondagem e ganho de insero no mostraram diferenas entre os tratamentos utilizados. Acreditando que a formao de nova insero diretamente influenciada pelas caractersticas da superfcie radicular, Baker et al.10 (2000) estudaram in vitro a adsoro e adeso do cogulo a superfcies radiculares tratadas por imerso em soluo saturada de cido ctrico por 5 minutos. As amostras tratadas apresentaram uma rede de fibrina sobre a dentina com grande presena de elementos celulares, especialmente eritrcitos, ao contrrio das amostras no tratadas que apresentaram deposio esparsa de protenas fibrosas, com poucos eritrcitos. At ento os trabalhos vinham analisando apenas as propriedades dos agentes quanto remoo da smear layer e exposio das fibras colgenas sem, no entanto, avaliar o que realmente acontecia com esse colgeno exposto. Pensando nisso que Breschi et al.22 (2003) estudaram por meio de tcnicas de imunocitoqumica a manuteno das propriedades antignicas imunoqumicas das fibras colgenas aps tratamento da superfcie radicular de 20 pr-molares extrados por razes ortodnticas e tratados aleatoriamente com cido ctrico a 10% (por 15 ou 30 segundos), cido maleico a 10% (por 15 ou 30 segundos), cido fosfrico a 35% (por 15 ou 30 segundos), EDTA 0.5M

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com pH 7.0 (por 1, 24, 48 ou 72 horas), comparando com superfcies no tratadas (controle). Por meio de anlise de imunocitoqumica para colgeno tipo I e sulfato de condroitina, os autores puderam observar que os espcimes tratados com os cidos maleico e ctrico apresentaram uma marcao difusa, intensa para fibras colgenas e proteoglicanas, resultado tambm obtido com o EDTA aps 48h de aplicao e no observado para o cido fosfrico, o qual resultou em grande coagulao das proteoglicanas. No mesmo ano, Breschi et al.23 estudaram tambm a presena de colgeno tipo I, alterando-se os tempos de aplicao em relao ao trabalho anterior do EDTA (0.5M, por 30 minutos), cido fosfrico a 35% (por 15 ou 30 segundos e por 30 segundos seguido de irrigao com soluo salina por 15 segundos e nova aplicao do cido por 30 segundos) e nenhum tratamento (controle). Utilizando-se de tcnicas de imunocitoqumica com anticorpos monoclonais para marcar colgeno tipo I, os autores observaram que quantidade significativamente maior de colgeno tipo I nos espcimes tratados com cido fosfrico a 35% por 15 segundos e que a aplicao por tempos maiores levaram a modificaes estruturais nas molculas de colgeno. Baker et al.9 (2005) avaliaram, na reteno do cogulo, o efeito do condicionamento de blocos de dentina humana com protenas (albumina bovina ou protenas da matriz do esmalte) associadas ao uso de cido ctrico ou gel de EDTA a 24% e uma soluo salina tampo de

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fosfato utilizada como controle. Vinte minutos aps a deposio de sangue humano fresco, os espcimes processados foram observados em MEV. Das substncias testadas, o cido ctrico foi o nico capaz de promover uma superfcie completamente livre de smear layer e tambm mais favorvel a reteno do cogulo. As protenas no foram eficazes na remoo de smear layer, nem proporcionaram reteno ao cogulo. J os espcimes tratados com EDTA apresentaram pequena quantidade de cogulo aderido, o qual se soltava facilmente da superfcie. A adeso de cogulo tambm foi objeto de estudo de Leite70 em 2006. Foram utilizados 150 fragmentos de dentes humanos que receberam raspagem e alisamento radicular e tratados com irrigao com 10 mL de soluo fisiolgica, EDTA a 24% (aplicado por frico suave, com pincel macio por 3 minutos), cido ctrico a 25% (aplicado por frico vigorosa por 3 minutos), cloridrato de tetraciclina 50 mg/mL (aplicado por frico vigorosa por 3 minutos) ou citrato de sdio a 30% (aplicado por frico suave, com pincel por 3 minutos), sendo as solues renovadas a cada 30 segundos. Aps lavagem com gua destilada, foi depositada uma gota de sangue humano sobre cada espcime. A observao em MEV mostrou que as substncias testadas foram efetivas na remoo da smear layer, exceto o controle. Segundo o autor, os espcimes tratados com cido ctrico apresentaram mais elementos sangneos aderidos.

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Ruggeri Jr et al.101 (2007) estudaram as caractersticas do colgeno, por meio de anlise imunohistoqumica, nas superfcies dentinrias expostas doena periodontal aps biomodificao com cido ctrico a 10% e EDTA a 17% (ambos aplicados por frico suave, com pincel por 2 minutos, seguido da lavagem dos espcimes com gua destilada por 3 minutos) em fragmentos de 21 dentes humanos extrados por doena periodontal e instrumentados com instrumentos manuais ou ultra-snicos previamente ao condicionamento. Os resultados mostraram que somente o cido ctrico removeu completamente a smear layer, bem como os espcimes tratados com esta substncia apresentaram marcao mais da intensa para colgeno Os tipo autores I e proteoglicanas, que o

independente

instrumentao.

concluem

condicionamento radicular com ambas as substncias permitiram a preservao das propriedades bioqumicas e estruturais da matriz dentinria, no entanto a aplicao de cido ctrico por 2 minutos proporcionaram maior exposio de tbulos dentinrios e fibras colgenas que correspondem a colgeno tipo I e proteoglicanas.

PROPOSIO
Foi objetivo neste estudo avaliar, por meio de microscopia eletrnica de varredura, a influncia de diferentes concentraes, modos e tempos de aplicao de cido ctrico na biomodificao de superfcies radiculares submetidas raspagem e alisamento radicular.

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MATERIAL E MTODO
O projeto da presente pesquisa foi submetido e aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa da Faculdade de Odontologia de Araraquara - UNESP (Protocolo CEP-FO/CAr n 31/06) (Anexo 1).

Obteno dos dentes


Para a realizao desta pesquisa foram utilizados dentes humanos uni ou multi-radiculares obtidos do Banco de Dentes da FOAr/UNESP. Os dentes utilizados foram mantidos em soluo

fisiolgica at o momento do preparo das amostras e foram excludos dentes que no satisfizessem os critrios: juno cemento-esmalte intacta, ausncia de leses cariosas radiculares, leses de abraso, abfrao e eroso e tambm de restauraes.

Preparo dos espcimes


Os dentes foram preparados, por um nico pesquisador treinado, de acordo com o protocolo descrito na seqncia. Para confeco dos espcimes, foram escolhidas e preparadas as faces que apresentassem melhores condies para obteno dos espcimes necessrios para a realizao da pesquisa. Assim, foi optado pelas faces proximais ou faces livres, preparando-se

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ambas as faces proximais ou livres para melhor aproveitamento do dente (Figura 1). Foram realizados dois sulcos, sendo um na juno cementoesmalte e outro aproximadamente 4 mm apicalmente ao primeiro com o auxlio de uma fresa cilndrica diamantada n 3099 ( 1.6mm) (KG Sorensen, Barueri - SP) em alta rotao e sob refrigerao constante (Figura 2). A profundidade dos sulcos correspondeu a aproximadamente metade do dimetro da fresa e foram feitos com objetivo de delimitar a regio de trabalho e padronizar a profundidade de penetrao da fresa. Aps a confeco, os sulcos foram unidos removendo-se assim totalmente o cemento da regio entre os sulcos e obtendo-se a regio de trabalho (Figura 3). A rea de dentina exposta pela fresa recebeu, com o auxlio de uma cureta de Gracey 5-6 nova (Hu-Friedy- EUA), a aplicao de 50 movimentos de raspagem e alisamento radicular, no sentido picocervical, formando assim a smear layer na superfcie de trabalho (Figura 4). A raspagem e alisamento foram realizados por um nico pesquisador, garantindo que todos os dentes recebessem tratamento semelhante. Sempre que necessria, foi realizada a afiao da cureta com uma pedra de Arkansas (Hu-Friedy- EUA). Aps raspagem e alisamento da rea de trabalho, os dentes foram seccionados com o auxlio de um disco diamantado de dupla face (KG Sorensen, Barueri SP) montado em pea reta em baixa rotao. Primeiramente, a coroa foi separada com um corte no sentido

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transversal ao longo eixo do dente no primeiro sulco (Figuras 5 e 6). Um corte longitudinal ao longo eixo do dente e paralelo s reas de trabalho foi realizado com intuito de separ-las (Figura 7). Finalmente, um corte transversal no segundo sulco separou os espcimes (Figura 8). Da forma descrita acima, foram obtidos 270 espcimes de aproximadamente 1 mm de espessura e medindo cerca de 2 mm de largura por 3 mm de comprimento (Figura 9). Todos os espcimes foram armazenados em frascos plsticos contendo pequena quantidade de soluo fisiolgica com intuito de que se mantivessem midos e inalterados at o momento do tratamento.

Tratamento dos espcimes


Os espcimes obtidos foram distribudos aleatoriamente nos seguintes grupos, com seus respectivos valores de pH, avaliados por meio de pHmetro (UB 10 - Denver Instruments Norfolk, EUA): Tabela 1 Substncias testadas e respectivos valores de pH. Grupo I II II III IV V Substncia Soluo fisiolgica cido ctrico 0.5% cido ctrico 1% cido ctrico 2% cido ctrico 15% cido ctrico 25% pH 7.40 2.40 2.04 1.90 1.40 1.31

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Todas as solues de cido ctrico foram manipulas na Farmcia Santa Paula (Araraquara - SP, Brasil) no dia da aplicao garantindo assim as caractersticas fsico-qumicas das substncias. Para cada concentrao de cido ctrico testada, a aplicao desta substncia deu-se de trs formas: passiva: os espcimes foram presos com uma pina clnica n 317 (S.S. White Duflex, Rio de Janeiro RJ) permitindo a aplicao com bolinhas de algodo embebidas nas substncias a serem testadas e depositadas sobre o espcime com o auxlio de outra pina n 317 (Figura 10A); frico vigorosa: os espcimes foram presos da mesma maneira que para a forma de aplicao anterior, sendo as substncias testadas aplicadas por meio de frico de bolinhas de algodo na superfcie dos espcimes, com auxlio de outra pina clnica n 317. (Figura 10B); frico suave: a apreenso dos espcimes, como descrito anteriormente, permitiu a aplicao das substncias testadas com auxlio de um pincel macio (3M ESPE), o qual era embebido nas solues e passado sobre o espcime com movimentos de vaivm (Figura 10C). Para todas as formas de aplicao, as solues testadas foram renovadas a cada 30 segundos pela troca das bolinhas de algodo ou pela imerso do pincel na frico suave. Alm disso, as solues nos seus modos de aplicao avaliados foram utilizadas por trs diferentes tempos: a) um minuto; b) dois minutos e c) trs minutos.

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Ao final da aplicao, os espcimes foram irrigados com 10 mL de gua destilada utilizando-se uma seringa descartvel de 10 mL (Becton Dickinson, So Paulo SP) e sua respectiva agulha. Para cada tempo de aplicao foram utilizadas 5 espcimes, sendo 3 diferentes tempos para cada forma de aplicao. Assim foram avaliados 45 espcimes para cada concentrao,

perfazendo um total de 270 espcimes no estudo.

Quadro 1 - Distribuio dos espcimes de acordo com a concentrao, tempo e modo de aplicao empregados
Frico Passiva Vigorosa Grupo Tempo de Aplicao 1 I II III IV V VI Total 5 5 5 5 5 5 30 2 5 5 5 5 5 5 30 3 5 5 5 5 5 5 30 1 5 5 5 5 5 5 30 2 5 5 5 5 5 5 30 3 5 5 5 5 5 5 30 1 5 5 5 5 5 5 30 2 5 5 5 5 5 5 30 3 5 5 5 5 5 5 30 45 45 45 45 45 45 270 Total Frico Suave

Os tempos de aplicao foram marcados com a utilizao de um cronmetro. Para a lavagem dos espcimes foram utilizados 10 mL de soluo fisiolgica com intuito de que houvesse uma melhor

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padronizao na pesquisa do que uma marcao de tempo para tal procedimento. Os espcimes de cada subgrupo foram colocados em cassetes codificados, que por sua vez, foram colocados em uma placa de Petri para passar por desidratao seqencial em concentraes crescentes de lcool etlico (30%, 50%, 70%, 80%, 95% e 100%) (Figura 11A), por 1 hora cada, a fim de se obter a desidratao dos espcimes. Aps a ltima concentrao de lcool, os mesmos foram transferidos para uma placa de acrlico com 6 orifcios, utilizada em cultura de clulas. Os grupos foram codificados para a aplicao do hexametidisilazane (HMDS) (Sigma, Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, USA), utilizado com finalidade de manuteno da integridade das fibras colgenas. Os 5 espcimes de cada grupo foram colocados em um orifcio contendo uma parte (800 L) de lcool etlico absoluto misturada a uma parte (800 L) de HMDS. Os espcimes ficaram imersos por 30 minutos e foram transferidos para outro orifcio contendo apenas HMDS (1600 L), no qual permaneceram por 10 minutos (Figuras 11B e 11C). A quantidade de HMDS e lcool foram determinados de tal forma que cobrissem totalmente os espcimes, mas sempre respeitando a proporo de 1:1 nos primeiros orifcios e apenas HMDS nos segundos orifcios. Todos os procedimentos que envolveram a utilizao de HMDS foram realizados dentro de uma capela, com ventilao acionada e

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com utilizao de micropipeta automtica (100-1000 L) (Boeco, Hamburg, Germany). Os espcimes retornaram para os cassetes de origem, os quais foram armazenados em placas de Petri contendo papel de filtro para terminar a desidratao (Figura 12).

Observao dos espcimes em microscopia eletrnica de varredura


Passadas 24 horas, os espcimes foram colados em bases metlicas (stubs) utilizando-se esmalte incolor acrescido de grafite em p (Figura 13). Os stubs foram levados a um dessecador a vcuo por 24 horas para completa remoo da umidade e preservao at a metalizao. (Figura 14). Na seqncia, os espcimes foram metalizados (Balt-Tec SCD-050, Flrida, USA) por recobrimento com liga de ouropaldio (pureza de 99,99%) por um perodo de 120 segundos. Cada espcime foi recoberto por uma pelcula de 25 nm (Figura 15). Aps a metalizao, os espcimes foram levados para observao em microscpio eletrnico de varredura (Jeol-JSM T330-A, JEOL Technics Co., Tokyo, Japan) com a obteno de fotomicrografias em filme Neopan Acros (Fuji Film 120 SS, Tokyo, Japan) com aumentos de 1500x e de 3500x. As fotomicrografias foram realizadas na regio central de cada espcime, objetivando reduzir a possibilidade de tendenciosidade do estudo.

50

Figura 1 - Seleo dos dentes.

Figura 2 - Demarcao dos sulcos

Figura 3 - rea de trabalho.

Figura 4 - Raspagem e alisamento radicular.

Figura 5 - Corte transversal ao longo eixo do dente, na altura do primeiro sulco.

Figura 6 - Coroa seccionada.

51

Figura 7 - Corte longitudinal ao longo eixo do dente, separando as faces preparadas.

Figura 8 - Corte transversal ao longo eixo do dente, na altura do segundo sulco.

Figura 9 - Espcimes preparados.

A B C FIGURA 10 - A) Aplicao passiva. B) Frico Vigorosal. C) Frico Suave.

52

FIGURA 11 - A) Desidratao em concentraes crescentes de lcool. B e C) Placas de acrlico codificadas para aplicao do HMDS.

Figura 12 - Secagem em papel de filtro.

Figura 13 - Espcime tratado, colado em stub metlico.

Figura 14 - Dessecador a vcuo.

Figura 15 - Espcime metalizado.

MaterialeMtodo______________________________________________________53

Anlise das fotomicrografias


As fotomicrografias obtidas foram avaliadas por um nico examinador cego treinado e calibrado25 (Kappa = 0.93) (Tabela A1 do Anexo 2) que atribuiu os graus de remoo de smear layer e exposio de fibras colgenas segundo o ndice de Remoo de Smear Layer proposto por Sampaio104 (1999) e modificado pelo autor para este estudo:

MaterialeMtodo______________________________________________________54

ndice de Remoo de Smear Layer


Grau 1: Superfcie radicular sem smear layer, com abertura total dos tbulos dentinrios, sem indcios de smear layer na abertura dos tbulos e com exposio de fibras colgenas da dentina.

FIGURA16Fotomicrografiacomaumento de1500xrepresentandoograu1.

FIGURA17Fotomicrografiacomaumento de3500xrepresentandoograu1.

Grau 2:

Superfcie radicular sem smear layer, com abertura total dos tbulos dentinrios, sem indcios de smear layer na abertura dos tbulos.

FIGURA 18 Fotomicrografia com aumento de 1500x representando o grau 2.

FIGURA 19 Fotomicrografia com aumentode3500xrepresentandoograu 2.

MaterialeMtodo______________________________________________________55

Grau 3:

Superfcie radicular sem smear layer, com abertura total dos tbulos dentinrios, com indcios de smear layer na abertura dos tbulos.

FIGURA 20 Fotomicrografia com aumento de 1500x representando o grau 3

FIGURA 21 Fotomicrografia com aumentode3500xrepresentandoograu 3.

Grau 4:

Superfcie radicular sem smear layer, com abertura parcial dos tbulos dentinrios.

FIGURA 22 Fotomicrografia com aumento1500xrepresentandoograu4.

FIGURA 23 Fotomicrografia com aumentode3500xrepresentandoograu 4.

MaterialeMtodo______________________________________________________56

Grau 5:

Superfcie radicular coberta por "smear layer" com aspecto uniforme, formada por dissoluo qumica apresentando abertura ou no de tbulos dentinrios.

FIGURA 24 Fotomicrografia com aumento de 1500x representando o grau 5.

FIGURA 25 Fotomicrografia com aumentode3500xrepresentandoograu 5.

Grau 6:

Superfcie radicular coberta por smear layer, com aspecto uniforme, apresentando indcios de abertura dos tbulos dentinrios.

FIGURA26Fotomicrografiacomaumento de1500xrepresentandoograu6.

FIGURA 27 Fotomicrografia com aumento de 3500x representando o grau 6.

MaterialeMtodo______________________________________________________57

Grau 7:

Superfcie radicular coberta por smear layer, com aspecto uniforme, sem indcios de abertura dos tbulos dentinrios.

FIGURA28Fotomicrografiacomaumento de1500xrepresentandoograu7.

FIGURA29Fotomicrografiacomaumento de3500xrepresentandoograu7.

Grau 8:

Superfcie radicular coberta por smear layer, com aspecto irregular e presena de estrias e/ou depsitos esparsos.

FIGURA30Fotomicrografiacomaumento de1500xrepresentandoograu8.

FIGURA31Fotomicrografiacomaumento de3500xrepresentandoograu8.

MaterialeMtodo______________________________________________________58

A leitura das fotomicrografias deu-se em 3 diferentes tempos com intervalo de 7 dias entre cada leitura (Anexo 3). Os dados obtidos foram devidamente tabulados para realizao da anlise estatstica.

Anlise Estatstica O pequeno nmero de espcimes em cada grupo e o grande nmero de repetio de determinados escores limitaram a aplicao dos testes estatsticos. Portanto, agrupamos os escores que apresentam caractersticas semelhantes. Assim, foram agrupados os escores 1 e 2 (os quais representam ausncia de smear layer), os escores 3 e 4 (os quais representam remoo parcial de smear layer) e os escores 6, 7 e 8 (os quais representam presena de smear layer). O escore 5 no foi agrupado com nenhum outro, pois representa hiperdesmineralizao. Foram, ento, comparadas as propores desses grupos de escores por meio de teste binomial, com o auxlio do programa BioEstat 4.0.

Resultado____________________________________________________________60

RESULTADO
A Tabela 2 ilustra a distribuio de todos os espcimes avaliados neste estudo. De acordo com esta Tabela, a distribuio dos escores, segundo o ndice de remoo de smear layer* para as diferentes concentraes de cido ctrico, mostrou que a concentrao mais eficaz na exposio de fibras colgenas foi a de 25%, com a produo de 12 espcimes com escore 1 (remoo da smear layer com exposio das fibras colgenas), representando 26,67% dos espcimes desse grupo; seguida das concentraes de 15% com 4 espcimes (8,89% dos espcimes desse grupo) e 1% com 3 espcimes (6,67% dos espcimes desse grupo). As concentraes de 0,5% e 2%, bem como o grupo controle, no produziram espcimes com escore 1. Os escores 2 e 3 representaram poucos espcimes nas concentraes estudadas, portanto, no ser descrita sua freqncia. O escore 4, no qual temos abertura parcial dos tbulos dentinrios, distribuiu-se de tal maneira que, no grupo controle observamos apenas 2 espcimes; na concentrao de 0,5% temos 14 espcimes (31,11% dos espcimes desse grupo); na concentrao de 1% temos 7 espcimes (15,56% dos espcimes desse grupo); na

concentrao de 15% temos 15 espcimes (33,33% dos espcimes); no sendo observado nas concentraes de 15 e 25%.

*OndicederemoodesmearlayerpropostoporSampaio104(1999)emodificadoparaestetrabalho possuiescoresquevode1a8emordemdecrescentedebenefcio.

Resultado____________________________________________________________61

O escore 5 (caracterizado por hiperdesmineralizao) foi encontrado em todas as concentraes testadas e no grupo controle, no qual observamos 7 espcimes (15,56% dos espcimes); a concentrao de 0,5% apresentou 14 espcimes (31,11% dos espcimes); a concentrao de 1% apresentou 24 espcimes (53,33% dos espcimes); a de 2% apresentou 25 espcimes (55,56% dos espcimes); a de 15% apresentou 38 espcimes (84,44% dos espcimes) e a de 25% apresentou 31 espcimes (68,89 dos espcimes). Considerando-se os escores nos quais no houve remoo de smear layer (escores 6, 7 e 8) observamos na Tabela 2 que o grupo controle apresentou uma freqncia bastante alta desses escores (36 espcimes 80% dos espcimes desse grupo) seguido pelos grupos de 0,5% (15 espcimes 33,34% dos espcimes desse grupo), 1% (8 espcimes 17,78% dos espcimes) e 2% (3 espcimes 6,67% dos espcimes).

Resultado____________________________________________________________62

Tabela 2 Distribuio da freqncia dos escores referentes aos diferentes graus de remoo de smear layer conforme a concentrao, a forma e o tempo de aplicao do agente condicionante
Controle 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. 43. 44. 45.
4F3 4F3 5F1 5F1 5F1 5F2 5F2 5F3 5F3 6P1 6P2 6P2 6P2 6P3 6P3 6N1 6N1 6N1 6N2 6N2 6N2 6N2 6N3 6N3 6N3 6N3 6N3 6F1 6F1 6F2 6F2 6F2 6F3 7P1 7P1 7P1 7P1 7P2 7P2 7P3 7P3 7P3 7N1 7N1 7N2

0,5%
2F3 3F1 4P1 4P1 4P2 4P2 4P2 4P3 4P3 4P3 4N3 4N3 4F1 4F2 4F2 4F3 5P3 5N2 5N2 5N2 5N3 5N3 5N3 5F1 5F1 5F1 5F2 5F2 5F2 5F3 6P1 6P1 6P2 6P2 6P3 6N1 6N1 6N1 6N1 6N2 6N2 6F3 8P1 8N1 8F3

1%
1N1 1N1 1N1 3P3 3P3 3N1 4P2 4P2 4P2 4P2 4P3 4P3 4P3 5N1 5N2 5N2 5N2 5N2 5N2 5N3 5N3 5N3 5N3 5F1 5F1 5F1 5F1 5F2 5F2 5F2 5F2 5F2 5F3 5F3 5F3 5F3 5F3 6P1 6P1 6P2 7P1 7P1 7N3 7F1 8P1

2%
2P1 3N1 4P1 4P1 4P2 4P2 4P2 4P2 4P2 4P3 4P3 4P3 4N1 4N1 4N2 4N2 4N2 5P3 5N1 5N1 5N2 5N2 5N3 5N3 5N3 5N3 5N3 5F1 5F1 5F1 5F1 5F1 5F2 5F2 5F2 5F2 5F2 5F3 5F3 5F3 5F3 5F3 6P1 6P1 6P3

15%
1P2 1P2 1P3 1N3 2N2 3P1 3P3 5P1 5P1 5P1 5P1 5P2 5P2 5P2 5P3 5P3 5P3 5N1 5N1 5N1 5N1 5N1 5N2 5N2 5N2 5N2 5N3 5N3 5N3 5N3 5F1 5F1 5F1 5F1 5F1 5F2 5F2 5F2 5F2 5F2 5F3 5F3 5F3 5F3 5F3

25%
1P1 1N1 1N1 1N1 1N2 1N2 1N3 1N3 1N3 1N3 1N3 1F3 2P3 3P3 5P1 5P1 5P1 5P1 5P2 5P2 5P2 5P2 5P2 5P3 5P3 5P3 5N1 5N1 5N2 5N2 5N2 5F1 5F1 5F1 5F1 5F1 5F2 5F2 5F2 5F2 5F2 5F3 5F3 5F3 5F3

escore 1 escore 2 escore 3 escore 4 escore 5 escore 6 escore 7 escore 8

Legenda: escore (1-8), forma de aplicao (passiva (P), frico vigorosa (F), frico suave (N)) e tempo de aplicao(1-3)

Resultado____________________________________________________________63

Nos Grficos 1 a 4 esto agrupados os espcimes de acordo com a semelhana de caractersticas dos escores. No Grfico 1 esto representados os escores 1 ou 2 (tbulos dentinrios abertos com e sem exposio de fibras colgenas), que aparecem com maior freqncia na concentrao de 25%, sendo significativamente diferente das demais.

GRFICO 1 - Distribuio dos espcimes com escores 1 ou 2 para as concentraes testadas e grupo controle (CTR). *Diferenas significantes quando comparado com as concentraes de 0.5, 1, 2, 15% e o grupo controle (p<0.05).

No Grfico 2 esto representados os escore 3 ou 4 (abertura parcial dos tbulos dentinrios).

Resultado____________________________________________________________64

GRFICO 2 - Distribuio dos espcimes com escores 3 ou 4 para as concentraes testadas e grupo controle (CTR). *Diferena no significante entre as concentraes de 0.5, 1 e 2%. Diferena significante destas quando comparadas s concentraes de 15, 25% e grupo controle (p<0.05).

No Grfico 3 est representado a distribuio do escore 5 (hiperdesmineralizao). Observamos que menos espcimes foram obtidos nos grupos controle e 0.5%, sem diferenas estatsticas entre ambos, no entanto significativamente diferentes das demais

concentraes. Sendo que, as que mais produziram espcimes com hiperdesmineralizao foram as de 15% e 25%, sem diferenas significantes entre ambas.

Resultado____________________________________________________________65

GRFICO 3 - Distribuio dos espcimes com escore 5 para as concentraes testadas e grupo controle (CTR). Diferenas no significantes entre o grupo controle e a concentrao de 0.5%. Diferenas significantes destas quando comparadas s concentraes de 1, 2, 15 e 25% (P<0.05) *Diferenas no significantes entre as concentraes de 1 e 2%. Entretanto, diferenas significantes entre as concentraes quando comparadas s concentraes de 0.5, 15, 25% e grupo controle (p<0.05). Diferenas significantes quando comparadas s concentraes de 0.5, 1, 2 e grupo controle (p<0.05). Diferenas no significantes entre as concentraes de 15 e 25% (p<0.05).

No Grfico 4 est representada a distribuio dos espcimes que apresentaram presena de smear layer (escores 6, 7 ou 8). O grupo controle produziu a maioria dos espcimes com presena de smear layer, com diferenas significantes das concentraes de 0.5, 1 e 2%.

Resultado____________________________________________________________66

GRFICO 4 - Distribuio dos espcimes com escores 6, 7 ou 8 para as concentraes testadas e grupo controle (CTR). *Diferenas significantes quando comparado com as concentraes de 0.5, 1 e 2% (p<0.05). Diferenas significantes entre as concentraes de 0.5 e 2% e diferenas no significantes quando comparadas a concentrao de 1% (p<0.05).

Para analisar a forma de aplicao, comparamos dentro das concentraes de 15% e 25% (Grfico 5), as quais produziram mais espcimes com escore 1 ou 2. Exclumos a forma de aplicao frico, visto que esta foi responsvel por apenas 1 espcimes com escore 1 ou 2 na concentrao de 25% e nenhum espcime na concentrao de 15%.

Resultado____________________________________________________________67

GRFICO 5 - Distribuio dos espcimes relativos aos escores 1, 2 e escore 5 dentro das concentraes de 15 e 25%. * Diferenas significantes quando comparadas as formas de aplicao passiva e frico suave (pincel) (p<0.05). Diferenasnosignificantes.

Dentro da concentrao de 25%, observamos uma diferena de propores significativamente diferente entre as formas de aplicao Frico suave e Passiva para os escores 1 ou 2 e para o escore 5. Nenhuma diferena foi encontrada entre os escores dentro da concentrao de 15%. O Grfico 6 representa a distribuio dos espcimes dentro da concentrao de 25%, para as formas de aplicao passiva e frico suave, e nos diferentes tempos de aplicao. Podemos observar que a aplicao por frico suave com pincel produziu maior nmero de espcimes com escore 1 ou 2.

Resultado____________________________________________________________68

GRFICO 6 - Distribuio dos espcimes segundo os diferentes tempos, dentro das formas de aplicao Passiva e Pincel na concentrao de 25%.

Todas as concentraes, apresentaram espcimes com hiperdesmineralizao (escore 5), num total de 139 espcimes. A concentrao de 15% apresentou maior nmero de espcimes com escore 5, seguida das concentraes de 25, 2, 1, 0.5% e o grupo controle (Tabela 3). Com relao s formas de aplicao, a mais prevalente entre os espcimes com escore 5 foi a por frico, seguida pela aplicao por pincel e passiva (Tabela 3). Com relao aos tempos de aplicao, os mais prevalentes entre os espcimes com escore 5 foi o tempo de 2 minutos, seguido por 3 minutos e 1 minutos (Tabela 3).

Resultado____________________________________________________________69

Tabela 3 Distribuio da freqncia do escore 5 nas concentraes, formas e tempos de aplicao do cido ctrico. *Diferenas significantes entre as formas de aplicao avaliadas, quando comparadas entre si (p<0.05) Concentraes Controle Freqncia n(%)
7 (5,03)

0.5
14 (10,07)

1
24 (17,27)

2
25 (17,99)

15
38 (27,34)

25
31 (22,30)

Forma de aplicao Passiva Freqncia n(%)


24 (17,27) *

Frico suave
43 (30,93) *

Frico vigorosa
72 (51,80) *C

Tempo de aplicao 1 minuto 2 minutos 3 minutos

Todas as concentraes, exceto o grupo controle, apresentaram espcimes com escore 1 ou 2 (23 espcimes no total) . A concentrao que apresentou maior nmero de espcimes foi a de 25%, seguida das demais concentraes (Tabela 4). Com relao a forma de aplicao, a que teve maior prevalncia de espcimes com escores 1 ou 2 foi a aplicao com pincel (Tabela 4). Com relao ao tempo, o que teve maior prevalncia de escores 1 ou 2 foi o tempo de 3 minutos, seguido por 1 minuto e 2 minutos (Tabela 4).

Resultado____________________________________________________________70

Tabela 4 Distribuio da freqncia dos escores 1 ou 2 nas concentraes, formas e tempos de aplicao do cido ctrico *Diferenas significantes quando comparada com a aplicao passiva e frico vigorosa (p<0.05) Concentraes 0.5% Freqncia n(%)
1 (4,35)

1%
3 (13,04)

2%
1 (4,35)

15%
5 (21,74)

25%
13 (56,52)

Forma de aplicao Passiva Freqncia n(%)


6 (26,09)

Frico suave
15 (65,22) *

Frico vigorosa
2 (8,69)

Tempo de aplicao 1 minuto Freqncia n(%)


8 (34,78)

2 minutos
5 (21,74)

3 minutos
10 (43,48)

Discusso_____________________________________________________________72

DISCUSSO
O principal objetivo, e tambm um grande desafio da terapia periodontal regenerativa, obter insero de novo tecido conjuntivo s superfcies radiculares previamente expostas doena periodontal, ou mesmo a cavidade bucal pela presena de recesses gengivais. Na literatura ainda h discusso a respeito da necessidade da remoo completa de smear layer e exposio de fibras colgenas para se obter nova insero dos tecidos periodontais. Albair et al.4 mostraram que possvel obter nova insero sem remover completamente o cemento radicular. No entanto, outros estudos mostraram que para haver regenerao dos tecidos periodontais, perdidos ou modificados pela doena periodontal, necessria a remoo completa da placa bacteriana, clculo e endotoxinas bacterianas presentes na superfcie radicular

contaminada46,49,64. A raspagem e alisamento radicular so considerados meios eficazes de remoo de depsitos mineralizados da superfcie radicular46,124. Contudo, a ao mecnica dos instrumentos sobre a superfcie radicular dos dentes afetados por doena periodontal resulta na formao de smear layer17,78,104, por outro lado, estudos mostram a presena de endotoxinas e bactrias na superfcie radicular, e tambm penetrando tbulos dentinrios2,3,5,38,49, havendo necessidade de terapias complementares.

Discusso_____________________________________________________________73

Assim, foram propostas alternativas adicionais para tratamento da superfcie radicular com a utilizao de substncias qumicas capazes de remover smear layer e descontaminar esta superfcie38. Os primeiros agentes qumicos utilizados no

condicionamento radicular eram substncias de carter cido (cido sulfrico e cido clordrico), os quais foram propostos empiricamente por Stewart122 (1899) e posteriormente os cidos hidroclordrico, lctico, ctrico, fosfrico, tricloroactico e frmico passaram a ser estudados cientificamente por Register95,96,97. Entretanto, os bons resultados obtidos com o cido ctrico por este autor no foram reproduzidos em outros estudos, alm do que se observaram algumas desvantagens na utilizao desta substncia, como necrose superficial dos tecidos

periodontais13,14,18,27,35,52,68,113,. Outras substncias foram propostas para serem utilizadas em substituio ao cido ctrico. Uma delas, o cloridrato de tetraciclina, aproveitando suas caractersticas de adsoro superfcie radicular e inibio da colagenase50,58,126. E outra, o EDTA (cido

etilenodiaminotetractico), cuja grande vantagem sobre as substncias anteriormente citadas o pH neutro15,16,18,105. As vantagens do uso das tetraciclinas na biomodificao radicular foram questionadas por Ben-Yehouda11 (1997) em um relato de caso isolado de reabsores cervicais progressivas em dentes humanos relacionadas ao condicionamento radicular com tetraciclina. Polson,

Discusso_____________________________________________________________74

Proye89 (1982) e Caffesse et al.26 (1985) observaram, em avaliaes histolgicas, lacunas de reabsoro no ativas em dentes de macacos e ces Beagle tratados com cido ctrico. No entanto, dentes tratados com cido ctrico e fibronectina no apresentaram sinais de reabsoro26. A maioria das metodologias avaliadas no contempla diferentes concentraes do cido ctrico, havendo muitas diferenas metodolgicas entre os estudos. Observamos neste trabalho uma variao de pH entre as concentraes estudadas e mesmo assim as concentraes mais baixas utilizadas apresentaram pH bastante baixo, como mostra a Tabela 1, o que segundo Blomlf, Lindskog14 (1995), Blomlf et al.18 (1996), Lan et al.68 (1999), leva a efeitos citotxicos os tecidos periodontais. Por outro lado, h estudos em que no h comprometimento dos tecidos periodontais100,108,131, bem como

observamos bons resultados obtidos em trabalhos de adeso de cogulo e elementos sangneos70,117, e tambm na evidenciao de colgeno, por meio de tcnicas imunohistoqumicas, em superfcies radiculares que apresentaram manuteno da integridade das fibras do tipo I aps tratamento com cido ctrico e cido fosfrico, apesar do baixo pH apresentado por essas substncias22,23. O colgeno fornece uma matriz extracelular capaz de ser colonizada por clulas, o que permitiu sua aplicao em aloenxertos para recuperao de reas acometidas por queimaduras,129 com alto potencial de promover agregao plaquetria24,102,128 e estabilizao do cogulo por

Discusso_____________________________________________________________75

meio da formao de uma rede de fibrina, o que o torna largamente utilizado na medicina para obteno desses benefcios. Na periodontia, a presena de uma rede de fibrina e formao de um cogulo estvel sobre a superfcie dentinria so requisitos fundamentais para restabelecimento de nova insero conjuntiva em procedimentos periodontais

regenerativos, pois se acredita que o cogulo possa atrasar a migrao apical do epitlio, evitando assim a formao de um epitlio juncional longo e permitindo que possa haver diferenciao celular necessria para formao de nova insero9,14,89,90,99,114. A matriz colgena da dentina, quando exposta por agentes biomodificadores, parece exercer papel fundamental nos processos regenerativos periodontais, pois o colgeno tipo I presente nessa matriz parece ser quimiottico para neutrfilos polimorfonucleares, macrfagos e fibroblastos92,110, bem como promove um substrato para formao de uma rede de fibrina75,112 e propicia condies para adeso e migrao de fibroblastos48. Shuman109 (2000) mostrou que a exposio de fibras colgenas favorece duas etapas da formao do cogulo: a primeira a atuao na ativao da cascata de coagulao que d origem a rede de fibrina; a segunda a induo da adeso, agregao e degranulao plaquetria, resultando na formao e maturao do trombo. Inicialmente ocorre a deposio de uma camada protica, seguida pela formao e estabilizao da rede de fibrina devido estimulao da degranulao

Discusso_____________________________________________________________76

plaquetria. A morfologia e o grau de maturao dessa rede resultam na quantidade de eritrcitos aderidos superfcie. importante ressaltar que a ativao das plaquetas leva no s a formao do trombo, mas tambm, a liberao de molculas biologicamente ativas que influenciam no processo de reparo tecidual57. Baseando-se na literatura pertinente, nos parece evidente a importncia de se obter uma superfcie livre de smear layer e com fibras colgenas ntegras nas tentativas de regenerao periodontal. Em nosso trabalho procuramos padronizar a metodologia utilizada da melhor maneira possvel, a fim de evitar que variveis pudessem interferir no estudo. Os dentes utilizados neste estudo foram obtidos junto ao Banco de Dentes da FOAr e estavam armazenados em soluo fisiolgica, o que segundo Hawkins et al.55 (1997) no influencia nos estudos desta natureza, desde que a soluo fisiolgica seja trocada semanalmente. Um cuidado importante no observado em alguns estudos foi quanto a remoo do cemento radicular, visto que um trabalho de Coldiron et al.34 (1990) mostrou por meio de MEV que 70 movimentos de raspagem e alisamento radicular com instrumentos manuais no foram capazes de remover completamente o cemento, permanecendo

fragmentos remanescentes em vrios pontos da superfcie radicular.

Discusso_____________________________________________________________77

Considerando que, ao microscpio eletrnico de varredura, a dentina e o cemento so estruturas bastante semelhantes e pudesse ser um fator de confundimento na avaliao dos resultados de nosso estudo, realizamos a remoo (do cemento) com fresa cilndrica diamantada em alta rotao associada a 50 movimentos de raspagem104. Esse procedimento nos garantiu a remoo completa do cemento radicular e criao de smear layer. A visualizao dos espcimes por meio de microscopia eletrnica de varredura (MEV) requer que os mesmos sejam cobertos por um metal condutor de eltrons, em nosso caso o ouro, sem que haja alterao da superfcie radicular tratada. Os estudos realizados anteriormente utilizaram o ponto crtico com CO2

lquido29,32,47,53,91,115,116,118,119,125, o que segundo Perdigo et al.87 (1995) no um mtodo adequado para visualizao das fibras colgenas. De acordo com este autor e tambm com a concordncia de Gusnard, Kirschner51 (1977), Nation81 (1983) e Bray et al.21 (1993), a desidratao com HMDS (hexametildisilizane) aps desidratao em concentraes crescentes de lcool etlico mais rpida e indicada para estudos de avaliao da superfcie radicular nos quais busca-se visualizao de fibras colgenas em MEV, visto que o HMDS preserva a microporosidade da superfcie dentinria desmineralizada e a rede de fibras colgenas, impedindo o colabamento das mesmas. Em nosso estudo utilizamos o

Discusso_____________________________________________________________78

HMDS para evidenciao das fibras colgenas, estando certos da preservao da sua integridade quando observadas em MEV. Os resultados expressos na Tabela 2 mostram que o grupo controle (soluo fisiolgica) no mostrou eficcia na remoo da smear layer e tambm as concentraes de 0,5 e 1% apresentaram maior nmero de espcimes com presena e poucos livres de smear layer. Ao observarmos os Grficos 1 e 2, constatamos uma tendncia de aumento de espcimes livres de smear layer (escores 1, 2, 3 ou 4) com o aumento da concentrao do cido ctrico. Estes resultados j eram esperados e tambm encontrados nos trabalhos de Codelli et al.32 (1991), Sterrett et al.116,119 (1989), Polson et al.91 (1984), Wen et al.125 (1992) e por Labahn et al.66 (1992). O trabalho de Sterret et al.120 (1991) mostra por meio da avaliao de remoo de ons clcio da dentina desmineralizada, que baixas concentraes de cido ctrico no so capazes de promover uma desmineralizao eficiente da superfcie radicular. Este Resultado tambm observado em nosso estudo e apresentado nos Grficos 2 e 4, o qual nos mostra que concentraes mais baixas de cido ctrico (0.5%, 1% e 2%) apresentam nmero significativo de amostras com presena de smear layer (principalmente escores 6, 7 e 8, na concentrao de 0.5% e escores 3 e 4, que aparecem em quantidade numericamente semelhante nas concentraes de 0.5, 1 e 2%). Provavelmente houve influncia da forma de aplicao na obteno dos diferentes escores.

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Sterrett et al.118 (1995) estudou a influncia do modo de aplicao na desmineralizao dentinria. Os autores observaram que frico vigorosa e frico suave foram semelhantes entre si, sendo ambas mais eficientes que a aplicao passiva. Outros estudos116,118, mostraram que a aplicao por frico foi superior, proporcionando exposio de fibras colgenas. Nosso estudo, em concordncia com Wen et al.125 e Bergenholtz, Babay12 (1998), mostrou uma tendncia de que a aplicao por frico vigorosa produza mais espcimes com hiperdesmineralizao (Tabelas 2 e 3). No trabalho de Codelli et al.32, o tempo de aplicao foi fator determinante na produo de espcimes com

hiperdesmineralizao, estando estes presentes quando tratados por frico por 5 minutos. O Grfico 3 tambm nos mostra uma tendncia de aumento desse escore com o aumento da concentrao. Alm disso, podemos observar, na Tabela 2, que a maioria dos espcimes com hiperdesmineralizao (escore 5) foi produzida pela aplicao por frico vigorosa, mostrando que a ao mecnica, associada ao aumento da concentrao do cido ctrico remove a smear layer, mas ao mesmo tempo causa a destruio por diluio qumica das fibras colgenas, levando a um resultado indesejado visto que estudos mostram que necessria a manuteno da integridade das fibras colgenas para aproveitamento das suas propriedades22,23,101.O tempo parece no ter influenciado na produo de escore 5, tanto que as diferenas entre 1, 2 ou 3 minutos no foram significativas (Tabela 3).

Discusso_____________________________________________________________80

Observamos

presena

do

escore

(hiperdesmineralizao) no grupo controle (Tabela 2). Visto que foi utilizada soluo fisiolgica neste grupo, este seria um resultado que no poderia ter ocorrido. No entanto, ressaltamos que o examinador estava cegado no momento da leitura das fotomicrografias e que o ndice de Remoo de Smear Layer subjetivo, com semelhanas entre os escores 5 e 6. A Tabela 2 tambm nos mostra que todos os espcimes que receberam escore 5, nesse grupo, foram tratados com frico que pode ter modificado o aspecto da smear layer, e como vimos anteriormente esta forma de aplicao est relacionada com a produo de superfcies indesejveis tambm para as outras concentraes. O clculo de propores dos espcimes que receberam escores 1 ou 2 entre as diferentes concentraes foi diferente estatisticamente das demais apenas para a concentrao de 25%. Mesmo a proporo sendo estatisticamente igual entre as concentraes de 15% e as demais inferiores, decidimos compar-la com a de 25% pelo fato de numericamente a concentrao de 15% possuir mais espcimes com escore 1 ou 2 que as concentraes inferiores. Resultados semelhantes foram obtidos por Sterrett et al.120 (1991) e Sterrett et al.117 (1993) que encontraram um pico de remoo de smear layer e desmineralizao dentinria para concentraes entre 25 e 30%. O Grfico 5 baseia-se na comparao das propores entre os escores 5 e escore 1 ou 2 dentro das concentraes de 15 e

Discusso_____________________________________________________________81

25%, que foram as mais efetivas para escores 1 ou 2 segundo o Grfico 1. Mesmo a Tabela 4 nos mostrando que a aplicao por frico suave foi superior s demais, comparamo-la com a aplicao passiva e exclumos a aplicao por frico que na Tabela 3 apresentou maior nmero de espcimes com escore 5 em relao s outras formas de aplicao. Para a concentrao de 15%, observamos que no houve diferena estatstica quando comparadas as propores dos espcimes com escores 1 ou 2 e escore 5 entre as formas de aplicao passiva e frico suave, bem como praticamente no houve diferena numrica entre os espcimes para esta concentrao (Grfico 5). Por outro lado, dentro da concentrao de 25% houve diferena estatstica na comparao de propores entre as formas de aplicao passiva e frico suave (Grfico 5). E notamos tambm uma diferena numrica com maior prevalncia de espcimes de escore 1 ou 2 para a concentrao de 25% e menor nmero de espcimes de escore 5. Resultado bastante favorvel para a biomodificao radicular, com maior nmero de espcimes com fibras colgenas expostas em relao as outras concentraes e formas de aplicao. Resultado esse, semelhante ao obtido por Wen et al.125 (1992) que tambm observou um padro favorvel de desmineralizao e exposio de fibras colgenas quando aplicou o cido ctrico por frico suave por 5 minutos. A concentrao de 25% foi numrica e estatisticamente superior s demais na remoo de smear layer e exposio de fibras

Discusso_____________________________________________________________82

colgenas. Dentro dessa concentrao, comparamos a aplicao passiva e por frico suave, excluindo a por frico vigorosa, como mencionado. Dessa forma, comparando as formas de aplicao que propiciaram melhores resultados (passiva e frico suave), observamos que, a por frico suave foi responsvel por mais amostras com fibras colgenas expostas que a aplicao passiva com valores estatisticamente significantes (Grfico 5). A Tabela 4 nos mostra a comparao entre todas as amostras que receberam escores 1 ou 2, mostrando que a aplicao por frico suave foi significativamente diferente que as demais formas de aplicao, reafirmando os resultados mostrados no Grfico 5. Ao observarmos as Tabelas 3 e 4 no que diz respeito ao tempo de aplicao, notamos que no h diferena estatstica entre os 3 tempos utilizados no estudo quanto a produo de espcimes com escores 5 e escores 1 ou 2. Na comparao dos diferentes tempos de aplicao dentro do Grfico 6, no foi aplicado teste estatstico devido ao pequeno nmero de espcimes envolvidos (15 espcimes no total). No entanto notamos a superioridade numrica em relao a aplicao por 3 minutos, resultado que corrobora com os obtidos por Sterrett et al.117 (1993) e Ruggeri et al.101 (2007) , que tambm observaram resultados favorveis na preservao das caractersticas bioqumicas do colgeno tipo I com aplicao de cido ctrico por frico suave por 2 minutos.

Discusso_____________________________________________________________83

Os autores, Sterrett, Murphy116 (1989) e Wen et al.125 (1992), recomendaram a aplicao do cido ctrico por 5 minutos, no entanto acreditamos que o contato por tempo to elevado de uma substncia de pH baixo e com grande citotoxicidade como o cido ctrico pode ser prejudicial aos tecidos periodontais13,14,18,68. Portanto, parece-nos indicado que a aplicao deva ser entre 2 ou 3 minutos, no excedendo este tempo afim de evitar os efeitos deletrios aos tecidos periodontais. Afim de melhor avaliar a influncia clnica da utilizao do cido ctrico, achamos oportuna a realizao de estudos controlados em humanos com intuito de avaliar a influncia do cido ctrico em procedimentos para recobrimento radicular com aplicao apenas na superfcie radicular exposta ao meio bucal, antes do rebatimento do retalho, evitando contato do cido com os tecidos periodontais.

Concluso_____________________________________________________________84

CONCLUSO
Considerando as limitaes metodolgicas e os

resultados obtidos, pode-se concluir que: Concentraes baixas de cido ctrico (0.5%, 1% e 2%) e soro fisiolgico no foram eficientes na remoo de smear layer e exposio de fibras colgenas; A forma de aplicao por frico vigorosa foi responsvel por maior nmero de espcimes com hiperdesmineralizao da superfcie dentinria; A concentrao de 25% aplicada por frico suave por 3 minutos foi a de maior eficcia na biomodificao radicular, produzindo numericamente maior quantidade de espcimes com fibras

colgenas expostas.

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Bone

and

cementum

induction

by

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Willey

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Anexos______________________________________________________________106

ANEXO 1
Certificado emitido pelo Comit de tica em Pesquisa da Faculdade de Odontologia de Araraquara - UNESP (Protocolo CEP-FO/CAr n 31/06).

Anexos______________________________________________________________107

Anexo 2
OS DADOS UTILIZADOS PARA O CLCULO DO KAPPA PONDERADO FORAM OS 90
ESCORES

(APROXIMADAMENTE 33.5% 3

DO TOTAL DE

270)

ATRIBUDOS AOS

ESPCIMES DO GRUPO DE

MINUTOS.

ESSE

GRUPO FOI ESCOLHIDO PARA

AVALIAR A REPRODUTIBILIDADE INTRA-EXAMINADOR PORQUE APRESENTOU ESPCIMES QUE RECEBERAM TODOS OS 8 ESCORES.

Tabela A1 - Tabela de contingncia dos escores atribudos s fotomicrografias


Primeira leitura 1 1 2 Segunda leitura 3 4 5 6 7 8 Soma 8,00 2,00 5,00 10,00 48,00 12,00 4,00 8 2 4 1 9 1 2 45 1 9 1 4 1 1,00 2 2 3 4 5 6 7 8 Soma 8,00 2,00 4,00 14,00 46,00 10,00 5,00 1,00 90,00

Anexos______________________________________________________________108

ANEXO 3
Quadros das notas atribudas s fotomicrografias segundo o ndice de Remoo de Smear Layer.

Anexos______________________________________________________________109

Quadro A1 Notas atribudas s fotomicrografias do grupo controle


(Grupo I) segundo o ndice de Remoo de Smear Layer Aplicao Passiva
Foto (1500x) Tempo 1'
291146 291149 291138 291123 291155 7 7 6 7 7 6 7 6 7 6 7 7 7 6 6 7 7 6 7 7 6 7 6 7 6 7 7 7 6 6 7 7 6 7 7 6 7 6 7 6 7 7 7 6 6 7 7 6 7 7 6 7 6 7 6 7 7 7 6 6

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
291132 291160 000128 291188 291130

Tempo 3'
000106 000156 201112 291154 000140

Frico Suave
Foto (1500x) Tempo 1'
000108 000112 291162 000126 000136 6 7 6 6 7 6 6 7 6 6 6 6 6 6 6 6 7 6 6 7 6 6 7 6 6 6 6 6 6 6 6 7 6 6 7 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 7 6 6 7 6 6 7 6 6 6 6 6 6 6

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
000110 000154 000132 000142 000170

Tempo 3'
000148 000158 291186 291168 000182

Anexos______________________________________________________________110

Frico Vigorosa
Foto (1500x) Tempo 1'
000104 000122 000120 000160 000144 5 6 5 6 5 5 6 6 6 6 4 6 4 5 5 5 6 5 6 5 5 5 5 5 6 4 5 5 4 5 5 6 5 6 5 5 6 6 5 6 4 6 4 5 5 5 6 5 6 5 5 6 6 5 6 4 6 4 5 5

1 leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
000116 000164 291176 000134 291140

Tempo 3'
000138 000172 000150 291196 000102

Anexos______________________________________________________________111

Quadro A2 Notas atribudas s fotomicrografias do grupo cido ctrico


0,5% (Grupo II) segundo o ndice de Remoo de Smear Layer Aplicao Passiva
Foto (1500x) Tempo 1'
250401 250403 250405 250407 250409 6 8 6 4 4 4 4 6 6 4 6 8 6 4 4 4 4 6 6 4 6 8 6 4 4 4 4 6 6 4 6 8 6 4 4 4 4 6 6 4

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
250411 250413 250415 250417 250419

Tempo 3' 250421 250423 250425 250427 250429 Foto (1500x) Tempo 1'
250431 250433 250435 250437 250439

4 6 4 4 5 1a leitura
8 6 6 6 6 6 5 6 5 5 4 4 5 5 5

3 6 4 4 5

4 6 4 4 5 3a leitura
8 6 6 6 6 6 5 6 5 5 4 4 5 5 5

4 6 4 4 5 Nota Foto
8 6 6 6 6 6 5 6 5 5 4 4 5 5 5

Frico Suave
2a leitura
8 6 6 6 6 6 5 6 5 5 4 4 5 5 5

Tempo 2'
250441 250443 250445 250447 250449

Tempo 3'
250451 250453 250455 250457 250459

Anexos______________________________________________________________112

Frico Vigorosa
Foto (1500x) Tempo 1'
250461 250463 250465 250467 250469 5 5 3 4 5 5 5 4 5 4 8 2 5 5 6 5 5 5 5 5 5 5 4 5 4 8 2 5 4 6 5 5 3 4 5 5 5 4 5 4 8 2 5 4 6 5 5 3 4 5 5 5 4 5 4 8 2 5 4 6

1 leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
250471 250473 250475 250477 250479

Tempo 3'
250481 250483 250485 250487 250489

Anexos______________________________________________________________113

Quadro A3 Notas atribudas s fotomicrografias do grupo cido ctrico


1% (Grupo III) segundo o ndice de Remoo de Smear Layer Aplicao Passiva
Foto (1500x) Tempo 1'
061187 061189 061191 911173 911175 8 7 6 6 7 6 4 4 4 4 4 4 3 3 6 8 7 6 6 7 6 4 4 4 5 6 4 3 3 4 8 7 6 6 7 4 4 4 4 4 4 4 3 3 4 8 7 6 6 7 6 4 4 4 4 4 4 3 3 4

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
061175 061177 061199 611103 611105

Tempo 3'
061127 061129 061147 061149 061151

Frico Suave
Foto (1500x) Tempo 1'
061101 061103 061161 061163 061165 1 5 1 3 1 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 1 5 1 3 1 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 1 5 1 3 1 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 1 5 1 3 1 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
061121 061123 061125 061167 061169

Tempo 3'
061117 061119 061131 061133 061135

Anexos______________________________________________________________114

Frico Vigorosa
Foto (1500x) Tempo 1'
061105 061107 061109 061157 061159 7 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 7 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
061111 061113 061115 061153 061155

Tempo 3'
061137 061139 061141 061143 061145

Anexos______________________________________________________________115

Quadro A4 Notas atribudas s fotomicrografias do grupo cido ctrico 2% (Grupo IV) segundo o ndice de Remoo de Smear Layer Aplicao Passiva
Foto (1500x) Tempo 1'
612119 612121 061281 061283 061285 4 4 6 6 2 4 4 4 4 4 4 6 4 5 4 4 4 6 6 2 4 4 4 4 4 4 6 4 5 4 4 4 6 6 2 4 4 4 4 4 4 6 4 5 4 4 4 6 6 2 4 4 4 4 4 4 6 4 5 4

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
712171 712173 712175 712161 712163

Tempo 3'
712137 712139 712141 712147 712149

Frico Suave
Foto (1500x) Tempo 1'
061271 061273 061275 061277 061279 5 5 4 4 3 5 4 4 5 4 5 5 5 5 5 5 5 4 4 3 5 4 4 5 4 5 5 5 5 5 5 5 4 4 3 5 4 4 5 4 5 5 5 5 5 5 5 4 4 3 5 4 4 5 4 5 5 5 5 5

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
712177 712179 712181 061287 061289

Tempo 3'
712151 712153 712155 712157 712159

Anexos______________________________________________________________116

Frico Vigorosa
Foto (1500x) Tempo 1'
712133 712135 061291 061293 061295 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
061297 061299 612101 612103 612105

Tempo 3'
612113 612115 612117 612127 612129

Anexos______________________________________________________________117

Quadro A5 Notas atribudas s fotomicrografias do grupo cido ctrico


15% (Grupo V) segundo o ndice de Remoo de Smear Layer Aplicao Passiva
Foto (1500x) Tempo 1'
051201 051203 051205 051207 051209 5 3 5 5 5 1 1 5 5 5 1 3 5 5 5 5 3 5 5 5 1 1 5 5 5 1 3 5 5 5 5 3 5 5 5 1 1 5 5 5 1 3 5 5 5 5 3 5 5 5 1 1 5 5 5 1 3 5 5 5

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
051211 051213 051215 051217 051219

Tempo 3'
051221 051223 051225 051227 051229

Frico Suave
Foto (1500x) Tempo 1'
051241 051243 051245 051247 051249 5 5 5 5 5 5 2 5 5 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 5 2 5 5 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 5 2 5 5 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 5 2 5 5 5 5 5 1 5 5

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
051251 051253 051255 051257 051259

Tempo 3'
051261 051263 051265 051267 051269

Anexos______________________________________________________________118

Frico Vigorosa
Foto (1500x) Tempo 1'
051231 051233 051235 051237 051239 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5

1 leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
612107 612109 612111 712143 712145

Tempo 3'
712165 712167 712169 612123 612125

Anexos______________________________________________________________119

Quadro A6 Notas atribudas s fotomicrografias do grupo cido ctrico


25% (Grupo VI) segundo o ndice de Remoo de Smear Layer Aplicao Passiva
Foto (1500x) Tempo 1'
130227 130229 130231 130272 130274 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 3 2 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 3 2 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 3 2 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 3 2

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
130276 130278 130290 130292 130294

Tempo 3'
130250 130252 130254 130256 130258

Frico Suave
Foto (1500x) Tempo 1'
130211 130213 130215 130217 130219 5 1 1 5 1 5 1 1 5 5 1 1 1 1 1 5 1 1 5 1 5 1 1 5 5 1 1 1 1 1 5 1 1 5 1 5 1 1 5 5 1 1 1 1 1 5 1 1 5 1 5 1 1 5 5 1 1 1 1 1

1a leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
130207 130209 130221 130223 130225

Tempo 3'
130201 130203 130205 130260 130262

Anexos______________________________________________________________120

Frico Vigorosa
Foto (1500x) Tempo 1'
130238 130240 130242 130264 130266 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 1 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 1 5 5

1 leitura

2a leitura

3a leitura

Nota Foto

Tempo 2'
130280 130282 130284 130286 130288

Tempo 3'
130244 130246 130248 130268 130270

Autorizo a reproduo deste trabalho. (Direitos de publicao reservado ao autor)

Araraquara, 24 de maro de 2008.

RODRIGO CAVASSIM

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