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Reatividade vascular da aorta torcica isolada do rato C57BL/6 Abstrato Ns caracterizamos a aorta torcica do mouse C57BL/6J, uma cepa

utilizada comumente na gerao de camundongos geneticamente modificados, em resposta a substncias vasoativas. Tiras de aorta foram montados em banhos de tecidos para a medio da fora contrtil isomtrica. Cumulativo curvas concentrao-resposta aos agonistas foram gerados para observar a contrao ou relaxamento dos tecidos contratados com fenilefrina ou prostaglandina F 2 (PGF2 ). No endotlio desnudado tiras, a ordem de potncia agonista contrtil (CE-log 50 [M]) foi norepinefrina> fenilefrina = 5hidroxitriptamina> dopamina> PGF2 > isoproterenol> KCl. Angiotensina II e endotelina-1 foram fracamente eficaz (15% da contrao mxima fenilefrina), assim como UK14, 304, clonidina, a histamina e adenosina. No endotlio intacto tiras, agonistas ainda causou contrao e angiotensina II e endotelina1 manteve-se ineficaz. Em experimentos com foco em angiotensina II, a angiotensina II contrao induzida foi abolida pela AT um antagonista do receptor de losartan (1 mM), mas no foi aumentado na presena da AT 2 antagonista do receptor PD123319 (0,1 mM) ortovanadato inibidor da tirosina fosfatase (1 mM) ou quando a angiotensina II foi dada noncumulatively. Prazosina abolida isoproterenol contrao induzida e no induzida pelo isoproterenol desmascarar relaxamento. Angiotensina II e endotelina-1 no causou relaxamento dependente do endotlio ou independente em fenilefrina ou PGF 2 -contratados tecidos. Acetilcolina, mas no histamina, dopamina ou adenosina causou um relaxamento dependente do endotlio vascular. Esses experimentos fornecem informaes sobre a reatividade vascular da aorta torcica mouse normal e demonstrar que a aorta do rato difere substancialmente da aorta de ratos em resposta ao isoproterenol, angiotensina II, endotelina-1, a histamina e adenosina. Durante anos, o rato tem servido como um modelo valioso para estudos em doenas cardiovasculares. Com o advento da manipulao do genoma, o mouse est na vanguarda do uso em investigao cientfica. Aqui, estabelecemos normais respostas vascular a um grupo de substncias vasoativas na aorta torcica isolada do rato C57BL/6J, um mouse utilizado comumente na criao de camundongos geneticamente modificados. Apesar de um esforo significativo tem sido feito anteriormente para examinar o papel do endotlio e clulas endoteliais derivadas de fatores vasoativos na vasculatura do mouse ( Abe et al, 1998. , Akishita, 1999 ; Faraci e Sigmund, 1999 ), um estudo da reatividade vascular do mouse para agonistas contrteis e relaxantes no tenha sido previamente realizada. Note-se que esta srie de estudos no era para ser nem exaustiva em termos de investigar todas as substncias que podem alterar o tnus muscular liso arterial. No entanto, o grupo dos agonistas examinados so representativos de vrios sistemas importantes vasoativas. Ns descobrimos que a aorta de rato contratada para -adrenrgicos, serotoninrgicos, dopaminrgicos, agonistas e prostaglandina (PG) e receptor, como tem sido observado em tecidos de rato, relaxado acetilcolina de forma endotliodependente. Surpreendentemente, a aorta de rato contrado com eficcia significativamente fraco para angiotensina II e endotelina-1, dois hormnios peptdicos com potncia significativa no sistema cardiovascular dos ratos. Por causa do interesse de nosso laboratrio na hipertenso, foi realizada uma investigao preliminar para alguns dos mecanismos que poderiam explicar a falta de resposta a angiotensina II. Nosso foco neste agonista em particular no deve diminuir a partir da constatao de que outros agonistas, como isoproterenol, a histamina e adenosina, no agiu na aorta do mouse em uma forma similar ao observado na aorta de ratos. Assim, existem diferenas significativas na resposta vascular da aorta de rato e do rato.

Materiais e Mtodos Protocolo de Banho de tecido isolado. Todos os procedimentos foram seguidos de animais, em conformidade com as diretrizes institucionais estabelecidas pela Michigan State University.Camundongos C57BL/6J machos (16-18 g; Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME; dixido de carbono) ou masculino Sprague-Dawley [250-300 g; Charles River Laboratories, Indianapolis, IN; pentobarbital (60 mg / kg ip) ] foram sacrificados e aortas torcica removido. Artrias foram dissecadas em tiras helicoidais (mouse: 0,15 0,75 centmetros; rato: 0,2 x 1,0 cm) e, em alguns experimentos, a camada de clulas endoteliais removidas friccionando o lado luminal do vaso com um cotonete de algodo mido. Tecidos foram colocados em soluo salina fisiolgica para a medio da fora contrtil isomtrica com os procedimentos padro de banho. Soluo salina fisiolgica continha 130 mM NaCl, 4,7 mM KCl, 1,18 mM KH 2 PO 4 , 1,17 mM MgSO 4 7H 2 O, 1,6 mM CaCl 2 2H 2 O, 14,9 mM NaHCO 3 , 5,5 mM dextrose, e 0,03 mM Cana 2 EDTA. Uma extremidade da preparao foi anexado a uma haste de ao inoxidvel, o outro era ligado a um transdutor de fora (FT03; Instruments Grass, Quincy, MA). Banhos muscular estavam cheios de aquecido (37 C), aerada (95% O 2 , 5% de CO 2 ) soluo salina fisiolgica. Mudanas na fora isomtrica foram registrados em um polgrafo Grass (grama Instruments). Determinao da tenso ideal de repouso. Tiras de aorta de rato foram colocados sob uma tenso especial por meio de um pinho e cremalheira, permitiu estabilizar durante 30 min com trocas de buffer a cada 10 minutos, e depois desafiados com uma concentrao mxima de KCl (100 mM). Gerao de fora ativa foi gravado, os tecidos foram lavados por 30 min, e da tenso passiva colocados nos tecidos foi aumentada. Este procedimento foi repetido vrias vezes das tenses passivas de 50 a 400 mg, de modo a gerar uma curva de tenso passiva-ativa para a determinao da tenso tima passiva em que os tecidos devem ser colocados. Tal experimento havia sido feito anteriormente para tiras de ratos artica e 1500 mg de tenso foi determinado como ideal para este tecido. Determinao da contrao artica Torcica de camundongos induzida por agonistas. Tecidos equilibrada por 1 h sob tenso ideal. Tecidos foram desafiados com uma concentrao mxima de fenilefrina (10 -5 M). Esta contrao fenilefrina dentro de cada grupo experimental no foi diferente (~ 100 mg), e, portanto, esta resposta fenilefrina foi utilizada para normalizar os dados contrtil. Tecidos foram lavados eo estado do endotlio foi analisada pela observao de relaxamento arterial ao agonista acetilcolina dependente do endotlio (1 10 -6M) nos tecidos contratado por uma concentrao metade mxima da 1 -adrenrgico fenilefrina agonista do receptor (1 10 7 M). Tecidos foram lavados vrias vezes e um dos agonistas a seguir foi adicionada de forma cumulativa (de 10:00 a 30 mM) para gerar uma curva de concentrao-resposta: angiotensina II, endotelina-1, norepinefrina, fenilefrina, 5-hidroxitriptamina (5 -HT), clonidina, UK14, 304, dopamina, isoproterenol, PGF 2 , KCl, a histamina, ou adenosina.Aps a resposta acumulada tinha atingido um mximo, os tecidos foram lavados por 1 h (lavagens a cada poucos minutos) e uma curva de concentrao-resposta cumulativa foi realizada para um agonista segundo. A ordem em que os agonistas foram testados foi aleatria, exceto para a endotelina-1. Porque endotelina-1 induzida por contrao, embora pequeno, era difcil de lavar, uma segunda curva no foi gerado nesses tecidos. Tecidos em que nenhuma contrao

do agonista teste foi observado foram reexpostos com fenilefrina (10 mM) para garantir que os tecidos foram ainda vivel. Em uma srie de experimentos, os efeitos da angiotensina AT 2 PD123319 antagonista do receptor foi examinado por sua capacidade de desmascarar angiotensina II contrao estimulada na aorta mouse. Nestes experimentos, ou o veculo (gua) ou PD123319 (100 nM) foi autorizada a incubar com as tiras de aorta antes da adio cumulativa de angiotensina II. Em uma srie separada de experincias, uma alta concentrao de angiotensina II (1 mM) foi dado a tecidos nunca antes expostas a angiotensina II para determinar se o processo de realizao de uma curva de concentrao-resposta cumulativas minimizou a resposta mxima em angiotensina II devido a receptor e dessensibilizao do tecido. Alguns dos tecidos nesta srie de experimentos tambm foram incubadas com o veculo, o AT um antagonista do receptor de losartan (1 mM), PD123319 (100 nM), ou o inibidor da tirosina fosfatase ortovanadato (1 mM). As duas ltimas manipulaes inibir ativao direta e funcionamento do AT 2 receptor, respectivamente ( Tsuzuki et al., 1996 ). Em experimentos semelhantes, a aorta torcica (desnudada de endotlio) de ratos Sprague-Dawley foi montado em banhos de tecido para comparar a contrao provocada pela cumulativo da angiotensina II e endotelina-1 ao observado na aorta mouse. Estes experimentos foram realizados de forma semelhante aos descritos acima. Determinao do Relaxamento da aorta torcica de camundongos induzida por agonistas. Agonistas que no provocou contrao da aorta de rato ou que prevamos poderia causar relaxamento foram examinados por sua capacidade de estimular o relaxamento arterial. Tecidos equilibrada por 1 h sob tenso ideal e foram desafiados com uma concentrao mxima de fenilefrina (10 -5 M). Tecidos foram lavados eo estado do endotlio foi examinado como descrito acima. Tecidos foram lavados vrias vezes e contratou novamente com um EC 50 concentrao de fenilefrina ou PGF 2 (5 mM). Quando a contrao destes agonistas foi estabelecido, um dos agonistas a seguir foi adicionada de forma cumulativa (de 10:00 a 30 mM) para gerar uma curva de concentrao-resposta: angiotensina II, endotelina-1, a dopamina, histamina, a adenosina, e acetilcolina . Isoproterenol foi examinado apenas em tecidos contrados com PGF 2 e, em alguns experimentos, os tecidos foram incubados com o veculo (metanol) ou prazosina (100 nM) para 1 h antes da adio de PGF 2 . Apenas uma curva de concentrao-resposta foi realizada em tecidos. Anlise de Dados. Os dados so apresentados como mdia SE e como uma porcentagem da resposta inicial fenilefrina mxima (10 -5 M) ou como uma porcentagem da contrao fenilefrina (100 nM) ou PGF 2 (5 mM) para o nmero de animais indicado entre parnteses. Agonista CE 50 valores foram calculados com uma anlise de regresso no-linear com o algoritmo [= efeito mximo de resposta / 1 + (CE 50 concentrao de agonista /)] no computador GraphPad Prism programa (San Diego, CA). Nos casos em que parece que o mximo no foi obtido na faixa de concentrao testada, o CE 50 valor declarado uma estimativa e os verdadeiros CE 50 valor igual ou maior que o valor declarado. Produtos qumicos. Solues de compostos foram preparadas em gua deionizada salvo indicao em contrrio. Produtos qumicos foram obtidos a partir das seguintes fontes: cloreto de acetilcolina, o cloridrato de adenosina,

angiotensina II, o cloridrato de dopamina, histamina, 5-HT cloridrato, isoproterenol, o cloridrato de noradrenalina, cloridrato de fenilefrina, prazosina, [Sar 1 ] angiotensina II, e ortovanadato de sdio (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO); endotelina-1 (Pennsula Laboratories, San Carlos, CA); PGF 2 (etanol; Biomol, Plymouth Meeting, PA) e clonidina, S -nitroso- N -acetylpenicillamine (SNAP; etanol ), PD123319, e UK14, 304 (Sigma RBI, Natick, MA). Resultados A relao comprimento-tenso foi realizada pela primeira vez para estabelecer a tenso passiva em que as tiras de aorta do rato C57BL/6J realizado de forma otimizada sob estmulo ativo. Figura 1 mostra os resultados que uma tenso passiva de mais de 200 resultados mg em uma contrao ideal e mxima de KCl.A tenso passiva de 250 mg foi usada em todos os experimentos seguintes.

Figura 1 Relao comprimento-tenso para o isolado, aorta torcica endotlio desnudado do rato macho C57BL/6J. Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. Na primeira srie de experimentos, que analisou um grupo de drogas vasoativas por sua capacidade de contrato de aorta de rato com e sem endotlio intacto.Figura 2 mostra os resultados a partir de tiras de aorta sem a camada de clulas endoteliais, tiras em que a acetilcolina causado menos de um relaxamento de 5% de fenilefrina (100 nM) induzida por contrao. Agonistas da 1 -adrenrgico, a fenilefrina e noradrenalina, foram potentes e eficazes agentes, como era de 5-HT.A 1 dos receptores adrenrgicos em aorta de rato parece ser o principal receptor adrenrgico como a plena 2 adrenrgico agonista do receptor UK14, 304 e parcial 2 -adrenrgicos clonidina agonista do receptor eram pouco eficazes.Isoproterenol tambm contraiu o endotlio desnudado aorta mouse. Outros agonistas causando contrao da aorta de rato foram PGF 2 , dopamina e KCl despolarizantes. Agentes que produzem uma contrao fraca includo angiotensina II e endotelina; histamina e adenosina no causar uma contrao mensurveis.

Figura 2 Agonista-induzida contrao da aorta de rato endotlio desnudado torcica. Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. PE, fenilefrina. Agonistas que no causar uma contrao no endotlio-desnudas strip artica, assim como 5-HT (um agonista de interesse para o nosso laboratrio), fenilefrina e PGF 2 (para experimentos posteriores relaxante) tambm foram examinados em tecidos em que o endotelial camada de clulas estava presente (Fig. 3 ). Esta foi determinada porque a acetilcolina (1 mM) causou mais de um relaxamento de 50% de tiras contratado com um EC 50 (~ 30 nM; concentrao necessria para causar um efeito halfmaximal) de fenilefrina. Tabela 1 compara o CE 50 valores de agonistas na contratao do endotlio desnudado contra endotlio intacto tiras arterial. Em geral, tecidos com endotlio intacto foram ligeiramente, mas no significativamente mais sensveis aos agonistas. Cumulativo da angiotensina II e endotelina-1 foram mal eficaz em tecidos com e sem uma camada de clulas endoteliais, assim como a adenosina e histamina. Angiotensina II e endotelina-1 produziu uma contrao entre 15 e 20% da contrao mxima produzida pela fenilefrina. Isto contrasta totalmente com a contrao estimulada por estes agonistas em aorta torcica isolados de ratos (Fig. 4 , canto superior direito).

Figura 3 Induzida por agonista contrao da aorta de rato endotlio intacto torcica. Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. PE, fenilefrina. Tabela 1 Potncia de agonistas na contratao relaxante C57BL6 / J aorta torcica de rato

Figura 4 Comparao de topo, da contrao induzida por angiotensina II e endotelina-1 em aorta-endotlio desnudado isolado do rato C57BL/6J machos (esquerda) e de ratos Sprague-Dawley machos (di-

reita). Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. PE, fenilefrina. Fundo, efeito representativo de uma concentrao nica de alta da angiotensina II (1 mM) em aorta torcica de rato seguido de uma concentrao mxima de fenilefrina (10 mM). Por causa do nosso interesse na hipertenso, ns prximos realizada uma pequena srie de experimentos que comeou a investigar a contrao relativamente pobre da aorta torcica de rato em angiotensina II. Uma possvel explicao para a falta de contrao em angiotensina II em aorta de rato pode ser a presena do AT 2 receptor, um receptor descrito como oposio aos efeitos funcionais do AT um receptor. Na presena da AT 2 antagonista do receptor PD123319 (100 nM), a angiotensina II ainda no produziu contrao significativa na aorta do rato (Fig. 4 , canto superior esquerdo). Tambm no houve contrao mensurveis na aorta do rato para uma resistente angiotensina II analgica degradao por aminopeptidase (s), [Sar 1 ] angiotensina II (10 -11 -10 -6 M; n = 4). Por outro lado, aorta de ratos contratada para [Sar 1 ] angiotensina II (1 mM), com uma magnitude de 71 5% de uma contrao mxima fenilefrina. Em uma manipulao final, uma concentrao de angiotensina II (1 mM) tambm foi dado para pessoas novatas tecidos para determinar se a dessensibilizao desempenhou um papel na falta de contrao observada significativa do mouse artica em angiotensina II. Figura 4 (abaixo) mostra um representante rastreamento da aorta do rato para uma concentrao mxima de angiotensina II, seguido de uma concentrao mxima de fenilefrina (10 mM). Como foi observado em experimentos cumulativo, a angiotensina II foi fracamente eficaz na aorta do rato e produziu uma contrao de 19 2% de contrao fenilefrina (10 mM). Contrao em angiotensina II (1 mM) no foi maior na presena de PD123319 ou ortovanadato (1 mM), um inibidor da tirosina fosfatase (dados no apresentados), mas foi completamente abolido pela AT 1 losartan antagonista do receptor [1 mM; 0 0% fenilefrina contrao (10 mM); n = 4]. A prxima srie de estudos examinaram agonistas por sua capacidade de relaxar aorta torcica isolada de rato. Figura 5 demonstra que, como encontrado em muitas artrias isoladas, a acetilcolina causou uma concentrao e relaxamento dependente do endotlio do tecido contrado com fenilefrina; no mostrado que o mesmo ocorre em tecidos contrados com PGF 2 .

Figura 5 Acetilcolina induzida por relaxamento nas tiras do endotlio intacto e endotlio desnudado de aorta torcica de rato. Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses ea resposta relatado como uma porcentagem da contrao induzida por fenilefrina 10 nM (PE). * Diferena estatisticamente significativa entre as respostas de tiras com e sem endotlio. Nenhum dos outros agonistas examinados (endotelina-1, a dopamina, histamina, angiotensina II, ou de adenosina) causou um relaxamento significativo da aorta torcica (intacto ou endotlio desnudado) contratado a um nvel semi-maximal com fenilefrina (Fig. 6 ) e dopamina continuou a provocar uma contra-

o. A falta de relaxamento da aorta tanto histamina e adenosina uma diferena entre os ratos e ratinhos. Embora no seja mostrado, resultados semelhantes para todos os agonistas foram observados em tecidos contrados com PGF 2 .

Figura 6 Efeito de agonistas selecionar em tom de tiras de endotlio intacto (em cima) e endotlio desnudado de aorta torcica de rato contrado com uma CE 50valor de fenilefrina (PE). Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. Como em tecidos em tons de base (Fig. 2 ), a -adrenrgico isoproterenol agonista do receptor causou contrao arterial nos tecidos contrados com PGF 2(Fig. 7 ); isoproterenol induzida por contrao foi abolido pela 1 -adrenrgico prazosina antagonista do receptor ( 100 nM), indicando que isoproterenol foi estimulante -adrenrgicos para provocar a contrao. Estes experimentos foram realizados somente em tecidos contrados com PGF 2 , para evitar confuso interaes entre os receptores -e adrenrgicos. Nomeadamente, induzida por isoproterenol vasorelaxamento no foi desmascarado, na presena de prazosin e estes tecidos so capazes de relaxamento porque o SNAP doadores de xido ntrico (100 nM) completamente relaxado PGF 2 -contratados tiras.

Figura 7 Efeito da 1 -adrenrgicos antagonista prazosin (100 nM) em isoproterenol contrao induzida em tiras endotlio desnudado de aorta torcica de rato. Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. * Diferena estatisticamente significativa entre as respostas de tiras com e sem prazosin. A comparao final para todos os dados gerados para a angiotensina II em aorta de rato foi feito para determinar se a angiotensina II contrao induzida foi aumentada na presena de qualquer fenilefrina ou PGF 2 . Figura 8 mostra os resultados de experimentos tanto contrtil e relaxante para a angiotensina II relatado como uma porcentagem de qualquer fenilefrina ou PGF 2 contrao induzida. A partir de uma linha de base noncontracted, a angiotensina II no induziu contrao

mensurveis em tecidos com endotlio, e induziu uma contrao de 11,9 8,6 mg em tecidos quando o endotlio estava presente. Na presena do endotlio, a angiotensina II contrao induzida no era observvel na presena de PGF 2 , mas foi cerca de 19 mg, na presena de fenilefrina.Estatisticamente, no fenilefrina nem PGF 2 potencializou os efeitos da angiotensina II.

Figura 8 Comparao da resposta angiotensina II em tiras aorta torcica de rato a partir de linha de base (com ou sem endotlio), contratada com fenilefrina ou PGF 2 . Pontos representam os meios e barras verticais da SE para o nmero de animais indicado entre parnteses. Discusso Este estudo foi realizado para caracterizar a reatividade vascular geral da aorta mouse. Uma hiptese subjacente deste estudo foi que a aorta de rato responderia de forma semelhante do rato e, para muitos dos agonistas examinado, este o caso. No entanto, a resposta vascular a agonistas do receptor de sistemas de vrios importantes para o sistema cardiovascular significativamente diferente. Semelhante ao rato, a aorta dos contratos mouse para agonistas adrenrgicos de, serotoninrgicos, dopaminrgicos e PG. O subtipo de receptor adrenrgico principal parece ser a um subtipo de receptor adrenrgico porque o 2 -agonistas do receptor clonidina e UK14, 304 foram apenas minimamente eficaz na contrao estimulante. A clonidina um agonista parcial na aorta de ratos (Connolly et al, 1998. ; . Iwanaga et al, 1998 ) e foi um agonista parcial do mouse (Wong, 1997 ). UK14, 304 um agonista completo no 2 -adrenrgicos ( Turner et al., 1985 ). O papel mnimo de 2 -adrenrgicos em aorta de rato est de acordo com os achados de Mimura et al. (1995) . Estes estudos demonstraram que 1 - mas no 2 - ou -agonistas adrenrgicos induzida proliferao de culturas de clulas do msculo liso da aorta de rato. Curiosamente, isoproterenol contratada aorta do rato e f-lo atravs da ativao da 1 -adrenrgicos, porque a umantagonista do receptor-prazosina completamente bloqueada isoproterenol contrao induzida. Isoproterenol, porm, no estimular o relaxamento e esta a primeira diferena significativa de nota entre ratos e tecidos do mouse arterial (Chapman et al, 1999. ; Martin e Broadley, 1999 ; Trochu et al, 1999. ). Ns no testamos outros agonistas do receptor adrenrgico, mas estes dados sugerem que pode haver nenhum sistema de -adrenrgicos funcional que sensvel ao isoproterenol na aorta mouse. A aorta do rato capaz de relaxar aos agonistas porque observamos relaxamento acetilcolina (endotlio intacto experimentos) e tecidos que no relaxar ao isoproterenol completamente relaxado para o SNAP doador de xido ntrico (100 nM).A camada de clulas endoteliais da aorta de rato funcionalmente ativa, porque a acetilcolina, um agonista colinrgico conhecida tambm por sua capacidade de ativar o xido ntrico sintase nas clulas endoteliais de muitas outras espcies, causou um endotlio eo relaxamento dependente da concentrao de tecidos contrados com fenilefrina. Ns no determinar se o relaxamento induzido por acetilcolina era mediado pelo xido ntrico e / ou prostaciclina, mas isso uma suposio apropriada para fazer porque as artrias dos camundongos homozigotos para a supresso da sintase endotelial do xido ntrico no

relaxar a acetilcolina ( Huang et al. , 1995 ). A presena do endotlio teve pouco efeito sobre a potncia dos agonistas contrteis. Tanto a histamina, que causa um relaxamento dependente do endotlio em aorta de ratos ( Lee et al., 1999 ), e de adenosina, que relaxa aorta de ratos de forma independente do endotlio ( He et al., 1999 ), no alterou o tnus vascular.Recm-adquirido histamina e adenosina foram usados em todos os experimentos, e as mesmas solues utilizadas nos experimentos do rato demonstrou a resposta apropriada na aorta de ratos (dados no mostrados).Assim, no podemos atribuir a falta de resposta do mouse artica histamina e adenosina falta de eficcia da droga. Estes achados sugerem que, receptor similar ao receptor -adrenrgicos, histaminrgicos e adenosina sinalizao na aorta do rato significativamente diferente do que no rato. Uma explicao bvia possvel para este achado que os receptores apropriados no pode estar presente na clula endotelial ou clulas musculares lisas, mas esta continua a ser investigado. Outra descoberta surpreendente foi a falta de uma resposta eficaz a dois hormnios peptdicos, angiotensina II e endotelina. Comparao com as respostas de aorta do rato, rato aorta respondeu mal a ambos os peptdeos.Estamos focados em vrios mecanismos possveis a respeito de porque a angiotensina II contrao induzida pode ser diminuda. No entanto, cada ttica tomamos no foi bem sucedida na melhoria da contraco da aorta do rato em angiotensina II. Sabemos que a AT um receptor deve ser no msculo do mouse aorta lisa por causa da angiotensina II no causar uma contrao de pequeno porte que completamente abolida pelo losartan. A exposio no-cumulativo em angiotensina II foi feito para determinar se o receptor de angiotensina II em aorta de rato dessensibiliza to rapidamente que a contrao mensurveis em angiotensina II diminuda ( Sasamura et al., 1994 ). Pode-se argumentar que a dessensibilizao comea imediatamente na introduo de angiotensina II ao seu receptor e que a verdadeira medida da contrao pode, portanto, nunca ser possvel. Se sim, ento dessensibilizao ocorre de forma extremamente rpida (segundos). Em geral, o mouse tem sido descrito como um modelo de alta circulao de angiotensina II por causa da angiotensina inibidores da enzima conversora pode reduzir a presso arterial de camundongos selvagens ( Oliverio et al., 1998 ). Assim, possvel que as artrias do rato so expostos a altos nveis circulantes de angiotensina II e poderia assim ser insensveis. Isso no poderia, no entanto, ser uma dessensibilizao completa nem seria esse ser necessariamente verdade para todas as artrias do rato porque quando a angiotensina I ou angiotensina II dado ao rato in vivo, aumenta a presso arterial ( Mattson e Krauski, 1998 ; Siragy et al., 1999a ) e observar o que fazemos, pelo menos, uma pequena contrao. Nossos estudos indicam que um navio grande canal do mouse no responde a angiotensina II em uma magnitude semelhante observada no rato.A aorta do rato pode conter a atividade da protease significativa ( Ikeda et al., 1999 ) que poderia destruir rapidamente peptdeos bioativos. Esta idia foi razovel porque cada peptdeo examinados [angiotensina II, endotelina-1, e neuropeptdeo Y (dados no mostrados)] tinha eficcia significativamente mais pobres. Ns enfocamos essa questo por meio de testes a capacidade do analgico protease resistente da angiotensina II, [Sar 1 ] angiotensina II, para causar a contrao da aorta. Este peptdeo no causou contrao mensurveis na aorta de rato, mas que o contrato de aorta de ratos. Assim, improvvel que as proteases so responsveis pela falta de contrao do mouse artica a peptdeos.A AT 2 antagonista do receptor PD123319 e ortovanadato inibidor da tirosina fosfatase tambm no melhorou tanto a resposta da aorta cumulativa ou nocumulativo em angiotensina II. O propsito por trs desses experimentos foi determinar se a ativao concomitante de um a AT 2 mediada receptor contrao mascarados por uma AT um receptor. A

AT 2 receptor tem sido descrito como um receptor que se ope as caractersticas progrowth e contrtil do AT um receptor (Nakajima et al, 1995. ; Griendling et al, 1996. , 1997 ). Por exemplo, a ativao da AT 2 receptor parece estimular a atividade tirosina fosfatase ( Bottari et al., 1992 ), uma atividade que contraria a ativao bem estabelecida da tirosina-quinase dependente do sinal extracelular regulado quinase mitgeno-ativada via da protena quinase ( Berk e Corson, 1997 ; Griendling et al, 1997. ). Curiosamente, camundongos sem a AT 2 receptor (Agtr2) demonstrar no somente uma resposta pressora angiotensina II, mas tambm anis isolados desses animais respondem a angiotensina II com maior magnitude de contrao em comparao com o tipo selvagem ( Akishita et al, 1999. ; Tanaka et al., 1999 ). Estes ratos tm um fundo gentico diferente (FVB / N e 129/SV), mas foram semelhantes em idade (7-8 semanas) para os camundongos no estudo. Assim, existe a possibilidade de que diferentes linhagens de camundongos respondem diferentemente a angiotensina II. No entanto, outra cepa do AT 2 ratos nulos derivados de receptor mais velhos (12-16 semanas de idade) camundongos C57BL / 6 apresentaram uma presso arterial um pouco elevada em comparao com o tipo selvagem, sugerindo que a ativao da AT 2 receptor mantm a presso arterial para baixo ( Siragy et al., 1999a , b ). Tsutsumi et al. (1999)demonstraram a capacidade de angiotensina II ao contrato de tiras de aorta de uma cepa C57BL / 6 de camundongos transgnicos, mas no descrevem a eficcia da angiotensina II contrao induzida em relao a outras substncias. A idade tambm pode influenciar a capacidade de resposta vascular angiotensina II, porque Viswanathan et al. (1991) demonstraram que, em ratos, os principais receptores da angiotensina msculo liso vascular foi um AT 2 receptores nos animais jovens e mudou para uma AT predominantemente uma populao receptora em ratos 8 semanas de idade. No entanto, a angiotensina II no causou uma significativa contrao dependente da concentrao na aorta isolada de camundongos C57BL/6J que so 16 semanas de idade (dados no mostrados), nem a 7 - a camundongos de 8 semanas de idade, utilizadas neste estudo. Assim, estes dados sugerem a idade no pode ser um fator. Finalmente, a falta de efeito de ambos um antagonista do receptor direto (PD123319) e um inibidor de uma via de transduo de sinal usado pela AT 2 receptor (ortovanadato) pode ser interpretada no sentido de que a AT 2 receptor no se ope a ativao da AT 1receptor na aorta mouse. Em resumo, este estudo fornece dados que deve ser til para o farmacologista e fisiologista investigando a vasculatura do mouse. A aorta do rato foi semelhante do rato no que diz respeito sensibilidade 1 -adrenrgicos, serotoninrgicos, dopaminrgicos e PG, mas diferia substancialmente do rato em uma falta de relaxamento para o isoproterenol agonista -adrenrgicos, adenosina, e histamina e na falta de contraco significativa, quer da angiotensina II ou endotelina-1. Agora importante para determinar por que estas diferenas ocorrem eo impacto fisiolgico eles podem ter sobre o sistema cardiovascular.

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