Manual De..

UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE HIDALGO
INSTITUTO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

REA ACADMICA DE MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA
LICENCIATURA EN MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA
MANUAL DE PRCTICAS

BIOQUMICA

SEMESTRE: 1
Enero-Junio 2012
ELABOR:

Dra. Rosalinda Acosta Salinas
Dr. Javier Piloni Martini
QFB Julia Rodrguez Sosa

LICENCIATURA EN MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
MANUAL DE PRCTICAS
BIOQUMICA Semestre: 1

FECHA ELABORACIN:

08 de Junio de 2011

ELABORARON:

NOMBRE FIRMA


Dr. Juan Ocampo Lpez


Julia Ma. M. Rodriguez Sosa

VO. BO. ACADEMIA DE CIENCIAS MORFOFISIOLGICAS :

NOMBRE FIRMA



QFB Julia Rodrguez Sosa

Dr. Juan Ocampo Lpez

MC. Irma De la Rosa Rodrguez

MVZ Samantha Jardn Xicotencatl

Dr. Armando Zepeda Batista

MANUAL DE PRCTICAS

Dra. Mara Guadalupe Torres Cardona

Dra. Maricela Ayala Martnez

Dra. Deyanira Ojeda Ramrez

Dr. Juan Carlos Hernndez Gonzlez

VO. BO. COORDINACIN DE LA LICENCIATURA EN MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA:

Dra. Maricela Ayala Martnez

FECHA DE PRXIMA REVISIN:

Julio 2012

MANUAL DE PRCTICAS

1

NDICE

Pg.
Introduccin 1
Medidas de seguridad en el laboratorio, taller y/o clnicas de la UAEH 2
Lineamientos de uso de laboratorios, talleres y/o clnicas de la UAEH 4
Practica 1. Bioseguridad 12
Prctica 2. Material y equipo de laboratorio. 26
Prctica 3. Preparacin de soluciones. 32
Prctica 4. Medicin de pH. 43
Prctica 5. Regulacin del equilibrio cido-base. 48
Prctica 6. Separacin cromatogrfica de aminocidos 54
Prctica 7. Extraccin y cuantificacin de protenas de la sangre 55
Prctica 8. Cintica de la enzima ureasa 60
Prctica 9. Reconocimiento de carbohidratos 74
Prctica 10. Aislamiento y cuantificacin de DNA. 79

MANUAL DE PRCTICAS

2
INTRODUCCIN

La bioqumica pude definirse como la ciencia que estudia las bases qumi cas de la vida.
Como la clula constituye la unidad estructural de los seres vivos, una definicin
funcional de la bioqumica sera la ciencia que estudia los componentes qumicos de las
clulas vivas, as como sus reacciones y procesos que intervienen.

La bioqumica de los cidos nucleicos constituye el corazn de la gentica molecular; la
gentica ha resultado crucial para dilucidar muchas reas de la bioqumica. La fisiologa
y la bioqumica se sobreponen por completo. La inmunologa utiliza numerosas tcnicas
de la bioqumica y viceversa. La farmacologa requiere de un slido conocimiento de la
bioqumica, ya que casi todos los frmacos se metabolizan mediante reacciones
catalizadas por las enzimas. Adems de que cada vez ms se utilizan criterios
bioqumicos para comprender los aspectos bsicos de la patologa (estudio de la
enfermedad).

Adems de ha permitido entender el proceso de nutricin, as como manejo adecuado de
esta para la formulacin de alimentos mejorados que permiten una mayor producci n de
los productos pecuarios.

Estudiante del Programa Educativo de Medicina Veterinaria y Zootecnia, te invitamos a
conocer y adentrarte en el apasionante mundo de la bioqumica.

MANUAL DE PRCTICAS

3
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO, TALLER Y/O CLNICAS DE LA
UAEH

I. Respetar la Normatividad Universitaria vigente.

II. Los alumnos slo podrn trabajar y permanecer en el laboratorio bajo la supervisin
directa del profesor, de acuerdo al Artculo 20 del Reglamento de Laboratorios. En
ningn caso el auxiliar o responsable de laboratorio, podr suplir al maestro en su
funcin.

IV. Todo usuario trabajar con el equipo de seguridad que se requiera, (bata blanca,
filipina, careta, mascarilla, cubre boca, cubre pelo, guantes de hule ltex, zapato de piso,
guantes quirrgicos, guantes industriales y/o de asbesto.

V. El usuario tendr cuidado de no contaminar los reactivos o tomar alguno
directamente con la mano. Existen muchos reactivos de los cuales se preparan
soluciones diluidas, que son altamente corrosivos. En este sentido, el contacto con ellos
deber ser reducido al mnimo con las manos, la nariz o la boca. Usar en todos los casos
una perilla o propipeta para auxiliarte al tomar la cantidad deseada de reactivo. Manual
de Ecologa, Seguridad e Higiene.

VI. Por ningn motivo pipetear las soluciones con la boca, no debes PIPETEAR
directamente del frasco que contiene al reactivo. Con esto, se evitar que los reactivos se
contaminen y que los resultados de tu prctica (y la de los dems) se vean afectados.
Para ello, toma slo la cantidad necesaria en un vaso de precipitados y NO
DEVUELVAS EL RESTANTE al frasco de origen. Manual de Higiene, Seguridad y
Ecologa.

VII. Si necesitas preparar una solucin de un reactivo que desprende gases (como los
cidos o el amoniaco) HAZLO EN LA CAMPANA y no en las mesas de laboratorio. Activa
los extractores. Manual de Higiene, Seguridad y Ecologa.

VIII. En caso de que alguna sustancia corrosiva te caiga en la piel o en los ojos, LAVA
INMEDIATAMENTE la parte afectada al chorro del agua durante al menos 5 minutos y
AVISA A TU PROFESOR. Si el derrame fue en una gran rea de la piel y de la ropa, usa
las regaderas que estn ubicadas en el laboratorio.

Manual de Procedimientos Departamento Control del Medio Ambiente DLA-MO-7.2-01.6

IX. Cuando peses en la balanza cualquier producto qumico hazlo en un pesafiltro o en

MANUAL DE PRCTICAS

4
un recipiente adecuado, NUNCA en un trozo de papel. Adems, procura no tirar el
producto alrededor de la balanza ya que puedes daarla. Si esto sucede lmpialo
inmediatamente con una brocha y/o con un trozo de tela limpio. Manual de Higiene,
Seguridad y Ecologa.

X. Las sustancias que se manejan comnmente en el laboratorio son altamente
contaminantes. Como UNIVERSITARIOS tenemos gran compromiso con el cuidado del
medio ambiente y en consecuencia debemos desecharlas de manera adecuada conforme
a las indicaciones que te indique tu catedrtico.NO DESECHES TUS SOLUCIONES,
RESIDUOS O PRODUCTOS DIRECTAMENTE EN LA TARJA, utiliza los contenedores
correspondientes al tipo de sustancia en particular. Manual de Higiene, Seguridad y
Ecologa.

XI. Todo frasco, bolsa, caja o contenedor, debern ser etiquetados. Por lo tanto
cualquier sustancia con recipiente no etiquetado ser desechada. Manual de
Procedimientos Departamento Control del Medio Ambiente DLA-MO-7.2-01.6

XV. El usuario solicitar el equipo, herramienta, material y reactivos de acuerdo a las
especificaciones del manual de prcticas, mediante el vale de laboratorio,Formato DLA-
009, y su identificacin oficial de la U.A.E.H.

XVI. Que el usuario que reciba el material sea el mismo que solicite durante el
desarrollo y el que haga entrega al final de la prctica.

XXX. Al concluir la prctica, deben dejar limpia el rea de trabajo, as como el material
y equipos utilizados. NO TIRES PAPELES Y/O BASURA A LAS TARJAS.

MANUAL DE PRCTICAS

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LINEAMIENTOS DE USO DE LABORATORIOS, TALLERES Y/O CLNICAS DE LA
UAEH

A los usuarios del laboratorio (Alumnos):
I. Respetar la Normatividad Universitaria vigente.

II. Los alumnos slo podrn trabajar y permanecer en el laboratorio bajo la supervisin
directa del profesor, de acuerdo al Artculo 20 del Reglamento de Laboratorios. En
ningn caso el auxiliar o responsable de laboratorio, podr suplir al maestro en su
funcin.

III. Para asistir a sesiones de laboratorio, es requisito indi spensable presentarse con bata
reglamentaria (blanca y de manga larga), Taller bata de color y de manga larga portada
adecuadamente, manual de prcticas correspondiente y con los materiales que no son
especficos de los laboratorios

XII.La entrada al laboratorio ser a la hora exacta de acuerdo a lo Programado.

XIII.El laboratorio no proporcionar manuales de prcticas a los usuarios, ya stos sern
suministrados por el catedrtico de la materia correspondiente.

XIV. Todo usuario trabajar con el equipo de seguridad que se requiera, (bata blanca,
filipina, careta, mascarilla, cubre boca, cubre pelo, guantes de hule ltex, zapato de piso,
guantes quirrgicos, guantes industriales y/o de asbesto.

XV. El usuario tendr cuidado de no contaminar los reactivos o tomar alguno
directamente con la mano. Existen muchos reactivos de los cuales se preparan
soluciones diluidas, que son altamente corrosivos. En este sentido, el contacto con ellos
deber ser reducido al mnimo con las manos, la nariz o la boca. Usar en todos los casos
una perilla o propipeta para auxiliarte al tomar la cantidad deseada de reactivo. Manual
de Ecologa, Seguridad e Higiene.

XVI. Por ningn motivo pipetear las soluciones con la boca, no debes PIPETEAR
directamente del frasco que contiene al reactivo. Con esto, se evitar que los reactivos se
contaminen y que los resultados de tu prctica (y la de los dems) se vean afectados.
Para ello, toma slo la cantidad necesaria en un vaso de precipitados y NO DEVUELVAS
EL RESTANTE al frasco de origen. Manual de Higiene, Seguridad y Ecologa.

XVII. Si necesitas preparar una solucin de un reactivo que desprende gases (como los
cidos o el amoniaco) HAZLO EN LA CAMPANA y no en las mesas de laboratorio. Activa
los extractores. Manual de Higiene, Seguridad y Ecologa.

MANUAL DE PRCTICAS

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XVIII. En caso de que alguna sustancia corrosiva te caiga en la piel o en los ojos, LAVA
INMEDIATAMENTE la parte afectada al chorro del agua durante al menos 5 minutos y
AVISA A TU PROFESOR. Si el derrame fue en una gran rea de la piel y

XIX. de la ropa, usa las regaderas que estn ubicadas en el laboratorio. Manual de

XX. Cuando peses en la balanza cualquier producto qumico hazlo en un pesafiltro o en
un recipiente adecuado, NUNCA en un trozo de papel. Adems, procura no tirar el
producto alrededor de la balanza ya que puedes daarla. Si esto sucede lmpialo
inmediatamente con una brocha y/o con un trozo de tela limpio. Manual de Higiene,
Seguridad y Ecologa.

XXI. Las sustancias que se manejan comnmente en el laboratorio son altamente
contaminantes. Como UNIVERSITARIOS tenemos gran compromiso con el cuidado del
medio ambiente y en consecuencia debemos desecharlas de manera adecuada conforme
a las indicaciones que te indique tu catedrtico.NO DESECHES TUS SOLUCIONES,
RESIDUOS O PRODUCTOS DIRECTAMENTE EN LA TARJA, utiliza los contenedores
correspondientes al tipo de sustancia en particular. Manual de Higiene, Seguridad y
Ecologa.

XXII. Todo frasco, bolsa, caja o contenedor, debern ser etiquetados. Por lo tanto
cualquier sustancia con recipiente no etiquetado ser desechada. Manual de

XIV. Todo usuario de laboratorio o taller, debe conocer la ubicacin de los extintores,
las puertas de emergencia, y la circulacin del lugar en caso de emergencia.

XV. El usuario solicitar el equipo, herramienta, material y reactivos de acuerdo a las
especificaciones del manual de prcticas, mediante el vale de laboratorio,Formato DLA-
009, y su identificacin oficial de la U.A.E.H.

XVI. Que el usuario que reciba el material sea el mismo que solicite durante el desarrollo
y el que haga entrega al final de la prctica.

XVII. Los usuarios debern revisar el equipo y material que se les proporcione,
verificando que este limpio, ordenado, completo y funcionando, el cual deber ser
devuelto en las mismas condiciones.

XVIII. Al devolver el equipo y material, el usuario deber solicitar el vale de laboratorio
Formato DLA-009 y su identificacin oficial de la U.A.E.H.

MANUAL DE PRCTICAS

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XIX. Cuando el material quede bajo la responsabilidad del usuario, el vale de laboratorio
Formato DLA-009 y su identificacin oficial de la U.A.E.H., ser retenido por el auxiliar
hasta la devolucin del material.

XX. En caso de prdida, ruptura o desperfecto del equipo o material de laboratorio, el
usuario solicitar al auxiliar el vale de adeudo Formato DLA-010 el cual debe anotar el
nombre y nm. de cuenta de todos los integrantes del equipo y ser respaldado con su
identificacin oficial de la U.A.E.H., se deber reponer en un plazo no mayor a 15 das
hbiles., para lo cual se retendr el vale de adeudo y su identificacin oficial de la
U.A.E.H.

XXI. Si el material adeudado no es repuesto en el plazo fijado, el o los usuarios
responsables, no podrn continuar con la realizacin de las prcticas correspondientes.
Control de adeudo Formato DLA-011.

XXII. En caso de no cumplir con la reposicin del material en el plazo establecido, el
integrante del equipo o grupo, segn sea el caso, sern dados de alta, en la aplicacin
del sistema de control de adeudos en laboratorios implementado en la U.A.E.H.

XXIII. La acreditacin de cada una de las prcticas que se realicen, estar sujeta a la
evaluacin que aplique el catedrtico.

XXIV. El usuario que realice prctica de recuperacin deber cumplir con lo estipulado en
el punto III.

XXV. Los alumnos que por indisciplina o negligencia pongan en peligro su integridad, la
de sus compaeros, la del material o la de las instalaciones, sern sujetos a la sancin
correspondiente prevista en el Reglamento de Laboratorios Artculo 36 y 38. Por la
naturaleza de las cosas que existen en el laboratorio debes mantenerte alerta y sin
distracciones (no corras, no se permiten equipos de sonido personales). TAMPOCO SE
ACEPTAN VISITAS a las horas de laboratorio.

XXVI. El usuario que incurra en alguna falta acadmica ser sancionado de acuerdo a la
Normatividad Universitaria vigente.

XXVII. Queda estrictamente prohibido realizar cualquier tipo de actividad ajena al
desarrollo de las tareas propias del laboratorio.

XXVIII. Todo usuario deber entrar y salir por los accesos autorizados, en orden y
cuidando su integridad y la de sus compaeros. (Manual de Higiene, Seguridad y

MANUAL DE PRCTICAS

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Ecologa, Capitulo 1).

XXIX. Los usuarios deben reportar cualquier anomala o maltrato por parte del
catedrtico y del personal de laboratorio, al jefe de los mismos o en su caso a la
Direccin de la escuela.

XXX. Al concluir la prctica, deben dejar limpia el rea de trabajo, as como el material y
equipos utilizados. NO TIRES PAPELES Y/O BASURA A LAS TARJAS.

XXXI. Al concluir la licenciatura, maestra o doctorado y realicen su trmite de titulacin al
solicitar su constancia de no adeudo de material, herramienta y/o equipo de laboratorios,
clnicas y talleres, se realizara una donacin en especie a las, clnicas, laboratorios y
talleres correspondientes de acuerdo al Formato DLA-043, la cantidad de la donacin
ser entre tres y cuatro salarios mnimos vigente en el estado de Hidalgo para ell o es
necesario entregar la nota y escribir en el formato el material donado, posteriormente el
documento que se extienda se entregar a la Direccin de Laboratorios y Talleres donde
se elabora y entrega la constancia de no adeudo.

DEL USUARIO (CATEDRTICO/INVESTIGADOR):
I. El catedrtico/investigador es Responsable del desarrollo y del cumplimiento de los
objetivos establecidos en su manual de prcticas o guas o proyecto de investigacin
(tesis).

II. El catedrtico/investigador que incurra en alguna fal ta acadmica ser reportado a la
Direccin de la Escuela, as mismo se elaborar el Reporte de Accin (oportunidad de
mejora, accin preventiva o accin correctiva).

III. El catedrtico llenar y entregar las Programaciones correspondientes segn
aplique: Prcticas Formato DLA-001, lo entregara al personal de laboratorio y/o taller los
primeros das del inicio del semestre, con tres copias. Proyecto de investigacin Formato
DLA-003, lo entregara al personal de laboratorio una hora antes de hacer uso del
laboratorio y/o taller.

IV. Para asistir a sesiones de laboratorio, es requisito indispensable presentarse con bata
reglamentaria (blanca y de manga larga) y equipo de seguridad.

V. La entrada al laboratorio ser a la hora exacta de acuerdo a lo Programado, el
catedrtico que no inicie la prctica durante los primeros 10 minutos sta ser
suspendida y tendr que ser reprogramada.

VI. Antes de realizar cualquier sesin prctica o experimento, el catedrtico deber
informar a los alumnos las caractersticas del material y equipo a emplear, as como las

MANUAL DE PRCTICAS

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propiedades fsicas, qumicas y toxicas de las sustancias empleadas.

VII. El catedrtico deber exigir el uso de bata reglamentaria (blanca y de manga larga)
personalizada y portada adecuadamente, manual de prcticas correspondiente y con los
materiales que no son especficos de los laboratorios.

VIII. El catedrtico deber anotar los datos indicados en el libro de registro de prcticas
(bitcora) de acuerdo a lo estipulado. Formato DLA-013

IX. El catedrtico programar en coordinacin con el Responsable de laboratorios la
recuperacin de prcticas. Formato DLA-035.1

X. El catedrtico es corresponsable de la reposicin del material de adeudo de los
alumnos de su grupo.

XI. El catedrtico tiene la responsabilidad de que los desechos qumico-biolgicos sean
depositados en los contenedores correspondientes. Manual de Procedimientos
Departamento Control del Medio Ambiente DLA-MO-7.2-01.6

XII. El catedrtico es responsable de supervisar a los alumnos desde el inicio, durante y
al finalizar la prctica. Al inicio de esta verificar que realice la prctica programada,
solicite lo necesario y cumpla con las medidas de seguridad, durante que hagan buen
uso de los materiales, equipos y que no haya desperdicio de reactivos y al finalizar que
dejen limpia el rea de trabajo, bancos en el lugar y QUE NO DEJEN PAPELES Y/O
BASURA EN LAS TARJAS.

XIII. El catedrtico deber ser el primero y ltimo en salir de los laboratorios, (NO
ABANDONAR EL LABORATORIO HASTA QUE HAYA CONCLUIDO SU SESIN, NO
DEBE DE CALIFICAR EXAMENES, NO REVISAR TAREAS, NO REVISAR TRABAJOS,
NO REALIZAR ACTIVIDADES EN LAPTOPS, ETC. Recuerda que en la enseanza
experimental es necesario valorar las actitudes y la motivacin en el trabajo grupal, ya
que es en el laboratorio donde el alumno forma su actitud hacia el trabajo en equipo, lo
cual se ver reflejado en su ejercicio profesional (Valdez, 2001).

DEL AUXILIAR DE LABORATORIOS:
I. El auxiliar de laboratorio est obligado a proporcionar el equipo, material y reactivos a
los alumnos. Formato DLA-001 y Formato DLA-003

II. Auxiliar a los alumnos durante el desarrollo de la prctica, as como vigilar el buen uso
de los materiales y equipo.

III. Vigilar el cumplimiento del Reglamento y Lineamientos de uso de Laboratorios, as

MANUAL DE PRCTICAS

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como el Manual de Higiene Seguridad y Ecologa.
IV. En ausencia del Responsable del Laboratorios, puede suspender la prctica en caso
de incumplimiento del Reglamento y Lineamientos de uso del Laboratorio.

V. El auxiliar debe permanecer en su rea de trabajo y realizar las actividades inherentes
a su rea.

VI. Apoyar en las actividades acadmicas que encomiende la Direccin y el
Responsable de laboratorios de la escuela, siempre y cuando no tenga prcticas
asignadas.

VII. Registrar en los formatos de limpieza DLA-025, DLA-026, DLA-027, DLA-028, DLA-
029, DLA-030 al DLA-031, las actividades realizadas por el personal de intendencia.

VIII. En caso de prdida, ruptura desperfecto o extravi de algn material, equipo e
infraestructura, notificar de manera inmediata al Responsable del laboratorios. Formato
DLA-017

IX. Es responsable de la custodia del material, equipo, sustancias e instalaciones, por lo
que en caso de prdida o desperfecto de algn bien se tendr que deslindar
responsabilidades de acuerdo con la Normatividad Universitaria.

X. Preparar previamente el material, equipo y reactivos necesarios para elaborar las
prcticas que ya estn programadas correspondientes a los planes y programas de
estudio vigentes. Formato DLA-041

XI. Ser responsable de mantener el material y equipo en ptimas condiciones, as como
el cubculo de laboratorio. Mantener vigente el inventario de equipo, material y reactivos.

XII. Ser responsable de reportar desperfectos o fallas en los equipos de l aboratorio y
solicitar el mantenimiento y/o accin necesaria para su funcionamiento al responsable de
laboratorios.

XIII. Elaborar y entregar el reporte mensual de actividades de su laboratorio al
responsable de laboratorios.

XXIII. Ser responsable de verificar que el usuario registre en el vale de laboratorio y
adeudo los datos correctos de acuerdo a la identificacin oficial de la UAEH.

XXIV. Vigilar que el catedrtico se registre debidamente en la bitcora de uso al
concluir su prctica.

MANUAL DE PRCTICAS

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DEL RESPONSABLE DE LABORATORIOS:
I. Es el responsable del buen funcionamiento, mantenimiento y participar con la
Direccin en las propuestas para actualizacin y desarrollo de los laboratorios.

II. Supervisar permanentemente los laboratorios, asesorar a catedrticos, alumnos y
personal de los mismos con la finalidad de lograr las metas planteadas.

III. Recepcionar las programaciones Formato DLA-01, DLA-03, Servicio a Tesistas,
alumnos y Profesores. Elaborar la calendarizacin, horario y control de prcticas
Formato DLA-005 o DLA-006

IV. Vigilar el cumplimiento del Reglamento y Lineamientos de uso de Laboratorios as
como el Manual de Higiene Seguridad y Ecologa.

V. Tiene la autoridad de suspender la prctica en caso de demora por parte del
catedrtico y/o alumnos o bien, incumplimiento del Reglamento y Lineamientos de uso
del Laboratorio.

VI. Elaborar y entregar a la Direccin el reporte mensual Formato DLA-016practicas,
Formato DLA-016inv.

VII. Elaborar y entregar relacin de alumnos que tienen adeudos a la instancia
correspondiente. Reposicin de adeudos Formato DLA-018

VIII. Ingresar en la Captura en la Aplicacin Sistema de Control de Adeudos en
Laboratorios, a los alumnos que no realizaron la reposicin de material en el tiempo
establecido. Formato DLA-018

IX. Apoyar en las actividades acadmicas que encomiende la Direccin de la escuela.

X. Elabora requerimiento semestral de material, equipo, reactivos y agua destilada
necesarios para las prcticas correspondientes a los planes y programas de estudio
vigentes, a la instancia correspondiente. Formato DLA-042.

Nota: Los lineamientos de Uso de Laboratorios, Clnicas y/o Talleres de Institutos,
Escuelas Superiores y Bachilleratos derivan del Reglamento de Laboratorios, Manual de
Seguridad, Higiene y Ecologa y Documentos Institucionales.

IMPORTANTE:
Del reglamento de laboratorio captulo II, artculo 20, tratndose de prcticas de
asignaturas de planes y programas de estudio vigentes en que deber de asistir el grupo,

MANUAL DE PRCTICAS

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este quedar a cargo del profesor titular del mismo, quien lo controlar y asesorar, en
caso de que el profesor no asista, la prctica no podr realizarse.

MANUAL DE PRCTICAS

13
I.-

NOMBRE DE LA PRCTICA: Bioseguridad

No. DE PRCTICA: 1 No. DE SESIONES: 1

No. DE INTEGRANTES MXIMO POR EQUIPO: 5

INTRODUCCIN:
La bioseguridad es un trmino que ha sido definido como las normas de comportamiento
y manejo preventivo. En el laboratorio de bioqumica veterinaria existe un riesgo evidente
de contaminacin al que est expuesto el personal de salud (profesionales, estudiantes,
investigadores, personal de limpieza, etc), al tratar con animales infectados o
potencialmente infectados, en especial cuando el mdico veterinario, est en contacto
con sangre o hemoderivados, con agujas, jeringas e instrumental contaminado. Los
lmites entre lo accidental y lo prevenible pasan por el cumplimiento de las normas
mnimas de bioseguridad hoy da consideradas universales.

Bioseguridad en el Laboratorio
En el laboratorio existen elementos nocivos o potencialmente peligrosos como los
productos biolgicos provenientes de animales infectados y los reactivos qumicos de
diferente naturaleza como cidos, productos custicos, voltiles como el ter, cloroformo,
altamente txicos o cancergenos como son: cido clorhdrico y acrilamida por mencionar
algunos.

MANUAL DE PRCTICAS

14
Un accidente ocurre por mltiples causas pero casi siempre se debe a errores humanos.
Una vez que ocurrido el accidente su consecuencia puede ser grave, por lo tanto, es
importante que el accidente no ocurra y para que esto sea as, importan nuestros hbitos
de trabajo y el conocimiento que tengamos sobre el peligro, la seguridad y el respeto de
las seales colocadas en los laboratorio, as como conocer las reglas del manejo de
muestras altamente infecciosas.

Cuando ocurre un accidente en el laboratorio es conveniente, casi obligatorio saber qu
es lo que hay que hacer porque el devenir de la salud de la persona o de las personas
involucradas depende de los minutos en que se pone en prctica el auxilio correcto.

CONDUCTA A SEGUIR PARA EVITAR ACCIDENTES

1. Tener conocimiento de los elementos de riesgo al tratar animales infectados.
2. Conocer la forma de manejarlos.
3. Adoptar tcnicas apropiadas de contencin del riesgo.
4. Solicitar de los directivos los elementos necesarios para implementar dichas
tcnicas.
5. Aceptar con inters y entusiasmo todas las prcticas que la lgica y la experiencia
sealan como convenientes.
6. No tomar decisiones basadas en tradiciones sin conocimientos cientficos.
7. Exigir de las autoridades responsables del laboratorio la implementacin de
medidas de proteccin.
En un laboratorio de bioqumica veterinaria nuestras manos tocan suciedad, material
infeccioso y agarran reactivos altamente txicos y es muy comn que se lleven a la boca,
a los ojos o a la cara, los cuales son a su vez la causa de entrada de muchas infecciones,
por lo que el laboratorio es un lugar no apto para el consumo de alimentos slidos o
lquidos.

MANUAL DE PRCTICAS

15
Un paso importante en la proteccin de nuestra salud es aceptar lo que denominamos la
regla de los cuatro NO, a la que debemos considerar como la regla de oro de la
bioseguridad.

- No fumar
- No comer
- No beber
- No maquillarse

En el laboratorio se deben lavar las manos con jabn cuantas veces sea necesario y, si
la tarea lo requiere, utilizar guantes. La posibilidad de infectarse por el manejo de
material infectado como puede ser sangre, heces, orina o pus es muy alta por lo que se
recomienda el uso de guantes para evitar los riesgos de contaminacin. Tambin es
importante proteger los ojos de vapores qumicos y salpicaduras de material infeccioso.
Un laboratorio bien provisto debe disponer de campanas para manipular solventes y de
un lavado especial para el enjuague de los ojos.

En un laboratorio donde se obtienen o llegan muestras, cuya peligrosidad se desconoce,
requiere especial atencin con relacin al manipuleo de las mismas; por eso la segunda
regla de oro de la bioseguridad es: considerar que todas las muestras son peligrosas y
como tal tratarlas.

UNIFORME PROTECTOR

- El estudiante o investigador debe llevar bata abrochada.
- En la toma de muestras se debe usar protectores de manos, nariz y boca.
- Los guantes desechables se utilizarn una sola vez y se colocarn en bolsas
destinadas a la incineracin.

MANUAL DE PRCTICAS

16
- El delantal y la bata, al terminar cada prctica, deben sumergirse en hipoclorito diluido
si se manchara accidentalmente con sangre u otros materiales, frotar las manchas con
hipoclorito diluido y enjuagar agua.
- Al final de cada prctica se limpiara el rea de trabajo con hipoclorito.

DISCIPLINA DEL PERSONAL

- Antes de comenzar las tareas, controlar el equipo y el rea que debe estar
desocupada de elementos innecesarios.
- Las superficies de las mesas deben estar limpias y ordenadas.
- Evitar el ingreso al laboratorio de personas que no se relacionen con las tareas
que se realicen.
- No ingresar artculos personales innecesarios al laboratorio.
- No humedecer con la lengua etiquetas para rotular.
- No llevarse a la boca dedos u objetos (lpices, lapicera, etc.).
- Observar las normas generales de higiene y lavarse las manos: Despus de
manipular las muestras; al terminar la prctica; al salir del laboratorio.
- No est permitido a los estudiantes guardar alimentos en la zona de trabajo.
- Evitar las distracciones y permanecer en el lugar de trabajo.

PRCTICAS CORRECTAS

a) Las agujas deben colocarse en recipientes para la incineracin y nunca
reenvainadas.
b) Proteger heridas existentes o lesiones cutneas con el uso de guantes.
c) Colocar los tubos y dems recipientes tapados en gradillas (nunca sobre la mesa).
d) No pipetear con la boca. Utilizar pipetas o dispensadores automticos.

MANUAL DE PRCTICAS

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Equipo de emergencia

- Botiqun de primeros auxilios
- Camilla
- Ropa protectora
- Desinfectantes
- Sealizacin
- Mscaras anti-gas

Primeros auxilios

Quemaduras provocadas por el fuego

- Hacer rodar a la vctima y cubrirla con una frazada para apagar el fuego.
- Si est inconsciente, colocarle la cabeza hacia atrs para facilitar la respiracin.
- Si no respira, iniciar la respiracin boca a boca.
- Colocar una compresa fra sobre la zona quemada.
- Pedir ayuda.

Quemaduras provocadas por sustancias qumicas
- Quitar la ropa de la zona afectada.
- Lavar con abundante agua dependiendo de la sustancia.
- Pedir ayuda, indicando el nombre de la sustancia que provoc la quemadura.
Derrames de cidos
- Lavar con abundante agua dependiendo del cido.
- Neutralizar la acidez de la piel con bicarbonato de sodio, durante 15 o 20 minutos.
- Pedir ayuda.

MANUAL DE PRCTICAS

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Derrames de Bases
- Lavar con abundante agua.
- Aplicar sobre la zona afectada solucin saturada de cido brico o solucin de
cido actico al 1%.
- Pedir ayuda.

OBJETIVO GENERAL:
Conocer y aplicar las medidas de bioseguridad para trabajar en el laboratorio de
bioqumica veterinaria.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1.- Indicar los principios de la bioseguridad y explicar los factores de riesgos que inciden
en un laboratorio bioqumica veterinaria.
2.- Identificar y explicar las normas de bioseguridad para evitar poner en riesgo la salud
de los estudiantes durante el trabajo en el laboratorio de bioqumica veterinaria.

.
PARTE EXPERIMENTAL O METODOLOGA:
1.- Los alumnos entregaran el cuestionario al profesor para revisarlo.
2.- Se revisara el cuestionario donde participaran los alumnos y el profesor.
3.- Los alumnos revisaran las instalaciones del laboratori o de bioqumica veterinaria
como son: regaderas, tarjas, campana de extraccin, conocer la nomenclatura de los
colores de tuberas, conocer las etiquetas de los reactivos (cidos y bases), la ubicacin
de los extinguidores, revisar que material existe en el botequn de primeros auxilios, etc.

MANUAL DE PRCTICAS

19
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS:

MATERIAL/UTENSILIOS
CANTIDAD DESCRIPCIN ESPECIFICACIONES OBS.

REACTIVOS/INSUMOS
1 Frasco de cido
clorhdrico
(cualquier
presentacin)
Los alumnos no
ocuparan el
reactivo, solamente
revisaran las
indicaciones y el
manejo que deben
de tener para su
uso en las practicas
3 y 4 adems
revisaran el cdigo
de peligrosidad que
tiene reportado el
HCl
1 Frasco de Hidrxido
de sodio (cualquier
presentacin)
Los alumnos no
ocuparan el
reactivo, solamente
revisaran las
indicaciones y el
manejo que deben
de tener para su
uso en las practicas
3 y 4 adems
revisaran el cdigo
de peligrosidad que
tiene reportado el
NaOH
EQUIPO
| Campana de
extraccin

CUESTIONARIO:

1.- Qu es la bioseguridad.

MANUAL DE PRCTICAS

20
2.- Cuales son los principios de la bioseguridad.

3.- Cuales son las medidas de bioseguridad que debe de tener un alumno de bioqumica
veterinaria en el laboratorio.

4.- Cuales son los elementos de proteccin personal que deben de tener los alumnos en
el laboratorio de bioqumica veterinaria.
.
5.- Cual es el proceso de bioseguridad que se le debe dar a las muestras biolgicas
despus de ser analizadas en el laboratorio de bioqumica veterinaria.
.7.- Que diferencia existe entre los siguientes trminos: esterilizacin y desinfeccin.

II.- REPORTE DE LA PRCTICA:
El presente tiene como objetivo servir como gua para las academias y los alumnos sobre
los contenidos de un informe de prcticas, cul es el significado de cada apartado y que
habilidades desarrollar el alumno con cada uno de estos.
El reporte de prcticas deber contener los siguientes elementos:
A) Cartula de la prctica.- Tiene como finalidad dar a conocer los datos generales
del alumno, a modo de hacerlo fcilmente identificable. Los datos que debe
contener son los siguientes:
a. Nombre del Instituto (Instituto de Ciencias Agropecuarias - UAEH)
b. Materia (Bioqumica)
c. Carrera (MVZ)
d. Grupo 2.
e. Nmero de equipo: X
f. Nombre de los integrantes del equipo,
g. Prctica No. ____. Nombre de la Prctica
h. Nombre del Profesor
i. Fecha
-

MANUAL DE PRCTICAS

21
Dentro el contenido de cada prctica deber llevar:
B) Ttulo y nmero de la prctica. El alumno escribir el nombre de la prctica
correspondiente a la sesin, as como el nmero de la prctica realizada y la
fecha.
C) Objetivos
En ellos se expresa la intencin de las actividades a desarrollar en la prctica para el
aprendizaje de los conceptos. Son las expectativas que se pretenden alcanzar
durante el desarrollo de la prctica, por lo que el estudiante escribir los objetivos que
estn en el manual de prcticas, y adems podr plantear otros objetivos que a su
juicio crea que puede alcanzar con las actividades desarrolladas en a prctica.
Se expresan en infinitivo, y siempre en relacin con el aprendizaje del alumno.
En este apartado el alumno ubica hacia donde enfoca las actividades que desarrolla,

D) Introduccin
Describe los Conocimientos Antecedentes que existen sobre el tema, los
Fundamentos tericos en los que se basan las tcnicas y metodologas empleadas y
el Estado del Arte del tema en estos momentos, para lo cual el alumno debe utilizar
material diferente al ya proporcionado por el profesor. Se sugiere una extensin
entre 1 3 cuartillas. En el texto se debe hacer referencia a la bibliografa consultada
de la siguiente manera. (Autor-ao).
El alumno puede conocer y explicar los conocimientos tericos requeridos de manera
previa para comprender la prctica.
Algunas academias prefieren que el alumno consulte la bibliografa y la use en la
discusin, por lo que esta parte se puede omitir del informe.
E) Material y Mtodos
E.1) Material: Consiste en un listado de los equipos, material, reactivos, medios de
cultivo y organismos empleados, as como las cantidades necesarias de cada uno por
equipo de alumnos.

MANUAL DE PRCTICAS

22
El alumno conoce el material a emplear as como el que se requiere que l aporte
para el desarrollo de la prctica. Puede servirle para establecer sus requerimientos en
caso de que l aplique las tcnicas en su vida profesional.
E.2) Mtodos: Describe el procedimiento que se realiz en el laboratorio, en orden
secuencial y con las cantidades, rangos, unidades, etc. precisas que se emplearon.
Puede incluirse un diagrama de bloques del procedimiento general para que el
alumno tenga una comprensin global del proceso que se realiz.
A juicio de la academia el alumno no escribir el material y mtodos si estos ya vienen
descritos en la prctica, a menos que se hayan hecho modificaciones.
F) Resultados
En este apartado se deben reportar los datos obtenidos durante el desarrollo de la
prctica, observaciones, etc. los cules pueden expresarse como tablas, grficas,
fotografas o dibujos, segn indique el instructivo de la prctica. Se debe insistir al
alumno sobre reportar los datos numricos deben reportarse usando el sistema
internacional de medidas, se debe hacer uso adecuado de las abreviaturas, y cada
grfica o figura que se incluya en el reporte deben de estar numeradas y llevar un
ttulo breve (de un prrafo) que explique lo que se desea representar.
El alumno demuestra el desarrollo de habilidades manuales e intelectuales como
manejo de equipo y material, representacin grfica de datos, elaboracin de tablas y
manejo y calculo de datos.
G) Anlisis de resultados
Aqu el alumno interpretara los resultados obtenidos durante el desarrollo de la
prctica. Har una evaluacin de los posibles factores que intervinieron para que el
resultado esperado se alcanzara, no se hubiera conseguido o se alcanzara de forma
parcial.
En esta parte el alumno desarrolla capacidades como: induccin, deduccin,
comparacin y expresin escrita.

MANUAL DE PRCTICAS

23
H) Discusin de resultados
Este apartado se puede desarrollar junto con el de Anlisis de Resultados, solo que
en este caso se revisa el significado de los resultados en trminos de los
fundamentos tericos, de sus aplicaciones y de los objetivos que se plantearon al
inicio de la prctica. Tambin se Interpretan los resultados obtenidos, y se justifican
las desviaciones de los datos o resultados esperados, se confrontan ideas y se
pueden formular hiptesis, as como se analiza cmo el desarrollo de esa prctica le
sirve en su capacitacin profesional.
En el reporte, esta seccin debe de contener la sntesis del anlisis real izado por
todos los estudiantes, la comparacin de resultados con otros equipos, as como con
los reportes bibliogrficos, en los que se sustenta la prctica.
En ello el alumno desarrolla habilidades de anlisis, de sntesis, comparacin de
expresin escrita, etc.
I) Conclusiones
Indica si se cumplieron o no los objetivos de la prctica, como resultado del anlisis y
discusin de resultados. Son puntuales en su expresin.

J) Recomendaciones
El alumno propondr modificaciones a la prctica para alcanzar los objetivos de
planteados de otra manera o propuestas de cmo lograr los objetivos de una manera
ms eficiente, a sea que se alcanzaran o no los objetivos, y analiza que otros
objetivos diferentes a los acadmicos son necesarios implementar.
K) Aplicaciones
El estudiante puede aplicar lo aprendido en su vida diaria y profesional, esto requiere
de investigacin bibliogrfica.
+
De esta manera en el informe el alumno vincula los
conocimientos tericos y prcticos con su preparacin profesional.

+
Toda revisin bibliogrfica que se cite en un reporte o escrito, debe de indicar adelante de la cita o al final del
prrafo cual fue la fuente bibliogrfica, como ya se menciono con anterioridad.

MANUAL DE PRCTICAS

24
L) Cuestionario
Debe ser diseado por los profesores de forma breve, tomando en cuenta los puntos
clave de la prctica, y con el fin de evaluar la relacin de los conceptos tericos
utilizados en esa prctica en particular. En las respuestas deber citarse la
bibliografa consultada.
+
El cuestionario puede auxiliar a conducir el anlisis y
discusin de resultados.
En este apartado el alumno desarrolla capacidades como bsqueda de informacin,
desarrollo de memoria, expresin escrita y capacidad de sntesis.
M) Glosario
Se usa para explicar, definir palabras tcnicas usadas en la prctica, acerca de los
conceptos fundamentales en relacin con la prctica. Las habilidades desarrolladas
son muy similares a las del cuestionario.
N) Referencias bibliogrficas
Cuando se cita se hace referencia a los trabajos de otros autores. Esto se hace con el
fin de evidencian el conocimiento aportado, probar la validez y confiabilidad de un
experimento, as como en la orientacin la investigacin o mtodos a seguir. Adems
esto permite que quien lea el reporte pueda tener la posibilidad de contar con las
misma fuentes y en su caso verificar o constatar datos. El profesor debe de evaluar si
el alumno esta realmente citando bibliografa consultada y es coherente con el texto
reportado.
Existen muchas formas de citar las referencias, pero en el rea cientfica la costumbre
es citar las referencias en el cuerpo del texto, anotando los datos del autor y fecha de
publicacin, despus de que se alude por escrito a las ideas o informacin obtenida,
Ejem. Bagarazzi et. al. (1998). Pero al final del escrito se incluye la referencia
completa en orden alfabtico.

MANUAL DE PRCTICAS

25
Ejemplo de artculos en revistas:
Bagarazzi ML, Boyer JD, Ayyavoo V, Weiner DB, 1998, Nucleic acid-based vaccines
as an approach to immunization against human immunodeficiency virus type-1. Curr
Top Microbiol Immunol. 226: 107-143.
Ejemplo de tesis:
De Baets B., Oplosseb van vaagrelationele vergelijkingen: een ordetheorethishe
benadering, Ph. D. thesis, University of Gent, (1995).
Ejemplo de libros y manuales:
Li, Xia and Nancy B. Crane. Electronic Style: A Handbook for Citing Electronic
Information. 2nd ed. Medford, New Jersey: Information Today, 1996.
Ejemplo de fuentes electrnicas, como paginas web:
Glantz, Stanton, John Slade, Lisa A. Bero, Peter Hanauer, Deborah E. Barnes. The Cigarette Papers.
San Francisco, Calif: UC Regents.1996.(En lnea) disponible:
http://galen.library.ucsf.edu/tobacco/cigpapers/. 15 March 2000.
Ejem. (de fuentes electrnicas, artculos en lnea).
Zilber, J. & Niven, E. (2000). Stereotypes in the news: media coverage of African-Americans in Congress.
Harvard International Journal of Press Politics. 5:32-49. Revisado en el 15 de marzo de 2000 del World
Wide Web:
http://muse.jhu.edu/journals/ harvard_international_journal_of_press_politicsv005/ 5.lzilber.html.

III.- BIBLIOGRAFA
Asomoach-Baah, A. (2005). Manual de bioseguridad en el laboratorio. Tercera edicin.
Ginebra (Suiza). pp. 1-223.

Villegas, L. H. H., Nez A. V. N. y Padilla R, C. (2007). Laboratorio de bioseguridad
nivel 3 y 4. Rev. Mex. Patol. Clin. 54(4):177-186.

Funes, E. F., Panozo M. A. y Cardozo S. T. (2005). Bioseguridad y seguridad qumica en
laboratorio. Primera edicin. Editorial poligraf. Cochabamba-Bolivia. pp 1-115.

Bets, A.O. and York, C.J.: Viral and ricketcial Infection of Animals. Accademic Press,
Neww York and London, 1996.

Burleson, F. G., Chambers, T. M., Wiedbraule, D. L,: Virology a Laboratory Manual.
Academic Press. New York, 1992.

MANUAL DE PRCTICAS

26

CENTRO PANAMERICANO DE ZOONOSIS, OFICINA SANITARIA PANAMERICANA:
Prueba de Anticuerpos Fluorescentes para Rabia. Nota tcnica No. 8, Rev. 2 Atlanta,
Georgia, E.U.A., 1967.

Coll, Morales J.: Tcnicas de Diagnstico en Virologa. Ediciones Daz de Santos, S.A.,
Madrid (Espaa), 1993

Cottral, G.E.: Manual of Standardized Methods for Veterinary Microbiology. Cornell
University Press, Ithaca and London, 1978

Cunningham, C.H.: Virologa Prctica Acribia, Zaragoza (Espaa), 1971.

Davis, D.D., Dulbeco, R., et al: Tratado de Microbiologa. Salvat, 1983.

Fenner, F., et al.: Veterinary Virology. Academic Press., USA, 1987.

Fenner, White: Virologa Mdica. Prensa Mdica Mexicana., S.A., 1981.

Habel, K., Salzman, N.P.: Fundamental Techniques in Virology. Academic Press. New
York, 1969.

Larski, Virologa para Veterinarios. Ediciones cientficas La Prensa Mdica Mexicana ,
S.A., 1980.

Michael, Thrusfield: Epidemiologa Veterinaria. Acribia, Zaragoza (Espaa), 1990.
ORGANIZACIN DE LAS NACIONES UNIDAS PARA LA AGRICULTURA Y LA
ALIMENTACION, Red de COOPERACIN Tcnica entre Laboratorios de Investigacin y
Diagnostico Veterinario. Oficina Regional para America Latina y el Caribe.

ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD. Tcnicas De Laboratorio Aplicadas a la
Rabia. Serie de Monografas No. 23 Washington 6, D.C., E.U.A., 1959.

Quin, P.J., Markey, B.K., Carter, M.E.: Clinical Veterinary Microbiology. Wolfe Publishing,
1994.

Wayne, M., Mekk A.H., Willeberb, P.: Epidemiologa Veterinaria, Principios y Mtodos.
Acribia, Zaragoza (Espaa), 1977.

Mohanty, S.B.: Virologa veterinaria. Interamericana, 1981.

MANUAL DE PRCTICAS

27
I.-

NOMBRE DE LA PRCTICA: Material y equipo de laboratorio.



INTRODUCCIN:

En la actualidad se cuenta con una gran variedad de materiales y equipos de laboratorio,
que son usados para la toma de muestra as como para el anlisis de las mismas. Por
este motivo es indispensable que el estudiante se familiarice con dichos materiales y
equipos para identificar el uso de los mismos as como su adecuada utilizacin con el fin
de evitar un dao en el equipo que repercutira de manera econmica en el diagnostico,
ya que el mal uso de este puede causar su deterioro durante el manejo y tomando en
cuenta que se trata de materiales y equipos costosos, esto repercutira de forma
econmica sobre el laboratorio. Adems es importante conocer el uso correcto del
material y equipo con el que cuenta cualquier laboratorio. De esta manera, los errores
humanos que puedan afectar el trabajo se vern minimizados.
Otra parte sumamente importante y que muchas veces se le resta valor es la preparacin
del material, ya que muchas veces el procesamiento adecuado de la muestra depender
de la forma en la que se ha preparado los materiales, por este motivo en esta prctica el
estudiante deber de preparar material que ser usado en los diversos laboratorios y se
familiarizar con los equipos indicando el uso de los mismos.

MANUAL DE PRCTICAS

28
OBJETIVO GENERAL:

Conocer el material de vidrio y equipo con el que cuentan los diversos laboratorios del
rea Acadmica (AA) de Medicina Veterinaria y Zootecnia (MVZ).


Identificar el uso y cuidados que se deben de tomar para la preparacin y manejo de los
diversos materiales y equipos con los que cuenta el AA de MVZ.


Los estudiantes conocern y aprendern el manejo y fundamento de los equipos bsicos
del laboratorio: Como son potencimetro, centrifugas, , lavando preparando y analizando
el equipo utilizado en uno de los laboratorios del PE de MVZ.
Los estudiantes entregarn un reporte describiendo el uso y cuidados de los equipos y
materiales del laboratorio asignado y la firma de liberacin de horas por algunos de los
responsables del laboratorio.


MATERIAL/UTENSILIOS
1 pieza Matraz Erlenmeyer No importa la
capacidad
1 pieza Matraz aforado

No importa la
capacidad
1 pieza Pipeta graduada No importa la
capacidad
1 pieza Pipeta volumetrica No importa la
capacidad
1 pieza Probeta No importa la
capacidad
1 pieza Vaso de precipitado No importa la
capacidad

MANUAL DE PRCTICAS

29
1 pieza Bureta.
.
No importa la
capacidad
1 pieza Tubo de ensaye.

No importa la
capacidad

REACTIVOS/INSUMOS

EQUIPO
1 pieza Centrifuga
1 pieza Parrilla elctrica
1 pieza Autoclave
1 pieza Potencimetro
1 pieza Campana de flujo
laminar

1 pieza Ultracongelador
1 pieza Balanza granataria
1 pieza Balanza analtica

CUESTIONARIO:

Cul es la diferencia entre las pipetas volumtricas y las gradadas?
Cul es el uso de los matraces y qu tipo de matraces existen?
Cul es el fundamento, por el cual podemos medir el pH de una sustancia con el
potencimetro?
Cul es el fundamento, por el cual podemos medir la concentracin de una sustancia
con el espectrofotmetro?
Cul es la diferencia entre espectrofotmetro y fotocolormetro?
Para qu usas la balanza analtica y para que la granataria?
Cmo conviertes g a rpm?

MANUAL DE PRCTICAS

30

(Ver practica 1).

III.- BIBLIOGRAFA:

Rosas, G.B y Rico, PJ.L. 1998. Bases qumicas e introduccin al manejo de muestras
biolgicas. Subcomisin de capacitacin y rea de bioqumica y Gentica de MVZ. FES
Cuautitln, UNAM, Mxico.
Skoog, D.F. y West, D.M. 1984. Anlisis instrumental. 2a Ed. Interamericana. Mxico.
Alquicira, CJA; Barrn, G.M.C.; Garca, L.E; Ocampo, L.J. Manual de Prcticas de
Bioqumica. Departamento de Ciencias Biolgicas. FES Cuautitln, UNAM, Mxico.

MANUAL DE PRCTICAS

31
I.-

NOMBRE DE LA PRCTICA:
Preparacin de soluciones



INTRODUCCIN:

Las soluciones se definen como mezclas homogneas de dos o ms sustancias; sus
componentes son el soluto (lo que se va a disolver) y el solvente (donde se disuelve el
soluto). Por lo general, el soluto se encuentra en menor cantidad y proporcin con
respecto al solvente. A nivel de laboratorio es muy importante saber preparar soluciones
de todo tipo, ya que el estado lquido es el ms adecuado para trabajar, puesto que es
difcil efectuar reacciones entre slidos y gases sin contar con una gran cantidad de
equipo en el laboratorio. Los lquidos se mezclan con bastante rapidez. Pueden medirse
exacta y rpidamente con equipo volumtrico. El disolvente ms comn es el agua
tomndola como un disolvente tpico. Examinaremos el proceso de disolucin. Las
molculas de agua son muy polares por lo que atraen a otras molculas polares y a los
iones. Por ejemplo, si un cristal de cloruro de sodio NaCl se introduce en agua, los iones
de la superficie cristalina atraen a las molculas polares del agua y gradualmente lo
rodean separndolos de los iones superficiales, por lo tanto los iones se hidratan y ya no
se quedan sujetos al cristal; gradualmente se desplazan del cristal a la solucin. Esta
separacin inica se denomina disociacin.
Si los lquidos son completamente solubles entre s, entonces son miscibles como

MANUAL DE PRCTICAS

32
el agua y el alcohol, sin embargo, si no se disuelve entre s son inmiscibles, como el
vinagre y el aceite.

SOLUCIONES EMPIRICAS
La relacin que existe entre el peso del soluto y el peso del solvente recibe el
nombre de concentracin. De acuerdo con la concentracin una solucin puede ser:
- Solucin diluida. Aquella que contienen una cantidad relativamente pequea de
soluto por unidad de volumen, es decir la cantidad de soluto es menor con relacin a
la cantidad de solvente.
- Solucin concentrada. Aquella que contiene una cantidad relativamente grande de
soluto y ste sigue siendo soluble en el solvente.
- Solucin saturada. Es aquella en la cual la sustancia disuelta se encuentra en
equilibrio con la sustancia no disuelta, es decir, al agregarse gran cantidad de soluto,
ste no se disuelve, se asienta en el fondo del recipiente.
- Solucin sobre saturada. Aquella que contiene mayor cantidad de soluto que la
saturada, es decir, existe exceso de soluto y al aadirle ms, se cristaliza parte del
que ya estaba disuelto. Para disolver dicha cantidad de soluto, la temperatura debe de
ser mayor a la ambiental lo cual hace que la solucin al enfriarse se inestable.

SOLUCIONES VALORADAS
Existen varios mtodos para determinar con exactitud la concentracin de una
solucin acuosa:

- Solucin porcentual (%) Representa los gramos del soluto presentes en 100 partes
de solucin (g o mL), pudiendo ser la concentracin en porcentual en masa y
volumen.
- Solucin molar (M) Es el peso molecular (PM) del soluto, expresado en gramos
(moles) por cada 1000 mL de solucin ( 1 L).

MANUAL DE PRCTICAS

33

M = moles / 1000 mL

- Solucin normal (N) Es el nmero de equivalentes del soluto para cada 1000 m L
de solucin.

N = Equivalentes qumicos / 1000 m L
El nmero de equivalentes se obtiene dividiendo el PM entre el nmero de
valencias de las sustancias en cuestin, el cual corresponde al nmero de H
+
o OH
-

intercambiables.

- Solucin molal (m). Son los moles de soluto por cada 1000 g de solvente (o1 Kg.)

M = moles/ 1000 g

Ejemplos de preparacin de soluciones
Porcentuales (%)

(V/V) Preparar 100 ml. de una solucin de alcohol al 40 %.
Se toman 40 ml de alcohol + 60 ml de agua destilada
(volumen total = 100 L.)

(P/V) Preparar 300 ml de una solucin de alcohol de NaCl al 0.9 %
0.9 ------- 100 ml
X ------- 300 ml
Se pesan 2.7 g de NaCl y se afora a 300 ml

MANUAL DE PRCTICAS

34
Molares (M) = moles / 1000 ml.
Preparar 1 L. de NaCl al 1 M
Determinar PM del soluto:
Na (23) + Cl (35.5) = 58.5 g. Esto representa
Como se requiere de una solucin 1M y 1 L de la misma, 58.5 g. de NaCl se
disuelve en 1000 ml. De solucin.
Preparar 350 ml de NaOH al 0.1 M
Na (23) + O (16) + H (1) = 40 g
40 g ------------- I M
X ------------- 0.1 M
X = 4 g

4 g -------------- 1000 ml
X ------------- 350 ml
X = 1.4 g.

Normal (N) = equivalentes qumicos /1000 ml.
Preparar 1 L. de H
2
SO
4
al 1 N
Como se trata de un reactivo lquido, se requiere conocer la densidad que en este
caso es de 1.53 g/ml y la pureza que es de 95%
H (1 x 2) + S (32)+o (16 x 4) = 98 g
Determinar el nmero de equivalentes qumicos. Como esta sustancia tiene como
frmula 2 H, el PM se divide entre dos: 98/2 = 49 g, lo cual corresponde a 49
equivalentes por cada litro.
Recordando que la densidad es D = m/V, donde m = masa y V =volumen y como
el reactivo es lquido, requerimos tomar un volumen determinado por ello V= m/D,

MANUAL DE PRCTICAS

35
sustituyendo: V= 49 g/1.53 g/ ml, tenemos que V= 32 ml
La mayora de los cidos tienen un grado de pureza menor al 100% por lo tanto,
para preparar una solucin con 100 % de pureza se realiza el siguiente clculo: 32
ml x 100 /95 = 33.7 ml. Esto significa que se deben de tomar 33.7 ml del reactivo y
se afora a 1000 ml. Es importante aclarar que tratndose de cidos concentrados
se debe de vaciar primero una cantidad de agua antes de agregar el reactivo para
posteriormente aforar al volumen requerido.
Preparar 500 ml de NaOH al 0.1 N
Al tratarse de un slido no requerimos densidad ni pureza
Al determinar el PM del soluto:
Na (23) + O (16) + H (1) = 40 g
La frmula posee un solo OH por ello el nmero de equivalentes = 40 g.
Dado que se requiere de una solucin 0.1 N:
40 g ----------- 1N
X ------------ 0.1 ml
X = 4 g

4 g ------------ 1000 ml
X= 500 ml
X= 2 g
Se pesan 2 g. de NaOH y se afora en 500 ml.
Para la preparacin de reactivos se debe de saber el manejo de sustancias y
lquidos. Las sustancias corrosivas son de uso delicado y deben de manejarse con
precaucin, pues al entrar en contacto con la piel o la piel pueden producir
quemaduras.

RECOMENDACIONES
Nunca se vierta agua en cido o lcali concentrado. Vierta siempre

MANUAL DE PRCTICAS

36
lentamente el cido en el agua, al mismo tiempo que se mezcla.
Nunca se pruebe un reactivo qumico.
Si su piel tiene contacto con cualquier reactivo slido o lquido, lvese
inmediatamente con abundante agua.

OBJETIVO GENERAL:
Conocer los diferentes tipos de soluciones empleadas en la prctica veterinaria, tanto en
la alimentacin de los animales, como para el anlisis de muestras y el tratamiento y
manejo de los animales


Preparar diversas soluciones y realizar ejercicios de diluciones, as como conocer
algunas medidas de precaucin en la preparacin de dichas diluciones.


Los estudiantes identificarn las presentaciones comerciales de los reactivos necesarios
para la preparacin de soluciones dentro del laboratorio.
Realizarn ejercidos de soluciones que se proponen en este manual y realizaran los
clculos para preparar una solucin porcentual, molar y normal para ser usada en el
laboratorio de bioqumica o histologa.
Prepararan algunas soluciones necesarias en el laboratorio entre las que se encuentran
las soluciones porcentuales, molares y normales soluciones necesarias en alguno de los
laboratorios del PE de MVZ. Adems prepararn las soluciones que se requieran durante
las semanas de prcticas conjuntas que se requieran en los ranchos asignados.
Los estudiantes entregarn un reporte describiendo que tipos de soluciones prepararon
y cules fueron los clculos realizados.

MANUAL DE PRCTICAS

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MATERIAL/UTENSILIOS
6 piezas Matraces
Erlenmeyer
500 mL
6 piezas Matraz erlenmeyer 1000 mL
6 piezas Probetas De vidrio de 500 mL
6 piezas Matraz aforado 500 mL
6 piezas Matraz aforado 1000 mL
4 piezas Pipeta graduada De vidrio de 5 mL de
capacidad

2 piezas Pipeta volumtrica De vidrio de 5 mL de
capacidad

4 piezas Pipeta graduada De vidrio de 10 mL
de capacidad

2 piezas Pipeta volumtrica De vidrio de 10 mL
de capacidad

6 piezas Esptula De acero inoxidable
3 piezas Piseta 250 mL
3 piezas Piseta 500 mL
REACTIVOS/INSUMOS
500 g Hidrxido de sodio Grado reactivo
1000 mL Etanol Grado reactivo
500 g Cloruro de sodio Grado reactivo
1000 mL cido sulfrico Grado reactivo
500 g Bicarbonato de
sodio
Grado reactivo
500 mL Glicerol Grado reactivo
500 g Hidrxido de potasio Grado reactivo
500 g Cloruro de potasio Grado reactivo
1000 mL cido clorhdrico Grado reactivo
100 g Rojo de fenol Grado reactivo
EQUIPO
2 piezas Balanza analtica Capacidad mx: 200 g
Lectura: 0.0001 g
Reproducibilidad:
0.00015 g
Linealidad: 0,2 mg

MANUAL DE PRCTICAS

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CUESTIONARIO:

1. Por qu razn crees que las soluciones valoradas son ms utilizadas en el
Laboratorio de Bioqumica?
2. Da un ejemplo cotidiano de soluciones empricas.
3. Explica porque el HCl 1M y 1 N se preparan exactamente de la misma manera, a
diferencia de lo que ocurre con el H
2
SO
4
.
4. Investiga que tipo de soluciones son las ms usadas en la prctica veterinaria.
5. Realiza los siguientes ejercicios:

Porcentuales
1) Si mezclamos 12 g de acetona en 60 g de agua. Calcule la concentracin en v/v.
Densidad de acetona pura 0.962 g/ml y densidad del agua 1.0g/ml.
2) Calcule cuntos gramos se necesitan para preparar 25 ml de una solucin de
bicarbonato de sodio al 1.9 / 100ml.
3) Calcule cuantos ml necesita tomar para preparar una solucin al 3% de rojo de fenol
para un volumen de 2 litros a partir de una solucin al 20 % de rojo de fenol.
4) Diga cuantos gramos hay en una solucin 24 % en peso de etanol
5) Calcule el porcentaje en peso de una solucin que contiene 32.4 g de hidrxido de
sodio (NaOH) en 1500 g de agua.

Molar
1) Calcule cuentos gramos necesita disolver para obtener una solucin con 4.2 moles /l
de cloruro de potasio
2) Calcule el nmero de milimoles contenidas en 62 g de NaCl
3) Calcule cuantos gramos se necesitan disolver para obtener una solucin al 0.5 moles /l
de NaOH.
4) Cuntos gramos de KOH se necesitan para preparar 700 mil de una solucin que
contiene 2 moles /l (PM = 56)

MANUAL DE PRCTICAS

39
5) Calcular cuntos moles estn presentes en una solucin de KCl al 33 %.
6) Calcular cuantas moles hay en 13 g de NaOH (PM = 39)
7 Calcule el peso molecular de una solucin X a la que se le agreg 45 g de un soluto x y
qu en trminos de molaridad representa 1.5 moles /1.

Molal
1) Determine la molalidad de una solucin de glicerol (C
12
H
22
O
11
) que contiene 1.2
molas /l con una densidad de 1.106 g/ml
PM0 342
2) Se mezclan 25 g de NaCl en un litro de agua, siendo la densidad de la mezcla 0.962
g/ml. Expresar concentracin en molalidad.

Normal
1) Calcule la normalidad de una solucin de 3.3 molas / 1 de H
2
SO
4

2) Calcule el nmero de equivalentes contenidos en una solucin de hidrxido de sodio
(NaOH) al 0.05 N disuelto en 800 ml.
3) Calcule el volumen que necesitamos tomar de una solucin cido clorhdrico al 8 N
para preparar 3 litros de cido clorhdrico al 1.2 N

(Ver practica uno)

III.- BIBLIOGRAFA:

Sienko, M.J y Plane, R.A. 1980. Qumica terica y descriptiva. Editorial Agular
Hess, G. G. y Uno, K. 1998. Qumica General Experimental. CECSA, Mxico.
Faras, M.G. 1988. Qumica clnica. 9. Edicin. El Manual Moderno, Mxico.

MANUAL DE PRCTICAS

40
I.-

Medicin de pH



INTRODUCCIN:
Disociacin del agua
Aunque la molcula de agua es neutra, una pequea cantidad de esta molcula puede
ionizarse, de acuerdo al siguiente equilibrio qumico:
H
2
O + H
2
O H
3
O
+
+ OH
-

Por lo que de la reaccin de disociacin de dos molculas de agua se forman iones
hidronio (H
3
O
+
) e iones hidroxilo (OH
-
). Como todas las reacciones reversibles, la
ionizacin del agua puede describirse mediante una constante de equilibrio de la
siguiente forma a 25C.
Keq = [H
+
][OH
-
]
[H
2
O].
Si el valor de Keq se ha determinado mediante la determinacin de la conductividad
elctrica del agua (en donde los portadores de corriente, los iones, provienen de la
disociacin del agua), y es de 1.8 X 10
-16
, y la concentracin molar del agua pura en un
litro de agua es de 55.5M (1000/18). Entonces: la constante de disociacin del agua o
producto inico del agua a 25C, Kw = [H
+
][OH
-
] = 1.0 X 10
-14
M
2
.
pH.
Por lo tanto en agua pura a 25C la concentracin de protones (H
+
) e hidroxilos (OH
-
) es

MANUAL DE PRCTICAS

41
igual [H
+
] = [OH
-
] = 1.0 X 10
-7
M.
El pH es el clculo de la concentracin de protones a partir del producto inico del agua,
se considera que es una forma de medir qumicamente de la acidez o alcalinidad
(basicidad) de una sustancia. El pH o potencial hidrgeno se deriva de la siguiente
formula:
pH = log 1/[H+] = -log [H+], por lo tanto el pH de define de forma matemtica como el
logaritmo negativo de la concentracin de iones hidrgeno [H
+
].
La escala de acidez se construye en funcin de la constante de equilibrio de disociacin
cida (Ka) del agua, cuyo valor es de 0.0000001, y se puede expresar de forma
abreviada por medio de su logaritmo decimal o base 10:

log 0.0000001 = -7 (esto es por los siete ceros).
Al multiplicar esta funcin por -1, se obtiene un valor positivo:
-log 0.0000001 = 7.
Por lo tanto, el pH o potencial de hidrgeno del agua pura a 25C tiene dicho valor, 7 y
se considera neutra, en tanto que aquellas soluciones con un valor menor a 7 se
consideran cidas y las arriba de 7 bsicas
en tanto que cuando al agua se le aade un cido o una base, estos niveles varan, esto
es debido a que el cido aporta H
+
por ionizacin o los consume en el caso de las bases.

OBJETIVO GENERAL:
Medir el pH de diversas sustancias, utilizando el potencimetro.

Ajustar el pH de diversas soluciones requeridas en el laboratorio donde el estudiante
preste sus servicios.

MANUAL DE PRCTICAS

42

1. Determinar y ajustar el pH de las diversas soluciones que se requieran en el
laboratorio al cual el estudiante este asignado usando el potencimetro y tiras
reactivas de pH, dependiendo del caso.
2. En el caso de dos soluciones hacer la medicin con tiras y potencimetro y compara
la medicin obtenida entre las tiras reactivas y el potencimetro.
3. Analiza l porque de la diferencia de pH de las soluciones medidas.
4. Ajustar el pH a 8.0 de la solucin reguladora de Tris-HCl 1M, para lo cual utilizarn
NaOH 5 N o HCl 10 N segn sea el caso.


MATERIAL/UTENSILIOS
6 piezas Vaso de precipitado De vidrio de 250 mL de
capacidad

capacidad

capacidad

capacidad

6 piezas Esptula Acero inoxidable
REACTIVOS/INSUMOS
50 piezas Tiras reactivas para
medir pH

300 g Hidrxido de sodio Grado reactivo

MANUAL DE PRCTICAS

43
5 muestras por
equipo
Muestras que los
alumnos quieran
medirle a pH
Los alumnos
medirn pH a las
diferentes muestras
tradas al
laboratorio usando
tiras reactivas y
potencimetros para
realizar una
comparacin entre
los dos mtodos

EQUIPO
2 pieza Potencimetro
Rango de pH: -2 a 16
Rango de temperatura: -9
a 120 C
Resolucin de pH: 0.01
Resolucin de
temperatura: 0.1C
Exactitud de pH: 0.01
Calibracin automtica
Electrodo de vidrio

2 pieza Balanza analtica Capacidad mx: 200 g
Lectura: 0.0001 g
Reproducibilidad: 0.00015 g
Linealidad: 0,2 mg

CUESTIONARIO:
1. Cul es el fundamento del cambio de color en las tiras reactivas usadas durante esta
prctica?
2. Cul es el fundamento por el cual el potencimetro es capaz de medir el pH?
3. Explica que entiendes por solucin amortiguadora y menciona alguna.
4. Cul es la importancia de estudiar el pH para en la prctica veterinaria?

(Ver practica 1)

MANUAL DE PRCTICAS

44
III.- BIBLIOGRAFA
Lehninger, A. (1998). Bioqumica. Ed. Revert, S.A., Barcelona
Orozco, F. (1993) Anlisis qumico cuantitativo. Ed. Porra. Mxico.

MANUAL DE PRCTICAS

45
I.-

Regulacin del equilibrio cido-base



INTRODUCCIN:
El sistema de regulacin cido base protege al organismo contra las modificaciones de
pH debidas principalmente a la continua formacin de diversos cidos producidos en el
curso del metabolismo; de hecho, el pH del lquido extracelular es muy constante, entre
7.35 y 7.45. En los mamferos la vida es incompatible con valores de pH de la sangre
menores de 7 o mayores de 8. La mayora de las sustancias degradadas en el organismo
producen CO
2
como producto final, el cual se combina con el agua y forma cido
carbnico (H
2
CO
3
) en gran cantidad, hasta 20 o ms moles de cido por da, equivalente
a 2 litros de HCl concentrado. Como el cido carbnico tiene la enorme ventaja de ser
eliminado en forma de CO
2
a travs de la respiracin, se facilita el mantener constante la
composicin de los compartimientos lquidos de los animales. En el metabolismo, adems
se producen otros cidos fijos no voltiles, como el cido sulfrico, los cidos aceto-
actico y -hidroxibutrico, cido rico y el fosfrico. En tales casos el H
+
del cido no
voltil es neutralizado de inmediato por el in bicarbonato (HCO
3
-
) para convertirse en
cido carbnico y por fin en CO
2
y H
2
O. Se evita la acidez, pero baja la cantidad de
HCO
3
-
disponible, as como la capacidad amortiguadora de las clulas.

Mecanismos de regulacin del equilibrio cido-bsico

MANUAL DE PRCTICAS

46
El sistema amortiguador mas efectivo en los mamferos es el formado por el H
2
CO
3
/HCO
3
-
, pues el organismo dispone de cantidades casi ilimitadas de H
2
CO
3
proveniente de la
hidratacin del CO
2
metablico, Este sistema amortiguador no es el nico presente en el
organismo, las protenas plasmticas y celulares, la hemoglobina del glbulo rojo y los
fosfatos intra y extracelulares intervienen tambin en los procesos de neutralizacin. Los
aniones totales de las sales amortiguadoras combinables con H
+
son el primer sitio de
defensa contra una alteracin producida por exceso de acidez. Como es difcil de valorar
la suma de todos los amortiguadores corporales, incluyendo los cationes de las clulas y
hasta de los huesos, con la prctica se hacen clculos basados en el pH de la sangre, el
contenido de CO
2
total de la sangre completa o del plasma y el hematocrito.
La influencia del mecanismo de intercambio de iones para mantener el pH de los lquidos
orgnicos se ejemplifica de manera caracterstica por el intercambio de aniones entre los
glbulos rojos y el plasma. As, al aumentar el CO
2
en el plasma se combina con el agua,
y forma cido carbnico, H
2
CO
3
, y aumenta la acidez, la salida de HCO
3
-
al plasma
aumenta su alcalinidad y neutraliza la mayor acidez (descenso de pH) generada por la
elevacin de H
2
CO
3
, al aumentar inicialmente la tensin de CO
2
en el plasma

En el mecanismo de regulacin respiratoria del pH participan los cambios de volmenes
respiratorios y la frecuencia del nmero de respiraciones, pues afectan al transporte de
oxgeno en la sangre, el efecto amortiguador de la hemoglobina y la eliminacin del cido
carbnico (en forma de CO
2
) a travs de los pulmones. La cantidad de CO
2
liberado del
plasma, en los pulmones, aumenta a medida que crecen la velocidad y profundidad de
las respiraciones. A su vez, el pH y la pCO
2
en la sangre influye en la amplitud y
frecuencia de los movimientos respiratorios: una elevacin en la concentracin
sangunea del H
2
CO
3
se refleja en una mayor presin de pCO
2
en la sangre y una
disminucin del pH; ambos factores, a travs del sistema nervioso central, estimulan los
movimientos respiratorios y as eliminan ms CO
2
por los pulmones; con ello baja
progresivamente la pCO
2
en la sangre, sube el pH y desaparece el estmulo de los

MANUAL DE PRCTICAS

47
movimientos respiratorios; estos ajustan su frecuencia y amplitud y se expulsa menos
CO
2
, disminuyendo a la concentracin del producto hidratado H
2
CO
3.
Se restablece as la
relacin [HCO3-]/ [H
2
CO
3
] normalmente 20 a 1 y se mantiene el pH sanguneo; ste se
puede calcular aplicando la ecuacin de Henderson-Hasselbach para el par amortiguador
(pK del cido carbnico, 6.1; relacin HCO3-/ H
2
CO
3
, 20:1).

Los riones son reguladores efectivos del equilibrio cido-bsico por su capacidad para
eliminar los cidos fijos, o sea los H
+
; mientras stos se excretan se combinan con el
HCO
3
-
impidiendo as cambios importantes en el pH. Los cidos fijos producidos en el
metabolismo son cerca de 100 mEq diarios; el rin los elimina el mismo tiempo que
recobra la reserva alcalina (los HCO
3
-
) para que el organismo siga contando con
capacidad amortiguadora. El filtrado glomerular en condiciones normales tiene un pH de
7.4; el pH de la orina vara de 4 a 8, de acuerdo con las necesidades del organismo. El
ajuste en el pH urinario depende de la disponibilidad de cidos fijos, H
+
, necesarios para
acidificar la orina o la de HCO
3
-
necesario para alcalinizarla.

OBJETIVO GENERAL:
Comprender las actividades reguladoras del pulmn y del rin para mantener el
equilibrio cido-base en condiciones tendientes a romperlo.

Observar la variacin de la concentracin de pH en la orina de un indivi duo que ha
realizado ejercicio muscular intenso, y otro que ha ingerido una carga de bicarbonato de
sodio.
Primera parte
1. Un alumno por equipo desayunar y comer normalmente evitando beber jugos
cidos.

MANUAL DE PRCTICAS

48
2. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la prctica. Vaciar la vejiga y descartar
esa orina.
3. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase.
4. Orinar en un frasco Gerber y medir el pH con el potencimetro.
5. Ingerir 250 ml de agua.
6. Realizar ejercicio muscular intenso, como por ejemplo, subir y bajar escaleras varias
veces.
7. Obtendr muestras de orina cada 15 minutos recolectadas en los frascos Gerber y se
determinar el pH hasta completar 5 determinaciones.
Segunda parte
1. Un alumno por equipo ingerir 250 ml de agua antes de la prctica. Vaciar la vejiga y
decantar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la prctica.
3. Orinar en un frasco Gerber y medir el pH de esta muestra con el potencimetro.
4. Tomar 250 ml de agua con 7.5 g de bicarbonato de sodio.
5. Obtendr muestras de orina cada 15 minutos midiendo el pH, hasta completar 5
muestras.

RESULTADOS
Registre los resultados de cada uno de los experimentos en los siguientes cuadros:
Experimento 1 Experimento 2
Muestra Tiempo pH Muestra Tiempo pH

MANUAL DE PRCTICAS

49
MATERIAL/UTENSILIOS
capacidad

6 piezas Probeta De vidrio de 100 mL de
capacidad

2 L Agua para beber
REACTIVOS/INSUMOS
500 g Carbonato de sodio Grado reactivo
EQUIPO
2 piezas Potencimetro
Rango de pH: -2 a 16
Rango de temperatura: -9
a 120 C
Resolucin de pH: 0.01
Resolucin de
temperatura: 0.1C
Exactitud de pH: 0.01
Calibracin automtica
Electrodo de vidrio

2 piezas Balanzas analticas Capacidad mx: 200 g
Lectura: 0.0001 g
Reproducibilidad: 0.00015 g
Linealidad: 0,2 mg

CUESTIONARIO:
1. Menciona cuales son los 4 sistemas amortiguadores que se encuentran en los
vertebrados.
2. Describe brevemente el control respiratorio del equilibrio cido bsico
3. Describe los mecanismos renales que regulan el equilibrio cido bsico

(Ver practica 1)

MANUAL DE PRCTICAS

50
III.- BIBLIOGRAFA
Bohinski, RC.1998. Bioqumica. Revert, S.A., Barcelona
Laguna, J.Y. Pia, E. 1992. Bioqumica. Salvat. Mxico.
Lehninger, A 1998. Bioqumica. Omega, Barcelona.

MANUAL DE PRCTICAS

51
I.-

Separacin cromatogrfica de aminocidos



INTRODUCCIN:
OBJETIVO GENERAL:
MATERIAL/UTENSILIOS

REACTIVOS/INSUMOS

EQUIPO

CUESTIONARIO:
(Ver practica 1)
III.- BIBLIOGRAFA

MANUAL DE PRCTICAS

52
I.-

Extraccin y cuantificacin de protenas de la
sangre



INTRODUCCIN:
Las protenas son macromolculas compuestas por aminocidos, unidos entre s por
enlaces peptdico, el tipo de aminocidos que componen una protena va a determinar
sus propiedades fsicas y qumicas.
a) El enlace peptdico se forma de la reaccin de condensacin que se lleva a cabo
entre el grupo amino de una aminocido (aa
1
) y el grupo carboxilo de otro
aminocido contiguo (aa
2
), por lo cual se forman enlaces covalentes entre estos
dos aminocidos, es el nico enlace covalente existente entre los aminocidos, la
unin de estos constituye el esqueleto de las protenas, la estructura lineal, dicha
estructura tambin recibe el nombre de estructura primaria de las protenas.
b) Estructura secundaria. Se refiere al arreglo espacial de la cadena polpepti dica,
arreglo dado por los ngulos de rotacin alrededor del enlaces N-Co, denominado
(phi) | y Co-C denominado (psi). Todas las estructuras secundarias queda
descrita mediante los ngulos de los enlaces | y , y se visualizan el la
representacin de Ramachandra, algunas de estas estructuras son:
a. La hlice alfa. Esta es la forma helicoidal, donde el esqueleto
polipeptdico se encuentra enrollado compactamente a lo largo del eje

MANUAL DE PRCTICAS

53
longitudinal de la molcula, y los grupos R, sobresalen del esqueleto
helicoidal. En este tipo de estructura secundaria se observa una
periodicidad cada 0.56 nm, y tiene ngulos de enlace |= -45a 50y
= -60, cada giro de la molcula incluye 3.6 aa. Esta estructura se
estabiliza por la formacin de puentes de hidrgeno internos entre el
hidrgeno unido al N y el O unido al C del enlace peptdico del cuarto
aminocido que se encuentra en posicin N-terminal en la cadena
pptidica, al acumularse la fuerza de puentes de hidrgeno a lo largo de
la cadena pptidica esta se hace ms estable.
b. Hoja beta plegada. Es la conformacin ms extendida en las cadena
polipeptdicas, en este caso el esqueleto de la cadena pptidica se
encuentra extendido en zig-zag en lugar de plegarse como una hlice, lo
que da la impresin de formar una hoja plegada. Al igual que la
conformacin antes mencionada se forma por la formacin de puentes
de hidrgeno entre el hidrgeno de grupo imino y el oxgeno del carbono
del enlace peptdico, pero estos enlaces pueden ser intracatenarios (en
la misma cadena) o intercatenarios (entre diferentes cadenas). Los
grupos R de aminocidos adyacentes sobresalen de la estructura en zig-
zag en direcciones opuestas dando lugar a la alternancia.
c) A pesar de que las protenas fibrosas tienen generalmente un solo tipo de
estructura secundaria, las protenas globulares presentan diversos tipos dentro
de la misma molcula. La estructura terciaria se forma cuando la protena que
ya adquiri su estructura secundaria se pliega sobre s misma originando una
conformacin globular. Es el resultado de interacciones entre los grupos R de
los aminocidos, estas interacciones generalmente son interacciones dbiles,
como pueden ser: puentes de hidrgenos entre grupos polares, interacciones
electrostticas, entre los grupos cargas, e interacciones hidrofbicas de tipo
Van der Walls y a veces mediante enlaces de puentes disulfuro.

MANUAL DE PRCTICAS

54
d) La estructura cuaternaria de las protenas, se forma cuando dos o ms
cadenas polipeptdicas o subunidades proteicas separadas, se unen a travs
de interacciones entre los grupos R libres. Las subunidades pptidicas pueden
ser idnticas o diferentes: por ejemplo la hemoglobina se forma con 4
polipptidos (2 cadenas globina y 2 ).

OBJETIVO GENERAL:
El alumno aprender la tcnica de sangrado en diversos animales domsticos, as como
la diferencia existente entre suero y plasma.

1) El alumno conocer el principio qumico usado para realizar la determinacin de la
concentracin de protenas en suero.
2) El alumno aprender a realizar la determinacin de la concentracin de protenas en
suero, haciendo una curva tipo de albmina.


1. Los alumnos observarn cual es la mejor forma de sangrar a diversas especies
domsticas.
2. Y de uno de ellos se tomarn 10 ml de sangre venosa, en tubos de ensayo sin
anticoagulante.
3. Dejar coagular la sangre sin agitacin, para evitar la hemlisis.
4. Posterior a este paso centrifugar a 6,000 g, para separar el coagulo del suero.
5. Antes de la realizacin de la cuantificacin de protenas, hacer una curva tipo
utilizando diluciones de albmina srica bovina.
a. Protocolo para la elaboracin de la curva de Albmina Srica Bovina
i. Preparar un estndar de BAS, pesando 1.6 mg/ml de BSA.

MANUAL DE PRCTICAS

55
ii. Colocar 60 L del estndar en el pozo B 12 de la placa de ELISA.
iii. Colocar 30 L de diluyente H
2
O o RIPA (1:5) en cada pozo de C12 a H12
iv. Hacer diluciones seriales 1:2, de BSA, para lo cual se proceder a pasar 30 L
del estndar BSA del pozo B12 al C12, mezclar bien y pasar 30l, de este pozo
al pozo D12 y as sucesivamente hasta terminar la columna.
v. En el pozo A1, A2 y A3, colocar 5 L de diluyente, sin BSA.
vi. De cada una de estas diluciones colocar 5 L de cada pozo en las columnas 1,
2 y 3, a partir de la fila B.
6. Realizar una cuantificacin de las protenas utilizando el mtodo de Lwry, tanto del
suero sin tratamiento, como del concentrado del suero, procediendo de la siguiente
manera
a. Preparacin de las muestras
i. En cada uno de los pozos vacos, colocar 5 L, de muestra (suero tratado o sin
tratamiento), as como diluciones 1:5 o 1:10 de las muestras.
7. Preparacin de los reactivos del Kit de Lowry (Marca Bio Rad
TM
)
El kit consta de 3 reactivos denominados S, A y B. Contabilizar cuantos pozos se van
a utilizar para preparar los reactivos y evitar desperdicios.
a. Mezclar 20 L del reactivo S por cada 1 ml de reactivo A formando un reactivo
llamado A'.
b. Colocar 25 L de A' en cada pozo a cuantificar.
c. Posteriormente colocar 200 L del reactivo B en cada pozo.
d. Dejar reposado la placa durante 15 minutos.
e. Leer en un Lector de Elisa a 630 nm.

MANUAL DE PRCTICAS

56

MATERIAL/UTENSILIOS
8 piezas

jeringa con aguja o
agujas de
vacutainer
10 mL
8 piezas Tubo para toma de
muestra sangunea
Con capacidad de 10 mL,
sin anticoagulante

8 piezas Placas de ELISA
8 piezas Bolsas de dilisis

REACTIVOS/INSUMOS
300 g Sulfato de amonio Grado analtico
A
B
C
D
E
F
G
H
1 2 3 4 5 6 7 8 11 12 9 10

Pozos para preparar las diluciones de BSA
1:2

Pozos para la curva tipo de BSA Pozos para el blanco
Pozos para las muestras a cuantificas

MANUAL DE PRCTICAS

57
100 mL Reactivo de Lwry Marca Bio Rad
TM

EQUIPO
1 pieza Centrfuga clnica
1 pieza Lector para placas
ELISA Biochrom
Anthos Zenyth 200rt
Microplate Reader
Rango de longitud de
onda: 200 a 100 nm

CUESTIONARIO:
1) Qu tipo de protenas se encuentran en mayor cantidad en el suero?
2) Investiga que otras protenas componen el suero de los mamferos.
3) Investiga qu funcin tiene cada una de las protenas del plasma de un mamfero.
4) Menciona el nombre de una enfermedad causada por alteraciones en alguna de las
protenas sanguneas, indicando cual sera la sintomatologa que observaras como
veterinario.

(Ver practica 1)

III.- BIBLIOGRAFA

MANUAL DE PRCTICAS

58
I.-

Cintica de la enzima ureasa



INTRODUCCIN:
Con excepcin de un pequeo grupo de molculas de RNA cataltico, tal es el caso de
las ribozima, todas las enzimas son protenas. Ests molculas actan como
catalizadores biolgicos, es decir aceleran una determinada reaccin qumica en la que
uno o varios sustratos son transformados en uno o varios productos. Algunas de las
enzimas solamente requieren de la protena para ser activas biolgicamente, pero en
algunos casos requieren de otros componentes qumicos como son: iones inorgnicos
(Fe
2+
, Mg
2+
, Mn
2+
o Zn
2+
) denominado cofactor; otro grupo qumico son los complejos
orgnicos o metaloorgnicos denominados coenzimas, tal es el caso del FAD, NADH,
Co-A; estos actan como transportadores transitorios de grupos funcionales especficos.
Estos pueden o no unirse de manera covalente con la protena, si se une de manera as
se denomina grupo prosttico. Una enzima completa junto con la coenzima o cofactor
se denomina holoenzima, en tanto que la parte proteica recibe el nombre de apoenzima
o apoprotena.
La reaccin catalizada por una enzima tiene lugar dentro de los confines dentro de la
estructura secundaria de la enzima denominada sitio activo, donde la enzima fija al
sustrato, compuesto qumico sobre el cual acta la enzima, formado el denominado
complejo enzima-sustrato; una vez formado este complejo se abate la energa de

MANUAL DE PRCTICAS

59
reaccin Su actividad cataltica depende de la integridad de su conformacin, ya que si
esta se pierde (desnaturaliza) se pierde su funcin. Por esta razn las enzimas presentan
actividad nicamente si se mantiene la integridad de su conformacin, ya que si esta se
pierde (desnaturaliza) se pierde su funcin.
Las enzimas siguen los principios energticos de la termodinmica, para lo cual cambian
la energa inicial de los productos a un estado de energa final de los productos, siempre
formacin de productos, la pregunta seria porque no ocurre este proceso entonces, para
lo cual es necesario mencionar que para que se lleve a cabo la transformacin es
necesario primero alcanzar un punto de transicin para lo cual es necesario aplicar la
denominada energa de activacin, que permite que se llegue a un estado energtico
intermedio (de transicin) para que ocurra la reaccin enzimtico, la energa de
activacin.

Cintica enzimtica
La cintica enzimtica comprende el estudio de la velocidad de reacci n de una enzima
determinada y de las condiciones que la modifican. Las variables importantes en los
estudios cinticos son las concentraciones se los sustratos y los productos, la
temperatura, la presin, el efecto de ciertos solventes, el pH, la fuerza i nica del medio,
el tiempo, la presencia de inhibidores, as como la estereoqumica y la estequiometra de
las molculas involucradas, entre otros factores.

MANUAL DE PRCTICAS

60
La cintica enzimtica es la rama de la Bioqumica que estudia la velocidad de las
reacciones qumicas catalizadas por enzimas, considerando que la reaccin enzimtico
se puede ejemplificar: Donde E representa la concentracin enzimtica, S la
concentracin del sustrato, P la concentracin del producto y ES el complejo enzima
sustrato.

En forma prctica, la velocidad de reaccin de una enzima puede determinarse utilizando
cualquiera de los siguientes procesos:
a) Medir la disminucin en la concentracin del sustrato en una unidad de tiempo
determinada.
b) Medir el aumento en la concentracin del producto final en una unidad de tiempo
determinada.
c) Medir el cambio en la concentracin de una coenzima en una unidad de tiempo
determinada, como medicin indirecta de la actividad de la enzima.
La forma de realizar las mediciones puede ser por muestreo discontinuo, el la cual se
toman muestras de las mezclas de reaccin en diferentes intervalos de tiempo, se para la
reaccin y se hace la determinacin del sustrato, producto o coenzima. Tambin puede
ser una medicin continua, en donde se hace uso de una propiedad fsica distintiva del
sustrato, producto o coenzima, la cual se puede medir sin interferir con el desarrollo de la
reaccin.
La curva de desarrollo de la reaccin as obtenida muestra que la reaccin desciende
con el tiempo, debido a:
a) Si la reaccin es significativamente reversible, la velocidad de la reaccin inversa
aumentar en tanto aumente la concentracin del producto.
b) La enzima puede desnaturalizarse a lo largo de la reaccin enzimtica
c) El producto de la reaccin pude inhibir la actividad enzimtica.
E + S ES P + E
K
1

K
-1

K
2

MANUAL DE PRCTICAS

61
Por lo tanto para medir la actividad cataltica mxima de una cantidad de enzima es
necesaria:
a) Medir la velocidad inicial de la reaccin preferiblemente por un mtodo continuo.
b) Realizar la prueba usando un exceso de sustrato.
c) Mantener las condiciones ptimas de reaccin (pH y temperatura)
d) Determinar la velocidad de la reaccin sin enzima (desnaturalizndola)
Siguiendo estas recomendaciones, cuando graficamos los valores de la velocidad inicial
contra los valores de la concentracin de sustrato, se obtiene una hiprbola, que
demuestra que para valores bajos de [S] la velocidad inicial de la reaccin es
directamente proporcional a la concentracin del sustrato, pero a valores altos la
velocidad inicial ya no se modifica, por lo tanto la ecuacin que define la actividad
enzimtico se escribe de la siguiente forma.

Esta ecuacin se conoce como la ecuacin de Michaelis-Menten y Km es la constante
de Michaelis, y es especfica para cada enzima
Enzima Ureasa
Fue una de las primeras enzimas en ser caracterizada (Sumner, 1926). Tienen
especificidad absoluta por un sustrato, la urea. La ureasa cataliza la reaccin que
hidroliza este compuesto nitrogenado en dos molcula del in amonio y una de bixido
de carbono, dicha reaccin se muestra en la figura 1. Para llevar a cabo su actividad
requiere del in Ni2+.

Es importante sealar que la urea es producida naturalmente en el hgado en el llamado
O
C NH
2
NH
2

Urea
2NH
4
+

2H
2
O 2CO
2

V
0 =

V
Mzx
[S]
[S] + Km

MANUAL DE PRCTICAS

62
ciclo de la urea y en el caso de los animales ureotlicos es un compuesto clave para la
eliminacin del exceso de N metablico; adicionalmente , en los rumiantes puede ser
reciclada y ya sea por va sangunea o salival, retornada al rumen, donde la ureasa
producida por algunas bacterias ruminales permite obtener el in amonio que es
reabsorbido como amonaco y utilizado para la formacin de aminocidos. Conocida esta
propiedad fisiolgica de los rumiantes con fines zootcnicos de alimentacin se ha
extendido la prctica de suministrar urea como fuente de nitrgeno no proteico,
especialmente en explotaciones intensivas.
La ureasa tiene un peso molecular de 483 kDa y un punto isoelctrico de 5.0. Consta de
seis subunidades idnticas. Adems de ser producida por las bacterias del rumen,
tambin es producida por diversos invertebrados marinos, as como ciertas plantas
leguminosas como el frijol de soya y el haba.

OBJETIVO GENERAL:
El alumno determinar cules son los diversos factores que influyen en la actividad
enzimtica y la manera en la que pueden ser observados o medidos en el laboratorio

El alumno determinar la influencia en la actividad enzimtica del inhibidor cloruro de
mercurio (HgCl
2
), en la reaccin catalizada por la ureasa.

1. A cada equipo se le proporcionar un tubo de ensaye con extracto de ureasa de soya
previamente centrifugado.

1. Determinacin del efecto de la variacin en la concentracin de sustrato (urea)
sobre la velocidad de reaccin de la ureasa.

MANUAL DE PRCTICAS

63
a. Se prepara la siguiente serie de tubos:
Tubo 1 2 3 4 5 6
Urea 0.25 M 0.5 1.0 2.0 5.0 7.5 7.5
A. fosfatos pH 7.2 11.5 11.0 10.0 7.0 4.5 4.5
HgCl
2
al 1% 4 gotas
Incubar en baos Mara durante 5 min. A 50 C
Ureasa 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
HgCl
2
al 1% 4 gotas 4 gotas 4 gotas 4 gotas 4 gotas
Nota. El volumen indicado es en ml, con excepcin en donde se indica gotas.

b. Para la titulacin se pasar 5 ml del tubo 6 (blanco) a un matraz Erlenmeyer de 125
ml.
c. Se agregarn 2 gotas del indicador rojo de metilo y se observar la coloracin
obtenida. Si hubo actividad, se habr formado hidrxido de amonio (NH
4
OH), que es
la base y la solucin se ver amarilla. Si no hubo actividad enzimtica, entonces la
solucin tendr un color rosa y no ser titulada.
d. Cuando la solucin sea amarilla, se proceder a su titulacin, agregando lentamente
al matraz cido clorhdrico al 0.1 N por medio de la bureta, hasta que el color del
indicador vire a canela. Es necesario anotar los ml de HCl utilizados en la titulacin.
e. Despus se proceder a titular 5 ml de cada uno de los tubos restantes de este
experimento en su respectivo matraz, tal como se hizo con el control.
f. A continuacin se calcular el valor de titulacin corregido (VTC) de cada tubo. Para
esto se debe restar al valor de cada tubo, el valor del tubo control, ambos de ml.

2. Determinacin del efecto de la variacin en la concentracin de sustrato (urea)
sobre la velocidad de reaccin de la ureasa.

MANUAL DE PRCTICAS

64
Tubo 1 2 3 4 5
Urea 0.25 M 7.5 7.5 7.5 7.5 7.5
A. fosfatos pH 7.2 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5
Agua destilada 0.9 0.7 0.5 0.3 0.1
Ureasa 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
HgCl
2

b. Se proceder con la titulacin de cada tubo, y al clculo del VTC como se indica en
el punto II, incisos e y f de esta metodologa.

3. Determinacin del efecto de la variacin en la temperatura sobre la velocidad de
reaccin de la ureasa.
Tubo 1 2 3 4
Urea 0.25 M 7.5 7.5 7.5 7.5
A. fosfatos pH 7.2 4.5 4.5 4.5 4.5
Incubar en baos
Mara durante 5 min.
0 C 20 C 50 C 80 C
Ureasa 0.5 0.5 0.5 0.5
Incubar en baos
Mara durante 5 min.
0 C 20 C 50 C 80 C
HgCl
2
al 1% 4 gotas 4 gotas 4 gotas 4 gotas


MANUAL DE PRCTICAS

65
4. Determinacin del efecto de la variacin del pH sobre la velocidad de reaccin
de la ureasa.
Tubo 1 2 3 4 5
Urea 0.25 M 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
7 ml de fosfatos
pH
3 5 7 8.5 10
Ureasa 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
HgCl
2


RESULTADOS
1. Calcular los M de urea inicial en cada tubo de los experimentos, se debe considerar
que esta se prepar a 0.25 M, es decir, hay 25 M por cada ml y cada tubo tiene un
volumen final de 12.5 ml. Por lo que para realizar el clculo utili ce la siguiente
frmula: (250 M)(ml de urea al 0.25 M)/125 ml.
2. Para calcular la concentracin de urea hidrolizada (en M), se debe de multiplicar el
valor de VTC por 50. Esto se debe a que cada molcula de urea da origen a dos
molculas de NH
4
OH, cada una de las cuales reacciona a su vez con una molcula de
HCl. Como la solucin de HCl est a 0.1N, esto significa que hay 100 M /ml, por lo
que cada ml dicha solucin equivale a 50 M/ml (100/2) de molculas de urea
hidrolizada. Este clculo se har en cada una de las variaciones manejadas en este
experimento.
3. Una vez realizados todos los clculos, completar las siguientes tablas:

MANUAL DE PRCTICAS

66
1. Determinacin del efecto de la variacin en la concentracin de sustrato (urea) sobre
la velocidad de reaccin de la ureasa.
Tubo M de urea inicial
en cada tubo
VTC M de urea
hidrolizada
1
2
3
4
5
6

Se proceder a graficar en Excel los M de urea hidrolizada en el eje de las ordenada (y)
y los ml de sustrato inicial en el eje de la abscisas (x).
Se verificar si con los datos obtenidos se puede trabajar con los mtodos de Michaelis-
Menten y Lineveaver-Burk para determinar la afinidad de la enzima por el sustrato.

2. Determinacin del efecto de la variacin en la concentracin de sustrato (urea) sobre
la velocidad de reaccin de la ureasa.
Tubo M de urea inicial en
cada tubo
VTC M de urea
hidrolizada
1
2
3
4
5
Se proceder a graficar en Excel la M de urea hidrolizada en el eje de las ordenada (y)
y los ml de enzima inicial en el eje de la abscisas (x).

MANUAL DE PRCTICAS

67
3. Determinacin del efecto de la variacin en la temperatura sobre la velocidad de
reaccin de la ureasa.
cada tubo
VTC M de urea
hidrolizada
1
2
3
4
Se proceder a graficar en Excel la M de urea hidrolizada en el eje de las ordenada (y)
y la temperatura en el eje de la abscisas (x).

4. Determinacin del efecto de la variacin del pH sobre la velocidad de reaccin de la
ureasa.
cada tubo
VTC M de urea
hidrolizada
1
2
3
4
5
Se proceder a graficar en Excel los M de urea hidrolizada en el eje de las ordenada (y)
y el pH del medio en el eje de la abscisas (x).

CONCLUSIONES
El alumno identificar como se afecta la actividad enzimtica por cada uno de los
factores probados en esta prctica y analice que es lo que ocurre en cada factor.

MANUAL DE PRCTICAS

68

MATERIAL/UTENSILIOS
36 piezas Tubos de ensaye 15 mL de capacidad
capacidad

capacidad

6 piezas Pipeta graduada De vidrio de 10 mL
de capacidad

18 piezas Matraz Erlenmeyer De vidrio de 125 mL
de capacidad

6 piezas Bureta 50 mL de capacidad
6 piezas Soporte universal
6 piezas Pinza de bureta
6 piezas Propipeta
6 Piezas Gradilla para tubos
de ensaye

REACTIVOS/INSUMOS
50 g Urea 0.25 M Grado de pureza:
para biologa
moleular

200 mL Amortiguador de
fosfatos 0.5 M, pH
7.2
Grado reactivo
10 mg Bicloruro de
mercurio al 0.1%
Grado reactivo 97%
de pureza, adecuado
para cultivo celular.
Solucin al 0.1% en
agua
500 mL cido clorhdrico Grado reactivo Solucin 0.1 N
5 mg Rojo de metilo Grado reactivo Solucin al 0.04%
en etanol
200 mL Etanol Grado reactivo

MANUAL DE PRCTICAS

69
500 U Extracto de ureasa Urease from
Canavalia ensiformis
(Jack bean) Type III,
powder, 15,000-
50,000 units/g solid
(Sigma)

500 mL Agua desionizada
EQUIPO
1 Bao mara Con tapa, Rango de
temperatura 5 a
180C

CUESTIONARIO:
1) Por qu a inicialmente la temperatura aumenta la velocidad de la acti vidad
enzimtica?
2) Qu es lo que ocurre cuando al aumentar la temperatura la velocidad enzimtica se
vuelve 0?
3) Cul es el pH ptimo de accin de la ureasa?
4) Cmo explica que el pH produzca un cambio en la actividad enzimtica?
5) Cul es el pH ptimo de accin de la ureasa?
6) Cul fue el valor de Km y Vmax para la ureasa?
7) Qu tipo de tcnica de muestreo se utiliz en esta prctica.
8) Investiga que equipos comerciales usan las tcnicas de muestreo continuo.
9) Investiga cuales son las unidades usadas para medir la actividad enzimtica y como
se define.

(Ver practica 1)

MANUAL DE PRCTICAS

70
III.- BIBLIOGRAFA
Moris, JG.1982. Fisicoqumica para bilogos. Ed. Revert, S.A., Barcelona. Espaa
Laguna, J. Y. Pia, E. 1992. Bioqumica. Salvat. Mxico.
Lehninger, A. 1998. Bioqumica. Omega, Barcelona.

MANUAL DE PRCTICAS

71
I.-

Determinacin de glucosa



INTRODUCCIN:
Los carbohidratos tambin conocidos como glcidos son las biomolculas ms
abundantes den la naturaleza, en general son sumamente importantes ya que de ellos se
obtiene la mayor parte de energa de las clulas no sintticas, aunque pueden presentar
diversas funciones.
Los monosacridos son slidos incoloros y cristalinos, solubles en agua, con sabor dulce.
Su estructura bsica es una cadena de carbonos unidos por enlace simple, uno de los
carbonos se encuentra unido a un tomo de O por un doble enlace, formado un grupo
carbonilo; y los dems carbonos unidos a un grupo hidroxilo y un hidrgeno, por lo que
tambin se le conoce como polialcoholes; su frmula reducida es CH
2
O, lo que indica su
naturaleza de hidratos de carbono. Esto se puede clasificar:
1. Por el nmero de carbonos que presentan en: Triosas (3), tetrosasas (4), pentosas
(5), hexosas (6), heptosas (7).
2. Y por el grupo qumico del que se forman:
a. Grupo aldehdo.- se denominan como aldosas,
b. O, grupo cetona.- se denominan como cetosas.
Los monosacridos pueden unirse a travs de enlaces glucosdicos, este tipo de enlace
se forma por la reaccin de esterificacin que ocurre cuando un grupo OH (hidroxilo) de

MANUAL DE PRCTICAS

72
un monosacrido reacciona con el carbono anomrico de otro monosacrido, unindose
ambos a travs de un enlace covalente. Por el nmero de monosacridos que se unen
pueden ser:
a. Oligosacaridos consisten de cadenas cortas de monosacridos unidos por enlaces
glucosdicos, los ms abundantes son los disacridos.
b. Polisacridos, formados por a veces cientos de monosacridos, los cuales pueden
se lineales como es el caso de la amilopectina y la celulosa; o ramificados como el
caso del glucgeno y la amilosa.
Los monosacrido y algunos disacridos son capaces de reducir a o agentes oxidantes
suaves como el in frrico (Fe
2+
) o el cprico (Cu
2+
), en estos azcares el grupo aldehdo
se oxida para formar un grupo carboxilo, dando reacciones coloridas caractersticas.
Cuando los disacridos al unirse por enlace glucosdico a veces pierden la capacidad de
reduccin, solo en el caso de que presenten el carbono anomrico mantienen su
capacidad de reducir a estos agentes oxidantes.
El principal carbohidrato en el metabolismo de los animales es la glucosa, el cual se
requiere este en una concentracin adecuada ya que el cerebro requiere de este
carbohidrato para su funcionamiento. Para lograr este objetivo diversas vas metablicas
estan encargadas de mantener la homeostasis de la glucosa, cuando alguna de ellas
falla se presenta una patologa.

OBJETIVO GENERAL:
Se realizar una determinacin de glucosa en diversos animales domsticos.


1. Reaccin de Fehling:
- Con cada uno de los carbohidratos, prepara un soluciones al 1%, y tomar 3 ml de

MANUAL DE PRCTICAS

73
esta solucin.
- Aade 1 ml del reactivo de Fehling A y 1 cc. de Fehling B. El lquido del tubo de
ensayo adquirir un fuerte color azul durante 3 minutos.
- Calentar el tubo a bao Mara.
a) La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo.
b) La reaccin ser negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul -
verdoso.
- Ahora bien, al tubo de sacarosa adiciona 10 gotas de cido clorhdrico al 10%
(HCl)
- Calienta al mechero durante un par de minutos.
- Neutraliza la reaccin con bicarbonato.
- Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling nuevamente.
- Observa nuevamente tu tubo.

2. Reaccin del Lugol: Este mtodo se usa para identificar a polisacridos como el
almidn en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolucin de yodo y
yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico.
- Poner en un tubo de ensayo unos 3 ml de las soluciones de carbohidratos
usada en el punto anterior.
- Aadir 5 gotas de lugol.
a. Si la disolucin del tubo de ensayo se torna de color azul -violeta, la
reaccin es positiva.
- Observa los tubos
CONCLUSIONES
Analiza l porque de cada una de las reacciones e investiga cual es el fundamento de
cada una de las reacciones realizadas en este laboratorio

MANUAL DE PRCTICAS

74
MATERIAL/UTENSILIOS
10 piezas Tubos de ensayo 10 mL de capacidad
1 piezas Mechero Butsen
1 piezas Tripie con rejilla
2 piezas Vaso de
precipitados
De vidrio de 200 mL de
capacidad

1 Gradilla
REACTIVOS/INSUMOS
100 mL Reactivo de Fehling
A y B
Grado reactivo
10 mL Lugol Grado reactivo
10 g Sacarosa Grado reactivo
10 g Maltosa Grado reactivo
10 g Glucosa Grado reactivo
10 g Almidn Grado reactivo
10 g Lactosa Grado reactivo
EQUIPO

CUESTIONARIO:
1) Qu entiendes por azcares reductores?
2) Explica porque la sacarosa y el almidn no son azcares reductores.
3) Por qu despus del tratamiento con HCl las sacarosa ya reacciona con el reactivo
de Fehling?
4) Cmo explicas que nicamente el almidn de positiva la prueba del lugol?
5) Qu utilidad tiene que tu conozcas estos datos en tu vida profesional como Mdico
Veterinario Zootecnista.

MANUAL DE PRCTICAS

75
(Ver practica 1)

III.- BIBLIOGRAFA

MANUAL DE PRCTICAS

76
I.-

NOMBRE DE LA PRCTICA: Extraccin y cuantificacin de DNA



INTRODUCCIN:
La informacin gentica de los organismos se almacenada dentro de una molcula de
caractersticas cidas y rica en bases nitrogenadas denominada cido desoxiribonucleico
(DNA), dado el tamao del ncleo celular, esta se encuentra compactada por medio de
protenas (histonas) en el ncleo celular. El DNA es un polmero de
desoxiribonucleotidos. Cuando la base nitrogenada (negro) se une al Carbono 1 del
azcar (azul), se forma el desoxinuclesido, que reciben el nombre de desoxi-adenosina,
desoxi-guanosina, desoxi-citidina y desoxi- timidina.. Finalmente si al desoxinucleosido
se le une un grupo fosfato (rojo) en el Carbono 5, del azcar, se forman los
desoxiribonucletidos, los cuales se denominan desoxiadenilato, desoxiguanilato,
desoxitimidilato y desoxicitidilato.

MANUAL DE PRCTICAS

77

La polimerizacin de desoxinucletidos para la formacin del DNA se hace a travs de la
formacin de un enlace covalente entre el grupo OH del C3 del azcar, uno de los
grupos OH del fosfato, este tipo de enlace se conoce con el nombre de enlace
fosfodister (lnea punteada). Por lo tanto, de esto podemos sacar dos conclusiones:
1. Que los cidos nucleicos presentan direccin, de manera similar a lo que ocurre con
las protenas, pero en este caso van de 5(donde no hay ningn nucletido unido, solo
el fosfato final), a 3 (donde no hay fosfato unido, sino un grupo OH libre). NOTA: en
realidad en los extremos pueden unirse uno a ms fosfatos u otros grupos.
2. Los esqueletos covalentes de los cidos nucleicos consisten de unidades repetidas
de azcar y grupo fosfato, en tanto que las bases nitrogenadas se encuentran hacia el
exterior del esqueleto carbonado, semejando los grupos radicales de los aa. Debido al
fosfato, los cidos nucleicos son hidrofilicos, formando puentes de hidrgeno con las
molculas de agua, debido a que el pK del grupo fosfato es cercano a 0, a pH de 7 se
encuentra ionizado, por lo que presenta una carga neta negativa, siendo buenos
donadores de protones, lo que les confiere su caracterstica cida. Estas cargas
CH
CH HC
N
N
H
C
O
P O O
O
O
N
N
C
C HC
N
N
H
C
CH
O
P O O
O
O
C5
C3
A
B

MANUAL DE PRCTICAS

78
negativas casi siempre se encuentran neutralizadas por las interaccines de los
cidos nucleicos con cargas positivas de protenas, iones metlicos o paliaminas.
3. Como las bases se encuentran hacia el exterior del esqueleto hidrocarbonado,
ayudan a la estabilizacin de la cadena a travs de las interacciones de van der Walls
de las porciones no polares de las bases nitrogenadas, adems de estabilizarse por
la formacin de puentes de hidrgeno, entre los grupos funcionales de los anillos
heterociclicos. Entre estas interacciones se encuentran las de tipo Watson-Crick, las
ms importantes, que se presentan predominantemente en la formacin de la doble
hlice de DNA.

Determinacin de la concentracin de DNA por espectroscopia de UV
Debido a que las bases nitrogenadas en el DNA absorben la luz ultravioleta (UV) de
manera eficiente, teniendo un mximo de absorcin a aproximadamente 260 nm; la
determinacin de la concentracin de DNA por espectrofotometra de UV puede ser
usada como un mtodo exacto, rpido y no destructivo para determinar la concentracin
de cantidades tan bajas como 2.5 g/ml.

MANUAL DE PRCTICAS

79
El fundamento de esta tcnica radica en el hecho de que las bases nitrogenadas al tener
enlaces resonantes absorben la longitud de onda de la UV a 260 nm. Y al hecho de que
segn la Ley de Lamber-Beer que relaciona la cantidad de luz absorbida con la
concentracin del componente en una solucin, por lo que en condiciones adecuadas, la
cantidad de luz absorbida por una sustancia, cuando se ilumina con luz de longitud de
onda conveniente, es directamente proporcional a la concentracin del componente
presente en una solucin, y definen esto con la siguiente formula:
A=abc donde:
a= es la absorcin especfica. Caracterstica constante de un sistema en particular soluto-
solvente para una cierta longitud de onda.
b= longitud del trayecto luminoso. Depende del tamao del tubo o de la cubeta que se
utiliza.
c= Concentracin del componente.
En determinaciones de concentraciones de DNA se observo que cuando se utiliza un
paso de luz de 1 cm, el coeficiente de extincin del DNA a 260 nm de longitud de onda
es de 20. Basado en este coeficiente de extincin la absorbancia a 260 nm en una
cubera de cuarzo de 1cm de paso de una solucin de 50
doble cadena es igual a 1.
Por lo que se concluyo que la densidad ptica del DNA a 260 nm (OD
260
DNA/ml] /[1 unidad de OD
260
].
Con lo que finalmente se llego a la formula de:
260
) X (factor de dilucin).
Por lo que de esta forma se calcula actualmente la concentracin del DNA cuando se lee
con un espectrofotmetro y una cubeta de cuarzo de 1 cm de paso de luz.
Nota: Debe de usarse cubetas de cuarzo debido a que este material no es capaz de
absorber la luz UV, por lo que hace posible la lectura espectrofotomtrica.

MANUAL DE PRCTICAS

80
Determinacin de la pureza del DNA por espectroscopia de UV
Las protenas tienen una absorbancia mxima a 280 nm debido principalmente a los
residuos de triptfano. Por lo tanto la relacin a 260/280, por lo tanto es una medida de la
pureza de la preparacin de DNA y debe caer entre 1.65 y 1.85. Un valor menor sugiere
contaminacin de protena. Si el fenol, el cual tiene una longitud mxima a 270 nm, esta
contaminando la preparacin de DNA, entonces al A
260
puede ser anormalmente alta, lo
que provoca la sobreestimacin de la concentracin del DNA.

OBJETIVO GENERAL:

Extraer el DNA a partir de glbulos blancos de la sangre
Cuantificar a travs de espectrofotometra, el DNA extrado
Determinar la pureza de la extraccin determinando el radio absorbancia a 260/280 nm
Extraccin de DNA partir de sangre total
1. Del tubo de EDTA con sangre, tomar 700 L, colocarlos en un tubo ependorff de 2 ml.
2. Adicionar 700 L de buffer TKM1 ms 18 L de Tritn X100 y agitar vigorosamente
con el vortex durante 30 segundos.
3. Centrifugar a 3,500 rpm durante 5 minutos, y desechar el sobrenadante.

MANUAL DE PRCTICAS

81
4. Realizar un lavado con el buffer TKM1, para lo cual adicionar a la pastilla obtenida en
el paso anterior 700 L de buffer TKM1, agitar con el vortex y repetir el paso 3.
5. A la pastillas de leucocitos que se encuentran en el fondo del tubo adicionar 120 l de
buffer TKM2 ms 7 l de solucin de SDS 10%.
6. Agitar vigorosamente con el vortex durante 1 minuto.
7. Incubar a 56C durante 10 minutos.
8. Adicionar 60 L de solucin de NaCl 5M.
9. Agitar con vortex durante 30 segundos.
10. Centrifugar a 12,000 rpm durante 5 minutos.
11. Recuperar en un tubo eppedorf limpio el sobrenadante, midiendo el volumen
aproximado que se recupero.
12. Adicionar dos volmenes de etanol concentrado fro (-20C)
13. Mezclar por inversin del tubo varias veces.
14. Centrifugar a 3,500 rpm durante 5 minutos, en una centrifuga refrigerada a 4C, y
decantar el sobrenadante.
15. Resuspender la pastilla con 400l de etanol al 70%. Y repetir el paso 14.
16. Dejar secar la pastilla al aire durante 10 minutos.
17. Resuspender la pastilla con 200 ml de TE agua destilada estril.
18. Incubar a 65C durante 20 minutos y proceder con la cuantificacin o almacenar a -
20C.
Determinacin de la concentracin y pureza del DNA
1. Se prepara una dilucin 1:100 en agua estril inyectable de la muestra de DNA que
se desee cuantificar.
2. Y se colocan 500 l de la mezcla anterior en una celda de cuarzo, se revisa que no
tenga burbujas de aire que interfieran con la lectura.
3. Se enciende el espectrofotmetro Janway 6305 de acuerdo a lo indicado en el
instructivo.
4. El blanco de lectura en este caso ser agua inyectable estril.

MANUAL DE PRCTICAS

82
5. Leer la absorbancia de la solucin problema a 260 nm (lectura de DNA) y a 280 nm
(lectura de protenas)
6. Determina la concentracin de DNA en la dilucin asumiendo que el dsDNA que tiene
una absorbancia (Ab
260
) de 1 a 260 nm, tiene una concentracin de 50
g/ml.
7. La pureza de la muestra al indicar la relacin de los valores de lectura a 260/280. El
cual debe ser de encontrarse entre 1.65 y 1.85 para DNA puro. Si se obtiene valores
menores a 1.7 quiere decir que el DNA est muy contaminado con protenas y se
recomienda realizar una nueva purificacin.

Determinacin de la concentracin y pureza del DNA
1. Adicionar 1 g de agarosa en un matraz
2. Adicionar 100 ml de TAE 1X o TBE 0.5X
3. Adicionar 2 l de bromuro de etidio al 2.5%
4. Calentar con el microondas hasta la completa disolucin de la agarosa y preparar el
gel.
5. Correr 2 l del DNA extrado con 2 l de buffer de carga, a 100 Volts durante 15
minutos y visualizar en el transiluminnador.

RESULTADOS

1. Menciona cuanto DNA obtuviste de tu extraccin.
2. Indica cual fue el grado de pureza el DNA que obtuviste
3. Y menciona que observaste en el gel.
[DNA]
(g/ml o ng/l)
(Ab
260
)
(50 g/ml)
Factor de OD del
dsDNA
X =
(100)
Factor de
dilucin
X

MANUAL DE PRCTICAS

83

CONCLUSIONES
Analiza cual es la funcin de cada una de las soluciones usadas en esta practica, y
compara tus resultados con los otros obtenidos por tus compaeros y las muestras
proporcionadas por el profesor.


MATERIAL/UTENSILIOS
6 piezas Matraces
Erlenmeyer 250 mL

6 piezas Vasos de
precipitado

12 piezas Pipetas (6 de 5 mL y
6 de 10 mL)

40 piezas Tubos de ensaye

REACTIVOS/INSUMOS
6 tubos Sangre de cualquier
ser vivo, obtenida
por venopuncin en
tubos con EDTA

200 mL Buffer TKM1
200 mL Buffer TKM2
200 mL Triton X100
200 mL Solucin de SDS al
10%

200 mL Solucin de cloruro
de sodio 5M

500 mL Etanol puro
500 mL Etanol al 70%
200 mL Solucin de TE
1000 mL Agua destilada
500 mL Buffer de carga
EQUIPO

MANUAL DE PRCTICAS

84
1 Votex
1 Centrifuga para
microtubos

1 Balanza analtica

ANEXO
Buffer TKM1
10 mM de Tris.HCL pH 7.6,
2 mM de EDTA pH 8
10 mM KCl
10 mM MgCl
2

BUFFER TKM2
10 mM de Tris.HCL pH 7.6,
2 mM de EDTA pH 8
10 mM KCl
10 mM MgCl
2
mM NaCl

Buffer de corrida 6X (DNA)
Glicerol 30%
TBE 10x 50%
Azul de Bromofenol 0.25%
Xilecianol 0.25%

Buffer de TBE 10X
0.89 M de Tris-base
0.89 M cido brico

MANUAL DE PRCTICAS

85
40 ml de EDTA 0.5 M pH 8
Afora a 1 L de agua

Buffer de TE
10 mM de Tris-HCL, pH 8.0
0.1mM de EDTA

CUESTIONARIO:
1. Explica que es el DNA y cual es su importancia a nivel biolgico
2. Explica porque se utilizaron dos diferentes soluciones en esta prctica.
3. Explica porque la lectura del DNA se realiza a 260 nm.
4. Explica que entiendes por coeficiente de extincin del DNA.
5. Investiga otra tcnica de extraccin diferente a la mencionada en esta prctica,
indicando su fundamente y las ventajas y desventajas de dicha tcnica con respecto a
esta.

(Ver practica 1)

III.- BIBLIOGRAFA
Zyskind, J.W. y Bernstein, S.I. 1992. Recombinant DNA Laboratory Manual. Academia
Press, Inc. San Diego.

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