BQ 21.

PATOLOGA LISOSOMAL
A) INTRODUCCIN
La fosfatasa cida (FA) de un homogenado heptico era mayor en condiciones hipotnicas. Si se dejaba envejecer a 4C aparecera, al centrifugar sedimentaba, cuando la organela estaba rota y se centrifugaba no sedimenta... todo ello lleva a decir que FA estaba en un elemento subcelular. La FA tiene 40 hidrolasas(=glicoprotenas) que rompen cidos nuclecos, hidratos de carbono, lpidos... El PH optimo es 5.5 y cuando se rompen los lisosomas a 7.4 (PH citoslico) disminuye su actividad. 1. La membrana lisosomal es semipermeable, permite la salida de los compuestos degradados. Tiene transportadores para todos los productos del lisosoma. 2. Existe 1 H+-ATPasa, generando un gradiante inico, acidificando al lisosoma. 3. En la parte interna de la membrana lisosomal existen unos receptores que reconocen las enzimas lisosomales: Protenas aceptoras de anclajes, permitiendo la fusin de las membranas entre s( son glicoprotenas con una antena comn que es la manosa6P) 4. Son organelas heterogneas variando de tamao segn cumplan funciones digestivas intra o extra celulares o participen en el metabolismo lipdico, metabolismo de mielina en el cerebro,morfognesis,apoptosis... Se distinguen : - Lisosomas 1arios: recien formado en el Golgi, solo contenido enzimtico sin material de deshecho. - Lisosoma 2ario: con componente de digestin. . Autofagosoma + lisosoma. . Enodocitosis por receptores: Endosoma tardo + lisosoma.

B) ORIGEN DEL LISOSOMA

Los enzimas lisosomales se sintetizan en el retculo sarcoplasmico liso como preproenzima. El pptido es eliminado en el retculo liso por una proteasa y el nuevo pptido sufre una glicosilacin bsica. Este paso se hace por un Dolicol de la membrana (un lpido complejo con un ncleo de dos NAG, 9 manosas y 3 glucosas). Una asparragina recibe al oligosacarido por accin de la oligosacaridoproteintransferasa, que es inhibida por la tunicamicina, inhibiendo as toda la sntesis de protenas glicosiladas, pues el porceso de glicosilacion es el mismo para todas las protenas lisosomales. Reconoce Asn-X-Ser y Asn-X-Thr, siendo X cualquier aminocido . Posteriormente existen hasta 11 enzimas que actuan sobre la glicoprotena: eliminando glucosas, manosas, aadiendo NAG y galactosas... Con ello se consigue dar estabilidad y mayor resistencia al producto que va a ser excretado. Existen 3 tipos de glicosilaciones: a) A oligosacaridos complejos: cuando el proceso llega hasta el final b) A protenas ricas en manosa: que es lo que ocurre en el caso de los enzimas lisosomales. c) Lpidos-oligosacaridos hbridos: que es un estadio entre el anterior pero sin llegar a finalizar el proceso. A continuacin adquieren residuos manosa P que es la seal para dirigir los enzimas lisosomales a los lisosomas. Actuan 2 enzimas: a) N-acetilglucosamina fosfotransferasa (en cis golgi), liberndose UMP. b) Fosfodiesterasa (PDE) rompe el enlace ester y queda el residuo manosa 6P+oligosacarido+enzimalisosomal.
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UDP + Nacetilglucosamina+manosa-oligosacarido-enz lisosomal. UMP Fosfato de acetilglucosamina-manosa-oligosacarido-enzlisosomal. GlcNac(=NAG) Manosa.- Oligosacarido-Enzlisosomal. En el trans golgi, las enzimas lisosomales se unen a unos receptores que reconoce especficamente los residuos manosa 6P formando una vescula protegida por clatrina. Despus se pierde la clatrina y se une a un endosoma con PH cido formando CURL (compartment of uncompling of receptor and ligand). El PH 5.5 del CURL hace que el enzima fosforilado se desuna del receptor, que se recicla volviendo al golgi y el enzima se incorpora a diferentes vesiculas de transporte. En estas pierde los grupos fosfato y se fusiona con el lisosoma. Los receptores de manosa6P tambin se encuentran en la membrana plasmtica donde recoge los enzimas lisosomales fosforilados que ocasionalmente son secretados. Son introducidos en vesculas de clatrina y fusionados con el CURL.

C) PATOLOGA
1955: Descubrimiento del lisosoma. 1961: Hers descubre la primera enfermedad lisosomal (enfermedad de Pompe), cree que existe la posibilidad de que otras enzimas fallen:

Fucosidosis (Alfa-f.ucosidasa) Fabrick (Beta-galactosidasa) Gaucher (Beta-glucosidasa) Nieman Pick (Esfingomielinasa) Wolman (Esterasa) Farber (Ceramidasa)

Las enfermedades lisosomales son enfermedades de acmulo: de lpidos, steres de colesterol... (No existe, sin embargo patologa de acmulo de protenas). Afectan a mltiples rganos, principalmente aquellos con un menor recambio (vida media celular mayor) Ej. Hgado, msculo, cerebro... El acmulo de material puede que inhiba la accin de otras hidrolasas, pej. el acmulo de dermatn sulfato inhibe la hialuronidasa. Son enfermedades heterogneas, generalizadas que dependen: 1. Del enzima que se afecte. 2. De la cantidad residual de enzima. Con un 0% es tpico que se produzca en nios recin nacidos o en la infancia, de un 5-10% en jovenes. Afecta a todas las clulas del organismo porque todos los tejidos tienen lisosomas, salvo la mieloperosidasa (su dficit solo afecta a leucocitos). Al microscopio se ve el acmulo: Glucogeno en rosetas Lpidos bipolares en bicapas lipdicas Cistina en cristales Metacromasia en mucopolisacaridosis El diagnostico se hace midiendo la actividad enzimtica. Puesto que los lisosomas estn en todas las clulas podemos coger una muestra de fibroblastos de la piel, pej. Tambin es posible el diagnstico prenatal con clulas amniticas o clulas de las microvellosidades.
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Experimentalmente se pueden simular estas enfermadades dando una sobrecarga de dextrano, que se acumula en los lisosomas y produce: - En el msculo distrofia muscular - En el hepatocito hepatomegalia pero no se altera la funcin. - En el cerebro hipertensin intracraneal, alteracin funcional, alteracin del desarrollo cerebral, desmielinizacin por afectacin de las clulas de Schwan. La terapetica es complicada: reponer el enzima deficiente. Ej. Maltasa cida de Aspergillus o purificada de placenta en el caso de la enfermedad de Pompe. Esto es posible por la existencia de los receptores de manosa 6P de la membrana que podran reconocer a los enzimas lisosomales que nosotros introducimos. Problemas: hay que darlo frecuentemente, es caro y no es posible en las clulas con baja capacidad endoctica como el msculo o el cerebro. Son candidatos a terapia gnica.

D) ENFERMEDADES LISOSOMALES
1. ENFERMEDAD DE POMPE. Explicada en la clase anterior, lo nico que dijo nuevo fue: la enzimoterapia en la enfermedad de Pompe consigue disminuir el glucgeno de los lisosomas en el hgado, pero no en el msculo y corazn y no pasa la barrera hematoenceflica. 2. I CELL DISEASE (Enfermedad de las clulas de inclusin) En 1967 se observo un nio con una mucopolisacaridosis con cuerpos de inclusin sin mucopolisacaridos en orina. En 1970 se observa que los pacientes tienen actividad enzimatica en plasma, pero no en los tejidos. Al aplicar un homogenado de fibroblastos normales en un medio de cultivo enfermo, los enzimas eran captados. Es decir, falta la direccin de las enzimas lisosomales al carecer de las manosa 6P, de forma que se pierden en vesculas al medio de cultivo (aumentan las enzimas en plasma) y no pueden ser recaptadas. El enzima deficiente es Nacetilglucosaminafosfotransferasa. Son AR. a) Mucolipidosis II (pseudohurler) Clnicamente es parecido a la enf de Hurler. Aparicin precoz (actividad residual < del 2%) No MPS en orina. Retraso psicomotor severo. Muerte en la primera dcada. Retraso mental. Hepatoesplenomegalia. Cardiomegalia. Hiperplasia gingival. Hernias umbilicales, diastasis de rectos abdominales. Alteraciones respiratorias recurrentes de tracto superior. Alteracin cartilaginosa. b) Mucolipidosis III (queda algo de enzima residual) clnica ms leve (2-4 a) endurecimiento articular: muecas y hombros escoliosis poca estatura soplos insuficiencia auditiva ligero retraso mental enfermedad lentamente progresiva (actividad residual del 2-20%, por eso aparece ms tarde).
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no mucopolisacariduria

La causa no es solo la deficiencia enzimtica, sino que existe un fallo en el reconocimiento de la enzima lisosomal (defecto del reconocimiento del dominio proteco). La deficiencia de accin cataltica absoluta da lugar a mucolipidosis II, pero la afectacin de la afinidad es lo que sucede en la mucolipidosis III. 3. DEFICIENCIA LIPASA CIDA (AR) a) Grave o absoluta: enfermedad de Wolman b) Leve o parcial: CESD o enfermedad por acmulo de colesterol. a) Wolman: Vmitos, diarreas en la primera semana de vida Hepatoesplenomegalia y distensin abdominal Anemia y muerte antes de 3-6meses. Desorientacin mental. Calcificacin de las gls adrenales (casi patognomnico). Las gls adrenales son ricas en R-LDL para captar colesterol y producir las hormonas esteroideas. Malabsorcin y malnutricin. Colesterol y trigliceridos en plasma son normales

b) CESD:

Fenotipo variable Hepatomegalia en la segunda dcada No malnutricin ni malabsorcin A veces calcificacin de las adrenales Colesterol y TG en plasma (aumento de LDL, VLDL y aterosclerosis). Xantomatosis generalizada

LDL interactua con su receptor LDL y esto hace que se forme un endosoma, penetra en la clula y se fusiona al lisosoma. La lipasa cida rompe el enlace ster del colesterol. Los quilomicrones residuales endocitados en el hgado tambin sufren el mismo proceso por la lipasa cida que hidroliza los trigliceridos. De este modo cuando falta la lipasa cida se produce acmulo de colesterol y trigliceridos. Cuando existe un exceso de colesterol, la ACAT (cido graso colesterolacetiltransferasa), lo acumula en forma de gotitas en el citosol. Como el colesterol plasmtico es abundante, inhibe la expresin de receptores de LDL y disminuye la expresin de HMGCOAreductasa, enzima que activa su sntesis de novo. En Wolman existe endocitosis, pero en los lisosomas no existe la lipasa cida y los steres no se hidrolizan y se quedan en los lisosomas. Como el colesterol plasmtico est disminuido hace que aumente los R-LDL y aumenta la captacin de LDL y el colesterol circulante est normal o disminuido. Al no haber colesterol libre se expresa la HMGCOAreductasa produciendo el suicidio celular porque se fabrica y se capta mucho colesterol que termina encharcando la clula. En CESD existe algo de lipasa cida y existe endocitosis, siendo algn ster de colesterol hidrolizado. Existe, por tanto, un colesterol plasmtico que inhibe a los R-LDL y se acumulan esteres de colesterol en el plasma. Sin embargo la HMGCOAreductasa sigue funcionando (es menos sensible que R-LDL ) y produce un acmulo de colesterol menor que en el Wolman con unos niveles plasmticos elevados de colesterol y TG y con sntomas de hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia. Tratamiento: ninguno, salvo intento de reducir la sntesis de colesterol endgeno en CESD con lavastatina, sinvastatina o resinas (para eliminar ac biliares).
NOTA: en las trasparencias vienen dibujos para entender mejor la teoria. FIN