CAVEOLINA 1: un regulador crtico de la injuria pulmonar. Intro: Cav-1, una protena trasmembrana de 22kDa, es el principal componente estructural de la Caveola.

Cav-1 regula funciones celulares muy importante como proliferacin, apoptosis, diferenciacin celular y la transitosis mediante diversas vas de sealizacin. Se encuentran abundantes en casi todas los tipos celulares en el pulmn, inluyendo las clulas epiteliales tipo I, clulas endoteliales, clulas de msculo liso, fibroblastos, macrfagos y neutrfilos, Cav.1 juega un rol crucial en la patognesis de la injuria pulmonar aguda (ALI). ALI y su forma severa, sndrome de distres respiratorio agudo (SDRA), son responsables de significativa mortalidad y moribilidad en unidades de cuidados, a pesar de la mejora en las estrategias de ventilacin. La patognesis de SDRA es aun poco entendido, y las opciones teraputicas aun son limitadas. En este articulo, nost resumiremos datos resientes somre la regulacin y funciones de la Cav-1 en la biologa y patologa del pulmn, sobretodo en su relacin con ALI. Nost ms adelante discutiremos sobre los mecanismos moleculares y celulares en que Cav.1 participa. Investgando las funciones celulares de cav-1 puede indicar nuevos puntos de vista para el entendimiento de la patognesis de ALI y mostrar nuevos objetivos para las intervenciones teraputicas en el futuro. El propsito de esta revision es explorar la literatura cientfica apoyando el rol de la cav.1 en la patognesis de ALI. Caveola s son invaginaciones en forma de omega de la membrana plasmtica que fueron decrubiertas por Palade y Yamada en los 50s. Caveola resinden ms prominentement en las clulas epiteliales, endoteliales, adipocitos y fibroblastos en los pulmones. En la pasada decada, el concepto ha emergido que la caveolas son una especializada forma de balsas lipidicas. ambos, las balsas lipidicas planas como las caveolas proveen plataformas que son proteinas ancladoras de membrana en el ''mar flotante'' de la bicapa lipidica.las proteinas estructurales requeridas para las caveolas incluyen Cav-1, cav-2 y cav-3, que facilitan la invaginacion de la membrana y reponde a estimulos externos mediante se;ales de trasduccin que modulas la actividad celulaar. Cav-1 y 2 han sido identificados en la mayoria de los tejidos y organos, mientras que cav-3 es principalemtent ecpresado en celulas musculares cardiacas, esquelticas y lisas. Actualmente, el rol funcinal de cav-2 permanece incierto; sin embargo, es expresada y heteroligomerizada con cav-1. Cav-1 isoformas y estructura: el gen de cav-1 codifica a 178 aa que forman una proteina en una conformacin b plegada. dos isoformas de cav-1 (cav-1a y cav-1b) han sido identificadas. la

cav 1a de 24 kDa y la cav-1b de 21kDa son generadas por un splicing alternativa del RNAm. estas dos isoformas difieren en 31 aa adicionales en cav-1a en su NH2 terminal. la funcin distinta de estas dos isoformasno estan claras. sin embargo, estudios recientes en pescados cebras, usando oligomeros antisentido de morfolino, revelaron funciones no redundantes y evolucionariamente conservadas por cada isoforma. como se muestra en la figura 1, la secuencia de cav-1 contiene un dominio hidrofbico central con una conformacin en forma de gancho insertada en el interior de la membrana plasmatica. 14-16 cav-1 monomeros forman una sola cav-1 homooligomero. ambos terminales de la cav-1 monomeros encaran al citoplasma. Entre las secuencias moduladores, un importante dominio llamado el DOMINIO DE ANDAMIAJE DE CAVEOLINA (CSD), localizado entre los residuos de aminoacidos 82-101 en la region terminal NH2 adyacente al dominio hidroffico de insercion en la membrana, es requerido para la dimerizacin de las caveolinas y critico en controlar las interacciones de cav-1 y numerosas proteinas de se;alizacin. la regin termina COOH de la cav-1 contiene tres residuos de cisteina palmitolizados, que son tambien relevantes para la oligomerizacin. (fig1). Estudios han revelado que la palmitolizacin en la zona termina COOH es crucial para q la cav-1 se logre juntar con la membrana plasmatica. otra region clave en la estructura de cav-1 es la tirosina 14. cav-1 es forforilada en tirosina 14 en respuesta a un estimulo celular, Evidencia reciente indica que cav-1 forforilada es responsable para multiples procesos biologicos que incluyen la internalizaci;on de caveolas y la regulacion de las se;ales celulares. cav-1 es una proteina de membrana integral asociada con varias estructuras membranosas, incluyendo reticulo endoplasmatico (ER), Golgi, y membrana plasmtica (fig1). despues de su sintesis, cav-1 es insertada dentro la membrana de ER con sus ambos regiones terminales encarando el citoplasma. en el ER, cav-1 forma homogeneos homooligomeros SDS-resistentes de 7-14 cav-1 moleculas. cav-1 es luego exportado hacia el Golgi y trasportado hacia la superficie celular para formar las caveolas. remarcablemente, cav-1 puede ser reciclado en un orden reverso de la membrana plasmatica celular. interesantemente, cav-1 es tbm encontrado en el citoplasma como una proteina soluble como tbm en las mitocondrias, vesiculas secretoras, sitios de contacto celula-celula y el nucleo. 4 regiones de cav-1 han sido identificadas de influenciar su trafico intracelular: 1) un region conservada entre los aa 66 y 70, que es necesaria para salir del ER, 2) una region entre los aa 71-80, que regula la

incorporacin de cav-1 oligomeros hacia el aparato del golgi, 3) una region entre los aa 91-100, y 4) COOH-terminal aa 134154, que son destinados para el control del la oligomerizacin de cav-1 y salir del aparato de Golgi. regulacin de la expresin de cav-1: la expresin de cav-1 es regulada transcripcionalemente o posttranslacional. el flanco 5' de la cav-1 incluye tres sitios ricos de G + C que son potenciales ELEMENTOS ESTEROLES REGULADORES (SREs). adicionalmente, el flanco 5' contiene una secuencia CAAT y una secuencia Sp1. elementos similares a SRE estan involucrados en la respuesta transcripcional al estimulo, como una tales como la lipoprotena de baja densidad libre de colesterol (LDL-FC). otros factores de transcripcion reportados para regular la expresin de cav-1 incluyen familias como FOXO3a, c-myc, y el NF-kB. Regulacin a la baja de la CAV-1 se puede lograr mediante la promocin de la degradacin deCAV-1 a travs de las vas de degradacin lisosomal. Por ejemplo, en las clulas epiteliales intestinales, el nivel de protena de CAV-1 es regulada por otra protena balsa lipdica, flotillin-1 (flot1), evitando su degradacin lisosomal. Cav-1 tambin est regulado por otros protenas componentes de lpidos balsa, por ejemplo, los Cavins. Estudios recientes indican que la deleccin de Cavin-1 disminuye la CAV-1 expresin de la protena sin afectar CAV-1 mRNA, y viceversa, la supresin de cav-1 suprime Cavin-1 de expresin. Estos resultados sugieren que cav-1 y Cavin-1 despus de la traduccin son regulados por la degradacin y tambin por la regulacin transcripcional de los niveles de ARNm. funciones de cav-1: Inicialmente descrito hace dcadas, CAV1 es la protena principal de caveola. Aunque el papel de la CAV-2 sigue sin estar claro, la funcin de la CAV-1 ha sido estudiado ampliamente. Muchas de estas funciones, se mencionan a continuacin, estn regulados por las modificaciones postraduccionales de cav-1 tales como palmitoilacin en los tres sitios de cistena en el extremo COOH y la fosforilacin de la tirosina Y14 NH2-terminal y la serina-80 cerca de la CDS. formacin de caveolas: Cav-1 es esencial para la formacin de caveolae. Eliminacin de cav-1 resulta en ausencia de caveolas. Como era de esperar, la sobreexpresin de cav-1 conduce a un aumento en el nmero de caveolas.Cav-1 se cree que es la protena estructural ms importante que se requiere para la formacin de caveolas, aunque los datos recientes sugieren que el Cavins tambin juegan un papel importante en la regulacin de la arquitectura de caveolas.

Control de homeostasis del colesterol: Cav-1 une directamente el colesterol con cidos grasos insaturados lde cadena larga de y forma oligmeros asociadas a la membrana. Los datos crecientes sugieren que CAV-1 controla la entrada y salida de colesterol celular por medio de las caveolas. Adems, Cav-1 coordina el metabolismo de los lpidos. Sin embargo, cav-1 ha mostrado que participa en roles tanto pro como anti aterogenico, dependiendo del tipo celular. En clulas musculares lisas, cav-1 suprime la proliferacon celular y puede tener efectos antiaterogenicos, mientras que en las clulas endoteliales, cav-1 promueve la transitosis de partculas de colesteros LDL. Regulacin del trafico en la mebrana: endo, exo y transitosis: cav-1 interactu7a con una variedad de molesculas de sealizacin en cascada, que incluyen oxido ntrico sintetasa endotelial (eNOS), protenas G, no receptores de tirosina, familia SRC tirosin kinasa, y protenas mitogenaa kinasa (MAP). Cav-1 ancla estos transductores de seales en su conformacin inactiva hasta la su activacin por un apropiado estimulo. Muchos de estas molculas de sealizacin interactan con el CSD directamente via su zona de unin hidrofobica de cav-1. Nuevas evidencias demuestran que CAV-1 funciona como un regulador negativo o positivo de sealizacin celular, dependiendo del tipo de clula y la va de sealizacin de clulas especficas de investigacin. Por ejemplo, como un regulador negativo, CAV-1inhibe la sealizacin de Wnt al bloquear la transcripcin b-catenina-mediada. Cav-1 inhibe eNOS, adicionalmente, cav-1 inhibe la seales de EGFR, Raf-1, MEK.1 y Erk-2. En cambio, cav-1 regula psotivamente las seales integrina dependientes, seales Shc-dependientes y la va fosfoinositol 3 kinasa. Sobrexpresin de Cav-1 activa vas de sealizacin fosfo Akt in Hela cells, y clulas cancergenas de prstata y en clulas de cabcer de mama MCF-7. Fenotipo pulmonar en los ratones cav-1-deficiente o CAV-1 transgnicos: cav-1 es abundantemente expresado en el epitelio pulmonar, endotelio y fibroblastos. Ratones knockout cav-1 exhiben anormalidades significativas dentro de los pulmones. En el 2001, 2 grupos, Drab t Razani, estos estudios han apoyado nuestro entendimiento de la funcin de cav-1 in vivo como en vitro. Ratones out cav-1, a pesar de la ausencia de caveolas, son viables y frtiles. Cav-1 out exhiben de manera muy significativa niveles bajos de cav-2 debido a la regulacin postranscripcional y el incremento de la degradacin de esta protena en ausencia de cav-1. Cav-1 out poseen multiples defectos, incluyendo la alteracin de la homeostasis de los lpidos, que han derivado en musculos

disfuncionales, cardiovascular y tejidos lipidogenicos. Cav-1 out tambin tienen un fenotipo basal caracterizado por hiperlipemia. Para el resto de esta revisin, nos centraremos en el fenotipo pulmonar de cav-1-ratones deficientes, ya que han servido como herramienta principal en la investigacin relacionado con CAV-1 . La alta densidad de caveolae en los septos de tejido pulmonar indic que estas estructuras desempean un papel importante en el sistema respiratorio. Cav-1 put tiene una pared alveolar engrosada que ocasiona espacios alveolares irregulares y restringidos. Sin embargo, estos septos anormales contienen cantidades aumentadas de clulas endoteliales y hematopoyticas; dos caracteristicas de esta hipercelularidad necesitan ser reconocidos: 1) mientras hipercelularidad es 7una carateristica notable de los cav-1 out, estas clulas parecen ser no clulas diferenciadas dado que el factor de von WIllebrand, que marca a las clulas endoteliales diferencidas, no es expresada. 2) el fenotipo de los cav-1 out, que carecen de sus isoformas tanto de cav-1 y b, muestras que solo en el endotelio pulmonar exhibe hiperproliferacin, mientras el epitelio alveolar no. Adems de la hipercelularidad, recientemente, Le Saux reporto un incremento rpogrsivo en el deposito de fibras de colganeo en las vas areas y parnquima pulmonar en los cav-1 out. El incremento del deposwito de estas fibras puede producir una reduccin significativa de la compliance pulmonar e incremento de la elasticidad y resistencia en las vas areas. Este proceso esta asociado con el incremento de la va de sealizacin TGF-b/Smad involucrando in tropoelastina, col1a2 expreseion de genes en el tejido pulmonar. Como consecuencia de las anormalidad en el pulmn, cav-1 put son intolerantes al ejercicio y muestran un inicio temprano de cansancio en pruebas de nado. Basado en lo mencionado, los cav-1 out deberan ser mas suceptibles a ALI. Sosprendetemente, numerosos estudios recientes en cav-1 out no ha apoyado completamente esta hiptesis. Por lo tanto, vamos a revisar la literatura cientfica que explorar la funcin de la CAV-1 en la patognesis de la ALI. Cav-1 e injuria pulmonar: En 1994, Lisanti et al. describi por primera vez la expresin de las protenas de la caveolina en el pulmn. Desde entonces, los estudios emergentes han investigado el papel funcional de caveolins en las enfermedades pulmonares. ALI es un proceso difuso heterogneo caracterizado por la muerte difusa de calulas alveolares (DAD), respuestas inflamatorias agudas como edema pulmonar no cardiognico , prdida de la permeabilidad capilar , la liberacin de citoquinas, y la generacin de ROS que conduce a la poca distensibilidad del pulmn, la

hipoxia severa, y el intercambio gaseoso anormal. Fibrosis pulmonar desarrolla en estadios tardos de ALI. Estudios recientes han explorado las posibles funciones de cav-1 en la lesin pulmonar de todos los aspectos antes mencionados (Fig. 2). Despus de los estmulos, los distintos tipos de clulas participan en la patognesis de la ALI, incluyendo los neutrfilos polimorfonucleares (PMN), clulas del endotelio vascular, clulas del epitelio alveolar pulmonar, y fibroblastos de pulmn. En el resto de este artculo, hablaremos de la literatura actual sobre el papel funcional de la CAV-1 en cada uno de estos elementos que intervienen en ALI. Cav-1 regula la inflamacin aguda y fuga capilar durante la lesin pulmonar: ALI primaria es causada por un dao directo a los pulmones, como neumona, lesin asociada a ventilacin, lesin hiperxica, traumatismos y contusiones. ALI secundaria es causada por una injuria indirecta a los pulmones de condiciones tales como pancreatitis, sepsis severa, o ALI relacionada con la transfusin. La inflamacin aguda ha sido bien descrita en la fase patolgica de ALI /SDRA, junto con el aumento de la permeabilidad vascular, fibroproliferacin con membranas hialinas, la apoptosis epitelial, y grados variables de fibrosis intersticial. CAV-1 de Clulas endoteliales juega un papel crucial durante la inflamacin aguda: El transporte de macromolc a partir de la sangre al tejido se rige por caveolas de las clulas endoteliales. Por ejemplo, la albmina no es endocitositada en las clulas endoteliales del pulmn de CAv-1 out y permanece en el lumen de los vasos sanguneos. Caveolas abundante es una caracterstica distintiva de las clulas endoteliales. La protena trasportadoras de agua aquaporin-1 se expresa en caveolas en la superficie de clulas endoteliales del pulmn. Este hallazgo apoya el papel de caveolae en el trasporte transcelular de agua en el endotelio. La reorganizacin mecnica de las balsas caveola/lpidos contribuyen en el edema pulmonar no cardiogenico en ALI. A diferencia de los estudios mencionados que se centran principalmente en caveolas en lugar de CAV-1, Sundivakkam et al. estudi el papel de la CDS en la entrada de Ca+2 en las clulas endoteliales. El influjo de Ca+2 se ha informado que regulan la vasoconstriccin pulmonar. CSD regula la fuente de Ca2 liberacin inducida por Ca2 entrada en las clulas endoteliales, lo que sugiere un posible papel en la permeabilidad endotelial.

La evidencia actual apoya un doble papel de cav-1 en la regulacin de la permeabilidad microvascular: 1) como una protena estructural asociada a caveolas controlando la transcitosis caveolar, y 2) como un inhibidor de la actividad de eNOS, que regula negativamente la permeabilidad paracelular. Como resultado de esta doble funcin, a pesar que cav-1 out tiene anomalas pulmonares vasculares y alteraciones del equilibrio de fluidos del pulmn de base, a desacato, CAV-1 out resisten a ALI en comparacin con los ratones de tipo salvaje. Cav-1 out han mejorado la supervivencia tras la exposicin LPS. Resultados similares fueron reportados en varios estudios anteriores con LPS y la exposicin a hiperoxia. Desde el CAV-1 es un regulador negativo de la eNOS, CAV-1 out han aumentado oxido ntrico (NO) en plasma, y, paradjicamente, aumenta la resistencia vascular pulmonar (PVR). PVR elevada se atribuye a la remodelacin de los vasos precapilares pulmonares, y, por tanto, el NO plasmatico basal elevado est pensado para compensar las alteraciones vasculares estructurales en CAV-1 out. defectos en la Disminucin de llenado de las arterias pulmonares se encuentran en la CAV-1 out. CAV-1 out tienene edema pulmonar basal, con agua extravascularaumentado en el pulmon.