CONTROL DE CALIDAD DE SUEROS HEMOCLASIFICADORES ABO, Rh Y SUERO DE COOMBS

Q.B.P. MA. LUISA TAVIRA MENDOZA

CONTROL DE CALIDAD DE SUEROS HEMOCLASIFICADORES ABO, Rh Y SUERO DE COOMBS

Las pruebas de control de calidad se realizan para determinar las especificaciones mnimas que deben tener los sueros hemoclasificadores ABO y Rh as como para la antiglobulina humana ( suero de Coombs ).

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Quines establecen estos criterios? Existen normas que establecen cuales son las especificaciones que deben cumplirse en estos reactivos. * NOM-003-SSA2-93 * NOM-017-SSA1-93 (ABO) * NOM-018-SSA1-93 (Rh) * NOM-019-SSA1-93 (Suero de Coombs)

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Reactivos a evaluar:
* Anti-A * Anti-B * Anti-AB * Anti-D * Antiglobulina Humana Lectinas ? - Potenciadores: Albmina ? LISS ? Bromelina ?

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Cuales son los criterios para valorar y aceptar estos reactivos? Se revisarn los siguientes aspectos: Fisicoqumicos Tcnicos

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Aspectos Fisicoqumicos: * Nombre del producto * Lote y fecha de caducidad * Temperatura de almacenaje * Volumen * pH * Olor y color del suero * Color de la etiqueta, rosca y bulbo * Instructivo

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Suero Anti-A Anti-B Anti-AB

Color del suero Azul Amarillo mbar

Color de la etiqueta Azul Amarillo Blanco

Color del bulbo Azul Amarillo Blanco

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Aspectos Tcnicos:

* Avidez * Especificidad * Ttulo ( potencia )

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Avidez: - Es la fuerza global de la interaccin entre dos molculas. - Es el tiempo en que se inicia la aglutinacin. - La avidez depende tanto de la afinidad como de la valencia de las interacciones.

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IgM tiene 10 sitios de unin idnticos que podran unirse a 10 determinantes antignicos en una superficie celular dando lugar a una interaccin polivalente con una mayor avidez.

Tiempo promedio de avidez

Antisuero
Anti-A

Grupo sanguneo
A1 A2 A1B A2B| B A1B A2B A1 A2 B R1r R2r D dbil

Nmero muestras a probar

2 2 1 2 3 1 1 2 2 3 3 3 1

Tiempo de inicio de aglutinacin (seg)

15 20 15 30 15 15 15 15 20 15 30 30 30

Anti-B

ANTI-AB

Anti-D

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Especificidad: Capacidad de un Ac para reconocer un Ag distinguiendo pequeas diferencias en la estructura qumica. Cada antisuero se hace reaccionar con las diferentes clulas y no debe existir aglutinacin inespecfica.

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ESPECIFICIDAD
REATIV O Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Control Rh Coombs Lectina A1 Lectina H POS ? NEG ? NEG ? NEG POS CEL. A1 POS NEG POS CEL. A2 POS NEG POS CEL. B NEG POS POS CEL. O NEG NEG NEG POS NEG NEG NEG POS NEG R1r rr E+ E-

Antgenos Eritrocitarios
Grupo A1
Ag A Ag A Tipo 2 Tipo 3 Ag H Ag A Tipo 2 Ag A Tipo 4 Ag B Ag H

Grupo A2

Grupo B

Ag H Ag A Ag H Ag H Tipo 3 Ag A Tipo 2 Ag B

Ag A Tipo 4 Ag H

Ag B

Ag A

Grupo O

Grupo A1B

Tipo 2

Grupo A2B

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TTULO: La concentracin de un Ac especfico en el suero para un Ag en particular se calcula determinando cuntas diluciones seriadas del suero se pueden realizar antes de que se dejen de observar uniones. Mide la capacidad del antisuero para reaccionar con sus respectivas clulas (Ag).

TTULOS MNIMOS QUE DEBEN TENER LOS DIFERNTES ANTISUEROS Antisuero Anti-A Grupo sanguneo
A1 A2 A1B A2B B A1B A2B A1 A2 B A1 A1B A2 E+ R1R2

Ttulo mnimo
256 128 128 8 256 64 128 256 64 256 64 64 8 32 64

Anti-B

Anti-AB Anti-A1 Lectina Anti-H Lectina Coombs Anti-Rh

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Potencia: Mide la fuerza del antisuero con la que es capaz de reaccionar con los Ags respectivos. A partir del resultado de las aglutinaciones en la titulacin, se anota lectura por grado de aglutinacin de 0 a 4+, a cada uno de estos se les asigna un valor numrico (computo).

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Lectur Aglutinacin a 4+ Total en un solo cmulo grande

3+ 2+ 1+ +/Grandes aglomerados con pocos eritrocitos libres

Puntos
12

10 Gran cantidad de conglomerados pequeos con nmero moderado de eritrocitos libres Conglomerados definidos pero finos (cmulos de 20 eritrocitos o menos) Eritrocitos dispersos que pueden contener ocasionalmente algn conglomerado pequeo Los eritrocitos se mueven libremente. No hay conglomerados visibles 08 05 02 0

LA CALIDAD EMPIEZA DESDE QUE AMANECE Y YO AUN SE EN QUE MOMENTO SE TERMINA USTEDES SI?

RECORDEMOS QUE SOMOS LO QUE HACEMOS

TCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNHEMATOLOGIA

* Avidez:
Se determina usando la tcnica en placa y a temperatura ambiente. La aglutinacin se debe iniciar en el tiempo mximo que se especifica para cada subgrupo, contando a partir del momento en que se pone en contacto suero y eritrocitos. Las pruebas de avidez se realizarn de rutina a los antisueros en uso diariamente antes de empezar a trabajar y a una muestra de antisuero de cada nuevo lote.

TCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNOHEMATOLOGIA AVIDEZ

Mezclar en un rea de 25mm diam. 1 gota eritrocitos + 1 gota de antisuero Rotar la placa de lado a lado

Eritrocitos al 10% ( ABO )

40% ( Rh ) calentar previamente la placa a 3745C

Nota: Tomar el tiempo con un cronometro desde el momento de la mezcla hasta el momento de inicio de la aglutinacin.

TCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNHEMATOLOGIA

ESPECIFICIDAD

El producto debe estar libre de aglutininas diferentes a las especificadas en la etiqueta y libre de partculas, de efectos o sustancias indeseables. Se debe realizar diariamente a los antisueros de rutina, antes de empezar a trabajar y a una muestra de cada nuevo lote.

Especificidad
Eritrocitos 2-5%

Reactivo
Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Control Rh Suero de Coombs

A1

A2

R1r

rr

E+

E-

+ +

+ +

+ +

+ + -

- Colocar igual volumen de la suspensin de eritrocitos y del reactivo. - Centrifugar 30 seg a 3400 rpm. - Leer. Los reactivos debern contener nicamente las aglutininas especificadas en la etiqueta. - El Rh se llevar hasta Coombs.

TCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNHEMATOLOGIA

Ttulo (Potencia): La titulacin se har a una muestra de antisuero de cada nuevo lote. La titulacin se realiza siempre por duplicado y los resultados debern ser reproducibles. Si existen diferencias en las lecturas de 2 tubos con la misma dilucin, deber repetirse la prueba.

Ttulacin
( ABO Y Rh )

TCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNHEMATOLOGIA

Realizar diluciones seriadas del Antisuero con SS

1:1

1:2

1:4

1:8

1:16

1:32

1:64

1:128
Mezclar y

1:256 1:512

50l del reactivo diluido + 50l de eritrocitos ( 2 5 % )

30 seg 3400 rpm

TCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNHEMATOLOGIA

Ttulo ( Potencia ) Resuspender suavemente las clulas y bajo iluminacin apropiada, leer macroscpicamente y sin demora ( los negativos se llevaran hasta Coombs ) El ttulo es el recproco de la mayor dilucin del suero que da una lectura de 1+. Ej. Si la dilucin es 1:512 el ttulo es de 512.

DILUCIONES
Ej. 1 Eritrocitos al 5% 5 ml E + 95 ml SS 5 ml E --------- 95 ml SS X --------- 3 ml SS 3x5 95 X = 0.15 ml E Ej. 2 Eritrocitos al 10 % 10 ml E + 90 ml SS 10 ml E --------- 90 ml SS X --------- 2 ml SS 2 x 10 90 X = 0.22 ml E

DILUCIONES
Ej. 3 Eritrocitos al 40 % 40 ml E + 60 ml SS 40 ml E --------- 60 ml SS X --------- 3 ml SS 3 x 40 60 X = 2.0 ml E Ej. 4 Eritrocitos al 0.8 % 0.8 ml E + 99.2 ml SS 0.8 ml E --------- 99.2 ml SS X --------- 3 ml SS 3 x 0.8 99.2 X = 0.02 ml E