Crateur du projet : Didier BAAR ( = ) Auteur de la fiche technique : Marcel LECOMTE Responsable : Marcel LECOMTE (Cercle Mycologique de Namur

& Cercle des M.L.B.)

Cercle des Mycologues du Luxembourg belge asbl (M.L.B.), Prsident : Paul PIROT, rue des Peupliers, 10, B-6840 NEUFCHATEAU Pour vos commandes : voir la feuille du Catalogue

Bleu de mthylne

1. NATURE DU COLORANT :
Le bleu de mthylne, ou chlorhydrate de ttramthylthionine, dont la base est une base ammonium, est obtenu par laction de loxyde dargent ; cette base a t appele bleu Borrel par LAVERAN. Cest un colorant basique progressif. Il fait partie du groupe des Quinones-imides, section des Thiazines, qui sont des colorants sulfurs dans lequel deux noyaux benzniques sont unis par un anneau ferm constitu dun atome dazote, dun atome de soufre et de 4 atomes de carbone. Dans ce groupe, on va trouver : la thionone (ou violet de Lauth), lz bleu de toluidine, le bleu de mthylne nouveau (qui est driv de lthyltoluidine, et non de la dimthylaniline comme son homonyme ; ils sont trs voisins dans leur action !), le violet de mthylne, lazur de mthylne et le vert de mthylne (bleu de mthylne nitr). ATTENTION ne pas confondre avec les bleus de mthyle (la fuchsine acide (rubine acide, Magenta S), le vert lumire (Lichtgrn ou vert acide S), le bleu leau, les bleus 1 et 2 de Saint-Denis, le bleu de diphnylamine, le bleu coton, le bleu de Chine, le bleu naphtyle, le bleu disamine qui constituent toute une famille de colorants bleus acides.

2. PREPARATION :
a/ en solution aqueuse (il est trs soluble dans leau) : Eau bidistille : Bleu de mthylne : Sodium Dodcyl Sulfate Mlanger longuement (ou laisser 2 heures sur lagitateur magntique) et filtrer. b/ comme colorant vital mlanger 1 cc de la solution mL53 avec 5 cc deau distille solution 1/500me mlanger 1 cc de la solution mL53 avec 10 cc deau distille solution 1/1.000me mlanger 1 cc de la solution mL53 avec 100 cc deau distille solution 1/10.000me 100 ml 1g 1g

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c/ en solution aqueuse alune : Eau bidistille : Bleu de mthylne : Alun de potasse Lalun de potasse est un sulfate double de potassium et daluminium. Mlanger longuement (ou laisser 2 heures sur lagitateur magntique) et filtrer. 100 ml 1g 10 g

3. UTILISATION :
Cest le plus important des colorants basiques. 1. Le bleu de mthylne chimiquement pur est peu utilis en microscopie, sinon pour les colorations vitales o il fournit dexcellents rsultats sur des tissus nerveux, sur des cellules vivantes isoles ou sur des organismes entiers (Protozoaires par exemples). On utilise beaucoup plus souvent le sel double associ au chlorure de zinc. Le bleu de mthylne est en effet pollu par lAzur de mthylne, qui se forme spontanment dans les solutions. En solution 1 %, il est possible de lutiliser pour une coloration nuclaire, mais nous lui prfrons le bleu de toluidine, et la thionine, qui sont plus lectifs, et fournissent des colorations plus nettes. Le bleu de mthylne nest pas mtachromatique. Toutes les colorations de noyaux qui lui ont t attribues dans la littrature sont dues en fait la prsence de ses deux drivs : le violet et lazur de mthylne. Une solution classique et bien connue, comme le bleu de Khne, nest efficace que grce leur prsence. Cest un systme de relations complexes puisque le violet et lazur de mthylne nexercent leur pleine action quen prsence de bleu de mthylne. 1. Le bleu de mthylne alun associ au rouge de ruthnium constituent une paire extraordinaire, utiliser en histologie et cytologie vgtales. Cette double coloration donne des couleurs varies dans les lments lignifis (lige en vert bois en bleu parenchyme en rose sclrenchyme en violet). La solution idale consiste videmment travailler sur des coupes qui ont t ralises au microtome aprs inclusion la paraffine ou au PEG, puis colles sur lame avec lalbumine de Meyer. Il serait triste de ne pas tenter de conserver les rsultats obtenus, qui sont spectaculaires. Modus operandi : colorer 5 10 minutes dans le bleu de mthylne alun laver leau colorer 5 10 minutes dans le rouge de ruthnium rincer leau monter au baume du Canada, la glycrine glatine ou au Conservateur de Hoyer Pour les diverses techniques et les produits voqus, voir les fiches techniques spcifiques !

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4. DANGERS :
Le bleu de mthylne en solution aqueuse est peu ou pas toxique, mais ne doit tre en aucun cas utilis comme colorant alimentaire. Il tache facilement la peau et les vtements.

5. CONSERVATION :
Il se conserve au moins un an en flacon bien ferm.

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