Imunobiologia

Professora Luciana Imunidade Inata Inata-> menos especfica Presente ao nascet No muda a intensidade do seu sinal com a exposio ao antgeno (no muda sua resposta)

Adquirida-> mais especfica Clulas proliferam a partir da exposio ao antgeno Aumenta a intensidade (da resposta, do sinal) com a exposio ao antgeno

Linfcitos B e T -> tpicos da imunidade adquirida, porm j nascemos com eles s que eles permanecem inativos at o com contato com o antgeno. Ao entra em contato com o antgeno, essas clulas se ativam e se proliferam (produzem clones)= expanso/proliferao clonal. OBS: errado dizer que imunidade inata inespecfica. Ela apenas menos especfica que a adquirida. Receptores da Imunidade Inata X Adquirida Inata: PRR receptores de reconhecimento padro -> reconhecem padro moleculares associados ao patgeno (PAMBs) Ex: LPS (presente em bactria), manose, metioninca. Adaptativa: receptores com regies variveis na sua extremidade, permitindo reconhecer maior variedade de antgenos, portanto mais especfico. BcR: clula B, TcR: clula T *O sistema imunolgico no serve apenas para a defesa, mas tambm para manter a homeostasia. Foi criado para manter a homeostasia, a defesa consequncia. A medula ssea produz linfcitos B diferentes todos os dias -> maior variabilidade (consegue reconhecer mais tipos de antgenos) O timo grande quando nascemos e diminui ao longo da vida. As clulas T proveniente deles se mantm no corpo e fazem outras por expanso clonal. Imunidade Inata possui a mesma quantidade e mesmo tipo de clulas por toda a vida. O idoso no possui sistema imunolgico melhor pois no consegue repor a quantidade de linfcitos. *Importante: Possuimos dois tipos de linfcitos B -> Tipo B1 e tipo B2. Eles possuem receptores diferentes, portanto reconhecem antgenos diferentes. Receptores Toll-like e seus ligantes

11 tipos de receptores A ausncia desses receptores nas clulas est relacionado a causas de cncer Substncias reconhecidas por esses receptores e presentes em antgenos

TLR2 e TLR6

Lipoprotenas, lipoarabinomananas, peptidioglicanos, zimosan, ancoras de GPI TLR4 LPS, taxol, hsp60* TLR5 Flagelina TLR9 CpG DNA *hsp60 uma protena endgena, ela est presente no prprio organismo humano. O TLR4 reconhece mas no responde, evitando assim uma doena auto-imune. Portanto h antgenos endgenos e exgenos. Alm disso h receptores na membrana e receptores intracelulares (citoslicos) Outras molculas de reconhecimento padro Receptores citoplasmticos: RIG-I=Reconhecem RNA viral; NOD=reconhecem peptidioglicanos de bactrias. Linhas de Defesa
Microorganismos invasores

Barreiras fsicas (pele integra, pois pele rompida porta de entrada para microorganismos; pelos e clios), qumicas (pH (da vagina, do estomago), salva com enzima)e biolgicas (flora intestinal -> microbiota)

clulas da imunidade inata

imunidade adqurida

Clulas da Imunidade Inata a) Moncito So clulas precursoras dos macrfagos (presentes apenas no tecido infectado). Presente no sangue circulante. b) Macrfagos Realiza fagocitose: engloba partculas slidas e as digere a partir de enzimas digestivas presentes nos lisossomos. Destruio de patgenos

Liberao de citocinas, cuja funo sinalizar quando algo est fora dos padres. APCs=clulas apresentadoras de antgenos -> apresentaes de antgenos para a imunidade adquirida. APCs= macrfagos, linfcito B e clula dendrtica. c) Neutrfilos (se cora com corante cido e bsico) Tambm chamados de granulcitos ou PMN (polimorfo nuclear, portanto uma clula com vrias formas de ncleo). Possui ncleo trilobulado e capaz de realizar fagocitose. a primeira clula a chegar no local da infeco ou da inflamao. Possui uma sobrevida de aproximadamente 12 horas. d) Clula dendrticas (forma estrelada) Tamm uma clula apresentadora. Possui capacidade fagoctica. Possui 2 molculas que permitem a apresentao de antgenos para o linfcito T: MHCI (presente em todas clulas nucleadas) e MHC II (presente apenas nas clulas apresentadoras) e) Clula NK = Natural Killer Mata 2 tipos celulares: clulas infectadas por vrus (vrus depende da clula hospedeira) e clulas tumorais. A clula possui grnulos. Destruio no por fagocitose, mas pela liberao de grnulos contendo: perforina (faz um poro) e granzima (que ativa capazes, induzindo a apoptose) Possui receptores ativadores e inibidores: Receptores inibidores: reconhece MHCI -> a presena dele impede a atuao de clula NK. Portanto clulas sem MHCI e que exibem alteraes de membrana sofrem ao da NK. Receptores ativadores: reconhece protenas do antgeno presente na membrana da clula. Para a NK se ativar precisa de 2 sinais: No ter MHCI Ter anormalidades na membrana da clula. Por isso a NK no mata a hemcia, que apesar de no ter MHCI, no possui elementos ativadores de NK. Protenas Circulantes da Imunidade Inata (componente Humoral) Sistema complemento Conjunto de protenas que so clivadas dentro do sangue e auxiliam o sistema imunolgico. Possui 3 vias: 1. Via Clssica: depende da ligao antgeno/anticorpo, portanto depende de linfcito B, logo pertence a imunidade adquirida. 2. Via da Lectina: depende da MBL Pertence a imunidade inata, portanto 3. Via alternativa: Caminho + curto no depende de anticorpo

*Todas vias passam por C3.

*Efeito cascata: uma protena vai clivando a outra sucessivamente. Via terminal de ativao do sistema complemento As vias formam um complexo de ataque membrana (MAC, CAM). Atacam a membrana da clula do patgeno, lisando-a. Fazem um poro na clula do patgeno, destruindo-o por choque osmtico. OBS: atacam patgenos fora de clulas, patgeno intracelular morto de outa forma. Protenas reguladoras do complemento Como ocorre a regulao da atuao do complemento: A presena de cido silico em volta da membrana no deixa que as protenas do sistema complemento se liguem a clulas do nosso corpo. Protenas reguladoras do complemento ( impede a formao do MAC). Ex: DAF, CD59

Anafilatoxinas geradas pelo complemento C3a, C4a, C5a -> podem sinalizar alguma coisa para as clulas desde que elas tenham receptores para eles. C3a = promove a degranulao de mastcitos, basfilos e eosinfilos. Ex: liberao de histamina pelo macrfago. Histamina = promove vasodilatao (atua no epitlio do vaso sanguneo) e aumenta a permeabilidade seletiva. C4a = promove a degranulao de mastcitos e basfilos C5a = prmove a degranulao de mastcitos, basfilos e eosinfilos. Aumenta a expresso dos receptores para complemento CR1 e CR3. Funo do sistema complemento Lise Opsonizao = o complemento facilita a realizao da fagocitose pelo macrfago. Ativao da resposta inflamatria C3a, C4a e C5a -> sinalizam a liberao de grnulos contendo histamina (grnulos dos macrfagos) Retirada do complexo antgeno-anticorpo por fagocitose A deficincia da retirada do complexo antgeno-anticorpo pode causar doenas como: vasculite (inflamao do vaso sanguneo) e glomerulonefrite. Inflamao: componente celular da imunidade inata Decorre da leso ou da injria de um vaso, de um tecido, da entrada de micro-organismos, etc. Porm nem toda inflamao resulta de uma infeco, mas toda infeco leva a inflamao. A infeco decorre necessariamente da entrada de micoroorganismos.

A inflamao tem as caractersticas essenciais como a Dor, Rubor, Calor e endema -> sensaao de pulsar, que dado de devido a um intermediador inflamatrio. Dor: provm de um intermediador inflamatrio, Rubor: vermelhido local devido a dilatao dos vasos; Calor: provem da grande movimentao de clulas; Endema: inchao que provm por vezes da prpria diapedese, do extravasamento do plasma. A grande infiltrao leucocitria e a liberao massiva de citosinas podem provocar danos no tecido afetado, apesar de objetivar a reparao do tecido lesado. Existem quatro reaes de hipersensibilidade, que geralmente so denominadas de alergia, porm apenas o tipo 1 pode receber esse nome. Todo processo alergico decorre de um processo inflamatrio, o contrario nao verdade. O primeiro processo que ocorre num injria a vasodilatao. Ao aumentar o calibre do vaso, o fluxo sanguineo diminui. Isso contribui para que as celulas consigam atravessar do vaso para o tecido injuriado. Ocorre tambm o aumento da permeabilidade seletiva, que nao a mesma coisa que o aumento da dilataao. O aumento da permeabilidade seletiva o aumento dos espaos entre as clulas que compem o vaso, o que tambm contribui para a passagem das clulas. Molculas de adeso envolvidas na migraao leucocitria Na inflamao as clulas na corrente sangunea expressam molculas, sendo que algumas so constitutivas (fazem parte da estrutura normal da clula e do endotlio) e outras so induzidas na inflamao, que vo se associar com outras molculas presentes no endotlio vascular para realizarem a migrao. Essas molculas so as selectinas, integrinas e as molculas da superfamilia das imunoglobulinas. Existem trs tipos de selectina. A do tipo L, que est expressa nos leuccitos. A E e a P esto presentes no endotlio. As integrinas esto expressas apenas nos leuccitos e as da superfamlia das imunoglobulinas apenas no endotlio. Como ocorre esse processo? Quando ocorre o dano do tecido e d-se inicio a inflamao. Com o dano do tecido, das membranas celulares, ocorre a produo de molculas denominadas mediadores inflamatrios no local: citosinas (TNF alfa e IL1), histamina (em processo alrgico toma-se anti-histamnico), prostaglandina (anti-inflamatrios so inibidores de produo de prostaglandina) (Ela, bem como os outros medidores inflamatrios, aumenta o vaso e faz a permeabilidade seletiva), leucotrienos. Posteriormente, com a vasodilatao e com o aumento da permeabilidade seletiva j ocorrida, os leuccitos (celulas da serie branca) passando pela circulao sangunea, portadores de resduos de carboidrato que se liga a selectina E ou P presente no endotlio, iniciando o processo de rolamento. A clula comea a rolar sobre o endotlio, at a integrinas, presente na clula, se conectar com os receptores da superfamlia das imunoglobulinas presentes no endotlio, quando a clula estabiliza e se prende firmemente. Aps isso, com o vaso j com a permeabilidade seletiva aumentada, o leuccito realiza diapedese. Ao atravessar para o

tecido, as clulas comeam a responder as quimiocinas, que se ligam nos receptores dessas celulas. Os papis das quimiocinas (um tipo de citocina) de atrair. A quimiocina se liga no receptor da celula, ajudando a atrair mais celulas, pois quando se liga, a celula secreta mais quimiocina. A quimiocina liberada, por exemplo, por macrfagos. Secreao de citocinas pelos macrfagos ativados L-1 -> ativaao do endotlio vascular e de linfcitos, TNF-alfa ->ativaao do endotlio vascular e aumento da permeabilidade, IL-6 -> produzido na febre, aumenta a temperatura corporal, ativaao de linfocitos e aumento da produao de anticorpos, L-8 (fator quimiottico/recrutamento de neutrfilos, IL-12 (ativaao de celulas NK- mata celulas infectadas por virus (para evitar que a infecao prossiga) ou celulas tumorais (evita a progressao do tumor, para a metafase). Numa infeco ocorre primeiramente a atuao dos neutrfilos, que iram liberar citocinas para atrair macrfagos, que por sua vez vo liberar citocinas que vo atrair linfcitos, que novamente iram atrair macrfagos. uma atuao conjunta, em circulo, no sendo possvel separar a imunidade inata da imunidade adaptativa. Bradicinina estimula o processo de pulsao, j que estimula a contrao do musculo liso. Todos juntos em ao Houve um dano tecidual e todas as coisas para reparar isso iro ocorrer simultaneamente. Com a presena de microorganismos, h uma infeco, havendo o recrutamento de macrfagos para fagocita-las. Ao mesmo tempo esses macrfagos esto liberando quimiocinas, citocinas, prostaglandinas e leucotrienos (que iro atuar no endotlio do vaso para a vasodilatao e para o aumento da permeabilidade seletiva). Ao mesmo tempo, como houve leso do vaso sanguneo vai ativar a cascata da via de complemento, cujos elementos esto presente no plasma. Esses complementos se ligam a basfilos, mastcitos, eosinfilos. Ao mesmo tempo vai ser liberado plasmina que vai ativar para liberar fibrina e consequentemente fibrinopeptdeos que vo atuar no reparo tecidual. Tambm h produo do neuropeptdeo bradicinina , que da a sensao de pulsar, e estimula os neuroreceptores perifricos dando a sensao de dor. E com isso j comea ocorrer a diapedese dos leuccitos para ajudar o macrfago. O macrfago celula da imunidade inata capaz de apresentar antgenos para linfcitos T, estimula as clulas tronco da medula ssea na hematopoese, ativa as clulas endoteliais por meio dos mediadores inflamatrios, produz citocinas que recrutam linfcitos e fibroblastos que vao atuar na reconstruo tecidual. O macrfago, portanto, uma celula chave de ligao entre a imunidade inata e adaptativa. Organizao morfofuncional do sistema imunolgico adaptativo Hematopoese

 a produo de clulas do sangue. Ocorre antes do nascimento no fgado e o bao fetal, at o timo fetal, produz o sangue. A partir do setimo mes a medula sse passa a assumir essa funao. Tudo comea com a celula tronco hemtopoitica auto-renovavel, uma celula pluripotente, a qual origina o progenitor mielide e o linfide. A linha mielide tudo que no linfide. A clula NK, apesar de ter origem linfoide, nao um linfcito para a maioria dos autores. As clulas de origem mielide so os eritrcitos, as plaquetas, os basfilos, os eosinfilos, os neutrfilos e os moncitos, logo, os macrfagos. O progenitor linfoide d origem a linfcito T, B e a clula NK. A IL-3 e a GM-CSF sao citocinas que ativam a diferenciacao para o se tornar um progenitor mieloide. O IL-7 ativa a diferenciacao em progenitor linfoide. O linfcito T, para se maturar, necessita ir para o timo. Linfocito B, clula dendritica e macrofagos sao apresentadores de antigenos. O neutrfilos, bem como a celula dendritica e macrfagos fazem fagocitose. O neutrfilo, um granulcito, o primeiro a chegar no sitio de infeco, porm possui vida curta. Possui ncleo trilobulado. O eosinofilo se cora com eosina, um corante cido, pois tem uma proteina bsica que ajuda a destruir os tegumentos dos helmintos. Eles tambem atuam na alergias. Possui o nucleo bilobulado. Num hemograma se suspeita que o paciente sofre de verminose ou alergia. O verme tambm por vezes da eritremas cutneos, podendo-se confundir com alergia. Essa celula se apresenta em pouca quantidade no sangue normalmente. O Basfilo tambm pode estar associado a um processo alergico, mas nao tem a funcao exclusiva nesse processo. O mastocito participa de processos inflamatorios e alergicos, ele produz histamina e citocina. Sistema imunilogico adaptativo Clula T, timocito, linfcito T. Os linfocitos T, possuem o receptor TcR, mais diversos que na resposta inata. Ou seja, sao mais especificos. Menor em tamanho que um netrofilo e eosinofilo. Celula B O receptor denominado BcR, que um receptor de imunoglobulina, que reconhece o antigeno sozinho, sem necessidade de alguem apresentar. Possui o nucleo quase igual ao do T. Para diferenciar do B do T, usa-se receptores. Isso pode ser feito por meio da imunoflorescncia. Pode ser usada tambem a citometria de fluxo, em que o aparelho le 11 cores diferentes ao mesmo tempo. Morfologia de um plasmcito

Quando o linfocito B ativado, transforma-se em plasmcito, uma clula mais alongada que secreta anticorpos, que so protenas, produzidos no RER. Essas clulas possuem grande quantidade de mitocndrias. Classes de linfcitos Linfcito B Linfcito B -> Plasmcito -> anticorpo: protena no enzimtica que tem trs funes: neutralizao (impede que ele entre na clula); fagocitose (marca o patgeno, avisando que ele precisa ser fagocitado); ativao do sistema complemento (pela via clssica). Linfocitos T T Helper (T CD4) -> possui receptores TcR, que junto com as clulas que apresentam antgenos por meio do MHC, produz diferentes tipos de citocinas que ativam macrfago, ou promovem inflamao, ou ativa o proprio linfocito T ou B. T Citolitico (T CD8) -> mata clulas infectadas e tumorais. Para que ele reconhea a clula, ele enxerga o antgeno presente no MHC de classe 1 da clula apresentadora, ento libera perforina e granzima, que matam a clula alvo. *O MHC de classe I est presente em todas as clulas. Na clula NK o MHC de classe I que inativa-a, j para o linfcito T, ele importante para ativa-la. *Clulas apresentadoras de antgenos possuem MHC de classe II. O macrfago apresenta antgenos por meio do MHC de classe dois, apenas para a T Helper. Celulas Naive sao celulas que nunca encontraram antgenos, so linfcitos virgens. Quando fazem o reconhecimento, os linfcitos B e T se proliferam e se diferenciam, alm de produzir clulas de memria, que j possuem anticorpo na superfcie e ajudam na resposta mais rpida aos antgenos. rgos do sistema imune Existem dois tipo de orgaos linfoides, os primarios e secundarios. Nos primarios sao onde as celulas so geradas: o timo e a medula ssea. A medula ssea gera todos os tipos de celula, com exceo do T que matura no timo, mas o precursor do T proveniente da medula. O Linfcito B matura na medula at certo ponto, e finalizam no bao. O Bao, apesar de ajudar na maturao do linfcito B, ele um rgo linfoide secundrio. Os orgaos linfoides secundrios: bao, linfonodos (orgaos linfoides, agregados de linfocitos), sao responsaveis por armazenar e onde ocorre as resposta imunologicas. Outros orgaos sao as adenoides (localizadas na regio do nariz), as amigdalas, Placas de peyers (localizadas na regio do instestino). Timo Quando os animais so jovens, o timo grande, quando envelhece, ele diminui de tamanho.

 normalmente formado por dois lbulos, localizado superiormente ao corao. Em doenas autoimunes de linfcito T, normalmente retira-se o timo. Quando envelhecemos, utilizamos principalmente dos linfcitos T de memria que se armazenam nos baos, nos linfonodos, que so ativados quando necessrios. No timo h tambm a produo de linfcitos T regulatrios, que controlam as doenas autoimunes. Quanto mais pra medula, mais pra dentro do timo, mais diferenciados so os linfcitos. No timo tem-se a regio medular, a regio cortical, as trabculas tmicas, que dividem as regies dentro do timo, tem-se os vasos sanguneos, por onde vem as clulas. Encontra-se timcitos (clulas T), clulas nurse (ajudam na diferenciao do timo), clulas dendrticas que apresentam os nossos linfcitos prprios, para ajudar na maturao, macrfagos. Orgaos linfoides secundarios Linfonodos So irrigados por artrias, veias e vasos linfaticos. Tem-se os vasos linfticos aferentes, por onde as clulas chegam a esses linfonodos e os vasos linfticos eferentes que so os vasos de sadas. Ele recebe a drenagem, portanto de vasos sanguneos e vasos linfticos. A linfa um tecido fluido parecido com o sangue, porm cheio de linfcitos. Os linfonodos possuem regies onde as clulas vo se distribuir. Os linfocitos B enstao localizados em folicos e os T estao adjacentes aos foliculos. O foliculo com tamanho aumentado, denomidado secundario, nele as celulas ja reconheceram antigeno. Bao Possui duas regies distintas. A polpa vermelha, mais externa, e a polpa branca. O bao, diferente do linfonodo, irrigado apenas por artrias e veias, responsavel, portanto, por proteger o sangue. Pela arterola central por onde chega o sangue trazendo linfcitos e qualquer coisa que venha acometer o sangue. Pessoas que nao tem bao so mais expostas a sofrer sepsemia. A regiao da polpa vermelha uma lixeira de hemcia, importante para a renovao das hemcias. Nela onde as hemcias velhas so retiradas. A regio da polpa branca onde se encontram os linfcitos T e B. Nos folculos tem-se os linfcitos B e na regio periarteriolar, em volta da regio da arterola central, onde se localizam os linfcitos T.

Amigdalas e adenides Nem nas adenides, nem nas amigdalas tem-se a organizao do timo e do bao, pois so menores. Placas de Peyer

Placas de peyer esto localizadas na regio do intestino. Abaixo das laminas prprias, em forma de folculos, formados por linfcitos B. Tecido linfoide associado a mucosa (MALT): Tem-se na regio abaixo da lamina propria folculos organizados de linfoides, de onde originam-se plasmcito que secretam IgA, muito importante para a imunidade dessas regies de mucosa. (Razo pela qual a vacina a poliomielite por via oral, j que o vrus entra por essa via, o que ajuda na produo de IgA). Na mucosa, tambm encontra-se linfcitos intraepiteliais. Tecido linfide associado a pele: Nela encontra-se linfcitos intra-epidermicos, as celulas de langerhans so iguais as ceulas dendriticas, que apresentam antigenos. Abaixo tem-se macrfagos, linfcitos e vasos linfticos, onde se antgenos que carem nessa regio vao ser levados pelos vasos linfticos para o linfonodo mais prximo. O Sistema Linftico um sistema que transporta linfa, que desemboca nos linfonodos. Quando ocorre um corte, e entra o agente infecioso, um fagcito fagocita o antgeno e o leva para o vaso linftico, na regio da derme, e leva para o linfonodo mais prximo. Pelo vaso eferente a celula entra no linfonodo e apresenta para o linfcito T. O linfcito B reconhece um antgeno que entrou pela linfa livremente. Esses linfcitos proliferam e voltam vo para o local da infeco. Os linfcitos, proveniente do bao e do timo, chegam nos linfonodos via circulao sangunea, por meio da vnula especializada endotlia alta. Linfocito B vai para dentro do folculo e o T vai para o lado de fora. Esses linfcitos recirculam, saem pelos vasos linfticos eferentes. Os linfcitos ativados dentro dos linfonodos para irem at o local da infeco tem que sair via vaso linftico eferente e ir at a veia cava, por meio do ducto torcico, um grande vaso linftico, prximo ao corao. Caindo na veia cava ele vai ser atrado por quimiocinas at o local da inflamao, por meio das veias. Quando o linfcito no ativado ele fica recirculando por toda esse caminho do ativado, porm ele volta para os vasos linfticos aps cair nas veias. Quando ocorre uma infecco ou um corte, o linfonodo a inchar o mais proximo. A celula dendritica, de langerhan, a mais numerosa e a melhor apresentadora. Existe uma regiao na veia cava da circulaao, denominada de ducto torcico, que faz parte do sistema liftico, onde desembocam todos os vasos linfacitos. O ductor toracico desemboca na veia cava. 14/03/12 Migraao das celulas para os orgas linfoides secundarios O linfocito B matura parte na medula, parte no bao. Os linfocitos chegam nos rgos secundrios via circulao sangunea, atrados por quimiocinas. Quando esses linfcitos chegam nos linfonodos eles se utilizam tambm das citocinas para saberem os locais onde devem se instalar. Os linfcitos T, por exemplo, s expressam receptores para CCL19 e CCL21, e se estabelecem fora do folculo. O linfcito B expressa receptores apenas para CXCL13 e se

estabelecem dentro do folculo. Essa passagem da vnula do endotlio alto para o rgo linfoide intermediado tambm por clulas de adeso, como na inflamao. Na vnula do endotlio alto h ligantes de Selectina-E e de integrinas, como no processo de inflamao. Para imunologia: Celula de Langerhan uma clula dendritica da pele.

Estrutura dos Anticorpos Descoberta dos anticorpos 1890 von Behring e Kitasato: inocularam ttano e da difteria em ratos e observaram que o soro desses animais expressavam molculas que se ligavam a essas toxinas e as neutralizaram e deram o nome a elas de antitoxinas. Com o passar dos anos ele perceberam que essas molculas se ligavam a qualquer antgeno, corpo, que eram injetados no animal, passando a chama-las de anticorpos. Isso foi evoluindo ao decorrer dos anos e hoje conseguimos caracterizar essas protenas. As gamaglobulinas Para um melhor estudo dessas protenas presentes no plasma, resolveram separa-las e obtiveram dois grandes grupos, as albuminas e as globulinas: so separadas por solubilidade ou por eletroforese. Podem ser divididas de acordo com sua migraao em um campo eltrico -> eletroforese. Identificaram trs tipos de proteinas globulinas -> alfa, beta e gama. Tais anticorpos migravam para o campo das gama globulinas, passando a se chamar em alguns casos de imunoglobulinas. Moleculas da superfamilia das imunoglobulinas Linfcitos B possuem em sua membrana receptores chamados de BcR ou Imunoglobulinas (Ig). A imunoglobulina possui o formato de um Y. Apresentam domnios(associados a funo da protena) globulares caractersticos. Ao longo dos anos foi se percebendo que outras molculas do sistema imunolgico que esto na superfcie de suas clulas, tambm apresentavam domnios de imunoglobulinas, porm no so anticorpos, como a do MHC, as duas molculas presentes em linfcitos T CD4 e CD8, as molculas de adeso. Por isso recebem esse nome. Exemplos tambm so as envolvidas na migrao e na diapedese. Estrutura do anticorpo

Anticorpos possuem o formato de Y, duas cadeias internas chamadas de cadeias pesadas (verdes) e duas cadeias externas leves (amarelo). Todas essas cadeias so ligadas por pontes de sulfeto. Possui tambm uma subdiviso de acordo com a funo e caractersticas da regio. Como uma protena possui uma regio N terminal e uma C terminal. Na regio N terminal tem-se a regio varivel, que se liga ao antgeno, mais especificamente a um eptopo. Eptopo uma parte do antgeno reconhecido pelo anticorpo. A regio restante a regio constante estrutural da molcula e uma funo biolgica. A regio constante, no to constante, pois varia entre as classes de anticorpos. O anticorpo bivalente, ou seja, tem duas regies capazes de reconhecer o antgeno. Sendo que se possvel dividir a cadeia em VH (varivel pesada), CH (constante pesada), VL (varivel leve), CL (constante leve). A cadeia pesada possui trs CH e a cadeia leve uma CL. O stio de reconhecimento do antgeno realizado pela VH e VL e constitui o Fab. O restante constitui a trao Fc da molcula, que tem trao pela atividade biolgica. As diferentes classes de anticorpos possuem trao diferentes, pois possuem atividades biolgicas diferentes. Temos 5 tipos de classes de anticorpos. Regioes hipervariaveis CDRs (regioes determinantes de complementaridade) Dentro das regies variveis das leves e pesadas, temos regies hipervariaveis. So pontos de mutao que vo causar uma hipervariedades nessas regies variveis. So chamadas de CDR (regies determinantes de complementariedade), so elas que vo interagir diretamente com o epitopo do antgeno. J foi estudado que a regio CDR3 a que possui a maior varieabilidade, sendo que existem a CDR 1 e 2. As regioes de dobradia, composta por pontes de sulfeto, permite que o anticorpo se modifique, abra ou feche, para se adaptar ao antgeno. Regiao Fc-> regiao estrutural do anticorpo. Usaram papaina e pepsina, enzimas sintticas, para clivar e estudar as regies que o anticorpo possuia. Viram que com papaina o anticorpo era quebrado na regiao da dobradia. Submeteram as duas partes da molecula e viram que uma tinha a capacidade de reconhecer a molecula e a outra nao. Assim chegaram a conclusao que F(ab), integra e unida, tinha capacidade de reconhecer o antigeno. Divises de anticorpos Isotipo: Quando anticorpos diferem na poro constante da cadeia pesada, diz-se que ele possui isotipo diferente ou classe diferente. Possumos 5 isotipos(classe) ->IgA, IgE, IgD, IgM, IgG) -> A regiao constante da parte pesada sao diferentes, quando dois anticorpos sao diferentes nessas areas, dizem que o possuem isoptipo diferente; Linfocitos imaturos possuem IgM, quando imaturo, e IgM e IgD, quando maturo.

Alotipo -> Linhagens diferentes da mesma espcie vo ter altipos diferentes. Diferenas nos gens que codificam as regies, tanto na cadeia pesada como na leve. O anticorpo de um individuo no pode ser injetado no outro. Idiotipo -> Dois anticorpos que possuem regies variveis diferentes, reconhecem antgenos diferentes. Dentro de um mesmo linfocito, a especificidade para um antgeno idntica. Ou seja, apresentam isotipos diferentes, mas idiotipos iguais. Classes Temos 5 isotipos, diferem entre si na regio constante da cadeia pesada. IgA- constante da cadeia pesada alfa -> neutralizaao de antigenos na mucosa. Tambm encontrada na forma de dimero, associados na forma de uma cadeia jota. IgD- delta -> nao existe funo descrita especfica, funciona apenas como um receptor celular, presente na superfcie de muitos linfcitos, como o linfcito B. No secretada. IgM- mi (possuem 4 partes na cadeia pesada constante) -> e dura no maximo 10 dias aps uma infeco- > a primeira a ser produzida. Indicio de infeco recente ou que est ainda atuando. Associa-se formando uma estrutura pentamrica. No atravessa placenta, pois o tamanho grande. IgG- gama -> produzida na maioria das infeces. O linfcito B imaturo possui esse anticorpo. Produzidos em infeces virais e bacterianas. Mais abundante no nosso plasma. Sorologia de memria, dura anos. IgE- psilon (possuem 4 partes na cadeia pesada constante) -> produzida para helmintos e em alto nivel em processos alergicos. Presente em basfilos, eosinfilos e mastcito. Imaturo diferente de naive (virgem). IgE e IgM sao as unicas que possuem 4 partes contates na cadeia pesada. As classes certas j estao produzidas em celulas de memoria (IgA, IgE, IgG). Estas s so produzidas nas formas secretadas, excetos em clulas de memoria. Secreao de IgA O receptor poly-Ig, presente nas celulas epiteliais da mucosa, reconhece a IgA na forma dimerica, endocita e a transporta em uma vesicula para o lumen. Paricipacao de IgE nas alergias Ela se liga ao alergeno, sendo reconhecida pelo receptor Fc, escpecifico para IgE, na clula na que ela vai se associar resultando na degranulao e a liberaao de granulos de histamina e outras substancias que medeiam a reacao alergia. Tem o nome de receptor de Fc pois se liga a poro Fc no anticorpo IgE. O do mastcito do tipo psilon.

Receptores Fcs Poly-Ig -> se liga a IgA FcRN-> transporta IgG para a placenta de recem-nascidos. Temos duas caractersticas ligadas aos anticorpos Afinidade -> Avidez -> Multiplos sitios para se ligar ao antigeno. A IgM ao decorrer da exposio do antigeno, matura a sua afinidade. Ela possui uma baixa afinidade em relao a outros anticorpos que vo ser produzidos, pois a primeira a ser produzida. Por possuir mais stios de ligao (10) ao antgeno, se ligando com mais fora. Por possuir mais stio de ligao ela possui alta avidez, porm nem por isso possui alta afinidade.

Quando o anticorpo est preso na membrana, atravs da poro transmembrana, e reconhece o epitopo antigenico, e fazem mudanas estruturais que resultam em maior afinidade. O anticorpo sofre maturao de afinidade, o anticorpo muda para a forma secretada, ou melhor, comea a produzir a forma secretada, e ocorre a recombinao de classe (switching de classe). Recombinao de classe mudar de isotipo. Produo de anticorpos monoclonais George Kholer e Cesar Milsten Quando injeta-se um antigeno em um individuo, estimula-se a resposta policlonal, pois estimula-se a produo de linfcitos diferentes, j que um antgeno possui vrios epitopos. Para se produzir um anticorpo monoclonal, pega-se um camundongo, injeta um antigeno, induzindo uma resposta imunolgica. Pega-se, por exemplo, as clulas do bao do animal, que tem receptores especficos pra esse antigeno e faz uma fuso dela com mieloma mutante, fazendo com que elas vivam mais tempo. S que a linhagem tumoral no sobrevive num tipo de cultura denominado meio HAT, e apenas sobrevivem as que se fundiram. Pega-se uma placa com muitos furos e pega a mistura de clula que fundiu e coloca nos furos e faz um processo de diluio, e no final, provavelmente, vai sobrar apenas uma clula em cada furo. Coloca-se um epitopo especifico em contato com cada uma das clulas, presentes em cada um dos furos, e ve qual vai produzir uma resposta , gerando uma expanso clonal. Anticorpos quimricos (de duas espcies) humanos Quando se aplica um soro anti-ofidico, por exemplo, e utiliza-se anticorpos de cavalos, o sistema imune humano reconhece a poro Fc desse anticorpo como um antgeno, pois so de diferentes altipos. Para resolver esse problema, muda-se a poro Fc desse antgeno. No exemplo, insere-se a regio varivel do anticorpo do cavalo e coloca-se a poro Fc do humano, obtidos em laboratrio por enzimas que cortaram essas pores, coloca-se isso no plasmdeo, DNA de bactria circular, de replicao independente. Coloca-se tambm nesse

plasmdeo o gen promotor da imunoglobulina e coloca o gen que d a garantia de que essa clula se utilizando desse plasmdeo. Coloca os plasmdeos nas clulas de mieloma que se multiplicam em alta velocidade, que fabricam esse anticorpo. 21/03/12 Maturao ou Ontogenia de Linfcito B - Formao Estgio do desenvolvimento dos linfcitos B O linfcito B comea a se desenvolver na medula ssea, at o estgio de clula B imatura, quando migra para o bao, onde se torna maturo. O nico caso em que ele se maturaria totalmente na medula quem no tem bao. Todas as clulas do sangue surgem a partir de uma clula tronco, uma clula que se diferencia em qualquer outra clula. As que vo formar as clulas sanguneas so formadas a partir da HSC (Clula tronco hematopoitica), clula pluripotente que se diferencia em todas as clulas sanguineas. Todas as clulas sanguneas se matura totalmente na medula, exceto a clula B, que se matura no bao e a clula T, que se matura no timo. A HSC gera um CLP (precursor linfoide comum, que d origem a linfcito T, B e as clulas NK) ou um CMP (precursor mielide comum, que d origem a neutrfilos, macrfagos, plaquetas, basfilos, moncitos). CLP gera um precursor de linfcito B, denominado pr-B, que j est comprometido com a linhagem B, pois expressa molculas de linhagem B, como a CD19. Esse linfcito pr-B gera o pr-B. A diferena entre eles que o pr-B j comea expressar receptor que vai da origem ao receptor imunoglobulina, sendo denominado portanto de receptor pr-BcR. Esse pr receptor possui uma cadeia leve substituta, que posteriormente vai ser substituda por uma fixa. Quando o pr-B origina a clula B imatura, h a troca da cadeia leve substituta, formando o receptor imunoglobulina IgM. A clula imatura, por via sangunea vai para o bao onde se torna matura, passando a expressar, alm de IgM, IgD. Cabendo lembrar que so de isotipos diferentes, porm de mesmo idiotipo, possuem a mesma regio varivel. Fatores de transcrio envolvidas no comprometimento com a linhagem B A CLP por meio de sinais vira linfcito T ou B, denominados fatores de transcrio que se liga no DNA. EBF, E2A, Pax-5 direciona o CLP a formar um pr-B. Dependendo do perodo de desenvolvimento humano, o linfcito no se origina na medula. No perodo fetal ele se desenvolve na fgado. A partir do stimo ms a medula comea a produzir, e quando nascemos, apenas a medula passa a produzir. Imunoglobulina (receptor da clula B) No receptor pr-BcR, a cadeia substituta formada por dois segmentos fixos, VpreB e lambida5, o que torna esse receptor menos varivel.

No receptor maduro BcR, formado por cadeia leve e pesada, a regio varivel diferente de um linfcito por outro, o que torna esse receptor muito varivel, ainda mais que bem difcil a regio varivel leve, concomitantemente com a regio varivel da pesada, serem iguais. Linfcito B imaturo, por j possuir receptor BcR, j capaz de reconhecer antgeno, o que importante para a seleo de linfcitos. Conjuntamente com o receptor BcR tem duas cadeias de molculas associadas, uma denominada de Igalfa e Igbeta, importantes para a sinalizao do receptor. Interao das culas B com as clulas estromais (interao da clula B desde o inicio com a medula) A medula ssea formada por um tapete de clulas, uma camada de clulas, em que os linfcitos vo estar sobre ela durante o processo de diferenciao. Esse tapete de clulas vo expressar e secreta uma serie de molculas que se ligam nos precursores do linfcito, ajudando na diferenciao. Elas expressam a VCAM-1, um tipo de molcula da superfamlia das imunoglobulinas, que vao se ligar a integrina da clula tronco que a fazem se fixar ao tapete, ao estroma da medula. Essa camada secretao resulta na secrecao do SCF (fator de clula tronco) que se liga ao receptor ckit se ativar a proliferao das clulas pr-B. A clula tronco, num estgio denominado de da clula denominado de pr-B tardio, vai liberar a IL-7 (interleucina 7), que tambm importante para o linfcito T. IL-7 vai se ligar ao receptor de IL-7, fazendo que o linfcito pr-B se prolifere e dure mais tempo. Ch de saio inibe a liberao de IL-7, o que impede a formao de linfcitos. Seleo linfocitria Antgenos no so apenas coisas externas, eles tambm esto presentes no nosso organismo, sendo denominados antgenos endgenos, que so importantes para a seleo dos linfcitos B at o estgio imaturo. rgo linfcito primrio s tem antgeno prprio. Quando ocorre a alta avidez do linfcito a um antgeno prprio ocorre a morte por apoptose, denominada de seleo negativa. Quando ocorre com baixa avidez, h o recebimento de um sinal para manterse vivo, o que se denomina de Seleo positiva. Esse processo todo se chama Seleo primria. Aps isso vo para o bao onde termina de se maturar. No bao h antgeno prprio e antgeno externo, os antgenos prprios quando ligados a ele com baixa avidez, o mantem vivo, com alta avidez, morrem. E se no reconhecer nada, tambm morrem. Quando se ligam a antgeno externo, eles se ativam, eles se mantm vivo. Esse processo como todo se chama de Seleo secundria. O que seleciona a sobrevivncia do linfcito sempre o antgeno prprio, pois nem sempre temos antgeno externo. Doenas auto-imunes ocorrem por falha na seleo negativa ou ento por uma posterior mutao do linfcito. Morte por negligencia: morte por fingir no ver o antgeno prprio. Rearranjo da cadeia leve para edio do receptor

Se ocorrer a edio do receptor, ou seja, troca da cadeia leve do receptor, o linfcito tem a oportunidade de no morrer por ter uma alta afinidade a um antgeno prprio. Essa edio muda a especificidade da cadeia leve. Aps essa edio ele pode continuar a responder com alta afinidade ento pode passar a responder com baixa afinidade. Essa edio s pode ocorrer na cadeia leve, na pesada no ocorre. Esse processo ocorre na medula , durante a seleo primria. Resumo do desenvolvimento da linhagem B Clula tronco torna-se linfcito pro-B, depois linfcito pr-B tardio, depois pr-B que passa expressar o receptor pre-BcR, que possui a cadeia leve substituta. Esse linfcito pr-B prolifera e passar expressar IgM na superfcie, passando a se chamar clula B imatura, quando migra para a medula. Na periferia ele se torna maturo e passa expressar IgM e IgD. Agora ele pode ser ativado podando se tornar um plasmcito ou uma clula de memria. Mas entre essa escolha de plasmcito e clula B de memria existe o estgio de linfoblasto. A clula B de memria s tem em sua superfcie ou IgA ou IgG ou IgE, podendo responder mais rapidamente porque ela j tem a classe especfica. O plasmcito no tem nada na superfcie, ele apenas secreta. At o estgio em quem ela no imatura, a clula denominada independente de antgeno. A partir de quando se torna imatura ela se torna dependente de antgeno, principalmente o prprio. Tudo isso descrito at o momento foi relativo ao linfcito B2, o clssico. Os linfcitos B esto dividios em Classes O B2 (clssico) dividido em linfcitos de zona marginal (esto na margem do folculo) e de zona folicular. As foliculares esto em maior numero. Diferencia-se uma da outra pois o CD23 esta presente em menor numero em de zona marginal e em maior na folicular. E o CD21 expresso em alta quantidade nas de zona marginal e em menor nas de zona folicular. As de zona marginal possuem receptores menos diversos que as de zona folicular. Elas so as que tem o primeiro contato com o antgeno. Vo se semelhar muito com a clula B1. As foliculares so as clulas que proliferam e do origem ao folculo sencundrio aps os linfcitos serem ativados, so as convencionais. O folculo secundrio que vai ter o CG (folculo germinativo), onde ocorre a proliferao desses linfcitos. As clulas B1 so um subgrupo de clulas B que so produzidos no fgado fetal exclusivamente durante o perodo embrionrio. As clulas B1, apesar de no serem produzidas pela medula, elas se proliferam por geraes. Elas se localizam no peritnio e na pleura e secretam uma grande quantidade de IgM. A diferena do IgM secretado por B1 da B2 que as B1 secretam IgM independentemente da presena de antgeno, ou seja, no precisa ser ativada. So eles que compem os anticorpos naturais. As clulas B1, em ratos, se proliferam e formam outras.

A formao de clula B1 muito parecida com a formao da clula B2, a nica diferena que no vo para o bao, ficando localizada pelo peritnio e pela pleura. Outra diferena dela que ela possui o receptor CD5, que participa da resposta inata. As clulas B1 se subdividem em B1a (CD5+), B1b (CD5-). Em humanos, dizem, que para ser B1 tem que ser CD19+ e CD5+ e quando B regulatria mais CD1D+. As B1 se localizam em cavidades corporais e a B2 em rgos linfoides secundrios. *Celulas T s reconhecem protena e clula B reconhecem outros tipos de antgenos. Comparao Clula B1 e Clula B2 B1 Cavidade corporal (peritnio e pleura) Fase Fetal Auto-renovao Muito mais IgM que IgG Responde mais a carboidrato No No sofre No B2 Orgos linfoides secundrio Aps nascimento A partir de clulas primarias da medula Mais IgG que IgM Responde mais a proteina Precisa Alta ocorrencia Sim

Localizao Produo Modo de renovao Isotipos secretados Resposta antigenica Requerimento de clula T helper Permutao somtica Desenvolvimento de memria

Imunodeficiencias causadas por falhas no desenvolvimento dos linfcitos B. A imunodeficincia primria gentica, o individuo j nasce com ela. Se no haver ADA (Adenosina Ademinase) e PNP (purina nucleotdeo fosfatase), enzimas que degradam purinas que no utilizada (quando no so degradadas elas tornam-se toxicas), o precursor linfoide no consegue produzir linfcito B ou linfcito T. A imunodeficincia secundria , por exemplo, quando se adquire HIV. Usam-se camundongos SCID, que tem deficincia nessas enzimas (ADA e PNP) , que simulam a sndrome de OMEN (ausncia de linfcito T e B em humanos), a qual ocorre por falta da enzima RAB, que sintetiza receptores. A ausncia da BTK, enzima importante para o desenvolvimento de linfcito B, gera a Agamaglobulinemia, pois a falta dessa protena no permite a formao de anticorpos, pois no permite a formao de receptores dos linfcitos B. Isso resulta na falha de deficincia do combate a microorganismo extracelulares, j que os intracelulares so combatidos por linfcitos T. 28/03/12 Receptor clonal dos linfcitos B e mecanismos de gerao da diversidade

Possuimos mecanismos genticos que geram a variabilidade do receptor. Relembrando... O linfcito B tem em sua superfcie o receptor BcR, associadoas as cadeias Igalfa e Ig beta, que vao ser importante para a transduo do sinal. As caudas citoplasmtica longa das cadeia acessrias atuam na ativao do linfcito, por, como j dito, permitir a transduo do sinal. Como as estruturas de cadeias leves e pesadas so geradas? Um mecanismo gentico responsvel por formar o receptor, durante a formao do linfcito. Breve pauta em gentica Estudaremos como a regio do DNA, responsvel por formar a estrutura do receptor. Todas as clula possuem o mesmo DNA, porm a expresso diferenciada em cada tecido. Alguns gens vo estar sendo determinados em um determinado momento e em outros no. O linfcito uma clula que vai conseguir recombinar esse DNA, vai conseguir escolher quais gens vo ser importantes para fazer o receptor, e vai acabar excluindo a parte do DNA que no usa. Loci da imunoglobulina humana na linhagem germinativa Locus o local onde est localizado os gens no cromossomo. H locus para gens que vo participar da constituio da cadeia leve e locus para os que vo participar da constituio da cadeia pesada, sendo que o locus da cadeia leve pode ser do tipo kapa ou do tipo lambida. A molcula do anticorpo vai ter ou duas cadeias kapa ou duas cadeias lambda, ou seja, o linfcito vai ter que escolher um dos locus. O locus da cadeia pesada est localizado no cromossomo 14. E o locus da cadeia leve kapa est localizado no cromossomo 2 e da lambda no cromossomo 22. Lembrando que somos diploides, temos dois cromossomos cada um. Dentro do cromossomo 14 temos trs grupos de gens: V, D e J, que vo ser importantes para a formao da cadeia pesada, mais especificamente da regio varivel, ou seja, varia de um linfcito para outro. E a cadeia constante varia entre os isotipos, classes diferentes. O grupo de gens denominado de V recebem esse nome por estarem ligado a variedade, o D por estar ligado a diversidade e o J por estar relacionado juno. Temos um determinado numero de gens V, de D e de J. Todos eles podem ser usados para fazer a regio varivel da cadeia pesada, porm s um gen do V, um gen do D e um do J para fazer a cadeia. Temos aproximadamente 45 gens V, 23 gens D e 6 gens J. Se quisermos saber o numero de variedade possvel da regio varivel da cadeia pesada, temos que multiplicar esses nmeros. Esses gens so escolhidos aletoriamente. As rgios C delta, C gama... seriam referente a poro constante da molcula, sendo que ela que determina o isotipo. Se escolher, por exemplo, Cmi, fabricar-se- IgM. O linfcito B

quando era imaturo ele s tem IgM. Esta a primeira a ser fabricada pois a primeira que aparece na sequencia. O linfcito B maturo passa a expressar o IgD, que correspondente ao segundo da sequencia. E depois que ele vira plasmcito que ele vai expressar os outros isotipos, tendo que retirar o IgM. Em relao a cadeia leve pode se escolher a cadeia kapa ou a cadeia lambda. Uma diferena entre a cadeia leve e a pesada que no tem gens D para se fabricar a regio varivel. Na cadeia kapa se tem 35 gens V e 5 gens J, o que resulta em menor diversidade que na regio varivel da cadeia pesada. A cadeia leve lambda possui 30 gens V e em torno de 7 gens J. Esse processo de se escolher aleatoriamente a regies variveis denominado de Recombinao somtica. *No confundir com Recombinao hipersomtica. No mutao pois no adicionado novos gens. A cadeia Kapa dez vezes mais frequentes que a cadeia lambda. Para se enumerar as possibilidades de se produzir regies variveis. Domnio das imunoglobulinas A regio varivel da cadeia pesada tem, portanto, VDJ e a da leve VJ. A cadeia pesada tem 4 ou trs regies que vo determinar a classe, uma regio transmembrana e uma citoplasmtica. A cadeia leve no fica ancorada. A enzima que faz esse processo de recombinao a enzima recombinase, que atua diretamente no DNA, atuando recortando e juntando o DNA. ela que escolhe quais gens vo ser usados. A recombinase fruto dos gens RAB 1 e RAB2. Animais que no possuem essa enzima, no possui linfcito, apenas pr-linfcitos. Recombinao VDJ A recombinase vai ao DNA e procura a sequencia RSS (Sequencias sinalizadoras de recombinao), que so nucleotdeos de DNA organizados de uma maneira que a reconbisase reconhea. As regies de heptamero e nonameros sero reconhecidas pela recombinase como sequencia sinalizadora. Entre esses heptameros e nonameros tem-se espaadores. A recombinase ela sempre vai unir gens que tem espaadores de 12 pares de bases com gens tem espaadores de 23 pares de bases. Isso se denomina regra do par 12-23. Na cadeia pesada em que se tem 3 grupos de gens, a recombinase vai colocar o par de que tem 12 pares de bases no meio da sequencia e une primeiro esse gen D com o gen V que tem 23 e depois com o gen J, que tambm tem 23. Mas esses gens podem ter cada ora um numero de espaadores, podendo ter ora 12 ora 23.

Ela faz esse processo de duas formas diferentes. Por eliminao e por inverso. Na eliminao ela une as regies de nonameros com regies de nonameros e regies de heptameros com regies de heptares para que ocorra esse processo. Na inverso ela faz o mesmo, por a sequencia estar em uma ordem diferente, h a necessidade de formar uma ala. Estudos mostraram que a enzima combina primeiro V com J e depois V com D. Quando a enzima est escolhendo o genes aleatoriamente e retirando as sequencia sinalizadoras, est ocorrendo outros processos. Quando ela corta os pedaos entre os gens VDJ, ela pode adicionar outros nucleotdeos entre eles, antes de unir novamente. Quando feito esses cortes h a perda de pedaos importantes que so reconstrudos por pela DNA polimerase. Essa DNA polimerase realiza a adio de nucleotdeos P, completando a fita adjacente. Alm desses nucleotdeos P, existe a enzima TdT (transferase deoxitidil terminal), que coloca N nucleotdeos, que tem numero indefinido e so aleatrios entre o gens , aumentando a diversidade, tornando mais difcil de fazer anticorpos iguais. O primeiro mecanismo de gerao de diversidade a recombinao somtica e a segunda a adio de nucleotdeos N e P, entre os gens que so unidos pela RAG. Transcriao dos genes da imunoglobulina Pega-se o DNA na linhagem germinativa, rearranja-se (recombinao) o DNA, transcreve-se o RNA primrio, sofre processo de splicing, retirando-se introns, adiciona-se cauda poliA para evitar a degradao e o traduz em protena Co-expresso de IgM e IgD Os linfcitos jogaram fora, durante a maturao na medula, as outras regies VDJ, mas no jogaram da regio constante, o que permite a troca de classe. O linfcito realiza o splicing alternativo, passando expressar outros tipos de classes. A clula apenas exclui a parte varivel (V,D,J), porm no jogou fora a os gens da parte constante, o que possibilita a mudana da classe do receptor. O linfcito pega a parte varivel e combina com uma parte constante mi e uma delta, formando IgM e IgD. No plasmcito a IgM e a IgD vo ser deletadas e vo poder escolher entre IgA, IgE e IgG. Mas no comeo da expresso do plasmcito ele ainda secreta um pouco de IgM. Temos 4 tipos de IgG em humanos e 2 tipos de IgA. Imunoglobulimas sofrem hipermutao somticas nas CDRs (exclusivo de linfcito B) A hipermutao somtica o terceiro mecanismo de gerao de variabilidade e exclusivo do linfcito B. Hipermutao o aumento de mutao nas regies CDR (regies hipervariaveis), que ficam dentro das regies variveis.

Isso faz com que a imunoglobulinas tenham mais afinidade pelos antgenos, mas por vezes pode ocorrer a perda de afinidade. A maturao de afinidade uma consequncia da hipermutao somtica. Esse mecanismo ocorre depois que o linfcito reconheceu o antgeno, no linfcito secundrio, os outros dois ocorrem quando est se fazendo a imunoglobulina ainda. A hipermutao somtica induzida pelo linfcito T CD4 Helper. Outro mecanismo de gerao de diversidade a escolha entre as cadeias leve kapa ou lambda. 04/04/2012 Ativao de Linfcitos B Caracteristicas gerais da resposta imune humoral Diz respeito ao plasma e ao soro. A ativao do linfcito B vai acontecer com a exposio ao antgeno, por meio do receptor BcR, que podem ser IgM e IgD. Na maioria dos casos, quando o antgeno for proteico, esses linfcitos precisam da ajudam do linfcito CD4 T Helper para a ativao. Isto s acontece para epitopo proteico. Aps a ativao ocorre a expanso clonal e posteriormente ocorre a diferenciao em plasmocito ou linfcito B de memria. Tanto o plasmcito, quanto a clula de memria B, vai passar pela sute de classe (mudana de classe) e maturao de afinidade, durante a sua diferenciao Os plasmocitos liberam ou IgA, IgE ou IgG. A medida que ele troca de classe ele para de liberar IgM. A maturao de afinidade ocorre devido a hipermutao somtica dentro da regio varivel. Todos os eventos de diferenciao ocorre praticamente concomitantes. O complexo co-receptor da clula B Alm do receptor BcR, tem-se as cadeias de acessrias, Igalfa e Igbeta, que vo ser importantes na transduo de sinais. Alm do receptor principal tem-se o co-receptor, que auxilia no reconhecimento do antgeno, que composto de TAPA-1 (CD81), CR2 (CD21)(receptor de complemento tipo 2) e CD19 (caracteriza a linhagem B). O CR2 se associa a um componente do complemento, e esse componente do complemento est associado a um antgeno, e o CR2 leva o receptor BcR a reconhecer o antgeno. Alm disso tanto o CD19, como o Igalfa e Igbeta, possuem cadeias citoplasmticas longas importantes para o processo de sinalizao celular. A CD19 possui resduos de kinases que vao ser fosforilados. Ativao do receptor BCR Os linfcitos possuem diferentes receptores com o mesmo idiotipo. Quando o antgeno entra em contato com receptores diferentes. Esse ligamento do antgeno a dois receptores se denomina Crosslinked, ligao cruzada. Os receptores BCR possuem resduos ITAM, ricos em tirosina, que so fosforilados por protenas de membrana, que so protenas cinases Fyn, Blk e Lck. Uma vez fosforilados, esses resduos

ITAM (motivos ativadores de imunoreceptores de tirosinas) criam stios para protenas adaptadoras , como a protena Syk e Src. Desse modo comea-se a transduzir sinais pela clula. Transduo de sinais induzida pelo BCR A Src fosforila a fosfolipase gama C que quebra PIP3 em PIP2 e DAG. DAG fosforila PKC que fosforila CREB, uma fator de transcrio, que inicia a transcrio genica indo para o ncleo. IP3 , proveniente do PIP2, atua no reticulo endoplasmtico, liberando clcio pelos canais de clcio, que ativa calmodulina, que ativa a calcineurina, que desfosforila o NF-AT, que tambm um fator de transcrio, vai para o nucleo. A protena Syk fosforila o IkapaB, qe se solta do NFkapaB, o qual ativado e vai para o ncleo. Da mesma forma a protena RAS ativam a MAPkinase, que vai para o ncleo ativando fatores de transcrio genica. Este processo produz citocinas, como o IL-2, importante para a ativao de linfcito B e T, que induz a proliferao, bem como outras molculas. Em linhas gerais: Aps o reconhecimento do gene, dois receptores se aproximam e iniciam o processo de fosforilao dos ITAM, ativando uma serie de vias intercelulares que leva a produo de varias citocinas, como a IL-2. Tipos de antgenos Numa resposta a antgeno proteico, denominada timo dependente, h a necessidade de dois sinais para ocorrer a ativao. Sendo que o primeiro o antgeno que leva a aproximao do receptor. Outro o estimulo pela molcula CD40/CD40L presente na clula T helper. Esse processo denominado sinal co-estimulatorio, que estimula o a clula B, ao mesmo tempo que estimulada tambm por ela, pelo receptor principal BcR. Numa resposta Timo independentes, que no precisa do T-Helper. O polmero (carboidratos, lipdeos, cidos nucleicos) possui epitopos repetitivos que ativam todas as pores variveis de todos receptores, gerando o primeiro e segundo sinal da clula B. Caracteristicas dos antgenos TD e TI O TD, de protena, produz uma troca de isotipo, passando a produzir IgA, IgE ou IgG; ocorre maturao de afinidade e a produo de linfcitos B de memria; dependente de T helper. Na resposta TI, tambm ocorre a ativao da clula, mas a troca de classe ocorre muito pouco. Quando acontece, ocorre a produo principalmente de IgG e as vezes s IgM. Em relao a maturao de afinidade e a produo de linfcito de memria, eles ocorrem muito pouco, pois no possuem estimulo do T helper. Interaes entre clulas B e T auxiliares Para que ocorra a interao entre eles, deve-se ocorrer o estimulo por quimiocinas. A clula apresentadora de antgeno, por meio do MHC class I, apresenta o antgeno ao CD4, ativando a proliferao e a diferenciao e se tornando um Linfcito T efetor. Este vai migrar, influenciado por quimicinas para perto do folculo, onde est o linfcito B. Essa ativao foi primada.

O Linfcito B ativado pelo antgeno, e ocorre a proliferao e inicia a ativao e a migrao para a borda do folculo tambm. Na borda da folculo, o linfcito T e B interagem entre si. Ativao da resposta humoral para antgenos T dependentes Ambos se encontram. O linfcito B encontrou o antgeno, internalizou-o em uma vescula de endocitose, colocou os antgenos na superfcie por MHC de Classe 2 e apresenta ao Linfcito CD4 T, e este passa a receber seu segundo sinal por meio da CD40L(T) CD40(B). Ao mesmo tempo o linfcito CD4 estimula o linfcito B por meio do linfcito CD28 que se liga ao B7 que est localizada no B, ativando o segundo sinal no linfcito B. O linfcito B totalmente ativado realiza expanso clonal e diferenciao em plasmcito e linfcito B de memria. O linfcito T tambm ajuda a induzir a hipermutao somtica no linfcito B por citocinas. Produo de clulas plasmticas e clulas B de memria Aps a exposio a citocinas, ou a clula B morre, por perda de afinidade, ou seja, seleo negativa, ou ento sobrevive, proliferando-se e diferenciando-se em plasmocito ou em clula de memoria. Mudana de isotipo A mudana de isotipo ocorre aps as clulas T helper liberar citocinas e estimular com CD40L. Dependendo do tipo de citocina liberada pelo linfcito T, o linfcito B muda de classe para um tipo de imunoglobulina. Se o T liberar IFN-gama, induz a troca para IgG, IL-4 para IgE, TGF-beta e IL-5 para IgA. Mecanismos moleculares da mudana de isotipo A regio varivel no possvel trocar, pois o linfcito jogou os genes fora. Os genes da poro constante ainda esto preservados at o momento da diferenciao fazendo combinao entre a regio varivel e as diferentes regies constantes possveis, dependendo do sinal da citocina que receber, produzindo o IgE, ou IgG, ou IgM. Quando ele tornar um linfcito B de memria ou plasmcito ele exclui os genes para outras pores constantes. 11/04/12 Mecanismos da resposta imune humoral e hipersensibilidades Como os anticorpos e as clulas de memria contribuem para a resposta humoral Proteinas do complemento e anticorpos participam dessa resposta humoral. A resposta pode ser do tipo primaria, secundaria, dependendo da vez da exposio ao antgeno. Na vacinao ou na primeira exposio dos antigenos se induz a resposta primaria. Os linfcitos naive so estimulados e induz a diferenciao em linfcitos B de memria e de plasmcitos. Os plasmcitos produzem primariamente IgM, que so anticorpos fase aguda. O

pico dessa produo ocorre em 10 dias, aproximadamente. Mas tambm comea-se a produzir a outra classe mais especfica. Aps 10 dias, ou melhor, aps a respostas, o nmero de plasmcitos diminui. Esse numero de anticorpos produzidos numa primeira resposta menor. Numa segunda exposio, as clulas de memria B so estimuladas e proliferam-se e algumas se diferenciam em plasmcito mais rapidamente, e produzem anticorpos j especficos que atingem o pico em no mximo 5 dias, ou seja, no produzem IgM como na resposta primaria. Alguns plasmocitos vo recircular na medula, mas a maioria morre aps alguns dias. Nessa segunda exposio, o individuo as vezes nem chega a ter a sintomatologia da doena. Quando chega um paciente com uma doena podendo ser rubola ou dengue, pede-se analise de Igs. Se ele tiver IgM para rubola e tiver IgG para dengue, certo que ele tenha rubola, pois ele foi exposto recentemente e para dengue o IgG porque ele j teve a doena alguma vez. Consequncias da ativao da clula B As clulas entram em mitose, aumentam a expresso de coestimuladores e receptores de citocinas (importante para a interao com o linfcito T), e secreta baixos nveis de IgM, antes de trocar de classe. Isotipos de imunoglobulina produzidos pela clula B J foi visto na aula passada. Transporte de IgA atravs do epitlio A produo de IgA ocorre da mesma forque as as outra imunoglobulinas. S que a IgA vai ser liberada na forma monomrica, vai dimerizar por meio da cadeia denominada de J e nessa forma de dmero que ela vai ser transportada. No epitlio da mucosa vai ter o receptor chamado de polyG, que vai se associar a IgA e vai promover a internalizao dela por meio de uma vescula de endocitose. Essa vescula de endocitose vai se fundir com a membrana j na parte do lmen do rgo. Durante isso, porm, parte do receptor vai ser clivado e liberado dentro do lmen do rgo da mucosa enquanto que a IgA vai ficar na mucosa neutralizando a entrada do microorganismo na clula. A IgA se solta do receptor polyG no lmen. Distribuio das Imunoglobulinas A IgD est presente apenas na clula B madura. A IgG a que est mais abundante no nosso plasma, com exceo do crebro, e ela capaz de atravessar a placenta. A IgM tambm est circulante, mas no capaz de atravessar a placenta devido ao seu tamanho. A IgA est localizada nas mucosas, na glndula lacrimal, no trato respiratrio, no trato geniturinrio e no trato gstrico e na glndula mamria. A IgE est localizada por toda via cutnea, por todo epitlio. Funes dos anticorpos Neutralizao -> impedir a ao de micrbios e toxinas

Opsonizao-> facilitao para fagocitose, por meio de receptor Fc, o qual est presente no fagcito. Ativao do sistema complemento -> por meio da via clssica; forma o complexo de ataque as membranas, lisar a membrana, opsonizao, inflamao. A diferena entre a opsonizao do anticorpo e do complemento a diferena entre os receptores do fagcito. O fagcito ter receptor pra complemento e para poro Fc do anticorpo. ADCC (Citoxidade celular dependente de anticorpo)-> Celulas NK mata clulas infectadas com vrus ou ento tumoral. O anticorpo atua sinalizando para a clula NK para que ela libere perforina e granzima para matar a clula marcada. O outro tipo mediado por eosinfilo.

Neutralizao Pode acontecer de dois momentos na clula. Para o microrganismo entrar na clula ele tem que ser reconhecido por algum receptor. Se o anticorpo conseguir neutralizar o microorganismo antes de entrar na clula, ele no entra na clula. Isso ocorre quando o individuo vacinado. A segunda situao quando a infeco j est ocorrendo e j h celulas infectadas e os microorganismo j esto espalhando de uma clula pra outra, e nesse momento de espalhamento de infeco o anticorpo atua neutralizando-o. A terceira situao a neutralizao da toxina, impedindo-o de atuar na clula. Opsonizao O microoganismo se liga ao anticorpo, o anticorpo reconhecido pela clula via poro Fc do anticorpo, e o anticorpo mais o microogranismos so fagocitados e destrudos por meio de enzimas e NO. Tipos de receptores Fc Existem vrios tipos de receptor Fc, sendo que o de maior afinidade o da IgE. Desse modo a mnima quantidade de alergeno j gera uma grande resposta, desencadeando a alergia. Citotoxidade celular dependente de anticorpos (ADCC) A citotoxidade celular dependente de anticorpo pode ser mediada pela clula NK como pelos eosinfilos. Como j dito, o anticorpo liga no microorganismo, e a poro Fc do anticorpo reconhecido pela clula NK, desencadeando a morte desse microorganismo. O segundo tipo, mediado por eosinfilo, ocorre quando o individuo est infectado por helminto e a IgE se associa a algum antgeno no helminto. O receptor Fc psilon se liga a IgE, presente sem mastcitos, basfilos e eosinfilos. No eosinfilo, quando ocorre a ligao,

ocorre a degranulao e a liberao de protenas bsicas que destroem o tegumento do helminto. O alergeno ativa os receptores de IgE que j esto acoplados em clulas. Ativao do complemento Possuimos trs vias de ativao do complemento, sendo que apenas a via clssica dependente de anticorpo, ou seja, faz parte da resposta adaptativa pra ativao da cascata de clivagem de protenas. A via alternativa se ativa diretamente a partir de C3b, que o componente principal, estando presente em todas as vias A via das lectinas comea com a ligao de uma protena denominada lectina ligadora de manose, que se liga a manoses de microorganismos. A ativao de qualquer dessas vias resulta na formao do complexo de ataque a membrana (MAC). As protenas vo se ligando na clula do patgeno, j que no organismo humano essa ligao impedida pelo cido silico. O MAC forma um poro na membrana do microorganismo por via osmtica, pois ele fura a membrana do organismo. Funes do complemento A- Opsonizao e Fagocitose O complemento se liga ao microorganismo, e o complemento reconhecido pelo fagcito, resultando na fagocitose no microorganismo. B- Citolise mediada por complemento C- Estimulao da inflamao pelo complemento A protelise de C3, C4 e C5 libera C3a, C4a e C5a, que vo ativar e recrutar clulas leucocitrias, desencadeando a inflamao devido a degranulao desses leuccitos. D- Retirada do complexo antgeno-anticorpo O complemento se liga no anticorpo dando um sinal para a fagocitose desse complexo antgeno-anticorpo. Evaso da resposta humoral por microorganismos Variao de genes (antgenos) um dos mecanismos de evaso. Outra maneira de escapar sequestrando o acido sialico. Desse modo o sistema complemento no pode se ligar a clula, pois o cido silico funciona como proteo componentes do complemento. Outro a resistncia a fagocitose. Exemplo o peumococos capsulado, pois a capsula um fator de resistncia a fagocitose. Apesar do sistema imunolgico conseguir impedir, por meio do linfcito B, torna a resposta mais difcil.

Hipersensibilidade do tipo I As hipersensibilidades so respostas inflamatrias. As respostas inflamatrias ao mesmo tempo que ela tenta ajudar pode promover uma agresso tecidual. Para reparar as vezes temse que destruir para depois poder reconstruir. Tem-se caracterizados 4 tipos de hipersensibilidades. Sendo 3 intermediadas por anticorpos e outro por linfcito tipo T. A do tipo I, a nica que pode ser chamada de alergia, mediada por IgE. Na hipersensibilidade os antgenos so denominados de alrgenos, pois so partculas inertes, mas causam alergias. H pessoas que tem resposta a mudana de temperatura. Pessoas, por exemplo, quando vao para lugar com diferente temperatura desencadeiam uma alergia. Para desencadear a alergia, tem-se que ter o contanto anterior com o alrgeno. Nos primeiros contatos o organismo produz IgM, por isso no se causa alergia no primeiro contato com o alrgeno, pois apenas IgE capaz de causar o processo alrgico. O processo de desencadeia alergia ocorre da seguinte maneira: o alrgeno entra em contato com o linfcito B, sendo que na maioria das vezes o alrgeno uma partcula proteica, e o linfcito B precisa, portanto, do Linfcito T para se ativar. O linfcito T libera IL-4 induzindo a troca de classe para IgE. O linfcito B se diferencia em plasmcito e libera IgE, que se liga ao mastcito (eosinfilo, basfilo), presentes na mucosa, no epitlio, pois os receptores de IgE tem alta afinidade por ela. At esse momento ocorreu a sensibilizao. Quando ocorrer a exposio novamente ao alrgeno, este se liga a IgE dos mastcitos, desencadeando a degranulao e a liberao de histamina e citocinas, como IL-1, TNF que vo agir no endotlio vascular promovendo a diapedese, o recrutamento de celulas, vasodilatao -> calor, rubor, dor e endema. Anafilaxia sistmica: Drogas, venenos, amendoins. Aplica-se adrenalina, pois um vasodilatador. Pode levar o individuo a morte. Sintomas: dificuldade de falar, endema de glote (ocluso traqueal), dificuldade respiratria, ofegao, colapso da circulao que leva a falncia dos rgos e choque anafiltico. Urticaria: Pelo de animal, de mordida de insetos. Alergia cutnea. Rinite alrgica: Provocada por partculas inalatrias. Causa endema de mucosa nasal e irritao da mucosa nasal. Asma: alimentos, leite, pelo de gato, polens. Causa constrio bronquica, aumento na produo de muco e inflamao nas vias areas. Alergia a alimentos: Ovo, leite, amendoin, castanha, noses, frutos do mar. Causa vomito, diarreia, espirro, urticaria e raramente anafilaxia. Hipersensibilidade tipo II Relacionada ao Tipo sanguneo, intermediada po IgG. Destruio de celulas via sistema complemento ou ADCC. Fator AB0 e Rh.

As hemcias podem apresentar s antgenos A, s antgeno B,ou antgenos A e B ou nenhum. Os indivduos no possuem anticorpos anti a e b inatamente, eles produzem esse anticorpos aps a exposio. Quando a me Rh negativa gera um feto Rh positivo, no parto, a mae estimulada a produzir anticorpos Rh. Aplica-se na me o soro Rhogam que impede a formao de clulas de memria. Caso a me venha a ter outro filho Rh positivo e ela no for imunizada, o bebe nascer com ictercia, resultando o quadro de eritroblastose fetal. Hipersensibilidade tipo III provocado pela presena de complexos antgenos-anticorpos, que pode causar inflamao e obstruo no interior do vaso. No interior do vaso causa vasculite, no glomrulo, glomero nefrite. Algumas doenas alto imune pode resultar em hipersensibilidade do tipo III, como Lupus(anticorpos de DNA) e artrite reumatoide (presena de anticorpos contra antgenos presentes nas articulaes). A deficincia de complemento pode ocasionar a hipersensibilidade do tipo III.