Perquirre- Revista Eletrnica da Pesquisa ISSN 1806-6399 Ncleo Interdisciplinar de Pesquisa e Extenso (NIPE) do Centro Universitrio de Patos de Minas

as (UNIPAM)

POLUIO DO RIO SANTA CATARINA NO MUNICPIO DE VAZANTE (MG)

DETECTADA POR MEIO DO TESTE DO MICRONCLEO EM PEIXES

Gilberto dos Reis Ferreira* Jlio Csar Nepomuceno**

RESUMO
Nos ltimos anos, diversos estudos foram realizados com o objetivo de avaliar a genotoxicidade de poluentes do meio ambiente. O teste do microncleo possibilita a deteco de efeitos genotxicos provocados por vrios agentes qumicos e fsicos, podendo ser utilizado para avaliao das condies ambientais. O presente trabalho teve como objetivo avaliar os possveis efeitos genotxicos da poluio aqutica, em peixes do Rio Santa Catarina, regio de Vazante MG, por meio do teste do microncleo. O peixe utilizado neste estudo foi a Bicuda (Boulengerella spp), por ser comum na regio, de fcil captura, alm de ser consumido pela populao ribeirinha. Os peixes foram capturados e as amostras de sangue foram obtidas por meio de puno branquial mediante o uso de seringa e agulha. O nmero de eritrcitos micronucleados (MN) foi determinado a partir de 1.000 eritrcitos contados por lmina, perfazendo um total de 2.000 eritrcitos por peixe. Os resultados demonstram que os peixes avaliados jusante da cidade de Vazante encontramse, possivelmente, expostos a substncias ou condies ambientais de potencial genotxico, devido ao aumento na freqncia de microncleos, encontrados nestes, quando comparados ao controle negativo.

PALAVRAS-CHAVE: Rio Santa Catarina. Vazante MG. Genotoxicidade. Microncleos.

Boulengerella spp. ABSTRACT

In recent years, diverse studies have been carried out to evaluate environment genotoxicity pollutants. The micronucleus test (MNT) is used in these researches and can estimate the ambient genotoxicity provoked by chemical and physical agents. The present work aims at
*

Acadmico do Curso de Cincias Biolgicas do Centro Universitrio de Patos de Minas MG. E-mail: gilbertodosreisferreira@gmail.com ** Professor Adjunto do Instituto de Gentica e Bioqumica da Universidade Federal de Uberlndia MG/ Professor Titular do Centro Universitrio de Patos de Minas MG. E-mail: nepomuceno@ufu.br

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evaluating the possible aquatic genotoxicity effect by means of MNT in the fishes of Santa Catarina River, localized in Vazante, MG. The fish species used in this study was the Bicuda (Boulengerella spp), because it is commonly found in that region, it is easily captured and has been consumed by the marginal population. The number of micronuclei structures (MN) was determined from 1.000 Eritrocites per sample, in a total of 2.000 Eritrocites per fish. The results found in this work show that the fishes localized in that region have a high micronuclei frequency when compared with the negative control. This indicates the presence of environmental genotoxicity conditions in that river. KEY-WORDS: Rio Santa Catarina. Vazante MG. Genotoxicity. Micronuclei. Boulengerella Spp.

1 INTRODUO
A poluio ambiental provocada pelas aes humanas associadas urbanizao, agricultura e indstria, sem observncia das normas ambientais. Em conseqncia dessas aes, tm ocorrido mudanas climticas, diminuio da camada de oznio, eutrofizao das guas, extino de seres vivos de determinadas reas, alm de colocar em risco a qualidade de vida de todos os seres vivos, causando, tambm, a diminuio da biodiversidade e a variabilidade das espcies naturais (AMARAL, 2001). Danos ao DNA so considerados os principais eventos causados por agentes genotxicos, que levam s mudanas hereditrias e ao desenvolvimento de doenas. Estes danos podem induzir morte celular ou a eventos mutacionais e, tambm, iniciar uma transformao maligna (MOUSTACCHI, 2000). O lanamento de efluentes industriais em curso hdrico impe significativo risco aos ecossistemas, devido principalmente sua composio qumica, contendo, em alguns casos, toxinas, que pode ser genotxicas (VARGAS et al., 2001). Nos ltimos anos, muitos ensaios foram realizados com o objetivo de avaliar a genotoxicidade de poluentes lanados no ambiente, como, estudos ecolgicos, toxicolgicos e qumicos, avaliando a poluio por metais pesados em Le an River (Chima) (MENGCHANG et al., 1998); avaliao de genotoxicidade em ambientes aquticos sob a influncia de metais pesados e contaminantes orgnicos (VARGAS et al., 2001); monitoramento de metais pesados no meio ambiente em peixe do lago Nasser (Egito) (RASHED, 2001).

Perquirre. Edio 5, Ano 5, jun 2008.

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Os peixes receberam uma ateno especial, como um possvel monitor de ambientes poludos, objetivando assim a deteco da atividade dos agentes genotxico no ambiente aqutico. O MNT em peixes de curta durao e tem se mostrado efetivo no monitoramento de ambientes aquticos poludos (NEPOMUCENO et al., 1997). usado para monitoramento da qualidade de gua doce (GRISOLIA; STARLING, 2001). O peixe um organismo adequado para monitoramento de genotoxinas aquticas, por ser capaz de metabolizar xenobiticos e poluentes acumulados (DE FLORA et al., 1993). O Rio Santa Catarina nasce no Estado de Minas Gerais e percorre grande parte do noroeste do estado. Vrios outros rios desguam no Santa Catarina, entre eles, o Ribeiro Escurinho e o Crrego Rico. O rio percorre um trecho de aproximadamente 80 km at as imediaes da cidade de Vazante. Estas guas recebem diariamente rejeitos de laticnio, indstria de minerao, agrotxicos provenientes das lavouras prximas, resduos de hospitais, de postos de gasolina, de lava-jatos, de mecnicas e de esgotos domsticos, o que pe em risco a vida e a biodiversidade das guas do rio. Em funo desse crescente aumento de resduos qumicos nos mananciais de gua, por resduos urbanos (esgotos) e industriais, procurou-se, neste estudo, avaliar a possvel ao genotxica deste ambiente aqutico, por meio do teste de microncleos, em peixes Bicuda (Boulengerella spp) do Rio Santa Catarina, nas proximidades da cidade de Vazante MG.

2 MATERIAIS E MTODOS

2.1 COLETAS
Os peixes foram coletados em locais com nveis aparentes de poluio mais crticos, no Rio Santa Catarina. No Rio Santa Catarina, mais precisamente no trecho que margeia/banha a cidade de Vazante-MG, foram feitas quatro coletas: Ponto 1 (controle negativo) antes da entrada da cidade de Vazante 18O0001.50'S e 46O5332.03W; Ponto 2 (17O5955.74S e 46O5317.94W), logo abaixo do primeiro ponto de lanamento de efluentes lquidos no rio; Ponto 3 (17O5958.57S e 46O53.88W), entre o primeiro ponto e o ltimo ponto de lanamento de efluentes; Ponto 4 (17O5816.83S e 46O4845.23W), abaixo da represa de tratamento dos rejeitos de uma empresa de minerao.

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Perquirre- Revista Eletrnica da Pesquisa ISSN 1806-6399 Ncleo Interdisciplinar de Pesquisa e Extenso (NIPE) do Centro Universitrio de Patos de Minas (UNIPAM) 2.2 ESPCIMES E PREPARAO DE LMINAS
O peixe utilizado neste estudo foi o Bicuda (Boulengerella spp), por ser um peixe comum na regio e de fcil captura. Foram capturados 10 peixes por ponto/local e, para cada animal, foi feita uma coleta de sangue, seguindo-se a sua soltura. Logo aps, foram preparadas e codificadas duas lminas por peixe em cada ponto de coleta. O sangue foi obtido conforme metodologia descrita por Nepomuceno et al. (1997). Esta consiste em fazer uma puno na regio branquial, rica em vasos sangneos. O toque com biseu da agulha nas lminas branquiais provoca um pequeno sangramento, onde se obtm uma gota de sangue, necessria para a confeco do esfregao sanguneo. Foi utilizado anticoagulante, pois as lminas foram observadas no laboratrio de Citogentica e Mutagnese do Centro Universitrio de Patos de Minas. O MNT consiste na contagem de clulas com um ou vrios ncleos citoplasmticos (microncleos) de tamanho reduzido associado ao ncleo celular. Os microncleos so pequenas massas intracitoplasmticas de cromatina, resultante da quebra cromossomal ou aneuploidia durante a diviso celular (GRISOLIA; STARLING, 2001), fragmentos acntricos (ou cromossomo inteiro), formados no final da diviso celular, so encontrados ao redor da cromatina, por no terem sido integrados aos ncleos das clulas filhas. Eles fornecem evidncia de quebra da cromatina ou disfuno do fuso acromtico (MERSCH; BEAUVAIS, 1997). O teste de microncleos em peixes semelhante ao teste para mamferos (SCHMID, 1995), com algumas modificaes: 1 - Para cada animal, foram preparadas duas lminas por esfregao de sangue perifrico, deixadas overnight e, aps, fixadas em metanol absoluto, por 5 minutos. 2 Os esfregaos foram corados com Giemsa e tampo fosfato de sdium (pH 6,8) na proporo 1:20, por 10 minutos. 3 A anlise foi realizada em microscopia ptica de luz, usando objetiva de imerso, contando-se 1000 clulas por lmina e totalizando 2000 clulas por animal.

2.3 ANLISE ESTATSTICA

As freqncias de microncleos encontradas nos peixes coletados nos pontos 2, 3 e 4 foram comparadas com as do ponto 1 (controle) pelo Teste U de Mann-Whitney , teste no paramtrico, com nveis de significncia de = 0,05.

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3 RESULTADOS E DISCUSSO

Neste estudo, foram analisadas as incidncias de microncleos nos peixes do Rio Santa Catarina. As freqncias de microncleos (MN) avaliadas nos peixes coletados nos pontos 2, 3 e 4 foram estatisticamente maiores, quando comparadas com o controle negativo (Tabela 1). Tabela-1 Freqncia de microncleos (MN) %o em eritrcitos perifricos de Boulengerella sp, coletados no Rio Santa Catarina, a montante e a jusante da cidade de Vazante MG, e de local de referncia. N de Local Ponto 1 (Controle) Ponto 2 Ponto 3 Ponto 4 indivduos 10 10 10 10 Total de clulas 40.000 40.000 40.000 40.000 19 81* 103* 146* Total de microncleos X (%o) SD 0,475 0,737 2,025 1,912 2,575 4,295 3,650 3,864

* Diferena estatisticamente significativa quando comparada com o controle negativo de acordo com o Teste U (Mann-Whitney), com nvel de significncia = 0,05.

Neste trabalho, no foi feita a distino entre o sexo dos animais para a contagem da freqncia de microncleos (MN). Os eritrcitos de Boulengerella sp analisados so, em sua maioria, de forma circular, com ncleos ovalados e centralizados no citoplasma, o que tornou mais fcil a contagem de MN. A identificao de substncias potencialmente genotxicas no foi objeto deste estudo, mas, sabendo das condies do rio, podemos apontar as provveis causas da contaminao dos peixes. O ndice de qualidade da gua (IQA) reflete a contaminao por esgotos e outros materiais orgnicos, por nutrientes e por slidos. No Rio Santa Catarina, constatamos a ausncia da vegetao ciliar em vrios pontos, a presena de lixo de maneira esparsa no leito do rio, espumas amarelas e brancas no naturais e existncia de microorganismos indicadores de poluio fecal (bactrias do grupo coliforme).

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160

140

Freqncia de microncleos (MN)

120

100

Ponto 1 (controle) Ponto 2

80

Ponto 3 Ponto 4

60

40

20

Pontos de coletas
Figura 1 Freqncia de MN em eritrcitos perifricos de Boulengerella sp, observada no controle e demais pontos de coleta.

Uma outra fonte de contaminao do rio que pode ter um efeito genotxico sobre os peixes seria a contaminao por agrotxicos em funo de seu uso indiscriminado. Devido aos resultados verificados neste estudo, podemos considerar que a concentrao de agentes clastognicos e aneugnicos, presentes na gua do rio Santa Catarina, alta, induzindo freqncias de microncleos estatisticamente significativas, quando comparadas com as freqncias obtidas no grupo controle. (Figura 1). Assim como HOSE et al. (1987) observaram, em sua pesquisa com peixes no Sul da Califrnia, um aumento significativo na freqncia de MN dos peixes coletados em ambiente contaminado, comparado com peixes coletados em locais de referncia, tambm, obtivemos resultados positivos com peixes vivendo em guas poludas do rio Santa Catarina. Os resultados obtidos neste estudo nos permitem concluir que o teste do microncleo, utilizando o peixe (Boulengerella sp) um mtodo rpido e prtico para o monitoramento da poluio aqutica. A poluio aqutica por esgotos urbanos e industriais, no rio Santa Catarina, regio de Vazante, , provavelmente, a responsvel por causar efeitos genotxicos em Boulengerella sp, conforme foi verificado pela alta freqncia de MN quando comparados ao do grupo controle negativo.

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