UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE MEDICINA INSTITUTO DE IMNUNOLOGIA CLINICA

ANTIGENICIDAD Y PRESENTACION DE ANTIGENOS.

I.- L o s A n t g e n o s ( A g s ) . Jos Angel Cova, MD. e-mail: jacova@ula.ve. CURSO: Inmunologa Bsica. Maestria en Inmunologa.

Los antgenos (Ags) son sustancias capaces de inducir una respuesta inmunolgica. Para ello estos compuestos deben poseer propiedades definidas as como la capacidad de combinarse con un receptor de unin de antgeno presente en la clula T (TCR) o B (BCR). Tradicionalmente se establecen los trminos de inmunogenicidad y antigenicidad, aunque en la prctica se usan por igual. La inmunogenicidad es la capacidad de inducir una respuesta inmunolgica (RI) mediada por clulas o por anticuerpos, en tanto que la antigenicidad es la capacidad de combinarse especificamente con el producto final de esa respuesta (Abs y receptores celulares). Los haptenos son sustancias capaces de unirse a los elementos de la RI pero carecen de inmunogencidad. Dentro de todas las molculas provenientes de los agentes infecciosos las protenas y los polisacaridos ocupan el primer y segundo lugar, respectivamente, como inmungenos. Los lpidos y cidos nucleicos generalmente no sirven como inmungenos, a menos que ellos formen complejos con protenas y polisacridos. Cuando se requiere inducir una respuesta mediada por clulas las protenas, algunos lpidos y los glicolpidos son los mejores inmungenos. La inmunogenicidad depende de una serie de condiciones inherentes al antgeno y al sstema biolgico partcular que interacciona con este. Estas caractersticas son: a) Extraa para el sistema inmunolgico. b) Tamao molecular adecuado; cercano a 100 KDa. Esta regla no es total ya que se han encontrado unos pocos inmungenos de menos de 1000 Da. c) Composicin qumica basada en diferentes a.a as como complejidad estructural en los niveles de organizacin molecular, esto es, estructura primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria. d) Ser suceptible de procesamiento y presentacin antignica. Los antgenos deben ser previamente fagocitados (Las macromoleculas grandes e insolubles son ms rapidamente fagocitadas que las pequeas y solubles), procesados (Las enzimas degradativas presentes en la CPA procesan principalmente L-aminocidos y muy pocos D-aminocidos) y presentados (por MHC I MHC II). Los Ags deben poseer la capacidad de ser sometidos a estos tratamientos previos para poder inducir una RI. Estas son las premisas que debe tener un antgeno (Ag) para inducir inmunogenicidad en el sistema, pero se requieren de otros factores para despertar una RI, estos son inherentes al sistema que debe manejar una sustancia y se agrupan en: a) El genotipo del animal receptor: Esto influye en la intensidad de la RI. Cuando se inmunizan ratones singnicos se observa que, a pesar de tener un perfil gentico homocigoto, la RI tiene diferentes grados de intensidad medidos en produccin de anticuerpos (Abs). La busqueda de

los genes que controlan la RI (Ir) ha mostrado que los genes de MHC y de los BCR/TCR para las clulas B y T son los principales responsables de este control. b) La dosis y ruta de Administracin del Ag debe ser considerada al momento de inducir un tipo particular de RI. Dosis bajas o muy elevadas de un Ag pueden inducir estados de no respuesta en los linfocitos, con fracaso en generar una RI (tolerancia). La ruta de administracin (intravenosa, intradrmica, subcutneo, intramuscular e intraperitoneal) seleccionada lleva al Ag a compartimientos particulares (bazo para el caso de los IV y nodos linfticos regionales para los drmicos) para generar un tipo de RI. El uso de refuerzos para incrementar la proliferacin clonal de clulas T y B Ag-especficas es recomendado. El esquema ms usado es un inoculo inicial con dos refuerzos a intervalos de 3 semanas cada uno. La evaluacin de la RI en trminos de produccin de Abs o citotoxicidad celular es recomendado en cada fase de la inmunizacin. c) El uso de adyuvantes incrementa la inmunogenicidad de la molcula por varios mecanismos, entre ellos: persistencia prolongada de Ag, aumento de seales co-estimuladoras, induccin de la formacin de granuloma y estimulacin de la proliferacin inespecfica de linfocitos. Los adyuvantes ms usados incluyen el sulfato potsico de aluminio, adjuvante incompleto de Freund (aceite y emulsificante como el monooleato manide en suspensin acuosa) y adjuvante completo de Freund (adiciona micobacterias muertas por calor en aceite, emulsin y agua). El aluminio induce precipitacin del Ag dando como resultado la lenta liberacin de este desde el sitio de la inyeccin y de esta manera prolonga el tiempo de exposicin de das a semanas. Los adjuvantes de Freund ejercen el mismo principio ya que las gotitas de grasa que se forman alrededor del Ag hacen que este sea liberado muy lentamente. Un efecto adicional para el adjuvante completo de Freund es la capacidad de activar macrfagos, gracias a la presencia del muramyl dipptido (componente de la pared de las micobacterias). Aluminio y adjuvantes de Freund producen una inflamacin crnica local que induce atraccin de macrfagos y linfocitos, as como una mayor liberacin de ILs y seales co-estimuladoras. Los poliribonucleotidos sintticos y los lipopolisacridos bacterianos inducen proliferacin inespecfica de las clulas e incrementan la probabilidad de seleccin clonal de linfocitos. Clasificacin de los antgenos:

ESTRUCTURA

ORIGEN

TIPO DE RI QUE INDUCEN

Protenas

Naturales

Timo-Dependientes

Timo-Independientes

Polisacridos

Artificiales

Lipidos

Sintticos

DNA, RNA

Se denominan antgenos timodependientes (TD) a aquellos que requieren de la colaboracin del linofocito T para inducir la RI. Sus caractersticas son: Poseen eptopes no repetitivos. Estimulan a los linfocitos T y B. Inducen cooperacin T-B. Generan respuesta inmunolgica primaria y secundaria. Por ende generan memoria inmunolgica. El 95% de los antgenos existentes en la naturaleza pertenecen a este grupo.

Los antgenos timoindependientes (TI) son aquellos capaces de inducir la produccin de anticuerpos sin activar a los linfocitos T, mediante la estimulacin solamente de los linfocitos B. Son generalmente: Macromolculas, en su mayora polisacridos compuestos de mltiples repeticiones de azcares. Estimulan slo a los linfocitos B. No generan memoria inmunolgica. La mayora inducen slo respuesta primaria.

Los antgenos TI han sido subdivididos en: TI-1: Aquellos capaces de inducir la proliferacin y la diferenciacin de un gran nmero de clones B, sin importar su especificidad (Producen activacin policlonal). EL lipopolisacrido (LPS) de las bacterias gram negativas, a altas dosis, es el mejor ejemplo de este grupo. TI-2: Estn representados, sobre todo por molculas presentes en las cpsulas polisacridas de algunas bacterias. La respuesta de las clulas B inducidas por los TI-2 son especficas y proveen una respuesta rpida contra las bacterias extracelulares. Hay participacin activa de los macrfagos. Epitopes: Son regiones inmunologicamente activas de un inmungeno, con capacidad de unin a receptores de membranas ag-especficos en los linfocitos o a los Abs secretados. Una misma molcula puede tener varios eptopes y las clulas B y T reconocen diferentes eptopes dentro de esa molcula. As por ejemplo, los ratones inmunizados con la hormona glucagon producen anticuerpos dirigidos contra la porcin amino-terminal en tanto que las clulas T responden a epitopes localizados en la porcin carboxi-terminal. Existen algunas caractersticas que definen a los eptopes para clulas B y T. Para el caso de las clulas B se requieren eptopes que tengan un perfil que puedan acoplarse y arreglarse dentro del sitio de unin del antgeno (SuAg) presente en el anticuerpo (complementariedad de los sitios del Ab y el Ag). Las uniones en este sistema son del tipo no covalente y dbiles, por lo que se necesita un estrecho acercamiento entre las dos molculas. Los eptopes de las clulas B, en la protena nativa, estn compuestos en general por a.a hidroflicos y ubicados en sitios accesibles para el anticuerpo libre o unido a la membrana celular. La secuencia de a.a que estn escondidos en el interior de la molcula no pueden funcionar como eptopes de clulas B, a menos que la protena sea primero denaturada. As mismo existen eptopes formados por a.a contiguos, secuenciales o lineales y se denominan Eptopes lineales. Otros se ubican en segmentos distantes de la protena, pero son acercados cuando dicha protena esta plegada, estos son eptopes conformacionales o no secuenciales y

dependen de la estructura terciaria y cuaternaria que adopten las protenas. Estos ltimos eptopes pierden su capacidad de unin cuando la protena es desnaturalizada. Algunos eptopes suelen inducir una respuesta inmunolgica ms intensa y por eso son llamados inmunodominantes. Por ultimo, los eptopes de las clulas B tienden a ubicarse en sitios flexibles o de movilidad de la molcula. Los eptopes para las clulas T, presentes en la protena en su forma nativa, requieren ser procesados y presentados en conjunto con las molculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC). Por tal razn los estudios diseados a estudiar los eptopes de T debern siempre incluir una clula presentadora de antgenos (APC) o una clula blanco que exprese dicho pptido junto con una MHC. Los antgenos reconocidos por las clulas T deben interactuar con al menos dos molculas, por un lado el eptope y el TCR y por otro lado el agretope con la MHC. Los eptopes T, por lo general, se encuentran dentro de la molcula antignica, son eptopes internos y por esa razn requieren un procesamiento molecular que haga accesible a estos eptopes ocultos. A diferencia de los eptopes B, la inmunodominancia de los eptopes T est dada por la MHC de un animal determinado. Afinidad y Avidez del antgeno: La concentracin del Ag que permite a la mitad de los Acs estar unidos y dejar la otra mitad libre es una medida de la fuerza o afinidad de la unin. La avidez es la fuerza global que resulta de la unin de varios Ags y depende de la afinidad de cada lugar de unin del Ag y el Ac (IgG tiene dos sitios de unin, en tanto que IgM tiene 10 sitios de unin). La avidez aumenta por cada lugar ocupado del Ac. Una definicin simple de recordar consiste en que la afinidad es la fuerza de la unin no covalente entre el eptope y paratope. La avidez es la fuerza de las uniones formadas entre el Ac completo (por ejemplo IgG divalente) y el Ag. Los Superantgenos (SAgs): Algunas bacterias y virus patgenos producen molculas que interfieren con la funcin inmunolgica del organismo hospedador. Un ejemplo de ellos son los superantgenos. El termino SAg define a un grupo de protenas, virales o bacterianas, que al unirse al complejo bimolecular MHC-II/TCR estimula a las clulas T que presentan una regin V especfica (y muy raras veces regiones V) induciendo activacin masiva de estas clulas y posteriormente anergia y/o delecin clonal. Los Ags convencionales usualmente inducen una respuesta que recluta aproximadamente al 0,01% del repertorio total de clulas T. Los SAgs pueden estimular del 5 al 30% del total de clulas T trayendo como consecuencia una exagerada produccin de citocinas en el hospedador. Cuando estas molculas son sintetizadas por la maquinaria celular del husped infectado se denominan SAg endgenos (los retrovirus son ejemplos clsicos de SAg endgenos), en tanto que, cuando la molcula es producida por el agente infeccioso (bacterias, mycoplasma y otros) sin necesidad de la maquinaria celular del hospedador, se les define como SAgs exgenos. Las diferencias entre un Ag convencional y un SAg pueden resumirse en la siguiente tabla:

Antgenos convencionales Interactua con los elementos del TCR ( y ).

SuperAntgenos Interactua con el elemento del TCR, especificamente las regiones variables, casi siempre CDR 2 y CDR 3. Estimula diversos clones de clulas T con especificidades distintas. No requieren procesamiento por CPA. Son presentados en la cara lateral del hoyo MCH-TCR. No restringidos a MHC.

Estimula slo un clon de clulas T.

Requieren procesamiento por CPA. Son presentados dentro del hoyo MHC-TCR

Restringidos a MHC. Generalmente inducen diferenciacin celular. proliferacin

y Hay proliferacin celular seguida de eliminacin clonal.

Se requieren en promedio 100 a 300 complejos Se requieren pocos complejos MHC-SAg-TCR MHC-PEPTIDO-TCR para iniciar la respuesta. para iniciar la respuesta.

II.- Procesamiento y presentacin antignica. Jos Angel Cova, MD. Curso: Inmunologa Bsica.

Las prximas pginas constituyen una aproximacin a los mecanismos usados por el sistema inmunolgico para procesar y presentar particulas extraas al organismo, llamadas antgenos. Esta es la primera parte de un complejo y sofisticado proceso, que en algunos puntos escapa a la comprensin del hombre y que ha sido denominado la respuesta inmunolgica ante elementos no propios (Invasores). El conocimiento de las bases bioqumicas y celulares del reconocimiento antignico se ha expandido en los ltimos aos y uno de los elementos que ms ha contribuido a este avance fue la determinacin, por mtodos cristalogrficos, de la estructura de la molcula clase I del complejo mayor de histocompatibilidad hacia finales de 1.980. A partir de entonces un gran nmero de investigaciones se estn llevando a cabo con la finalidad de conocer los intrincados mecanismos de interaccin entre el MHC y el antgeno y la forma cmo este complejo dicta seales necesarias para una respuesta inmunolgica adecuada. El organismo est protegido de los invasores por una compleja red de clulas y sustancias que trabajan en conjunto. El blanco ltimo de toda respuesta inmunolgica es la eliminacin del antgeno y paradojicamente este es a su vez, el que inicia tal respuesta (principio y fin del sistema juntos). Para ensamblar una respuesta inmunolgica se necesitan algunos elementos. Primero una clula con capacidad de presentar, a los efectores, la partcula extraa. Segundo, un mensajero que permita la presentacin de esa partcula a las clulas adecuadas, con tal precisin que sea capaz de distinguirla entre los distintos subgrupos de esa poblacin celular. Tercero, la existencia de

mecanismos que regulen esa respuesta actuando como un "encendedor y apagador" que no permita la extensin infinita de tal respuesta. Cuarto, la presencia de seales coestimuladoras que hagan ms eficiente el trabajo del sistema. Este ensamblaje ha sido objeto de largos aos de estudio y es un rea en constante expansin dentro de la investigacin moderna. El estudio de la estructura del sistema inmunolgico ha otorgado varios aos de intensa investigacin a las llamdas clulas presentadoras de antgenos (APCs). En un primer momento fueron llamadas clulas accesorias, ya que se crea que su funcin en la respuesta inmunolgica era de poca importancia y fueron definidas como un grupo de clulas que ayudaban o cooperaban para que el linfocito T llevara a cabo su funcin de reconocimiento y eliminacin de antgenos. Posteriormente cuando se estableci que estas clulas participaban activamente en los procesos inductivos de la respuesta inmunolgica, se le concedi el nombre que actualmente llevan (APCs). La interaccin de las clulas presentadoras de antgenos con el antgeno es un paso escensial en los eventos de defensa del organismo contra agentes extraos y su fisiologa, contrario a lo que inicialmente se pensaba, involucra un conjunto de fenmenos activos y de gran complejidad. Al menos dos requisitos deben cumplir las clulas presentadoras de antgenos y estos son en primer termino, la capacidad de expresar molculas clase II del complejo mayor de histocompatibilidad y en segundo lugar, poseer la maquinaria celular capaz de procesar un antgeno dado. Bajo la denominacin de APCs se incluyen las clulas del sistema mononuclear-fagocitario (presentes en la sangre y tejidos), clulas de Langerhans(presentes en la piel), clulas dendrticas y dendrticas foliculares (bazo y ganglios linfticos) y el linfocito B, el cual en algunas situaciones puede presentar antgenos. Otras clulas poseen propiedades similares al monocito, en cuanto a su capacidad de presentar antgenos, y son la microglia (a nivel del sistema nervioso central), las clulas endoteliales (en la pared capilar) y el fibroblasto (en la piel). Las clsicas clulas presentadoras de antgenos (monocitos, linfocitos B y clulas dendrticas) derivan de una misma clula, llamada Stem Cell hematopoyetica, localizada en la mdula osea. Los trabajos que llevaron a esta conclusin fueron realizados por Ernest McCulloch y James Till en 1.961 en Toronto. Estos investigadores encontraron que una sola clula tena la capacidad de reponer todas las clulas de la sangre. Para ello inyectaron clulas de la mdula osea a ratones irradiados y demostraron que los ratones rapidamente desarrollaban clulas sanguneas (eritrocitos, mielocitos, megacariocitos y linfocitos), siendo entonces los primeros en aislar la stem cell en el animal y posteriormente colaboraron para aislarla en el humano. El macrfago y otras clulas del sistema mononuclear fagocitario estn ampliamente distribuidas en los tejidos. En las reacciones inmunolgicas su funcin comprende la captura y presentacin de protenas antignicas al linfocito CD4, as como la produccin y secrecin de interleukina 1 (IL-1) y factor de necrosis tumoral (TNF) entre otros. Tambin participa como clula efectora contra microbios y tumores. Los precursores del macrfago se desarrollan a partir de la stem cell pluripotencial en la medula osea, la cual da orgen al progenitor mieloide. Este progenitor es sometido a divisiones y diferenciaciones bajo la influencia de los llamados factores estimuladores de colonias (CSFs). El precursor celular ms primitivo responde a un CSF multipotencial (IL-3) dando orgen a las llamadas Unidades Formadoras de Colonias granulocito y monocito (GM-CFU). Las sucesivas diferenciaciones estn a cargo del factor estimulador de colonias de macrfagos (MCSF), especfico para esta clula, el factor estimulador de colonias de granulocitos y macrfagos (GM-CSF) y el factor estimulador de granulocitos (G-CSF). El producto final de esta divisin son los neutrofilos y los monocitos. Los monocitos son clulas poco diferenciadas que entran al torrente sanguneo una vez completada su maduracin, de aproximadamente 12 a 20 milimicras de dimetro que poseen un ncleo arrionado (en forma de habichuela) y un citoplasma con un contenido finamente granular donde pueden encontrarse enzimas lisosomales y vacuolas fagocticas. A travs de la circulacin estas clulas alcanzan los diferentes tjidos y sufren una nueva diferenciacin que les proporciona caractersticas particulares, as se desarrollan en la piel y constituyen los macrfagos, histiocitos y clulas gigantes, en el sistema nervioso central forman la microgla (la cual se localiza perivascular

y parenquimal), en los sinusoides vasculares del hgado forman las llamadas clulas de Kupffer, en el aparato respiratorio constituyen los macrfagos alveolares. Otro elemento que participa en el procesamiento y presentacin de antgenos es el Linfocito B. Esta clula esta capacitada para procesar y presentar antgenos ya que presenta en su superficie inmunoglobulinas que actan como receptores (BCR), los cuales unen selectivamente algunos antgenos. Adems posee la capacidad de internalizar y degradar protenas as como de producir seales coestimuladoras. Los linfocitos B se diferencian a partir de la stem cell hematopoyetica en la mdula osea y en el higado fetal. El progenitor linfoide acta bajo la accin de la clula del estroma que libera un factor soluble llamado IL-7, dando orgen a clulas inmaduras, las cuales son llamadas, sucesivamente, clula pro-B, clula pre-B y al final se obtiene el linfocito B. Esta diferenciacin involucra gran actividad gentica (reordenamiento gentico) cuya finalidad es la produccin y expresin, inicialmente citoplasmtica y luego en la membrana celular, de cadenas ligeras y pesadas de inmunoglobulinas que actuarn como receptor. Los linfocitos B estn localizados en los rganos linfoides (bazo, ganglios linfticos y mdula osea) y son capaces de unir antgenos por la va de una inmunoglobulina de superficie (sIg). Durante la estimulacin secundaria las clulas B pueden captar el antgeno, ensamblarlo dentro de un complejo que incluye molculas clase II del sistema mayor de histocompatibilidad (MHC) y presentarlo a una clula efectora (Linfocito T), cumpliendo as su funcin como APC. En los ltimos aos se le ha dado gran importancia al estudio del tercer grupo de clulas presentadoras de antgenos, estas son las clulas dendrticas. Ellas estn capacitadas para endocitar y transportar antgenos a los ganglios linfticos regionales. Su orgen no es bien conocido y segn Liu las clulas dendrticas inmaduras (imDCs) se forman a partir de la stem cell hematopoyetica en la mdula osea (M.O) por accin de factores claves para el crecimiento de ellas, que son el FLT-3 y el GM-CSF. La stem cell CD34+ se diferencia en dos progenitores, el progenitor linfoide comn (CLP) y el progenitor mieloide comn (CMP). CMPs-CD34+ parecen diferenciarse en dos poblaciones que son las clulas CD34+ CLA+ y CD34+ CLA- y estas a su vez se diferenciarn en imDCs CD11c+ CD1a+ y CD11c+ CD1a -, respectivamente. Las imDC CD11c+ CD1a+ migran a la piel y se transforman en clulas de Langerhan y las CD11c+ CD1a- migran a la dermis y otros tjidos transformandose en imDCs intersticiales. Adems de estos dos subtipos de imDCs, la stem cell da dos tipos de precursores (pre-DCs), el monocitico (Pre-DC1), y el plasmocitoide (Pre-DC2), este tlimo proviene del CPL. Tras completar su maduracin cada linaje celular tiene diferentes funciones. Es importante sealar que las DCs inmaduras tienen una alta capacidad de fagocitar antgenos, por sus receptores para manosa, y de activar linfocitos B naive en presencia de CD40L e IL-2. Las clulas dendrticas expresan niveles elevados de HLA-DR, DP y DQ, lo cual esta asociado con su capacidad para presentar antgenos. Estas clulas cuando entran a la circulacin linftica aferente contienen grandes cantidades de antgeno en su interior. A su vez ellas son capaces de procesar esas mismas cantidades de antgeno. Se ha observado un intenso movimiento de estas clulas, en los ganglios linfticos, despus de la exposicin perifrica a una protena extraa, lo cual ha hecho pensar que su participacin como APC es de gran cuantia. Una vez que el antgeno es llevado a los ganglios linfticos la clula dendrtica madura, pierde algunos de sus marcadores de membrana (como CD14 y CD1a), incrementa la expresin de molculas clase II del MHC y es capaz de activar a los linfocitos T para la emisin de una respuesta inmunolgica. Las clulas dendrticas adems de expresar molculas clase II del MHC pueden exhibir una amplia gama de molculas tales como el CD11a (LFA-1), CD58 (LFA-3), CD54 (ICAM-1) y CD80 (B7/BB1). Muchas de estas molculas, principalmente CD80, son esenciales y contribuyen a la estimulacin de la clula T por la clula dendrtica. Durante la estimulacin primaria (primer contacto con el antgeno), las clulas dendrticas juegan un papel de extremada importancia, no as durante la estimulacin secundaria (re-exposicin al antgeno), donde ests llegan a los ganglios linfticos con menor cantidad de antgeno y producen

menos estimulacin en los linfocitos T. La presencia de clulas de memoria y de anticuerpos en la periferia parece ser la razn de este hecho. El segundo elemento importante en la presentacin del antgeno son las MHC ya que ellas son las responsables de llevar el pptido y conectarse con el TCR de un linfocito especfico. Cada clase de molcula del MHC est especializada para capturar pptidos presentes en compartimientos intracelulares particulares y de vas diferentes. El estudio de la presentacin del antgeno por una clula ha mostrado diferencias significativas en las formas de presentacin a travs de las molculas clase I y clase II del MHC. Por lo tanto es necesaria su descripcin por separado. En lineas generales se ha establecido que el linfocito T citoltico (CTL) reconoce formas parcialmente degradadas de un antgeno cuando ste va asociado a molculas clase I del MHC en la superficie de una clula, la cual una vez reconocida, es lisada por este linfocito. De manera anloga el linfocito CD4 reconoce antgenos asociados a molculas clase II del MHC en la superficie de las clulas que expresan tal molcula (APCs). Esta divisin tiene una razn biolgica en el sentido de que el CTL reconoce y elimina aquellas clulas cuyas protenas antignicas son producidas por va la endgena (intracitoplasmticas), tal es el caso de las infecciones virales, haciendo poco probable que el CTL responda contra clulas que obtienen sus antgenos de la va exocitica (extracelular). Esta ltima va es reservada para la clula T ayudadora (Th), la cual determina la divisin y transformacin del linfocito B en clula plasmtica productora de anticuerpos dirigidos contra el antgeno extracelular. La presentacin de pptidos de la va endocitica requiere que las protenas recin sintetizadas en el citoplasma sean parcialmente degradadas, fenmeno que ocurre por la accin del inmunoproteasoma (unidad multicataltica). Previo a la accin del inmunoproteasoma las protenas son marcadas para la degradacin por la unin covalente de varias copias de un pequeo polipptido llamado ubiquitina. La ubiquitinacin induce deplegamiento proteco y luego la protena lneal es captada por el inmunoproteasoma. El inmunoproteasoma es una estructura tubular de aproximadamente 1500 kD compuesta de varias subunidades catalticas denominadas LMP (polipptido de masa molecular baja). El complejo LMP, especialmente los LMP-2, LMP-7 y MECL1, contienen multiples sitios catalticos y pueden producir simultaneamente varios pptidos de un mismo substrato. Los pptidos obtenidos de esta accin son liberados en el sistema transportador TAP-1 y TAP-2, cuya funcin es llevar estos pptidos a travs de la membrana del reticulo endoplsmico (RE) hasta llegar al lumen, en un paso ATP-dependiente. Los pptidos son liberados por las protenas TAP 1 y TAP 2 a la molcula clase I recien sintetizada en el lumen del RE. Existen adems mecanismos de generacin de pptidos que son independientes del inmunoproteosoma, donde la tri Peptidil Peptidasa II (TPP II) juega un papel importante. La sntesis de las molculas del MCH-I ocurren por separado y diversas chaperonas presentes en el RE, como la calnexina, BiP y la calreticulina, ayudan al plegamiento apropiado de la cadena recin formada. Una vez formado el dmero MHC-I (cadena -2 microglobulina) este permanece unido a TAP por la tapasina y cuando el pptido entra al RE y se une al sitio de unin para el antgeno (SUAg), en MHC-I, este complejo es liberado de TAP-tapasina y es transportado a travs del aparto de Golgi y luego al reticulo Trans-Golgi, donde alcanza la superficie celular. La unin del pptido para formar el complejo MHC-I-pptido produce cambios conformacionales en la molcula clase I, haciendola pasar de una forma inestable a la forma estable (incrementa la termoestabilidad del complejo). Cuando las molculas clase I, recien formadas, quedan vacias la inestabilidad del complejo hace que ellas no migren al aparato de Golgi y probablemente sean degradadas pasando a otra va, posiblemente de recirculacin. Los pptidos inmunognicos obtenidos de antgenos exgenos son producidos por el catabolismo intracelular del antgeno completo y unido a la molcula clase II dentro de un compartimiento intracelular.

El antgeno es internalizado por diferentes vas. La primera es a travs del llamado sistema inmunolgico innato y la segunda es el sistema adaptativo, en la cual los anticuerpos, actuando como receptores, juegan un papel importante. El sistema inmunolgico innato tiene diferentes vas para capturar el antgeno, la primera es a travs del macrfago y la clula dendrtica, las cuales tienen receptores para algunos polisacridos bacterianos (Receptores que reconocen patrones asociados al patgeno-PRRs) y ellos usan estos receptores para unir e ingerir antgenos bacterianos. La segunda va es mediada por la accin de sustancias opsnicas, tales como el sstema de complemento y la produccin de IL-6, que induce en el hgado la sntesis de protenas con capacidad para unirse a residuos glucdicos presentes en la bacteria. Otra forma es mediada por los receptores Fc (FcR) los cuales se unen al fragmento Fc de las Igs mientras estas, a su vez, unen partculas extraas por su fragmento Fab. El sistema inmunolgico adaptativo opera mediante un proceso de seleccin clonal. El linfocito B produce anticuerpos que se expresan en su superficie y que actan como receptores (BCR). Cada clona de clulas B elabora un receptor diferente que puede reconocer una molcula extraa. El antgeno endocitado entra en una estructura denominada endosoma donde es degradado mediante la ruptura de sus puentes disulfuros por accin de la asparaginil peptidasa (AEP) y GILT (una enzima thiol reductasa lisosomal inducible por IFN-) . Esta degradacin inicial expone sitios para la accin de otras enzimas (endopeptidasas y exopeptidasas) hasta convertirlo en pequeos fragmentos peptdicos. Los endosomas portan en su interior principalmente cisteina proteasas (catepsina S, L, B, H, F, Z, V, entre otras) y aspartil proteasas (catepsina D y E) requeridas para la degradacin del antgeno. Mientras ocurre la degradacin del Ag, las molculas y de la clase II son sintetizadas y ensambladas en el RE junto con una cadena invariable (Ii), la cual evita la unin con pptidos endgenos al ocupar el SUAg en la MHC-II. Ii tambin es responsable de dirigir el dimero MHC-II hacia la ruta endocitica. Se cree que algunas chaperonas, como calnexina, participan en el plegamiento de las cadenas y que formarn la MHC-II. Las molculas clase II unida a Ii pasan a vesiculas exocticas saliendo del RE para fusionarse con las vesiculas endociticas que portan los pptidos antignicos producto de la degradacin proteca por accin de las catepsinas. Estas vesiculas o MIIC (compartimiento de molculas clase II) contienen la molcula HLA-DM. La cadena Ii es degradada parcialmente transformandose en un pptido de 24 a.a denominado pptido residual de la cadena Ii asociado a MHC-II (CLIP) localizado en el SUAg. Posteriormente CLIP es removido por accin de HLA-DM. Esta molcula facilita la entrada del pptido antignico a presentar en la MHC-II. La unin del pptido estabiliza la MHC-II y los complejos MHC-pptido son transportados hacia la superficie de la APC para ser presentados a un linfocito T CD4 a travs de su TCR antgeno-especfico. En 1.989 Jenkins et al. proponian que la unin del complejo pptido-MHC no era suficiente para generar una respuesta inmunolgica por un linfocito T, sugiriendo la idea de que se necesitaban seales coestimuladoras. Actualmente algunas molculas han sido identificadas como coestimuladoras de la activacin del linfocito. Estas incluyen las molculas CD28, CD80, CD53 (LFA-1), CD54 (ICAM-1), ICAM-2, LFA-3, la molcula de adhesin celular y vascular (VCAM) entre otros. La molcula CD80 es una protena de membrana con un peso molcular de aproximadamente 50 KDa, la cual se expresa en la membrana de las clulas dendrticas, en el linfocito B y el monocito activados (todas clulas APCs). La protena tiene su sitio de unin en el linfocito T, la molcula CD28, la cual es una glicoprotena de superficie compuesta de dos subunidades idnticas de 44 kD unidas por puentes disulfuros. Todas las clulas CD4 del humano, expresan CD28 y se estima que la mitad de las clulas CD8 tambin la expresan. La unin del complejo pptido-MHC al TCR no es suficiente para el crecimiento y diferenciacin del linfocito T. Cuando la interaccin antes mencionada se realiza conjuntamente con molculas

coestimuladoras (pr ej. unin CD80-CD28) la respuesta inmunolgica es iniciada eficientemente, dando lugar al siguiente paso, LA ACTIVACION DEL LINFOCITO T. Presentacin de antgenos endgenos.

Membrana celular

Golgi

cl

2-m ERp57 crt

tpn

RE
MHC-Ip

TAP 1

TAP 2 Peptidos

Ubiquitina

Proteina Proteosoma

10

Presentacin de antgenos exgenos.

Macropinocitosis Fagocitosis
Endosoma MIIC

Membrana celular
MHC-IIp

HLA-DM HLA-DO? Endosoma tardio

Golgi

li

RE

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Sinapsis inmunolgica que muestra el complejo MHC-pptido-TCR y las seales coestimuladoras.

Finalmente existe un grupo de molculas responsables de presentar antgenos lipdicos, denominadas CD1. CD1 constituye un grupo de protenas asociadas a 2 microglobulina no relacionadas con las molculas del MHC y que se han dividido en dos grupos. El grupo 1 formado por CD1a, CD1b y CD1c y CD1e. El segundo grupo aloja a CD1d. Estas molculas estn expresadas en los timocitos, clulas dendriticas y linfocitos B. Hasta ahora, las micobacterias son la principal fuente conocida de antgenos que son presentados por CD1. Las protenas del grupo 1 presentan lpidos y glicolpidos tales como el cido miclico, lipoarabinomanan (LAM) y hexosa-1-fosfoprenoides. Las CD1 del grupo 2 presentan galactosilceramida. Las molculas CD1 han sido halladas en los diferentes compartimientos de la va endosomal/lisosomal lo que hace suponer que la va de procesamiento y presentacin es similar a las de las MHC-II, aunque grandes diferencias existen entre ellas. La siguiente figura esquematiza las dos teoras de presentacin de antgenos restringida por CD1:

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Tomado de: Jayawardena J. Curr Opin Immunol. 2001;13:109-113.

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