CENTRO FEDERAL DE EDUCAO TECNOLGICA DE MINAS GERAIS DEPARTAMENTO DE QUMICA COORDENAO DE ENSINO TCNICO DISCIPLINA Microbiologia Industrial II - Turma:

a: Mdulo II Prof. Beatriz Borelli

Alunos: Alessandro Noronha Juma Fortunato Arthur Costa

Data da prtica: 13/04/12

Provas bioqumicas para identificao de E. coli

Belo Horizonte 1 Semestre 2012

1.

INTRODUO

O ensaio completo para anlise da qualidade microbiolgica da gua inclui o isolamento das culturas de bactrias com resultado positivo no caldo EC em gar eosina azul de metileno para a realizao de provas bioqumicas. Posteriormente, ser feito o teste de colorao de Gram. O Meio EAM recomendado para o isolamento e diferenciao de bactrias entricas gramnegativas de espcimes clnicos e no clnicos. O Meio Eosina Azul de Metileno (EAM) foi originalmente desenvolvido por Holt-Harris e Teague e posteriormente modificado por Levine. O meio uma combinao das frmulas de Levine e Holt-Harris e Teague. [1]

2.OBJETIVOS - Identificar as espcies de enterobactrias isoladas a partir dos tubos contendo caldo EC. - Confirmar a presena de E. coli nas amostras de gua analisadas. - Confirmar, por meio da colorao de Gram, a presena de bacilos Gram negativos.

3. MATERIAIS - gar EAM - Caldo VM-VP - Meio SIM - Meio Citrato Simmons - Ala de platina - Bico de Bunsen - Placas de Petri - gua destilada - Corante Cristal Violeta - Soluo de Lugol - Soluo descolorante lcool-acetona - Soluo Fucsina

Tabela 1 Ficha informativa de Reagentes Nomes Meios de cultura/reage ntes Constituintes g/L Composio Qumica/ Natureza Descrio Fsicoqumica Risco Sade/ Impacto ambiental No apresenta riscos sade Manuseio Estocagem Refernci a Bibliogr fica Armazenar em temperatura ambiente. (abaixo de 30C) Himedia

gar E.A.M. - Peptona de lactose carne 10g/L segundo -Lactose 10g/L Levine -Fosfato dipotssico 2g/L -Eozina Y 0,4g/L - Azul de metileno 0,065g/L -gar 15g Meio SIM - Digesto Peptca de Tecido Animal 30 g/L - Extrato de Bife: 3 g/L - Ferro Peptonizado 0.20 g/L, - Tiosulfato de sdio 0,025 g/L - Agar: 3.00g/L Agar Citrato Simmons -Fosfato Diidrognio de Amnia: 1.00 g/L - Cloreto de Sdio: 5.00 g/L - Sulfato de Magnsio: 0.2 g/L

pH 7,1 0.2 (25C)

pH 7,3 0.2 (25C)

No apresenta riscos sade

Armazenar o p a temperatura ambiente. (abaixo de 30C)

Himedia

pH 7,2 (25C)

No apresenta riscos sade

Armazenar o p em temperatura ambiente (abaixo de 30C)

Himedia

- Azul de Bromotimol: 0.08 g/L - Fosfato Dipotssico: 1.00 g/L - Citrato de Sdio: 2.00 g/L - Agar: 15.00 g/L Caldo VM VP (Caldo Glicose Tamponado) - Peptona Tamponada:7 g/L - Dextrose: 5.00g/L - Fosfato Dipotssico: 5.00 g/L pH 6.9 0.2 (25C) No apresenta riscos sade Armazenar o p em temperatura ambiente (abaixo de 30C) Himedia

Tabela 2 Planejamento de gastos de solues/meios de cultura Meios de cultura/solues gar E.A.M. lactose segundo Levine Meio SIM Quantidade/grupo (em g e ml) 1,3 g / 20mL Quantidade Sub-turma (em g e ml) 3 g / 80mL Total por turma (em g e ml)

200 ml / 7,5 g

Agar Citrato Simmons

Caldo VM VP

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS [1] http://www.splabor.com.br/meios-de-cultura/meios-para-seletividade/agar-eosina-azul-demetileno-emb-modelo-m317.html Acessado em 18/04/12.