AISLAMIENTO DE HONGOS FITOPATOGENOS

Clavijo Diego, Neidy Yazmn Chila, 1 Ramos Diana Shirley 1, Salcedo Laura

RESUMEN Con el fin de aislar y diferenciar las estructuras fngicas, a las que se les atribuye cierta sintomatologa perjudicial en las plantas de Tomate (siendo esta una especie de importancia econmica y susceptible a estos daos); se identifico sntomas visibles causados por hongos; posterior a ello se realizo una desinfeccin con concentraciones de hipoclorito de sodio de 4%, 8 % y 12% y muestreado de las zonas ms afectadas, estas fueron sembradas en un medio nutritivo puro consistente en Papa Dextrosa Agar (PDA - Scharlau), observndose mayor crecimiento micelar en el tratamiento de 8 %, que fue sembrado nuevamente para obtener un cultivo fngico puro. Finalmente el desarrollo de hifas y esporulacin en menor proporcin fue visible al microscopio lo que induce que el hongo patgeno puede reproducirse y aislarse fcilmente. Palabras clave: hongo fitopatgeno, medio de cultivo, aislamiento, tincin, siembra masiva de micelio.

ABSTRACT In order to isolate and differentiate the fungal structures, which are attributed some adverse symptoms in tomato plants (this being an economically important species and susceptible to such damage), was identified visible symptoms caused by fungi after It made a disinfection with sodium hypochlorite concentrations of 4%, 8% and 12% and sampled from the most affected areas, these were planted in a nutrient medium consisting of pure Potato Dextrose Agar (PDA - Scharlau) with a higher growth micelle in the treatment of 8%, which was seeded again to obtain a pure fungal culture. Finally, the development of hyphae and sporulation in a smaller proportion was microscopically visible which leads to the fungal pathogen can reproduce and easily isolated.

Keywords: phytopathogenic fungus, isolation, staining, seed mass of mycelium.

1 Estudiantes

de ingeniera agronmica, universidad de Cundinamarca, facattiva 2011

INTRODUCCION

Para realizar la caracterizacin de un hongo, es necesario tener en cuenta que este en su medio natural se encuentra asociado a otras especies, ya sean bacterias u otros microorganismos, por lo tanto en esta prctica se llevo el individuo a procesos de desinfeccin y aislamiento para analizar su comportamiento. Para el desarrollo y crecimiento de microorganismos es importante contar con un medio de cultivo, que cumpla con todos los requerimientos nutricionales que la especie necesite para reproducirse en este, simulando el ambiente natural en que se encontrara normalmente; exentos de cualquier microorganismo contaminante. Estos contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. Los hongos son organismos eucariotas y presentan en comn con las plantas la posesin de una pared celular, de vacuolas llenas de jugo celular y de una corriente plasmtica bien observable as como la incapacidad de moverse. No presentan sin embargo pigmento fotosinttico alguno y son C-hetertrofos (quimioarganohetertrofos). (Carrillo, 2003) Al conjunto de hifas del talo de un hongo se Ie denomina micelio. En determinados estadios, a menudo en el paso a fases de multiplicacin asexual a sexual, el micelio forma conjuntos de aspecto tisular denominados plectnquimas.

El cuerpo vegetativo es un talo; Consiste en filamentos de unos 5 mm de dimetro que se ramifican repetidamente y que se extienden por la superficie o por el interior del sustrato. Durante el aislamiento, al existir junto al patgeno otras especies de bacterias u hongos es necesaria realizar la desinfeccin. En algunos casos es difcil separar a un hongo de ciertas bacterias contaminantes (an usando sustancias bacteriostticas) o separar dos hongos que se desarrollan juntos en las siembras. Esta es la razn por la que en casos de hongos muy variables, se recomienda hacer una purificacin gentica. (Pelez & Jimnez, 2001)

El principal objetivo de este estudio es la siembra y aislamiento del hongo encontrado en cultivo de tomate bajo invernadero, realizando una caracterizacin morfolgica de sus estructuras. Materiales y mtodos Se tomo muestreo; Hojas y trozos de tronco con sntomas causados presumiblemente por hongos. Se preparo medio nutritivo. en un erlenmeyer con 210 ml de agua destilada estril, y 12,5 gr de PDA, agitacion constante hasta punto de ebullicin, posterior auto clavado. Se describi la sintomatologa presentada por el material vegetal; encontrando: En hojas aparecen manchas irregulares de aspecto aceitoso con partes con presencia de necrosis; En tallo aparecen manchas pardas que se van agrandando y que suelen circundarlo.

Las hifas de los hongos crecen por el extremo (crecimiento apical). En la mayora de hongos cualquier parte del micelio puede crecer; para sembrar resulta suficiente un pequeo trozo de micelio para que crezca un talo nuevo.

Se realizo corte de zonas afectadas (hoja), se desinfectaron las muestras a tres concentraciones diferentes de

hipoclorito de sodio: 4%, 8%, 12%, seguido de tres lavados con agua destilada. ( Figura 1 y 2 )

Figura N 1 y 2; corte y desinfeccin de tejido con concentracin de hipoclorito de sodio. (Chila et al 2011) Se siembro directamente en medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA - Scharlau). Se llevo a 30c hasta presentar crecimiento micelar. Se observ en el microscopio utilizando primero el aumento 10x para detectar la forma y ordenamiento caracterstico de las esporas; posteriormente con el

aumento de 40x se realiz una observacin ms detallada.

Se sembr masivamente el hongo que presento mayor formacin de micelio, tomando parte de esta estructura para ser trasladada a un medio nutritivo puro. (figura 3 y 4) Se observo nuevamente crecimiento de talo, posteriormente realizando tincin con azul de metileno y agua destilada; llevado al microscopio para observar crecimiento de hifas y determinar presencia de otras estructuras como esporas.

RESULTADOS

El comportamiento del hongo en el tratamiento con concentracin de hipoclorito de sodio al 8 %, fue mayor; presentndose estructuras micelares mayores, representadas como masas blancas y esponjosas. (Grafica N 1)

. reproductivas del hongo; formacin de aglomerado teido) (figura N 6)

Grafica N 1, crecimiento vs concentracin hipoclorito de sodio.

La siembra del micelio en un nuevo medio nutritivo, presento un mayor crecimiento y uniformidad en estructuras, indicando que se obtuvo una especie fngica libre de la presencia de otros microorganismos. (Figura N 5)

Figura N 6 estructuras microscpicas del hongo (Ramos et al, 2011)

DISCUSION

Figura N 5: crecimiento micelar de hongo; (Clavijo, 2011)

El uso del microscopio y del azul de metileno en el proceso de tincin, permiti observar estructuras internas de lo que se constituye como un hongo. Es decir la parte de hifas (partes alargadas) y pequeas formaciones iniciales de lo que se considera son esporas (Estructuras

La variacin del crecimiento de esta especie fngica con los diferentes tratamientos de hipoclorito de sodio, donde el de 8 %, evidencia un crecimiento micelar mayor y/o nico; puede deberse a la susceptibilidad del hongo a rompimiento de membranas, los detergentes como este son tenso activos, es decir, disminuyen la tensin superficial y favorecen el arrastre por el agua, dan una funcin de barrido. (Esterilizacin y desin.., 2005), por lo cual cuando se realiza posterior a la desinfeccin un juagado para la eliminacin de residuos del desinfectante se remueven estas capas inhibiendo la reproduccin y por tanto el crecimiento del microorganismo. Esto cuando la concentracin es del 12 %.

Segn el ergonmico, (2005) Hay clulas ms sensibles, dependiendo del tipo celular (clula vegetativa es ms sensible que en forma de espora) y del estado fisiolgico de las clulas (son ms sensibles a agentes que atacan el metabolismo cuando estn creciendo, las clulas viejas son ms sensibles a aquellos agentes que atacan la membrana). Por ello, como se tomo muestreo de hoja discriminando el avance y maduracin del hongo, pudo haberse presentado diferencias en etapa de crecimiento fngico, justificando el no

crecimiento de estructuras micelares en 4 % y 12 %. En este estudio se logro el aislamiento de un hongo fitopatgeno, causante de enfermedad en el cultivo de tomate. Comprobndose sus estructuras en la tincin, y vista al microscopio. Donde se puede observar claramente la formacin de hifas y muy pocas pero visibles estructuras de reproduccin (esporas)

Figura 3 y 4: crecimiento de hongo y transferencia de micelio a otro medio para purificacin. (Clavijo et al 2011)

REFERENCIAS Esterilizacin y desinfeccin, 2005 disponible en http://www.elergonomista.com/micr obiologia/esteri.htm consultada el 6 de abril de 2011
Carrillo 2003, ESTRUCTURA DE LOS HONGOS. Capitulo 4, Descargado el da 7 de abril de 2011 de

http://www.unsa.edu.ar/matbib/micra gri/micagricap4.pdf

PELAEZ, Dens & JIMENZ, Alberto 2001, Aislamiento e identificacin de hongos fitopatgenos que afectan algunos cultivos de importancia econmica en Bolivia descargado el 7 de abril de 2011 de http://www.ops.org.bo/textocomplet o/rnbiofa20010903.pdf

1 Estudiantes

de ingeniera agronmica, universidad de Cundinamarca, facattiva 2011