AO DEL CENTENARIO DE MACHU PICCHU PARA EL MUNDO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE ODONTOLOGA

CURSO: FARMACOLOGIA GENERAL TRABAJO: TERAPIAGNICA APLICADA A LA ODONTOLOGIA PROFESOR: CAMONES MALDONADO RAFAEL ALUMNA: TELLO NORIEGA, THALIA ALESSANDRA CICLO: III TRUJILLO PER 2011

Introduccin: Con el proyecto genoma humano asistimos a una trascendental carrera donde miles de bilogos, de instituciones pblicas y privadas de diversos pases, persiguen un objetivo comn: descifrar nuestro ADN, identificar los genes en l contenidos y conocer la forma en que se expresan. La genmica se est convirtiendo en el paradigma comn de todas las ciencias biomdicas, incluida la odontologa. El conocimiento del desarrollo morfolgico y funcional de nuestro organismo yace en este lenguaje de tripletes que compartimos con bacterias, animales y plantas. La seleccin natural ha modelado su larga cadena a lo largo de miles de millones de aos. De la interfaz entre el genoma y el ambiente surge la vida y tambin, eventualmente, la enfermedad. La terapia gnica es un nuevo procedimiento para tratar, curar y prevenir la enfermedad cambiando los genes de un individuo. La investigacin en este campo est enfocada a conocer la forma por la cual los genes controlan la funcin celular para que cuando alguno de ellos falle, se puedan introducir al organismo nuevos genes que funcionen de manera normal. Esta terapia consiste en modificar genticamente las efecto teraputico. Esto se refiere a una copia normal genticos. Se ha sugerido el uso de terapia gnica modificacin gentica de las clulas para producir enfermedades de difcil manejo asociadas clulas para producir un de genes con desordenes que podra involucrar la efectos teraputicos en con base gentica.

Las modificaciones pueden ser realizadas fuera de las clulas cultivadas y luego administradas al paciente mediante un vector (procedimientos ex vivo) o pueden ser involucradas como modificaciones en las clulas del individuo directamente (procedimientos in vivo). El uso clnico de la terapia gentica comenz el 14 de septiembre de 1990, en el instituto nacional de salud en Bethesda, Maryland, cuando una nia de cuatro aos recibi un tratamiento de terapia gentica para tratar una fatal enfermedad hereditaria del sistema inmune (ADA: adenosine deaminase deficiency). Por este defecto ella era muy susceptible a las infecciones, por lo cual la terapia gnica tuvo que utilizar un virus genticamente modificado para implantarle un gen normal de ADA dentro de sus clulas inmunes. El gen ADA programa la clula para que produzca la enzima faltante, y en esta forma se desarrolla la funcin inmune normal en esas clulas. Este tratamiento ayuda a crear resistencia contra las infecciones. La identificacin de nuevos genes involucrados en las enfermedades del hombre, el desarrollo de nuevos vectores y la regulacin transgnica han acelerado el

progreso de la terapia gnica. Sin embargo, una de las mayores dificultades que presenta la aplicacin clnica de esta terapia radica en las caractersticas que debe tener el vector utilizado. Los requisitos ms importantes que debe cumplir este vector son: la facilidad para producirlo a gran escala, la seguridad para manejarlo con cada tipo de clula y la capacidad para producir una expresin transgnica regulada. Aunque la terapia gnica est todava en etapa experimental, las investigaciones indican que en los prximos 25 aos ser posible usar con xito este tipo de terapia. Para qu se utiliza la terapia gnica?

La terapia gnica fundamentalmente va dirigida a reparar los errores bsicos que se encuentran en la estructura gentica de un individuo; es decir va encaminada a reemplazar aquellos genes mutados o imperfectos, por genes que poseen la secuencia correcta de nucletidos y con la cual es posible la trascripcin de ese gen para expresar una protena determinada. La terapia gnica es un tratamiento mdico que consiste en manipular la informacin gentica de clulas enfermas para corregir un defecto gentico o para dotar a las clulas de una nueva funcin que les permita superar una alteracin. Con la ayuda de vectores adecuados, que son generalmente virus, se introduce el gen correcto y se integra en el ADN de la clula enferma mediante tcnicas de recombinacin gentica. La modificacin del genoma de las clulas diana para que sinteticen una protena de inters teraputico permite compensar una insuficiencia debida a la alteracin de un gen celular, estimular una mejor respuesta inmunitaria contra un tumor o conferir resistencia a la infeccin producida por un virus. En principio existen tres formas de tratar enfermedades con estas terapias: a) Sustituir genes alterados:

Se pueden corregir mutaciones mediante terapia gnica, sustituyendo el gen defectuoso o reparando la secuencia mutada. b) Inhibir o contrarrestar efectos dainos:

Se lleva a cabo mediante la inhibicin dirigida de la expresin gnica. Este proceso se desarrolla bloqueando promotores, interfiriendo con los mecanismos de expresin gnica mediante RNAs anti-sentido que son complementarios de mRNA y se unen a ellos bloquendolos, o, ms recientemente, mediante siRNA ("small interferents RNA", "RNAs pequeos interferentes"), que bloquean secuencias especficas de RNA, por lo que pueden inhibir cualquier gen bloqueando sus mRNA.

c) Insertar

genes

nuevos:

Se realiza por supresin dirigida de clulas especficas. Se insertan genes suicidas que destruyen a la propia clula que los aloja o genes estimuladores de la respuesta inmune. Tambin se puede introducir una copia de un gen normal para sustituir la funcin de un gen mutante que no fabrica una protena correcta. El desarrollo de mtodos para la transferencia de genes a las clulas de los mamferos ha brindado la posibilidad de tratar las enfermedades por medio de la terapia gnica. Hoy en da se conocen ms de 4000 enfermedades genticas en el humano causadas por alteraciones en diferentes genes. Algunas pocas de estas enfermedades reciben algn tipo de tratamiento, pero ninguna de ellas se cura de forma definitiva. La curacin se lograra, al corregir el defecto en la estructura del ADN responsable de la enfermedad o por la transferencia del gen celular normal a las clulas defectuosas. Los mtodos de ingeniera gentica utilizados para corregir estos trastornos involucran la participacin de un equipo cientfico multidisciplinario; hay que caracterizar, purificar y amplificar in vitro el gen deseado mediante su clonacin en bacterias, y luego disear un mtodo de transferencia apropiado para su introduccin en las clulas. Una vez transferido el gen es necesario verificar que ste se integre en el sitio especfico del genoma celular por recombinacin homloga, que se transcriba a mRNA y se traduzca por ltimo a una protena funcional, la cual debe participar en el control de un proceso biolgico particular. Los procedimientos de terapia gnica se basan en la integracin de una secuencia exgena de DNA modificado en sus regiones cromosmicas homlogas por medio de la recombinacin. Segn los propsitos y tipos de clulas blanco se distinguen 4 categoras de terapia gnica: a. Tipo I es la terapia gnica de clulas somticas; sta terapia involucra la correccin de defectos genticos en cualquiera de las clulas somticas del organismo. b. Tipo II es la correccin de una deficiencia gentica a travs de la transferencia de genes funcionales dentro de las clulas germinales o gametos, reemplazando un gen defectuoso. A diferencia de la anterior, no se recomienda la adicin de genes en lnea germinal debido a los efectos

biolgicos que produciran la mezcla del gen normal y mutado sobre las seales reguladoras necesarias para el crecimiento y desarrollo celular normales. c. Los tipos III y IV de terapia gnica involucran el uso tanto de clulas somticas, como de clulas germinales, con el fin de seleccionar una o varias caractersticas fenotpicas particulares. El propsito de este tipo de terapia es hacer mejoramiento gentico. Estas terapias estn dirigidas a personas normales en quienes no hay evidencia de alteracin gentica alguna. d. En el tipo IV de intervencin se pretende asegurar que las modificaciones genticas pasen a las futuras generaciones. Los procedimientos necesarios para la terapia gnica de clulas somticas se pueden hacer en forma directa sobre el paciente (in vivo) o sobre algunas clulas progenitoras (ex vivo) y su posterior infusin al paciente. Se utilizan clulas somticas progenitoras con el fin de asegurar su replicacin posterior al transplante. Mtodos para la transferencia de genes: 1. Hibridacin de clulas somticas. 2. Vectores recombinantes adenovirales o retrovirales. 3. Mtodos fsicos: i. ii. iii. iv. v. DNA transportador y precipitacin con fosfato de calcio. Microinyeccin: DNA purificado. Plsmidos recombinantes. Endocitosis de conjugados de DNA-protenas/receptores. Liposomas. Electroporacin

La terapia gnica pretende curar enfermedades hereditarias (que, en la mayora de los casos, se deben a genes defectuosos) mediante la introduccin de genes sanos. Es aplicable tambin al tratamiento del cncer, de patologas infecciosas (hepatitis, sida); de enfermedades cardiovasculares (hipercolesterolemia y aterosclerosis), neurodegenerativas (enfermedades de Parkinson y de Alzheimer) y crnicas (artritis reumatoide). Todas las enfermedades humanas, excepto el trauma, tienen un componente gentico.

Aplicacin

clnica

de

la

terapia

gnica

en

odontologa:

Uno de los campos de la odontologa que puede beneficiarse directamente de este tipo de terapias lo constituye las alteraciones craneofaciales y dentales. El 5% de todos los nacidos en Estados unidos cada ao tiene algn defecto congnito y por lo menos 1/800 presenta una malformacin que afecta la cabeza, la cara o el cuello. De las cerca de 5.500 patologas heredadas que presentan malformaciones, cerca de 700 involucran la regin craneofacial y alrededor de 300 se manifiestan con labio y/o paladar fisurado. El odontopediatra y el ortodoncista frecuentemente deben prestar atencin a los pacientes que padecen este tipo de patologas. Algunas crneosinostosis como los sndromes de Appert, Pfeiffer y Crouzon, que afectan el crecimiento craneofacial normal, debido al cierre prematuro de las suturas, son producidos por una mutacin en el gen FGFRII (receptor tipo II del factor de crecimiento fibroblstico). La investigacin actual en biologa de las suturas, est dirigida a conocer las funciones de los genes que se expresan en este tejido, los mecanismos de sealizacin celular, las actividades de los factores de transcripcin especficos y las interacciones celulares. Cuando se conozcan estos procesos ser posible prevenir o intervenir tempranamente mediante terapia gnica perinatal las patologas relacionadas con crneosinostosis o con otros sndromes que afectan el crecimiento craneofacial. Al respecto Kyrkanydes y Millar (2002), vienen desarrollando una modalidad de terapia gnica para la transferencia de genes teraputicos a animales y pacientes utilizando un virus de pseudotipo de inmunodeficencia felina (VSV-G) y han demostrado niveles de expresin gnica estable en varios rganos y estructuras examinadas. Otra rea de la odontologa que podra beneficiarse con la terapia gnica est relacionada con las enfermedades que afectan las glndulas salivares. Sin embargo la mayor limitacin para el uso de la terapia gnica en este campo, radica en la eleccin del vector utilizado para transferir los genes, ya que actualmente los vectores disponibles inducen reacciones inmunes y otros efectos indeseables que impiden establecer con seguridad este tipo de terapias. La terapia gnica puede ser utilizada tambin para el tratamiento del dolor crnico severo. Numerosos estudios han demostrado que los genes pueden ser transferidos a clulas del sistema nervioso central de los modelos animales. Por ejemplo la transferencia del gen b-endorfina produce analgesia efectiva en ratas. Este procedimiento podra ser de gran utilidad en un futuro para el tratamiento de

la

neuralgia

del

trigmino.

La matriz extracelular en el hueso alveolar, periodonto y diente se relaciona con la localizacin de los morfgenos en la reparacin sea. En este proceso, los tejidos como el colgeno, son importantes en grandes defectos de hueso y mandbula; dndose procesos de osteo-conduccin. La literatura reporta que en defectos periodontales se pueden utilizar sistemas de osteoinduccin (membranas periodontales) y al tiempo osteoconduccin (terapia gnica). La combinacin de estas dos terapias en la utilizacin de las BMPs, permitira obtener mejores resultados. En un estudio reciente, se tomaron fibroblastos que codificaban para BMP7, y se transplantaron en ratas que tenan grandes defectos seos a nivel mandibular. Las lesiones tratadas con BMP7 demostraron condrognesis, osteogenesis, y cementognesis en la reparacin de defectos seos periodontales. BMP 4 recombinante codifica para heparan sulfato, heparina, colgeno tipo I y IV de la matriz extracelular. Los componentes de la matriz extracelular activan morfgenos para permitir funciones proteolticas. Las BMP4 en estado soluble, al entrar a ser componente de la matriz extracelular, se convierte en un estado slido, en el cual puede iniciar sus funciones. La interaccin entre la seal inducida por morfgenos y la respuesta celular es modulada por la matriz extracelular. Las BMPs 2, 4, 7 pueden iniciar la cascada de osteognesis y por esta razn tienen posibilidades teraputicas en defectos craneofaciales, en trauma de cabeza y cuello y en defectos causados por neoplasias. Las BMPs 2 y 4, logran corregir defectos de 100 ug/g, mientras que las BMPs 7 corrigen defectos de 1.000 ug/g. La utilizacin de BMP junto con implantes metlicos pueden estimular el crecimiento seo alrededor de los implantes, para lograr una integracin optima del implante. Sin embargo se requieren altas concentraciones para inducir regeneracin tisular con BMP. La produccin de morfgenos en la transduccin de tejidos, aplicados directamente a la protena podra ser ms efectiva. Algunos estudios realizados en clulas mesenquimales de roedores y de humanos, utilizan el gen BMP 2 BMP 7 para formacin de hueso nuevo in vivo e in vitro. Los ligandos tambin han sido incorporados dentro de la superficie de los vectores virales para permitir procesos celulares especficos, los cuales son menos riesgosos que otros mtodos (inyeccin directa). La accesibilidad y observacin visual de la cavidad oral, hace que estos tejidos sean ms favorables para la transferencia de genes que los rganos y tejidos viscerales. Mtodos como la electroporacin o sonoporacin han sido usados

para transferir el gen Gdf11 (que codifica para la protena BMP11) en la pulpa dental amputada, y estimula la formacin y reparacin de dentina. En estos mtodos se aslan las clulas madres de la pulpa dental con genes que codifican para las BMP, y luego se implantan las clulas dentro de la pulpa injuriada. Este procedimiento ex vivo para transferir genes, que podran estimular la reparacin y formacin de dentina ms rpidamente. Sin embargo uno de los mayores campos de accin de la terapia gnica en odontologa, lo constituyen las tcnicas usadas para la transferencia de genes en el tratamiento primario, o como terapia adjunta en los pacientes que presentan cncer de cabeza y cuello. Podhajcer report la inmunizacin de ratones contra distintos tipos de cncer (colon, mama y sarcoma) mediante terapia gnica. Este experimento abre un nuevo camino hacia una vacuna contra el cncer. Uno de los tratamientos para el cncer utilizados hoy en da, consiste en marcar genticamente a las clulas tumorales de un cncer para que el organismo las reconozca como extraas y pueda luchar contra ellas, estimulando la respuesta inmune. Otras estrategias que se siguen en la actualidad contra el cncer son: inactivar oncogenes, introducir genes supresores de tumores, introducir genes suicidas, e introducir genes que aumenten la sensibilidad a los frmacos. En un estudio reciente, Wang y col (2001), sugieren que la terapia gnica con IL12 combinada con la inmunizacin de la mucosa oral, puede inducir inmunidad sistmica antitumoral. Por otra parte Fukui y col (2001), proponen que la sensibilizacin de las clulas tumorales con ganciclovir, utilizando como vector el virus asociado al adenovirus, podra ser utilizado con xito en la terapia gnica para el carcinoma oral escamo-celular. Estos procedimientos permiten cambiar el gen defectuoso por un gen normal en etapas tempranas del desarrollo embrionario, o en otras etapas de la vida del individuo, impidiendo en esta forma que se desarrolle la enfermedad. Sin embargo este tipo de tratamientos al igual que todos los tratamientos generados a partir del proyecto genoma humano generan una serie de implicaciones de tipo tico y legal que no son objeto de estudio en esta revisin. El siguiente cuadro resume la metodologa utilizada en la terapia gnica:

Conclusiones: FUTURO DE LA INVESTIGACIN EN ODONTOLOGA INVESTIGACIN BSICA Conocimiento de genes involucrados en el desarrollo de caries, enfermedad periodontal, cncer, sndromes y maloclusiones Conocimiento de los genomas de los microorganismos involucrados en la etiologa de la caries y las periodontopatas Conocimiento de los genes involucrados en el desarrollo dental. Conocimiento de los genes involucrados en el desarrollo de hueso, mucosa y cartlago. APLICACIN CLNICA Perfil gentico. Prevencin de aparicin y desarrollo de la enfermedad. Desarrollo de genes teraputicos microorganismos patgenos. mutados que destruyan los

Induccin de agenesia (ej.terceros molares) y de formacin de nuevos dientes. Induccin de neoformacin de tejidos normales en enfermedades que generen dao o prdida de estos tejidos. Manipulacin del crecimiento (inhibicin y promocin) en sndromes y maloclusiones esquelticas. TERAPIA CON STEM CELL y BIOINGENIERA INVESTIGACIN BSICA Conocimiento de las molculas necesarias para el desarrollo dental Conocimiento de las molculas necesarias para el desarrollo de tejidos dentales (esmalte, dentina, cemento, pulpa y ligamento) Conocimiento de las molculas necesarias para el desarrollo de hueso, cartlago, mucosa, glndulas salivales

 Conocimiento de las molculas necesarias para el desarrollo de rganos completos. APLICACIN CLNICA Cultivo de clulas embrionarias para desarrollar dientes que reemplacen el rgano dental (agenesia, ausencia) Cultivo de fibroblastos, ameloblastos, odontoblastos, cementoblastos. Reemplazo de tejidos perdidos por caries o periodontopatas. Promover el crecimiento de tejidos seos y dentales en: maloclusiones esquelticas, periodontopatas, trauma. Reemplazo de tejidos en sndromes, trauma y enfermedades de ATM. Reemplazo de dientes, maxilares, glndulas salivares.

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