Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia Curso de Engenharia Ambiental

Francisco Almeida Gomes Jnior Matheus Andrade Rocha Costa

Relatrio de Mtodo de Esgotamento e Isolamento de Microrganismo

Itapetinga-BA 2012

Francisco Almeida Gomes Jnior Matheus Andrade Rocha Costa

Relatrio de Mtodo de Esgotamento e Isolamento de Microrganismo

Trabalho apresentado professora Katia Mota, como requisito avaliativo da disciplina de Microbiologia Ambiental do quarto semestre do curso de Engenharia Ambiental.

Itapetinga-BA 2012

1- Introduo Identificar preenchimento um das dado organismo como espcie quela baseia-se espcie. no O

caractersticas

atribudas

reconhecimento da fonte ou origem do espcime (ambiente, espcie animal, tipo de patologia e localizao) do organismo s vezes fundamental para identificao e a correta caracterizao cultural do organismo em meios de isolamento primrio, assim como a execuo e interpretao da colorao e reao ao Gram so vitais para o sistema de identificao. A tcnica da semeadura por estrias ou esgotamento de ala tem por objetivo a obteno de colnias isoladas de bactrias em meio slido. Essa tcnica amplamente utilizada em laboratrios de pesquisa cientfica e de anlises clnicas quando se busca obter colnias isoladas de bactrias presentes em um material biolgico como fluidos ou secrees de animais, humanas ou de plantas. A obteno de colnias isoladas permite a distino de diferentes tipos bacterianos presentes no material analisado Para isolar o microrganismo efetua-se a inoculao ou semeadura, utilizando a tcnica do esgotamento do inculo por estrias, tendo-se o cuidado de usar inteiramente toda a rea do meio para garantir a separao das bactrias, de modo que aps a incubao cada clula separada origine uma colnia.

2- Desenvolvimento Inoculao Quando o inoculo (material colocado no meio de cultura), obtido de uma suspenso original da amostra, colocado dentro ou sobre um meio geleificado (PCA), as clulas so imobilizadas e cada uma ir se multiplicar produzindo uma colnia isolada. Cada colnia nada mais do que clulas individuais agrupadas, com ancestral nico, visvel a olho nu. Tcnica de esgotamento por estrias A ala bacteriolgica pode ser usada para espalhar micrbios em placas de Petri contendo meio de cultura slido com a finalidade de obter-se colnias de bactrias. Esse procedimento conhecido como tcnica de esgotamento onde o material esgotado por meio de estrias na superfcie do meio. Como podemos ver na imagem abaixo:

3- Objetivo Utilizando uma determinada amostra, realizou-se a multiplicao dos microrganismos a partir do mtodo de cultura por esgotamento, com fins de identificar selecionar e estimar a densidade da populao de microrganismos. 4- Material Utilizado no Procedimento

Ala de platina; Placa de petri contendo meios de cultura Agar Padro de Contagem (PCA); Bico de Bunsen; Culturas bacterianas; Estufa incubadora

5- Procedimento

Inicialmente, realiza-se a flambagem da ala de platina, utilizando o Bico de Bunsen, para evitar a contaminao da amostra; Posteriormente a ala de platina resfriada na parte interna da tampa da placa de petri; Em seguida, abre-se a placa de petri, contendo a cultura bacteriana, prximo ao bico de Bunsen para evitar a contaminao com germes do ar. Logo se retira a cultura bacteriana da placa de petri utilizando a ala de platina;

Em seguida feito a semeadura na placa de petri devidamente identificada, contendo PCA; Aps a primeira estria, girou-se a placa em torno de 30 e puxou-se uma segunda estria. Posteriormente girou-se novamente a placa em 30 e puxou-se a terceira estria. Ocorrendo assim o esgotamento da amostra;

Aps a semear a cultura bactria, a placa foi incubada em estufa a uma temperatura de 35C com a tampa voltada para baixo.

6- Resultados Aps determinado perodo de tempo na estufa incubadora, a placa de petri foi retirada, e em seguida se analisou os resultados obtidos. Observando as imagens abaixo, podemos notar que o procedimento de esgotamento no foi realizado de forma correta. Podemos observar que as estrias no ficaram na forma desejada.

Observou-se tambm uma contaminao da placa, podendo ter sido provocada no processo de montagem, por bactrias presente no ar, bactrias da saliva e/ou pelo processo de analise da placa onde pode ter sido acidentalmente aberta acarretando assim sua contaminao.

7- Concluso

Os resultados obtidos no foram satisfatrios, no entanto o experimento foi visto de forma til para o aprendizado do mesmo, tendo em vista que esta tcnica ainda ser utilizada ao desenvolver do curso. Alm disso, verificou-se o desenvolvimento das colnias de bactrias, no entanto as estrias foram realizadas de forma incorreta. Este erro no procedimento pode ser corrigido atravs da repetio do procedimento, onde teramos mais experincia com a tcnica empregada, gerando assim um menor erro.

8- Referncias http://www.scielo.br/pdf/cr/v38n9/a43v38n9.pdf Acesso em 01/04/2012 http://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:ioq1uy2dkG0J:www.fop.unicamp. br/microbiologia/aulas/isolamento.pdf Acesso em 01/04/2012 http://www.microbiologia.ufba.br/aulas/MEIOS%20DE%20CULTURA.doc Acessado em 01/04/2012