UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE Facultad de Ciencias de la Ingeniera Instituto de Acstica

Mtodo UltrasnicoFotoacstico para el diagnstico y Ultrasnico Tratamiento del Cncer

Docente responsable: Ing. Alfio Yori Fernndez

Alumno: Osvaldo Cuadrado Corssen

Fecha de entrega: 26 de Mayo 2010

INDICE

Introduccin. 3 Introduccin

fotoacstico.. 3 El Efecto fotoacstico

Medicina. 5 Fotoacstica en la Medicina

Fotoacstica. 7 Ecuacin de la Onda Fotoacstica

Cncer 7 Diagnstico y Tratamiento del Cncer

Conclusin.. 10 Conclusin

Referencias... 10 Bibliografa y Referencias

Introduccin
El ultrasonido ya ha sido ampliamente utilizado para la imagenologa en distintas superficies y materiales como lo son sus aplicaciones en la acstica estructural (deteccin de fallas) y en la bioacstica. Pero tiene sus limitaciones, ya que al tratarse de un haz ultrasnico que atraviesa un medio y luego es reflejado, se pueden generar prdidas energticas debido a las irregularidades en la superficie de reflexin y por la dispersin del haz. Este es el caso del ultrasonido (y las tcnicas con luz IR o UV) aplicado al cuerpo humano para la imagenologa mdica. Sin embargo, recientemente se ha implementado un mtodo en el que se mezcla el uso del ultrasonido y la fotoacstica (PA por su sigla en ingls: Photoacoustics). En ste se utiliza el ultrasonido para visualizar la clsica imagen de un cuerpo observado y simultneamente la PA para realzar un tejido objetivo, como lo son las clulas cancergenas. En el presente informe se ahondar en este mtodo, el cual tiene la caracterstica de ser muy actual y por lo tanto un rea poco explotada. Para introducirse en el mtodo, primero se debe dejar claro a qu nos referimos cuando se habla del efecto Fotoacstico.

El Efecto Fotoacstico
A pesar de que el mtodo en cuestin es bastante reciente, el efecto fotoacstico no lo es. ste ya haba sido descubierto por Alexander Graham Bell en 1881 cuando propuso el espectrfono. ste instrumento fue utilizado por A. G. Bell para la examinacin del espectro de absorcin en objetos.

Figura 1 Espectrfono, primer dispositivo en demostrar el efecto fotoacstico, inventado por A. G. Bell en 1881.

El espectrfono (en la figura 1), consista en un delgado disco rotatorio que emita sonido cuando era excitado por un haz de luz focalizada. La energa ptica absorbida calentaba parte del disco, en donde sufra una expansin mecnica por la variacin de temperatura. Estas expansiones en el disco eran moduladas en el tiempo por la rotacin del disco, lo cual terminaba en la emisin de un sonido con frecuencia igual a la frecuencia de rotacin mecnica del disco. Con esto ya se evidencia que en el principio del efecto fotoacstico se pueden identificar el fenmeno ptico, acstico y trmico, interactuando para la emisin de un haz ultrasnico. A pesar de que el espectrfono de A. G. Bell fue utilizado para lograr su posterior invento, el Fotfono, en el cual logr modular y transmitir sonidos por vas pticas (y sin la utilizacin de cables elctricos), el efecto

fotoacstico demostrado en la prctica por el espectrfono fue tema de investigacin para otras aplicaciones en el siglo siguiente. El principio bsico de la PA es el efecto fototrmico (PT), y que es la absorcin de energa lumnica de un cuerpo con una consecuente variacin trmica. sta variacin trmica en el cuerpo de muestra hace que ste se expanda, creando un aumento de presin en el medio que limita con el exterior del cuerpo de muestra (onda acstica). Si el haz de luz que excita al cuerpo incide de forma intermitente, como lo hace el dispositivo que se muestra en la figura 2, har que este cuerpo emita una onda acstica con una frecuencia dependiente de la intermitencia del haz de luz.

Figura 2 Espectroscopio fotoacstico. En este dispositivo se aprecia la intermitencia del haz de luz que incide sobre el cuerpo de muestra.

La ventaja del efecto PA es que la lectura de la seal ultrasnica resultante por la muestra, luego de que fuera excitada por un haz de luz, es independiente del haz de luz reflejado y transmitido, por lo que la dispersin de la seal luego de incidir no interesa, y lo cual hace que el mtodo mediante el efecto PA sea ms atractivo que el de imagenologa tradicional. Adems de que es aplicable para muestras lquidas, gaseosas y slidas. Sin embargo, para las aplicaciones actuales de PA no se utiliza un simple haz de luz, sino ms bien se introdujo la utilizacin de luz laser, cuando a mediados de los 70, Allan Rosencwaig y Allen Gersho establecieron las bases tericas del efecto fotoacstico en slidos [4]. Se prefiere la utilizacin de laser principalmente por 2 razones: (1) la seal ultrasnica resultante por el efecto fototrmico es proporcional a la variacin de temperatura en la muestra, y por lo tanto a la capacidad de absorcin de energa de sta, y (2) para muchas aplicaciones la selectividad del anlisis PA depende de la longitud de onda de excitacin.

Cuadro 1 Secuencia de transduccin de energa durante el efecto PA: Luz Absorcin Calentamiento Expansin Trmica Onda de Presin Deteccin Acstica [2].

Fotoacstica en la Medicina
Conociendo el efecto PA se pueden entonces describir sus aplicaciones en el rea mdica. En la presente investigacin se describir un innovador sistema de imagenologa fotoacstica en el cual se emite pulsos de luz laser hacia un medio biolgico (un ser vivo) y que son absorbidos de manera diferenciada en distintos puntos del medio, generando varias fuentes ultrasnicas que son monitoreadas por un arreglo de sensores acsticos, los cuales se traducen en la imagen interna del medio. Actualmente existen muchas tcnicas de imagenologa aplicada en el rea clnica, pero que todas presentan sus propias limitantes. Como ya se haba mencionado, una de las limitantes en comn de todas estas tcnicas es la absorcin y dispersin de energa de la seal enviada. Otros factores que influyen son por ejemplo la ventana teraputica o ventana de diagnstico que se refiere al rango de frecuencia en el cual se encuentra la luz aplicada. En el caso de la luz IR en el que las longitudes de onda se encuentran entre los 2000-3000nm, el principal absorbente en el medio es el agua, limitando las penetraciones de la luz a profundidades entre 0,1-1mm. En los rangos de UV cerca de los 300nm las micropartculas celulares presentes absorben la luz y limitan la profundidad de penetracin. Sin embargo, en rangos intermedios de la luz con longitudes de onda entre 650-1300nm la absorcin por agua, lpidos y hemoglobina es menor, permitiendo que la luz penetre varios centmetros y el contraste entre los distintos componentes dentro del tejido an se mantiene alto. Para este ltimo rango el tema de la dispersin de la energa sigue siendo una limitante. Si se requiere de una imagen de alta resolucin del tejido se logra solo con poca penetracin. Y si se requiere de alta penetracin, la resolucin de la imagen se ve reducida. La particularidad del mtodo fotoacstico es que es el nico mtodo clnico de imagenologa que utiliza la propiedad de absorcin ptica de los componentes dentro del tejido. A diferencia de otros mtodos establecidos como imagenologa ptica, ultrasonido, rayos x, rayos gamma y resonancias magnticas, en los cuales por ejemplo, en mtodos pticos se utilizan las propiedades de refraccin de

la luz y en ultrasonido se logra el contraste a travs de las heterogeneidades de las propiedades mecnicas de los componentes internos, tales como densidad y compresibilidad.

Figura 3 En la figura se muestra como el pulso laser penetra el tejido, es absorbido por los puntos negros que representan el objetivo y la onda acstica generada por los puntos objetivos que es detectada por el sensor ultrasnico.

Ahora, el mtodo utilizado para el diagnstico y tratamiento del cncer no es usando puramente el mtodo PA, sino ms bien se logr realizar un mtodo que combina el fenmeno PA y el ultrasonido, para obtener una imagen generalizada del medio y el contraste del objetivo que se quiera resaltar. En algunos casos utilizando un solo sistema combinado, y no 2 sistemas independientes [3]. Un ejemplo del potencial que tiene este mtodo es el trabajo realizado por X. Wang [5], en el que se utiliz como objetivo el contraste entre la hemoglobina oxigenada y desoxigenada en el cerebro de un ratn al estimular sus bigotes izquierdos y luego los derechos (figura 4). Este trabajo demostr que se puede monitorear en alta resolucin, a travs de PA, cualquier actividad molecular que est relacionada con la utilizacin de oxigeno. Y a raz de este trabajo se puede extender la PA como una herramienta de propsito general para la imagenologa molecular y terapia.

Figura 4 Imgenes mostrando las zonas de utilizacin de oxgeno en el cerebro de un ratn al ser estimulados los bigotes izq. y luego der. Se calibr el sistema a una longitud de onda tal que la mxima absorcin de la luz ocurriera en presencia de oxigeno, por lo que las zonas de mayor contraste indican la presencia de ste.

Ecuacin de la Onda Fotoacstica

Se deben considerar pulsos de luz laser de onda plana iluminando un objeto, con pulsos de my corta duracin y con periodo entre pulsos relativamente altos, como por ejemplo un pulso de 10ns y con frecuencia de repeticin de 20Hz. Si la energa se absorbe ms rpido de lo que se disipa entonces los puntos de alta absorcin en el medio aumentaran su volumen al recibir los pulsos laser y generarn una transiente acstica. La magnitud y forma de transiente depender de la duracin del pulso laser. Bajo condiciones de medio tpicas en la imagenologa mdica, la ecuacin de la onda generada por el efecto fotoacstico es

Donde es la presin, es la velocidad de propagacin longitudinal en el medio, adimensional de Grneisen:

es el parmetro

es el coeficiente volumtrico de expansin trmica, es el calor especfico a presin constante y es la funcin de calor representando la energa trmica depositada por unidad de volumen y por unidad de tiempo. La amplitud de la onda acstica generada por el absorbente ptico depende exclusivamente de la cantidad de energa absorbida y no tiene relacin con el tiempo del pulso laser. Esta amplitud est (3) , donde es el coeficiente de absorcin ptico y es la fluencia (energa dada por por unidad de superficie) ptica del absortor.

Diagnstico y Tratamiento del Cncer

Como se mencion anteriormente, el mtodo utilizado es un mtodo que utiliza ambos, ultrasonido y PA. Tradicionalmente con ultrasonido se pueden generar imgenes en 2D y 3D, en la que la resolucin espacial est directamente relacionada con la frecuencia aplicada, que es entre 1-20MHz (longitudes de onda entre 1,5mm - 75 m). La resolucin de la imagen generada es indirectamente proporcional a la profundidad que se requiera y como el ultrasonido funciona a travs de las propiedades mecnicas del tejido (generalmente la densidad), ste se utiliza para obtener una imagen fisiolgica general de la zona en la que supuestamente podran existir clulas cancergenas. Cuando a esto se le combina la aplicacin de PA dirigida a un objetivo, como la hemoglobina oxigenada en el ejemplo de la figura 4, se puede obtener una imagen fisiolgica general y resaltar el objetivo deseado. Debido a que las clulas cancergenas no tienen mayores diferencias en su capacidad de absorcin ptica, en comparacin con el resto de los tejidos, se debi encontrar algn agente que de alguna

forma se adhiriera al objetivo (cncer) y que adems cumpliera con la absorcin mnima requerida para que actuara como fuente ultrasnica bajo un haz de luz laser. Para este propsito se utilizan nanopartculas doradas (llamadas as por el color que adquieren al ser visualizadas en la imagen, en contraste con la imagen griscea general obtenida con ultrasonido). Estas nanopartculas tienen la peculiar caracterstica de que su capacidad de absorcin ptica vara segn su forma geomtrica. Por ejemplo una nanoesfera con decenas de nm de dimetro tiene su peak de absorcin para longitudes de onda cercanas a los 550nm. El caso de una nanovarilla (nanorod en ingls) tiene si peak de absorcin cercano a los 800nm, dentro de la ventana teraputica mencionada anteriormente, lo que la hace ideal para ser aplicada. La adhesin de nanopartculas a clulas especficas permite la deteccin temprana del cncer debido a la gran diferencia en su capacidad de absorcin ptica con respecto al resto de los tejidos. Para lograr esta adhesin de nanopartculas a un biomarcador objetivo o antgeno, se acoplan anticuerpos a las nanovarillas, los cuales reaccionan frente a este biomarcador en especfico. De esta forma se logra que las nanovarillas se trasladen y se acumulen en el biomarcador, que en este caso seran las clulas cancergenas. Adems se pueden aplicar nanopartculas de distintas geometras a un mismo espacio y luego ser visualizadas simultneamente simplemente cambiando la longitud de onda ptica. En la figura 5a se muestran las nanovarillas con vista microscpica, en 5b se observan variadas geometras de nanopartculas adheridas a la superficie de una clula cancergena, la imagen tiene aproximadamente 70nm de espesor. Las nanovarillas se conjugan con un anticuerpo al HER2, una protena comnmente encontrada en la superficie o membrana de clulas cancergenas. Normalmente se necesitan unas 5000 nanovarillas que se adhieran a la superficie del cncer, mientras que si se tiene una alta variedad de nanopartculas basta con unas 10 para que la clula objetivo sea detectada. La figura 5c muestra la adhesin de mltiples nanopartculas al EGFR, otra protena de membrana comnmente encontrada en clulas cancergenas. En las figuras 5d y 5e se muestra una imagen combinada de ultrasonido y PA, de un tumor carcinoma epidermoide oral implantado en un ratn. En 5d se muestra la imagen antes de inyectar las nanopartculas, en que el cncer apenas es visible y en 5e la resolucin e identificacin del cncer es evidente luego de la inyeccin de nanopartculas.

Figura 5 (a) nanovarillas, (b) nanopartculas adheridas a una clula cancergena, (c) imagen multimodal de un tumor activo en un ratn con imagen ultrasnica (gris) e imagen fotoacstica en distintos colores (de tonalidad similar), (d) antes de inyeccin de nanopartculas y (e) despus.

Adems este mtodo no solo es til para la creacin de imgenes, al lograr tal nivel de especificidad en la deteccin de un objetivo, se puede irradiar pulsos laser a una intensidad tal que el calentamiento por la energa absorbida termine destruyendo al antgeno, si comprometer a los tejidos aledaos. Adems se aprovechan las mismas nanopartculas que destruiran al antgeno en generar una imagen para monitorear el procedimiento. El procedimiento tpico entonces es el de inducir la adhesin de nanopartculas en un agente antgeno o cancergeno. Se confirma la presencia de un tumor y se monitorea hasta confirmar que una cantidad mnima requerida es adherida a ste. Finalmente se irradia luz laser, calentando el tumor hasta destruirlo. La clave de realizar una intervencin exitosa recae en monitorear correctamente el procedimiento, al obtener una imagen multimodal ultrasnica fotoacstica en la que se visualice el aumento de temperatura del tumor, y as asegurarse que esta est dentro de los rangos aceptables para no comprometer otros tejidos benignos. Debido a que la amplitud de la onda producida por el fenmeno PA est dada por (3) y el parmetro adimensional de Grneisen depende de la temperatura (2), se puede obtener el cambio de temperatura en el tejido mientras se aplica el tratamiento fototrmico. Es el caso de la figura 6, en el que se aplicaron nanopartculas a un tumor en un ratn. Despus de una hora y ya confirmado el asentamiento de las nanopartculas se aplic el tratamiento fototrmico al ratn, siendo monitoreado a travs del mtodo PA. Las imgenes muestran la variacin de temperatura en el tumor despus de 60, 120 y 180 segundos. Se puede apreciar que el tumor alcanz temperaturas sobre los 20C y luego de una evaluacin histolgica despus del procedimiento, se confirm que el tumor haba sido trmicamente daado.

Figura 6 Tratamiento fototrmico de un tumor en un ratn luego de (b) 60s, (c) 120s y (d) 180s. Monitoreado a travs de un sistema ultrasnico fotoacstico. Cada ventana representa un campo visual de 10,5 x 20mm.

Conclusin
Durante muchos aos se han utilizado variadas tcnicas para la imagenologa mdica y hace ms de 125 aos se conoce el fenmeno fotoacstico. Pero solo en los recientes aos se ha estado desarrollando el tratamiento clnico con el mtodo fotoacstico. Por supuesto que sera un gran avance que se desarrollara este tratamiento aplicado al cncer, pero claramente este mtodo se seguir expandiendo a distintas aplicaciones de bioingeniera y quizs incluso a otras reas en la que la imagenologa sea la base. Como lo son aplicaciones estructurales, de seguridad civil, forestales, metrologa y medicin materiales, etc. Como se mencion en la introduccin, este mtodo es batante actual, los papers escritos sobre esta aplicacin en especfico no tienen ms de 2 aos, lo cual lo hace un rea bastante atractiva para la investigacin. Se sabe mucho sobre el fenmeno, pero no se ha desarrollado an la aplicacin para ser clnicamente masiva. Este mtodo ultrasnico fotoacstico integrado de seguro tiene un gran potencial para llegar a ser el principal mtodo para la imagenologa y tratamiento del cncer en el futuro.

Bibliografa Stanislav Y. Emelianov, Pai-Chi Li y Matthew O'Donnell, "Photoacoustics for molecular imaging and therapy", Phys. Today, 62 (2009) [2] C. Haisch y R. Niessner, "Light and sound - photoacoustic spectroscopy", artculo Spectroscopy Europe, 14/05 (2002) [3] J. Mobley y T. Vo-Dinh, "Photoacoustic method for the simultaneous acquisition of optical and ultrasonic spectra", J. Acoust. Soc. Am., 89-94 (Julio 2003) Referencias [4] A. Rosencwaig y A. Gersho, "Theory of the Photoacoustic Effect in Solids", J. Appl. Phys. 47, 64-69 (1976) [5] X. Wang et al., Nat. Biotechnol. 21, 803 (2003)