I.

INTRODUCCION

El alto contenido de protena en la biomasa microbiana determina su uso potencial en la alimentacin humana y animal, ya que actualmente las fuentes convencionales, agricultura, ganadera y pesca, no satisfacen la demanda de alimentos, situacin que se ve agravada por el incremento alarmante de la poblacin mundial. Las levaduras de Candida, Schwan niomyces, Lipomyces, Pichia, Rhodotorula y Saccaromycopsis son ideales para la produccin de protena unicelular (PUC). Se caracterizan (Anupama y Ravindra, 2000; Ferrer et al., 2004) por tener un metabolismo fermentativo dbil, no presentan efecto diferentes sustratos: melazas, lacto suero glucosa y crecen sobre

(Klu yveromyces), metanol (Pichia),

hidrolizado ac ido de bagacillo de caa Candida utilis),aguas o

de azcar (Saccha- romyces cerevisiae y

residuales amilaceas (Shwanniomyces), licor sulftico de la n-alcanos (Cndida). Sin embargo, en la seleccin de un

industria papelera

microorganismo para su uso en la produccin de PUC se debe considerar criterios basados en el contenido proteico de las clulas, perfil de aminocidos, velocidad de crecimiento en un sustrato determinado, toxicidad, valor calorfico, eficiencia de

conversin de sustrato, digestibilidad y seguridad del producto. (De Cabrera y Rolz, 1980). Se denomina protena unicelular bioprotena (Molk et al. 2002), a aquella obtenida de la biomasa microbiana de algas, bacterias, levaduras y hongos filamentosos, cultivados En condiciones fermentativas apropiadas y controladas que garanticen una

adecuada tasa de crecimiento, por medio del aprovechamiento de sustratos baratos compuestos por o enriquecidos con carbono, nitrgeno y fsforo (Israelidis 2003, Rojas 1995, Keil 1995, FAO 2003).

II.

OBJETIVOS Conocer el proceso de produccin industrial de protena de origen celular Conocer los microorganismo os que se utilizan en la produccin de bioproteinas o protena celular

III.

MARCO TEORICO

3.1.PRINCIPALES MICROORGANISMOS EMPLEADOS COMO FUENTE DE PROTENA UNICELULAR (SCP) Los primeros microorganismos empleados como fuente de protena fueron las

Levaduras, especialmente Saccharomyces cerevisiae, que an hoy da es la principal fuente de SCP con una produccin de 200.000 toneladas anuales en peso seco (Biocity 2003, Chicas 2003, Biocity 2003). Son tambin de uso amplio Spirulina fragilis

mxima (Pedraza 2003), Aspergillus niger (Arias 2001), Kluyveromyces (Hernndez et al. 1979) y Candida utilis(Phetteplace et al. 2003)

La utilizacin de determinado microorganismo depende del sustrato, el proceso y la misma calidad deseada de la biomasa (Rojas 1995). La bioseguridad, la disponibilidad tcnica y la estabilidad biolgica son aspectos a tener en cuenta para la seleccin de determinada cepa como fuente de SCP. Es importante sopesar otros aspectos para la seleccin del microorganismo adecuado (Rojas 1995), tales como su estabilidad gentica, la capacidad de crecer en un proceso continuo, la especificidad al substrato que se le ofrece, su demanda de nutrientes, la facilidad con que la biomasa obtenida puede separarse del medio de cultivo, y la calidad final deseada en el producto. El Cuadro N01 lista muchos de los

organismos de inters en la obtencin se biomasa.

Cuadro N 01

3.2.IMPORTANCIA DE LA PROTENA DE ORIGEN UNICELULAR El crecimiento de la poblacin, especialmente en las naciones en vas de

desarrollo es abrumador esperndose en la primera dcada del siglo 21 que la poblacin mundial alcance entre cinco y seis billones de personas (Goel 1994, Hernndez et al. 2003). La agricultura y ganadera convencional muy

posiblemente no sean capaces de suplir la demanda proteica de esta emergente poblacin (Goel 1994), proyectndose que el planeta necesitar producir entre los aos 1980-2015 una cantidad de productos agrcolas igual los generados a travs de la historia antes de esa fecha. La biomasa puede ofrecer una gran alternativa para remplazar algunas de las

fuentes tradicionales de protena (soya, harina de pescado, suero descremado de leche) en piensos para el consumo animal (Suharto y Redyowati 1999); e incluso en porciones para humanos despus de ser tratada adecuadamente. Por ello el desarrollo implementacin de tcnicas de produccin industrial de SCP ayudaran a solventar el problema de la cada vez ms limitada disponibilidad e ingesta de protena (Phetteplace et al. 2003).

3.3.USOS DE LA BIOMASA Y LA PROTENA UNICELULAR A partir de la biomasa microbiana pueden desarrollarse muchos productos derivados dada su riqueza composicional: carbohidratos, lpidos, protenas, cidos nucleicos, vitaminas, etc. (Rojas 1995). El uso de la protena unicelular en piensos es el ms inmediato y menos tecnificado de todos. Generalmente implica un secado de la biomasa previamente a la ingesta. En el caso del consumo por parte de humanos el proceso es ms elaborado, implicando no slo la remocin de riesgos nutricionales como los cidos nucleicos, sino tambin al garantizar la calidad y seguridad del producto.

Muchos de los procesos que generan los productos no se encuentran ampliamente difundidos, a la espera quizs de condiciones econmicas ms competitivas. La protena unicelular encuentra adems aplicaciones an experimentales en el campo de la salud. Recientes investigaciones evalan el papel de la SCP como un nutriente de control inmunitario en pacientes quirrgicos con hipoproteinemia, hiperglucemia, anemia, hipercolesterolemia, otros (EDV 2003).

3.4.SUBSTRATOS PARA LA PRODUCCIN DE PROTENA DE ORIGEN UNICELULAR (SCP) HIDROCARBUROS Y COMBUSTIBLES

a) PETROQUMICOS (N-ALCANOS) Muchos de los hidrocarburos que se destinan a la produccin de SCP son alcanos de cadena carbonada de 12 a 20 tomos de carbono fcilmente utilizables como sustituto de carbohidratos como fuente nutricional de la biomasa (Biocity 2003). Productos derivados de la actividad petrolera son tambin metabolizables, emplendose incluso la parafina como substrato (Butolo etal. 2003). La n-alcano puede obtenerse a partir del mismo petrleo crudo (Hernndez 1979, Keil 1995) y constituyen la fraccin de ceras del gasoil que debe ser removida pues aumenta la viscosidad y tiende a causar precipitaciones a baja temperatura. La principal desventaja de los n-alcanos es su baja solubilidad (10-4 - 10-9 v/v) lo cual dificulta el proceso de suspensin que muchas veces requiere de forzamiento mecnico. La protena unicelular derivada de los n-alcanos se denomina genricamente Toprina (Keil 1995, Israe- lidis 2003), y se obtiene principalmente por crecimiento de Candidor lipolytica, C. tropicalis, Candida oleop- hila y Saccharomycopsis lipolytica (Crueger y Crueger1989), as como de bacterias oxidativas.El medio suele ser enriquecido con NH3 como fuente de nitrgeno y Mg como suplemento mineral.

b) METANO: El principal problema que presenta el metano es que este no se lica con facilidad, por lo cual se pueden implicar muy altos costos por concepto de licuado y posterior transporte al lugar de proceso (Crueger y Crueger 1989). Las bacterias que oxidan el metano son denominadas metilforos obligados y solo metabolizan substratos de un solo carbono.Entre ellas estn Methylomonas methanica, Methylococcus capsulatus, Methyvibrio soehngenii, Methanomonas

margaritae as como los gneros Acinetobacter y Flavobacterium. Puesto que el metanol es de manejo ms simple y de ms fcil transporte, y el metano puede ser transformado en metanol, se prefiere utilizar este ltimo como sustrato para los sistemas que utilizan materiales de un solo carbono.

c) METANOL El metanol fue en determinado momento el substrato ms importante y barato para la produccin de SCP (Crueger y Crueger 1989, Biocity 2003). Entre las principales ventajas del metanol, est el hecho de que puede ser obtenido a partir de una amplia gama de fuentes como el gas natural, la gasolina, la hulla y hasta desechos agroindustriales. En la fermentacin del metanol se emplean ms las bacterias como por ejemplo Methyluphilus methylotropha, dado su ms rpido crecimiento, su mayor contenido de protena, su mayor rendimiento y

requerimientos ms sencillos de cultivo (Crueger y Crueger 1989). Generalmente estos requerimientos implican la suplementacin con amonio del medio (Biocity 2003). La protena obtenida a partir del metanol se conoce genricamente como Pruteen (Israelidis 2003). Actualmente la produccin de protena no es econmicamente rentable debido a las condiciones de mercado (Crueger y Crueger 1989, Israelidis 2003)

d) ETANOL En comparacin con el metano y el metanol, el etanol cae en un tercer lugar dado su costo comparativamente ms elevado.Generalmente el proceso fermentativo se hace por medio de levaduras grado alimenticio o "torula". La SCP obtenida por este medio se denomina pues genricamente como,"Torutein"(Israelidis, 2003) y suele

caracterizarse por su bajo contenido de methionina. La Torutein suele presentar valores de PER cercanos a 1,7.El PER (Protein Efficiency Ratio) es una forma de medir la calidad de una protena y corresponde al peso que gana una rata en crecimiento dividido entre la ingesta de protena necesaria para generar ese aumento de peso en el perodo de estudio (SOLAE 2003, Whey Protein Institute 2003). A medida que el valor del PER se incrementa, as aumenta tambin la calidad dietara de la protena (Whey Protein Institute 2003). El valor biolgico es otra

unidad alternativa de medicin para la calidad de protena que corresponde a la fraccin del nitrgeno en la dieta que permanece en el organismo despus de la digestin, a diferencia del nitrgeno que se pierde en las heces (Whey Protein Institute 2003).

e) DESECHOS INDUSTRIALES: La lista de posibles residuos involucra tcnicamente cualquier fuente de carbono, y los autores enumeran las ms diversas imaginativas fuentes de las que se mencionan las ms representativas tales como: 1. Aguas residuales de las industrias de la celulosa, del caf, almidn, procesamiento de alimentos y del papel (aguas sulfticas) empleando Candida utilis, C. tropicalis, Chaetomium cellulolyticum y Paecilomyces varioti (Crueger y Crueger 1989). 2. Gases de desecho industrial (Gaddy 2002). 3.Melasas derivadas de la industria azucarera empleando Saccharomyces cerevisiae o Fusarium graminearum (Qiao 2003, Israelidis 2003, Biocity 2003, Suharto 2003), siendo la protena de este ltimo muy exitosa y denominada genricamente

micoprotena. (Crueger y Crueger 1989, Israelidis 2003). 4. Residuos de la industria vincola o vinazas con Chaetomiun cellulolyticum (Rojas 1995). 5. Desechos de la industria lctea con Candida utilis, Kluyveromyces marxianus, Kluyveromyces fragilis (Hernndez et al. 1979, Okos y Dale 1994). 6. Residuos de cscaras de ctricos con Fusarium culmorum, Geotrichum candidum y Trichoderma viride (Durn 1989, De Gregorio et al. 2002). utilizando Aspergillus niger (Arias 2003, Bustamante et al. 2003) 7. Hidrolizados de cuernos y pezuas sobrantes de la industria crnica con Bacillus subtilis (Kurbanoglu y Algur 2002). 8. Bagazo de banano y caa empleando Saccharomyces cerevisiae (Chicas et al. 1999), Aspergillus nigis y Aspergillus foetidus (Bergquist y Jurgenson 2003): La cscara de banana ha dado excelentes resultados cuando se emplea como susbtrato para la produccin de SCP. 9. Excretas animales de granja con Spirulina maxima (Pedraza 2003). Como es lgico suponer cada residuo requiere de un tratamiento de pasteurizacin previo, y de unas condiciones de incubacin posteriores favorables al microorganismo especfico que en ellos se hace prosperar. Bagazo denaranja

3.5.GENERALIDADES SOBRE EL PROCESO DE OBTENCIN DE SCP El proceso de obtencin de protenas unicelulares puede involucrar una gran variedad de procesos bioqumicos, en concordancia con la amplia gama de microorganismos que pueden ser utilizados. Genricamente, la produccin de biomasa (SCP) puede

expresarse a travs de la siguiente ecuacin (Rojas 1995, Suharto y Redyowati 2003): 3.6.REACCIN GENERAL PARA LA PRODUCCIN DE BIOMASA

MICROBIANA

Preparacin de sustrato para protena celular

El proceso bioqumico anterior como es lgico requiere de una fuente de carbono a fermentar, la cual puede ser cualquiera de los substratos descritos en secciones anteriores de este documento. Algunas de estas fuentes suelen ser pobres en nitrgeno y minerales, por lo cual es necesaria una suplementracin con sales de amonio otras fuentes de nitrgeno (Raimbault 1998). Como productos de la fermentacin se obtiene la biomasa, y se libera energa y gases como el CO2. Los microorganismos deben adems ser inoculados en un medio particularmente favorable tanto en condiciones de competencia (medio previamente "esterilizado"), como en condiciones nutricionales. Por ello es requerido un pre tratamiento inicial que no altere in- deseablemente al substrato y que garantice que el mismo favorezca el desarrollo de la SCP. Este pre tratamiento generalmente implica (Crueger y

Crueger 1989, Durn 1989, Rojas 1995, Raimbault 1998, Pollard et al. 2001): 1. Reduccin del tamao y homogeneizado mecnico de modo que sea ms accesible al microorganismo y ms fcil de manipular en la fermentacin. 2. Eliminado de agentes inhibidores del crecimiento microbiano tales como toxinas y trazas de residuos qumicos. As mismo debe garantizarse la inexistencia de substancias que puedan causar efectos txicos en la SCP obtenida posteriormente. 3. En algunos casos, cuando el microorganismo a emplear necesita metabolizar formas orgnicas ms simples, debe hidrolizarse enzimtica o qumicamente al substrato empleando cidos, lcalis enzimas como amilasas diastasas. 4. Suplementacin del medio con nutrientes como fsforo y sales nitrogenadas que sirvan de fuente mineral a la SCP. 5. Ajuste del pH y de la humedad del substrato de modo que favorezcan el crecimiento de los microorganismos involucrados. Generalmente se requiere regular constantemente las condiciones de pH empleando un buffers (Chicas 2003). El

ajuste del pH se mantiene a lo largo del proceso fermentativo y no solo durante el pre tratamiento del substrato. En la mayora de los casos el pH suele ser cido y

ronda valores de 4 5 a lo largo del proceso. 6. Tratamiento trmico del substrato para eliminar la flora bacteriana

patgena y/o competitiva de la matriz. El tratamiento puede ser de pasteurizado en matrices destinadas a fermentacin en substrato lquido o esterilizacin en

substratos slidos. En general los parmetros del proceso trmico rondan los 122-123 C por un tiempo de 30-45 minutos (Pollard et al. 2001).

3.7.ELECCIN DEL MICROORGANISMO. Se deben tener en cuenta criterios como el sustrato necesario y los posibles suplementos del mismo, la velocidad de crecimiento, productividad y rendimiento del sustrato, el PH y la temperatura, la aireacin, morfologa del crecimiento en el fermentador, seguridad y no patogenicidad, ausencia de productos txicos, facilidad de recuperacin de las protenas de organismos unicelulares, la composicin proteica, el contenido de RNA (indeseable para la utilizacin humana). Los hongos tienen la capacidad de degradar un amplio rango de productos vegetales y son fciles de recuperar por filtracin, pero son difciles de airear en su morfologa filamentosa que optimiza la velocidad de crecimiento de los mismos. Por su parte las bacterias crecen muy rpidamente pero exigen de refrigeracin en el fermentador. Las bacterias y levaduras son ms fciles de airear pero ms difciles de recuperar que los hongos, exigiendo tcnicas de sedimentacin y centrifugacin. Adems aunque las bacterias tienen mayor contenido proteico que los hongos stas tienen un nivel mayo de RNA indeseable nutricionalmente.

3.8.PROCESOS DE FERMENTACIN DE LAS PROTENAS DE ORGANIMOS UNICELULARES.

Fuente (TESIS, obtencin de protena unicelular a partir de sacharomyces exiguus crecida en etanol como principal fuente de carbono y energa, Mxico 1981)

3.9.EL PROCESO DE PRODUCCIN El proceso requiere de la provisin de una fuente de carbono, que generalmente demanda alguna combinacin de tratamiento fsico o qumico de las materias primas, es decir, de la preparacin de un medio adecuado que contenga fuente de carbono y fuentes de nitrgeno, fsforo y otros nutrientes esenciales. El pH en las

fermentaciones se mantiene entre 3.5 y 5.0 ya que esto reduce el riesgo de contaminacin bacteriana. Despus se debe impedir la contaminacin del medio o de la planta y preparar el cultivo de los microorganismos deseados. Finalmente se lleva a cabo la separacin de la biomasa microbiana del medio agotado. clulas de levadura pueden Las

ser recuperadas fcilmente a partir del medio

agotado por centrifugacin continua y el tratamiento posterior de la biomasa puede efectuarse con o sin operaciones de purificacin (BioCity, 2004).

3.14. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL USO DE PROTENA UNICELULAR EN PROCESOS PRODUCTIVOS A. VENTAJAS 1. Requerimientos de crecimiento fciles de implementar (University of Indiana 2003) y que originan rpidas tasas de crecimiento y alta productividad (Goel 1994, Keil 1995): el tiempo de duplicacin puede ser de 0,3 a 2 h en bacteria, 1-3 h en levaduras, 2-6 h en algas y 4-12 horas para hongos filamentosos celulolticos (FAO 2003). Es posible producir y seleccionar fcilmente cepas con alta productividad y buena composicin (Biocity 2003). 2. Las bacterias presentan una eficiencia de alimentacin (gramos de protena producida por kilogramo de alimento consumido) un milln de veces ms alta que aquella de cerdos o reses (Keil 1995). Para obtener 1 kg de clulas de levadura se emplean alrededor de 2 kg de glucosa contra los 18 kg de cereales necesarios para obtener un kg de carne de res (Annimo 2003). 3. La SCP puede hacerse crecer en substratos baratos, muchos incluso objeto de desecho agroindustrial (Keil 1995), para lo cual se pueden emplear muy variadas metodologas. Prcticamente cualquier substrato que sea fuente de carbono orgnico puede ser utilizado (Goel 1994, Berquist y Jurgenson 2003, Biocity 2003, FAO 2003). 4. Los microorganismos son ms fciles de manipular genticamente que los animales y plantas superiores, lo cual los hace ms susceptibles al mejoramiento y trasferencia gentica (Goel 1994, Israelidis 2003, FAO 2003). 5. Independencia de la produccin de factores estacionales o climticos, dado el sistema de produccin continuo y poco contaminante (Israelidis 2003) en

fermentadores y quimostatos (Goel 1994, Israelidis 2003, Biocity 2003). 6. Las instalaciones de produccin suelen eficientes (Goel 1994, Biocity 2003, FAO 2003). tener reas reducidas y son muy

7. Elevado contenido vitamnico (University of Indiana 2003), y especialmente proteico de apreciable valor nutricional (Goel 1994): entre 44% a 88% protena en peso seco (Annimo 2003, FAO 2003) y hasta un 15% de cidos nucleicos, tambin en base seca (Biocity 2003). 8. Estudios demuestran que la eficiencia en la produccin de leche aument significativamente cuando la dieta de animales como las cabras fue suplementada con SCP (Berquist & Jurgenson 2003).

B. DESVENTAJAS No obstante la gran cantidad de ventajas que presenta la SCP, hay desventajas inherentes a las mismas: 1. Culturalmente en occidente, muchas personas rechazan la idea de emplear

microorganismos como fuente de alimento (Goel 1994). 2. Muchas veces la SCP no presenta las caractersticas de olor, textura, color y sabor necesarias para garantizar una buena aceptacin (Israelidis 2003). Las algas suelen ser las ms problemticas en color y sabor. El mejoramiento sensorial puede implicar procesos de transformacin posteriores de complejidad y costos tales que representan un verdadero desafo (Goel 1994). 3. Presencia en la SCP de sustancias txicas o carcinognicas que fuesen adsorbidas previamente en los sustratos utilizados como fuente de carbono (Crueger y Crueger 1989), importante para asegurar la seguridad y hasta la pureza del medio de cultivo (University of Indiana 2003). 4. El alto contenido de cidos nucleicos (4-6% en algas; 10-16% en bacteria; 610% en levadura y 2,5-6% en hongos), podra eventualmente representar un riesgo para la salud de algunos monogstricos (Crueger y Crueger 1989, Israelidis

2003, FAO 2003, Berquist y Jurgenson 2003). 5. El alto contenido de cidos nucleicos (4-6% en algas; 10-16% en bacteria; 6-10% en levadura y 2,5-6% en hongos), puede ser un riesgo para la salud de los animales monogstricos y para el hombre (Crueger y Crueger 1989, Israelidis 2003, FAO 2003, Berquist y Jurgensor 2003). 6. La digestin lenta nula de la pared celular en el tracto digestivo del ser humano y otros animales, especialmente en cuanto a las algas (Israelidis 2003), puede ser causa de indigestin y reacciones alrgicas (Crueger y Crueger 1989, University of Indiana 2003).

7. A pesar de la alta productividad, en un proceso de produccin de SCP efectuado en un medio de fermentacin lquido, la protena se obtiene en concentraciones muy diluidas (menos del 5% de slidos), por lo que se requiere de procesos de concentracin (Berquisty Jurgenson 2003)

IV.

CONCLUSIONES La produccin de las protenas de origen celular en pleno ciclo XXI, donde el crecimiento demogrfico va en aumento es indispensable e

inevitable ya la escasa produccin de los recursos. La produccin industrial de protenas de origen celular satisfaces los requerimientos nutricionales de los animales y humanos, la SCP podra ser una alternativa para las fuentes tradicionales. Utilizada como concentrado proteico en la formulacin de alimentos balanceados principalmente para aves y cerdos y como sustituto de la leche para becerros

V.

BIBLIOGRAFIA

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