LABORATORIO DE MICROBIOLOGA PRCTICA NMERO 11

Facultad de Ciencias Mdicas Ctedra de Microbiologa Tercer Semestre 2011-2012

Realizado por: Sthefani Gualpa. Revisado por: Dr. David Larreategui Romero.

INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL

Toma de Muestras

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INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL SISTEMA DE COMPETENCIAS

COMPETENCIA GENERAL DEL AREA.- Aplica los conocimientos de las ciencias biolgicas bsicas para la comprensin del proceso salud enfermedad, que le permitan resolver problemas de salud en el mbito de su competencia: con tica y responsabilidad SISTEMA DE HABILIDADES.Observar Conocer Analizar Comprender Definir Formular Determinar Establecer Aplicar Unidad de competencia Identifica prcticamente los microorganismo s patgenos con los alteraciones orgnicas por ellos producidas: con responsabilidad y orden Elemento de competencia Reconoce la diferenciacin estructural entre bacterias con preparacin en fresco y tinciones de Gram y campo oscuro las relaciona con enfermedades vaginales con orden e iniciativa

COMPETENCIA ESPECFICA.- Aplica la Microbiologa Mdica en la comprensin del proceso salud enfermedad y en la resolucin de problemas de salud en el mbito de su competencia con tica y responsabilidad.

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SISTEMA DE VALORES.- tica, Responsabilidad, Orden Iniciativa y trabajo en equipo

Ncleos de conocimientos INFECCIONES VAGINALES Toma de muestras de secrecin vaginal para fresco, cultivo y coloraciones Interpretacin de la tincin de Gram en muestras de secrecin vaginal .

Horas

Actividades trabajo autnomo Gua de prcticas descriptiva. Descripcin de muestra de secrecin vaginal y tincin diferencial para visualizacin en el microscopio. Reconocimient o en agares generales y especficos y caracterizacin en pruebas bioqumicas.

Criterios de evaluacin Reconocer la estructura bacteriana mediante tinciones como Gram y relacionarlas con enfermedade s vaginales.

OBJETIVOS

1. Identificar las caractersticas microbiolgicas y patgenas de los diferentes agentes

infecciosos tanto bacterianos virales parsitos y hongos responsables de infecciones del tracto genital 2. Conocer los mtodos de toma de muestras para las infecciones del tracto genital superior e inferior as como el diagnstico clnicos y sobre todo de laboratorio con utilidad en la prctica mdica de la patologa genital

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INFECCIONES DEL TRACTO GENITAL INFECCIONES DE TRANSMISION NO SEXUAL INFECCIONES DE TRANSMISION SEXUAL

TABLA 1: AGENTES ETIOLOGICOS: MICROORGANISMO: SINDROME: BACTERIA: Neisseria gonorrhoeae* Uretritis, cervicits, bartolinitis, proctitis, faringitis, salpingitis, epididimitis, conjuntivitis, perihepatitis, artritis, dermatitis, endocarditis, meningitis, infeccin amnitica. Treponema pallidum* Sifilis Haemophillus ducreyi* Chancroide Calymmatobacterium granulomatis Granuloma inguinal Especies Shigella Enteritis en homosexuales Especies Campylobacter Enteritis en homosexuales Streptococo del grupo B Sepsis neonatal y meningitis Especies Mobiluncus y Gardnerella Vaginosis bacteriana vaginalis Chlamydia trachomatis* Uretritis no gonoccica, cervicitis hipertrfica purulenta, epididimitis, salpingitis, tracoma neumona perihepatitis, linfogranuloma venreo, sndrome de Reiter. MICOPLASMAS: Ureaplasma urealyticum* Uretritis no gonoccica, ruptura prematura de membranas y aborto. Mycoplasma hominis Fiebre postparto, enfermedad plvica inflamatoria. Mycoplasma genitalium Uretritis no gonoccica. VIRUS: Virus del herpes simplex Herpes genital, proctitis, meningitis, infeccin diseminada en neonatos. Virus de la hepatitis A Hepatitis en homosexuales Virus de la hepatitis B Hepatitis, periarteritis nodosa, hepatoma: especialmente en homosexuales. Virus de la hepatitis C Hepatitis, crioglobulinemia. Cytomegalovirus Infeccin congnita (defectos congnitos, mortinato, deficiencia mental, perdida de la audicin), sndrome mononucleosico. Papilomavirus Humano Condiloma acuminado cervical y perianal, cncer de crvix. Virus del Molusco contagioso. Molusco contagioso. VIH SIDA y enfermedades relacionadas. PROTOZOOS: Trichomonas vaginalis* Tricomoniasis vaginal, uretritis ocasional. Entamoeba histolytica Enteritis en homosexuales. Giardia lamblia Enteritis en homosexuales. HONGOS: Candida albicans Vaginitis, balanitis. ECTOPARASITOS:

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Phthirus pubis* Infestacin de piojos en vello pbico. Sarcoptes scabiei* Escabiosis *Se recomienda dar tratamiento a la pareja.

ENFERMEDAD DEL TRACTO GENITAL INFERIOR INFECCIONES DE TRANSMISION NO SEXUAL: CANDIDIASIS VULVOVAGINAL: Candida albicans es la causa de 85 a 90% de las infecciones vaginales por levaduras. Otras especies de Candida, como C. glabrata y C. tropicalis, pueden generar sntomas vulvovaginales y tienden a ser resistentes al tratamiento. El embarazo, la diabetes y el uso de antibiticos de amplio espectro y corticoides son 17 factores predisponentes para que una persona presente infecciones por cndida. El uso de ropa interior caliente, hmeda y oclusiva tambin contribuye al riesgo. El prurito, eritema vulvovaginal y una secrecin blanca y cuajada espesa similar a la nata que no es de mal olor son signos indicadores (Fig. 1). El examen microscpico con (KOH) hidrxido de potasio al 10% revela filamentos y esporas (Fig. 2). Cultivos en medio de Nickerson se pueden utilizar si se sospecha de Cndida y no se ha demostrado por otros medios.

Fig 1: Candidiasis cervical.

FIG 2: preparacin de KOH que muestra hifas ramificadas y levadura en florecimiento de Candida albicans.

. VAGINOSIS BACTERIANA: Se considera a esta condicin como una enfermedad poli-microbiana, que no es de trasmisin sexual. Se produce por una proliferacin excesiva de Gardnerella vaginalis y otros anaerobios, se debe a la alteracin de la microflora vaginal, se asocia a menudo con el aumento de secrecin la cual es de mal olor, poco viscosa que cubre suavemente la mucosa vaginal. Esta secrecin es de color grisceo, y es espumosa, a veces con un pH de 5.0 a 5.5.

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FISIOPATOLOGA DE LA VAGINOSIS BACTERIANA.

Este sndrome se asocia a factores de riesgo de ETS, como son la existencia de numerosos compaeros sexuales y de un contacto reciente con un nuevo compaero sexual, antiguamente se consideraba un proceso benigno pero hoy se sabe que es un factor de riesgo de la salpingitis aguda, parto prematuro y complicaciones neonatales y 17 perinatales. El diagnostico se realiza por la visualizacin del montaje hmedo en solucin salina, las clulas epiteliales estn cubiertas con las bacterias de tal manera que los bordes de clula se ocultan (clulas pista o gua), (Fig. 3 y 4). Generalmente no se realizan cultivos para esta patologa. Se confirma por la prueba de aminas, que consistente en el empleo de KOH al 10% que se aplica a las secreciones lo que provoca liberacin de aminas con olor a pescado (trimetilamina, putrescina y cadaverina) producidas en el lquido vaginal por estos microorganismos, secreciones vaginales con un Ph > 4,5 (por las aminas y la poca produccin de lactato). Tambin se utiliza la coloracin de gran para Vaginosis Bacteriana

FIG 3: Clulas gua en vaginosis bacteriana debida a Gardnerella vaginalis.

FIG 4: Montura humedecida con SS de clulas gua en infeccin por

TABLA 2: PUNTAJE DE LAS COLORACIONES DE GRAM EN VAGINOSIS BACTERIANA de Nugent Rp, Krohn y Hiller SL J Clin Microbiol 29:297, 1991 Morfotipo del Cantidad y campo Puntaje microorganismo con inmersin Similares a Lactobacillus > 30 0 (bacilos grampositivos 5-30 1 con bordes paralelos) 1-4 2 <1 3 0 4 Similares a Mobiluncus >5 2 (bacilos gramnegativos <1-4 1 curvos) 0 0 Similares a Gardnerella o > 30 4

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Bacte roides (cocobacilos gram variables, delgados y bacilos Gran(-) redondeados, pleomorficos con vacuolas PUNTAJE 0-3 4-6 adelante 7-10 5-30 1-4 3 2

<1 1 0 0 INTERPRETACIN Normal Intermedia, repetir la prueba mas Vaginosis bacteriana

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INFECCIONES DE TRANSMISION SEXUAL: Enfermedades de transmisin sexual (ETS) se encuentran entre las causas ms comunes de enfermedad infecciosa en el mundo. De losms de 30 agentes patgenos de transmisin sexual que son actualmente reconocidos, ocho han sido identificados desde 1980, y parece probable que el espectro de enfermedades de transmisin sexual sigue siendo indefinido. La resistencia a los antimicrobianos ha hecho que el tratamiento de algunas infecciones (por ejemplo, gonorrea) sea ms difcil. El contacto sexual incluye toda la gama de comportamiento heterosexual u homosexual, como son: genital, oral-genital, contacto oral-anal y genital-anal. Los estudios seroepidemiolgicos indican que aproximadamente el 20% de los jvenes en EEUU son infectados con el HSV-2. La mayora de las mujeres con infeccin gonoccica o por clamidia no presentan sntomas o tiene sntomas que no las llevan a buscar atencin mdica. VAGINITIS POR TRICHOMONAS VAGINALIS: Trichomonas vaginalis es un protozoario flagelado que infecta la vagina, los conductos de Skene, y del tracto urinario inferior en las mujeres y el tracto urinario en los hombres. Es de transmisin sexual. La infeccin se manifiesta con prurito, y una secrecin mal oliente, espumosa, y de color amarillo-verdosa, en el examen fsico se evidencia un eritema difuso vaginal y lesiones maculares de color rojo en el cuello uterino en caso de infeccin severa crvix en fresa (Fig. 5). En el examen microscpico de una preparacin en fresco con solucin salina se observan organismos mviles flagelados (Fig. 6).

FIG 5: Cuello uterino en fresa en infeccin por Trichomonas vaginalis, con hemorragias y la

FIG 6: Frotis de secrecin vaginal en SS con tricomnas mviles en

DIAGNOSTICO DIFERENCIAL: Los libros deben seguir a las ciencias y no las ciencias a los libros Francis Bacon

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CONDICION VAGINOSIS BACTERIAN A CANDIDIASI S SECRECION Secrecin abundante fina, blanquecina, mal olor, homognea Secrecin blanquecina, espesa, grumosa (eritema) Secrecin amarillenta y espesa. PH > 4,5 FRESCO Clulas gua > 20% Alteracin en la flora normal. Presencia de Hifas o esporas CARACTERSTICAS MICROBIOLOGICAS Disminucin notable de lacto bacilos, aumento de cocos, bacilos y vibrios. Pueden existir infecciones mixtas, con vaginosis, tricomoniasis o ambas, con un Ph >4,5 La mayora de sntomas se presentan con un ph alto.

< 4,5

TRICOMONI ASIS

> 4,5

Tricomonas moviles

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ENFERMEDAD DEL TRACTO GENITAL SUPERIOR CERVICITIS:

Epitelio escamoso (ectocervix): Trichomonas, Candida y virus del herpes simple. Epitelio
glandular: Neisseria (endocervicitis mucopurulenta). gonorrhoeae y Chlamydia trachomatis

La salpingitis (Fig. 8) es un problema clnico importante, dando lugar a una

considerable morbilidad de los aproximadamente 250.000 a mujeres afectadas cada ao en los Estados Unidos.

500.000

Fig 8: Salpingitis.

N. gonorrhoeae o C. trachomatis puede ascender desde el cuello del tero en la cavidad uterina, produciendo endometritis, y de all a las trompas de Falopio, causando salpingitis. La infertilidad complica aproximadamente el 15% de los ataques inciales de salpingitis y alrededor de 75% despus de tres o ms ataques. El embarazo ectpico y el absceso tubo- ovrico son complicaciones adicionales. INFECCIONES POR CHLAMYDIA TRACHOMATIS

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Chlamydia trachomatis es una bacteria gramnegativa patgena, transmitida frecuentemente por va sexual. Las infecciones se caracterizan por la presencia de uretritis o cervicitis y son ms comunes en adultos jvenes, especialmente entre aquellos en condiciones socioeconmicas bajas y entre mujeres con mltiples 17 compaeros sexuales. Adems, pueden conducir a complicaciones graves y costosas como abscesos plvicos, enfermedad plvica inflamatoria, esterilidad y dolor plvico crnico, entre otras. Se han descritos varios serotipos de C. trachomatis; Las infecciones por los serotipos D-K se asocian a enfermedades como uretritis, cervicitis, conjuntivitis y neumona. El estndar de oro para el diagnstico de infeccin por C. trachomatis es el cultivo celular, frecuentemente se recurre a ensayos inmunoenzimticos y a otro tipo de mtodos, a pesar de su menor sensibilidad y especificidad.

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INFECCIONES POR NEISSERIA GONORRHOEAE La Neisseria gonorroeae son diplococos gram negativos no mtiles, en el frotis se encuentran junto con los polimorfonucleares o dentro de ellos, en sus cpsulas no hay 17 polisacridos y contienen gran cantidad de plsmidos. Son aerobios estrictos, oxidasa positiva, fermenta la glucosa. Ocasionan las siguientes patologas: Fase aguda: uretritis, cervicitis, salpingitis Fase crnica: esterilidad cuando afecta a las gnadas Bacteriemia gonoccica Oftalma neonatal gonoccica Diagnstico de laboratorio Tincin de Gram (Fig. 9) Cultivos primarios y selectivos

Fig.9 Tincin de Gram.

Medios de cultivo. Se cultivan en MEDIOS PRIMARIOS como agar chocolate y sus colonias son convexas, blanquecinas parecidas a gotas de cera sobre una superficie. Se desarrolla en MEDIOS SELECTIVOS como son Thayer Martin, Martin Lewis, New York, Muller Hinton y forman colonias convexas, mucoides, elevadas y resplandecientes, (Fig. 10).

Fig.10. Neisseria gonorrhoeae en medio de Thayer Martin

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LAS LCERAS GENITALES Producida s por VHS, T. pallidum ; con meno r frecuen cia por H. ducreyi , C. trachomatis serovariedades L1, L2, L3 (del linfogranulom a venre o [LGV]) y, ms excepcionalmente , Klebsiell a granulomati s (ante s denominado Calymmatobacteriu m granulomatis , agent e causa l de la donovanosi s o granulom a inguinal). De estas etiologas las lceras producidas por el virus del herpes simple, Treponema pallidum y H. ducreyi son entidades clinoco-bacteriologicas similares por lo requieren un diagnstico microbiolgico diferencial. HERPES SIMPLE: La infeccin genital por el virus del herpes simple (VHS) es la causa ms comn de enfermedad de lcera genital en EEUU, pero el chancro blando se vuelve relativamente ms comn en frica y Asia. Cuando nos enfrentamos a una presentacin clsica, el diagnstico diferencial con frecuencia se pueden hacer en la clnica. El herpes genital generalmente se desarrolla despus de un perodo de incubacin de 3 a 13 das y se presenta inicialmente como vesculas agrupadas sobre una base eritematosa. (Fig. 11). Las vesculas se ruptura un poco pustulosa y luego para formar lceras superficiales y dolorosas, que pueden unirse. Las lceras curan por formacin de costra, y el proceso se completa en aproximadamente 2 a 3 semanas con la infeccin inicial. Las recurrencias proceder a travs de la misma progresin, pero generalmente slo duran alrededor de 5 a 7 das. Parestesias locales pueden preceder a la aparicin de lesiones recurrentes. Slo alrededor del 20% de las personas infectadas manifiestan la forma clsica de presentacin

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Fig 11: lesiones vesiculares producidas por VHS

Aproximadamente el 60% de las personas con herpes genital tienen sntomas relativamente atpico que no sugieren el diagnstico. Alrededor del 20% de las personas infectadas permanecen completamente asintomticos, a pesar de que 17 eliminan el virus de forma intermitente. La mayora de las personas adquirir el herpes genital lo hacen desde las personas que no saben que estn infectadas. El tratamiento del herpes genital se describe en el captulo 369. Los pacientes con frecuentes recidivas sintomticas pueden elegir la terapia de supresin a largo plazo. Los individuos asintomticos y aquellos con recurrencia que se encuentran actualmente asintomticos parecen propagar el virus aproximadamente 3 a 4% del tiempo, por lo que representan un riesgo a sus parejas sexuales.

HAEMOPHILUS DUCREYI H. ducreyi es un bacilo, cocobacilo gramnegativo, anaerobio facultativo, que requiere protoporfirina IX (factor X) y o el NAD (factor V) para su crecimiento. Es un microorganismo pequeo (0,5 - 1,5 um), con forma de bastoncillo, redondeado en los extremos, que forma cadenas estreptobacilares tpicas. Parsitos obligados de las mucosas de la especie humana. No posee motilidad ni forma esporas. El cancroide (Chancro blando), infeccin por Haemophilus ducreyi, produce lceras mltiples irregulares, sucias y adenopatas inguinales, que pueden ser fluctuantes (Fig. 12). A diferencia de las lesiones de VHS, estos tienden a variar de tamao.

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FIg 12: Lesiones producidas por H. ducreyi.

Diagnstico de laboratorio El diagnstico de laboratorio del chancroide se basa en el aislamiento de H. ducreyi de 17 la lcera genital o del material obtenido de la adenopata

1. Toma de muestras: Para la toma de muestras hemos de emplear un hisopo de

algodn o alginato clcico y recoger la secrecin del fondo de la lcera. No es aconsejable realizar una limpieza previa de la lesin porque, al tratarse de un germen piognico, ste se encuentra en el material purulento siempre y cuando no vayamos hacer cultivo. 2. Microscopia: La visin directa del material teido con Gram o Giemsa a travs del microscopio ptico puede mostrar la existencia de cocobacilos gramnegativos dispuestos en pequeos conglomerados o en cadenas paralelas. Estos patrones se han denominado en banco de peces o en vas de ferrocarril y, aunque sugerentes, no son patognomnicos de H. ducreyi. (Fig. 13)

Fig.13 H. ducreyi microscopia.

3. Cultivo: El cultivo de H. ducreyi se ha considerado como la prueba oro

para evaluar otros mtodos diagnsticos; con una sensibilidad mxima del cultivo del 75-80%. Se han desarrollado mltiples medios de cultivo con resultados dispares como agar GC suplementado y agar Mueller Hinton suplementado. Entre 2 y 4 das despus de la inoculacin se observan colonias pequeas, no mucosas, semiopacas o translcidas, de color amarillento-grisceo, que permanecen intactas cuando son empujadas a travs de la superficie de la placa de agar.

4. Otros: En un intento de mejorar la sensibilidad del diagnstico de laboratorio se

estn desarrollando tcnicas de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) Actualmente existe un test mltiple de PCR (M-PCR) que permite la amplificacin simultnea de ADN de H. ducreyi, T. pallidum y virus de herpes simple (VHS) tipo 1 y 2, que ha demostrado ser ms sensible que otras pruebas diagnsticas para la deteccin de estos microorganismos en las lceras genitales Tambin se han desarrollado tcnicas de deteccin antignica mediante inmunofluorescencia (IF)

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TREPONEMA PALLIDUM La sfilis es una de las Infecciones de Transmisin Sexual (ITS) provocada por la bacteria Treponema pallidum; son organismos helicoidales sumamente finos y delgados, tienen movilidad activa, pertenecientes al orden Spirochaetales, familia Spirochaetaceae que se caracterizan por tener una pared celular flexible y rodeando la pared se encuentran unas pequeas microfibrillas, que en realidad tienen una estructura como si fueran flagelos; por tanto se consideran endoflagelos. Tapizando la pared celular se encuentra una bicapa externa, la cual tiene una estructura similar a la estructura de las capas de las bacterias Gram negativas; pero esta bacteria no es Gram negativa, no se tie con colorantes de Gram. Modo de transmisin La sfilis se transmite a travs de tres vas: a) Por contacto sexual, la va ms frecuente y directa. b) A travs de transfusiones de sangre contaminada con sfilis. c) A travs de la circulacin placentaria durante el embarazo que da como resultado la sfilis congnita. Patogenia:La infeccin sifiltica se produce por la penetracin de las Espiroquetas a travs de una grieta microscpica o soluciones de continuidad de la piel y/o mucosas en donde se multiplican para luego alcanzar la circulacin linftica y sangunea. Clnica: El perodo de incubacin constituye de 2-4 semanas promedio 10 a 90 das, al parecer la magnitud del tiempo de incubacin se relaciona con el tamao del inoculo, la virulencia del organismo causal y la resistencia del husped. Durante el periodo de incubacin, los Treponmas no solamente permanecen en el sitio de inoculacin sino que se diseminan en todo el organismo, por lo tanto puede transmitirse durante este periodo a travs de transfusiones sanguneas La sfilis se divide en tres estadios clnicamente diferentes y en dos estadios epidemiolgicos asintomticos. La sfilis temprana (menos de un ao de evolucin) abarca: el primer estadio (chancro)(Fig. 14), la enfermedad secundaria (Fig. 15) (lesiones mucocutneas, linfadenopatas o ambas, con o sin compromiso sistmico) y temprana latente. La etapa tarda (mayor de un ao de evolucin) comprende: sfilis terciaria sintomtica que se presenta con alteraciones cutneas cardiovasculares o neurolgicas, y latente tarda (Fig.16). La lesin ulcerosa primaria de la sfilis, el chancro (chancro duro), es palpable con una base indurada, de bordes bien definidos, y generalmente indolora (Fig. 14). En varios estudios en el mundo en desarrollo, mltiples organismos se han identificado una lesin ulcerativa nica.

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La sfilis latente se define como un periodo asintomtico que sigue a la sfilis primaria que solo se detecta a travs de pruebas serolgicas para la sfilis y se acostumbra a dividir en latente temprana o reciente que es de menos de 1 ao de evolucin y puede ser contagiosa y latente tarda que es de ms de 1 ao de evolucin y por lo general no contagiosa.

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Fig. 14: Sfilis primaria Fig. 15: Sfilis secundaria

Fig.16: Sfilis terciaria.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO 1. Diagnostico directo 1.1.Microscopia de campo oscuro 1.2.Tcnicas de inmunofluorescencia directa en extensiones secas 1.3.Tcnicas de amplificacin de cidos nucledos

2. Diagnostico indirecto: Dos tipos de reacciones serolgicas: 2.1. Pruebas no treponmicas: Se denominan as porque no usan al Treponema
como antgeno, y son: VDRL (Venereal Dissease Research Laboratory), RPR (Prueba Rpida para la identificacin de la Reagina). No son especficas, pero si sensibles.

2.2. Pruebas treponmicas: Utilizan al Treponema como antgeno: FTA ABS

(Absorcin del Treponema Pallidum Fluorescente), demostracin de inmovilizacin del treponema, fijacin del complemento, hemaglutinacin con el treponema plido. inmuno electro quimioluminiscencia, inmuno cromatografa. Estas pruebas son especficas.

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DESARROLLO DE LA PRCTICA VDRL/ RPR Fundamento: Es una prueba de aglutinacin en placa, utiliza como antgeno lpidos extrados del corazn de buey, la cardiolipina al que se le adhiere lecitina y colesterol la cual debe reaccionar con la reagina que es una mezcla de anticuerpos IgM e IgA, las cuales se encuentran en sangre de pacientes infectados entre las 2 a 3 semanas de infeccin sifiltica no tratada. El antgeno est unido a partculas de carbn para evidenciar la reaccin en el RPR mientras que el VDRL tememos que necesariamente ver la reaccin al microscopio ya que no dispone de ninguna partcula que magnifique la reaccin. MATERIALES Y MTODOS Reactivo de RPR Centrfuga de 2.500 r.p.m. Mezclador Jeringuillas de 5 ml. Tubo tapa roja de 10 ml de capacidad Tubo pequeo de 5 ml de capacidad Placas de vidrio con celdillas de 18 mm de dimetro Pipetas automticas graduables Puntas amarillas Torundas Torniquete Separadores de suero Hisopos

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Placas porta y cubre objetos Solucin salina KOH al 10 % Placas con coloracin de gran

PROCEDIMIENTO PRUEBA CUALITATIVA DE RPR: Obtener una muestra de sangre total sin anticoagulante (4 ml. aprox. Centrifugar la muestra y separar el suero En una placa de vidrio con varios pocillos se coloca una gota (50 ul aprox.) del suero en estudio Aadir una gota (16 ul aprox.) del antgeno de Treponema Pallidum Llevar a al mezclador por 8 minutos a 100 r.p.m. Transcurridos los 8 minutos observar en el microscopio si existen agregados o partculas Resultados: Agregados medianos o grandes Suspensin homognea

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REACTIVO NO REACTIVO

Interpretacin: Los reactivos muy dbiles se indican por la presencia de aglutinaciones al borde o alrededor del crculo de la prueba, se facilita la visualizacin a travs de la observacin al microscopio. Los resultados reactivos se debern analizar seguidamente con una prueba semicuantitativa Procedimiento prueba semicuantitativa Preparar las diluciones de las muestras con solucin fisiolgica en 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y proceder con cada uno como la prueba cualitativa

VDRL negativo

VDRL positivo.

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Fases de la sfilis y sensibilidad de las pruebas diagnsticas: Fase Duracin Sensibilidad pruebas Comentario biolgicas (%)* VDR RP FTAabs L R 78 86 84 Ausencia de reaccin serolgica Inoculacin de ppula que se ulcera con gran nmero de 17 Treponemas (hasta 4 semanas). Reactividad serolgica: 1-4 semanas desde aparicin del chancro El chancro cura espontneamente Afectacin de piel y mucosas en distinta localizacin. Diagnstico serolgico (positividad de todas las pruebas) Sin clnica y seroactividad; 2025% sntomas de sfilis secundaria. Contagiosa Rara transmisibilidad. En 1/3 de pacientes es latente toda la vida (serologa positiva), 1/3 cura biolgicamente (serologa negativa) 1/3 tiene manifestaciones 10-20 aos despus (benignagomatosa, cardiovascular y neuro-sfilis)

Inicial (incubacin ) Primaria

3 semanas (10-90 d) 1-5 semanas

Secundaria

2-6 semanas

100

100

100

Latencia: - temprana - tarda terciaria

1er ao

95 71

98 73

100 96

y >1 ao

Falsos positivos de las pruebas diagnsticas de la sfilis: Prueba No treponmicas (a ttulos bajos) Permanec en <6 meses Permanec en >6 meses Falsos positivos Hepatitis, Mononucleosis Neumona vrica, Sarampin, Paludismo Vacunaciones, Embarazo, Errores tcnicos Conectivopatas: lupus sistmico Anormalidades inmunoglobulinas Drogadiccin (a altos ttulos, 10%) Lepra ,Cncer,Vejez

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Lupus eritematoso sistmico Vejez Enfermedad de Lyme Error tcnico TPHA (<1%) Mononucleosis infecciosa Drogadiccin Enfermedades del colgeno Lepra, Error tcnico Para diagnstico de Sfilis congnita conjuntamente con evidencias clnicas y radiolgicas comparar titulaciones de RN y madre, en donde la serologa del RN es reactiva con dos o ms diluciones que la materna. Evaluar criterios clnicos y epidemiolgicos de pacientes adultos y RN, para repetir la prueba en 3 y 6 meses. El VDRL se puede negativizar a los 18 meses. Las pruebas confirmatorias son tiles en la exclusin de resultados falsos positivos de las pruebas no treponmicas, y son de 17 especial importancia en RN y embarazadas. PROCEDIMIENTO PRUEBA DE SECRECION VAGINAL: Obtener una muestra de secrecin vaginal como la descrita del fondo de saco o cuello dependiendo de la patologa que investigamos Colocar una gota de solucin salina en un extremo y otra gota en el otro extremo del reactivo de KOH al 10% en un porta objetos y agregar con un hisopo la secrecin vaginal en cada gota. Cubrir con el cubre objetos. Mirar al microscopio y describir lo observado. Buscando sobretodo parsitos en la solucin salina y hongos en el KOH Coger secrecin vaginal con un hisopo al cual agregamos una gota de KOH y percibimos el olor que desprende (a pescado) Coger secrecin vaginal con un hisopo realizar un frotis como lo descrito en prcticas anteriores y realzanos coloracin de Gram. Observamos al micrsocopio y realizamos el puntaje de las coloraciones de gram para vaginosis bacteriana de nugent rp, krohn y hiller o investiganos Neisseria gonorroeae y prueba de Tzanck dependiendo si es de fondo de saco o cuello la toma PROCEDIMIENTO PRUEBA DE SECRECION INGUINAL: Obtener una muestra de secrecin inguinal como la descrita Coger secrecin inguinal con un hisopo realizar un frotis como lo descrito en prcticas anteriores y realzanos coloracin de Gram. Observamos al micrsocopio y describimos lo observado OBSERVACIN DIRECTA: Observamos y describimos los diferentes medios de cultivo usados para la siembra e identificacin de la patologa de transmisin sexual BIBLIOGRAFIA Barn et al "Microbiologa" pgs 156-157, 170/94 USA. Difco Manual pgs 191-194 USA. FTA (1%)

Koneman et al. Microbiologa pgs 101,303/94/USA. BIBLIOTECA VIRTUALwww.carpermor.com

Canadian Journal Infect Dis Med Microbiol Vol 16 No 1 January/February 2005 Enferm Infecc Microbiol Clin 2008;26(1):32-7

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Campos J. Gnero Haempphilus: Inters clnico y epidemiolgico. Revisiones

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Koneman et al. Microbiologa pgs 101,303/94/USA. Disponible en: http: //www.medicosecuador.com /librodermatologia/captulos/ capitulo_9.htm Vzquez. F. ACTUALIZACIN EN INFECCIONES DE TRANSMISIN SEXUAL: EPIDEMIOLOGA, DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO. Enferm Infecc Microbiol Clin 17 2004;22(7):392-411 Stephen. J, CURRENT MEDICAL DIAGNOSIS TREATMENT 2011,Mc Graw Hill, Cap 18 Dale.C. ACP MEDICINE, 3ra Edicin, Cap XXII.

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