TINCION GRAM

La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndoseBacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. Se decoloran porque el cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual est presente para solubilizar el yodo, y acta de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen. Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules. La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del protocolo, las Gram positivas se vern azulviolceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina).

PROCEDIMIENTO PARA HACER LA TINCION GRAM

1 Fijamos la muestra mediante calor. 2 Violeta cristal (Tie todas las bateras, gram + y -) 1. 3 Fijamos con Lugol, 1. 4 Decoloremos con una mezcla alcohol-cetona (los gram - se decoloren). 5 Safranina (colorante de contraste, tie a los gram -), 1. Los tiempos para aplicar cada colorante es orientativo. En la tincin se observarn de color azul-violeta las gram + y de color rosa las gram -.

Fotografa tomada a partir de M. O. Digital, se observan estreptococos gram + y bacilos gram -. Ejemplos de algunos grupos de bateras que no se tien con esta tcnica, por lo que podemos usar: Gnero Legionella: uso de tincin de Diertele, Gimenez o Fluorescencia. Gnero Treponema: tincin argntica o de Fontana-Tribondeau Gnero Mycoplasma: tincin de Giensa. Gnero Mycobacterium: tincin Zeil-Nilsen. BIBLIOGRAFIA: http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram http://perso.wanadoo.es/microdominguez/b.htm