Universidad de Chile Facultad de Ciencias Departamento de Qumica Licenciatura en Ciencias mencin Qumica

Informe de Laboratorio N6 Determinacin de un pesticida con detector ECD mediante una curva de calibracin relativa

Autores:

lvaro Etcheverry Mariana Montanares Daniela Bobadilla Nicols Faras aetcheverry@ug.uchile.cl mariana.montanares@gmail.com danii.bobadilla@gmail.com nicolasfariasr@gmail.com

e-Mail:

Fecha de entrega: 18/05/2012

RESUMEN En este laboratorio se realiz una curva de calibracin relativa de Clorpirifs, utilizando como estndar interno Captan. Esta curva se realiz inyectando distintas concentraciones de Clorpirifs (entre 2 y 10 ppb) a las cuales se les agreg una misma concentracin de Captan (6 ppb), se calcula la razn entre sus reas y entre sus masas y se grafica rea Clorpirifs/rea Captan versus g Clorpirifs/g Captan. Finalmente se obtuvo la siguiente ecuacin de la recta: rea Clorpirifs = 2,9844 g Clorpirifs + 3,2547 rea Captan g Captan

INTRODUCCIN En la cromatografa de gases (GC) la fase mvil siempre es un gas inerte, tenemos cromatografa gas-solido cuando la fase estacionaria es un slido y tambin tenemos cromatografa gas-liquido cuando la fase estacionaria es un lquido que esta sostenido en un slido. En este practico se utilizara una tcnica de deteccin de pesticidas, realizando una curva de calibracin relativa de Clorpirifs usando como estndar interno captan, ya que posee la misma naturaleza que el Clorpirifs.
Cl Cl H3C O P O H3C Clorpirifs O Cl S N N O Cl S Cl Cl

O Captan

Figura N1: Estructuras del Clorpirifs y del Captan.

Para esta determinacin el cromatgrafo de gases esta implementado con una columna del tipo capilar y un detector ECD. El ECD se basa en la emisin de electrones, ioniza el gas portador produciendo una rfaga de electrones. Si se aplica un campo elctrico constante, se tendr una corriente constante. Si se tienen especies orgnicas en el gas, stas capturarn parte de los electrones disminuyendo la intensidad de la corriente. Este tipo de detector es muy selectivo y sensible a molculas con grupos electronegativos como halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitro.

El objetivo de este practico es cuantificar una muestra de pesticida utilizando una curva de calibracin relativa la cual se realizar graficando una relacin de reas del analito y el estndar versus una relacin de reas del analito y el estndar.
6

Area Analito Area Estandar

Masa Analito Masa estandar

La ventaja de este mtodo es que es independiente del volumen de inyeccin de muestra lo que es sumamente importante para aquellas tcnicas cromatografas que utilizan un mtodo de inyeccin no automatizado.

PARTE EXPERIMENTAL 1. Datos brutos obtenidos: Se preparan soluciones estndar de Clorpirifs con Captan como estndar interno, a partir de soluciones de 20 ppb de cada estndar y aforadas con hexano a 1 mL, segn se indica en la Tabla N1. Tabla N1: Volmenes de las soluciones de Clorpirifs y de Captan, con las respectivas concentraciones de cada solucin estndar. Volumen Volumen Volumen Concentracin Concentracin Clorpirifs Captan Hexano Clorpirifs Captan (ppb) (mL) (mL) (mL) (ppb) 0.1 0.3 0.6 2 6 0.2 0.3 0.5 4 6 0.3 0.3 0.4 6 6 0.4 0.3 0.3 8 6 0.5 0.3 0.2 10 6 Cada una de las soluciones es sometida al anlisis cromatogrfico, utilizando un detector de captura de electrones. Las reas obtenidas se muestran en la tabla siguiente. 3

Tabla N2: reas obtenidas en el cromatograma para el analito y para el estndar interno. Solucin Concentracin Concentracin rea rea de Clorpirifs de Captan (V*s) (V*s) (ppb) (ppb) 1 2 6 21158.5 5049.8 2 4 6 18447.1 3540.6 3 6 6 21648.3 3616.1 4 8 6 24531.1 3417.3 5 10 6 29612.3 3431.2 2. Tratamiento de datos: Con las reas obtenidas se calcula la razn de reas para cada una de las soluciones patrn, a la vez que se calcula la razn de masas, lo que se muestra en la Tabla N3. Tabla N3: Razn de masas y razn de reas para cada solucin patrn. Razn de Razn de Solucin masas reas 4.190 1 0.333 5.210 2 0.667 5.987 3 1.000 7.179 4 1.333 8.630 5 1.667 En base a las razones obtenidas se calcula la curva de calibracin relativa, utilizando el software OriginPro 8.5, como se muestra en el Grfico N1.

Grfico N1: Curva de calibracin relativa para el Clorpirifs. La curva de calibracin relativa obtenida es:
y 2.9844 x 3.2547

Donde y corresponde a la razn de las reas y x corresponde a la razn de masas. Para validar el mtodo se utiliz como parmetro la linealidad de la curva obtenida, teniendo sta un coeficiente de correlacin de 0.983. DISCUSIN Para el presente laboratorio se realiz la determinacin de pesticida (Clorpirifos) por cromatografa de gases (GC), utilizando como detector ECD (Captura de electrones). El anlisis de pesticidas en un proceso recurrente ya que estos son altamente persistentes y nocivos para la salud y es por ello que el anlisis debe ser confiable y reproducible. A partir de los estndares realizados en este laboratorio se realiz una curva de calibracin relativa utilizando como estndar interno Captan el cual nos permiti monitorear el comportamiento de la solucin durante el tiempo de anlisis y para as poder determinar la concentracin inyectada del pesticida en cuestin. Ahora tenemos el caso de que utilizamos una curva de calibracin relativa y no una curva de calibracin absoluta, ya que cualquier factor que afecte la concentracin de la muestra problema afectar al patrn interno, por lo tanto, en una curva de calibracin absoluta tendremos una mayor desviacin con respecto a una curva de calibracin relativa, donde tendremos un comportamiento lineal. El comportamiento no lineal de la curva de calibracin absoluta conlleva a una posible mayor cantidad de errores en las mediciones. De la curva de calibracin obtenida se pueden desprender varios datos tiles para la evaluacin de la exactitud del mtodo. En el caso de la relacin 2, la cual es muy cercana a 1 e incluso la relacin 3 tambin, se puede decir que la relacin entre rea y masa es constante, lo que mantiene la linealidad, lo que permitir fcilmente el clculo de la masa de la muestra problema en base al rea obtenida (ecuacin de la recta). Tambin podemos decir que la volatilizacin de la muestra fue efectiva ya que el cromatgrafo dio una respuesta dentro de los rangos esperados y la columna utilizada logr separar efectivamente los compuestos analizados y arroj valores de reas eficientes para cada analito. El hecho de que se utilizara un auto-sampler implic que la cantidad de errores posibles de inyeccin se redujeran al mnimo, ya que el equipo se encuentra perfectamente calibrado y la posibilidad de algn error es remota. Un posible error podra haber sido que, al utilizar una columna capilar, se haya inyectado una mayor cantidad de analito, provocando que la columna se obstruyera o que al ser mayor el flujo, la fase estacionaria se deteriorara provocando malos resultados, los que no fueron en este caso y es por eso que la inyeccin programada fue de Split con una razn de 1:14. 5

CONCLUSIONES Podemos concluir que: - La ecuacin de la recta para la curva de calibracin relativa obtenida es: rea Clorpirifs = 2,9844 g Clorpirifs + 3,2547 rea Captan g Captan La curva de calibracin relativa es una buena metodologa para cuando se utilizan volmenes pequeos de inyeccin (Split). El mtodo utilizado es el correcto ya que los Clorpirifos y el Captan fueron separados y detectados por la columna de manera efectiva, lo que nos indicara su reproducibilidad y corroborando que son compuestos voltiles.

BIBLIOGRAFA SKOOG, Douglas A. y West, Donald M. Anlisis Instrumental, 2da Edicin. Mxico, McGraw-Hill, 1992.

ANEXO En un accidente, un camin que transportaba desechos de petrleo derram su carga. Se desea determinar el contenido de algunos PAHs (Hidrocarburos Aromticos Policclicos, Figura N1) en el suelo contaminado para lo cual se realiz una serie de curvas de calibracin relativas y se obtuvieron las reas mostradas en la Tabla N1. El estndar interno utilizado es fenantreno-d6.

Naftaleno Acenaftileno Acenafteno

Fenantreno

Antraceno

Fluoreno

Figura N1: Hidrocarburos aromticos policclicos. Tabla N1: reas obtenidas del cromatograma para los distintos PAHs, para obtener las curvas de calibracin respectivas. ppb Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Fenantreno Antraceno E. Interno 1418866.68 2450838.55 5248443.876 3998796.355 4839213.652 5595210.653 37753008 25 50 1706198.539 2506866.37 6088861.173 3807620.348 4918334.019 5729601.707 37856635 100 2358516.679 2874230.613 7580731.521 4064021.404 5466342.007 5813536.727 37615896 500 4869314.801 4521696.556 15309639.37 6942107.307 8595478.456 9256143.077 37991065 2000 17411000.72 11487834.67 41217353.36 16111163.26 19505899.12 20922456.69 37896136 Considerando que cada muestra contena 100 ppb del estndar interno, se calcul la relacin de masas para cada concentracin del analito. Adems se calcul la relacin entre las reas obtenidas del cromatograma, con el fin de obtener las curvas de calibracin relativa. Las relaciones obtenidas se muestran en la Tabla N2.

Tabla N2: Razones de masas y de reas obtenidas entre los analitos y el estndar interno para cada uno de los PAHs. Razn de las reas Razn de masas Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Fenantreno Antraceno 0.0376 0.0649 0.1390 0.1059 0.1282 0.1482 0.25 0.0451 0.0662 0.1608 0.1006 0.1299 0.1513 0.5 0.0627 0.0764 0.2015 0.1080 0.1453 0.1546 1 0.1282 0.1190 0.4030 0.1827 0.2262 0.2436 5 0.4594 0.3031 1.0876 0.4251 0.5147 0.5521 20 Utilizando el software OriginPro 8.5 se graficaron las razones de las masas versus las razones de las reas para cada analito, y se realiz el ajuste lineal correspondiente con el fin de obtener las curvas de calibracin relativas que nos permitieran obtener las composiciones de los analitos en las muestras de suelo. Entre los Grficos N1 y N6, se muestran las curvas de calibracin relativas para cada uno de los analitos, y en la Tabla N3, se resumen las pendientes y los interceptos obtenidos para cada uno de los analitos.

Grfico N1: Curva de calibracin relativa para el Naftaleno.

Grfico N2: Curva de calibracin relativa para el Acenaftileno.

Grfico N3: Curva de calibracin relativa para el Acenafteno.

Grfico N4: Curva de calibracin relativa para el Fluoreno.

10

Grfico N5: Curva de calibracin relativa para el Fenantreno.

Grfico N6: Curva de calibracin relativa para el Antraceno. Tabla N3: Pendientes e interceptos de las curvas de calibracin para cada uno de los analitos. Acenaftilen Acenaften Fenantren Antracen Naftaleno Fluoreno o o o o 0.0212 0.01206 0.04741 0.01648 0.01958 0.02062 Pendiente Intercept 0.03319 0.06143 0.14475 0.09633 0.12412 0.13963 o Los coeficientes de correlacin son iguales o mayores a 0.98 para todas las curvas de calibracin relativas. Para determinar la concentracin se tomaron varias muestras de suelos y se trataron utilizando una extraccin con microondas. Despus del tratamiento y obtener un extracto limpio con un volumen final de 1 mL, fue necesario realizar algunas diluciones. Primero se tom 0.1 mL del extracto y se afor a 1 mL, luego se diluy 5 veces ms y se agregaron 10 L de fenantreno-d6 10 ppm. Finalmente el extracto se llev a un volumen final de 1 mL. De cada extracto se inyect 1 L en un GC-MS. Las reas obtenidas en el cromatograma se muestran en la Tabla N4. Tabla N4: reas obtenidas del cromatograma para los distintos analitos en cada muestra de suelo. Masa suelo (g) 10.003 10.234 Naftaleno 1965088 8907110 Acenaftileno 6513280 8244992 Acenafteno 23561264 13381600 Fluoreno 4450304 10818906 Fenantreno 6258371 5118348 Antraceno 13329031 17561264 E. Interno 5974037 47648192 11

10.345

3659744

7493152

10852010

4510780

9999763

16692124

93502104

Se calcularon las razones entre las reas de cada analito y el estndar interno y se obtuvieron los datos mostrados en la tabla a continuacin. Tabla N5: Razones de las reas entre los analitos y el estndar interno para cada una de las muestras de suelo. Muestra de Razn de las reas suelo Naftalen Acenaftilen Acenaften Fenantren Antracen Fluoreno o o o o o 0.3289 1.0903 3.9439 0.7449 1.0476 2.2312 1 0.1869 0.1730 0.2808 0.2271 0.1074 0.3686 2 0.0391 0.0801 0.1161 0.0482 0.1069 0.1785 3 Utilizando las curvas de calibracin relativa obtenidas anteriormente se calcularon las relaciones de masas entre los analitos y el estndar interno, las cuales se muestran en la Tabla N6. Para algunas muestras las razones de las masas obtenidas se encontraban por debajo del lmite de deteccin por lo que no fue posible cuantificarlas, lo que se ve reflejado tambin en las tablas de resultados sucesivas. Tabla N6: Razones de las masas entre los analitos y el estndar interno para cada una de las muestras de suelo, obtenidas a partir de las curvas de calibracin. Razn de las masas Muestra de suelo Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Fenantreno Antraceno 13.9504 85.3097 80.1349 39.3575 47.1642 101.4321 1 7.2521 9.2545 2.8705 7.9325 -11.1024 2 0.2807 1.5513 ---1.8861 3 Considerando las diluciones que se le realizaron a la muestra es posible calcular la cantidad de gramos de cada analito presente en cada muestra, como se muestra en la Tabla N7. Tabla N7: Gramos de analito por muestra de suelo. g/muestra Muestra de suelo Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Fenantreno Antraceno 0.0698 0.4265 0.4007 0.1968 0.2358 0.5072 1 0.0363 0.0463 0.0144 0.0397 -0.0555 2 0.0014 0.0078 ---0.0094 3 Finalmente, considerando la masa de cada muestra de suelo y los gramos de cada analito presentes en cada una de ellas, se calcul la composicin porcentual de cada muestra, como se muestra en la Tabla N8.

12

Tabla N8: Porcentaje de analito en cada muestra de suelo. % de analito en cada muestra Muestra de suelo Naftaleno Acenaftileno Acenafteno Fluoreno Fenantreno Antraceno 0.697 4.26 4.01 1.97 2.36 5.07 1 0.354 0.452 0.140 0.388 -0.542 2 0.014 0.075 ---0.091 3

13