Apoenzimas e Cofactores

As enzimas so protenas, logo so formadas por uma ou mais cadeias de aminocidos. Essas cadeias esto dobradas sobre si prprias, adquirindo uma estrutura globular. No entanto, certas enzimas apresentam na sua constituio dois componentes: - apoenzima - molcula proteica; - cofactor - substncia no proteica. Apoenzima + Cofactor > Enzima
(Inactiva) (Inactivo) (Activa)

Estas enzimas s so funcionais quando a apoenzima est ligada ao cofactor. O cofactor, ajuda a ligao do substrato enzima.

Figura: Interaco da apoenzima e cofactor com o substrato.

I- No h ligao do substrato apoenzima. II- Aps a juno do cofactor, ocorre a ligao do substrato. III- A reaco ocorreu.

So exemplos de cofactores: Ies metlicos- Cu2+; Mn2+ Fe2+ que, ligados apoenzima, permitem uma melhor ligao do substrato enzima. Coenzimas - compostos orgnicos que se ligam temporariamente durante a catlise. Muitos derivados vitamnicos funcionam como coenzimas. Grupos prostticos Esto permanentemente ligados s enzimas. So compostos no proteicos Ex.plo: FAD

Enzimas Alostricas
Estas enzimas, para alm do centro activo, ao qual se liga o substrato, possuem um ou mais centros reguladores centros alostricos aos quais se podem ligar substncias especficas que, provocando mudana de configurao da enzima, inibem ou favorecem a ligao com o substrato. Estas substncias so designadas moduladores, reguladores ou efectores. Quando o centro alostrico se encontra vazio, a enzima actua velocidade normal.

Se o centro alostrico estiver ocupado pelo modulador, a enzima muda de configurao e adquire uma forma mais activa ou menos activa, conforme o regulador seja positivo (activador) ou negativo (inibidor). Quando o modulador, regulador ou efector favorece a afinidade entre a enzima e o substrato, denomina-se Modulador Positivo. A enzima adquire uma forma mais activa. Trata-se de um Activador. Quando o modulador, regulador ou efector inibe a afinidade da enzima com o substrato, denomina-se Modulador Negativo. A enzima adquire uma forma inactiva. Trata-se de um Inibidor.

Inibio Enzimtica
Como vimos anteriormente, a actividade enzimtica pode ser afectada pela presena de molculas que funcionam como inibidores enzimticos. A inibio enzimtica pode assumir dois aspectos:

Inibio Irreversvel O inibidor combina-se permanentemente com a enzima, inactivando-a ou mesmo destruindo-a. O gs cianidrico e grande nmero de pesticidas, como o DDT, so inibidores irreversveis de enzimas intervenientes na respirao e da o perigo da sua utilizao. Estes inibidores so venenos metablicos. Inibio competitiva - ocorre quando um composto estruturalmente semelhante ao substrato, mas resistente aco enzimtica, existe em concentrao mais elevada que a do substrato. Esse inibidor liga-se ao centro activo da enzima, impedindo a ligao do verdadeiro substrato. O substrato e o inibidor competem pelo centro activo da enzima. Depende, pois, da relao entre a concentrao do inibidor e a concentrao do substrato.

Inibio Reversvel
(O inibidor dissocia-se rapidamente da enzima)

Inibio no competitiva ou alostrica - o inibidor no tem estrutura semelhante do substrato e forma com a enzima um complexo enzima-inibidor, num local da superfcie, diferente do centro activo, provocando uma alterao na estrutura da enzima, modificando a conformao do centro activo, inactivando a enzima. O inibidor e o substrato no competem pela ocupao do centro activo, dependendo apenas da concentrao do inibidor.

Inibio Competitiva

Inibio No Competitiva

Inibio da primeira enzima de uma via metablica pelo produto final em excesso (feedback ou retrocontrolo)
Muitos inibidores so substncias celulares que regulam a actividade enzimtica combinando-se reversivelmente com enzimas. Assim, o produto de uma reaco enzimtica pode controlar a actividade de outra enzima, especialmente em casos de sequncias de reaces enzimticas muito comuns no metabolismo (vias metablicas). Quando o produto final formado em excesso, as respectivas molculas vo inibir a enzima 1 provocando a paragem da sequncia de reaces (feedback negativo, retro-controlo negativo ou retro-inibio). Essa sequncia ser retomada logo que deixe de haver excesso do produto final.

Figura - Inibio da enzima 1 pelo produto final em excesso (retro-inibio ou feedback negativo).

Factores que afectam a actividade Enzimtica

1- Temperatura 2- pH 3- Concentrao do substrato 4- Concentrao de enzima 5- Efectores (Inibidores e Activadores) 6- Cofactores

1 Temperatura A temperatura influencia a actividade enzimtica. Em qualquer reaco enzimtica, a velocidade da reaco aumenta com a temperatura at um determinado valor, a partir do qual diminui at se anular. A temperatura para a qual a actividade enzimtica mxima designa-se por temperatura ptima. Temperaturas baixas ou muito elevadas dificultam a aco enzimtica, podendo as altas temperaturas destruir a enzima por desnaturao da protena enzimtica. Embora cada enzima tenha a sua temperatura ptima de actuao, verifica-se que a maioria das enzimas tem a temperatura ptima prxima da temperatura de muitos seres vivos 35 C a 40 C.

2 - pH A alterao do pH do meio em que uma enzima actua interfere na actividade enzimtica, pois provoca alteraes nas cargas elctricas do centro activo e do substrato. Verifica-se pois que cada enzima tem um pH ptimo de actuao, havendo, portanto, enzimas que tm a sua actividade mxima em meio cido (ver grfico 2 da pgina anterior - A) como as do estmago, outras em meio neutro (ver grfico 2 da pgina anterior - B) como as da boca e outras em meio alcalino (ver grfico 2 da pgina anterior - C) como as do duodeno.

3 - Concentrao do substrato um dos factores que mais fortemente influencia a actividade enzimtica. Para baixas concentraes de substrato h uma relao directa entre o aumento da concentrao do substrato e a velocidade da reaco. Para maiores concentraes de substrato, o aumento da velocidade passa a ser cada vez menor e, a partir de determinada concentrao, a velocidade estabiliza, mesmo que a concentrao do substrato continue a aumentar. Isto acontece porque todos os centros activos das enzimas que catalisam a reaco esto ligados a molculas do substrato, havendo assim saturao dos centros activos das enzimas. A partir deste momento, a quantidade de produto formado por unidade de tempo (velocidade da reaco) constante. A nica possibilidade de, neste caso, aumentar a velocidade da reaco fazer aumentar a concentrao da enzima. 6

4 - Concentrao da enzima A velocidade de qualquer reaco enzimtica directamente proporcional concentrao da enzima, desde que haja excesso de substrato durante a reaco.

5 Efectores ou moduladores So compostos qumicos que interferem na catlise enzimtica e que podem actuar, quer activando, quer inibindo a reaco. Enquanto os activadores orientam os grupos catalticos presentes no centro activo da enzima, facilitando a formao do complexo enzima-substrato e acelerando assim a reaco, os inibidores actuam impedindo a ligao do substrato enzima, o que obriga a diminuir a velocidade da reaco. possvel ultrapassar a aco dos inibidores competitivos

aumentando a concentrao do substrato. Se a inibio se deve a inibidores no competitivos, mesmo aumentando a concentrao do substrato, a inibio mantm-se por incapacidade das enzimas. Esta inibio s pode ser ultrapassada fazendo aumentar a concentrao das enzimas, ou seja, substituindo as enzimas inibidas por outras.

6 - Cofactores Como os cofactores so molculas ou ies cuja presena indispensvel actuao da enzima, a sua concentrao interfere na capacidade cataltica das mesmas.

Classificao das Enzimas

GRUPOS TIPO DE REACO CATALISADA

Catalisam reaces de oxi-reduo, isto , reaces em que h transferncia de electres ou de tomos de hidrognio ou oxignio de uma molcula para outra. xido - redutases Tm particular importncia as desidrogenases e as oxidases. Desidrogenase Exemplo: AH2 + B -------------------> A+BH2 <-----------------Catalisam reaces em que h transferncia de um grupo especifico de uma molcula para outra. Exemplos: as transaminases e as fosforilases, que transferem, respectivamente, grupos amina e fosfato inorgnico. AB + C -------------------> A + BC <------------------(B - grupo a transferir)

Transferases

Hidrolases

Catalisam reaces de hidrlise, ou seja, o desdobramento de compostos por reaco com a gua. Exemplos: lipases, amilases e outras enzimas digestivas. AB + H2O -------------------> AOH + BH <------------------Catalisam reaces em que h adio ou remoo de um grupo qumico de um substrato, sem hidrlise, originando geralmente uma dupla ligao. Exemplo: a descarboxilase catalisa a remoo de CO2. Catalisam rearranjos moleculares, com formao ismeros. Exemplo: glucose-6-fosfato > frutose-6-fosfato. de

Lases

Isomerases

Ligases

Catalisam a sntese de 2 molculas, normalmente utilizando energia obtida por hidrlise do ATP. Exemplo: X + Y + ATP -------------------> XY + ADP + Pi <-------------------

Sntese
As enzimas so substncias de natureza proteica e tm estrutura globular. So biocatalisadores dotados de alta especificidade relativamente s reaces que catalisam. As enzimas no alteram o equilbrio qumico das reaces, diminuindo apenas a energia livre de activao. As enzimas actuam ligando-se temporariamente ao substrato, formando o complexo enzima-substrato, libertando posteriormente o produto da reaco. No se gastam nem se alteram durante a catlise enzimtica. A ligao ao substrato ocorre atravs de uma regio restrita da enzima denominada stio activo ou centro activo. H dois modelos explicativos para o modo de actuao das enzimas: o modelo de Fischer ou da chave-fechadura, segundo o qual o centro activo tem uma estrutura rgida, permitindo apenas a sua ligao a substratos com uma forma rigorosamente complementar, e o modelo de Koshland ou do encaixe induzido, segundo o qual a forma do centro activo flexvel e induzida pelo prprio substrato medida que ele se liga ao centro activo da enzima. Muitas enzimas necessitam, para actuar, de estar associadas a molculas no proteicas designadas cofactores. H 3 tipos de cofactores: os grupos prostticos, que se caracterizam por se ligarem de uma forma permanente enzima; as coenzimas, que apenas se ligam enzima durante a catlise; os ies metlicos, que actuam ao nvel da estrutura do centro activo. A actividade enzimtica pode ser inibida por molculas estruturalmente semelhantes ao substrato, que competem com este para ocupar o centro activo (inibio competitiva), ou por molculas que se ligam a um local, que no o centro activo (centro alostrico), alterando a conformao do stio activo e impossibilitando ou dificultando a formao do complexo enzima-substrato (inibio no competitiva). A inibio enzimtica pode ser reversvel ou irreversvel, conforme o complexo enzima-inibidor ou no rapidamente dissocivel. A actividade enzimtica tambm influenciada por factores do meio, como a temperatura, o pH, a concentrao da enzima e a concentrao do substrato.

Na clula, as reaces metablicas no ocorrem isoladamente, mas em sequncias organizadas; nestas intervm vrias enzimas em cadeia, com formao de produtos intermedirios, em que frequentemente o produto de uma reaco o substrato da reaco seguinte. De acordo com a ltima nomenclatura proposta pela Comisso Internacional de Enzimas, estas so classificadas em funo do tipo de reaces que catalisam, acrescentando-se o sufixo ase.

FIM

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