AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS

CALDO DE TIOGLICOLATO: El medio de cultivo, tiene por sus componentes la calidad nutricional del caldo triptena soya. Este permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes. Adems, se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio. Las sustancias reductoras como tioglicolato de sodio y cistena proporcionan una anaerobiosis suficiente y debido a los grupos -SH- de estos compuestos, se neutralizan los efectos bacteriostticos de los derivados mercuriales, arsenicales y de otros metales pesados. La presencia de una baja cantidad de agar, retarda la dispersin de CO2 y O2. Contiene un indicador de pH: azul de metileno. El color azul y en ocasiones verde muestra la presencia de oxigeno en el tubo de cultivo.

Clostridium sporogenes: Anaerobio obligado Escherichia coli: Anaerobio Facultativo. Crece en ambas capas. Streptococcus pyogenes: Anaerobio facultativo.

BREWERS GASPAK: CONDICIONES DE ANAEROBIOSIS (SIN OXIGENO) El principio bsico de sta, es como la de todas: La remocin del oxgeno presente en la cmara ocurre por la reaccin con el hidrgeno producido, en presencia de un catalizador, para formar agua. La reaccin se describe como 2H2 + O2 >>> 2H2O El catalizador est compuesto de un pellet de aluminio revestido de 0.5 % de paladio. El catalizador puede ser inactivado en la jarra por la produccin de sulfuro de hidrgeno u otros metabolitos voltiles producidos por las bacterias. Por ello se recomienda que los catalizadores sean reemplazados cada vez que se va a cerrar la jarra. Los mismos pueden restaurar su actividad si son calentados a 160 - 170 C por 2 horas; luego de lo cual son almacenados en un lugar seco y limpio a temperatura ambiente. El sobre generador de GasPak contiene un papel de filtro, una tableta de borohidruro de sodio, una tableta de bicarbonato de sodio y cido ctrico. El sobre es activado al aadir 10 ml de agua y el ambiente se obtiene en aproximadamente 30 minutos, visualizndose por una condensacin del agua dentro de la jarra. El sistema produce un potencial de oxido-reduccin ( Redox ) de -100 Mv dentro de Las condiciones anaerbicas pueden ser monitoreadas utilizando un indicador de xido-reduccin; una tira de papel de filtro impregnada de azul de metileno puede ser utilizada con ste propsito. El azul de metileno se degrada a incoloro y permanece as mientras se mantengan las condiciones de ausencia de oxgeno. Si el la tira indicadora se observa azul, hay falla en la produccin del ambiente y los cultivos deben ser repetidos. El azul de metileno se decolora en aproximadamente Existen en mercado diversas marcas para generadores de ambientes, entre los que llama la atencin el Genbox de bioMerieux que no requiere agua para su activacin ni catalizador. No desprende Hidrgeno y requiere ser colocado en menos de 1 minuto en la jarra, ya que la reaccin es inmediata. Normalmente el periodo de incubacin de los platos es de 48 h, sin embargo algunos requieren ms de 3 das como el Fusobacterium y algunos cocos anaerbicos. Generalmente el periodo mximo de incubacin es de 72 horas , con observacin de los platos a las 48h.

Streptococcus pyogenes Microaerofilico Puede crecer en anaerobiosis Clostridium sporogenes Anaerobio obligado. Crece muy bien. Micrococcus luteus Aerobio estricto, no crece en anaerobiosis. Escherichia coli Anaerobio facultativo. Crece en condiciones de Anaerobiosis, bajo condiciones reducidas de oxgeno y condiciones aerbicas. CANDLE JAR: CONDICIONES DE ANAEROBIOSIS (BAJAS CONCENTRACIONES DE OXIGENO) La combustin de la vela aporta una atmsfera aproximada de 17-19% de oxgeno y de 2-4% de dixido de carbono que si se incluye al medio de cultivo el suplemento FBP, aumenta alrededor de 10 veces la aerotolerancia del microorganismo. Se postula que el rendimiento de este mtodo es mayor a 42-43C que a 37C Streptococcus pyogenes Microaerofilico Puede crecer en anaerobiosis Clostridium sporogenes Anaerobio obligado. No crece por la baja concentracin de oxigeno Micrococcus luteus Aerobio estricto Crece por la baja concentracin de oxigeno Escherichia coli Anaerobio facultativo. Crece en condiciones de Anaerobiosis, bajo condiciones reducidas de oxgeno y condiciones aerbicas.

INCUBACIN AEROBICA: CONDICIONES DE AEROBIOSIS (ALTAS CONCENTRACIONES DE OXIGENO) Streptococcus pyogenes Microaerofilico Puede crecer en aerobiosis Clostridium sporogenes Anaerobio obligado. No crece por la altaconcentracin de oxigeno Micrococcus luteus Aerobio estricto Crece por la alta concentracin de oxigeno Escherichia coli Anaerobio facultativo. Crece en condiciones de Anaerobiosis, bajo condiciones reducidas de oxgeno y condiciones aerbicas.

AGAR MACCONKEY Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial. Se usa para seleccionar Gram . Adems puede diferenciar coliformes fermentadores de lactosa. La adicin de sales biliares y cristal violeta inhiben el desarrollo de Gram +, esto lo hace selectivo. La adicin de lactosa y el indicador de pH rojo neutro lo hace diferencial. Los fermentadores de lactosa acidifican el medio de cultivo por debajo de pH 6.8, como resultado las colonias se tornan de color rojo o rosado. AGAR EOSIN METHYLENE BLUE (EMB) Es un agar selectivo y diferencial usado para aislamientos de Enterobacteriaceae. Eosin methylene blue agar (EMB) selecciona bacterias Gram negativas bacteria, y diferencia entre fermentadoras de lactosa de no fermentadoras. EMB contiene azul de metileno y eosina que inhibe el crecimiento de Gram positivas Adems contiene Lactosa. Una pequea cantidad de produccin de cido resulta en colonias coloreadas de rosado, mientras que grandes fermentadores con acumulacin de productos cidos provoca la precipitacin de estos cidos en la colonia dando lugar a ese color verde metlico caracterstico. Los m.o que no fermentan lactosa permanecen sin color.