DETERMINACIN DE UN ESPECTRO DE ABSORCIN

CURSO: LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL. PROFESORA: QUM. MARA ANGLICA RODRIGUEZ BEST. ALUMNA: Caldern Boada, Andrea Natal. FACULTAD: Qumica, Ing. Qumica e Ing. Agroindustrial. EAP: Ingeniera Agroindustrial.

RESUMEN:
En la presente prctica se determin, con ayuda del espectrofotmetro, la medida de la transmitancia del maz morado y de un sobre de chicha morada. Para la verificacin del espectrofotmetro se empleo una solucin de CoCl2 y un blanco de HCl al 1%. Las mediciones de las transmitancias se realizaron a diferentes longitudes de onda que van desde 450nm a 700nm (intervalo correspondiente al rango visible). Luego se realiz lo mismo con las muestras, donde los solventes utilizados fueron agua y etanol, empleando agua destilada como blanco. Ya obtenidos los datos, se deber realizar grficas relacionando la longitud de onda con la transmitancia y luego con la absorbancia , con el objetivo de poder observar las diferencias entre ambas muestras y determinar la presencia de antocianinas, las cuales ocasionan oscilaciones en la grfica.

PRINCIPIOS TERICOS
El espectrofotmetro El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Utiliza cromadores. Con ellos se obtiene un haz de luz monocromtico cuya longitud de onda se vara a voluntad. Los monocromadores pueden ser de dos tipos: prismas y redes de difraccin. Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, an el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo. La absorcin de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida.

Espectro de absorcin Cada especie absorbente, que recibe el nombre de cromgeno, tiene un determinado espectro de absorcin. El espectro de absorcin es un grfico donde se representa en ordenadas la Absorbancia y en abcisas la longitud de onda. La medida de la cantidad de luz absorbida por una solucin es el fundamento de la espectrofotometra de absorcin.

 Longitud de onda La longitud de una onda es el perodo espacial de la misma, es decir, la distancia a la que se repite la forma de la onda. La longitud de onda es una distancia real recorrida por la onda (que no es necesariamente la distancia recorrida por las partculas o el medio que propaga la onda, como en el caso de las olas del mar, en las que la onda avanza horizontalmente y las partculas se mueven verticalmente). La letra griega (lambda) se utiliza para representar la longitud de onda en ecuaciones. En el Sistema Internacional, la unidad de medida de la longitud de onda es el metro, como la de cualquier otra longitud. Segn los rdenes de magnitud de las longitudes de onda con que se est trabajando, se suele recurrir a submltiplos como el milmetro (mm), el micrmetro (m) y el nanmetro (nm). Transmitancia La transmitancia o transmitencia es una magnitud que expresa la cantidad de energa que atraviesa un cuerpo en la unidad de tiempo (potencia). Su expresin matemtica es: Donde I0 es la intensidad del rayo incidente, e I es la intensidad de la luz que viene de la muestra. La transmitancia de una muestra est normalmente dada porcentualmente.

Absorbancia La absorbancia (A) es definida como , Donde I es la intensidad de la luz con una longitud de onda especfica y que es pasada por una muestra (intensidad de la luz transmitida) y I0 es la intensidad de la luz antes de que entre a la muestra (intensidad de la luz incidente)

PROCEDIMIENTO
Determinacin de un espectro de absorcin 1. Fundamento: se basa en la interaccin de la energa radiante sobre una sustancia. Las molculas orgnicas que poseen grupos cromforos tienen electrones que se pueden excitar con facilidad para promoverse a niveles mayores de energa por absorcin en los intervalos del rango visible (400 750nm). Mediante un espectro se determina la longitud de onda que corresponde a la mxima absorcin de la sustancia. 2. Equipo: espectrofotmetro GENESYS 20 THERMO SCIENTIFIC. 3. Materiales: 4 vasos de 50ml. 2 fiolas de 25ml 1 pipeta volumtrica de 5ml 1 pipeta volumtrica de 2ml 1 propipeta 1 luna de reloj 4. Reactivos: Cloruro de cobalto. HCl. Etanol. Agua destilada. 5. Procedimiento: A) ESPECTRO DE ABSORCIN DEL CoCl2 Verificacin del espectrofotmetro Genesys 20 thermo scientific con CoCl2 en HCl al 1% Colocar en la celda solucin de CoCl2 en HCl al 1%. Colocar en otra celda HCl al 1% (blanco). Medir las transmitancias en el rango de 450 nm a 700 nm (comenzar a medir con intervalos de 10nm y cuando se est cerca de 500nm los intervalos debern ser de cada 5nm para visualizar mejor el fenmeno en este rango. A partir de 460nm, ya se podr avanzar con diferencias de 20nm)

Trazar en papel milimetrado el grfico de %T vs. Longitud de onda. Trazar en papel milimetrado el grfico de Absorbancia vs. Longitud de onda.

B) ESPECTRO DE ABSORCIN DEL MAZ MORADO Determinar el espectro de absorcin del maz morado y de un producto elaborado de chicha morada SOLVENTE: AGUA Maz morado Pesar 3 granos de maz morado, colocar en un vaso de 50ml (previamente pesado), agregar 20ml de agua destilada y calentar (una vez que empiece a hervir se deber controlar que transcurran 20 minutos para retirarlo). Enfriar y tomar 5ml de solucin y llevar a una fiola de 25ml enrasar con agua destilada. Leer en espectrofotmetro utilizando una celda para la muestra y otra celda con el blanco (agua destilada). Medir las transmitancias en el rango de 450nm a 700nm. Trazar en papel milimetrado el grfico %T vs. Longitud de onda. Trazar en papel milimetrado el grfico de Absorbancia vs. Longitud de onda.

Peso del vaso = 30.2883g Peso del vaso + maz = 31.8285g Peso del maz = 1.5402g

Chicha morada en sobre Pesar aproximadamente 0.1g de un producto elaborado de chicha morada y disolver con 20ml de agua destilada. Tomar 2ml de la muestra y llevar a una fiola de 25ml con agua destilada. Leer en espectrofotmetro utilizando una celda para la muestra y otra celda con el blanco (agua destilada). Medir las transmitancias en el rango de 450nm a 700nm. Trazar en papel milimetrado el grfico %T vs. Longitud de onda.

Trazar en papel milimetrado el grfico de Absorbancia vs. Longitud de onda. Peso del vaso = 34.9895g Peso del vaso + chicha = 35.0917g Peso de chicha en sobre = 0.1022g

Determinar el espectro de absorcin del maz morado y de un producto elaborado de chicha morada- SOLVENTE: ETANOL Maz morado Pesar 3 granos de maz morado, colocar en un vaso de 50ml, agregar 20ml de etanol, dejar en reposo hasta obtener la coloracin deseada. Leer en espectrofotmetro utilizando una celda para la muestra y otra celda con el blanco (agua destilada). Medir las transmitancias en el rango de 450nm a 700nm. Trazar en papel milimetrado el grfico %T vs. Longitud de onda. Trazar en papel milimetrado el grfico de Absorbancia vs. Longitud de onda. Peso del maz = 1.3962g

Chicha morada en sobre Pesar 0.1g de un producto elaborado de chicha morada y disolver con 20ml de etanol, disolver y reservar para su determinacin. Leer en espectrofotmetro utilizando una celda para la muestra y otra celda con el blanco (agua destilada). Medir las transmitancias en el rango de 450nm a 700nm. Trazar en papel milimetrado el grfico %T vs. Longitud de onda. Trazar en papel milimetrado el grfico de Absorbancia vs. Longitud de onda. Peso de chicha en sobre = 0.1267g

CLCULOS Y TABLA DE RESULTADOS

A = 2 log(%T) = log T

CoCl2 %T vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 560 580 600 620 640 660 680 700 %T 52,8 37,8 31,8 28,9 27,5 26,8 26,7 27,4 30,2 32,4 36,2 41,1 64,4 81,5 85,7 88,2 88,7 89,9 91,9 93,5

CoCl2 A vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 560 580 600 620 640 660 680 700 A 0,277 0,423 0,498 0,539 0,561 0,572 0,573 0,562 0,520 0,489 0,441 0,386 0,191 0,089 0,067 0,055 0,052 0,046 0,037 0,029

GRANOS DE MAZ + AGUA %T vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 530 540 550 560 580 600 620 640 660 680 700 %T 52,9 55 54,5 53,6 53,2 52,7 52,5 52,3 52,3 53,4 54,9 57,4 64,5 73,3 82,5 89,3 92,9 94,8 96,2

GRANOS DE MAZ + AGUA A vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 530 540 550 560 580 600 620 640 660 680 700 A 0,277 0,260 0,264 0,271 0,274 0,278 0,280 0,281 0,281 0,272 0,260 0,241 0,190 0,135 0,084 0,049 0,032 0,023 0,017

CHICHA MORADA EN SOBRE + AGUA %T vs. (nm) (nm) 450 460 470 480 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 550 560 570 580 600 620 640 650 660 680 700 %T 64,1 57,4 49,4 42,4 37,3 33,8 32,6 32,2 32,5 33,5 34,2 36,1 38,4 41,3 48,6 59,2 71,1 80,1 85,3 77,4 79,1 87 92,9 97,6 98,6

CHICHA MORADA EN SOBRE + AGUA A vs. (nm) (nm) 450 460 470 480 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 550 560 570 580 600 620 640 650 660 680 700 A 0,193 0,241 0,306 0,373 0,428 0,471 0,487 0,492 0,488 0,475 0,466 0,442 0,416 0,384 0,313 0,228 0,148 0,096 0,069 0,111 0,102 0,060 0,032 0,011 0,006

GRANOS DE MAZ + ETANOL %T vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 560 580 600 620 640 660 680 700 %T 81,8 81,8 78,9 76,7 75,5 74,5 73,6 72,8 72 71,6 71,4 71,2 73,8 79,5 85,4 92,7 96,4 97,9 98,5 99,2

GRANOS DE MAZ + ETANOL A vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 560 580 600 620 640 660 680 700 A 0,087 0,087 0,103 0,115 0,122 0,128 0,133 0,138 0,143 0,145 0,146 0,148 0,132 0,100 0,069 0,033 0,016 0,009 0,007 0,003

CHICHA MORADA EN SOBRE + ETANOL %T vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550 555 560 570 580 600 610 620 630 640 660 680 700 %T 55,2 43,1 31,7 27,9 26,5 25 24,4 24,6 25,4 26,2 27,3 28,9 30,7 33,2 35,9 40,4 52,9 66 75,9 73,1 66,7 64,7 72,5 89,3 94,1 95,4

CHICHA MORADA EN SOBRE + ETANOL A vs. (nm) (nm) 450 470 490 500 505 510 515 520 525 530 535 540 545 550 555 560 570 580 600 610 620 630 640 660 680 700 A 0,258 0,366 0,499 0,554 0,577 0,602 0,613 0,609 0,595 0,582 0,564 0,539 0,513 0,479 0,445 0,394 0,277 0,180 0,120 0,136 0,176 0,189 0,140 0,049 0,026 0,020

GRFICOS ESPECTRO DE ABSORCIN DEL CoCl2 %T vs. (nm)

100 90 80 70 60

%T

50 40 30 20 10 0 400 450 500 550 (515 , 26.7)

(nm)

600

650

700

750

Espectro de absorcin del CoCl2 A vs. (nm)

0.600 0.500 0.400 0.300 0.200 0.100 0.000 400 450 500 (515 , 0.573)

(nm)

550

600

650

700

750

GRANOS DE MAZ + AGUA %T vs. (nm)

96 92 88 84 80 76

%T

72 68 64 60 56 52 48 400 450 500 550 (520 , 52.3) (530 , 52.3)

(nm)

600

650

700

750

GRANOS DE MAZ + AGUA A vs. (nm)

0.300 (520 , 0.281) (530 , 0.281)

0.250

0.200

0.150

0.100

0.050

0.000 400 450 500 550 600 650 700 750

(nm)

CHICHA MORADA EN SOBRE + AGUA %T vs. (nm)

110 100 90 80 70 (620 , 77.4)

%T

60 50 40 30 20 10 0 420 450 480 510 540 570 600 630 660 690 720 (510 , 32.2)

(nm)

CHICHA MORADA EN SOBRE + AGUA A vs. (nm)

0.600 (510 , 0.492)

0.500

0.400

0.300

0.200 (620 , 0.111) 0.100

0.000 400 450 500 550 600 650 700 750

(nm)

GRANOS DE MAZ + ETANOL %T vs. (nm)

105 100 95 90 85

%T
80 75 70 65 60 400 450 500 550 600 650 700 750 (540 , 71.2)

(nm)

GRANOS DE MAZ + ETANOL A vs. (nm)

0.160 (540 , 0.148) 0.140 0.120 0.100 0.080 0.060 0.040 0.020 0.000 400 450 500 550 600 650 700 750

(nm)

CHICHA MORADA EN SOBRE + ETANOL %T vs. (nm)

100 90 80 70 60 (630 , 64.7)

%T

50 40 30 20 10 0 400 450 500 550 600 650 700 750 (515 , 24.4)

(nm)

CHICHA MORADA EN SOBRE + ETANOL A vs. (nm)

0.700 (515 , 0.613) 0.600 0.500 0.400

A
0.300 0.200 0.100 0.000 400 450 500 (630 , 0.189)

(nm)

550

600

650

700

750

DISCUSIN DE RESULTADOS
Se observan distintas variaciones (cadas) en las grficas, por ejemplo: %T vs. Grfica chicha morada en sobre + etanol: tiene 2 cadas Grfica chicha morada en sobre + agua: 2 cadas Grfica Grano de maz + etanol: 1 cada Grfica Grano de maz + agua: 1 cada A vs. Grfica Chicha ms etanol: 2 picos Grfica Chicha ms agua: 2 picos Grfica Maz ms etanol: 1 pico Grfica Maz ms agua: 1 pico Esto se debe a que el maz morado presenta antocianinas las cuales alteran la trasmitancia y la absorbancia de la luz. En la grfica que representa a los granos del maz disuelto en agua, se observa que hay una variacin a partir de 520nm. Al comparar esto con la bibliografa deducimos que nuestra muestra contiene a la antocianina cianidina-3-glucsido, la cual presenta como longitud mxima 523nm (valor cercano al obtenido en la grfica). En la grfica de chicha morada con agua, se observa que hay una variacin en la longitud de onda de 510nm. Esto comprobara la presencia de la antocianina pelargonidina- 3 glucsido, la cual presenta segn la bibliografa, una longitud mxima de 506nm (valor que no difiere mucho con el obtenido en la prctica). En cambio se puede observar en esta misma grfica, que tambin hay una variacin en los 620nm, valor que no concuerda con ninguna longitud de onda de las antocianinas presentes en el maz morado. Esto podra deberse a que como la muestra de chicha utilizada es un producto elaborado, muy probablemente se emplean otros colorantes o aditivos que no necesariamente son extrados del producto natural; los cuales presentan diferente longitud de onda. En la grfica del maz con etanol hay variacin en 540nm, lo cual seala presencia de cianidina 3 galactsido.

 En la grfica de chicha con etanol hay fluctuacin en 515nm, valor que podra concordar con el de pelargonidina- 3 glucsido, pero que sin embargo no es tan cercano como en el caso de la chicha con agua, lo que demuestra que el mejor solvente para las antocianinas es el agua. En la grfica de chicha con etanol tambin hay variacin en 630nm, valor que demuestra la presencia de otros colorantes, no provenientes de las antocianinas del maz morado.

Estructura de una antocianina

CONCLUSIONES
En la grfica del espectro de absorcin del CoCl2 se obtiene una longitud de onda de 515nm, lo que se puede verificar con la teora, la cual seala que la mxima absorcin se da en 510nm. Esto comprueba que el equipo estaba bien calibrado. Es importante trabajar a la longitud de onda a la que la sustancia estudiada absorbe la mayor cantidad de luz (a mayor cantidad de luz, mayor cantidad de sustancia). El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. El maz morado contiene importantes antocianinas, pero la cianidina 3glucsido es el componente mayoritario presente en todas las especies del maz morado. Otras son: pelargonidina 3-glucsido peonidina 3-glucsido cianidina acilada 3-glucsido pelargonidina acilada 3-glucsido peonidina acilada 3-glucsido Las antocianinas representan el grupo ms importante de pigmentos hidrosolubles detectables en la regin visible por el ojo humano.

RECOMENDACIONES

Limpiar cada celda antes de colocarla nuevamente al espectrofotmetro para evitar interferencias de la solucin anterior o que algn contaminante pueda interferir en la lectura de la transmitancia. Asegurarse de cambiar constantemente la longitud de onda requerida, no sin antes haber ledo la transmitancia del 100% del blanco utilizado. Al momento de manipular la balanza analtica, procurar no derramar sustancias, ya que esto podra afectar el peso de la muestra o alterar la balanza para la siguiente pesada. Asegurarse de haber cerrado bien el espectrofotmetro luego de colocado la celda correspondiente, para evitar la interferencia de la luz del exterior. Si se observa que una lectura de la transmitancia difiere demasiado con la anterior, procurar medir a longitudes de ondas ms cercanas, para lograr observar el fenmeno en dicho rango.

BIBLIOGRAFA

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